CN113854548A - 一种含有溶菌酶的微生态制剂与制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生态制剂技术领域，尤其是一种含有溶菌酶的微生态制剂，包括溶菌酶15％‑25％、革兰氏阳性菌10％‑20％、谷氨酸(Glu35)3％‑5％、天冬氨酸(Asp52)3％‑5％、枯草芽孢杆菌10％‑20％、葡萄糖溶液25％‑41％。本发明使用的材料与培养的方法都比较的简单，能够快速调节人体或牲畜肠道的微生态，主要平衡肠道的微生态，来增强体质从而达到提高身体的免疫效果，并且培养类所使用的材料比较简单，而且对操作制备的环境和技术也复杂，适合大量的生产。
Description
技术领域
本发明涉及微生态制剂技术领域，尤其涉及一种含有溶菌酶的微生态制剂与制备方法。
背景技术
微生态制剂，是利用正常微生物或促进微生物生长的物质制成的活的微生物制剂，一切能促进正常微生物群生长繁殖的及抑制致病菌生长繁殖的制剂都称为“微生态制剂”，由于其调节肠道之功效，快速构建肠道微生态平衡，无论在婴儿、老人还是新生畜禽可以防止和治疗腹泻、便秘，现在的含有溶菌酶的微生态制剂与制备方法都比较的复杂，而且不能够快速调节人体或牲畜肠道来平衡肠道的微生态，不能来增强体质达到提高身体的免疫效果，并且培养类所使用的材料比较昂贵从而增加培养成本，而且对操作制备的环境和技术也比较复杂，不适合大量的生产。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种含有溶菌酶的微生态制剂与制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种含有溶菌酶的微生态制剂，包括溶菌酶15％-25％、革兰氏阳性菌10％ -20％、谷氨酸(Glu35)3％-5％、天冬氨酸(Asp52)3％-5％、枯草芽孢杆菌 10％-20％、葡萄糖溶液25％-41％。
一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，所述溶菌酶的等电点以下较广泛的pH值范围内，分子带正电荷，可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上，洗脱后盐析，可得溶菌酶沉淀，再进行精制可得成品其具体操作步骤如下：
步骤一、蛋清吸附↓724树脂洗涤↓缓冲液洗脱↓硫酸铵溶液盐析透析去碱性蛋白↓NaOH冻干溶菌酶冻干粉沉淀干燥溶菌酶在5～10℃下，将新鲜蛋清 540kg加入到已处理好的80kg724树脂中，搅拌吸附6h，在0～5℃静置12h；
步骤二、静置过后倾出上层蛋清树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用15mol/L、pH＝6.5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用600L的10％硫酸铵溶液洗脱收集洗脱液，洗脱液中加硫酸铵使终含硫酸铵量为40％，有白色沉淀生成，冷处放置12h，虹吸上层清液进行沉淀吸滤抽干，再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状，然后装入透析袋在温度3℃-5℃的条件下，对蒸馏水透析24h左右；
步骤三、在蒸馏水透析24h内换水2～3次，离心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液与离心液合并，再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH值上升到8.0～9.0，如有白色沉淀，即离心除去，然后用 3mol/L盐酸调pH＝5.0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶；以及
也可将离心液用3mol/L盐酸调pH＝3.5，在搅拌下缓慢加入5％的固体氯化钠，在约5℃的温度下静置48h，然后对液体进行离心沉淀用蒸馏水进行洗涤，干燥，即得溶菌酶。
优选的，所述枯草芽孢杆菌的培养基：20L-40L蒸馏水、40kg-80kg葡萄糖、 30kg-60kg蛋白胨、10kg-20kg氯化钠、1kg-2kg牛肉膏、40kg-80kg琼脂，温度 30℃-37℃条件下pH＝7即可。
一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，具体步骤如下：
步骤一：倒入葡萄糖溶液25％-41％在反应罐中，保持罐内温度到30℃ -37℃，然后放入溶菌酶15％-25％和革兰氏阳性菌10％-20％进行搅拌1h，然后密封反应罐防止其他菌类加入，然后保持温度30℃-37℃静置12h；
步骤二：打开静置12h的反应罐加入谷氨酸(Glu35)3％-5％和天冬氨酸 (Asp52)3％-5％进行搅拌1h，盖上反应罐保持温度30℃-37℃静置6h；
步骤三：打开静置6h的反应罐加入枯草芽孢杆菌10％-20％搅拌1h，盖上反应罐然后保持30℃-37℃静置24h得到含有溶菌酶的微生态制剂。
本发明提出的一种含有溶菌酶的微生态制剂与制备方法，有益效果在于：
本发明使用的材料与培养的方法都比较的简单，能够快速调节人体或牲畜肠道的微生态，主要平衡肠道的微生态，来增强体质从而达到提高身体的免疫效果，并且培养类所使用的材料比较简单，而且对操作制备的环境和技术也复杂，适合大量的生产。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“内”、“外”“前端”、“后端”、“两端”、“一端”、“另一端”等指示的方位或位置关系为基于所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“设置有”、“连接”等，应做广义理解，例如“连接”，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
一种含有溶菌酶的微生态制剂，包括溶菌酶15％-25％、革兰氏阳性菌10％ -20％、谷氨酸(Glu35)3％-5％、天冬氨酸(Asp52)3％-5％、枯草芽孢杆菌 10％-20％、葡萄糖溶液25％-41％。
一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，所述溶菌酶的等电点以下较广泛的pH值范围内，分子带正电荷，可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上，洗脱后盐析，可得溶菌酶沉淀，再进行精制可得成品其具体操作步骤如下：
步骤一、蛋清吸附↓724树脂洗涤↓缓冲液洗脱↓硫酸铵溶液盐析透析去碱性蛋白↓NaOH冻干溶菌酶冻干粉沉淀干燥溶菌酶在5～10℃下，将新鲜蛋清 540kg加入到已处理好的80kg724树脂中，搅拌吸附6h，在0～5℃静置12h；
步骤二、静置过后倾出上层蛋清树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用15mol/L、pH＝6.5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用600L的10％硫酸铵溶液洗脱收集洗脱液，洗脱液中加硫酸铵使终含硫酸铵量为40％，有白色沉淀生成，冷处放置12h，虹吸上层清液进行沉淀吸滤抽干，再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状，然后装入透析袋在温度3℃-5℃的条件下，对蒸馏水透析24h左右；
步骤三、在蒸馏水透析24h内换水2～3次，离心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液与离心液合并，再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH值上升到8.0～9.0，如有白色沉淀，即离心除去，然后用 3mol/L盐酸调pH＝5.0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶；以及
也可将离心液用3mol/L盐酸调pH＝3.5，在搅拌下缓慢加入5％的固体氯化钠，在约5℃的温度下静置48h，然后对液体进行离心沉淀用蒸馏水进行洗涤，干燥，即得溶菌酶。
实施例一：枯草芽孢杆菌的培养基：20L蒸馏水、40kg葡萄糖、30kg蛋白胨、10kg氯化钠、1kg牛肉膏、40kg琼脂，温度30℃-37℃条件下pH＝7即可。
一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，具体步骤如下：
步骤一：倒入葡萄糖溶液41％在反应罐中，保持罐内温度到30℃-37℃，然后放入溶菌酶15％和革兰氏阳性菌10％进行搅拌1h，然后密封反应罐防止其他菌类加入，然后保持温度30℃-37℃静置12h；
步骤二：打开静置12h的反应罐加入谷氨酸(Glu35)3％和天冬氨酸(Asp52) 3％进行搅拌1h，盖上反应罐保持温度30℃-37℃静置6h；
步骤三：打开静置6h的反应罐加入枯草芽孢杆菌10％搅拌1h，盖上反应罐然后保持30℃-37℃静置24h得到含有溶菌酶的微生态制剂。
实施例二：枯草芽孢杆菌的培养基：30L蒸馏水、60kg葡萄糖、45kg蛋白胨、15kg氯化钠、1.5kg牛肉膏、60kg琼脂，温度30℃-37℃条件下pH＝7即可。
一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，具体步骤如下：
步骤一：倒入葡萄糖溶液32％在反应罐中，保持罐内温度到30℃-37℃，然后放入溶菌酶20％和革兰氏阳性菌15％进行搅拌1h，然后密封反应罐防止其他菌类加入，然后保持温度30℃-37℃静置12h；
步骤二：打开静置12h的反应罐加入谷氨酸(Glu35)4％和天冬氨酸(Asp52) 4％进行搅拌1h，盖上反应罐保持温度30℃-37℃静置6h；
步骤三：打开静置6h的反应罐加入枯草芽孢杆菌15％搅拌1h，盖上反应罐然后保持30℃-37℃静置24h得到含有溶菌酶的微生态制剂。
实施例二：枯草芽孢杆菌的培养基：40L蒸馏水、80kg葡萄糖、60kg蛋白胨、20kg氯化钠、2kg牛肉膏、80kg琼脂，温度30℃-37℃条件下pH＝7即可。
一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，具体步骤如下：
步骤一：倒入葡萄糖溶液25％在反应罐中，保持罐内温度到30℃-37℃，然后放入溶菌酶25％和革兰氏阳性菌20％进行搅拌1h，然后密封反应罐防止其他菌类加入，然后保持温度30℃-37℃静置12h；
步骤二：打开静置12h的反应罐加入谷氨酸(Glu35)5％和天冬氨酸(Asp52) 5％进行搅拌1h，盖上反应罐保持温度30℃-37℃静置6h；
步骤三：打开静置6h的反应罐加入枯草芽孢杆菌20％搅拌1h，盖上反应罐然后保持30℃-37℃静置24h得到含有溶菌酶的微生态制剂。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种含有溶菌酶的微生态制剂，其特征在于：包括溶菌酶15％-25％、革兰氏阳性菌10％-20％、谷氨酸(Glu35)3％-5％、天冬氨酸(Asp52)3％-5％、枯草芽孢杆菌10％-20％、葡萄糖溶液25％-41％。
2.根据权利要求1所述的一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述溶菌酶的等电点以下较广泛的pH值范围内，分子带正电荷，可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上，洗脱后盐析，可得溶菌酶沉淀，再进行精制可得成品其具体操作步骤如下：
步骤一、蛋清吸附↓724树脂洗涤↓缓冲液洗脱↓硫酸铵溶液盐析透析去碱性蛋白↓NaOH冻干溶菌酶冻干粉沉淀干燥溶菌酶在5～10℃下，将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg724树脂中，搅拌吸附6h，在0～5℃静置12h；
步骤二、静置过后倾出上层蛋清树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用15mol/L、pH＝6.5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用600L的10％硫酸铵溶液洗脱收集洗脱液，洗脱液中加硫酸铵使终含硫酸铵量为40％，有白色沉淀生成，冷处放置12h，虹吸上层清液进行沉淀吸滤抽干，再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状，然后装入透析袋在温度3℃-5℃的条件下，对蒸馏水透析24h左右；
步骤三、在蒸馏水透析24h内换水2～3次，离心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液与离心液合并，再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH值上升到8.0～9.0，如有白色沉淀，即离心除去，然后用3mol/L盐酸调pH＝5.0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶；以及
也可将离心液用3mol/L盐酸调pH＝3.5，在搅拌下缓慢加入5％的固体氯化钠，在约5℃的温度下静置48h，然后对液体进行离心沉淀用蒸馏水进行洗涤，干燥，即得溶菌酶。
3.根据权利要求1-2中任意一项中所述的一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的培养基：20L-40L蒸馏水、40kg-80kg葡萄糖、30kg-60kg蛋白胨、10kg-20kg氯化钠、1kg-2kg牛肉膏、40kg-80kg琼脂，温度30℃-37℃条件下pH＝7即可。
4.根据权利要求1所述的一种含有溶菌酶的微生态制剂的制备方法，其特征在于具体步骤如下：
步骤一：倒入葡萄糖溶液25％-41％在反应罐中，保持罐内温度到30℃-37℃，然后放入溶菌酶15％-25％和革兰氏阳性菌10％-20％进行搅拌1h，然后密封反应罐防止其他菌类加入，然后保持温度30℃-37℃静置12h；
步骤二：打开静置12h的反应罐加入谷氨酸(Glu35)3％-5％和天冬氨酸(Asp52)3％-5％进行搅拌1h，盖上反应罐保持温度30℃-37℃静置6h；
步骤三：打开静置6h的反应罐加入枯草芽孢杆菌10％-20％搅拌1h，盖上反应罐然后保持30℃-37℃静置24h得到含有溶菌酶的微生态制剂。
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