CN113528398A - 一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用 - Google Patents

一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用，所述具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)SDCP1905菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年12月4日，保藏编号为CGMCC No.21298，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明所涉及的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌具有良好的解磷解钾功能，施用于土壤中能明显提高有效磷和钾的含量，促进植物生长。将其作为生物肥料或与化学肥料配合使用，对改良土壤和提高农作物产量及品质具有重要的意义。

Description

一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其 应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用，尤其涉及一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、具有解磷解钾作用的微生物菌剂及其在改良土壤和提高农作物产量及品质中的应用。
背景技术
化肥的长期使用易导致土壤养分比例失调、土壤板结及退化等问题。钾是作物生长必需的3种元素之一，它是多种酶的激活剂，与水的调节、淀粉和蛋白质的合成以及植物的能量***(光合作用和呼吸作用)有关。在土壤中有不同形态的钾存在，但作物只能吸收土壤中的可溶性钾，而土壤中大部分钾被束缚在矿物质中，无法供植物吸收。此外，在大多数土壤中钾很容易由于作物吸收、径流、淋滤和土壤侵蚀而减少。在传统农作物生产过程中，过度依赖于无机肥料，对土壤生态环境造成重大破坏。
磷作为第二大重要的植物营养元素，在植物的细胞***、能量转移、信号传导、核酸合成以及光合作用等过程中发挥着重要作用。据统计，我国缺磷土壤面积已占总耕地面积的2/3以上，土壤中有效磷平均含量仅有0.1％，严重影响植物生长和作物产量。化学磷肥虽在一定程度上满足了作物生长对磷元素的需求，却易因养分流失出现肥效下降、土壤养分比例失调、土壤板结及退化等问题。解磷解钾菌能通过黏附到矿物表面并释放酸性物质等途径，将难溶性钾、磷和硅等营养元素释放出来进而供植物吸收利用。因此，利用解磷解钾微生物制备土壤改良剂、生物肥料等，不仅能提高土壤有效磷的利用率、增加农作物的产量，还能有效减少磷和钾的流失。利用解磷解钾菌分解土壤矿物质释放磷和钾被认为是最具应用前景的方法。
目前，部分分离自土壤的解磷解钾微生物已投入实际应用，且效果显著。如：洋葱伯克霍尔德菌作为生物肥料可以显著提高番茄、马铃薯、洋葱等作物的产量；巴西青霉菌对小麦等谷物类作物促生长作用明显，能有效减少化学磷肥的施加。目前，解磷解钾微生物已得到广泛应用，但还不能满足实际需求，需要从更广泛的范围内筛选高效解磷解钾微生物以及多样化的施用工艺，以满足不同环境下的土壤改良和肥力提升的需求。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用，尤其提供一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、具有解磷解钾作用的微生物菌剂及其在改良土壤和提高农作物产量及品质中的应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌，所述具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SDCP1905菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年12月4日，保藏编号为CGMCC No.21298，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明所涉及的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌具有良好的解磷解钾功能，施用于土壤中能明显提高有效磷和钾的含量，促进植物生长。将其作为生物肥料或与化学肥料配合使用，对改良土壤和提高农作物产量及品质具有重要的意义。
本发明所涉及的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌可以通过如下方法分离和筛选得到：
(1)将新鲜大棚土壤用10倍重量的无菌水稀释，置于摇床震荡混合30min，混合液用无菌水梯度稀释，取稀释后的样品涂布于LB固体培养基上，在37℃下培养16-40h，待长出单菌落后挑取接种到LB试管斜面，培养后保存；
(2)取分离得到的菌株接种于筛选培养基中，筛选培养基为：酵母膏1.0g，葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 1.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，CaCO3 0.5g，钾长石粉3.0g，磷矿粉3.0g，定容至1000ml，调pH至7.0-7.2，在37℃下发酵，发酵过程测定发酵液有效钾和有效磷的含量变化。采用火焰光度计测定有效钾的含量，采用钼锑抗比色法测定磷的含量，筛选出一株高效解磷解钾菌株即为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SDCP1905菌株，发酵液中有效磷和钾的含量可达到0.57mg/mL和0.74mg/mL。
第二方面，本发明提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，所述具有解磷解钾作用的微生物菌剂包括如第一方面所述的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌和固体载体。
优选地，所述微生物菌剂中枯草芽孢杆菌的活菌数大于5.0×109cfu/g，例如5.0×109cfu/g、6.0×109cfu/g、7.0×109cfu/g、8.0×109cfu/g、9.0×109cfu/g、1.0×1010cfu/g、2.0×1010cfu/g、3.0×1010cfu/g、5.0×1010cfu/g等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述固体载体由包括粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉在内的原料制备而成。
优选地，所述粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉的质量比为(2.5-4.5):1:(1.5-3.5):(0.1-1):(0.1-0.5)。
在上述(2.5-4.5)中具体数值可以选择2.5、3、3.5、4、4.5等；
在上述(1.5-3.5)中具体数值可以选择1.5、1.8、2、2.2、2.5、3、3.5等；
在上述(0.1-1)中具体数值可以选择0.1、0.2、0.5、0.8、1等；
在上述(0.1-0.5)中具体数值可以选择0.1、0.2、0.3、0.4、0.5等；
上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
本发明创造性地以粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉的组合作为微生物菌剂中的固体载体，并以上述特定的质量配比进行组合，能够协同配合枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)SDCP1905菌株在提高土壤中有效磷和钾的含量、促进植物生长方面具有更加显著的作用。
第三方面，本发明提供一种如第二方面所述的具有解磷解钾作用的微生物菌剂的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
将具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌的种子液接种到固体载体中，混合后进行培养，最后干燥，得到所述具有解磷解钾作用的微生物菌剂。
本发明所涉及的具有解磷解钾作用的微生物菌剂的制备方法简单易操作，适合工业化生产，具有实用性。
优选地，所述种子液的制备方法包括：将具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌接种于培养基中，在转速200-400rpm(例如200rpm、220rpm、250rpm、280rpm、300rpm、320rpm、350rpm、380rpm、400rpm等)、温度25-38℃(例如25℃、28℃、30℃、32℃、33℃、35℃、36℃、38℃等)的条件下培养24-30h(例如24h、25h、26h、27h、28h、29h、30h等)，即得。
优选地，所述培养基的组分包括胰蛋白胨5-10g/L、酵母提取物5-10g/L、氯化钠2-10g/L。
所述胰蛋白胨在所述培养基中的浓度可以为5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L等；
所述酵母提取物在所述培养基中的浓度可以为5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L等；
所述氯化钠在所述培养基中的浓度可以为2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L等；
上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述种子液的接种量为10-20％，例如10％、12％、14％、15％、16％、18％、20％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述培养在25-38℃(例如25℃、28℃、30℃、32℃、35℃、38℃等)下培养36-48h(例如36h、40h、42h、44h、46h、48h等)，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述干燥是指在40-45℃(例如40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃等)下干燥至含水量为15％-30％(例如15％、26％、27％、30％等)，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述固体载体的制备方法包括：将粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉按比例混合后加入蒸馏水，灭菌，即得。
优选地，所述蒸馏水的加入量为粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉总质量的1-2倍。
优选地，所述灭菌在115-121℃(例如115℃、117℃、118℃、121℃等)下灭菌10-30min(例如10min、15min、20min、25min、30min等)，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第四方面，本发明提供一种如第一方面所述的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌或如第二方面所述的具有解磷解钾作用的微生物菌剂在改良土壤和提高农作物产量及品质中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明所涉及的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌具有良好的解磷解钾功能，施用于土壤中能明显提高有效磷和钾的含量，促进植物生长。将其作为生物肥料或与化学肥料配合使用，对改良土壤和提高农作物产量及品质具有重要的意义。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
实施例1
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌，其分离和筛选方法如下：
(1)将新鲜大棚土壤用10倍重量的无菌水稀释，置于摇床震荡混合30min，混合液用无菌水梯度稀释至10-1-10-7倍，取稀释后的样品涂布于LB固体培养基上，在37℃下培养24h，待长出单菌落后挑取接种到LB试管斜面，48h后保存于4℃冰箱备用。共分离得到细菌53株。
(2)取分离得到的菌株接种于筛选培养基中，筛选培养基为：酵母膏1.0g，葡萄糖10.0g，(NH4)2SO4 1.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，CaCO3 0.5g，钾长石粉3.0g，磷矿粉3.0g，定容至1000ml，调pH至7.2，在37℃下发酵，发酵过程测定发酵液有效钾和有效磷的含量变化。采用火焰光度计测定有效钾的含量，采用钼锑抗比色法测定磷的含量，筛选出一株高效解磷解钾菌株即为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SDCP1905菌株，发酵液中有效磷和钾的含量可达到0.57mg/mL和0.74mg/mL。
实施例2
本实施例对实施例1筛选得到的菌株进行鉴定，方法如下：
对筛选到的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SDCP1905菌株进行了16Sr DNA分子鉴定，将菌株进行试管斜面活化后接种于LB液体培养基中，于30℃，200rpm条件下振荡培养过夜。12000rpm离心1min收集菌体，然后利用细菌基因组提取试剂盒提取所分离菌株的基因组。利用通用引物对各个菌株的16S rRNA基因进行扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测合格后测序。测序所得的核酸序列结果于NCBI Nucleotide BLAST上进行比对，并利用软件MEGA V10.0.5进行各个测序菌株的***进化树绘制。
经过序列比对，该菌株确定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株的16SrDNA序列如下：
ggggcgggtgctatacatgcagtcgagcccacagatgggagcttgctccctgatgttagc
ggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctgtaagactgggataactccgggaaa
ccggggctaataccggatggttgtttgaaccgcatggttcagacataaaaggtggcttcg
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ccagactcctacgggagccagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacgga
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gaaatgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgttggcgactctctcctctgtaactg
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taaacgatgagtgctaagtgttagggggtaaccgccccttagtgctgcagctaacgcatt
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tgacatcctctgacaatcctagagataggacgtccccttcgggggcagagtgacaggtgg
tgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaa
cccttgatcttagttgccagcattcagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaac
cggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt
gctacaatggacagaacaaagggcagcgaaaccgcgaggttaagccaatcccacaaatct
gttctcagttcggatcgcagtctgcaactcgactgcgtgaagctggaatcgctagtaatc
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acgagagtttgtaacacccgaagtcggtgaggtaacctaaaggagccagccgccgaagaa
实施例3
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法如下：
(1)将实施例1的枯草芽孢杆菌接种于培养基中，在转速200rpm、温度25℃的条件下培养30h，所述培养基的组分包括胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L，制得种子液；
(2)将粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾、磷矿粉按照质量比例为3.5:1:2.5:0.5:0.3混合，混合后加入1.5倍质量的蒸馏水，115℃灭菌30min后得到固体载体；
(3)将步骤(1)得到的种子液接种到步骤(2)的固体载体中，混合后在28℃下培养36h，在45℃下干燥至含水量为27％，得到所述具有解磷解钾作用的微生物菌剂，活菌数为7.0×109cfu/g。
实施例4
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法如下：
(1)将实施例1的枯草芽孢杆菌接种于培养基中，在转速300rpm、温度38℃的条件下培养24h，所述培养基的组分包括胰蛋白胨5g/L、酵母提取物6g/L、氯化钠5g/L，制得种子液；
(2)将粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾、磷矿粉按照质量比例为2.5:1:1.5:0.3:0.2混合，混合后加入1倍质量的蒸馏水，121℃灭菌15min后得到固体载体；
(3)将步骤(1)得到的种子液接种到步骤(2)的固体载体中，混合后在37℃下培养36h，在45℃下干燥至含水量为25％，得到所述具有解磷解钾作用的微生物菌剂，活菌数为1.0×1010cfu/g。
实施例5
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法如下：
(1)将实施例1的枯草芽孢杆菌接种于培养基中，在转速400rpm、温度30℃的条件下培养24h，所述培养基的组分包括胰蛋白胨7g/L、酵母提取物10g/L、氯化钠6g/L，制得种子液；
(2)将粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾、磷矿粉按照质量比例为4.5:1:3.5:1:0.5混合，混合后加入2倍质量的蒸馏水，121℃灭菌15min后得到固体载体；
(3)将步骤(1)得到的种子液接种到步骤(2)的固体载体中，混合后在37℃下培养36h，在40℃下干燥至含水量为20％，得到所述具有解磷解钾作用的微生物菌剂，活菌数为8×109cfu/g。
实施例6
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中不含有粉煤灰，且草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉的质量比保持不变。其他条件均一致。
实施例7
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中不含有草炭，且粉煤灰、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉的质量比保持不变。其他条件均一致。
实施例8
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中不含有麦麸，且粉煤灰、草炭、腐殖酸钾和磷矿粉的质量比保持不变。其他条件均一致。
实施例9
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中不含有腐殖酸钾，且粉煤灰、草炭、麦麸和磷矿粉的质量比保持不变。其他条件均一致。
实施例10
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中不含有磷矿粉，且粉煤灰、草炭、麦麸和腐殖酸钾的质量比保持不变。其他条件均一致。
实施例11
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中固体载体的制备原料为单一的粉煤灰。其他条件均一致。
实施例12
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中固体载体的制备原料为单一的草炭。其他条件均一致。
实施例13
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中固体载体的制备原料为单一的麦麸。其他条件均一致。
实施例14
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中固体载体的制备原料为单一的腐殖酸钾。其他条件均一致。
实施例15
本实施例提供一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中固体载体的制备原料为单一的磷矿粉。其他条件均一致。
应用例1-13
将实施例3-15制得的微生物菌剂与沙土按照1:7的质量比混合均匀后作为植物培养基质，将实施例3中步骤(2)的固体载体与沙土按照1:7的质量比混合均匀后作为对照植物培养基质。将小麦种子播种到各组培养基质中，置于25℃环境中光照培养2周后，分别记录小麦株高和鲜重(每组记录50株数据)，计算小麦株高和鲜重相对于对照组的增长率(平均值)。结果如表1所示。
表1
组别 株高 鲜重
应用例1 32％ 57％
应用例2 35％ 60％
应用例3 34％ 58％
应用例4 32％ 55％
应用例5 30％ 54％
应用例6 29％ 54％
应用例7 28％ 51％
应用例8 30％ 54％
应用例9 22％ 48％
应用例10 25％ 50％
应用例11 26％ 48％
应用例12 22％ 49％
应用例13 24％ 48％
由表1数据可知：与对照组相比，本发明所涉及的具有解磷解钾作用的微生物菌剂促进植物生长的效果明显；且微生物菌剂中固体载体的配方组成也是影响植物生长效果的关键因素。
应用例14
将实施例3步骤(2)制得的固体载体与沙土按照1:6的质量比混合后作为植物培养基质，将小麦种子播种到培养基质中，按照5％(W/W)的比例接种本发明筛选到的解磷解钾菌株种子液，以不接种种子液的培养基质作为对照，置于25℃环境中光照培养2周后，分别记录小麦株高和鲜重(每组记录50株数据)，计算小麦株高和鲜重相对于对照组的增长率(平均值)。结果显示小麦株高和鲜重分别提高28％和46％，本发明所涉及的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌促进植物生长的效果明显。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
SEQUENCE LISTING
<110> 中科南京绿色制造产业创新研究院
中国科学院过程工程研究所
<120> 一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用
<130> 2021
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1440
<212> DNA
<213> 枯草芽孢杆菌SDCP1905
<400> 1
ggggcgggtg ctatacatgc agtcgagccc acagatggga gcttgctccc tgatgttagc 60
ggcggacggg tgagtaacac gtgggtaacc tgcctgtaag actgggataa ctccgggaaa 120
ccggggctaa taccggatgg ttgtttgaac cgcatggttc agacataaaa ggtggcttcg 180
gctaccactt acagatggac ccgcggcgca ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca 240
aggcgacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca cactgggact gagacaccgc 300
ccagactcct acgggagcca gcagtaggga atcttccgca atggacgaaa gtctgacgga 360
gcaacgccgc gtgagtgatg aaggttttcg gatcgtattg ctctgttgtt agggaagaac 420
aagtgccgtt caaatagggc ggcaccttga cggtacctaa ccagaaagcc acggctaact 480
acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggaatt attgggcgta 540
aagggctcgc aggcggtttc ttaagtctga tgtgaaagcc cccggctcaa ccggggaggg 600
tcattggaaa ctggggaact tgagtgcaga agaggagagt ggaattccac gtgtagcggt 660
gaaatgcgta gagatgtgga ggaacaccag tggcgttggc gactctctcc tctgtaactg 720
acgctgagga gcgaaagcgt ggggagcgaa caggattaga taccctggta gtccacgccg 780
taaacgatga gtgctaagtg ttagggggta accgcccctt agtgctgcag ctaacgcatt 840
aagcactccg cctggggaga acggtcgcaa gactgaaact caaacgaatt gacgggcccc 900
cgcacaagcg gtggagcatg acctttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct 960
tgacatcctc tgacaatcct agagatagga cgtccccttc gggggcagag tgacaggtgg 1020
tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa 1080
cccttgatct tagttgccag cattcagttg ggcactctaa ggtgactgcc ggtgacaaac 1140
cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1200
gctacaatgg acagaacaaa gggcagcgaa accgcgaggt taagccaatc ccacaaatct 1260
gttctcagtt cggatcgcag tctgcaactc gactgcgtga agctggaatc gctagtaatc 1320
gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380
acgagagttt gtaacacccg aagtcggtga ggtaacctaa aggagccagc cgccgaagaa 1440

Claims (10)

1.一种具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SDCP1905菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年12月4日，保藏编号为CGMCCNo.21298，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其特征在于，所述具有解磷解钾作用的微生物菌剂包括如权利要求1所述的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌和固体载体。
3.如权利要求2所述的具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中枯草芽孢杆菌的活菌数大于5.0×109cfu/g。
4.如权利要求2或3所述的具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其特征在于，所述固体载体由包括粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉在内的原料制备而成。
5.如权利要求4所述的具有解磷解钾作用的微生物菌剂，其特征在于，所述粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉的质量比为(2.5-4.5):1:(1.5-3.5):(0.1-1):(0.1-0.5)。
6.如权利要求2-5中任一项所述的具有解磷解钾作用的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
将具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌的种子液接种到固体载体中，混合后进行培养，最后干燥，得到所述具有解磷解钾作用的微生物菌剂。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述种子液的制备方法包括：将具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌接种于培养基中，在转速200-400rpm、温度25-38℃的条件下培养24-30h，即得；
优选地，所述培养基的组分包括胰蛋白胨5-10g/L、酵母提取物5-10g/L、氯化钠2-10g/L。
8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述种子液的接种量为10-20％；
优选地，所述培养在25-38℃下培养36-48h；
优选地，所述干燥是指在40-45℃下干燥至含水量为15％-30％。
9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述固体载体的制备方法包括：将粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉按比例混合后加入蒸馏水，灭菌，即得；
优选地，所述蒸馏水的加入量为粉煤灰、草炭、麦麸、腐殖酸钾和磷矿粉总质量的1-2倍；
优选地，所述灭菌在115-121℃下灭菌10-30min。
10.如权利要求1所述的具有解磷解钾作用的枯草芽孢杆菌或如权利要求2-5中任一项所述的具有解磷解钾作用的微生物菌剂在改良土壤和提高农作物产量及品质中的应用。
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