CN115372605A - 一种尿液巯基化合物检测试剂及检测试剂、检测试纸、检测试剂盒的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种尿液巯基化合物检测试剂，所述检测试剂由磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂三种试剂组成；所述磷酸盐缓冲试剂配制方法为：分别配制0.1±0.05mol/L的磷酸溶液和磷酸二氢钾溶液，并用磷酸溶液调节磷酸氢二钾溶液至pH值为1.9‑2.5，得到磷酸盐缓冲试剂，所述显色试剂的制备方法为：称取玉米淀粉1‑10g，加入至约800mL超纯水中，煮沸至玉米淀粉全部溶解，待温度下降至室温后，再称取1‑20g磷钼酸和10‑20g碘酸钾，加入并完全溶解，定容至1000mL得到显色试剂，所述显色试剂为磷钼酸和碘酸钾、玉米淀粉的水溶液，所述的对照试剂包含碘乙酰胺的水溶液，本发明解决了HPV感染检测手续繁琐、耗时长、操作水平要求高的问题。
Description
技术领域
本发明涉及快速体外诊断技术领域，尤其涉及一种尿液巯基化合物检测试剂及检测试剂、检测试纸、检测试剂盒的制备方法。
背景技术
人***瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)属于乳多空病毒科的***瘤空泡病毒A属，是一种小分子的、无被膜包被的环状双链DNA病毒。HPV 通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。HPV病毒能感染人的皮肤和粘膜上皮细胞，引起人类皮肤的多种***状瘤或疣及生殖道上皮增生性损伤。
HPV病毒持续感染,可能引发***，2017年，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，人***瘤病毒部分亚型被列在3类致癌物清单中。
目前HPV感染的检测方法，往往需要采集受测者的活体组织，且需要在正规医院里进行，由专业人士进行检测，不适用于家庭的常规检查。入院检查的程序会给受测者带来一定的心理压力，导致很多人不愿意提早检查，可能耽误治疗时机。因此，一种快速、便捷、高效、安全的检测手段势在必行。
研究证实，HPV感染患者的尿液中有大量的巯基类代谢物质，而在正常人群的尿液中极少，因此，可将尿液中巯基类代谢物质的含量作为机体是否发生HPV感染及宫颈病变的一个重要指标，通过检测尿液中巯基类代谢物质的含量，可以有效地提高HPV感染检出率和治疗效率，为此，我们提出了一种尿液巯基化合物检测试剂及检测试剂、检测试纸、检测试剂盒的制备方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种尿液巯基化合物检测试剂及检测试剂、检测试纸、检测试剂盒的制备方法，解决了上述问题。
为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明提供一种尿液巯基化合物检测试剂，所述检测试剂由磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂三种试剂组成。
优选的，所述磷酸盐缓冲试剂配制方法为：分别配制0.1±0.05mol/L的磷酸溶液和磷酸二氢钾溶液，并用磷酸溶液调节磷酸氢二钾溶液至pH值为 1.9-2.5，得到磷酸盐缓冲试剂，所述磷酸盐缓冲试剂中磷酸根离子的浓度为 0.05-0.15mol/L，pH范围为1.9-2.5，在此区间显色试剂有良好的显色反应。
优选的，所述显色试剂为磷钼酸和碘酸钾、玉米淀粉的水溶液。
优选的，所述显色试剂的制备方法为：称取玉米淀粉1-10g，加入至约 800mL超纯水中，煮沸至玉米淀粉全部溶解，待温度下降至室温后，再称取 1-20g磷钼酸和10-20g碘酸钾，加入并完全溶解，定容至1000mL得到显色试剂，所述显色试剂中磷钼酸的浓度为0.1％-2％，碘酸钾的浓度为1％-2％，玉米淀粉的浓度为0.1％-1％。
优选的，所述的对照试剂包含碘乙酰胺的水溶液。
优选的，所述对照试剂的制备方法为：称取碘乙酰胺1-2g，溶解于800mL 超纯水中，定容至1000mL得到对照试剂，所述对照试剂中碘乙酰胺的浓度为 0.1％-0.2％。
一种尿液巯基化合物检测试剂的制备方法，采用上述的一种尿液巯基化合物检测试剂进行制备，具体包括以下步骤：
S1：分别配制0.1±0.05mol/L的磷酸溶液和磷酸二氢钾溶液，并用磷酸溶液调节磷酸氢二钾溶液至pH值为1.9-2.5，得到磷酸盐缓冲试剂；
S2：称取玉米淀粉1-10g，加入至约800mL超纯水中，煮沸至玉米淀粉全部溶解，待温度下降至室温后，再称取1-20g磷钼酸和10-20g碘酸钾加入并完全溶解，定容至1000mL后得到显色试剂；
S3：称取碘乙酰胺1-2g，溶解于800mL超纯水中，定容至1000mL得到对照试剂；
S4：将磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂按照4:5:1的比例混合后得到尿液巯基化合物检测试剂。
一种尿液巯基化合物检测试纸的制备方法，采用上述的尿液巯基化合物检测试剂制备方法制备的检测试剂进行制备，其特征在于：包括以下步骤：
a：将检测试剂通过浸泡的方法施加在试纸上，浸泡时超声大于10秒钟；
b：浸泡完毕后将其取出，抽真空使其干燥，然后将试纸切成小块，并粘贴于塑料条上得到检测试纸。
9.一种尿液巯基化合物检测试剂盒的制备方法，采用权利要求7所述的尿液巯基化合物检测试剂制备方法制备的检测试剂进行制备，其特征在于：所述试剂盒包括检测盒、检测条、干燥片、比色条，其中检测条的制备方法包括以下步骤：
(1)：分别配制权利要求7所述的磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂；
(2)：将磷酸盐缓冲试剂和对照试剂按照9:1的比例混合，并浸泡试纸，干燥后切割试纸，得到试纸1；
(3)：将磷酸盐缓冲液和显色试剂按照5:5的比例混合，并浸泡试纸，干燥后切割试纸，得到试纸2；
(4)：将试纸1和试纸2彼此相连粘贴于塑料条上得到检测条；
(5)：将检测盒、检测条、干燥片、比色条、比色卡组装后即为尿液巯基检测试剂盒。
本发明的有益效果：本发明检测试剂中的显色试剂能够氧化巯基化合物，产生蓝色物质，在正常人的尿液中，也包含有还原性物质，如维生素C、尿酸等，普通的显色试剂，在与维生素C或者尿酸反应时会快速显色变蓝，导致假阳性，而加入对照试剂后，维生素C和尿酸优先与对照试剂发生反应，避免与显色试剂反应，而在HPV感染患者的尿液中，含有大量的游离巯基化合物，此时对照试剂同时与尿液中的还原性物质反应，包括维生素C、尿酸和巯基化合物，对照试剂虽然也消耗少量巯基化合物，但是剩余巯基化合物仍可与显色试剂反应并显色变蓝，得到阳性结果，通过本检测试剂解决了HPV感染检测手续繁琐、耗时长、操作水平要求高的问题。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1
尿液巯基化合物检测试剂的配制
配制磷酸盐缓冲液：量取438ml超纯水，向其中加入3mL 85％的浓磷酸，得到0.1mol/L的磷酸溶液；称取13.6g磷酸二氢钾，溶解于超纯水中并定容至1000mL，得到0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液；所得磷酸二氢钾溶液用 0.1mol/L的磷酸溶液调节pH至2.0，得到浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲试剂。
配制显色试剂：称取玉米淀粉5g，加入至约800mL超纯水中，煮沸至玉米淀粉全部溶解，待温度下降至室温后，再称取10g磷钼酸和10g碘酸钾加入并完全溶解，定容至1000mL后得到显色试剂；
配制对照试剂；称取碘乙酰胺2g，溶解于800mL超纯水中，定容至1000mL 得到对照试剂；
将磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂按照4:5:1的比例混合后得到检测试剂。
实施例2
尿液巯基化合物检测试剂盒的制备
配制磷酸盐缓冲液：量取438ml超纯水，向其中加入3mL 85％的浓磷酸，得到0.1mol/L的磷酸溶液；称取13.6g磷酸二氢钾，溶解于超纯水中并定容至1000mL，得到0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液；所得磷酸二氢钾溶液用 0.1mol/L的磷酸溶液调节pH至2.2，得到浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲试剂。
配制显色试剂：称取玉米淀粉5g，加入至约800mL超纯水中，煮沸至玉米淀粉全部溶解；待温度下降至室温后，再称取20g磷钼酸和10g碘酸钾加入并完全溶解，定容至1000mL后得到显色试剂。
配制对照试剂；称取碘乙酰胺2g，溶解于800mL超纯水中，定容至1000mL 得到对照试剂。
将磷酸盐缓冲试剂和对照试剂按照9:1的比例混合，并浸泡试纸，干燥后切割试纸，得到试纸1。
将磷酸盐缓冲液和显色试剂按照5:5的比例混合，并浸泡试纸，干燥后切割试纸，得到试纸2；
将试纸1和试纸2彼此相连粘贴于塑料条上待用；
将检测盒、检测条、干燥片、比色条、比色卡组装后即得到尿液巯基检测试剂盒。
实施例3
标准比色卡的制备
配制0mmol/L,0.04mmol/L,0.2mmol/L,1mmol/L,5mmol/L,25mmol/L 的半胱氨酸标准溶液；
分别取所配制的半胱氨酸标准溶液100uL，分别滴加到制备好的尿液巯基化合物检测试剂盒中；
室温放置10分钟后，根据显色情况制备比色卡。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种尿液巯基化合物检测试剂，其特征在于：所述检测试剂由磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂三种试剂组成。
2.根据权利要求1所述的一种尿液巯基化合物检测试剂，其特征在于：所述磷酸盐缓冲试剂配制方法为：分别配制0.1±0.05mol/L的磷酸溶液和磷酸二氢钾溶液，并用磷酸溶液调节磷酸氢二钾溶液至pH值为1.9-2.5，得到磷酸盐缓冲试剂。
3.根据权利要求1所述的一种尿液巯基化合物检测试剂，其特征在于：所述显色试剂为磷钼酸和碘酸钾、玉米淀粉的水溶液。
4.根据权利要求1所述的一种尿液巯基化合物检测试剂，其特征在于：所述显色试剂的制备方法为：称取玉米淀粉1-10g，加入至约800mL超纯水中，煮沸至玉米淀粉全部溶解，待温度下降至室温后，再称取1-20g磷钼酸和10-20g碘酸钾，加入并完全溶解，定容至1000mL得到显色试剂。
5.根据权利要求1所述的一种尿液巯基化合物检测试剂，其特征在于：所述的对照试剂包含碘乙酰胺的水溶液。
6.根据权利要求1所述的一种尿液巯基化合物检测试剂，其特征在于：所述对照试剂的制备方法为：称取碘乙酰胺1-2g，溶解于800mL超纯水中，定容至1000mL得到对照试剂。
7.一种尿液巯基化合物检测试剂的制备方法，采用权利要求1-6任一项所述的一种尿液巯基化合物检测试剂进行制备，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1：分别配制0.1±0.05mol/L的磷酸溶液和磷酸二氢钾溶液，并用磷酸溶液调节磷酸氢二钾溶液至pH值为1.9-2.5，得到磷酸盐缓冲试剂；
S2：称取玉米淀粉1-10g，加入至约800mL超纯水中，煮沸至玉米淀粉全部溶解，待温度下降至室温后，再称取1-20g磷钼酸和10-20g碘酸钾加入并完全溶解，定容至1000mL后得到显色试剂；
S3：称取碘乙酰胺1-2g，溶解于800mL超纯水中，定容至1000mL得到对照试剂；
S4：将磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂按照4:5:1的比例混合后得到尿液巯基化合物检测试剂。
8.一种尿液巯基化合物检测试纸的制备方法，采用权利要求7所述的尿液巯基化合物检测试剂制备方法制备的检测试剂进行制备，其特征在于：包括以下步骤：
a：将检测试剂通过浸泡的方法施加在试纸上，浸泡时超声大于10秒钟；
b：浸泡完毕后将其取出，抽真空使其干燥，然后将试纸切成小块，并粘贴于塑料条上得到检测试纸。
9.一种尿液巯基化合物检测试剂盒的制备方法，采用权利要求7所述的尿液巯基化合物检测试剂制备方法制备的检测试剂进行制备，其特征在于：所述试剂盒包括检测盒、检测条、干燥片、比色条，其中检测条的制备方法包括以下步骤：
(1)：分别配制权利要求7所述的磷酸盐缓冲试剂、显色试剂、对照试剂；
(2)：将磷酸盐缓冲试剂和对照试剂按照9:1的比例混合，并浸泡试纸，干燥后切割试纸，得到试纸1；
(3)：将磷酸盐缓冲液和显色试剂按照5:5的比例混合，并浸泡试纸，干燥后切割试纸，得到试纸2；
(4)：将试纸1和试纸2彼此相连粘贴于塑料条上得到检测条；
(5)：将检测盒、检测条、干燥片、比色条、比色卡组装后即为尿液巯基检测试剂盒。
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