CN112830891A - 一种匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶胶体金检测试剂盒及其应用 - Google Patents
一种匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶胶体金检测试剂盒及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种新的化合物,采用这个化合物,可以提升对匹可硫酸钠、比沙可啶、脱乙酰比沙可啶的识别灵敏度和特异性。应用层析式免疫胶体金原理,将上述化合物制备成抗原,并进一步形成检测装置,检测装置中包含试纸条和反应杯,其中试纸中检测线与质控线线比色来半定量检测样品中匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶的含量,在短时间内快速准确地检测出样品是否含有匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶,能够满足减肥类产品中非法添加匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶检测需求,能满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。本发明与现有技术相比,具有使用方便、经济快捷、制作容易、成本低廉的特点。
Description
技术领域
本发明属于胶体金检测技术领域,具体涉及一种匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶胶体金检测试剂盒及其应用。
背景技术
近年来,食品、保健食品、中成药中非法添加现象层出不穷,其中,宣称具有减肥、纤体、通便等功效的产品已成为非法添加的重灾区,新型非法添加物层出不穷,一直是分析领域的研究热点。
匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶是二苯基甲烷类刺激性泻剂,通过刺激结肠黏膜中的感觉神经末梢,增强肠道蠕动和肠道分泌。匹可硫酸钠和比沙可啶经口服摄入后,在肠道被脱乙酰酶或结肠内细菌水解成活性双酚,促进结肠蠕动加快,减少传输时间和促进水份电解质在结肠腔内蓄积,软化粪便,增加粪便容积。该类药物适用于治疗各种便秘,主要用于消化器官检查前或术前排空肠道,其不良反应包括胃痉挛、急腹症(阑尾炎、胃肠炎、直肠出血、肠梗阻)、炎症性肠病、***或痔疮破裂和严重的水电解质紊乱,不可长期服用。脱乙酰比沙可啶是匹可硫酸钠和比沙可啶药物的主要杂质,在存在非法添加行为的产品中通常同时检出。
匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶属于减肥类产品的新型非法添加物,因服用含有该类药物的通便减肥产品致病、致死的情况偶有发生,严重危害消费者的健康,已成为通便减肥类产品的重点整治对象。目前,相关非法添加的研究报道较少,其检验方法主要有高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)和高效液相色谱法(HPLC)。我国食品补充检验方法BJS 201701和BJS 201911采用HPLC-MS/MS法对比沙可啶和匹可硫酸钠进行测定。这些方法定性定量准确,但操作繁琐、检验时间长,难以实现现场快速检测,不能为现场取证和执法提供技术支持。因此亟需一种特异性好、灵敏度高、操作简便、可实现现场快速检测的检测装置。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种化合物。
本发明的第二个目的在于提供一种抗原。
本发明的第三个目的在于提供一种抗体。
本发明的第四个目的在于提供上述化合物和抗原的应用。
本发明的第五个目的在于提供一种检测装置。
本发明的第六个目的在于提供上述检测装置的制备方法。
本发明的第七个目的在于提供一种检测二苯甲基烷类药物的方法。
本发明所采取的技术方案是:
本发明的第一个方面,提供一种化合物,所述化合物的结构式如式(Ⅰ)下:
进一步地,上述化合物为二苯基甲烷类药物半抗原。
进一步地,上述化合物的制备方法为:
1.将苯酚12.5g加热熔融后加入二氯甲烷8mL搅拌均匀,并降温至15℃以下。向体系中缓慢滴加吡啶-2-甲醛5.0g(滴加过程内温不得超过15℃)。完成后降温至0℃,然后滴加浓硫酸4.9g(滴加过程内温不得超过5℃)。滴加完成后反应1h,然后升温至室温反应21h。反应完成后降温至0℃并调节pH至7。继续搅拌后加入乙醇30mL。继续搅拌至有大量固体析出。过滤,滤饼用少量水洗,得淡橙色固体。在淡橙色固体中加入20mL乙酸乙酯45℃搅拌1h,乘热过滤,滤饼用少量乙酸乙酯洗涤,滤饼干燥后得到中间体1。
2.取2.40g中间体1溶于40mLDMF再加入4.78g无水碳酸钾,搅拌均匀后加入4-溴丁酸甲酯1.56g。80℃搅拌反应3h,反应完成蒸干溶剂,加入适量蒸馏水溶解,用乙酸乙酯萃取2-3遍,合并有机相,蒸干后过柱纯化得到中间体2。
3.取0.65g中间体2溶于5mL乙醇中。再取145mg氢氧化钠,向其中加入155mg水后用5mL乙醇溶解滴入反应体系。室温搅拌反应4h,反应完成蒸干溶剂,加入适量蒸馏水溶解,并用6mol/L的盐酸调节pH至5~6。用乙酸乙酯萃取2-3遍,合并有机相,蒸干后得到中间体3。
4.取0.38g中间体3溶于10mL绝干四氢呋喃中,再向其中加入635mg三乙胺,将反应体系降温至0℃。再取333mg氯磺酸用5mL冰冷的绝干四氢呋喃溶解,滴入反应体系。体系自然升温至室温搅拌反应5.5h,反应完成蒸干溶剂,加入适量乙醇溶解,并调节体系为弱碱性。抽滤除去不溶物,滤液浓缩至较少溶剂后加入适量乙酸乙酯,出现大量白色沉淀。抽滤后将沉淀转移入圆底烧瓶并用少量甲醇溶解,加6N盐酸并用TLC板检测至在溴甲酚绿显色剂中显蓝色的点恰好消失。浓缩后过柱纯化得二苯基甲烷类药物半抗原。
本发明的第二个方面,提供一种抗原,由本发明第一个方面所述化合物制备而成。
进一步地,所述抗原为二苯基甲烷类药物免疫抗原或二苯基甲烷类药物偶联抗原。
进一步地,上述二苯基甲烷类药物免疫抗原的制备方法为:
1.取本发明第一方面所述化合物0.08~0.12mmol溶于2mLDMF中,搅拌加入0.18~0.22mmol DCC和0.1~0.2mmol NHS,4℃搅拌反应过夜,离心取上清得A液。
2.称取血蓝蛋白(KLH)130~150mg溶于PBS中,加入DMF 0.8~1.2mL,混匀得B液。
3.搅拌条件下,将A液滴入B液中,2~6℃反应10~14h,离心取上清,用生理盐水透析2~4天,每天更换3次透析液。
进一步地,上述二苯基甲烷类药物偶联抗原的制备方法为:
1.取二苯基甲烷类药物半抗原0.08~0.12mmol溶于2mLDMF中,搅拌加入0.18~0.22mmol DCC和0.1~0.2mmol NHS,4℃搅拌反应过夜,离心取上清得A液。
2.称取人血清蛋白(HSA)130~150mg溶于PBS中,加入DMF 0.8~1.2mL,混匀得B液。
3.搅拌条件下,将A液滴入B液中,2~6℃反应10~14h,离心取上清,用生理盐水透析2~4天,得到二苯基甲烷类药物偶联抗原。
本发明的第三个方面,提供一种抗体,所述抗体由本发明第二方面所述二苯基甲烷类药物免疫抗原免疫制备而成。
进一步地,上述抗体为二苯基甲烷类药物的单克隆抗体,其制备方法为:
1.使用本发明第二方面所述二苯基甲烷类药物免疫抗原免疫小鼠,加强免疫三次后,采血测量效价,待血清效价不再上升,用两倍剂量的二苯基甲烷类药物的抗原免疫小鼠,三天后去小鼠脾脏制备脾细胞,与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞按8:1的比例混合,加入无血清培养基中,离心后37℃水浴。
2.把1mL 50%PEG-4000缓缓加入细胞中,在1min内滴完,同时轻轻搅动底部沉淀,静置1min后,前30s沿管壁缓慢匀速加入无血清培养基1mL,后30s加入2mL,然后快速加入27mL终止融合过程,1100r/min离心5min,弃上清,用HAT选择性培养基重悬后加到已铺有饲养细胞的96孔细胞培养板中,37℃、体积分数5%的CO2条件下培养。
3.7天后换成HT培养液,待孔内的杂交细胞数量达到300个以上时,用间接ELISA法筛选,选择强阳性、抑制效果好、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化,经3次以上的克隆培养和检测,均呈阳性的孔内细胞即为分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,将杂交瘤细胞扩大培养以备单克隆抗体的制备。采用体内诱生腹水法生产抗二苯基甲烷类药物单克隆抗体。选4只经产小鼠,腹腔注射液体石蜡油0.5mL/只,7天后腹腔注射杂交瘤细胞3~5×106/只,10天后,待小鼠腹部明显膨大时收集腹水。用正辛酸-硫酸铵沉淀法来纯化腹水,经紫外测定抗二苯基甲烷类药物单克隆抗体的含量。
本发明的第四个方面,提供上述化合物或抗原在检测二苯甲基烷类药物中的应用。
本发明的第五个方面,提供一种检测装置,包括底板和反应杯,沿同一方向依次铺设的样品垫,硝酸纤维素膜和吸水纸,硝酸纤维素膜上含有检测线和质控线;所述反应杯内含有胶体金标记的二苯基甲烷类药物单克隆抗体。
进一步地,所述检测线上为能与本发明第三方面所述的二苯基甲烷类药物单克隆抗体结合的本发明第二个方面所述的二苯基甲烷类药物偶联抗原。
进一步地,所述质控线上为能与本发明第三方面所述的二苯基甲烷类药物单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体。
本发明的第六个方面,提供上述检测装置的制备方法,包含以下步骤:
S1:调节胶体金溶液pH值至7~9,加入二苯基甲烷类药物的单克隆抗体,0.5~1.5h后加入抗体量相当的聚乙二醇,充分反应后加入抗体量相当的BSA,加完后,继续搅拌后在离心得均一性金标抗体沉淀,再加对硝基棕榈酸脂(PNPB)重悬备用。
S2:在试纸条底板上,沿同一方向依次将样品垫,喷涂有二苯基甲烷类药物偶联抗原的检测线和兔抗鼠抗体的质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接粘连;反应杯内加入胶体金标记抗体,冻干。
进一步地,步骤S1中所述胶体金的制备方法为:取0.5~1.5%氯金酸溶液0.5~1.5ml,加90~100ml超纯水制成氯金酸溶液,加热沸腾后,取0.5~2%柠檬酸三钠1.0~2ml迅速加入煮沸的氯金酸溶液中,继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色,颜色稳定后继续加热4~6min,室温冷却,补充失水至原体积。
进一步地,所述兔抗鼠抗体的制备方法为:用载体蛋白结合抗原免疫新西兰白兔,免疫剂量为50~100μg/次,背部皮下分多点注射;首免,用合成的人工抗原与等量弗氏完全佐剂乳化;加强免疫,用合成的人工抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化,连续免疫4~5次,每次间隔4~8周,最后一次免疫后10~15天,以ELISA法测其定效价达到105以上时,采血并分离收集高免血清,以饱和硫酸铵盐析法提取IgG抗体,冻存备用。
进一步地,提供本发明第六方面所述检测装置在检测二苯甲基烷类药物中的应用。
进一步地,所述二苯甲基烷类药物为含有吡啶环的二苯甲基烷类药物。
优选地,所述二苯甲基烷类药物选自匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶中的一种或多种。
本发明第一方面所述化合物和匹可硫酸钠、比沙可啶、脱乙酰比沙可啶、酚酞、双醋酚丁的化学结构分别如下图所示,其中吡啶环是匹可硫酸钠、比沙可啶、脱乙酰比沙可啶的一个特征位点,而同属二苯甲基烷类药物的酚酞、双醋酚丁结构中不含吡啶环,因此本发明采用这个特征位点,可以提升对匹可硫酸钠、比沙可啶、脱乙酰比沙可啶的识别灵敏度和特异性。
本发明的第七个方面,提供一种检测二苯甲基烷类药物的方法,包括以下步骤:
使用本发明第六方面所述检测装置进行样本检测,吸取样本处理液滴到反应杯中,混匀,***试纸条,20~40℃孵育3~8分钟;取出试纸条,进行结果判读;若T线与C线同时显示***条带且T线颜色比C线深,则结果为阴性;若T线颜色比C线浅或C线显色而T线不显色,则结果为阳性;若C线、T线均不显色,则检测装置已失效。
进一步地,所述二苯甲基烷类药物为含有吡啶环的二苯甲基烷类药物。
优选地,所述二苯甲基烷类药物选自匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶中的一种或多种。
本发明的有益效果是:
1.本发明提供一种新的化合物,其含有吡啶环,吡啶环是匹可硫酸钠、比沙可啶、脱乙酰比沙可啶的一个特征位点,而同属二苯甲基烷类药物的酚酞、双醋酚丁结构中不含吡啶环,因此本发明采用这个特征位点,可以提升对匹可硫酸钠、比沙可啶、脱乙酰比沙可啶的识别灵敏度和特异性。
2.本发明应用层析式免疫胶体金原理,将上述化合物制备成抗原,并进一步形成检测装置,检测装置中包含试纸条和反应杯,其中试纸中检测线与质控线线比色来半定量检测样品中匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶的含量,在短时间内快速准确地检测出样品是否含有匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶,能够满足减肥类产品中非法添加匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶检测需求,能满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。本发明与现有技术相比,具有使用方便、经济快捷、制作容易、成本低廉的特点。
附图说明
图1为实施例5中的检测装置的结构示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例与附图进一步说明本发明的技术方案。下述实施例仅用于示例性说明,不能理解为对本发明的限制。除非特别说明,下述实施例中使用的试剂原料为常规市购或商业途径获得的试剂原料。除非特别说明,下述实施例中使用的***为本领域常规使用的设备。
实施例1一种二苯基甲烷类药物半抗原的制备
1.将原料苯酚12.5g加入到单口烧瓶中加热,使之熔融后加入二氯甲烷8mL搅拌均匀,并降温至15℃以下。向体系中缓慢滴加吡啶-2-甲醛5.0g(滴加过程内温不得超过15℃)。滴加完成后继续降温至0℃,然后滴加浓硫酸4.9g(滴加过程内温不得超过5℃)。滴加完成后0℃反应1h,然后升温至室温反应21h。反应完成后降温至0℃并用冰冷的10%氢氧化钠调节pH至7。继续搅拌0.5h,确保pH不再变化后加入乙醇30mL。继续搅拌至有大量固体析出。过滤,滤饼用少量水洗。得淡橙色固体。将上述得到的淡橙色固体加入到单口烧瓶中,加入20mL乙酸乙酯45℃搅拌1h,乘热过滤,滤饼用少量乙酸乙酯洗涤,滤饼干燥后得到中间体1。
2.取2.40g中间体1溶于40mLDMF再加入4.78g无水碳酸钾,搅拌均匀后加入4-溴丁酸甲酯1.56g。80℃搅拌反应3h,反应完成蒸干溶剂,加入适量蒸馏水溶解,用乙酸乙酯萃取2-3遍,合并有机相,蒸干后过柱纯化得到中间体2。
3.取0.65g中间体2溶于5mL乙醇中。再取145mg氢氧化钠,向其中加入155mg水后用5mL乙醇溶解滴入反应体系。室温搅拌反应4h,反应完成蒸干溶剂,加入适量蒸馏水溶解,并用6mol/L的盐酸调节pH至5~6。用乙酸乙酯萃取2~3遍,合并有机相,蒸干后得到中间体3。
4.取0.38g中间体3溶于10mL绝干四氢呋喃中,再向其中加入635mg三乙胺,将反应体系降温至0℃。再取333mg氯磺酸用5mL冰冷的绝干四氢呋喃溶解,滴入反应体系。体系自然升温至室温搅拌反应5.5h,反应完成蒸干溶剂,加入适量乙醇溶解,并用10%氢氧化钠调节体系为弱碱性。抽滤除去不溶物,滤液浓缩至较少溶剂后加入适量乙酸乙酯,出现大量白色沉淀。抽滤后将沉淀转移入圆底烧瓶并用少量甲醇溶解,逐滴滴加6N盐酸并用TLC板检测至在溴甲酚绿显色剂中显蓝色的点恰好消失。浓缩后过柱纯化得二苯基甲烷类药物半抗原,其化学结构式为:
实施例2一种二苯基甲烷类药物免疫抗原的合成
利用实施例1中所得二苯基甲烷类药物半抗原制备免疫抗原。取二苯基甲烷类药物半抗原0.1mmol溶于2mLDMF中,搅拌加入0.2mmol DCC和0.15mmol NHS。4℃下磁力搅拌反应过夜,离心后上清夜为A液,称取血蓝蛋白(KLH)140mg溶于10mL浓度为0.1mol/L的PBS(pH8.0)中。加入DMF1mL,搅拌溶解制备B液,磁力搅拌下,A液逐渐滴入B液中,4℃下反应12h。离心后,取上清液,4℃下用生理盐水透析3天,每天更换3次透析液,得到的全抗原,以1mg/mL的浓度分装于0.5mL离心管中。冻存于-20℃冰箱中。
实施例3一种二苯基甲烷类药物单克隆抗体的制备
利用实施例2中的二苯基甲烷类药物免疫抗原制备单克隆抗体。使用二苯基甲烷类药物免疫抗原并鉴定后免疫4只6周龄BALB/C小鼠,加强免疫三次后,采血测效价,待血清效价不再上升,用两倍剂量的抗原不加佐剂免疫小鼠,三天后脱颈致死小鼠,在无菌条件下取脾脏制备脾细胞,与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞按8:1的比例混合于50mL离心管,加入30mL无血清IPMI1640培养基,1100r/min离心5min弃上清,将细胞团轻轻振松,置于37℃水浴中。把1mL50%PEG-4000缓缓加入细胞中,在1min内滴完,同时轻轻搅动底部沉淀,静置1min后,前30s沿管壁缓慢匀速加入无血清培养基1mL,后30s加入2mL,然后快速加入27mL终止融合过程,1100r/min离心5min,弃上清,用HAT选择性培养基重悬后加到已铺有饲养细胞的96孔细胞培养板中,37℃、体积分数5%的CO2条件下培养。7天后换成HT培养液,待孔内的杂交细胞数量达到300个以上时,用间接ELISA法筛选,选择强阳性、抑制效果好、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化,经3次以上的克隆培养和检测,均呈阳性的孔内细胞即为分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,将杂交瘤细胞扩大培养以备单克隆抗体的制备。
采用体内诱生腹水法生产抗二苯基甲烷类药物单克隆抗体。选4只昆明小鼠,腹腔注射液体石蜡油0.5mL/只,7天后腹腔注射杂交瘤细胞3~5×106/只,10天后,待小鼠腹部明显膨大时收集腹水。用正辛酸-硫酸铵沉淀法来纯化腹水,经紫外测定抗二苯基甲烷类药物单克隆抗体的含量。
实施例4二苯基甲烷类药物偶联抗原的制备
取实施例1中的半抗原0.1mmol溶于2mLDMF中,搅拌加入0.2mmol DCC和0.15mmolNHS。4℃下磁力搅拌反应过夜,离心后上清夜A液,称取人血清蛋白(HSA)140mg溶于10mL浓度0.1mol/L的PBS(pH8.0)中。加入DMF 1mL,搅拌溶解制备B液,磁力搅拌下,A液逐渐滴B液中,4℃下反应12h。离心后,取上清液,4℃下用生理盐水透析3天,每天更换3次透析液。得到的全抗原以10mg/mL的浓度分装于0.5mL离心管中。冻存于-20℃冰箱中备用。
实施例5一种检测装置的制备
1.胶体金的制备
取1%氯金酸溶液1mL,加99mL超纯水成终浓度0.01%的氯金酸溶液,加热沸腾后,取1%柠檬酸三钠1.6mL一次性迅速加入煮沸的氯金酸溶液中,继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色,颜色稳定后继续加热5min,室温冷却,补充失水至原体积。
2.胶体金标记单克隆抗体的制备
调节胶体金溶液pH值至8.0,用恒速搅拌器均匀搅拌,同时逐滴加入二苯基甲烷类药物的单克隆抗体,1h后加入抗体量相当的PEG,充分反应30min后加入抗体量相当的BSA,加完后,继续搅拌30min。在9000rpm下离心30min获得均一性金标抗体沉淀,再加PNPB重悬备用。
3.胶体金检测装置的制备
在试纸条底板上,沿同一方向依次将样品垫,喷涂有二苯基甲烷类药物偶联抗原的检测线和兔抗鼠抗体的质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接粘连;反应杯内加入胶体金标记抗体,冻干。
实施例6样品检测
1)使用实施例5中的检测装置进行液体样品的检测,具体步骤如下:
取液体样品0.1mL,用Tris-PBS缓冲溶液稀释10倍,摇匀(必要时离心、过滤)备用。滴加Tris-PBS缓冲溶液0.1mL、上述样品稀释试液0.1mL于反应杯中,上下抽吸1~3次混匀,随后***试纸条,于20~40℃反应3min。取出试纸条,进行结果判读。若T线与C线同时显示***条带且T线颜色比C线深,则结果为阴性;若T线颜色比C线浅或C线显色而T线不显色,则结果为阳性;若C线、T线均不显色,则检测装置已失效。
2)使用实施例5中的检测装置进行固体样品的检测,具体步骤如下:
取固体样品约0.1g,加10mL Tris-PBS缓冲溶液充分搅拌(必要时加热辅助溶解)。滴加Tris-PBS缓冲溶液0.1mL、上述样品稀释试液0.1mL于反应杯中,上下抽吸1~3次混匀,随后***试纸条,于20~40℃反应3min。取出试纸条,进行结果判读。若T线与C线同时显示***条带且T线颜色比C线深,则结果为阴性;若T线颜色比C线浅或C线显色而T线不显色,则结果为阳性;若C线、T线均不显色,则检测装置已失效。
实施例7灵敏度检测
用Tris-PBS缓冲溶液分别配制不同浓度的匹可硫酸钠、比沙可啶、脱乙酰比沙可啶标准溶液,对上述标准溶液分别作20次平行测试,具体结果见表1。
表1检出限的确定
由表1可见,当匹可硫酸钠浓度为5μg/L时,20份样品阳性检出率为50%;当浓度为10μg/L时,20份阳性检出率为100%。因此,该装置匹可硫酸钠的检出限为10μg/L。当比沙可啶、脱乙酰比沙可啶浓度为25μg/L时,20份样品阳性检出率为50%;当浓度为50μg/L时,20份阳性检出率为100%。因此,该装置比沙可啶、脱乙酰比沙可啶的检出限为50μg/L。
实施例8特异性检测
在阴性样品试液中,分别加入减肥类产品常见非法添加物酚酞、***、伪麻黄碱、二甲双胍、双醋酚丁标准溶液,减肥类产品常见功效成分番泻苷、左旋肉碱标准溶液,使之浓度为200μg/L。结果见表2。
表2交叉反应验证结果
实验结果发现,只有加入匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶的样品能够检出,而加入上述减肥类产品常见的非法添加物和功效成分的样品无法检出,说明本检测装置对匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶的特异性较好。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
2.一种抗原,其特征在于,所述抗原由权利要求1所述的化合物制备而成。
3.根据权利要求2所述的抗原,其特征在于,所述抗原为二苯基甲烷类药物免疫抗原或二苯基甲烷类药物偶联抗原。
4.一种抗体,其特征在于,所述抗体由权利要求3所述的二苯基甲烷类药物免疫抗原免疫制备而成。
5.权利要求1所述化合物或权利要求2~3任一项所述抗原或权利要求4所述抗体在检测二苯甲基烷类药物中的应用。
6.一种检测装置,包括底板和反应杯,所述底板包括沿同一方向依次铺设的样品垫,硝酸纤维素膜和吸水纸,硝酸纤维素膜上含有检测线和质控线;所述反应杯内含有胶体金标记的权利要求4所述抗体;所述检测线上为能与权利要求4所述抗体结合的权利要求3所述的二苯基甲烷类药物偶联抗原;所述质控线上为能与权利要求4所述抗体结合的兔抗鼠抗体。
7.权利要求6所述的检测装置的制备方法,包含以下步骤:
S1:调节胶体金溶液pH值至7~9,加入权利要求4所述抗体,0.5~1.5h后加入聚乙二醇,充分反应后加入BSA,加完后,继续搅拌后在离心得金标抗体沉淀,再加对硝基棕榈酸脂重悬备用。
S2:在试纸条底板上,沿同一方向依次将样品垫,喷涂有权利要求3所述二苯基甲烷类药物偶联抗原的检测线和兔抗鼠抗体的质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接粘连;反应杯内加入胶体金标记抗体,冻干。
8.权利要求6所述的检测装置在检测二苯甲基烷类药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述二苯甲基烷类药物为含有吡啶环的药物,优选为匹可硫酸钠、比沙可啶和脱乙酰比沙可啶中的一种或多种。
10.一种检测二苯甲基烷类药物的方法,包括以下步骤:
使用权利要求6所述检测装置进行样本检测,吸取样本处理液滴到反应杯中,混匀,***试纸条,进行结果判读;若T线与C线同时显示***条带且T线颜色比C线深,则结果为阴性;若T线颜色比C线浅或C线显色而T线不显色,则结果为阳性;若C线、T线均不显色,则检测装置已失效。
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