CN1117268A

CN1117268A - 白细胞介素-8生成抑制剂

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Publication number: CN1117268A
Application number: CN94190812A
Authority: CN
Inventors: 松田隆秀; 大和田滋; 牟田弘; 相原美纪; 滝泽寿男; 今川健一; 菊地干雄
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-10-21
Filing date: 1994-10-17
Publication date: 1996-02-21
Anticipated expiration: 2014-10-17
Also published as: WO1995011026A1; EP0674515A1; DE69420832T2; DE69420832D1; AU7864194A; GR3032091T3; CA2150546A1; AU683697B2; ATE184793T1; ES2138092T3; CN1073418C; JP2839847B2; US5637597A; DK0674515T3; KR100191191B1; TW296983B; EP0674515B1; JPH0812578A; CA2150546C; KR950703957A

Abstract

本发明提供了白细胞介素-8生成和粒细胞激活的抑制剂以及新的治疗炎性疾病的方法。白细胞介素-8生成抑制剂、粒细胞激活抑制剂和炎性疾病治疗剂含有作为活性组分的通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其可药用盐：(其中R为卤原子)；式侧链取代基的位置为喹诺酮骨架的3-或4-位；且喹诺酮骨架中3-和4-位间的碳-碳键为单键或双键)。

Description

白细胞介素—8生成抑制剂

本发明涉及白细胞介素—8生成抑制剂，粒细胞激活抑制剂，炎性疾病治疗剂，贝切特疾病治疗剂，口炎治疗剂，肾炎治疗剂和语音障碍治疗剂。尤其是，本发明涉及白细胞介素—8抑制剂，粒细胞激活抑制剂，炎性疾病治疗剂，贝切特疾病治疗剂，口炎治疗剂，肾炎治疗剂和语音治疗剂都含有由以下通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐作为活性组分

[其中R为卤原子(氟原子、氯原子、溴原子或碘原子)；喹诺酮骨架上取代基的取代部位为喹诺酮骨架的3—或4—位；并且喹诺酮骨架中3—和4—位间的碳—碳键为单键或双键]，优选为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其盐。

在日本专利公开号35623/1988中描述了以上通式(I)所示的喹诺酮衍生物及其制备方法。而且，在日本专利申请公开号74329/1991中描述了喹诺酮衍生物用作抗胃溃疡剂。

在国际公开号WO 92/21342中也描述了这些喹诺酮衍生物用作糖尿病治疗剂；在国际公开号WO 94/12182中描述了其作为防止肠粘膜失调剂的用途；在国际公开号WO93/24043中描述了其作为生长激素抑制素分泌减少的抑制剂的用途。

白细胞介素—8(下文简写为IL—8)，也称作嗜中性白细胞激活因子，是一种结合了由72个氨基酸组成的多肽的碱性肝素，也是一种既由激活的巨噬细胞也由各种类型的人细胞产生的细胞因子。

IL—8具有以下各种生理活性。(1)IL—8是中性白细胞、T细胞和嗜碱性白细胞的趋化性因子；(2)IL—8激活中性白细胞，释放溶酶体酶，改变中性白细胞对血内皮细胞的粘合，并加强对念珠菌繁殖的抑制作用；(3)将IL—8注入关节时，引起伴随有大量中性白细胞润湿的滑液膜的破坏；(4)IL—8增加了中性白细胞表面上粘附因子的出现；(5)IL—8控制嗜碱性白细胞释放组胺；以及(6)IL—8激活人造器官中的中性白细胞。IL—8也被称作炎性细胞因子，并认为IL—8异常产生和对IL—8的过度反应都会引起炎性疾病。

贝切特疾病是一种特殊的***炎性疾病，它侵袭口腔、眼、***、皮肤和几乎所有器官的粘膜。据说该疾病的引起与感染、免疫异常等有关，但仍未被澄清。在该疾病的治疗中，使用甾体激素、秋水仙素、环磷酰胺、环孢子菌素等，但由于其副作用，必须尽最大可能地小心使用。仍未发现安全且能长期给药的有用的治疗剂。

由诸如口炎等疾病引起的口疮性口炎在临床上难以与贝切特疾病引起的口疮性口炎区分开，并且象贝切特疾病一样难以治疗和经常复发。在治疗该疾病中，由于在多数情况下不清楚口炎的起因，采用对症治疗，如局部给予甾体激素、包衣硝酸银等。然而，在这些治疗中，进行连接给药是困难的，这是因为例如所使用物质的副作用并且当停止治疗时，经常可见疾病复发。至今仍未发现安全且能长期给药的有用的治疗剂。口炎常表现出溃疡的症状，但没有报告提及任何抗胃溃疡剂可用于此口炎。

人们认为肾炎不仅由感染和免疫机制引起，也可由非免疫机制引起，由各种其它疾病如血清凝集***疾病、血纤维蛋白溶解***疾病、高血压等引起肾炎时，据说膳食的质量等也诱导肾炎。因此，肾炎是一种非常复杂的疾病且很难治疗。由此，进行了许多探索以便找到一种有效的治疗肾炎的方法。

迄今为止，肾炎的治疗是通过给予各种药物如甾体药物、免疫抑制剂、非甾体抗炎药物、抗凝血剂、抗血小板剂等来进行。然而，当以大剂量长期给药时，甾体药物显示副作用；显示更惊人副作用的免疫抑制剂必须十分小心地使用和给药；而且抗凝血剂和抗血小板剂仅仅缓解肾炎的症状并不治疗疾病的根本起因。

因此，需要充分地阐明肾炎的发展机制，建立治疗肾炎的合理方法，并开发一种对肾炎有效的且能在长时间内安全使用的药物。

近年来，经常可见这样一种情况，就是在特殊职业中由于社会需要的改变而要求过度发音引起声带炎和继之的声音障碍。在这种情况下，因为过度发言是迫于职业的，当病人不能摆脱工作时，不能通过沉默治疗等来治疗声音障碍。其结果是，过度使用具有炎症的发声带，而且单单通过常规的保守治疗常难以改善声音的障碍。因此，在适用于治疗声音障碍的药物上进行了各种探索。常用于治疗声音障碍的方法包括用血管收缩药或肾上腺皮质激素来喷雾咽喉(这是一种辅助方法)，但当长期连续使用时，喷雾法存在一个安全性问题。所以，需要开发一种副作用低并能长期安全使用的药物。

为了找到一种因其对细胞因子的活性以及对粒细胞激活和粘附的活性而可用于治疗炎性疾病并能长期安全地用于治疗贝切特疾病、口炎、肾炎和声音障碍的药物，本发明人进行了广泛研究。其结果是，本发明人发现以上通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐，特别是2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其盐具有极好的抑制IL—8生长细胞产生IL—8的活性，抑制粒细胞激活的活性和抑制粒细胞粘附因子表达的活性；对贝切特疾病是有效的；对由诸如口炎等疾病引起的和与贝切特疾病症状相同的疼痛的或无痛的口疮性口炎的治疗是有效的；和作为由IL—8生成增加而引起的疾病的治疗剂、作为由粒细胞激活而引起的疾病的治疗剂，作为因粒细胞粘附因子表达增加而引起的疾病的治疗剂、作为肾炎治疗剂及作为声音障碍的治疗剂是有效的。

图1显示用作试验化合物的本发明化合物，即，2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸对Helicobacter Pylori(下文称作H.Pyroli)促进IL—8生成细胞产生IL—8的抑制活性曲线。

图2显示用作试验化合物的本发明化合物，即2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸对H、Pyroli激活中性白细胞的抑制活性曲线。

本发明的白细胞介素—8生成抑制剂、粒细胞激活抑制剂、炎性疾病治疗剂、贝切特疾病治疗剂、口炎治疗剂、肾炎治疗剂和声音障碍治疗剂都是通过将通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐转变为常规药用制剂来获得的。

使用常用的稀释剂或赋型剂来制备药用制剂，如填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等。药物制剂可根据打算治疗的目的制成各种形式。剂型的典型例子为片剂、丸剂、粉剂、溶液、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶囊、栓剂、注射剂(如，溶液或混悬液)以及外用制剂。与增加其持续释放性的树脂或类似物混合来使用通式(I)的化合物或其盐也是可能的。

制备片剂时，可使用现有技术中已知的载体，赋型剂的例子如乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、脲素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素、硅酸等；粘合剂如水、乙醇、丙醇、单糖浆、乳糖溶液、淀粉液、明胶液、羧甲基纤维素、虫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂如干淀粉、藻酸钠、粉状琼脂、粉状昆布多糖、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、淀粉、乳糖等；崩解抑制剂如白糖、硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；湿润剂如甘油、淀粉等；吸附剂如淀粉、乳糖、高岭土、皂粘土、胶体硅酸等；和润滑剂如精制滑石、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇等。该片剂可按需制成常规包衣片形式，如糖衣片、明胶包衣片、肠溶衣片或膜包衣片，或制成双层片或多层片形式。

制备丸剂时，可使用现有技术已知的各种载体，赋型剂如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高岭土、滑石等；粘合剂如粉状***胶、粉状西黄蓍胶、明胶、乙醇等；崩解剂如昆布多糖、琼脂等。

制备栓剂时，可使用现有技术中已知的载体，例如聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶及半合成甘油化物。

制备注射剂(溶液、乳液或混悬液)时，通常是灭菌的且优选制成与血液等渗的。制备溶液、乳液或混悬液时，可使用现有技术中常用的所有稀释剂，如水、乙醇、丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、聚氧异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。在这种情况下，注射剂可含有足以使注射剂等渗的氯化钠、葡萄糖和甘油，且还可含有通常所用的加溶剂、缓冲剂、光滑剂。该注射剂可更进一步地含有(按需)着色剂、防腐剂、香料、调味剂、甜味剂以及其它药物。

外用制剂被制成药用的常规外用制剂的形式。药用的常规外用制剂包括，例如，溶液剂、油剂、洗剂、搽剂、脂肪油基质的软膏、乳剂型软膏(如，O/W型亲水性软膏或W/O型水吸附性软膏)、水溶性软膏、糊剂、硬膏剂、霜剂及乳剂。药用的常规外用制剂不受以上实施例的限定。这些剂型都可按常规方法来制备。

外用制剂成形时，可使用现有技术中的各种材料。作为基质，例如，可使用至少一种选自各种油性基质或各种水溶性基质的基质。基质的具体例子为油和脂如花生油、芝麻油、豆油、红花油、鳄梨油、葵花油、玉米油、菜子油、蓖麻油、山茶油、椰子油、橄榄油、罂粟子油、可可油、牛脂、猪脂、羊毛脂等；由上述油和脂进行化学处理(如，氢化)获得的改良的油和脂；矿物油如凡士林、石蜡、硅油、角鲨烷等；高级脂肪酸酯、高级脂肪醇和蜡如十四烷酸异丙酯、十四烷酸正丁酯、亚油酸异丙酯、蓖麻醇酸丙酯、蓖麻醇酸异丙酯、蓖麻醇酸异丁酯、蓖麻醇酸庚酯、癸二酸二乙酯、己二酸二异丙酯、鲸蜡醇、硬脂醇、漂白的蜂蜡、鲸蜡、日本蜡、含水羊毛脂、巴西棕榈蜡、紫胶蜡等；高级脂肪酸如硬酯酸、油酸、棕榈酸等；12—18个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸的单、二和三甘油酯的混合物；多元醇如乙二醇、聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇、甘油、鲨肝醇、季戊四醇、山梨糖醇、甘露糖醇等；粘合物质如***胶、安息香胶、愈创木脂、黄蓍胶等；天然水溶性聚合物如明胶、淀粉、酪蛋白、糊精、果胶、果胶酸钠、藻酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、硝基纤维素、结晶纤维素等；合成的水溶性聚合物如聚乙烯醇、聚乙烯基甲基醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、羧乙烯基聚合物、聚乙烯亚胺等；非离子、阴离子或阳离子或两性表面活性剂；乙醇；异丙醇；和水。在本发明中，这些基质可单独使用或以两种或两种以上的混合物形式来使用。

该外用制剂可按需含有常用的添加剂如胶凝剂、防腐剂、抗氧剂、缓冲剂、PH—控制剂、润湿剂、消毒剂、着色剂、芳香剂、色素、增稠剂、金属螯合剂等。

常通过制备含有有效组分的灭菌溶液或混悬液然后加入喷射剂来制备喷雾型制剂。在制备溶液或混悬液时，可使用现有技术中常用的所有稀释剂，如注射剂中所述的那些。作为喷射剂，可使用现有技术中常用的所有喷射剂，如液化的气体喷射剂，例如含氯氟烃(如，Flon 12或Foln 123)、压缩气体喷射剂(如氮气和二氧化碳)等。喷雾型制剂还可含有常用的增溶剂、缓冲液等，而且，如果需要，该喷雾型制剂可含有着色剂、防腐剂、香料、调味剂、增甜剂等。

由于具有抑制IL—8生成的活性以及抑制粒细胞激活的活性，本发明的IL—8生成抑制剂可用于预防和治疗急性以及慢性炎症疾病。该抑制剂也可用于增加人造器官和人造血管的生物相容性。炎症疾病包括如炎性皮肤疾病如炎性角化病(如，牛皮癣)，特应性皮炎、接触性皮炎等；慢性炎症疾病如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮(SLE)、贝切特疾病等(这些是自身免疫疾病)；炎性肠道疾病如节段性回肠炎、溃疡性结肠炎等；炎性肝病如乙型肝炎、丙型肝炎、醇性肝炎、药物过敏性肝炎等；炎性肾病如肾小球性肾炎(glumerulonephritis)等；炎性呼吸***疾病如支气管炎等；口炎；声带炎；以及在使用人造器官和人造血管期间所表现出的炎症。可用本抑制剂的炎性疾病不受以上所述例子的限制。

本发明的抑制剂抑制(1)h.Pyroli对IL—8生成细胞(如，外周血单核细胞、组织巨噬细胞、大粒状淋巴细胞、T淋巴细胞、中性白细胞、纤维细胞、血管内皮细胞、表皮细胞、肝细胞，星状体细胞、支气管上皮细胞和胃癌建立的细胞系)产生IL—8的促进作用，据说H.Pyroli与胃粘膜损伤的产生和复发有关，(2)中性白细胞的激活作用和(3)粘合因子的增加。所以，本抑制剂也可用于预防H.Pyroli引起的胃粘膜疾病的产生和复发。鉴于H.Pyroli不仅诱导中性白细胞的激活也促进血管内皮细胞和胃粘膜细胞中ICAM—1(LFA—1配体)的出现，本发明的抑制剂也具有抑制H.Pyroli促进ICAM—1出现的活性。

本发明的贝切特疾病治疗剂和口炎治疗剂用于治疗各种由贝切特疾病引起的口腔、眼、***、皮肤等处的粘膜疾病。该治疗剂也可用于治疗口炎等引起的口腔粘膜疾病。口炎包括如卡他性口炎、溃疡性口炎、口疮性口炎、疱疹性口炎和毒性口炎。

本发明的肾炎治疗剂用于由各种原因引起的急性、快速进展的或慢性肾炎，尤其是可用于治疗慢性肾小球性肾炎等。急性肾炎包括如溶血性链球菌等感染后的肾小球性肾炎或IgA肾小球肾炎、慢性增殖性肾炎、新月形成的肾炎、狼疮肾炎、引起坏死的脉管炎和紫癜肾炎。快速进展性肾炎包括如新月形成性肾炎(小管外增殖性肾小球肾炎)。慢性肾炎包括如肾小球膜增殖性肾小球肾炎、膜肾炎、膜增殖性肾炎、灶性肾小球肾炎、Screlotic肾小球肾炎或紫癜脉管炎，和狼疮肾炎。

本发明声音障碍治疗剂用于治疗由各种原因引起的声音障碍，尤其是可用于治疗以声音为职业的人们(如歌手、播音员等)的声音障碍。

本发明药用制剂中所含的喹诺酮衍生物(I)或其盐的量不受特别的限制并可在大的范围内适当选择，通常其量为药用制剂重量的1—70％(重量)，优选为5—50％(重量)。

给予药用制剂的方法不受特别的限制。它取决于制剂的形式、病人的年龄、性别和其它因素、病人的病情等。例如，口服给予片剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂或胶囊剂。单一地或与葡萄糖或氨基酸等常规辅助溶液混合静脉给予注射剂，或者根据需要，单一地肌内、真皮内、皮下或腹腔给予注射剂。直肠内给予栓剂。口服给予溶液、混悬液或糖浆型制剂。喷雾型制剂可直接喷到咽喉。

本发明药用制剂的剂量可依据给药方法、病人的年龄，性别和其它因素、病人的病情等来适当选择，而且理想的剂量通常以喹诺酮衍生物(1)或其盐的量来计为每天每公斤体重约0.6—50mg。在各个给药单位中，有效组分的理想含量为10—1,000mg。

下文通过显示制备实施例和药理试验来更具体地描述本发明的试剂。制备实施例1

2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)

丙酸 150g

Avicel(微晶纤维素的商品名，由Asahi Chemical Industry Co.，Ltd生产) 40g

玉米淀粉 30g

硬脂酸镁 2g

羟丙基甲基纤维素 10g

聚乙二醇6000 3g

蓖麻油 40g

甲醇 40g

将2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸、Avicel、玉米淀粉和硬脂酸镁混合在一起并研磨，然后用带有冲头(半径10mm)的制片机将混合物制成片剂。用羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇6000、蓖麻油和甲醇组成的膜包衣剂来包衣片剂而获得膜包衣片。制备实施例2

2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)

丙酸 150g

枸橼酸 1.0g

乳糖 33.5g

磷酸二钙 70.0g

Prulonic F—68 30.0g

十二烷基硫酸钠 15.0g

聚乙烯吡咯烷酮 15.0g

聚乙二醇(Carbowax 1500) 4.5g

聚乙二醇(Carbowax 6000) 45.0g

玉米淀粉 30.0g

干燥十二烷基硫酸钠 3.0g

干燥的硬脂酸镁 3.0g

乙醇定量

将2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸、枸橼酸、乳糖、磷酸二钙、Prulonic F—68和十二烷基硫酸钠混合在一起。

将混合物过60号筛。所得过筛的混合物用含有聚乙烯吡咯烷酮、Carbowax 1500和Carbowax 6000的乙醇溶液进行湿法制粒。按需加入乙醇使混合物转化为糊状团块。加入玉米淀粉并继续混合直到形成均匀颗粒。所得材料过10号筛，然后放在盘中，并在100℃的烘箱中干燥12—14小时。干颗粒过16号筛。将干燥十二烷基硫酸钠和干燥硬脂酸镁加到所得材料中。用制片机将混合物压成所需形状的片心。

用涂剂处理片心，然后用滑石喷涂以防止吸湿。在所得的片心上形成包衣内层。交替地进行多次的涂剂包衣。形成包衣内层和抛光包衣层来获得圆的且光滑的片剂。进行着色包衣直到获得理想的色泽。干燥后，磨光包衣片以获得均匀光泽的片剂。制备实施例3

2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸 5g

聚乙二醇(分子量：4000) 0.3g

氯化钠 0.9g

聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯 0.4g

焦亚硫酸钠 0.1g

羟苯甲酸甲酯 0.18g

羟苯甲酸丙酯 0.02g

注射用蒸馏水 10.0ml

在80℃搅拌下，将羟苯甲酸酯、焦亚硫酸钠和氯化钠溶于以上一半体积的蒸馏水中。将溶液冷却到40℃，并将2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸、聚乙二醇和聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯溶解在其中。将剩余的蒸馏水加到溶液中使达到最终体积。经合适滤纸过滤来使溶液灭菌，制得注射剂。药理试验1

抑制IL—8生成的活性。1)使用的细胞：在含有10％热灭活的FCS(胎儿腓肠血清)的RPMI1640培养基中保温培养的人胃癌株MKN45。2)1L—8生成刺激物

临床上分离的H.Pyroli C0001(由Departmont of InternalMedicine，the ohkura National Hospital获得)。

在含有7％FCS的布鲁杆菌液体培养基中保温培养细菌(H.Py-roli)并在指数生长期使用。3)试验化合物

2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸。4)试验方法

将人胃癌细胞系MKN 45以0.3×10⁶个细胞/孔的量接种在24孔培养板上。细胞粘合到板上之后，将培养基变为无抗菌物的含有10％FCS的RPMI培养基。在5％CO₂浓度37℃温度下保温培养24小时后，以1.2×10⁷cfu(细胞∶细菌＝1∶400)的量加入H.Pyroli。将所得混合物离心，回收上清液；并用Sandwich法[Microbiol.Im-munol.，Vol.36(5)，PP.507—516，1992]的EIA(酶免疫测定)测量上清液中IL—8的量。5)试验结果

试验结果显示在图1中，在图1中，各数据显示四次测量的平均值±SE，且***均表示P＜0.001。如图1所示，依据使用的试验化合物量，试验化合物抑制人胃癌MKN 45细胞产生IL—8。顺便提一句，当使用高达5mM的浓度时，试验化合物不显示细胞毒性。药理试验2

对粒细胞激活作用的影响1)使用的细胞：用葡糖浆Ficoll Paque沉降法分离的人中性白细胞。2)激活物：H.Pyroli培养的上清液。

将H.Pyroli(标准菌株ATCC43504)在含有7％热灭活的FCS的布鲁杆菌液体培养基中保温培养3天。所得培养基以3,500rpm的转速离心10分钟。将上清液过滤死菌。3)试验化合物

2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸

用NaOH制成20mM溶液然后用测定培养基稀释该溶液来使用该试验合物。

作为表面抗原的抗体(CD11b)，使用FITC标记的CD11b(由Bec-ton，Dicuinson &Co.制造)。

作为测定培养基，使用含有10％FCS的RPMI培养基。4)试验方法

将人中性白细胞以5×10⁵个细胞/孔的量接种在24孔培养板上。将24孔板分为不加物质(仅含有中性白细胞)的(A)组，加H.Pyloli培养的上清液(最终浓度＝2％)的(B)组，和加H.Pyroli培养的上清液(最终浓度＝2％)和试验化合物(最终浓度＝10μm，50μm，100μm或500μm)的(C)组。

将各个24孔培养板在含10％CO₂环境下的培养器中并在37℃温度下保温培养2小时。保温培养后，回收各孔中的中性白细胞，用FCM缓冲溶液(0.1％牛血清白蛋白、0.1％NaN₃/磷酸盐缓冲的盐水)洗涤一次，然后在冰上与FITC标记的CD11b(抗体)反应30分钟。反应后，用FCM缓冲溶液洗涤反应混合物并用细胞流量计进行分析。由所得直方图计算平均荧光强度。用未刺激的中性白细胞(不含H.Pyroli培养的上清液)中出现的CD11b作为100％，计算各组中相对出现的CD11b。5)试验结果

试验结果显示在图2中，在图2中，各数据为四次测量的平均值±SE；**表示P＜0.01；和***均表示P＜0.001。符号A为(A)组的结果；B为(B)组的结果；和C¹、C²、C³及C⁴为(C)组的结果且分别为试验化合物加到10μm、50μm、100μm和500μm最终浓度时的结果。如图2所示，依据使用化合物的量，试验化合物抑制H.Pyroli对表面抗原的促进活性。药理试验3

检测口炎作用的试验1)试验对象

对8名口腔中有口疮贵疡的贝切特疾病患者进行试验(年龄18—45岁，5男和3女)。2)给药方法

除已进行治疗的外，每天给予2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸三次(每次一片(每片含有100mg所述化合物)共6个月。3)方法的评价

要求每个受试者每天记录“口腔中口疮溃疡数”和“疼痛的程度”。按月计算各自的总数并如下计算其变化情况。

(a)：给药一个月内口疮溃疡的总数

(b)：给药前一个月内口疮溃疡的总数

(c)：给药一个月内疼痛程度的总点数

(d)：给药一个月前疼痛程度的总点数

顺便提一句，疼痛的程度按下列6级标准来表示点数。

0：无疼痛

1：无折磨疼痛

2：不强烈的疼痛

3：折磨性疼痛

4：强烈疼痛

5：非常强烈的疼痛

根据变化情况(％)，按下列7级标准来进行评价。

明显改善：60％或以上

改善：30％到低于60％

略有改善：10％到低于30％

无变化：10％到-10％以上

略有恶化：-10％到-30％以上

恶化：-30％到-70％以上

明显恶化：-70％或以下4)结果

关于对口腔中口疮溃疡数目的影响，4个病人显示明显的改善；一个病人显示改善；两个病人显示略有改善；和一个病人显示恶化。关于对疼痛的影响，5个病人显示明显改善；一个病人显示稍有改善；和两个病人显示恶化。药理试验4

检验对肾炎作用的试验1)受试者

十六名经诊断确证患有慢性肾小球肾炎的病人(年龄：18—66岁，十男和六女)。2)给药方法

每天口服三次每片含100mg2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸的片剂(每次一片)共12周。3)评价方法

分别累积各受试者在给药前2—3天和给药12周后2—3天排出的尿。测量每个累积尿中的尿蛋白的量。由获得的各个尿蛋白的量计算其每天的平均值。由下式计算尿蛋白量的减少值(％)。

(e)：给药后每天尿蛋白量的平均值；

(f)：给药前每天尿蛋白量的平均值。

根据尿蛋白的减少值(％)，按下列4级标准来进行评价。

改善：50％或以上

略有改善：25％或以上到50％以下

没有改变：-25％或以上到25％以下

恶化：低于-25％4)试验结果

六名病人显示改善；两名病人显示略有改善；七名病人没有变化；和一名病人显示恶化。因此，半数受试者显示改善或略有改善。药理试验5

测验对声音障碍作用的试验1)受试者

十名经诊断确证因发音而过度使用声带导到患有声带炎并继之声音障碍的患者(歌手、教师、中国诗歌朗诵的教员、音乐学院声乐专业的学生等)。其年龄范围为19到65岁且由两名男性和八名女性组成。2)给药方法

每天三次给予，每片含100mg2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸的片剂(每次一片)。给药连续进行2—4周直到炎症(客观判断时)和声音障碍(主观和客观判断时)显示改善。3)评价方法

仍未建立通过声学分析来客观测量声音障碍程度的方法。同时，据说专搞声学的人们甚至在其正常情况下声带粘膜也发红。在这种情况下，评价治疗声音障碍的效果主要基于沙哑声音的改善程度(主观判断)和客观进行的听音检查，它借助于使用简接的候镜、动态镜等来客观地观察炎症(如，声带粘膜的红或肿)。

沙哑声音的程度分为以下四级。

3：很强

2：强

1：略有

0：没有

使用以上分类，按以下标准来评价治疗声音障碍的效果。

显著有效：在四周中沙哑声音的程度改善了三级。

有效：在四周中沙哑声音的程度改善了二级。

略有效：在四周中沙哑声音的程度改善了一级。

无效：沙哑的程度没有改善。4)结果

十名受试者中，三名显示有效；三名显示略有效；且没有显示无效的受试者。而且，没有因使用试验化合物而产生副作用。

Claims

1.一种白细胞介素—8生成、粒细胞粘附表达或粒细胞激活的抑制剂，它含有作为活性组分的通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐：

(其中R为卤原子；式：

侧链取代基的位置为喹诺酮骨架的3—或4—位；且喹诺酮骨架上3—和4—位间的碳—碳为单键或双键)。

2.权利要求1的抑制剂，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用的盐。

3.一种炎性皮肤病、自身免疫病、炎性肾脏病、炎性呼吸病、口炎或声带炎的预防或治疗剂，它含有作为有效成分的权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

4.权利要求3的预防或治疗剂，其中通式(1)所示的喹诺酮衍生物或其盐为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

5.一种由Helicobacter Pyroli感染引起的胃粘膜损伤的预防或治疗剂，它含有作为活性组分的权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

6.权利要求5的预防或治疗剂，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

7.一种人造器官或人造血管的生物相容性改善剂，它含有作为有效成分的权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

8.权利要求7的改善剂，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

9.一种贝切特疾病治疗剂，它含有作为活性组分的权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

10.权利要求9的治疗剂，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

11.一种口炎治疗剂，它含有作为活性组分的权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

12.权利要求11的治疗剂，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

13.一种肾脏疾病治疗剂，它含有作为活性组分的权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

14.权利要求13的治疗剂，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

15.一种声音障碍治疗剂，它含有作为活性组分的权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

16.权利要求15的治疗剂，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

17.抑制白细胞介素—8生成、抑制粒细胞粘附表达或抑制粒细胞激活的方法，它是给予通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐：

(其中R为卤原子；式

侧链取代基的位置为喹诺酮骨架的3—或4—位；且喹诺酮骨架中3—和4—位间的碳—碳键为单键或双键)。

18.权利要求17的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

19.预防或治疗炎性皮肤病、自身免疫病、炎性肾脏病、炎性呼吸病、口炎和声带炎的方法，它是给予权利要求17中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

20.权利要求19的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

21.预防或治疗因Helicobacter Pyroli感染引起的胃粘膜损伤的方法，它是给予权利要求17中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

22.权利要求21的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐是2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

23.改善人造器官或人造血管生物相容性的方法，它是给予权利要求17中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

24.权利要求23的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐是2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

25.权利要求19的方法，其中炎性皮肤病是炎性角化病(牛皮癣)。

26.权利要求25的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

27.权利要求19的方法，其中炎性皮肤病为特应性皮炎。

28.权利要求27的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

29.权利要求19的方法，其中炎性皮肤病是接触性皮炎。

30.权利要求29的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

31.权利要求19的方法，其中自身免疫疾病为类风湿性关节炎。

32.权利要求31的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

33.权利要求19的方法，其中自身免疫疾病为***性红斑狼疮(SLE)。

34.权利要求33的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

35.权利要求19的方法，其中自身免疫疾病为贝切特疾病。

36.权利要求35的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

37.权利要求19的方法，其中炎性肾脏疾病为肾小球肾炎。

38.权利要求37的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

39.权利要求19的方法，其中炎性呼吸***疾病为支气管炎。

40.权利要求39的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

41.治疗贝切特疾病的方法，它是给予权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

42.权利要求41的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

43.治疗口炎的方法，它是给予权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

44.权利要求43的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

45.治疗肾炎的方法，它是给予权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

46.权利要求45的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。

47.治疗声音障碍的方法，它是给予权利要求1中通式(I)所示的喹诺酮衍生物或其盐。

48.权利要求47的方法，其中通式(I)所示的喹诺酮衍生物为2—(4—氯苯甲酰基氨基)—3—(2—喹诺酮—4—基)丙酸或其可药用盐。