CN115894519B - 一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115894519B CN115894519B CN202211294679.0A CN202211294679A CN115894519B CN 115894519 B CN115894519 B CN 115894519B CN 202211294679 A CN202211294679 A CN 202211294679A CN 115894519 B CN115894519 B CN 115894519B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tripeptide
- extract
- culture
- compound
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 title claims abstract description 30
- -1 alkaloid compound Chemical class 0.000 title claims abstract description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 31
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 31
- 241000228341 Talaromyces Species 0.000 claims abstract description 18
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 13
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 12
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 10
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 9
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 8
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 7
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 claims description 7
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 claims description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims description 7
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 5
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 5
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 5
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000010266 Sephadex chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 241001207467 Talaromyces sp. Species 0.000 description 5
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 4
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 3
- 241000857964 Ileodictyon cibarium Species 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 2
- 241001149649 Taxus wallichiana var. chinensis Species 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- GUEIZVNYDFNHJU-UHFFFAOYSA-N quinizarin Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C(O)=CC=C2O GUEIZVNYDFNHJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 2
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 241000675278 Candida albicans SC5314 Species 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- 238000004252 FT/ICR mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 241001248610 Ophiocordyceps sinensis Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241001540766 Talaromyces purpureogenus Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000002027 dichloromethane extract Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229930001119 polyketide Natural products 0.000 description 1
- 125000000830 polyketide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用，属于海洋真菌活性成分分析技术领域。本发明从海洋篮状菌属真菌Talaromyces purpureogenus.CX11的发酵培养物中提取、分离获得了一种具有新颖结构的三肽生物碱化合物，结构式如式(Ⅰ)所示。本发明提供的三肽生物碱化合物具有较好的抗真菌活性，可用于制备抗真菌药物，具有良好的开发前景。
Description
技术领域
本发明涉及海洋真菌活性成分分析技术领域，具体涉及一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用。
背景技术
近年来，海洋天然产物来源的生物活性物质不断增加。从海洋生物中分离的代谢产物具有化学结构多样性，结构类型包括聚酮、萜类、生物碱类、大环内酯类、醌类、聚醚类、甾醇类等，并且具有广泛的药理活性。据报道，1981年至2020年开发的新药中有50％来源于自然界的天然产物；1997年至2010年获批农药中天然产物占35.7％。海洋微生物是丰富的海洋天然产物来源，由于其所生存的高压、低温、缺氧等独特的环境，可提供一系列结构新颖且具有多种生物活性的次级代谢产物，在多种疾病治疗中具有潜在的治疗潜力，对新药的开发挥着先导性作用。
海洋真菌作为海洋微生物的重要组成部分，近年来表现出强劲的发展趋势。2018年发现的海洋新天然产物中有617个来源于海洋真菌，约占海洋来源新天然产物总发现量的39.7％。目前已有逾千种海洋真菌的活性代谢产物被发现，是海洋天然药物发现的重要来源。
目前关于篮状菌属真菌(Talaromyces)的化学成分研究较少。中科院昆明植物所2011年从云南红豆杉内生真菌Talaromyces sp.TIBF中分离得到5α，6α-环氧-24(R)-甲基胆甾-7,22-二烯-3β-醇、醌茜素、苔色酸和间甲基苯酚，Bok(1999)等在活性跟踪下从Cordyceps sinensis分离得到的5α，6α-环氧-24(R)-甲基胆甾-7,22-二烯-3β-醇具有较好的抗肿瘤活性(云南红豆杉内生真菌Talaromyces sp.TIBF的化学成分研究.广西植物,2011,31(5),pp699-701)。本课题组2018年从浙江沿海的大型海洋植物中分离得到篮状菌属真菌Talaromyces purpureogenus.CX11，并对其代谢产物进行分析，从该菌株中分离得到抗病毒的杂萜类化合物(Polycyclic meroterpenoids,talaromyolides E-K forantiviral activity against pseudorabies virus from the endophytic fungusTalaromyces purpureogenus.Tetrahedron 76(2020)131349；Talaromyolides A-D andTalaromytin:Polycyclic Meroterpenoids from the Fungus Talaromycessp.CX11.Organic Letters 2019,21,6,6539-6542.)。
但是迄今还未查到有文献报道从篮状菌属真菌中分离得到具有抗真菌活性的分子结构中含有肉桂酸结构片段的三肽生物碱化合物。
发明内容
本发明的目的在于从海洋真菌的代谢产物中提取获得具有药用价值的天然活性物质。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明从海洋篮状菌属真菌Talaromyces purpureogenus.CX11的发酵产物中分离得到两个新的化合物，经结构鉴定，结构式如式(Ⅰ)所示，
其中R为OH或H。
将上述两个化合物分别命名为Talaropeptin A和Talaropeptin B，化合物talaropeptin A的分子式为C20H23N3O6；化合物talaropeptin B的分子式为C20H23N3O5。
本发明还提供了一种从海洋篮状菌属真菌Talaromyces purpureogenus.CX11的发酵产物中分离提取上述新化合物的方法，但本发明中上述化合物的制备方法并不局限于此。
具体的，从发酵产物中提取所述的三肽生物碱化合物的方法，包括以下步骤：
(1)将保藏号为CCTCC NO：M 2018338的篮状菌属真菌Talaromycespurpureogenus.CX11经活化后接种于培养液中，进行发酵培养；
(2)发酵培养结束后，分离得到菌丝体和发酵液；菌丝体中加入有机溶剂中浸提，分离得到浸提液，浸提液浓缩后用蒸馏水混悬，得到水混悬液，然后用二氯甲烷或乙酸乙酯对水混悬液进行萃取，得到萃取液A；发酵液与硅藻土拌样后，采用二氯甲烷或乙酸乙酯回流萃取，得到萃取液B；
(3)将萃取液A或萃取液B浓缩后进行正相硅胶柱层析分离，依次以体积比8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4、1:6、1:8的二氯甲烷/甲醇进行梯度洗脱，收集体积比6:1的二氯甲烷/甲醇混合液洗脱的馏分，再利用葡聚糖凝胶色谱和重结晶分离获得所述化合物；
或者，将萃取液A或萃取液B浓缩后进行正相硅胶柱层析分离，依次以体积比9:1、5:1、1:1、1:3、1:9的石油醚/乙酸乙酯混合液进行梯度洗脱，收集5:1馏分，再进行反相硅胶柱层析，依次以体积比1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇/水混合液进行梯度洗脱，收集8:2馏分，继而利用高效液相色谱分离，流动相为体积比63:37的甲醇/水混合液，流速为10mL/min，保留时间47分钟的峰为R＝OH的化合物，保留时间56分钟的峰为R＝H的化合物。
步骤(1)中，对篮状菌属真菌Talaromyces purpureogenus.CX11进行发酵培养。
篮状菌属真菌(Talaromyces sp.)CX11为真菌，采用常规的PDA液体培养基即可用于发酵培养。为了增加产量，给微生物生长代谢提供足够的营养成分，优选地，以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：淀粉1-8g、麸皮4-25g、酵母膏2-10g、KH2PO4 1-10g，MgSO4·7H2O 0.1-1.0g，余量为水；
或者，以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：马铃薯100-500g、蛋白胨1-8g、酵母膏1-8g、葡萄糖3-25g、余量为水；培养液初始pH值为6.0-7.0。
更为优选，以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：淀粉4g、麸皮10g、酵母膏2g、KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 0.6g，余量为水；
或者，以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：马铃薯500g、蛋白胨2g、酵母膏1g、葡萄糖20g、余量为水；培养液初始pH值为7.0。
发酵培养的条件为20-30℃静态培养10-40天。所述静态培养方式即不进行摇瓶培养。
作为优选，发酵培养的温度为22-26℃。更优选为25℃培养20天。
步骤(2)中，分离获得菌丝体和发酵液，所述的菌丝体和发酵液中均能提取分离得到所述三肽生物碱化合物。
其中，利用菌丝体获取三肽生物碱化合物时，将菌丝干燥后粉碎，置于有机溶剂中浸泡7-14天，或者加热回流提取，菌丝体充分破壁，使胞内物质有效溶出。
利用发酵液获取三肽生物碱化合物时，将发酵液浓缩后与硅藻土搅拌，采用乙酸乙酯或二氯甲烷回流进行萃取。
步骤(3)中，分离纯化方法为：对萃取液进行正相硅胶柱层析分离，所得馏分再利用葡聚糖凝胶色谱、重结晶，或者反相硅胶柱层析、高效液相色谱等方法进行分离。通过多步分离纯化，能获得纯度较高的三肽生物碱化合物。
所述葡聚糖凝胶色谱的流动相采用体积比为3:1的甲醇/氯仿混合液。所述重结晶通过溶剂挥发析出目标产物。
本发明研究表明，利用上述方法从篮状菌属真菌Talaromyces sp.CX11发酵培养物中分离得到的三肽生物碱化合物具有较好的抗真菌活性，因此，本发明还提供了所述的三肽生物碱化合物在制备抗真菌药物中的应用。
进一步的，病原菌为白色念珠菌、新型隐球菌、镰刀菌中的一种或多种。
通过体外抗真菌试验，表明本发明提供的三肽生物碱化合物具有较好的抗真菌活性，具体的，化合物Talaropeptin A抗白色念珠菌(Candida albicans)的MIC为40μg/mL，抗新型隐球菌(Crytococcus neoformans)的MIC为40μg/mL，抗镰刀菌(Fusarium oxysporum)的MIC为12.5μg/mL；化合物Talaropeptin B抗白色念珠菌的MIC为80μg/mL，抗新型隐球菌的MIC为80μg/mL，抗镰刀菌的MIC为25μg/mL。
本发明还提供了一种药物组合物，包括有效剂量的所述的三肽生物碱化合物和药学上可接受的载体。
所述药物以本发明的三肽生物碱化合物为主要活性成分，添加药剂学上可接受的辅料制成，可按照药剂学上记载的制剂制备方法制成制剂。
本发明具备的有益效果：
(1)本发明从海洋真菌Talaromyces purpureogenus.CX11的发酵培养物中提取、分离获得了一种具有新颖结构的三肽生物碱化合物，该方法操作简便、提取得率高、产物纯度高，适合规模化生产。
(2)本发明提供的三肽生物碱化合物具有较好的抗真菌活性，可用于制备抗真菌药物，具有良好的开发前景。
附图说明
图1为本发明两个三肽生物碱化合物的结构式。
图2为本发明化合物1的1H NMR图谱(DMSO-d6)。
图3为本发明化合物1的13C NMR图谱(DMSO-d6)。
图4为本发明化合物2的1H NMR图谱(DMSO-d6)。
图5为本发明化合物2的13C NMR图谱(DMSO-d6)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。以下实施例仅用于说明本发明，不用来限制本发明的适用范围。在不背离本发明精神和本质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
下述实施例中采用的菌株篮状菌属真菌Talaromyces purpureogenus.CX11分离自浙江沿海的大型海洋植物，于2018年6月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国、武汉、武汉大学，保藏号为：CCTCCNO：M 2018338。
实施例1真菌Talaromyces purpureogenus.CX11的发酵培养
将经活化的Talaromyces purpureogenus.CX11制成孢子悬浮液，再接种到培养液中，于25℃静态发酵培养20天。
其中，培养液配方为：淀粉4g，麸皮10g，酵母膏2g，KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 0.6g，水1000mL。
实施例2真菌Talaromyces purpureogenus.CX11的发酵培养
将经活化的Talaromyces purpureogenus.CX11真菌制成孢子悬浮液，再接种到培养液中，于24℃静态发酵培养20天。
其中，培养液配方为：马铃薯500g，蛋白胨2g，酵母膏1g，葡萄糖20g，水1000mL；培养液的初始pH值为7.0。
实施例3三肽生物碱化合物的制备
真菌Talaromyces purpureogenus.CX11发酵培养后，取10L发酵培养液，离心取沉淀得到菌丝体；菌丝体用甲醇浸泡1周，浸泡液经浓缩后用1L蒸馏水混悬，水混悬液合并，用10L二氯甲烷萃取，二氯甲烷萃取液经浓缩得到浸膏10g；用硅胶(100目，100g)拌样，进行正相硅胶柱层析分离(200-300目，100g；硅胶柱尺寸L 50mm，12mm)，依次以体积比8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4、1:6、1:8的二氯甲烷/甲醇进行梯度洗脱，TLC点板合并，收集体积比6:1的二氯甲烷/甲醇混合液洗脱的馏分。再采用葡聚糖凝胶色谱LH-20(柱尺寸L 120mm，/>5mm；流动相甲醇/氯仿＝3：1)分离得到含有化合物1(56/90馏分)和2(77/90馏分)的粗品，采用甲醇/氯仿(3:1)重结晶得到talaropeptin A(化合物1，23mg)，重结晶母液采用硅胶柱层析(柱尺寸L 20mm，/>4mm；流动相甲醇/氯仿＝3：1)得到talaropeptin B(化合物2，12mg)。
实施例4三肽生物碱化合物的制备
真菌Talaromyces purpureogenus.CX11发酵培养后，取5L发酵培养液，离心取上清得到发酵液；发酵液浓缩，用10g硅藻土拌样，1L乙酸乙酯回流，进行正相硅胶柱层析分离(200-300目，1kg；硅胶柱尺寸L 50mm，12mm)，依次以体积比9:1、5:1、1:1、1:3、1:9的石油醚/乙酸乙酯混合液和乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集5:1馏分；分段后用反相硅胶柱层析，洗脱剂为甲醇/水(1:9-9:1)，依次以体积比1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇/水混合液进行梯度洗脱，收集8：2馏分；继而用高效液相色谱分离，流动相为：甲醇/水(63：37)，流速为10mL/min，高效液相色谱的检测波长为254nm，保留时间47分钟的峰用甲醇重结晶为talaropeptin A(化合物1，13mg)，保留时间56分钟的峰用甲醇重结晶为talaropeptinB(化合物2，17mg)。
实施例5三肽生物碱化合物的结构鉴定
采用HPLC对制得的化合物进行纯度鉴定，纯度大于98％的样品运用质谱和核磁共振技术进行结构鉴定，核磁共振用Bruker AVANCE DRX-600NMR Sectrometer测定，TMS作内标；高分辨质谱FTICRMS用Bruker Apex Spectrometer测定；电喷雾质谱ESI-MS用BrukerEsquire 3000plus Spectrometer测定。
根据化合物的一维NMR分析结果(见表1)和二维NMR分析结果，可知，化合物talaropeptin A(1)的分子式为C20H23N3O6；化合物talaropeptin B(2)的分子式为C20H23N3O5。talaropeptin A(1)和B(2)结构如图1所示。
表1化合物talaropeptin A(1)和talaropeptin B(2)的NMR数据
实施例6三肽生物碱化合物抗真菌活性分析
取96孔板，将待测化合物样品用沙氏液体培养基稀释为1mg/mL的加载液，然后进行稀释，共设6个浓度梯度，分别为80μg/mL、40μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL、3.13μg/mL，每个梯度设置3个复孔。各孔加入真菌白色念珠菌Candida albicans SC5314、新型隐球菌的Crytococcus neoformans GOYJ11988和镰刀菌Fusarium oxysporum ATCC28856的悬液，菌株浓度为1×105CFU/mL，于37℃培养24h，酶标仪625nm下测OD值。阳性对照采用放线菌酮。
实验结果显示，化合物1抗白色念珠菌Candida albicans的MIC为40μg/mL，抗新型隐球菌的Crytococcus neoformans的MIC为40μg/mL，抗镰刀菌的MIC为12.5μg/mL；化合物2抗白色念珠菌Candida albicans的MIC为80μg/mL，抗新型隐球菌的Crytococcusneoformans的MIC为80μg/mL，抗镰刀菌Fusarium oxysporum的MIC为25μg/mL；阳性对照药物放线菌酮对上述三种真菌的MIC分别是25μg/mL，25μg/mL，12.5μg/mL。
上述结果表明该化合物1和2具有较好的抗真菌作用。
Claims (6)
1.一种三肽生物碱化合物，其特征在于，所述化合物的结构式如式(Ⅰ)所示，
其中R为OH或H。
2.如权利要求1所述的三肽生物碱化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将保藏号为CCTCC NO：M 2018338的篮状菌属真菌Talaromycespurpureogenus.CX11经活化后接种于培养液中，进行发酵培养，发酵培养的条件为20-30℃静态培养10-40天；
以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：淀粉1-8g、麸皮4-25g、酵母膏2-10g、KH2PO41-10g，MgSO4·7H2O 0.1-1.0g，余量为水；
或者，以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：马铃薯100-500g、蛋白胨1-8g、酵母膏1-8g、葡萄糖3-25g、余量为水；培养液初始pH值为6.0-7.0；
(2)发酵培养结束后，分离得到菌丝体和发酵液；菌丝体中加入有机溶剂中浸提，分离得到浸提液，浸提液浓缩后用蒸馏水混悬，得到水混悬液，然后用二氯甲烷或乙酸乙酯对水混悬液进行萃取，得到萃取液A；发酵液与硅藻土拌样后，采用二氯甲烷或乙酸乙酯回流萃取，得到萃取液B；
(3)将萃取液A或萃取液B浓缩后进行正相硅胶柱层析分离，依次以体积比8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4、1:6、1:8的二氯甲烷/甲醇进行梯度洗脱，收集体积比6:1的二氯甲烷/甲醇混合液洗脱的馏分，再利用葡聚糖凝胶色谱和重结晶分离获得所述化合物；
或者，将萃取液A或萃取液B浓缩后进行正相硅胶柱层析分离，依次以体积比9:1、5:1、1:1、1:3、1:9的石油醚/乙酸乙酯混合液进行梯度洗脱，收集5:1馏分，再进行反相硅胶柱层析，依次以体积比1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇/水混合液进行梯度洗脱，收集8:2馏分，继而利用高效液相色谱分离，流动相为体积比63:37的甲醇/水混合液，流速为10mL/min，保留时间47分钟的峰为R＝OH的化合物，保留时间56分钟的峰为R＝H的化合物。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：淀粉4g、麸皮10g、酵母膏2g、KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 0.6g，余量为水；
或者，以体积1L计，所述的培养液包括以下原料：马铃薯500g、蛋白胨2g、酵母膏1g、葡萄糖20g、余量为水；培养液初始pH值为7.0。
4.如权利要求1所述的三肽生物碱化合物在制备抗真菌药物中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，病原菌为白色念珠菌、新型隐球菌、镰刀菌中的一种或多种。
6.一种药物组合物，其特征在于，包括有效剂量的如权利要求1所述的三肽生物碱化合物和药学上可接受的载体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211294679.0A CN115894519B (zh) | 2022-10-21 | 2022-10-21 | 一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211294679.0A CN115894519B (zh) | 2022-10-21 | 2022-10-21 | 一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115894519A CN115894519A (zh) | 2023-04-04 |
| CN115894519B true CN115894519B (zh) | 2024-05-17 |
Family
ID=86471811
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211294679.0A Active CN115894519B (zh) | 2022-10-21 | 2022-10-21 | 一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115894519B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1439953A (fr) * | 1965-01-28 | 1966-05-27 | Sandoz Sa | Nouveaux dérivés de l'ergolène et leur préparation |
| DE3018543A1 (de) * | 1979-05-16 | 1980-11-27 | Erba Farmitalia | Secoergolinderivate |
| GB2051049A (en) * | 1979-05-16 | 1981-01-14 | Erba Farmitalia | Secoergoline Derivatives |
| DE3018514A1 (de) * | 1979-09-20 | 1981-04-09 | Farmitalia Carlo Erba S.p.A., Milano | 6,7-secoergoline |
| GB2058746A (en) * | 1979-09-20 | 1981-04-15 | Erba Farmitalia | 6,7-Secoergolines |
-
2022
- 2022-10-21 CN CN202211294679.0A patent/CN115894519B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1439953A (fr) * | 1965-01-28 | 1966-05-27 | Sandoz Sa | Nouveaux dérivés de l'ergolène et leur préparation |
| DE3018543A1 (de) * | 1979-05-16 | 1980-11-27 | Erba Farmitalia | Secoergolinderivate |
| GB2051049A (en) * | 1979-05-16 | 1981-01-14 | Erba Farmitalia | Secoergoline Derivatives |
| DE3018514A1 (de) * | 1979-09-20 | 1981-04-09 | Farmitalia Carlo Erba S.p.A., Milano | 6,7-secoergoline |
| GB2058746A (en) * | 1979-09-20 | 1981-04-15 | Erba Farmitalia | 6,7-Secoergolines |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115894519A (zh) | 2023-04-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110452247B (zh) | 一种杂萜化合物及其制备方法和应用 | |
| CN114956993B (zh) | 一种源于钩状木霉的抑菌化合物及其应用 | |
| WO2022247618A2 (zh) | 具有抗新冠病毒活性的聚酮类化合物的制备及其应用 | |
| CN103172507B (zh) | 蛇孢菌素类二倍半萜化合物及其制备方法与应用 | |
| CN103724290B (zh) | 一种环肽化合物clavatustide A及其产生菌、制备方法和应用 | |
| CN101367716B (zh) | 一类炭壳菌聚酮及其制法和用途 | |
| US11851692B2 (en) | Method for preparing an antimycin compound produced by Streptomyces sp.4-7 | |
| CN115894519B (zh) | 一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用 | |
| CN112300243B (zh) | 一种环肽化合物及其制备方法和应用 | |
| CN114907367B (zh) | 大环内酯类化合物fw-z、其发酵菌株、发酵方法及应用 | |
| CN114213428B (zh) | 一种吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111807946B (zh) | 一种Pratensinon A化合物及其制备和应用 | |
| CN114409627A (zh) | 一种抗炎化合物Dalditone A及其制备方法和应用 | |
| CN109467579B (zh) | 一种具有免疫抑制活性的pks i型聚酮类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN108774120B (zh) | 拉帕醌类化合物及其制备方法 | |
| CN113004237A (zh) | 一种螺环化合物及其制备方法和应用 | |
| CN103641791A (zh) | 一种环肽化合物clavatustide B及其制备方法和应用 | |
| CN115433153B (zh) | 一对具有抗炎活性的聚酮类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN110452940A (zh) | 一种链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法 | |
| WO2022246810A1 (zh) | 具有抗新冠病毒活性的聚酮类化合物的制备及其应用 | |
| CN116874417B (zh) | 一种吡啶类生物碱及其在抗肿瘤药物制备中的应用 | |
| CN109439697B (zh) | 利用微生物发酵产高效抗氧化活性物质的方法 | |
| CN115504990B (zh) | 一种含糖-螺环-大环内酯类化合物fw-5-39及制备方法与应用 | |
| CN112409386B (zh) | 鸟嘌呤哌嗪化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111320597B (zh) | 一种抗植物病毒嘧肽霉素及其制备工艺和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |