CN112300154B - 一类含氮杂环化合物、其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种作为BRD4抑制剂的含氮杂环化合物(如式Ⅰ所示)、及包含其的药物组合物、其制备方法，以及其在制备用于治疗与BRD4相关的疾病如癌症、炎症、心血管疾病、代谢性疾病和免疫性疾病的药物中的用途。

Description

一类含氮杂环化合物、其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药领域，具体而言，涉及一种含氮杂环化合物、其制备方法及含有该类化合物的药物组合物，以及它们作为BRD4抑制剂在制备治疗癌症、炎症、心血管疾病,代谢性疾病和免疫性疾病的药物中的用途。
发明背景
肿瘤是严重危害人类健康和危及人类生命的重大疾病之一。随着人口老年化的加剧，恶性肿瘤发病率呈现逐年上升趋势，但肿瘤总体治愈率仍然较低且复发率高，因此在肿瘤预防和治疗方面仍然有巨大的未被满足的临床需求。表观遗传调控的异常是导致肿瘤发生的重要因素之一。表观遗传是指基于非基因序列改变所致基因表达水平的变化，包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色体重塑和非编码灿灿调控等，主要通过对基因转录或翻译过程的调控，影响其功能和特性。组蛋白是染色质的核心，参与转录后修饰，主要包括乙酷化、甲基化、磷酸化和泛素化。
Bromodomain(溴结构域)是由110个氨基酸组成。它能特异性识别组蛋白上的乙酷化赖氨酸残基，介导蛋白相互作用，进而影响基因转录调控过程。目前，已经在人体46种蛋白质中发现有61种不同溴结构域，根据其所在蛋白功能的不同，划分为Ⅰ-Ⅷ八大家族。其中溴结构域和末端外结构域(Bromodomain and extra-terminal domain,BET)蛋白是溴结构域家族中的第Ⅱ家族,也是研究最为透彻的一类。BET蛋白家族包含4个亚型，即含溴结构域蛋白2(Bromodomain containing protein 2,BRD2)、BRD3、BRD4和溴结构域睾丸特异性蛋白(Bromodomain testis-specific protein,BRDT)；其中每个亚型均含有2个高度保守的溴结构域BD1和BD2，均可通过招募转录调节复合物到乙酰化染色质，进而参与细胞增殖过程和细胞周期进展。
BRD4最初命名为有丝***染色体相关蛋白(MCAP)，也称为Fshrg4或Hunk1，于1988年从哺乳动物介导复合物的研究中发现，该复合物是一种将转录因子与RNA Pol II激活联系起来的多蛋白共激活因子。[48]它有三个不同长度的亚型：一个长亚型(1362个残基)和两个较短的亚型(分别为722和796个残基)。[ref:Nature 2013,498,246-250]BRD4含有两个高度保守的N-末端溴结构域(BD1和BD2)，一个ET结构域和一个C-末端结构域(CTD)。BD1和BD2与乙酰化染色质以及非组蛋白相互作用，以调节转录，DNA复制，细胞周期进程和其他细胞活动。[50]尽管它们具有序列相似性，但由于它们与不同的赖氨酸乙酰化组蛋白(例如H3和H4)或与转录蛋白的相互作用，BD1和BD2似乎具有不同的功能。BRD4 BD1与二乙酰化的H4K5AcK8Ac标记结合，以将其相关蛋白锚定到染色质中的靶基因启动子和增强子位点。BRD4 BD2不与单乙酰化的H3K4ac相互作用，但与二乙酰化的H3K4AcK9Ac显示出强烈的相互作用.此外，BRD4 BD2与非组蛋白的募集有关(例如Twist)。[52]BRD4的每个BD由通过螺旋间ZA环和BC环连接的左旋四个螺旋(αZ，αA，αB和αC)组成，其构成活性乙酰基-赖氨酸结合口袋。在每个BD的环内的特定残基(例如，BD1的Gln85对BD2的Lys383，BD1的Asp144与BD2的His442)有助于确定乙酰赖氨酸结合特异性。另外，通过水分子在乙酰基羰基氧原子和保守的Tyr97之间形成第二相互作用。BRD4在正常哺乳动物细胞的细胞周期控制中起重要作用，影响细胞过程，包括细胞增殖，细胞凋亡和转录。[Kanno,T,et al.Mol.Cell 2004,13,33-43；Dey,A.et.al,Mol.Biol.Cell 2009,20,4899-4909]向HeLa细胞核中显微注射BRD4特异性抗体的试验可导致细胞周期停滞，表明BRD4是G2-M相变所必需的。[Dey,A.；et.al,Mol.Cell.Biol.2000,20,6537-6549]此外，BRD4对于Aurora B激酶的表达至关重要，Aurora B激酶负责有丝***期间的染色体分离和胞质***.58 BRD4通过各种蛋白质-蛋白质相互作用(例如，乙酰化组蛋白，转录因子，介质，P蛋白)将转录调节复合物募集到染色质中。研究表明BRD4的表达水平失调或功能紊乱与淋巴瘤、黑色素瘤、急性髓系白血病、结肠癌、乳腺癌等的发生有关。
BRD4 shRNA或抑制剂可以诱导上述肿瘤发生细胞周期阻滞、凋亡及细胞分化，显示出强大的抗肿瘤活性。因此人们已经进行了大量努力以开发BRD4抑制剂。报道的BRD4抑制剂在化学上分为几个系列，包括氮杂卓，3,5-二甲基异恶唑，吡啶酮，***并吡嗪，四氢喹啉(THQs)，4-酰基吡咯，2-噻唑烷酮等，这些化合物在体外和/或体内对BRD4显示出抑制作用，并且在各种水平报道了选择性。在过去的十年中，小分子BET抑制剂的数量急剧增加。其中一些已进入人体临床试验的不同阶段，包括RVX-208/Apabetalone，I-BET762/GSK-525762A，OTX-015/MK8628，CPI-0610，TEN-010和ABBV-075他们的大多数临床研究都集中在癌症治疗上。鉴于溴结构域在40多种不同蛋白质中的相似性，不同的BRD4抑制剂的选择性也有所不同。最初的一些选择性抑制BET家族蛋白而不是其他BCP家族。后来人们研究出了选择性是靶向BET蛋白的BD1或BD2。现在人们努力研究选择性更好的化合物,特异性地抑制BRD4 BD1或BRD4 BD2。
作为最广泛表征的BET蛋白，BRD4涉及许多人类疾病，包括癌症炎症，心血管疾病，中枢神经***(CNS)疾病和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。BRD4代表了各种疾病的有希望的治疗靶标，并且靶向BRD4在药物和学术环境中引起了极大的兴趣公开的选择性BRD4抑制剂的专利申请包括等，到目前为止，学术界和工业界的研究组找到了不同化学类型的BET抑制剂，并且有些已经进入临床测试阶段。目前公开了一系列BET抑制剂的专利申请，其中包括W02011054553、W02011054845、W02013097052、W02013185284、W02014139324、W02014164771、W02015100282、W02015075665、W02015080707、W02015164480、W02015195862、W02016050821，W02013097052、W02013158952W02014165127、W02014206345、W02016077378和W02015081189等。
其中，艾伯维(Abbive)公司开发的溴结构域抑制剂ABBV-075在急性髓系白血病(AML)、多发性骨髓瘤(MM)和实体肿瘤的治疗展示出活性，目前正处于一期临床试验阶段。Tensha Therapeutics公司致力于小分子表观遗传蛋白BET抑制剂的开发，其首个候选药物Tensha-010正在开展两项Ib期研究。另外，Constellation制药公司开发的CPI-0610、葛兰素史克(GSK)公司开发的GSK-525762、默沙东(Merck)开发的MK-8628等也进入临床试验。
BRD4抑制剂作为药物在医药行业具有良好的应用前景，目前还没有上市的药物，为了达到更好的治疗效果的目的和满足市场需求，我们希望能开发出新一代的高效低毒的选择性BRD4抑制剂。
本发明所要解决的技术问题在于开发新型BRD4结构域抑制剂，从而为涉及到溴结构域功能的疾病和适应症提供更多治疗方法，因而提供了一系列与现有技术完全不同的具有溴结构域抑制作用的含氮类化合物。
发明内容:
本发明提供了一种如式I所示的含氮类杂环化合物、其互变异构体、其光学异构体、其水合物、其溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物、或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002151023850000041
其中，
Figure BDA0002151023850000042
为单键或双键；
R1、R2各自独立地为H、卤素、C1-C6的烷基、C1-C6的取代烷基、C3-C6环烷基、-氰基、C1-C6的烷氧基或CF3；优选为H、F、Cl、Br、C1-C3的烷基、CN、C1-C3的烷氧基或CF3；
R3为H、C1-C6的烷基、C3-C6环烷基、或C1-C5的取代烷基；优选为甲基、乙基、丙基或环丙基、环丁基、或C1-C5的取代烷基；
R4为H、卤素、氰基、C1-C6的烷基、C1-C6的取代烷基；优选为H、C1-C3的烷基；
A1至A9各自独立地为C或N；
X为NH或O；
环B为
Figure BDA0002151023850000051
本发明还提供了制备式I所示含氮杂环化合物的方法，其中的一种方法包括如下步骤：
Figure BDA0002151023850000052
其中，X、A1至A9、环B、R1、R2、R3、R4的定义如式I所定义；G为保护基，例如2,4-二甲氧基苄基,叔丁氧羰基,苄氧羰基；
通过合理的步骤或商业购买,获得化合物II,然后与环B的硼酯或硼酸化合物(P-01),在催化剂的作用下进行偶联反应,接上环B得到化合物III；与P-02片段发生取代反应或用催化偶联反应,接上该片段,得到化合物IV,将化合物IV除去保护基(如果有保护基G),与R3SO2Cl(P-03)发生磺酰化反应得到目标产物I。需要说明的是,根据化合物的不同,其联接顺序可以改变,例如先与R3SO2Cl进行磺酰化反应,然后进行取代或催化偶联反应,最后进行与环B硼酸酯的偶联反应,同样可以得到目标产物I。
其中的一种方法如下反应所示,包括化合物V与含有R3SO2Na发生取代反应,得到化合物VI,化合物VI与含有环B的硼酯或硼酸化合物(P-01)反应,得到目标产物I：
Figure BDA0002151023850000061
其中，X、A1至A9、环B、R1、R2、R3、R4的定义如式I所定义；
其中的另一种方法如下反应所示,包括化合物VII与含有R3I发烷基反应,得到化合物VIII,化合物VIII在氧化剂的作用下得到化合物IX,化合物IX与含有含有环B的硼酯或硼酸化合物(P-01)反应,得到目标产物I：
Figure BDA0002151023850000062
其中，X、A1至A9、环B、R1、R2、R3、R4的定义如式I所定义。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的如上式I所示化合物、其互变异构体、其光学异构体、其水合物、其溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物、或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
本文所用的"药学上可接受的盐"属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱基比如无机酸或有机酸盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机盐等等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季胺盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。常规的无毒性的盐,包括但不限于那些衍生的无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自乙酰氧基苯甲酸、乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸盐、乙磺酸、乳酸、糖、十二院基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双手圣荼酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醒、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选酯类化合物、如乙酸乙酯；醚类化合物如***,四氢呋喃,二氧六环等；醇类化合物如乙醇、异丙醇或乙睛等非水介质。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy.22nd ed.London,UK:Pharmaceutical Press；2012.3056 p。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
在各种不同实施方式中,优选地,本申请所述式I所示化合物为下表1中所列的结构中的一个:
表1代表性化合物
Figure BDA0002151023850000081
Figure BDA0002151023850000091
Figure BDA0002151023850000101
Figure BDA0002151023850000111
Figure BDA0002151023850000121
Figure BDA0002151023850000131
Figure BDA0002151023850000141
Figure BDA0002151023850000151
Figure BDA0002151023850000161
本申请还提供了式I所示化合物在制备治疗治疗、预防、延迟或阻止癌症，癌症转移，炎症,心血管疾病，免疫性疾病，代谢性疾病,纤维化或眼部疾病的药物中的用途，其中所述癌症优选白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、胰腺癌,肝癌或其组合。其中所述炎症优选关节炎,皮肤炎,气管炎,膀胱炎,肠炎,肝炎,胰腺炎,口腔炎,中耳炎等。其中所述所述代谢性疾病包括脂肪肝、糖尿病、血脂异常,痛风等。所述免疫性疾病包括类风湿关节炎,银屑病,红斑狼疮等。所述心血管疾病包括类高血压,肺动脉高压,低血压,冠心病,中风等。
具体实施方式
为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。
除非另有说明，本发明所有的一部分和百分比均按重量计算，所有温度均指摄氏度。
实施例中使用了下列缩略语：
AcOH：乙酸
ACE-Cl：1-氯乙基氯甲酸酯；
ACN,MeCN:乙腈
(BOC)2O：二碳酸二叔丁酯；
BBr3:三溴化硼
BOP：苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐；
Cu(OAc)2:醋酸铜
CuI:碘化亚铜
Cs2CO3:碳酸铯
DBU：1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；
DCE：1,2-二氯乙烷；
DCM：二氯甲烷；
DIBAL-H:二异丁基氢化铝
DIEA:二异丙基乙基胺
DIPEA或DIEA：N,N-二异丙基乙胺；
DMAP:4-二甲氨基吡啶
DMCF:二甲氨基甲酰氯
DMF-DMA:N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛
DMF：N,N-二甲基甲酰胺；
DMSO：二甲基亚砜；
EtOAc或EA：乙酸乙酯；
EtOH：乙醇；
EtONa：乙醇钠；
Fe:铁,铁粉
h、hr或hrs：小时；
HCOOH:甲酸
Hex：正己烷；
IPA:异丙胺
KOAc:乙酸钾
K2CO3:碳酸钾
LC-MS：液相色谱-质谱联用；
LDA：二异丙基氨基锂；
m-CPBA:间氯过氧苯甲酸
MeCN：乙腈；
MeOH：甲醇；
MeONa：甲醇钠；
min或mins：分钟；
MsCl：甲烷磺酰氯；
MW,microwave:微波炉；微波
NaBH3CN:氰基硼氢化钠
Na2CO3:碳酸钠
NaH:氢化钠
NaNO2:亚硝酸钠
NaOH:氢氧化钠
NEt3：三乙胺
NBS：N-溴代琥珀酰亚胺；
NH4Cl:氯化铵
NH4BF4:氟硼酸铵
NIS:N-碘代丁二酰亚胺
NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮；
Pd-118:PdCl2(dtbpf):1,1’-双叔丁基膦二茂铁二氯化钯
PddCl2(dppf)：1,1’-双二苯基膦二茂铁二氯化钯；
Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯；
Pd(OAc)2：乙酸钯(II)；
Pd(PPh3)4:四(三苯基膦)钯
PE：石油醚；
PPA：多聚磷酸；
rt或RT：室温；
SEM-Cl:氯甲基三甲基硅乙基醚
t-BuOK:叔丁醇钾
TEA：三乙胺；
TFA：三氟乙酸
Tf2O:三氟甲磺酸酐
THF：四氢呋喃；
Ti(OEt)4：钛酸四乙酯；
TMSCN:三甲基氰硅烷；三甲基硅化腈；
TLC：薄层色谱；
xantphos：4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。
X-phos:2-(二环己基膦)-2'，4'，6'-三异丙基-1,1'-联苯
ABBV-075：Mivebresib(购自Selleck公司)
JQ-01：购自Selleck公司
制备实施例1：中间体1(INT-01):6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000201
第一步：4-溴-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(I-02)
将化合物I-01(3.0g)和NaOH(1.5g)溶于乙醇/蒸馏水(20mL/20mL)中，常温搅拌过夜，LCMS监测完成，将反应液浓缩，用EA进行萃取，有机相干燥浓缩，直接得到粗品I-02(1.3g)。LCMS(ES,m/z)：227.1[M+H]+。
第二步：6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮化合物I-02(1.3g),化合物频哪醇二硼酯(2.7g),Pd2(dba)3(120mg),X-phos(250mg)和KOAc(1.3g)溶于二氧六环(25mL)中，80℃下搅拌过夜，LCMS监测完成，将反应液用DCM(50mL*3)萃取，有机相干燥浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:5)分离纯化，得到化合物INT-01(370mg)。
制备实施例2：
中间体二(INT-02):2,5-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-2,5-二氢-4H-吡唑并[4，3-c]吡啶-4-酮
Figure BDA0002151023850000202
第一步：1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-醇(I2-02)
化合物I2-01(5.0g)与H2O(2.0mL)加到ACOH(200mL)中，100℃下搅拌过夜，LCMS检测反应完成，溶剂旋干，残余物溶于甲醇中，过滤，滤液浓缩直接得到化合物I2-02(4.2g)。LCMS(ES,m/z)：136.0[M+H]+。
第二步：7-溴-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-醇(I2-03)
将化合物I2-02(4.2g)加到ACOH(80mL)中，常温搅拌，随后将Br2(1.8ml)加到反应中，常温搅拌过夜，LCMS检测反应完成，溶剂直接浓缩旋干得到化合物I2-03(2.5g)。LCMS(ES,m/z)：214.0[M+H]+。
第三步：7-溴-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(I2-04)
将化合物I2-03(2.5g),CH3I(5.0g)和CS2CO3(9.5g)溶于DMF(80mL),常温搅拌过夜，LCMS检测反应完成，然后将反应液加到EA中，用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:3)分离纯化，得到化合物I2-04(700mg)。LCMS(ES,m/z)：242.0[M+H]+。
第四步：2,5-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(INT-02)
将化合物I2-04(500mg),频哪醇二硼酯(800mg),Pd(PPh3)4(240mg)和TEA(650mg)溶于二氧六环(20ml)中，90℃氮气保护下封管反应6h，LCMS检测反应完成，然后反应液冷却至室温，将其加到蒸馏水中，用DCM(50mL*3)进行萃取，萃取液用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(DCM：MeOH＝30:1)分离纯化，得到化合物INT-02(400mg)。LCMS(ES,m/z)：290.0[M+H]+。
制备实施例3：
INT-03:1,5-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮
Figure BDA0002151023850000221
第一步：7-溴-1,5-二甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(I3-01)
将化合物I2-03(2.5g),CH3I(5.0g)和CS2CO3(9.5g)溶于DMF(80mL),50℃搅拌过夜，LCMS检测反应完成，然后将反应液加到EA中，用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:3)分离纯化，得到化合物I3-01(500mg)。LCMS(ES,m/z)：242.0[M+H]+。
第二步：1,5-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(INT-03)
将化合物I3-01(450mg),频哪醇二硼酯(700mg),Pd(PPh3)4(220mg)和TEA(600mg)溶于二氧六环(20ml)中，90℃氮气保护下封管反应7h，LCMS检测反应完成，然后反应液冷却至室温，将其加到蒸馏水中，用DCM(50mL*3)进行萃取，萃取液用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(DCM：MeOH＝30:1)分离纯化，得到化合物INT-03(400mg)。LCMS(ES,m/z)：290.0[M+H]+。
制备实施例4：
INT-04 6-甲基-7-氧代-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-6,7-二氢-1H-吡咯烷基叔丁酯[2,3]-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002151023850000222
第一步:4-溴-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸叔丁酯(I-02)
将I-02(450mg)溶解解于无水DMF(10mL)中,加入DMAP(50mg),三乙胺(100mL),(Boc)2O(500mg),在70℃下搅拌3小时冷却至环境温度后，将反应混合物倒入50mL冰水中。用二氯甲烷50mL萃取两遍,合并有机相并干燥,过滤浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:10)分离纯化，得到化合物I4-01(370mg)。LCMS(ES,m/z)：327.0
第二步：6-甲基-7-氧代-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-6,7-二氢-1H-吡咯烷基叔丁酯[2,3]-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(INT-04)
4-溴-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸叔丁酯化合物I4-01(300mg),化合物频哪醇二硼酯(600mg),Pd2(dba)3(40mg),X-phos(60mg)和KOAc(300mg)溶于二氧六环(25mL)中，70℃下搅拌过夜，LCMS监测完成，将反应液用DCM(50mL*3)萃取，有机相干燥浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:6)分离纯化，得到化合物INT-04(250mg)。LCMS(ES,m/z)：375.20[M+H]+。
实施例1
化合物HY-02-B0001：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0001)
Figure BDA0002151023850000231
第一步：1-溴-2-(2,4-二氟苯氧基)-4-甲基-5-硝基苯(1-2)
将化合物1-1(3.0g)，2,4-二氟苯酚(2.0g)和CS2CO3(5.0g)加到DMSO(30ml)中，并在100℃下搅拌3h，TLC监测反应完成，将反应液冷却至室温，然后加到EA(50mL)中，用蒸馏水(50mL*3)进行萃取,有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物1-2(3.8g)。
第二步：(E)-2-(4-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-2-硝基苯基)-N，N-二甲基乙烯-1-胺(1-3)
将化合物1-2(3.8g)溶于DMF(50mL)中，将温度升到80℃，随后将DMF-DMA(15mL)加到反应中，在95℃下搅拌6h，LCMS监测完成，将反应液冷却到室温，往反应液中缓慢加到冰水中，过滤，并用蒸馏水清洗滤饼，干燥得到红色固体1-3(3.3g)。LCMS(ES,m/z)：399.0[M+H]+。
第三步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1H-吲哚(1-4)
将化合物1-3(3.0g),Fe(2.5g)和NH4Cl(2.4g)溶于甲醇/水(35mL/5mL)中，在70℃下搅拌4h。LCMS监测完成，将反应液过滤，滤液浓缩，将残余物溶于EA(50mL),用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝20:1)分离纯化，得到化合物1-4(550mg)。LCMS(ES,m/z)：324.1[M+H]+。
第四步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(甲基磺酰基)-1H-吲哚(1-5)
将化合物1-4(550mg)溶于DMF(20mL)中，降温至0℃，NaH(102mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，随后将化合物1(262mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。然后将反应液冷却至0℃，蒸馏水淬灭，用EA萃取，有机相干燥浓缩，得到粗品1-5(650mg)。LCMS(ES,m/z)：402.1[M+H]+。
第五步：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0001)
将化合物1-5(400mg),化合物INT-01(290mg),Pd-118(60mg)和K2CO3(330mg)溶于二氧六环/水(10.0mL/2.0mL)中，60℃微波下搅拌3h，LCMS监测反应完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到目标产物HY-02-B0001(74.4mg)。LCMS(ES,m/z)：470.0[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.01(s,1H),7.91(s,1H),7.64(d,J＝3.6Hz,1H),7.43-7.37(m,1H),7.35(s,1H),7.28(t,J＝2.8Hz,1H),7.18(s,1H),7.16-7.13(m,1H),7.04-7.00(m,1H),6.81(d,J＝3.6Hz,1H),6.26(t,J＝2.4Hz,1H),3.68-3.63(m,2H),3.3(s,3H)。
实施例2
化合物HY-02-B0002：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0002)
Figure BDA0002151023850000251
第一步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚(2-1)
将化合物1-4(250mg)溶于DMF(10mL)中，降温至0℃，NaH(52mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，随后将化合物乙磺酰氯(140mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。然后将反应液冷却至0℃，蒸馏水淬灭，用EA萃取，有机相干燥浓缩，得到粗品2-1(270mg)。LCMS(ES,m/z)：416.1[M+H]+。
第二步：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0002)
将化合物2-5(200mg),化合物INT-01(1450mg),Pd-118(30mg)和K2CO3(200mg)溶于二氧六环/水(10.0mL/2.0mL)中，60℃微波下搅拌3h，LCMS监测反应完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到目标产物HY-02-B0002(64.4mg)。LCMS(ES,m/z)：484.0[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.01(s,1H),7.91(s,1H),7.64(d,J＝3.6Hz,1H),7.43-7.37(m,1H),7.35(s,1H),7.28(t,J＝2.8Hz,1H),7.18(s,1H),7.16-7.13(m,1H),7.04-7.00(m,1H),6.81(d,J＝3.6Hz,1H),6.26(t,J＝2.4Hz,1H),3.68-3.63(m,2H),3.56(s,3H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例3
化合物HY-02-B0003：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0003)
Figure BDA0002151023850000261
第一步：3-溴-2-(2,4-二氟苯氧基)-6-甲基-5-硝基吡啶(3-2)
将化合物3-1(570mg)溶于DMF(20mL)中，0℃下加入NaH(208mg),常温搅拌0.5h,随后将2,4-二氟苯酚(1.0g)加到反应中，常温搅拌12h,TLC监测反应完成，将反应液加到EA(50mL)中，用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤,有机相用无水Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物3-2(700mg)。
第二步：(E)-2-(5-溴-6-(2,4-二氟苯氧基)-3-硝基吡啶-2-基)-N，N-二甲基乙烯-1-胺(3-3)
将化合物3-2(700mg)溶于DMF(20mL)中，将温度升到80℃，随后将DMF-DMA(3.5mL)加到反应中，在95℃下搅拌6h，LCMS监测反应完成，将反应液冷却到室温，把反应液缓慢加到冰水中，过滤，并用蒸馏水清洗滤饼，干燥得到红色固体化合物3-3(3.3g)。LCMS(ES,m/z)：400.0[M+H]+。
第三步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(3-4)
将化合物3-3(700mg)，Fe(490mg)和NH4Cl(460mg)溶于甲醇/水(20mL/4.0mL)中，在70℃下搅拌8h。LCMS监测反应完成，将反应液过滤，滤液浓缩，将残余物溶于EA(50ml),用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤，有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝20:1)分离纯化，得到化合物3-4(350mg)。LCMS(ES,m/z)：325.1[M+H]+。
第四步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(3-5)
将化合物3-4(350mg)溶于DMF(20mL)中，降温至0℃，NaH(86mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min。随后将化合物乙磺酰氯(210mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测反应完成。随后将反应液冷却至0℃，蒸馏水淬灭，用EA萃取，有机相干燥浓缩，得到粗品化合物3-5(400mg)。
第五步：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0003)
将化合物3-5(300mg),化合物INT-01(300mg),Pd-118(50mg)和K2CO3(250mg)溶于二氧六环/水(15mL/3mL)中，60℃微波下搅拌2h，LCMS监测反应完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到目标产物HY-02-B0003(147mg)。LCMS(ES,m/z)：485.0[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.01(s,1H),8.25(s,1H),7.87(d,J＝4.0Hz,1H),7.49(s,1H),7.47-7.39(m,2H),7.32(t,J＝2.8Hz,1H),7.14(d,J＝7.2Hz,1H),6.80(d,J＝3.6Hz,1H),6.34(t,J＝2.4Hz,1H),3.78-3.72(m,2H),3.61(s,3H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例4
化合物HY-02-B0004：4-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0004)；
Figure BDA0002151023850000281
第一步：5-溴-6-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(4-2)
在氮气保护下，将化合物5-溴-6-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(4-1)(100mg)溶解到THF(20mL)中，冰浴降温到0℃，随后将化合物SEM-Cl(87mg)溶解在THF(3mL)并滴加到反应体系中，逐渐升温到室温并搅拌过夜。加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)纯化得到目标化合物4-2(120mg)。LCMS(ES,m/z)：361.0/363.0[M+H]+。
第二步：6-氯-N-(4-氯-2-氟苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-胺(4-3)
将碳酸铯(362mg)加入到含有化合物4-2(200mg)，4-氯-2-氟苯胺(97mg)，Pd2(dba)3(51mg)和xphos(53mg)的DMF(10mL)混合体系中，用氮气置换3次，105℃下反应15小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝15:1)纯化得到目标化合物4-3(60mg)为淡黄色油状物。LCMS(ES,m/z)：426.1/428.1[M+H]+。
第三步：4-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(4-4)
将化合物4-3(110mg)，化合物Int1(98mg)和Pd-118(30mg)和K2CO3(250mg)溶于二氧六环/水(15mL/3mL)中，60℃微波下搅拌2h，LCMS监测反应完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:2)纯化得到目标产物4-4(45mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：538.2[M+H]+。
第四步：4-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,1，3-c]吡啶-7-酮(4-5)
向溶有化合物4-4(45mg)的DCM(7mL)溶液中加入TFA(1mL)，室温下搅拌过夜。用饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，并用乙酸乙酯(35mL)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，干燥得到目标产物4-5(30mg)灰色固体。LCMS(ES,m/z)：408.1[M+H]+。
第五步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0004)
在冰浴下将NaH(4mg)加入到化合物4-5(30mg)的THF(5mL)溶液中，冰浴下搅拌30分钟。然后将溶有化合物乙磺酰氯(20mg)的THF(1.5mL)溶液逐滴加入到该反应体系中，缓慢升到室温并搅拌过夜。用饱和氯化铵溶液(50mL)和EA(50mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过薄层色谱法(PE：EA＝1/2)纯化得到目标产物HY-02-B0004(16mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：500.1[M+H]+。
实施例5
化合物HY-02-B0005：7-(5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0005)
Figure BDA0002151023850000301
第一步：1-溴-2-(4-氯-2-氟苯氧基)-4-甲基-5-硝基苯(5-1)
将化合物2-1(5.0g),4-氯-2-氟苯酚(3.8g)和CS2CO3(10g)溶于DMSO(100mL)中，100℃下搅拌3h，TLC监测反应完成，将反应液冷却至室温，然后加到EA(50mL)中，用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤,有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物5-1(4.2g)。
第二步：(E)-2-(4-溴-5-(4-氯-2-氟苯氧基)-2-硝基苯基)-N，N-二甲基乙烯-1-胺(5-2)
将化合物5-1(4.0g)溶于DMF(50mL)中，将温度升到80℃，随后将DMF-DMA(20mL)加到反应中，在95℃下搅拌6h，LCMS监测反应完成，将反应液冷却到室温，把反应液缓慢加到冰水中，过滤，并用蒸馏水清洗滤饼，干燥得到红色固体5-2(4.5g)。LCMS(ES,m/z)：415.0[M+H]+。
第三步：6-溴-5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1H-吲哚(5-3)
将化合物5-2(2.0g),Fe(1.4g)和NH4Cl(1.3g)溶于甲醇/水(30mL/6.0mL)中，在70℃下搅拌8h。LCMS监测反应完成，将反应液过滤，滤液浓缩，将残余物溶于EA(50mL),用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物5-3(430mg)。LCMS(ES,m/z)：340.1[M+H]+。
第四步：6-溴-5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚(5-4)
将化合物5-4(400mg)溶于DMF(20mL)中，降温至0℃，NaH(71mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min。然后将化合物乙磺酰氯(230mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测反应完成。将反应液冷却至0℃，蒸馏水淬灭，用EA萃取，有机相干燥浓缩，得到粗品5-5(400mg)。LCMS(ES,m/z)：432.1[M+H]+。
第五步：7-(5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0005)
将化合物5-5(100mg),化合物INT-02(80mg),Pd-118(15mg)和K2CO3(80mg)溶于二氧六环/水(5.0mL/1.0mL)中，60℃氮气保护下微波搅拌2h，LCMS监测反应完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到目标产物HY-02-B0005(25.5mg)。LCMS(ES,m/z)：515.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.38(s,1H),8.19(s,1H),7.64(d,J＝3.6Hz,1H),7.46(s,1H),7.40(s,1H),7.22-7.19(m,1H),7.02-6.99(m,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,1H),6.79(d,J＝3.6Hz,1H),4.06(s,3H),3.57(s,3H),3.56-3.52(m,2H),1.24-1.21(m,3H)。
实施例6
化合物HY-02-B0006：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4，3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0006)
Figure BDA0002151023850000321
第一步：5,6-二溴-1-乙磺酰基-1H-吲哚(6-2)
将化合物10-1(300mg)溶于THF(12.0ml)中，并降温到0℃，随后将NaH(160mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，然后将乙磺酰氯(330mg)加到反应中，常温搅拌12h，TLC监测反应完成，将反应也降温到0℃，用NaHCO3水溶液淬灭，反应液用DCM(3*60ml)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)进行纯化得到318mg的化合物6-2。
第二步：7-(5-溴-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(6-3)
将化合物6-2(300mg)，化合物INT-2(270mg)，Pd-118(60mg)和K2CO3(290mg)溶于1,4二氧六环/H2O(12.0ml/2.0ml)中，微波60℃下搅拌2h，LCMS监测完成，将反应液加到蒸馏水中，用二氯甲烷(3*50ml)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:4)进行纯化得到70mg的化合物6-3。LCMS(ES,m/z)：449.0[M+H]+。
第三步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4，3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0006)
将化合物6-3(32mg)，4-氯-2-氟苯胺(21mg)，Pd(OAc)2(2mg)，xantphos(8mg)和Cs2CO3(70mg)置于20mL的封管中，加入甲苯(12mL)，用氮气鼓泡3分钟，封住封管然后在100℃下反应3小时，冷却到室温，真空下除去溶剂，并加入饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯(40mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用薄层色谱法(DCM：MeOH＝30:1)纯化得到粗品，该粗品再用薄层色谱法(DCM：MeOH＝40:1)纯化得到目标产物HY-02-B0006(21.6mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：514.2[M+H]+。1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.43(s,1H),7.99(s,1H),7.64(s,1H),7.58(d,J＝3.6Hz,1H),7.40(s,1H),7.01-6.98(m,1H),6.87-6.85(m,2H),6.77(d,J＝3.6Hz,1H),4.10(s,3H),3.58(s,3H),3.51(q,J＝7.2Hz,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例7
化合物HY-02-B0007：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(甲磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0007)
Figure BDA0002151023850000331
第一步：5-溴-6-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(7-2)
在氮气保护下，将化合物5-溴-6-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(7-1)(100mg)溶解到THF(20mL)中，冰浴降温到0℃，随后将化合物SEM-Cl(87mg)溶解在THF(3mL)并滴加到反应体系中，逐渐升温到室温并搅拌过夜。加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)纯化得到目标化合物7-2(120mg)。LCMS(ES,m/z)：361.0/363.0[M+H]+。
第二步：6-氯-N-(4-氯-2-氟苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-胺(7-3)
将碳酸铯(362mg)加入到含有化合物7-2(200mg)，4-氯-2-氟苯胺(97mg)，Pd2(dba)3(51mg)和xphos(53mg)的DMF(10mL)混合体系中，用氮气置换3次，105℃下反应15小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝15:1)纯化得到目标化合物7-3(60mg)为淡黄色油状物。LCMS(ES,m/z)：426.1/428.1[M+H]+。
第三步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2，5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(7-4)
将化合物7-3(100mg)，化合物INT-02(82mg)和Na2CO3(74mg)置于微波管中，加入离子液体(1-丁基-3-甲基咪唑鎓四氟硼酸盐，4mL)和水(2mL)，用氮气鼓泡3分钟，然后加入Pd(PPh3)4(28mg)，继续氮气鼓泡2分钟，将封管封住，并在微波中110℃下反应6小时。冷却到室温，用饱和氯化铵溶液(40mL)和EA(30mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:2)纯化得到目标产物7-4(45mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：553.2[M+H]+。
第四步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(羟基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(7-5)
向溶有化合物7-4(45mg)的DCM(8mL)溶液中加入TFA(1mL)，室温下搅拌过夜。用饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，并用乙酸乙酯(30mL)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，向残余物中加入***(3mL)，有固体析出，过滤，滤饼干燥得到目标产物7-5(20mg)灰色固体。LCMS(ES,m/z)：453.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.42(s,1H),7.98(s,1H),7.68(s,1H),8 7.54(d,J＝3.6Hz,1H),6.94(dd,J＝11.2Hz,2.4Hz,1H),6.80-6.78(m,1H),6.60-6.53(m,2H),5.74(s,2H),4.11(s,3H),3.58(s,3H)。
第五步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(7-6)
将化合物7-5(20mg)溶解在乙醇(10mL)和水(1mL)中，加入Na2CO3(1.0g)室温下搅拌20小时。反应液用水(30mL)和乙酸乙酯(30mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂得到化合物7-6(17mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：423.1[M+H]+。
第六步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(甲磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0007)
在冰浴下将NaH(5mg)加入到化合物7-6(50mg)的THF(10mL)溶液中，冰浴下搅拌30分钟。然后将溶有化合物甲磺酰氯(30mg)的THF(2mL)溶液逐滴加入到该反应体系中，缓慢升到室温并搅拌过夜。用饱和氯化铵溶液(60mL)和EA(60mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过薄层色谱法(PE：EA＝1/2)纯化得到目标产物HY-02-B0007(35mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：501.1[M+H]+。
实施例8
化合物HY-02-B0008：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0008)；
Figure BDA0002151023850000361
第一步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0008)
在冰浴下将NaH(6mg)加入到化合物7-6(30mg)的THF(6mL)溶液中，冰浴下搅拌40分钟。然后将溶有化合物乙基磺酰氯(15mg)的THF(1mL)溶液逐滴加入到该反应体系中，缓慢升到室温并搅拌过夜。用饱和氯化铵溶液(40mL)和乙酸乙酯(40mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过薄层色谱法(PE：EA＝1/2)纯化得到目标产物HY-02-B0008(22mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：515.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.34(s,1H),7.92(s,1H),7.62(s,1H),7.59(d,J＝4.0Hz,1H),6.93(dd,J＝11.6Hz,2.4Hz,1H),6.80-6.73(m,1H),673-6.69(m,1H),6.61(d,J＝4.0Hz,1H),4.02(s,3H),3.78(d,J＝7.2Hz,2H),3.51(s,3H),1.13(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例9
化合物HY-02-B0009：7-(5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-1,5-二甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0009)
Figure BDA0002151023850000362
第一步：7-(5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-1,5-二甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0009)
将化合物5-4(95mg),化合物INT-03(81mg),Pd-118(14mg)和K2CO3(70mg)溶于二氧六环/水(6.0ml/1.0ml)中，70℃微波下搅拌4h，LCMS监测完成，反应液用DCM(3*40ml)进行萃取，有机相用Na2SO4干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:4)进行纯化得到15.6mg的目标产物。LCMS(ES,m/z)：515.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.01(s,1H),7.90(s,1H),7.56(d,J＝3.6Hz,1H),7.30(s,1H),7.23(s,1H),7.08-7.05(m,1H),6.95-6.94(m,1H),6.78(t,J＝8.8Hz,1H),6.72-6.71(m,1H)，3.55(s,3H),3.46-3.40(m,5H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例10
化合物HY-02-B0010：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-1,5-二甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0010)
Figure BDA0002151023850000371
第一步：7-(5-溴-1-乙磺酰基-1H-吲哚-6-基)-1,5-二甲基-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(10-1)
将化合物6-2(150mg)，化合物INT-03(140mg)，Pd-118(27mg)和K2CO3(142mg)溶于二噁烷/H2O(5.0ml/1.0ml)中，微波60℃下搅拌2h，LCMS监测完成，将反应液加到蒸馏水中，用DCM(3*50ml)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:4)进行纯化得到30mg的化合物10-1。LCMS(ES,m/z)：449.0[M+H]+。
第二步：7-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-1,5-二甲基-1,5-二氢-4H-吡唑并[4，3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0010)
将化合物10-1(40mg),4-氯-2-氟苯胺(26mg),Pd(OAC)2(10mg)，Xant-Phos(10mg)和CS2CO3(87mg)溶于甲苯(8.0ml)中，100℃下搅拌5h，LCMS监测完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到11.3mg的目标产物。LCMS(ES,m/z)：514.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD+CDCl3，400MHz)δ8.13(s,1H),7.87(s,1H),7.54(d,J＝3.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.31(s,1H),7.07-7.01(m,3H),6.72(d,J＝4.0Hz,1H),3.62(s,3H),3.57(s,3H),3.44(d,J＝7.6Hz,2H),1.25(t,J＝7.6Hz,3H).
实施例11
化合物HY-02-B0011：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0011)
Figure BDA0002151023850000381
第一步：4-(2,4-二氟苯氧基)-6-甲氧基-1H-吲哚(11-2)
将化合物11-1(1.0g)，2,4-二氟苯酚(1.2g)，N,N-二甲基乙酸(620mg)，CuI(850mg)和K2CO3(1.2g)溶于DMF(40mL)中，125℃下封管搅拌12h，LCMS检测反应完成，反应液用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物11-2(180mg)。
LCMS(ES,m/z)：276.0[M+H]+。
第二步：4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-6-甲氧基-1H-吲哚(11-3)
将化合物11-2(170mg)溶于DMF(5.0mL)，降温到0℃，随后将NaH(37mg)加到反应中，低温搅拌0.5h，然后将化合物乙基磺酰氯(100mg)慢慢加到反应中，常温搅拌2h，LCMS检测反应完成。将反应液降温至0℃，用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物11-3(80mg)。LCMS(ES,m/z)：368.0[M+H]+。
第三步：4-(2,4-二氟苯氧基)-6-羟基-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚(11-4)
将化合物11-3(80mg)溶于DCM(4.0mL)中，反应液降温至0℃，将BBr3(2mL，1.0mol/L)缓慢滴加到反应体系中，常温搅拌4h，LCMS检测完成，用饱和NaHCO3溶液淬灭，用DCM溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物11-4(60mg)。
LCMS(ES,m/z)：354.1[M+H]+。
第四步：4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基三氟甲磺酸酯(11-5)
将化合物11-4(60mg)溶于溶于DCM(3.0mL)中，降温0℃，随后将Tf2O(0.05mL)和TEA(34mg)滴加到反应中，常温搅拌2h，LCMS检测完成，将反应液降温至0℃，用饱和NH4Cl溶液淬灭，用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物11-5(60mg)。
LCMS(ES,m/z)：503.1[M+NH4]+
第五步：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0011)
将化合11-5(60mg)，化合物INT-01(50mg)，Pd-118(8.0mg)和K2CO3(43mg)溶于二氧六环/水(6.0mL/1.2mL)，80℃微波搅拌2h。LCMS检测完成，反应液用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)洗，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC分离纯化得到的化合物HY-02-B0011(32.2mg)。LCMS(ES,m/z)：484.0[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.16(s,1H),7.81(s,1H),7.62(d,J＝3.6Hz,1H),7.64-7.50(m,1H),7.42-7.38(m,2H),7.34(t,J＝2.8Hz,1H),7.15-7.14(m,1H),6.86(s,1H),6.81(d,J＝1.6Hz,1H),6.30(t,J＝2.4Hz,1H),3.76-3.70(m,2H),3.57(s,3H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例12
化合物HY-02-B0012：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)二氢吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0012)
Figure BDA0002151023850000401
第一步：4-(2,4-二氟-苯氧基)-6-甲氧基-2,3-二氢-1H-吲哚(12-1)
将化合物11-2(120mg)和氰基硼氢化钠(83mg)溶于ACOH(5.0mL)中，常温搅拌2h，LCMS监测完成，反应液浓缩旋干，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物12-1(70mg)。LCMS(ES,m/z)：278.0[M+H]+。
第二步：4-(2,4-二氟-苯氧基)-1-乙磺酰基-6-甲氧基-2,3-二氢-1H-吲哚(12-2)
将化合物12-1(70mg)，乙基磺酰氯(65mg)和TEA(76mg)溶于DCM(3.0mL)中，常温搅拌2h，LCMS监测完成，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物12-2(60mg)。LCMS(ES,m/z)：370.0[M+H]+。
第三步：4-(2,4-二氟-苯氧基)-6-羟基-1-乙磺酰基-2,3-二氢-1H-吲哚(12-3)
将化合物12-2(40mg)溶于DCM(2.0mL)中，反应液降温至0℃，将BBr3(0.4mL)缓慢滴加到反应体系中，常温搅拌4h，LCMS检测完成，用饱和NaHCO3溶液淬灭，用DCM溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到28mg的化合物12-3。LCMS(ES,m/z)：356.1[M+H]+。
第四步：三氟甲磺酸4-(2,4-二氟-苯氧基)-1-乙磺酰基-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基酯(12-4)
将化合物12-3(28mg)溶于溶于DCM(3.0mL)中，降温0℃，随后将Tf2O(0.01ml)和TEA(16mg)滴加到反应中，常温搅拌2h，LCMS检测完成，将反应液降温至0℃，用饱和NH4Cl溶液淬灭，用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物12-4(30mg)。LCMS(ES,m/z)：505.1[M+NH4]+。
第五步：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)二氢吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0012)
将化合物12-4(25mg)，化合物INT-01(22mg)，Pd-118(4.0mg)和K2CO3(18mg)溶于二氧六环/水(2.0mL/0.4mL)，80℃微波搅拌2h。LCMS检测完成，反应液用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC分离纯化得到的化合物HY-02-B0012(5.5mg)。LCMS(ES,m/z)：486.0[M+H]+。1HNMR(CD3OD，400MHz)δ7.37(t,J＝2.8Hz,2H),7.27-7.23(m,1H),7.20(s,1H),7.19-7.15(m,1H),7.04-6.99(m,1H),6.64(s,1H),6.38(d,J＝2.8Hz,1H),4.18(t,J＝8.8Hz,2H),3.68(s,3H),3.27-3.20(m,4H),1.39(t,J＝7.6Hz,3H).
实施例13
化合物HY-02-B0013：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0013)
Figure BDA0002151023850000421
第一步：5-溴-1-(2,4-二氟苯氧基)-3-氟-2-硝基苯(3)
将2,4-二氟苯酚(550mg)溶于THF(20mL)中，降温到0℃下，NaH(250mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，5-溴-1,3-二氟-2-硝基苯13-1(1.1g)加到反应中，常温搅拌12h，LCMS监测反应完成，反应液降温到0℃，用蒸馏水淬灭，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝20:1)进行纯化得到的化合物13-2(900mg)。LCMS(ES,m/z)：348.0[M+H]+。
第二步：5-溴-3-(2,4-二氟苯氧基)-2-硝基苯胺(13-3)
将化合物13-2(800mg)溶于氨甲醇(24mL)中，常温搅拌12h，LCMS监测反应完成，将反应液减压浓缩，石油醚打浆得到化合物13-3(650mg)。LCMS(ES,m/z)：345.0[M+H]+。
第三步：5-溴-3-(2,4-二氟苯氧基)苯-1,2-二胺(13-4)
将NH4Cl(940mg)溶于H2O(20mL)中，并在0℃下加到化合物13-3(600mg)的EA/MeOH(20mL/20mL)溶液中，随后将Zn(910mg)常温加到反应，常温搅拌4h，LCMS监测反应完成，将反应液溶于EA(50mL),用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行萃取，有机相用Na2SO4干燥，浓缩，得到化合物13-4(450mg)。LCMS(ES,m/z)：315.1[M+H]+。
第四步：6-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)-1H-苯并[d]咪唑(13-5)
将化合物13-4(450mg)溶于甲酸(20mL)中，100℃搅拌3h，LCMS监测反应完成，将反应液旋干直接得到粗品13-5(500mg)。.LCMS(ES,m/z)：325.1[M+H]+。
第五步：6-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑(13-6)
将化合物13-5(200mg)溶于DMF(10mL)中，降温至0℃，NaH(92mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min。随后将化合物7(237mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。随后将反应液冷却至0℃，蒸馏水淬灭，用EA萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝3:1)进行纯化得到的化合物13-6(150mg)。LCMS(ES,m/z)：417.0[M+H]+。
第六步：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0013)
将化合物13-6(120mg),化合物INT-01(95mg),Pd(dppf)Cl2.DCM(25mg)和KOAC(57mg)溶于二氧六环/水(12mL/2.4mL)中，在85℃微波下搅拌2h，LCMS监测完成，反应液用EA(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0013(31.1mg)。LCMS(ES,m/z)：485.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.53(s,1H),7.83(d,J＝1.2Hz,1H),7.39-7.31(m,3H),7.24-7.19(m,1H),7.04-7.02(m,2H),6.40(d,J＝3.2Hz,1H),3.79-3.73(m,2H),3.71(s,3H),1.36(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例14
化合物HY-02-B0014：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(甲磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0014)
Figure BDA0002151023850000441
第一步：6-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(甲磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑(14-1)
将化合物13-5(190mg)溶于DMF(10mL)中，降温至0℃，NaH(90mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min。随后将甲磺酰氯(230mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。随后将反应液冷却至0℃，蒸馏水淬灭，用EA萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝3:1)进行纯化得到的化合物14-1(140mg)。LCMS(ES,m/z)：403.0[M+H]+。
第二步：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(甲磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0014)
将化合物14-1(130mg),化合物Int1(98mg),Pd(dppf)Cl2.DCM(25mg)和KOAC(67mg)溶于二氧六环/水(15mL/3mL)中，在85℃微波下搅拌2h，LCMS监测完成，反应液用EA(60mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0014(40.1mg)。LCMS(ES,m/z)：471.0[M+H]+。
实施例15
化合物HY-02-B0015：4-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)二氢吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0015)
Figure BDA0002151023850000451
第一步：5-(2,4-二氟-苯氧基)-6-甲氧基-2,3-二氢-1H-吲哚(15-2)
将化合物15-1(120mg)和氰基硼氢化钠(85mg)溶于AcOH(5.0mL)中，常温搅拌2h，LCMS监测完成，反应液浓缩旋干，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物15-2(72mg)。LCMS(ES,m/z)：278.0[M+H]+。
第二步：5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-乙磺酰基-6-甲氧基-2,3-二氢-1H-吲哚(15-3)
将化合物15-2(70mg)，乙基磺酰氯(65mg)和TEA(76mg)溶于DCM(3.0mL)中，常温搅拌2h，LCMS监测完成，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物15-3(60mg)。LCMS(ES,m/z)：370.0[M+H]+。
第三步：5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-乙磺酰基-2,3-二氢-1H-吲哚-6-醇(15-4)
将化合物15-3(40mg)溶于DCM(2.0mL)中，反应液降温至0℃，将BBr3(0.4mL)缓慢滴加到反应体系中，常温搅拌4h，LCMS检测完成，用饱和NaHCO3溶液淬灭，用DCM溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到28mg的化合物7。LCMS(ES,m/z)：356.1[M+H]+。
第四步：三氟甲磺酸5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-乙磺酰基-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基酯(15-5)
将化合物15-4(28mg)溶于溶于DCM(3.0mL)中，降温0℃，随后将Tf2O(0.01ml)和TEA(16mg)滴加到反应中，常温搅拌2h，LCMS检测完成，将反应液降温至0℃，用饱和NH4Cl溶液淬灭，用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物15-5(30mg)。LCMS(ES,m/z)：505.1[M+NH4]+。
第五步：5-(4-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)二氢吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0015)
将化合物12-5(25mg)，化合物INT-1(22mg)，Pd-118(4.0mg)和K2CO3(18mg)溶于二氧六环/水(2.0mL/0.4mL)，80℃微波搅拌2h。LCMS检测完成，反应液用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC分离纯化得到的化合物HY-02-B0015(6.5mg)。LCMS(ES,m/z)：486.0[M+H]+。1HNMR(CD3OD，400MHz)δ7.37(t,J＝2.8Hz,2H),7.27-7.23(m,1H),7.20(s,1H),7.19-7.15(m,1H),7.04-6.99(m,1H),6.64(s,1H),6.37(d,J＝2.8Hz,1H),4.17(t,J＝8.8Hz,2H),3.69(s,3H),3.27-3.20(m,4H),1.40(t,J＝7.6Hz,3H).
实施例16
化合物HY-02-B0016：7-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)二氢吲哚-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0016)
Figure BDA0002151023850000461
第一步：7-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)二氢吲哚-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0016)
将化合物15-5(45mg)，化合物INT-2(42mg)，Pd-118(12.0mg)和K2CO3(45mg)溶于二氧六环/水(8.0mL/1mL)，80℃微波搅拌2h。LCMS检测完成，反应液用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC分离纯化得到的化合物HY-02-B0016(6.5mg)。LCMS(ES,m/z)：486.0[M+H]+。
实施例17
化合物HY-02-B0017：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0017)
Figure BDA0002151023850000471
第一步：2-氯-4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶(17-2)
在冰浴下将NaH(1.1g)加入到化合物2,4-二氟苯酚(2.7g)的DMF(40mL)溶液中，冰浴下搅拌30分钟。逐滴加入溶有化合物17-1(3.0g)的DMF(5mL)溶液并升到室温搅拌过夜。加入饱和氯化铵溶液(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(40mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用柱层析(PE：EA＝10:1)纯化得到化合物17-2(3.0g)为黄色固体。
第二步：(4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(17-3)
将碳酸铯(5.3g)加入到含有化合物17-2(3.0g)，氨基甲酸叔丁酯(1.8g)，Pd(OAc)2(280mg)和xantphos(1.1g)的甲苯(10mL)混合体系中，用氮气置换3次，100℃下反应8小时。真空下除去溶剂得到17-3粗品，该粗品直接用于下一步反应。LCMS(ES,m/z)：323.1[M+H]+。
第三步：4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶-2-胺(17-4)
将DCM(50mL)和TFA(15mL)加入到粗品化合物17-3中，室温下搅拌过夜。真空下除去溶剂，向残余物中加入H2O(200mL)和乙酸乙酯(150mL)，然后加入NaOH溶液(2.0mol/L)调节pH大于8，分离，水相有乙酸乙酯洗涤两次，合并的有机相用无数硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过柱层析(DCM：MeOH＝50:1)纯化得到化合物17-4(1.0g)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：223.0[M+H]+。
第四步：5-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶-2-胺(17-5)
向溶有化合物17-4(1.0g)的乙腈(50mL)溶液中加入NBS(797mg)，60℃下反应4小时。真空下除去溶剂，用H2O(80mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释，加入饱和NaHCO3溶液(30mL),有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过柱层析(PE：EA＝1:1)纯化得到化合物17-5(500mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：301.0/303.0[M+H]+。
第五步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)咪唑并[1,2-a]吡啶(17-6)
将化合物17-5(1.0g)，2-氯乙醛(522mg)和NaHCO3(421mg)溶解在乙醇(25mL)和水(5mL)中，90℃下搅拌5小时。LCMS显示化合物17-5未反应完全，冷却到室温，加入2-氯乙醛(522mg)，然后90℃下搅拌12小时。真空下除去溶剂，用DCM(50mL)和H2O(40mL)稀释，加入饱和的NaHCO3溶液(20mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用柱层析(PE：EA＝1:1)得到化合物17-6(850mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：325.0/327.0[M+H]+。
第六步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)-3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(17-7)
向溶有化合物17-6(850mg)的乙腈(25mL)溶液中加入NIS(649mg)，室温下反应7小时。真空下除去溶剂，用H2O(80mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释，加入饱和NaHCO3溶液(30mL),有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过柱层析(PE：EA＝2:1)纯化得到化合物17-7(950mg)为灰色固体。LCMS(ES,m/z)：450.9/452.9[M+H]+。
第七步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶(17-8)
将DMSO(15mL)加入到含有化合物17-7(300mg)，乙亚磺酸钠(232mg)，CuI(127mg)，L-proline(84mg)和碳酸铯(217mg)的混合体系中。氮气置换3次，然后40℃下搅拌3小时。用饱和氯化铵溶液(50mL)和氨水(3mL)淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用柱层析(PE：EA＝3:1)纯化得到化合物17-8(50mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：417.0/405.0[M+H]+。
第八步：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0017)
将Pd(PPh3)4(28mg)加入到含有化合物17-8(50mg)，Int1(40mg)和Na2CO3(32mg)的二氧六环/H2O(5mL/1mL)的混合体系中。氮气置换3次，然后在80℃下反应6小时。冷却到室温，用饱和氯化铵溶液(40mL)和EA(30mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用薄层色谱法(DCM：MeOH＝25:1)纯化得到粗品，向该粗品中加入MeOH(2mL)，搅拌2分钟，过滤，滤饼真空下干燥得到化合物HY-02-B0017(19.5mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：471.1[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.1(s,1H),8.71(s,1H),8.14(s,1H),7.57-7.48(m,3H),7.33-7.31(m,1H),7.22-7.20(m,1H),6.92(s,1H),6.38-6.36(m,1H),3.59(s,3H),1.57(s,3H)。
实施例18
化合物HY-02-B0018：7-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4，3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0018)
Figure BDA0002151023850000501
第一步：7-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4，3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0018)
将Pd(PPh3)4(30mg)加入到含有化合物17-8(55mg)，INT-2(44mg)和Na2CO3(36mg)的二氧六环/H2O(6mL/1mL)的混合体系中。氮气置换3次，然后在80℃下反应6小时。冷却到室温，用饱和氯化铵溶液(40mL)和EA(40mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用薄层色谱法(DCM：MeOH＝25:1)纯化得到粗品，向该粗品中加入MeOH(2mL)，搅拌2分钟，过滤，滤饼真空下干燥得到化合物HY-02-B0018(19.5mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：486.1[M+H]+。
实施例19
化合物HY-02-B0019：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0019)
Figure BDA0002151023850000502
第一步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶(19-1)
将DMSO(18mL)加入到含有化合物17-7(400mg)，乙亚磺酸钠(290mg)，CuI(156mg)，L-脯氨酸(120mg)和碳酸铯(280mg)的混合体系中。氮气置换3次，然后40℃下搅拌3小时。用饱和氯化铵溶液(50mL)和氨水(3mL)淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用柱层析(PE：EA＝3:1)纯化得到化合物19-1(70mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：417.0/419.0[M+H]+。
第二步：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0019)
将Pd(PPh3)4(36mg)加入到含有化合物19-1(66mg)，INT-1(48mg)和Na2CO3(40mg)的二氧六环/H2O(8mL/1mL)的混合体系中。氮气置换3次，然后在80℃下反应7小时。冷却到室温，用饱和氯化铵溶液(60mL)和EA(55mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用薄层色谱法(DCM：MeOH＝25:1)纯化得到粗品，向该粗品中加入MeOH(2mL)，搅拌2分钟，过滤，滤饼真空下干燥得到化合物HY-02-B0019(24.5mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：485.1[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.1(s,1H),8.71(s,1H),8.14(s,1H),7.57-7.48(m,3H),7.33-7.31(m,1H),7.22-7.20(m,1H),6.92(s,1H),6.38-6.36(m,1H),3.59(s,3H),3.51(q,J＝7.2Hz,2H),1.17(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例20
化合物HY-02-B0020：7-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-1,5-二氢-4H-吡咯并[4,3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0020)
Figure BDA0002151023850000521
第一步：7-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2,5-二甲基-2,5-二氢-4H-吡唑并[4，3-c]吡啶-4-酮(HY-02-B0020)
将Pd(PPh3)4(60mg)加入到含有化合物19-1(115mg)，INT-2(44mg)和Na2CO3(85mg)的二氧六环/H2O(10mL/1mL)的混合体系中。氮气置换3次，然后在80℃下反应6小时。冷却到室温，用饱和氯化铵溶液(50mL)和EA(40mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用薄层色谱法(DCM：MeOH＝25:1)纯化得到粗品，向该粗品中加入MeOH(2mL)，搅拌2分钟，过滤，滤饼真空下干燥得到化合物HY-02-B0020(30.1mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：500.1[M+H]+。
实施例21
化合物HY-02-B0021：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0021)
Figure BDA0002151023850000522
第一步：4-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-2-硝基苯胺(21-2)
将化合物21-1(400mg)，化合物2,4-二氟苯酚(266mg)和碳酸铯(666mg)溶于DMSO(10mL)中，80℃下搅拌1h，TLC监测反应完成，将将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，用PE打浆得到化合物21-2(500mg)。
第二步：4-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)苯-1,2-二胺(21-3)
将化合物21-2(500mg)溶于EA/MeOH(10mL/10mL)，降温到0℃，随后将NH4Cl(780mg)的水溶液(10mL)加到反应中，常温搅拌4h，LCMS检测反应完成。将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩得到的化合物21-3(460mg)。
LCMS(ES,m/z)：315.0[M+H]+。
第三步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(21-4)
将化合物21-3(300mg)溶于AcOH(10mL)中，110℃下搅拌4h，LCMS检测完成，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NaHCO3溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，用PE打浆得到化合物21-4(200mg)。
LCMS(ES,m/z)：339.1[M+H]+。
第四步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(21-5)
将化合物21-4(200mg)溶于THF(10mL)中，降温至0℃，随后将NaH(60mg)加到反应中，常温搅拌0.5h，将乙基磺酰氯(151mg)加到反应中，常温搅拌2h,LCMS检测完成，将反应液降温至0℃，用饱和NH4Cl溶液淬灭，用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝3:1)进行纯化得到的化合物21-5(100mg)。LCMS(ES,m/z)：431.1[M+H]+。
第五步：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0021)
将化合物21-5(100mg)，化合物INT-01(90mg)，Pd(dppf)Cl2.DCM(27mg)和KOAC(64mg)溶于二氧六环/水(5.0mL/1.0mL)，90℃搅拌3h。LCMS检测完成，反应液用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)洗，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC分离纯化得到的化合物HY-02-B0021(16.0mg)。HY-02-B0021：LCMS(ES,m/z)：499.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.01(s,1H),7.35(d,J＝2.8Hz,1H),7.34(s,1H),7.18(s,1H),7.04-6.97(m,2H),6.84(d,J＝1.2Hz,1H),6.35(d,J＝2.8Hz,1H),3.71-3.66(m,5H),2.84(s,3H),1.35(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例22
化合物HY-02-B0022：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0022)
Figure BDA0002151023850000541
第一步：3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶(22-2)
将2,4-二氟苯酚(6.0g)溶于DMF(100mL)中，降温到0℃下，NaH(2.5g)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，化合物22-1(8.0g)加到反应中，65℃下搅拌5h，LCMS监测还有原料，随后在80℃下搅拌3h，反应完成，反应液降温到0℃，用饱和NH4Cl溶液淬灭，反应液用NH4Cl(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)进行纯化得到的化合物22-2(7.0g)。
第二步：3-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶1-氧化物(22-3)
将化合物22-2(5.1g)溶于溶于DCM(50mL)中，将m-CPBA(4.6g)加到反应中，常温过夜，用饱和NaHCO3溶液淬灭，用DCM(50mL*3)萃取，有机相干燥浓缩直接得到化合物22-3(5.0g)
LCMS(ES,m/z)：302.0[M+H]+。
第三步：5-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)-2-氰基吡啶(22-4)
将化合物22-3(3.0g)溶于DCM(40mL)中，将TMSCN(1.8mL)和二甲氨基甲酰氯(1.5mL)低温加到反应中，常温搅拌12h，反应液干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物22-4(300mg)。
LCMS(ES,m/z)：311.1[M+H]+。
第四步：(5-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶-2-基)甲胺(22-5)
将化合物22-4(300mg)溶于DCM(15mL)中，将DIBAL-H(3.6mL)在-70℃下加到反应中，慢慢升温至常温，接着搅拌2h，LCMS监测反应完成，将反应液降温到0℃，饱和NH4Cl溶液淬灭，就反应液倒入EA(50mL)，用NH4Cl(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，直接得到化合物22-5(200mg)。LCMS(ES,m/z)：315.1[M+H]+。
第五步：((5-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)吡啶-2-基)甲基)-3-(4-硝基苯基)硫脲(22-6)
将化合物22-5(200mg)和1-异硫氰酸基-4-硝基苯(115mg)溶于DCM(15mL)中，常温搅拌2h，LCMS监测完成。随后将反应液加到EA(50mL)中，用饱和NH4Cl(50mL*3)溶液洗涤，有机相干燥浓缩得到化合物22-6(300mg)。LCMS(ES,m/z)：495.0[M+H]+。
第六步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)咪唑并[1,5-a]吡啶-3(2H)-硫酮(22-7)
将化合物22-6(300mg)和DIEA(780mg)溶于IPA(10mL)中，封管130℃下搅拌7h，反应液浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝2:1)进行纯化得到的化合物22-7(150mg)。LCMS(ES,m/z)：357.0[M+H]+。
第七步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙硫基)咪唑并[1,5-a]吡啶(22-8)
将化合物22-7(100mg)，碘乙烷(66mg)和K2CO3(78mg)溶于丙酮(10mL)中，45℃下搅拌12h，反应液过滤，滤液浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝3:1)进行纯化得到的化合物22-8(60mg)。
LCMS(ES,m/z)：385.0[M+H]+。
第八步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,5-a]吡啶(22-9)
将化合物22-8(60mg)和m-CPBA(81mg)溶于DCM(6.0mL)，常温搅拌0.5h，反应液加到EA(50mL)，饱和NaHCO3溶液萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝3:1)进行纯化得到的化合物22-9(30mg)。
LCMS(ES,m/z)：417.0[M+H]+。
第九步：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0022)
将化合物22-9(30mg),化合物INT-01(24mg),Pd(dppf)Cl2.DCM(6.0mg)和KOAc(18mg)溶于二氧六环/水(5.0mL/1.0mL)中，在90℃下搅拌3h，LCMS监测完成，反应液溶于EA(50mL)，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0022(9.0mg)。LCMS(ES,m/z)：485.0[M+H]+。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ9.05(s,1H),7.55(s,1H),7.47(s,1H),7.39(d,J＝2.8Hz,1H),7.3-7.29(m,1H),7.24-7.18(m,1H),7.07-7.02(m,1H),7.01(s,1H),6.48(d,J＝2.4Hz,1H),3.74(s,3H),3.50-3.44(m,2H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例23
化合物HY-02-B0023：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0023)
Figure BDA0002151023850000571
第一步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲硫基)咪唑并[1,5-a]吡啶(23-1)
将化合物22-7(200mg)，碘甲烷(95mg)和K2CO3(140mg)溶于丙酮(12mL)中，40℃下搅拌20h，反应液过滤，滤液浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝3:1)进行纯化得到的化合物23-1(110mg)。
LCMS(ES,m/z)：371.0[M+H]+。
第二步：6-溴-7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,5-a]吡啶(22-9)
将化合物23-1(110mg)和m-CPBA(140mg)溶于DCM(12mL)，常温搅拌3h，反应液加到EA(45mL)，饱和NaHCO3溶液洗涤，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝3:1)进行纯化得到的化合物23-2(48mg)。
LCMS(ES,m/z)：403.0[M+H]+。
第三步：4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(甲磺酰基)咪唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0023)
将化合物23-1(48mg),化合物INT-01(35mg),Pd(dppf)Cl2.DCM(8.0mg)和KOAc(28mg)溶于二氧六环/水(10.0mL/1.0mL)中，在80℃下搅拌6h，LCMS监测完成，反应液溶于EA(60mL)，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0023(9.0mg)。LCMS(ES,m/z)：471.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ9.03(s,1H),7.54(s,1H),7.46(s,1H),7.39(d,J＝2.8Hz,1H),7.3-7.29(m,1H),7.24-7.18(m,1H),7.06-7.01(m,1H),7.00(s,1H),6.49(d,J＝2.4Hz,1H),3.75(s,3H),1.50(s,3H).
实施例24
化合物HY-02-B0024：4-(2-((2,4-二氟苯基)氨基)-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0024)
Figure BDA0002151023850000581
第一步：2-溴-3-氯-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-B]吡嗪(24-2)
将化合物24-1(200mg)溶于DMF(5.0mL)中，降温至0℃，NaH(80mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，随后将甲磺酰氯(250mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。随后将反应液冷却至0℃，用NH4Cl(50mL*3)进行洗,有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)分离纯化，得到160mg化合物24-2。LCMS(ES,m/z)：309.9[M+H]+。
第二步：3-氯-N-(2,4-二氟苯基)-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-2-胺(24-3)
将化合物24-2(100mg),2,4-二氟苯胺(90m g)和CsCO3(80m g)溶于DMSO(20mL)中，100℃下搅拌3h，TLC监测反应完成，将反应液冷却至室温，然后加到EA(50mL)中，用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤,有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物24-3(69mg)。
第三步:4-(2-((2,4-二氟苯基)氨基)-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0024)
将化合物24-3(38.1mg),INT-01(30mg),Pd(PPh3)4(20mg)和Na2CO3(34mg)溶于EtOH/水(4.0mL/0.3mL)中，78℃下搅拌15h，LCMS监测完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0024(13.8mg)。LCMS(ES,m/z)：471.1[M+H]+。
实施例25
化合物HY-02-B0025：4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0025)
Figure BDA0002151023850000591
第一步：2-溴-3-氯-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-B]吡嗪(25-2)
将化合物25-1(200mg)溶于DMF(5.0mL)中，降温至0℃，NaH(80mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，随后将甲磺酰氯(250mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。随后将反应液冷却至0℃，用NH4Cl(50mL*3)进行洗,有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)分离纯化，得到160mg化合物25-2。LCMS(ES,m/z)：309.9[M+H]+。
第二步：3-氯-2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-B]吡嗪(25-3)
将化合物25-2(100mg),2,4-二氟苯酚(90m g)和t-BuOK(80m g)溶于DMSO(20mL)中，100℃下搅拌3h，TLC监测反应完成，将反应液冷却至室温，然后加到EA(50mL)中，用蒸馏水(50mL*3)进行洗涤,有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物25-3(69mg)。
第三步:4-(2-(2,4-二氟苯氧基)-5-(甲基磺酰基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0025)
将化合物25-3(35.8mg),INT-01(29mg),Pd(PPh3)4(20mg)和Na2CO3(34mg)溶于EtOH/水(3.0mL/0.2mL)中，75℃下搅拌7h，LCMS监测完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0025(11.8mg)。LCMS(ES,m/z)：472.1[M+H]+。
实施例26
化合物HY-02-B0026：4-(1-(乙基磺酰基)-5-(4-氟苯氧基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0026)
Figure BDA0002151023850000611
第一步：1-溴-2-(4-氟-苯氧基)-4-甲基-5-硝基-苯(26-1)
将1-溴-2-氟-4-甲基-5-硝基苯2-1(2.0g)，2,4-二氟苯酚(1.2g)和CS2CO3(3.3g)加到DMSO(20mL)中，并在100℃下搅拌3h，TLC监测反应完成，将反应液加到EA(50mL)中，用NH4Cl(50mL*3)洗,有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物26-1(2.0g)。
第二步：(E)-2-(4-溴-5-(4-氟苯氧基)-2-硝基苯基)-N，N-二甲基乙烯-1-胺(26-2)
将化合物26-1(2.0g)溶于DMF(50mL)中，将温度升到80℃，随后将DMF-DMA(8.0mL)加到反应中，在95℃下搅拌6h，LCMS监测完成，将反应液冷却到室温，往反应液中缓慢加到冰水中，过滤，并用蒸馏水清洗滤饼，干燥得到红色固体26-2(3.3g)。
第三步：6-溴-5-(4-氟-苯氧基)-1H-吲哚(26-3)
将化合物26-2(2.0g),Fe(1.6g)和NH4Cl(1.3g)溶于甲醇/水(30mL/5mL)中，在70℃下搅拌4h。LCMS监测完成，将反应液过滤，滤液浓缩，将残余物溶于EA(50ml),用NH4Cl(50mL*3)进行萃取，有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)分离纯化，得到化合物26-4(700mg)。LCMS(ES,m/z)：306.1[M+H]+。
第四步：6-溴-1-(乙基磺酰基)-5-(4-氟苯氧基)-1H-吲哚(26-5)
将化合物26-4(300mg)溶于DMF(5.0mL)中，降温至0℃，NaH(80mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min，随后将乙基磺酰氯(250mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。随后将反应液冷却至0℃，用NH4Cl(50mL*3)进行洗,有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)分离纯化，得到160mg化合物26-5。LCMS(ES,m/z)：398.1[M+H]+。
第五步：4-(1-(乙基磺酰基)-5-(4-氟苯氧基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0026)
将化合物26-5(50mg),化合物INT-01(290mg),Pd(PPh3)4(29mg)和Na2CO3(34mg)溶于二氧六环/水(3.0mL/0.6mL)中，75℃下搅拌7h，LCMS监测完成，反应液用DCM(50mL*3)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0026(11.8mg)。LCMS(ES,m/z)：466.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.05(s,1H),7.61(d,J＝3.6Hz,1H),7.38(s,1H),7.35(d,J＝3.2Hz,1H).7.24(s,1H),6.91(t,J＝8.8Hz,2H),6.79-6.74(m,3H),6.37(d,J＝2.8Hz,1H),3.65(s,3H),3.49(d,J＝7.6Hz,2H),1.23(t,J＝7.6Hz,3H).
实施例27
化合物HY-02-B0027：
4-(1-(乙基磺酰基)-5-(2-氟苯氧基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0027)
Figure BDA0002151023850000631
第一步：1-溴-2-(2-氟苯氧基)-4-甲基-5-硝基苯(27-1)
将化合物2-1(2.0g),2-氟苯酚(1.2g)和CS2CO3(3.3g)溶于DMSO(100ml)中，100℃下搅拌3h，TLC监测反应完成，将反应液加到EA(50ml)中，用蒸馏水(3*50ml)进行萃取,有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物27-1(1.8g)。
第二步：(E)-2-(4-溴-5-(2-氟苯氧基)-2-硝基苯基)-N，N-二甲基乙烯-1-胺(27-2)
将化合物27-1(1.8g)溶于DMF(21mL)和DMF-DMA(7mL)中，在95℃下搅拌8h，LCMS监测完成，将反应液冷却到室温，用饱和氯化铵溶液(40mL)和EA(30mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物将直接用于下一步反应。LCMS(ES,m/z)：381.0/383.0[M+H]+。
第三步：6-溴-5-(2-氟苯氧基)-1H-吲哚(27-3)
将化合物27-2(1.7g),Fe(1.3g)和NH4Cl(1.2g)溶于甲醇/水(30mL/6.0mL)中，在75℃下搅拌8h。LCMS监测完成，将反应液过滤，滤液浓缩，将残余物溶于EA(50mL),用蒸馏水(50mL*3)进行萃取，有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物27-3(1.0g)。LCMS(ES,m/z)：306.0/308.0[M+H]+。
第四步：6-溴-1-(乙基磺酰基)-5-(2-氟苯氧基)-1H-吲哚(27-4)
将化合物27-3(400mg)溶于DMF(10ml)中，降温至0℃，NaH(80mg)缓慢加到反应中，低温搅拌30min。随后将化合物乙基磺酰氯(200mg)在0℃下缓慢加入，常温搅拌2h，LCMS监测完成。随后将反应液冷却至0℃，用饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化得到化合物27-4(450mg)。LCMS(ES,m/z)：398.0/400.0[M+H]+。
第五步：4-(1-(乙基磺酰基)-5-(2-氟苯氧基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0027)
将化合物27-4(50mg),化合物INT-01(45mg),Pd(PPh3)4(29mg)和Na2CO3(33mg)溶于二氧六环/水(5.0ml/1.0ml)中，氮气置换3次，80℃下搅拌7h。冷却到室温，用饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过薄层色谱法(DCM：MeOH＝25:1)纯化得到粗品，向该粗品中加入MeOH(2mL)，搅拌2分钟，过滤，滤饼真空下干燥得到目标产物HY-02-B0027(29.8mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：466.1[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.0(s,1H),7.92(s,1H),7.64(d,J＝3.2Hz,1H),7.35-7.27(m,3H),7.20(s,1H),7.12-7.05(m,3H),6.81(d,J＝4.0Hz,1H),6.27(s,1H)，3.66(q,J＝7.2Hz,2H),3.55(s,3H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例28
化合物HY-02-B0028：4-(5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-C]吡啶-7-酮(HY-02-B0028)
Figure BDA0002151023850000651
第一步：1-溴-2-(4-氯-2-氟苯氧基)-4-甲基-5-硝基苯(28-1)
将化合物2-1(2.1g)，4-氯-2-氟苯酚(1.9.0g)和CS2CO3(4.0g)加到DMSO(30ml)中，并在100℃下搅拌5.0h，TLC监测反应完成，将反应液冷却至室温，然后加到EA(60mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤,有机相用无水Na2SO4干燥，过滤及浓缩，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)分离纯化，得到化合物28-1(3.1g)
第二步:5-溴-4-(4-氯-2-氟苯氧基)-2-甲基苯胺(28-2)
将化合物2-2(1.0g)，Fe粉(780mg)，和NH4Cl(1.5g)溶于MeOH/H2O(20mL/4.0mL)中，75℃下搅拌6h，LCMS检测反应完成。将反应液溶于EA(82mL)中，用饱和NaHCO3溶液(60mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩得到的化合物28-2(500mg)。LCMS(ES,m/z)：330.0[M+H]+。
第三步：5-溴-4-(4-氯-2-氟苯氧基)-2-甲基苯重氮盐(28-3)
将化合物28-2(500mg)溶于ACOH/H2O(20mL/5.0mL)中，将NH4BF4(250mg)在冰浴下加入，低温搅拌30min，随后将NaNO2(95mg)，浓盐酸(0.75mL)依次加到反应中，常温搅拌10h，反应液浓缩，直接得到化合物28-3(480mg)。
第四步：6-溴-5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1H-吲唑(28-4)
将化合物28-3(390mg)和KOAc(1.0g)溶于EA(20mL)，20℃下搅拌10h，用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(75mL)中，用饱和NH4Cl溶液(60mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩,用石油醚打浆得到化合物28-4(320mg)。LCMS(ES,m/z)：341.1[M+H]+。
第五步：6-溴-5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑(28-5)
将化合物28-4(320mg)，化合物7(165mg)和TEA(280mg)溶于DCM(15mL)中，常温过夜，反应液浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)进行纯化得到的化合物28-5(220mg)。LCMS(ES,m/z)：433.10[M+H]+。
第六步：4-(5-(4-氯-2-氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0028)
将化合物28-5(120mg),化合物INT-01(110mg),Pd(dppf)Cl2.DCM(10mg)和KOAC(28mg)溶于二氧六环/水(30mL/3.0mL)中，在90℃下搅拌6.0h，LCMS监测完成，反应液用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)洗，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC分离纯化得到的化合物HY-02-B0028(41.1mg)。HY-02-B0028：LCMS(ES,m/z)：501.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.41(s,1H),8.22(s,1H),7.50(s,1H),7.39(s,1H),7.36(d,J＝3.2Hz,1H),7.27-7.24(m,1H),7.06(d,J＝8.8Hz,1H),6.92(t,J＝8.8Hz,1H),6.36(d,J＝2.8Hz,1H),3.70(s,3H),3.63-3.58(m,2H),1.23(t,J＝7.6Hz,3H).
实施例29
化合物HY-02-B0029：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0029)
Figure BDA0002151023850000671
第一步：5-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)-2-甲基苯胺(29-1)
将化合物2-2(350mg)，Fe粉(286mg)，和NH4Cl(541mg)的水溶液(2.0mL)加到甲醇溶液(10mL)中，75℃下搅拌4h，LCMS检测反应完成。将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NaHCO3溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩得到的化合物29-1(300mg)。LCMS(ES,m/z)：314.0[M+H]+。
第二步：5-溴-4-(2,4-二氟苯氧基)-2-甲基苯重氮盐(29-2)
将化合物29-1(300mg)溶于ACOH/H2O(10mL/5.0mL)中，将NH4BF4(201mg)在冰浴下加入，低温搅拌30min，随后将NaNO2(79mg)，浓盐酸(0.5mL)依次加到反应中，常温搅拌3h，反应液浓缩，直接得到化合物29-2(300mg)。
第三步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1H-吲唑(29-3)
将化合物29-2(300mg)和KOAc(939mg)溶于EA(10mL)，20℃下搅拌5h，用饱和NH4Cl溶液淬灭，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩得到的化合物29-3(300mg)。
LCMS(ES,m/z)：325.1[M+H]+。
第四步：6-溴-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑(29-4)
将化合物29-3(300mg)，化合物7(154mg)和TEA(280mg)溶于DCM(10mL)中，常温过夜，反应液浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)进行纯化得到的化合物29-4(200mg)。
LCMS(ES,m/z)：417.0[M+H]+。
第五步：4-(5-(2,4-二氟苯氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0029)
将化合物29-4(50mg),化合物INT-01(43mg),Pd(PPh3)4(28mg)和Na2CO3(32mg)溶于二氧六环/水(10mL/2.0mL)中，在80℃下搅拌5h，LCMS监测还有化合物29-4，将反应液冷却到室温，将化合物INT-01(21mg)和Pd(PPh3)4(14mg)加到反应体系中，80℃下再搅拌3h，LCMS监测完成，反应液溶于EA(50mL)，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过Prep-TLC(PE：EA＝2:1)进行纯化得到的目标产物HY-02-B0029(15.1mg)。LCMS(ES,m/z)：485.0[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.11(s,1H),8.51(s,1H),8.04(s,1H),7.49-7.44(m,2H),7.35(s,1H),7.31-7.25(m,2H),7.12-7.07(m,1H),6.28(t,J＝2.4Hz,1H),3.73-3.67(m,2H),3.58(s,3H),1.09(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例30
化合物HY-02-B0030:4-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000691
第一步：4-(1-(乙基磺酰基)-5-硝基-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-丁基-1-羧酸叔丁酯(30-2)
将化合物30-1(500mg),化合物INT-03(43mg),Pd(PPh3)4(100mg)和Na2CO3(300mg)溶于乙醇/水(50mL/2.0mL)中，在80℃下搅拌5h，LCMS监测完成，反应液溶于EA(100mL)，用饱和NH4Cl溶液(80mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过Prep-TLC(PE：EA＝2:1)进行纯化得到的目标产物30-2(460.5mg)。LCMS(ES,m/z)：502.1.0[M+H]+。
第二步：4-(5-氨基-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶叔丁基-1-羧酸叔丁酯(30-3)
将化合物30-2(450mg)，Fe粉(350mg)，和NH4Cl(750mg)的水溶液(3.0mL)加到甲醇溶液(15mL)中，70℃下搅拌4h，LCMS检测反应完成。将反应液溶于EA(80mL)中，用饱和NaHCO3溶液(75mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩得到的化合物30-3(330mg)。LCMS(ES,m/z)：472.2[M+H]+。
第三步：4-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-叔丁基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(30-4)
向装有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中加入取代的4-氯-2-氟苯硼酸(210mg)，在二氯甲烷(10mL)中加入Cu(OAc)2·H2O(mmol)，并在50℃下搅拌5分钟。室内温度。将30-3(236mg)加入到上述搅拌的悬浮液中。保持烧瓶打开并在室温下将反应混合物在空气中搅拌24小时。通过TLC监测反应进程。在反应完成后借助旋转蒸发器除去溶剂。用20mL水稀释粗反应混合物，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO 4干燥，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝15:1)纯化得到目标化合物30-4(153mg)为淡黄色油状物。LCMS(ES,m/z)：600.1[M+H]+。
第四步：4-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0030)
将30-4(153mg)溶于二氯甲烷(14mL)，加入12M盐酸甲醇(2mL)在35℃下反应15小时。加入饱和NaHCO3溶液淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝15:1)纯化得到目标化合物进行HY-02-B0030(51mg)。LCMS(ES,m/z)：500.1[M+H]+。
实施例31
化合物HY-02-B0031:4-(5-((2,4-二氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-C]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000701
采用类似于实施例30的方法,得到化合物HY-02-B0031,为白色固体LCMS(ES,m/z)：481.1[M+H]+。
实施例32
化合物HY-02-B00324-(5-((2,4-二氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-C]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000711
第一步：4-(5-溴-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-丁基-1-羧酸叔丁酯(32-1)
将化合物6-1(250mg)，化合物INT-4(280mg)，Pd-118(50mg)和K2CO3(400mg)溶于1,4二氧六环/H2O(16.0ml/2.0ml)中，微波50℃下搅拌2h，LCMS监测完成，将反应液加到蒸馏水中，用二氯甲烷(3*60ml)进行萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝1:4)进行纯化得到80mg的化合物32-1。LCMS(ES,m/z)：534.1[M+H]+。
第二步：4-(5-((2,4-二氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-叔丁酯吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯
将化合物32-1(75mg)，2,4-二氟苯胺(60mg)，Pd(OAc)2(5mg)，xantphos(12mg)和Cs2CO3(120mg)置于20mL的封管中，加入甲苯(12mL)，用氮气鼓泡3分钟，封住封管然后在100℃下反应3小时，冷却到室温，真空下除去溶剂，并加入饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯(40mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用薄层色谱法(DCM：MeOH＝30:1)纯化得到粗品，该粗品再用薄层色谱法(DCM：MeOH＝40:1)纯化得到目标产物32-2(31.6mg)为灰色固体。LCMS(ES,m/z)：583.2[M+H]+。
第三步：4-(5-((4-氯-2-氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲唑-6-基)-6-甲基-1，6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0032)
将32-2(31mg)溶于二氯甲烷(6mL)，加入12M盐酸甲醇(1mL)在35℃下反应15小时。加入饱和NaHCO3溶液淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过硅胶色谱柱(PE：EA＝15:1)纯化得到目标化合物进行HY-02-B0030(15mg)。LCMS(ES,m/z)：483.1[M+H]+。
实施例33
化合物HY-02-B0033:4-(1-(乙基磺酰基)-5-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000721
采用类似于实施例32的方法,得到化合物HY-02-B0033,为白色固体LCMS(ES,m/z)：515.1[M+H]+。
实施例34
化合物HY-02-B0034
Figure BDA0002151023850000731
第一步：3-溴-N-(2,4-二氟苯基)-6-甲基-5-硝基吡啶-2-胺(3)
将化合物3-1(1.0g)和化合物2,4-二氟苯胺(1.6g)溶于DMSO(20mL)中，120℃下搅拌过夜，TLC监测反应完成，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝20:1)进行纯化得到的化合物34-1(1.0g)。
第二步：(E)-3-溴-N-(2,4-二氟苯基)-6-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-5-硝基吡啶-2-胺(34-2)
将化合物34-1(500mg)和DMF-DMA(5.0ml)溶于DMF(20ml)中，100℃下搅拌15h，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，直接得到的粗品34-2(500mg)。
第三步：6-溴-N-(2,4-二氟苯基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-胺(34-3)
将化合物34-2(500mg)，铁粉(351mg)和氯化铵(664mg)溶于MeOH/H2O(15mL/3.0mL)，75℃下搅拌5h，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝10:1)进行纯化得到的化合物34-3(100mg)。
LCMS(ES,m/z)：324.0[M+H]+。
第四步：6-溴-N-(2,4-二氟苯基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-胺(34-4)
将化合物34-3(150mg)，化合物7(90mg)和t-BuOK(160mg)溶于THF(10ml)中，50℃下搅拌8h，将反应液溶于EA(50mL)中，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，通过硅胶色谱柱(PE：EA＝5:1)进行纯化得到的化合物34-4(50mg)。LCMS(ES,m/z)：416.1[M+H]+。
第五步：4-(5-((2,4-二氟苯基)氨基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0034)
将化合物34-3(50mg),INT-01(40mg),Pd-118(16mg)和K2CO3(41mg)溶于二氧六环/水(5.0mL/1.0mL)中，在90℃下搅拌2h，LCMS监测完成，反应液溶于EA(50mL)，用饱和NH4Cl溶液(50mL*3)进行洗涤，有机相干燥浓缩，通过Prep-HPLC进行纯化得到的目标产物HY-02-B0034(13.6mg)。LCMS(ES,m/z)：484.0[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.15(s,1H),7.95(s,1H),7.82-7.80(m,1H),7.73(d,J＝3.6Hz,1H),7.44(s,2H),7.30(t,J＝2.8Hz,1H),7.25-7.19(m,1H),7.02-7.00(m,1H),6.74(d,J＝3.6Hz,1H),6.13(s,1H),3.68-3.62(m,2H),3.60(s,3H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例35
化合物HY-02-B0035:4-(1-(乙基磺酰基)-5-((4-氟苯基)氨基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并并[2,3-c]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000751
采用类似于实施例34的方法,得到化合物HY-02-B0035,为白色固体,LCMS(ES,m/z)：466.1[M+H]+。
实施例36
化合物HY-02-B0036
Figure BDA0002151023850000752
第一步：6-溴-7-氯咪唑并[1,2-a]吡啶(36-2)
将化合物36-1(2.0g)，2-氯乙醛(1200mg)和NaHCO3(800mg)溶解在乙醇(60mL)和水(10mL)中，80℃下搅拌10小时后。补加2-氯乙醛(80mg)，然后80℃下搅拌10小时。真空下除去溶剂，用DCM(100mL)和H2O(60mL)稀释，加入饱和的NaHCO3溶液(20mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用柱层析(PE：EA＝1:1)得到化合物36-2(1250mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：230.9/232.9[M+H]+。
第二步：6-溴-7-氯-3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(36-3)
向溶有化合物36-2(1100mg)的乙腈(45mL)溶液中加入NIS(900mg)，室温下反应7小时。真空下除去溶剂，用H2O(80mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释，加入饱和NaHCO3溶液(30mL),有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物通过柱层析(PE：EA＝2:1)纯化得到化合物36-3(980mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：356.8/358.9[M+H]+。
第三步：6-溴-7-氯-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶(36-4)
将DMSO(25mL)加入到含有化合物36-3(800mg)，乙亚磺酸钠(500mg)，CuI(310mg)，L-脯氨酸(230mg)和碳酸铯(400mg)的混合体系中。在70℃下搅拌7小时。用饱和氯化铵溶液(80mL)和氨水(5mL)淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，残余物用柱层析(PE：EA＝3:1)纯化得到化合物36-4(255mg)为黄色固体。LCMS(ES,m/z)：322.9/324.9[M+H]+。
第四步：6-溴-N-(2,4-二氟苯基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-7-胺(36-5)
将36-4(240mg)和2,4-二氟苯胺(186mg)在1,4-二氧六环(15ml)中的混合物搅拌并在加热器中在100℃下加热12小时。将混合物冷却至室温。蒸发除去1,4-二氧六环。将产物溶解在乙醇中,加入饱和NaHCO3溶液,用二氯甲烷100ml萃取，有机相干燥浓缩，通过硅胶色谱柱(DCM：MeOH＝10:1)进行纯化得到的化合物22-9(50mg)。LCMS(ES,m/z)：416.0/418.0[M+H]+。
第五步：4-(7-((2,4-二氟苯基)氨基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮(HY-02-B0036)
将Pd(PPh3)4(80mg)加入到含有化合物36-5(120mg)，INT-01(100mg)和Na2CO3(90mg)的二氧六环/H2O(15mL/3mL)的混合体系中。氮气置换3次，然后在85℃下反应6小时。冷却到室温，用饱和氯化铵溶液(100mL)和EA(100mL)稀释，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空下除去溶剂，柱层析(EA:EtOH＝10:1),浓缩得到化合物HY-02-B0036(34.5mg)为白色固体。LCMS(ES,m/z)：484.1[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.7(s,1H),9.11(s,1H),8.09(s,1H),7.68-7.54(m,3H),7.38(s,1H),7.30-7.14(m,1H),7.10-6.90(m,1H),,6.68-6.36(m,1H),3.60(s,3H),3.47(dd,2H),1.29(t,3H)。
实施例37
化合物HY-02-B0037:4-(3-(乙基磺酰基)-7-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并并[2,3-c]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000771
采用类似于实施例36的方法,得到化合物HY-02-B0037,为白色固体,LCMS(ES,m/z)：516.1[M+H]+。
实施例38
化合物HY-02-B0038 4-(7-(2,4-二氟苯氧基)-3-(乙基磺酰基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-甲基-1,6-二氢-7H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-酮
Figure BDA0002151023850000772
采用类似于实施例36的方法,得到化合物HY-02-B0038,为白色固体,LCMS(ES,m/z)：485.1[M+H]+。
实施例39-60
采用类似于实施例22，化合物HY-02-B0022的方法,得到化合物HY-02-B0039--HY-02-B0060其结构,名称和化合物分子量信息如下表2所示。
表2
Figure BDA0002151023850000781
Figure BDA0002151023850000791
Figure BDA0002151023850000801
Figure BDA0002151023850000811
Figure BDA0002151023850000821
实施例61-82
采用类似于实施例36，化合物HY-02-B0036的方法,得到化合物HY-02-B0061--HY-02-B0082,其结构,名称和化合物分子量信息如下表3所示。
表3
Figure BDA0002151023850000822
Figure BDA0002151023850000831
Figure BDA0002151023850000841
Figure BDA0002151023850000851
Figure BDA0002151023850000861
实施例83-97
采用类似于实施例22，化合物HY-02-B0022的方法,或采用类似于实施例36,化合物HY-02-B0036的方法,得到化合物HY-02-B0083至HY-02-B0097,其结构,名称和化合物分子量信息如下表4所示。
表4
Figure BDA0002151023850000871
Figure BDA0002151023850000881
Figure BDA0002151023850000891
生物测试
实施例A:BRD4酶活性的测定
仪器:ENVISION；
材料:用于筛选的人源重组BRD4购自Active Motif公司。检测试剂盒购自Cisbio公司
过程:采用Cisbio公司的HTRF试剂盒进行BRD4结合活性的检测
样品处理:
样品用DMSO溶解，低温保存，DMSO在最终体系中的浓度控制在不影响检测活性的范围之内。
数据处理及结果说明:
初筛选择单浓度条件下，例如20μg/ml，对样品的活性进行测试。对于在一定条件下表现出活性的样品，例如抑制率％Inhibition大于50，测试活性剂量依赖关系，即IC50/EC50值，通过样品活性对样品浓度进行非线性拟和得到，计算所用软件为Graphpad Prism4，拟合所使用的模型为sigmoidal dose-response(varible slope)，对于大多数抑制剂筛选模型，将拟合曲线底部和顶部设定为0和100。一般情况下，每个样品在测试中均设置复孔(n≥2)，在结果中以标准偏差(Standard Deviation,SD)或者标准误差(Standard Error,SE)表示。结果如表1所示，本发明化合物表现出优异的BRD4抑制活性，其中，A表示IC50≤50nM；B表示50nM≤IC50≤200nM；C表示IC50≥200nM。
表5 BRD4激酶抑制活性
Figure BDA0002151023850000901
Figure BDA0002151023850000911
Figure BDA0002151023850000921
实施例B:细胞增殖抑制活性测试:
测试方法:悬浮细胞法(3days)
仪器:SpectraMAX 340；材料:96plate(coring)；Cells,Medium,DMSO,MTS
过程:运用MTS法检测细胞存活率：
1.将生长在对数生长期的MM-1S细胞，吸取培养基，轻轻吹打，计数；
2.以相应的细胞密度接种在96孔板中90ul；
3.加10ul化合物，每一化合物设浓度梯度，每一浓度设三复孔，每一浓度分别加入到对应孔中；DMSO的终浓度是0.2％
4. 5％CO2 37℃培养箱内培养3天，加入20ul的MTS；
5. 37℃孵育3小时后，使用SpectraMAX 340测490nm(L1)光吸收值，参考波长690nm(L2)，将(L1-L2)值对抑制剂不同浓度作图，百分比活性(％)＝化合物OD值-BLANKOD值/DMSO OD值-BLANK OD*100％用graphpad,经公式拟合得IC50.
样品处理:
样品用DMSO溶解，低温保存，DMSO在最终体系中的浓度控制在不影响检测活性的范围之内。
数据处理及结果说明:
初筛选择单浓度条件下，例如20μg/ml，对样品的活性进行测试。对于在一定条件下表现出活性的样品，例如抑制率％Inhibition大于50，测试活性剂量依赖关系，即IC50/EC50值，通过样品活性对样品浓度进行非线性拟和得到，计算所用软件为Graphpad Prism4，拟合所使用的模型为sigmoidal dose-response(varible slope)，对于大多数抑制剂筛选模型，将拟合曲线底部和顶部设定为0和100。一般情况下，每个样品在测试中均设置复孔(n≥2)，在结果中以标准偏差(Standard Deviation,SD)或者标准误差(Standard Error,SE)表示。
本发明实施例化合物对MM-1S细胞具有良好的抑制活性，其中A表示IC50≤50nM；B表示50nM≤IC50≤200nM；C表示IC50≥200nM。对MM-1S细胞抑制的IC50数据参见表6。
表6：对MM-1S细胞抑制活性
Figure BDA0002151023850000931
Figure BDA0002151023850000941
Figure BDA0002151023850000951
Figure BDA0002151023850000961

Claims (14)

1.一种如式II或III所示的含氮杂环化合物、或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003907020310000011
其中，
Figure FDA0003907020310000012
为单键或双键；
R1、R2各自独立地为H、卤素、C1-C3的烷基、-氰基、C1-C3的烷氧基或CF3；
R3为C1-C3的烷基；
R4为H、或C1-C3的烷基；
A1至A7以及A9各自独立地为CH、C或N；
X为NH或O；
环B为
Figure FDA0003907020310000013
2.根据权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1、R2各自独立地为H、F、Cl、Br、C1-C3的烷基、CN、C1-C3的烷氧基或CF3。
3.根据权利要求1或2所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于，R3为甲基、乙基、丙基。
4.一种如下所示的含氮杂环化合物、或其药学上可接受的盐，其中所述含氮杂环化合物为：
Figure FDA0003907020310000021
Figure FDA0003907020310000031
Figure FDA0003907020310000041
Figure FDA0003907020310000051
Figure FDA0003907020310000061
Figure FDA0003907020310000071
Figure FDA0003907020310000081
Figure FDA0003907020310000091
Figure FDA0003907020310000101
5.一种药物组合物，其特征在于，包含治疗有效量的选自根据权利要求1至4中任意一项所述的含氮杂环化合物、或其药学上可接受的盐中的一种或多种，以及药学上可接受的载体或辅料。
6.权利要求1至4中任一项所述的含氮杂环化合物、或其药学上可接受的盐，或者权利要求5所述的药物组合物在制备药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗、预防、延迟或阻止与BRD4相关的癌症、癌症转移、炎症、心血管疾病、纤维化疾病。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述癌症选自青少年髓单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、胃癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、胰腺癌、肝癌或其组合。
9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述炎症选自关节炎、皮肤炎、气管炎、膀胱炎、肠炎、肝炎、胰腺炎、结膜炎、口腔炎、中耳炎。
10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述心血管疾病包括类高血压、肺动脉高压、低血压、冠心病、中风。
11.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗、预防、延迟或阻止与BRD4相关的代谢性疾病。
12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述代谢性疾病包括脂肪肝、糖尿病、血脂异常、痛风。
13.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗、预防、延迟或阻止与BRD4相关的免疫性疾病。
14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，所述免疫性疾病包括类风湿关节炎、银屑病、红斑狼疮。
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