CN110438107A - 一种溶菌酶的高效生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的属于溶菌酶技术领域，具体为一种溶菌酶的高效生产方法，该溶菌酶的高效生产方法步骤如下：步骤一：原料处理：将鸡蛋利用蛋清分离器分离出蛋清，然后将蛋清搅拌5分钟，使鸡蛋清的粘稠度均匀，接着利用筒筛过滤除去脐带块等其他杂质；步骤二：吸附：利用搅拌装置边搅拌蛋清边加入724树脂，使724树脂全部悬浮于蛋清中，温度控制在0‑5摄氏度，搅拌吸附3‑6小时，将蛋清在0‑5摄氏度环境中静置过夜；步骤三：去杂蛋白：将步骤二处理后的蛋清，把上层清液渐渐倒出，下层树脂用清水洗去吸附的蛋白质，反复清洗3‑5次，将树脂抽滤掉水分；该发明提高了溶菌酶的纯度，简化了生产过程，提高了生产效率的综合效果。
Description
技术领域
本发明涉及溶菌酶技术领域，具体为一种溶菌酶的高效生产方法。
背景技术
溶菌酶(lysozyme)学名N-乙酰己糖胺酶，属于胞壁质酶。溶菌酶广泛存在于自然界的各种微生物、原生动物、人和动植物组织中。但不同来源的溶菌酶其抗菌谱也不尽相同。溶菌酶在临床上具有很高的实用价值，它可与血液中的病菌和病毒结合，具有抗菌、抗病毒止血、消肿、加快组织恢复等作用。临床上可用于慢性鼻炎、急性慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等的治疗。溶菌酶还是人体内的非特异免疫因子，可提高肌体免疫力。近年来，有关溶菌酶抗肿瘤、抗艾滋病毒的药理研究也表明，溶菌酶可作为一种较强的免疫调节因子用于预防和治疗恶性肿瘤，以及作为一种有效的抗HIV物质用于艾滋病的治疗。
现有技术当中的溶菌酶的生产方法的生产过程较为复杂，且生产的效率较为低下，在生产过程中溶菌酶的纯度有待进一步提高，因此亟需研发一种溶菌酶的高效生产方法。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实施方式。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有溶菌酶的高效生产方法中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的是提供溶菌酶的高效生产方法，提高了溶菌酶的纯度，简化了生产过程，提高了生产效率。
为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：
一种溶菌酶的高效生产方法，该溶菌酶的高效生产方法步骤如下：
步骤一：原料处理：将鸡蛋利用蛋清分离器分离出蛋清，然后将蛋清搅拌5分钟，使鸡蛋清的粘稠度均匀，接着利用筒筛过滤除去脐带块等其他杂质；
步骤二：吸附：利用搅拌装置边搅拌蛋清边加入724树脂，使724树脂全部悬浮于蛋清中，温度控制在0-5摄氏度，搅拌吸附3-6小时，将蛋清在0-5摄氏度环境中静置过夜；
步骤三：去杂蛋白：将步骤二处理后的蛋清，把上层清液渐渐倒出，下层树脂用清水洗去吸附的蛋白质，反复清洗3-5次，将树脂抽滤掉水分；
步骤四：洗脱：取磷酸缓冲液分三次加入树脂中，搅拌时间为15-20分钟，每次搅拌后减压抽滤掉水分，然后利用硫酸铵分四次洗脱溶菌酶，每次搅拌30-45分钟，过滤抽干，合并洗脱液，按总体积加入32％固体硫酸铵使含量达到40％，有白色沉淀产生，冷却放置过夜，弃上清，沉淀离心分离，得到粗制品；
步骤五：透析：将粗制品溶解与蒸馏水中，装入透析袋，温度控制在0-5摄氏度，透析20-40小时；
步骤六：盐析：向步骤五中的透析液中慢慢滴加1mol/L氢氧化钠，同时不断搅拌，直至PH值上升到8.5-9时，有白色沉淀，立即离心除去，在搅拌中加入3mol/L盐酸，使溶液pH值达到3.5，按体积缓缓加入5％固体氯化钠，即有白色沉淀析出，在0-5摄氏度环境中放置48小时，离心得溶菌酶沉淀；
步骤七：干燥：将步骤六中的沉淀加入10倍量的无水丙酮，不断搅拌，然后冷处静置数小时，用漏斗过滤去丙酮，将沉淀置于真空干燥箱干燥，即可制得溶解酶。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述鸡蛋清的PH值大于等于8。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述724树脂占10-18％，所述蛋清的占20-25％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述磷酸缓冲液28-30％，硫酸铵占20-25％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述步骤7中的冷处环境为0摄氏度。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述搅拌装置为电动搅拌器。
与现有技术相比：该溶菌酶的生产方法经过吸附、去杂蛋白、洗脱、透析、盐析和干燥的一系列过程，提高了溶菌酶的提炼纯度，并简化了相关的过程，从整体上提高了溶菌酶的生产效率。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施方式的限制。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的实施方式作进一步地详细描述。
本发明提供一种溶菌酶的高效生产方法：
实施方式1
该溶菌酶的高效生产方法步骤如下：
步骤一：原料处理：将鸡蛋利用蛋清分离器分离出蛋清，然后将蛋清搅拌5分钟，使鸡蛋清的粘稠度均匀，接着利用筒筛过滤除去脐带块等其他杂质；
步骤二：吸附：利用搅拌装置边搅拌蛋清边加入724树脂，使724树脂全部悬浮于蛋清中，温度控制在0摄氏度，搅拌吸附6小时，将蛋清在0摄氏度环境中静置过夜；
步骤三：去杂蛋白：将步骤二处理后的蛋清，把上层清液渐渐倒出，下层树脂用清水洗去吸附的蛋白质，反复清洗5次，将树脂抽滤掉水分；
步骤四：洗脱：取磷酸缓冲液分三次加入树脂中，搅拌时间为15分钟，每次搅拌后减压抽滤掉水分，然后利用硫酸铵分四次洗脱溶菌酶，每次搅拌45分钟，过滤抽干，合并洗脱液，按总体积加入32％固体硫酸铵使含量达到40％，有白色沉淀产生，冷却放置过夜，弃上清，沉淀离心分离，得到粗制品；
步骤五：透析：将粗制品溶解与蒸馏水中，装入透析袋，温度控制在0摄氏度，透析40小时；
步骤六：盐析：向步骤五中的透析液中慢慢滴加1mol/L氢氧化钠，同时不断搅拌，直至PH值上升到8.5时，有白色沉淀，立即离心除去，在搅拌中加入3mol/L盐酸，使溶液pH值达到3.5，按体积缓缓加入5％固体氯化钠，即有白色沉淀析出，在5摄氏度环境中放置48小时，离心得溶菌酶沉淀；
步骤七：干燥：将步骤六中的沉淀加入10倍量的无水丙酮，不断搅拌，然后冷处静置数小时，用漏斗过滤去丙酮，将沉淀置于真空干燥箱干燥，即可制得溶解酶。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述鸡蛋清的PH值大于等于8。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述724树脂占10％，所述蛋清的占25％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述磷酸缓冲液28％，硫酸铵占25％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述步骤七中的冷处环境为0摄氏度。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述搅拌装置为电动搅拌器。
实施方式2
该溶菌酶的高效生产方法步骤如下：
步骤一：原料处理：将鸡蛋利用蛋清分离器分离出蛋清，然后将蛋清搅拌5分钟，使鸡蛋清的粘稠度均匀，接着利用筒筛过滤除去脐带块等其他杂质；
步骤二：吸附：利用搅拌装置边搅拌蛋清边加入724树脂，使724树脂全部悬浮于蛋清中，温度控制在5摄氏度，搅拌吸附3小时，将蛋清在5摄氏度环境中静置过夜；
步骤三：去杂蛋白：将步骤二处理后的蛋清，把上层清液渐渐倒出，下层树脂用清水洗去吸附的蛋白质，反复清洗3次，将树脂抽滤掉水分；
步骤四：洗脱：取磷酸缓冲液分三次加入树脂中，搅拌时间为20分钟，每次搅拌后减压抽滤掉水分，然后利用硫酸铵分四次洗脱溶菌酶，每次搅拌30分钟，过滤抽干，合并洗脱液，按总体积加入32％固体硫酸铵使含量达到40％，有白色沉淀产生，冷却放置过夜，弃上清，沉淀离心分离，得到粗制品；
步骤五：透析：将粗制品溶解与蒸馏水中，装入透析袋，温度控制在5摄氏度，透析20小时；
步骤六：盐析：向步骤五中的透析液中慢慢滴加1mol/L氢氧化钠，同时不断搅拌，直至PH值上升到9时，有白色沉淀，立即离心除去，在搅拌中加入3mol/L盐酸，使溶液pH值达到3.5，按体积缓缓加入5％固体氯化钠，即有白色沉淀析出，在0摄氏度环境中放置48小时，离心得溶菌酶沉淀；
步骤七：干燥：将步骤六中的沉淀加入10倍量的无水丙酮，不断搅拌，然后冷处静置数小时，用漏斗过滤去丙酮，将沉淀置于真空干燥箱干燥，即可制得溶解酶。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述鸡蛋清的PH值大于等于8。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述724树脂占18％，所述蛋清的占20％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述磷酸缓冲液30％，硫酸铵占20％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述步骤七中的冷处环境为0摄氏度。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述搅拌装置为电动搅拌器。
实施方式3
该溶菌酶的高效生产方法步骤如下：
步骤一：原料处理：将鸡蛋利用蛋清分离器分离出蛋清，然后将蛋清搅拌5分钟，使鸡蛋清的粘稠度均匀，接着利用筒筛过滤除去脐带块等其他杂质；
步骤二：吸附：利用搅拌装置边搅拌蛋清边加入724树脂，使724树脂全部悬浮于蛋清中，温度控制在3摄氏度，搅拌吸附4.5小时，将蛋清在2.5摄氏度环境中静置过夜；
步骤三：去杂蛋白：将步骤二处理后的蛋清，把上层清液渐渐倒出，下层树脂用清水洗去吸附的蛋白质，反复清洗4次，将树脂抽滤掉水分；
步骤四：洗脱：取磷酸缓冲液分三次加入树脂中，搅拌时间为17分钟，每次搅拌后减压抽滤掉水分，然后利用硫酸铵分四次洗脱溶菌酶，每次搅拌37分钟，过滤抽干，合并洗脱液，按总体积加入32％固体硫酸铵使含量达到40％，有白色沉淀产生，冷却放置过夜，弃上清，沉淀离心分离，得到粗制品；
步骤五：透析：将粗制品溶解与蒸馏水中，装入透析袋，温度控制在2.5摄氏度，透析30小时；
步骤六：盐析：向步骤五中的透析液中慢慢滴加1mol/L氢氧化钠，同时不断搅拌，直至PH值上升到8.9，有白色沉淀，立即离心除去，在搅拌中加入3mol/L盐酸，使溶液pH值达到3.5，按体积缓缓加入5％固体氯化钠，即有白色沉淀析出，在2.5摄氏度环境中放置48小时，离心得溶菌酶沉淀；
步骤七：干燥：将步骤六中的沉淀加入10倍量的无水丙酮，不断搅拌，然后冷处静置数小时，用漏斗过滤去丙酮，将沉淀置于真空干燥箱干燥，即可制得溶解酶。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述鸡蛋清的PH值大于等于8。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述724树脂占14％，所述蛋清的占22.5％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述磷酸缓冲液29％，硫酸铵占22.5％。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述步骤七中的冷处环境为0摄氏度。
作为本发明所述的溶菌酶的高效生产方法的一种优选方案，其中：所述搅拌装置为电动搅拌器。
综合以上实施方式，该溶菌酶的高效生产方法经过吸附、去杂蛋白、洗脱、透析、盐析和干燥的一系列过程，提高了溶菌酶的提炼纯度，并简化了相关的过程，从整体上提高了溶菌酶的生产效率，具有良好的经济效益。
虽然在上文中已经参考实施方式对本发明进行了描述，然而在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的部件。尤其是，只要不存在结构冲突，本发明所披露的实施方式中的各项特征均可通过任意方式相互结合起来使用，在本说明书中未对这些组合的情况进行穷举性的描述仅仅是出于省略篇幅和节约资源的考虑。因此，本发明并不局限于文中公开的特定实施方式，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。
Claims (6)
1.一种溶菌酶的高效生产方法，其特征在于：该溶菌酶的高效生产方法步骤如下：
步骤一：原料处理：将鸡蛋利用蛋清分离器分离出蛋清，然后将蛋清搅拌5分钟，使鸡蛋清的粘稠度均匀，接着利用筒筛过滤除去脐带块等其他杂质；
步骤二：吸附：利用搅拌装置边搅拌蛋清边加入724树脂，使724树脂全部悬浮于蛋清中，温度控制在0-5摄氏度，搅拌吸附3-6小时，将蛋清在0-5摄氏度环境中静置过夜；
步骤三：去杂蛋白：将步骤二处理后的蛋清，把上层清液渐渐倒出，下层树脂用清水洗去吸附的蛋白质，反复清洗3-5次，将树脂抽滤掉水分；
步骤四：洗脱：取磷酸缓冲液分三次加入树脂中，搅拌时间为15-20分钟，每次搅拌后减压抽滤掉水分，然后利用硫酸铵分四次洗脱溶菌酶，每次搅拌30-45分钟，过滤抽干，合并洗脱液，按总体积加入32％固体硫酸铵使含量达到40％，有白色沉淀产生，冷却放置过夜，弃上清，沉淀离心分离，得到粗制品；
步骤五：透析：将粗制品溶解与蒸馏水中，装入透析袋，温度控制在0-5摄氏度，透析20-40小时；
步骤六：盐析：向步骤五中的透析液中慢慢滴加1mol/L氢氧化钠，同时不断搅拌，直至PH值上升到8.5-9时，有白色沉淀，立即离心除去，在搅拌中加入3mol/L盐酸，使溶液pH值达到3.5，按体积缓缓加入5％固体氯化钠，即有白色沉淀析出，在0-5摄氏度环境中放置48小时，离心得溶菌酶沉淀；
步骤七：干燥：将步骤六中的沉淀加入10倍量的无水丙酮，不断搅拌，然后冷处静置数小时，用漏斗过滤去丙酮，将沉淀置于真空干燥箱干燥，即可制得溶解酶。
2.根据权利要求1所述的一种溶菌酶的高效生产方法，其特征在于：所述鸡蛋清的PH值大于等于8。
3.根据权利要求1所述的一种溶菌酶的高效生产方法，其特征在于：所述724树脂占10-18％，所述蛋清的占20-25％。
4.根据权利要求1所述的一种溶菌酶的高效生产方法，其特征在于：所述磷酸缓冲液28-30％，硫酸铵占20-25％。
5.根据权利要求1所述的一种溶菌酶的高效生产方法，其特征在于：所述步骤7中的冷处环境为0摄氏度。
6.根据权利要求1所述的一种溶菌酶的高效生产方法，其特征在于：所述搅拌装置为电动搅拌器。
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