CN111830023A - 巯基化合物检测试剂、检测试纸、试剂盒、试纸盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种巯基化合物检测试剂、检测试纸、试剂盒、试纸盒及其制备方法,检测试剂由所制备的磷钨酸试剂,醋酸缓冲液和屏蔽试剂按一定比例混合而成,检测试纸,其由多孔吸水性纸和分散于其上的干态检测试剂构成。本发明提供的检测试剂基于原理创新,使用时,直接将检测试剂与待测尿液按照体积比为2:1混合,静置10~15分钟,即可通过肉眼直接判断结果。本发明克服了现有方法中需要对照样辅助判断结果的缺点,且兼具操作简单,安全无毒,检测快速的优点。本发明提供的尿液巯基化合物检测试纸具有稳定、保质期长、安全无毒、操作简单、检测快速以及无需对照等优点。
Description
技术领域
本发明涉及检测试剂及检测试纸技术领域,具体涉及一种巯基化合物检测试剂、检测试纸、试剂盒、试纸盒及其制备方法。
背景技术
人***瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)属于***瘤病毒科,是一种小分子的、无被膜包被的环状双链 DNA 病毒。HPV 通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。该病毒不但具有宿主特异性, 而且具有组织特异性,只能感染人的皮肤和粘膜上皮细胞,引起人类皮肤的多种***状瘤或疣及生殖道上皮增生性损伤。目前已发现的 HPV 亚型有 200 余种,其中约 40 种可感染生殖道,根据其致病力大小分为高危型和低危型,其感染具有地域、民族和年龄差异。
(1)在世界范围内,HPV 亚型分布存在一定的地域性差异,不同亚型HPV感染及其后果不同。全球范围HPV亚型主要是16亚型,其次是18,33,52,58 亚型,在亚洲主要以16,18,33 亚型为主,而在中国主要以16,18,52,58 亚型最为常见。***前病变中常见亚型为HPV16,58,52,18,33,31。
(2)高危型,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、54、52、53、56、58、59、66、58、73、82等,主要引起外生殖器癌、***及高度外阴、宫颈上皮内瘤变及其他部位恶性病变等;
(3)低危型,包括HPV 6、11、 42 等,主要诱发外生殖器和皮肤***以及低度外阴、宫颈上皮内瘤及其他部位的疣类病变和低度上皮内瘤等。
(4)低危型通常可在宫颈良性或低度病变的病灶中检测到,而高危型通常在高度病变及***中发现。HPV感染临床一般没有不舒服,少数具有外阴瘙痒、外阴灼热痛、白带增多。大***、小***、*** 、***、宫颈或肛周为淡红色或灰色小丘疹,呈疣状突起,呈簇状排列或融合形成鸡冠状,菜花状赘生物,皮损脆性增加而出血。高危型HPV的持续感染是***及其癌前病变的只要病因,HPV感染的检测已成为预防、诊断、处理宫颈病变的重要依据。
(5)女性对高危型HPV易感性高于男性,而男性对低危型HPV的易感性高于女性。男性HPV感染与女性***的HPV感染有一定的关系。伴侣已经感染、近3-6月有多个***或***有多个***、有患“淋病,梅毒,衣原体感染,滴虫***炎”等情形可自诊HPV疑似感染。HPV疑似感染以3%~5%的醋酸溶液浸湿的纱布包绕或敷贴在可疑的皮肤或黏膜表面,3~5分钟后揭去,典型的***损害将呈现白色丘疹或疣赘状物,而亚临床感染则表现为白色的斑片或斑点。醋白试验对辨认早期***损害及亚临床感染是一个简单易行的检查方法,发现HPV或怀疑感染,去医院确诊。
(6)人***瘤病毒持续感染 8-24个月才可能发生***前病变,在此之前还没有形态学改变,是形态学方法的盲点, 组织病理学和细胞学不可能发现细胞形态异常,只能报告阴性结果。然而,在此过程中由于已经发生基因突变和巯基脱落,这种分子水平的改变,通过测定尿中巯基检测得到尿中巯基阳性结果。诊***及***前病变的假阴性率子***的发生发展是个逐渐演变过程,巯基的排出量在病变不同阶段也不同,总的趋势是从病变早期到晚期巯基越来越多被排出。
现有的巯基化合物检测法均针对巯基化合物还原性来设计,通过氧化巯基化合物使氧化试剂被还原并显色,再通过比色法测定巯基化合物含量,或直接通过观察颜色来判断结果是否为阳性。然而由于尿液或者分泌物中还含有其他还原性物质,目前的检测方法均需加入对照样来判断结果,而一般是通过加入氯化汞使巯基化合物被屏蔽而不与氧化试剂发生反应,从而降低显色程度作为对照。然而氯化汞为剧毒品,会造成操作危险以及环境污染,并且以对照的方式进行检测需要对照样品与被测样品之间有明显的显色差异,否则仅通过肉眼很难判断结果。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题,本发明的目的之一在于提供一种巯基化合物检测试剂。
本发明的目的之二在于提供一种巯基化合物检测试剂的加工方法。
本发明的目的之三在于提供一种含有前述巯基化合物检测试剂的试剂盒。
本发明的目的之四在于提供一种尿液巯基化合物检测试纸、检测试纸的加工方法及试纸盒。
本发明解决其技术问题采用的技术方案如下:
本发明提供的巯基化合物检测试剂是由三部分试剂组分混合配制而成,分别是磷钨酸试剂,醋酸缓冲液和屏蔽试剂,所述屏蔽试剂具有氧化性,呈透明无色,在一定条件下被还原后仍为无色。
本发明的工作原理是:当检测对象为正常人的尿液或者分泌物时,其中也含有还原性物质,如维生素C,普通的磷钨酸试剂与维生素C反应时会快速显色而变蓝,导致假阳性,而加入屏蔽试剂后,维生素C与屏蔽试剂优先反应,则不会再与磷钨酸试剂反应显色,此时显示阴性,为正常。当检测对象为HPV感染患者的时,其中含有大量巯基化合物,含量远高于正常尿液或者分泌物中所含有的还原性物质,此时屏蔽试剂优先与巯基化合物反应,然而不足以将其完全屏蔽,同时正常尿液或者分泌物中高活性的还原物质得到保护,其与磷钨酸试剂反应显色,从而得到阳性结果,为真阳性,即尿液或者分泌物中原有的高活性还原物质充当了巯基化合物的指示反应物。
另外,人尿液中有较高含量的尿酸也具有还原性,但其在碱性条件下还原性较高,而本发明所提供的检测试剂是偏酸性试剂,所以尿酸的干扰可排除。其它分泌物中若含有尿酸类还原性物质,通常也都是在碱性条件下还原型较高,同理,由于检测试剂偏酸性的条件限制,可以排除干扰。
优选的,所述磷钨酸试剂的制备方法如下:称取5±0.5g钨酸钠,溶解于40±5ml去离子水中,加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2±0.5小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中。
优选的,所述醋酸缓冲液的制备方法如下:分别配置2±0.5M醋酸钠溶液和2±0.5M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合。
优选的,所述屏蔽试剂的制备方法如下:称取屏蔽剂25~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里。
优选的,所述巯基化合物检测试剂由磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀获得。
一种巯基化合物检测试剂的制备方法,所述方法步骤如下:
步骤S1: 称取5±0.5g钨酸钠,溶解于40±5ml去离子水中,加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2±0.5小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中;
步骤S2:分别配置2±0.5M醋酸钠溶液和2±0.5M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
步骤S3:称取屏蔽剂50~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
步骤S4:将磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀。
本发明还提供一种巯基化合物自查试剂盒,主要包含:取样器,测试试剂和测试管,测试试剂为本发明前述的巯基化合物检测试剂。
本发明提供一种尿液巯基化合物检测试纸,其由多孔吸水性纸和分散于其上的干态检测试剂构成,检测试剂是由三部分试剂混合配制而成,分别是磷钨酸试剂,醋酸缓冲液和屏蔽试剂,所述屏蔽试剂具有氧化性,呈透明无色,在一定条件下被还原后仍为无色。
本发明的尿液巯基化合物检测试纸的制备方法如下:检测试剂配制好后,将多孔吸水性纸浸入到检测试剂中,待其充分吸收检测试剂后,取出沥干,而后干燥即可得到巯基化合物检测试纸。
本发明还提供一种尿液巯基化合物自查试剂盒,主要包含:尿液取样器、本发明的检测试纸和干燥剂。
本发明所基于的原理是,当试纸接触尿液后,若是正常尿液,尿液中的维生素C先与屏蔽试剂反应,则磷钨酸试剂不反应,试纸不显色,为阴性;若是含有大量巯基化合物的尿液,尿液中的巯基化合物先与屏蔽试剂反应,而后维生素C与磷钨酸试剂反应,显蓝色,为阳性,此时维生素C充当了巯基化合物的指示剂。
优选的,所述磷钨酸试剂的制备方法如下:称取5±0.5g钨酸钠,溶解于40±5ml去离子水中,加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2±0.5小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中。
优选的,所述醋酸缓冲液的制备方法如下:分别配置2±0.5M醋酸钠溶液和2±0.5M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合。
优选的,所述屏蔽试剂的制备方法如下:称取屏蔽剂25~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里。
优选的,屏蔽试剂为碘酸钠和/或高碘酸钠。
优选的,所述巯基化合物检测试剂由磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:0.5混合均匀获得。
一种尿液巯基化合物检测试纸的制备方法,所述方法步骤如下:
第一步,检测试剂的配置
步骤S1: 称取5±0.5g钨酸钠,溶解于40±5ml去离子水中,加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2±0.5小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中;
步骤S2:分别配置2±0.5M醋酸钠溶液和2±0.5M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
步骤S3:称取屏蔽剂50~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
步骤S4:将磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:0.5混合均匀;
第二步,将多孔吸水性纸浸入到检测试剂中,待其充分吸收检测试剂后,取出沥干,而后干燥即可得到巯基化合物检测试纸。
优选的,多孔吸水性纸采用滤纸,浸润时间不低于5秒,浸润温度常温,干燥方式为真空干燥,干燥温度40-60℃。
更优选的,多孔吸水性纸浸润时超声波辅助,超声波辅助处理时间不低于10s。超声波辅助,可以使得检测试剂充分进入检测试纸的立体微孔中并储存,避免局部空隙负载的检测试剂少,提高检测试纸上检测试剂分步的均一性,改善检测试纸的检测可靠性。
本发明的有益效果:
本发明提供的巯基化合物检测试剂基于原理创新,具有安全无毒,操作简单,检测快速以及无需对照等优点。
本发明提供的尿液巯基化合物检测试纸具有稳定、保质期长、安全无毒、操作简单、检测快速以及无需对照等优点。
鉴于尿中巯基成分的复杂性和感染人***瘤病毒(HPV)并不一定会引起***及***前病变的基因突变,因此通过测定尿中巯基阳性来筛诊患者是否感染或感染过人***瘤病毒(HPV)也有一定的局限性,会产生一定的假阳性和假阴性的比例。
假阳性:
1、理论上从定性的概念来说,各种组织细胞发生基因突变时都有巯基脱落。根据中国医学科学院肿瘤医院对中国常见的几种癌症(胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、鼻咽癌、食道癌等)所做的临床试验的数据表明,按照一定标准,使用尿中巯基检测法,子***(阳性率80%以上)外的其它恶性肿瘤的阳性率有12%。
2、***炎的病原微生物包括加德纳菌、***毛滴虫、白假丝酵母菌等,不能排除这些微生物感染时会产生巯基类代谢产物,造成尿液标本检测阳性。
3、尿液或者分泌物中含有的其它还原性物质(如维生素C、尿酸等),某些微量成分、其他病因导致的代谢异常产物。
4、操作不当引起的检测假阳性。
5、对于部分尿中巯基阳性的患者来说,当前HPV核酸检测不一定呈阳性,但这部分患者可能有过人***瘤病毒(HPV)感染史,并导致处在癌前病变之前的基因突变阶段的可能性,所以对这部分假阳性的患者来说,筛查***前病变或***高危人群的意义远大于检测判断当前感染人***瘤病毒(HPV)阳性的意义。
假阴性:
1、人***瘤病毒(HPV)已经分离出的型号已有130多种,女性一生感染人***瘤病毒(HPV)的几率高达80%,但很大一部分感染患者感染后会被人体免疫***自行清除,并不会引起组织细胞的基因突变,因此也不会引起尿中巯基的持续升高,所以对于低危一过性感染人群和HPV早期感染还没引起细胞组织基因突变的人群假阴性会比较高。如果目的是使用尿中巯基筛诊高危人***瘤病毒(HPV)的持续感染高危人群时假阴性的比例反而会大大下降,而高危人***瘤病毒(HPV)的持续感染高危人群也是最值得进行筛诊的人群。
2、肿瘤、结石、炎症等造成尿路堵塞,使脱落的巯基不能顺利通过尿路排出。
3、患者未禁饮、禁食或收集的不是第一次晨尿,导致尿中巯基相对浓度偏低。
4、色盲、色弱者无法正确地观测反应颜色,造成反应结果判别错误。
5、检验操作不规范等因素也会造成一定的人为假阴性。
具体实施方式
基于本发明所述原理,下面通过具体实施例,对本发明的技术方案做进一步的阐述。实施例中所用各种试剂均系市场采购,纯度采用分析纯。
本发明所提供的巯基化合物检测试剂具体实施步骤如下:
步骤S1、磷钨酸试剂制备:称取5g钨酸钠,溶解于40ml去离子水中,加85%浓磷酸4ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100ml保存在棕色试剂瓶中;
步骤S2、醋酸缓冲液:分别配置2M醋酸钠溶液和2M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
步骤S3、屏蔽试剂:称取屏蔽试剂25~100mg,优选为50~100mg,溶解于100ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
步骤S4、巯基化合物检测试剂:将磷钨酸试剂,醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀;
本发明用于检测:将尿液与巯基化合物检测试剂按体积比1:2混合,静置10~15分钟,若混合液明显变蓝,则为阳性,否则为阴性。
如实施步骤S3所述,屏蔽试剂为氧化剂,溶于水,溶解后溶液透明无色,且一定条件下被还原后仍为无色,优选为碘酸钠,高碘酸钠。
为了使本发明更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的实施例仅用于解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1
巯基化合物检测试剂的制备。
磷钨酸试剂制备:称取5g钨酸钠,溶解于40ml去离子水中,加85%浓磷酸4ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100ml保存在棕色试剂瓶中;
醋酸缓冲液:分别配置2M醋酸钠溶液和2M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
屏蔽试剂:称取碘酸钠50mg,溶解于100ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
巯基化合物检测试剂:将磷钨酸试剂,醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀。
实施例2
巯基化合物检测试剂的制备。
屏蔽试剂:称取碘酸钠100mg,溶解于100ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
其余同实施例1
测试例1
以下以模拟尿样进行本发明检测试剂的效果测试。
模拟尿样1制备:称取500mg L-半胱氨酸与7mg维生素C,溶解于100ml水中;
模拟尿样2制备:称取7mg维生素C,溶解于100ml水中。
取模拟尿样1,100μl,与实施例1中的检测试剂200ul混合,静置10~15分钟,混合液变蓝,结果为阳性;取模拟尿样2,100μl,与实施例1中的检测试剂200ul混合,静置10~15分钟,混合液无变化,结果为阴性。
测试例2
以下以正常人尿样进行本发明检测试剂的效果测试。
正常人尿样1:早饭后第一次排出的,静置冷却至室温;
正常人尿样2:取正常人尿样1,25ml,向其中加入125mg L-半胱氨酸并溶解。
不含屏蔽试剂的磷钨酸试剂制备:将实施例1中的磷钨酸试剂,醋酸缓冲液按体积比为2:1混合均匀即可。
取正常人尿样1,100μl,与实施例2中的检测试剂200μl混合,静置10~15分钟,混合液颜色无变化,结果为阴性;取模拟尿样2,100μl,与实施例2中的检测试剂200μl混合,静置10~15分钟,混合液颜色变蓝,结果为阳性;取正常人尿样1,100μl,与不含屏蔽试剂的磷钨酸试剂200μl混合,静置10~15分钟,混合液颜色变蓝,结果为假阳性。
下面就本发明的巯基化合物检测试纸的制备,提供若干实施例进行阐述如下:
本发明所提供的用于试纸条加工的巯基化合物检测试剂具体实施步骤如下:
步骤S1、磷钨酸试剂制备:称取5g钨酸钠,溶解于40ml去离子水中,加85%浓磷酸4ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100ml保存在棕色试剂瓶中;
步骤S2、醋酸缓冲液:分别配置2M醋酸钠溶液和2M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
步骤S3、屏蔽试剂:称取屏蔽试剂25~100mg,优选为50~100mg,溶解于100ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
步骤S4、巯基化合物检测试剂:将磷钨酸试剂,醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:0.5混合均匀;
将滤纸与配置好的尿液巯基化合物检测试剂混合,待滤纸充分吸收检测试剂后,取出沥干并在40℃,真空条件下烘干。
尿液检测:取一定量尿液,滴到试纸上,静置晾干,观察试纸,若试纸颜色变蓝,则为阳性,否则为阴性。
为了使本发明更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的实施例仅用于解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例3
巯基化合物检测试纸的制备。
磷钨酸试剂制备:称取5g钨酸钠,溶解于40ml去离子水中,加85%浓磷酸4ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100ml保存在棕色试剂瓶中;
醋酸缓冲液:分别配置2M醋酸钠溶液和2M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
屏蔽试剂:称取碘酸钠50mg,溶解于100ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
巯基化合物检测试剂:将磷钨酸试剂,醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:0.5混合均匀;
将滤纸浸入配置好的尿液巯基化合物检测试剂,超声波辅助10s,待滤纸充分吸收检测试剂后,取出沥干并在40℃,真空条件下烘干。
实施例4
巯基化合物检测试纸的制备。
屏蔽试剂:称取碘酸钠100mg,溶解于100ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
将滤纸浸入配置好的尿液巯基化合物检测试剂,待滤纸充分吸收检测试剂后,取出沥干并在60℃,真空条件下烘干。
其余同实施例3
测试例3
以下以模拟尿样进行本发明检测试剂的效果测试。
模拟尿样1制备:称取500mg L-半胱氨酸与7mg维生素C,溶解于100ml水中;
模拟尿样2制备:称取7mg维生素C,溶解于100ml水中。
取模拟尿样1,滴到实施例3所制备的试纸上,静置晾干,试纸颜色变蓝,结果为阳性;取模拟尿样2,滴到实施例3所制备的试纸上,静置晾干,试纸颜色没有变蓝,结果为阴性。
测试例4
以下以正常人尿样进行本发明检测试剂的效果测试。
正常人尿样1:早饭后第一次排出的,静置冷却至室温;
正常人尿样2:取正常人尿样1,25ml,向其中加入125mg L-半胱氨酸并溶解。
不含屏蔽试剂的磷钨酸试剂制备:将实施例1中的磷钨酸试剂,醋酸缓冲液按体积比为2:1混合均匀,而后将滤纸浸入其中,充分吸收试剂后取出沥干并于60℃烘干。
取正常人尿样1,滴到实施例4所制备的试纸上,静置晾干,试纸为微黄色,结果为阴性;取正常人尿样2,滴到实施例4所制备的试纸上,静置晾干,试纸颜色变蓝,结果为阳性;取正常人尿样1,滴到不含屏蔽试剂的磷钨酸试纸上,静置晾干,试纸颜色变蓝,结果为假阳性。
基于本发明的巯基化合物检测试剂、检测试纸、试剂盒、试纸盒,当初步检测为阳性时,为了让自诊者就医之前进一步了解自己HPV感染诱因,也便于临床医师了解临床症状及体征,本申请还设计了如下自诊提纲以及治疗和预防措施,供自诊者和医师参考使用:
一、诱因:出现不适前你是否有下面情况:
1、配偶已经感染
2、近3-6月有多个***或你的***有多个***;
3、近期有无患“淋病,梅毒,衣原体感染,滴虫***炎”等;
4、夏天是否穿超短短裤外出至公共场所,上厕所前是否洗净手;
5、使用公用浴盆、便盆、浴巾、浴袍。
二、临床症状:你是否感觉哪里不舒服:
1、没有不舒服 ;
2、外阴瘙痒 ;
3、白带增多 ;
4、外阴灼热痛 。
三、临床体征:是否看到了或触摸到什么:
1、生长部位:大***、小***、*** 、***、宫颈、肛周,常见两个部位同时发生;
2、局部表现:为淡红色或灰色小丘疹,呈疣状突起;或呈簇状排列或融合形成鸡冠状,菜花状赘生物,皮损脆性增加而出血。
四、实验室检查:自我检测
1、尿液巯基试验阳性
2、醋白试验 :以3%~5%的醋酸溶液浸湿的纱布包绕或敷贴在可疑的皮肤或黏膜表面,3~5分钟后揭去,典型的***损害将呈现白色丘疹或疣赘状物,而亚临床感染则表现为白色的斑片或斑点。醋白试验对辨认早期***损害及亚临床感染是一个简单易行的检查方法。
五:治疗
1、发现HPV感染,去医院确诊;
2、怀疑HPV感染,去医院确诊。
六:预防
1、***互相固定,注意性卫生。
2、避孕套可以降低明显感染HPV的概率。
3、夏天穿足够到膝关节部位的裙子或裤子去公共场所。
4、上厕所前彻底洗净双手,手不直接接触关厕所门(一个HPV感染着有20%可能手指上携带病毒)。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案,并非对本发明作任何形式上的限制,在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (15)
1.一种巯基化合物检测试剂,其特征在于,所述检测试剂由磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂组成,所述屏蔽试剂具有氧化性,呈透明无色,在一定条件下被还原后仍为无色。
2.根据权利要求1所述的一种巯基化合物检测试剂,其特征在于,所述屏蔽试剂为碘酸钠或高碘酸钠的水溶液。
3.根据权利要求2所述的一种巯基化合物检测试剂,其特征在于,所述屏蔽试剂为高碘酸钠的水溶液。
4.根据权利要求1所述的一种巯基化合物检测试剂,其特征在于,所述磷钨酸试剂的制备方法如下:称取5±0.5g钨酸钠,溶解于40±5ml去离子水中,加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2±0.5小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中。
5.根据权利要求4所述的一种巯基化合物检测试剂,其特征在于,
所述醋酸缓冲液的制备方法如下:分别配置2±0.5M醋酸钠溶液和2±0.5M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合。
6.根据权利要求5所述的一种巯基化合物检测试剂,其特征在于,
所述屏蔽试剂的制备方法如下:称取屏蔽剂25~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里。
7.根据权利要求6所述的一种巯基化合物检测试剂,其特征在于,
所述屏蔽试剂的制备方法如下:称取屏蔽剂50~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里。
8.根据权利要求6所述的巯基化合物检测试剂,其特征在于,所述巯基化合物检测试剂由磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀获得。
9.一种巯基化合物检测试剂的制备方法,其特征在于,所述方法步骤如下:
步骤S1: 称取5±0.5g钨酸钠,溶解于40±5ml去离子水中,加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2±0.5小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中;
步骤S2:分别配置2±0.5M醋酸钠溶液和2±0.5M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
步骤S3:称取屏蔽剂50~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
步骤S4:将磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:1混合均匀。
10.一种巯基化合物检测试剂盒,包括取样器、测试试剂和测试管,其特征在于,所述测试试剂为权利要求1-8任意一项所述的巯基化合物检测试剂。
11.一种尿液巯基化合物检测试纸,其特征在于,由多孔吸水性纸和分散于其上的干态检测试剂构成,所述检测试剂为权利要求1-9中任意一项所述的巯基化合物检测试剂。
12.一种尿液巯基化合物检测试纸的制备方法,其特征在于,所述方法步骤如下:
第一步,检测试剂的配置
步骤S1: 称取5±0.5g钨酸钠,溶解于40±5ml去离子水中,加85±0.5%浓磷酸4±0.5ml及沸石,加热至回流开始计时,持续沸腾回流2±0.5小时,停止加热,冷却至室温,然后定容至100±0.5ml保存在棕色试剂瓶中;
步骤S2:分别配置2±0.5M醋酸钠溶液和2±0.5M醋酸溶液,并以体积比为5:1的方式将前后两者混合;
步骤S3:称取屏蔽剂50~100mg,溶解于100±0.5ml去离子水中,保存在棕色试剂瓶里;
步骤S4:将磷钨酸试剂、醋酸缓冲液和屏蔽试剂按体积比2:1:0.5混合均匀;
第二步,将多孔吸水性纸浸入到检测试剂中,待其充分吸收检测试剂后,取出沥干,而后干燥即可得到巯基化合物检测试纸。
13.根据权利要求12所述尿液巯基化合物检测试纸的制备方法,其特征在于,多孔吸水性纸采用滤纸,浸润时间不低于5秒,浸润温度常温,干燥方式为真空干燥,干燥温度40-60℃。
14.根据权利要求13所述尿液巯基化合物检测试纸的制备方法,其特征在于,多孔吸水性纸浸润时超声波辅助,超声波辅助处理时间不低于10s。
15.一种巯基化合物检测试纸盒,包括尿液取样器、检测试纸和干燥剂,其特征在于,所述检测试纸为权利要求11-14任意一项所述的巯基化合物检测试纸。
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CN104655624A (zh) | 人体唾液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法 |
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