CN111163798A - 用于抗lag-3抗体的给药方案及其用途 - Google Patents

用于抗lag-3抗体的给药方案及其用途 Download PDF

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Abstract

公开了与LAG‑3特异性结合的抗体分子的剂量方案。该抗体分子可以用来治疗或预防癌性或传染性病状和疾病。

Description

用于抗LAG-3抗体的给药方案及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年7月20日提交的美国临时申请号62/534,798和2018年3月16日提交的美国临时申请号62/643,992的权益。前述申请的内容因而通过引用的方式完整并入。
序列表
本申请含有已经通过电子方式以ASCII格式提交并因而通过引用方式完整并入的序列表。所述ASCII拷贝创建于2018年7月17日，命名为C2160-7019WO_SL.txt，并且大小为233.727字节。
背景技术
淋巴细胞活化基因-3或LAG-3(也称作CD223)是免疫球蛋白超基因家族的成员并且在以下细胞上表达：活化的T细胞(Huard等人(1994)Immunogenetics 39:213)、NK细胞(Triebel等人(1990)J.Exp.Med.171:1393-1405)、调节型T细胞(Huang等人(2004)Immunity 21:503-513；Camisaschi等人(2010)J Immunol.184:6545-6551；Gagliani等人(2013)Nat Med 19:739-746)和浆细胞样树状细胞(DCs)(Workman等人(2009)J Immunol182:1885-1891)。LAG-3是位于第12号染色体上的基因编码的膜蛋白并且在结构和遗传上与CD4相关。
类似于CD4，LAG-3可以与细胞表面上的MHC II类分子相互作用(Baixeras等人(1992)J.Exp.Med.176:327-337；Huard等人(1996)Eur.J.Immunol.26:1180-1186)。已经提出LAG-3与MHC II类的直接结合在下调CD4+ T淋巴细胞的抗原依赖性刺激作用中发挥作用(Huard等人(1994)Eur.J.Immunol.24:3216-3221)并且还已经显示LAG-3阻断作用使肿瘤或自身抗原模型(Gross等人(2007)J Clin Invest.117:3383-3392)和病毒模型(Blackburn等人(2009)Nat.Immunol.10:29-37)中的CD8+淋巴细胞复生。另外，LAG-3的胞质内区域可以与LAP(LAG-3相关蛋白)相互作用，所述LAP是参与CD3/TCR活化途径下调的信号转导分子(Iouzalen等人(2001)Eur.J.Immunol.31:2885-2891)。另外，已经显示活化时CD4+CD25+调节型T细胞(Treg)表达LAG-3，这促成Treg细胞的阻抑活性(Huang,C.等人(2004)Immunity 21:503-513)。LAG-3还可以通过Treg细胞以T细胞依赖性和非依赖性机制负向调节T细胞稳态(Workman,C.J.和Vignali,D.A.(2005)J.Immunol.174:688-695)。
因此，需要调节LAG-3功能和表达LAG-3的细胞的功能的新治疗方案，包括抗LAG-3抗体分子的给药方案和制剂，以治疗疾病，如癌症。
发明简述
本文至少部分地公开了以高亲和力和特异性与淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)结合的抗体分子(例如，人源化抗体分子)。还提供了包含抗LAG-3抗体分子的药物组合物和剂量制剂。本文公开的抗LAG-3抗体分子可以(单独或联合其他治疗药、程序或模式)用来治疗或预防疾病，如癌疾病(例如，实体瘤和血液癌症)以及传染性疾病(例如，慢性传染病或败血症)。因此，本文公开了使用抗LAG-3抗体分子治疗多种疾病的方法，包括给药方案。在某些实施方案中，按***(flat)剂量或固定剂量施用或使用抗LAG-3抗体分子。
因此，在一个方面，本公开以一种治疗受试者中(例如，抑制、减少、缓解或预防)疾病(例如，过度增生性病状或疾病(例如，癌症))的方法为特征。
在某些实施方案中，该方法包括将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)按约300mg至约500mg、约500mg至约700mg或约700mg至约900mg的剂量每三周一次或每四周一次向受试者施用。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg的剂量每三周一次或每四周一次施用。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至约700mg的剂量每三周一次或每四周一次施用。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至约900mg的剂量每三周一次或每四周一次施用。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg、约500mg至约700mg或约700mg至约900mg的剂量每三周一次施用。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg、约500mg至约700mg或约700mg至约900mg的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg，例如，约350mg至约450mg、约300mg至约400mg或约400mg至约500mg，例如，约300mg、约350mg、约400mg、约450mg或约500mg的剂量每三周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约350mg至约450mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至约700mg，例如，约550mg至约650mg、约500mg至约600mg或约600mg至约700mg，例如，约500mg、约533mg、约550mg、约600mg、约650mg或约700mg的剂量每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至约650mg，例如，约533mg或约600mg的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至约900mg，例如，约750mg至约850mg、约700mg至约800mg或约800mg至约900mg，例如，约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg的剂量每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约750mg至约850mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按导致以下一种或两种情况的剂量或给药方案施用：
(a)受试者中(例如，血液中)50％或更多(例如，60％或更多、70％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多、99％或更多)的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合；或
(b)受试者中(例如，癌中)50％或更多(例如，60％或更多、70％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多、99％或更多)的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，在血液样品(例如，血清样品或血浆样品)中测定抗LAG-3抗体分子与可溶性LAG-3的结合。在一些实施方案中，在癌(例如，癌样品)中测定抗LAG-3抗体分子与膜结合型LAG-3的结合。
在一些实施方案中，当受试者具有抗LAG-3抗体分子的稳态谷浓度时测定抗LAG-3抗体分子与可溶性LAG-3的结合、抗LAG-3抗体分子与膜结合型LAG-3的结合或这两种结合。在一些实施方案中，谷浓度是在施用后约24周的抗LAG-3抗体分子的浓度，或在施用下一剂之前抗LAG-3抗体分子达到的最低浓度。在一些实施方案中，测定(例如，在体外(例如，通过ELISA或基于细胞的测定法)或体内(例如，通过成像法)测量)或从PK/PD模型(例如，本文所述的PK/PD模型)预测抗LAG-3抗体分子与可溶性LAG-3的结合、抗LAG-3抗体分子与膜结合型LAG-3的结合或这两种结合。
在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中60％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中80％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中90％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，来自受试者的癌或癌样品中85％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的癌或癌样品中95％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中的70％或更多、80％或更多、或90％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中85％或更多、90％或更多、或95％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中的70％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中的80％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中的90％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约800mg，例如，约300mg至约500mg(例如，约400mg)或约600mg至约800mg(例如，约700mg)的剂量每三周一次施用。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约600mg至约1600mg，例如，约600mg至约1000mg(例如，约800mg)或约1200mg至约1600mg(例如，约1400mg)的剂量每四周一次施用。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约600mg至约1000mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按降低以下一种或两种水平的剂量或给药方案施用：
(a)降低受试者(例如，血液)中非占据(free)可溶性LAG-3水平，例如，至非占据可溶性LAG-3参考水平的50％或更小(例如，40％或更小、30％或更小、20％或更小、15％或更小、10％或更小、5％或更小、或1％或更小)；或
(b)降低受试者(例如，癌)中非占据膜结合型LAG-3水平，例如，至膜结合型LAG-3参考水平的50％或更小(例如，40％或更小、30％或更小、20％或更小、15％或更小、10％或更小、5％或更小、或1％或更小)。
在一些实施方案中，在血液样品(例如，血清样品或血浆样品)中测定非占据可溶性LAG-3的水平。在一些实施方案中，非占据可溶性LAG-3的参考水平是例如，在(例如根据给药方案)施用抗LAG-3抗体分子之前，受试者中非占据可溶性LAG-3的基线水平。
在一些实施方案中，在癌(例如，癌样品)中测定非占据膜结合型LAG-3的水平。在一些实施方案中，非占据膜结合型LAG-3的参考水平是例如在(例如根据给药方案)施用抗LAG-3抗体分子之前，受试者中非占据膜结合型LAG-3的基线水平。
在一些实施方案中，当受试者具有抗LAG-3抗体分子的稳态谷浓度时测定非占据可溶性LAG-3的水平、非占据膜结合型LAG-3的水平或这两种水平。在一些实施方案中，谷浓度是在施用后约24周的抗LAG-3抗体分子的浓度，或在施用下一剂之前抗LAG-3抗体分子达到的最低浓度。在一些实施方案中，测定(例如，在体外(例如，通过ELISA或基于细胞的测定法)或体内(例如，通过成像法)测量)或从PK/PD模型(例如，本文所述的PK/PD模型)预测非占据可溶性LAG-3的水平、非占据膜结合型LAG-3的水平或这两种水平。
在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的参考水平的30％或更小。在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的参考水平的20％或更小。在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的参考水平的10％或更小。
在一些实施方案中，将非占据膜结合型LAG-3的水平降低到来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的参考水平的15％或更小。在一些实施方案中，将非占据膜结合型LAG-3的水平降低到来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的参考水平的5％或更小。
在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的参考水平的30％或更小、20％或更小、或10％或更小，并且将非占据膜结合型LAG-3的水平降低到来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的参考水平的15％或更小、10％或更小、或5％或更小。
在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的参考水平的30％或更小，并且将非占据膜结合型LAG-3的水平降低到来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的参考水平的20％或更小，并且将非占据膜结合型LAG-3的水平降低到来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将非占据可溶性LAG-3的水平降低到来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的参考水平的10％或更小，并且将非占据膜结合型LAG-3的水平降低到来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约800mg，例如，约300mg至约500mg(例如，约400mg)或约600mg至约800mg(例如，约700mg)的剂量每三周一次施用。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约600mg至约1600mg，例如，约600mg至约1000mg(例如，约800mg)或约1200mg至约1600mg(例如，约1400mg)的剂量每四周一次施用。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约600mg至约1000mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，疾病是癌症，例如，本文所述的癌症。在某些实施方案中，所述癌是实体瘤。在一些实施方案中，癌是脑肿瘤，例如，胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤或复发性脑肿瘤。在一些实施方案中，癌是胰腺癌，例如，晚期胰腺癌。在一些实施方案中，癌是皮肤癌，例如，黑素瘤(例如，II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌。在一些实施方案中，癌是肾癌，例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性肾细胞癌)。在一些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，癌是病毒相关的癌。在一些实施方案中，癌是肛管癌(例如，肛管鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌或胃癌或胃食管结合部癌)。在一些实施方案中，癌是头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))。在一些实施方案中，癌是鼻咽癌(NPC)。在一些实施方案中，癌是***癌(例如，***鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是结直肠癌，例如，复发结直肠癌或转移性结直肠癌，例如，微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌。在一些实施方案中，癌是肺癌，例如，非小细胞肺癌(NSCLC)。在某些实施方案中，癌是血液学癌。在一些实施方案中，癌是白血病。在一些实施方案中，癌是淋巴瘤，例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，复发性或难治性HL或DLBCL)。在一些实施方案中，癌是骨髓瘤。
在其他实施方案中，癌是MSI高癌。在一些实施方案中，癌是转移性癌。在其他实施方案中，癌是晚期癌。在其他实施方案中，癌是复发性或难治性癌。在其他实施方案中，癌是复发性癌。
在一些实施方案中，通过注射(例如，静脉内或皮下)，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)、约500mg至约700mg(例如，约533mg或约600mg)或约700mg至约900mg(例如，约800mg)的剂量(例如，***剂量)施用。给药方案(例如，***给药方案)可以例如从每三周一次至每四周一次变动。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次静脉内施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至700mg(例如，约533mg或约600mg)的剂量每四周一次静脉内施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至900mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次静脉内施用。
在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约400mg的剂量每三周一次静脉内施用，以治疗本文公开的癌症。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约533mg或600mg的剂量每四周一次静脉内施用，以治疗本文公开的癌症。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约800mg的剂量每四周一次静脉内施用，以治疗本文公开的癌症。
在一个实施方案中，该方法还包括向受试者施用PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)或PD-L1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子)。在一些实施方案中，将PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)按约200mg至约400mg(例如，约300mg)剂量每三周一次静脉内施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)连同抗PD-1抗体分子一起，按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次向受试者施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，并且将PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)连同抗PD-1抗体分子一起，按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周一次向受试者施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)按约600mg至约1000mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用，并且将PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周一次施用。在一个实施方案中，该方法包括向受试者施用抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)和化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))。在一个实施方案中，将化疗药(例如，铂剂，例如，卡铂)静脉内按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的剂量每三周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，并且将化疗药(例如，铂剂，例如，卡铂)按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的剂量每三周一次施用。
在一个实施方案中，该方法包括向受试者施用抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)、PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)和化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，将PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用，并且将化疗药(例如，铂剂，例如，卡铂)按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的剂量每三周一次施用。
在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)或包含抗LAG-3抗体分子(例如，与PD-1抑制剂或化疗药中一者或两者组合的抗LAG-3抗体分子)的组合，用来例如根据本文所述的给药方案治疗乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。
在某些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者尚未用PD-1或PD-L1疗法治疗过。在其他些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者已用PD-1或PD-L1疗法治疗过。
在某些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者尚未用化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))治疗过。在其他实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者已经用化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))治疗过。
在其他实施方案中，受试者具有或经鉴定为具有肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)中的LAG-3表达。
在另一个方面，本公开以一种减少过度增生性(例如，癌)细胞的活性(例如，生长、存活、或活力或全部)的方法为特征。该方法包括使细胞与抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)接触。可以将该方法在受试者中例如作为治疗方案的部分进行，例如，按约300mg至约500mg(例如，约400mg)、约500mg至约700mg(例如，约533mg或约600mg)或约700mg至约900mg(例如，约800mg)抗LAG-3抗体分子的剂量每三周一次或每四周一次进行。在某些实施方案中，剂量是约300mg至约500mg(例如，约400mg)抗LAG-3抗体分子，每三周一次。在其他实施方案中，剂量是约500mg至约700mg(例如，约533mg或约600mg)抗LAG-3抗体分子，每四周一次。在其他实施方案中，剂量是约700mg至约900mg(例如，约800mg)抗LAG-3抗体分子，每四周一次。
癌细胞可以例如是来自本文所述癌的细胞，如实体瘤或血液学癌，例如，脑肿瘤(例如，胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤、或复发性脑肿瘤)、胰腺癌(例如，晚期胰腺癌)、皮肤癌(例如，黑素瘤(例如，II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌)、肾癌(例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性肾细胞癌))、乳腺癌(例如，转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC))、病毒相关的癌、肛管癌(例如，肛管鳞状细胞癌)、***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)、胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌、或胃癌或胃食管结合部癌)、头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))、鼻咽癌(NPC)、***癌(例如，***鳞状细胞癌)、***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)、结直肠癌(例如，复发结直肠癌或转移性结直肠癌，例如，微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌)、肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC))、白血病，淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，例如，复发性或难治性HL或DLBCL)或骨髓瘤。
在某些实施方案中，所述癌是实体瘤。在一些实施方案中，癌是脑肿瘤，例如，胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤或复发性脑肿瘤。在一些实施方案中，癌是胰腺癌，例如，晚期胰腺癌。在一些实施方案中，癌是皮肤癌，例如，黑素瘤(例如，II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌。在一些实施方案中，癌是肾癌，例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性肾细胞癌)。在一些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，癌是病毒相关的癌。在一些实施方案中，癌是肛管癌(例如，肛管鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌或胃癌或胃食管结合部癌)。在一些实施方案中，癌是头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))。在一些实施方案中，癌是鼻咽癌(NPC)。在一些实施方案中，癌是***癌(例如，***鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是结直肠癌，例如，复发结直肠癌或转移性结直肠癌，例如，微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌(mismatchrepair proficient colorectal cancer)或错配修复缺陷型结直肠癌。在一些实施方案中，癌是肺癌，例如，非小细胞肺癌(NSCLC)。在某些实施方案中，癌是血液学癌。在一些实施方案中，癌是白血病。在一些实施方案中，癌是淋巴瘤，例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，复发性或难治性HL或DLBCL)。在一些实施方案中，癌是骨髓瘤。
在某些实施方案中，该方法还包括使细胞与PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)或化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))中的一者或两者接触。可以将该方法在受试者中例如作为治疗方案的部分进行，例如，按约300mg至约500mg(例如，约400mg)抗LAG-3抗体分子的剂量每三周一次和按约200mg至约400mg(例如，约300mg)PD-1抑制剂的剂量每三周一次进行。可以将该方法在受试者中例如作为治疗方案的部分进行，例如，按约600mg至约1000mg(例如，约800mg)抗LAG-3抗体分子的剂量每四周一次和按约300mg至约500mg(例如，约400mg)PD-1抑制剂的剂量每四周一次进行。可以将该方法在受试者中例如作为治疗方案的部分进行，例如，按约300mg至约500mg(例如，约400mg)抗LAG-3抗体分子的剂量每三周一次和按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的化疗药剂量每三周一次进行。可以将该方法在受试者中例如作为治疗方案的部分进行，例如，按约300mg至约500mg(例如，约400mg)抗LAG-3抗体分子的剂量每三周一次、按约200mg至约400mg(例如，约300mg)PD-1抑制剂的剂量每三周一次和按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的化疗药剂量每三周一次进行。在一些实施方案中，癌细胞可以例如是乳腺癌细胞，例如，TNBC细胞。在本文所公开方法的某些实施方案中，方法还包括确定受试者中肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)内的LAG-3表达水平。在其他实施方案中，在获自受试者的样品(例如，肿瘤活检样品)中(例如，使用免疫组织化学)测定LAG-3表达的水平。在某些实施方案中，当受试者中存在可检出水平或升高水平的LAG-3时，施用抗LAG-3抗体分子(例如，响应于受试者中可检出水平或升高水平的LAG-3，施用抗LAG-3抗体分子)。检测步骤也可以例如用来监测本文所述的治疗药的有效性。例如，检测步骤可以用来监测抗LAG-3抗体分子的有效性。
在另一个方面，本公开以一种组合物(例如，一种或多种组合物或剂型)为特征，所述组合物包含抗LAG-3抗体分子(例如，如本文所述的抗LAG-3抗体分子)。本文还描述了包含抗LAG-3抗体分子(例如，如本文所述的抗LAG-3抗体分子)的制剂(例如，给药制剂)和试剂盒(例如，治疗用试剂盒)。在某些实施方案中，组合物或制剂包含约300mg至约500mg(例如，约400mg)、约500mg至约700mg(例如，约533mg或约600mg)或约700mg至约900mg(例如，约800mg)的抗LAG-3抗体分子(例如，如本文所述的抗LAG-3抗体分子)。在一些实施方案中，将组合物或制剂每三周一次或每四周一次施用或使用。在一些实施方案中，组合物或制剂包含约400mg抗LAG-3抗体分子(例如，如本文所述的抗LAG-3抗体分子)，并且每三周一次施用或使用。在一些实施方案中，组合物或制剂包含约533mg或600mg抗LAG-3抗体分子(例如，如本文所述的抗LAG-3抗体分子)，并且每四周一次施用或使用。在一些实施方案中，组合物或制剂包含约800mg抗LAG-3抗体分子(例如，如本文所述的抗LAG-3抗体分子)，并且每四周一次施用或使用。在某些实施方案中，组合物或制剂用来治疗癌症，例如，本文公开的癌症。
本文所述的方法、组合物、给药制剂和试剂盒的附加特征或实施方案包括以下一个或多个。
针对LAG-3的抗体分子
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个五个或六个互补决定区(CDR)(或总体上全部CDR)，所述重链可变区和轻链可变区包含表5中所示(例如，来自表5中公开的BAP050-克隆I或BAP050-克隆J的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表5中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据Kabat定义(例如，如表5中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据Chothia定义(例如，如表5中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据(例如，如表5中所述的)Kabat和Chothia的联合CDR定义限定CDR。在一个实施方案中，VH CDR1的Kabat和Chothia CDR组合包含氨基酸序列GFTLTNYGMN(SEQ ID NO:766)。在一个实施方案中，相对于表5中所示的或由表5中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换(例如，保守性氨基酸置换)或缺失。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:702的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:703的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:710的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:711的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:712的氨基酸序列的VLCDR3，其各自在表5中公开。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含由SEQ ID NO:736或737的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:738或739的核苷酸序列编码的VHCDR2和由SEQ ID NO:740或741的核苷酸序列编码的VHCDR3；所述VL包含由SEQ ID NO:746或747的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ ID NO:748或749的核苷酸序列编码的VLCDR2和由SEQ IDNO:750或751的核苷酸序列编码的VLCDR3，其各自在表5中公开。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含由SEQ ID NO:758或737的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:759或739的核苷酸序列编码的VHCDR2和由SEQ ID NO:760或741的核苷酸序列编码的VHCDR3；所述VL包含由SEQ ID NO:746或747的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ IDNO:748或749的核苷酸序列编码的VLCDR2和由SEQ ID NO:750或751的核苷酸序列编码的VLCDR3，其各自在表5中公开。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列或与SEQ ID NO:706具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列或与SEQ ID NO:718具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:724的氨基酸序列或与SEQ IDNO:724具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:730的氨基酸序列或与SEQ ID NO:730具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:724的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:730的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:707或708的核苷酸序列或与SEQ ID NO:707或708具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:719或720的核苷酸序列或与SEQ ID NO:719或720具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:725或726的核苷酸序列或与SEQID NO:725或726具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:731或732的核苷酸序列或与SEQ IDNO:731或732具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:707或708的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:719或720的核苷酸序列编码的VL。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:725或726的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:731或732的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:709的氨基酸序列或与SEQ ID NO:709具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:721的氨基酸序列或与SEQ ID NO:721具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:727的氨基酸序列或与SEQ ID NO:727具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:733的氨基酸序列或与SEQ ID NO:733具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:709的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:721的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:727的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:733的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:716或717的核苷酸序列或与SEQ ID NO:716或717具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:722或723的核苷酸序列或与SEQ ID NO:722或723具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:728或729的核苷酸序列或与SEQ ID NO:728或729具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:734或735的核苷酸序列或与SEQ ID NO:734或735具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:716或717的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:722或723的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:728或729的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:734或735的核苷酸序列编码的轻链。
其他示例性LAG-3抑制剂
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)，也称作BMS986016。WO 2015/116539和US9,505,839中公开了BMS-986016和其他抗LAG-3抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含BMS-986016的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表6中公开。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是TSR-033(Tesaro)。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含TSR-033的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是IMP731或GSK2831781(GSK和PrimaBioMed)。WO 2008/132601和US 9,244,059中公开了IMP731和其他抗LAG-3抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含IMP731的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表6中公开。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含GSK2831781的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是IMP761(Prima BioMed)。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含IMP761的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
其他已知的抗LAG-3抗体包括例如在WO 2008/132601、WO 2010/019570、WO 2014/140180、WO 2015/116539、WO 2015/200119、WO 2016/028672、US 9,244,059、US 9,505,839中描述的那些，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体是这样的抗体，其与如本文所述的抗LAG-3抗体之一竞争结合LAG-3上的相同表位和/或与其竞争结合于所述表位之上。
在一个实施方案中，抗LAG-3抑制剂是可溶性LAG-3蛋白，例如，IMP321(PrimaBioMed)，例如，如WO 2009/044273中公开，所述文献通过引用的方式完整并入。
制剂
可以将本文所述的抗LAG-3抗体分子配制成适于施用(例如，静脉内施用)至如本文所述的受试者的制剂(例如，剂量制剂或剂型)。本文所述的制剂可以是液态制剂、冻干制剂或复溶制剂(reconstituted formulation)。
在某些实施方案中，制剂是液态制剂。在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)和缓冲剂。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以25mg/mL至250mg/mL，例如，50mg/mL至200mg/mL、60mg/mL至180mg/mL、70mg/mL至150mg/mL、80mg/mL至120mg/mL、90mg/mL至110mg/mL、50mg/mL至150mg/mL、50mg/mL至100mg/mL、150mg/mL至200mg/mL或100mg/mL至200mg/mL，例如，50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL或150mg/mL的浓度存在的抗LAG-3抗体分子。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子以80mg/mL至120mg/mL，例如，100mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含缓冲剂，所述缓冲剂包含组氨酸(例如，组氨酸缓冲剂)。在某些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以1mM至100mM，例如，2mM至50mM、5mM至40mM、10mM至30mM、15至25mM、5mM至40mM、5mM至30mM、5mM至20mM、5mM至10mM、40mM至50mM、30mM至50mM、20mM至50mM、10mM至50mM或5mM至50mM，例如，2mM、5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM的浓度存在。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度存在。在其他实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)或制剂具有4至7，例如，5至6，例如，5、5.5或6的pH。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)或制剂具有5至6，例如，5.5的pH。在某些实施方案中，缓冲剂以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH。在某些实施方案中，缓冲剂包括组氨酸和HCl组氨酸。
在一些实施方案中，在5至6(例如，5.5)的pH，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；和以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂的缓冲剂。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)还包含碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物是蔗糖。在一些实施方案中，碳水化合物(例如，蔗糖)以50mM至500mM，例如，100mM至400mM、150mM至300mM、180mM至250mM、200mM至240mM、210mM至230mM、100mM至300mM、100mM至250mM、100mM至200mM、100mM至150mM、300mM至400mM、200mM至400mM或100mM至400mM，例如，100mM、150mM、180mM、200mM、220mM、250mM、300mM、350mM或400mM的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
在一些实施方案中，在5至6(例如，5.5)的pH，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂的缓冲剂；和以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)还包含表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，表面活性剂或聚山梨醇酯20以0.005％至0.1％(w/w)，例如，0.01％至0.08％、0.02％至0.06％、0.03％至0.05％、0.01％至0.06％、0.01％至0.05％、0.01％至0.03％、0.06％至0.08％、0.04％至0.08％或0.02％至0.08(％w/w))，例如，0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/w)的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以0.03％至0.05％(例如，0.04％)的浓度(w/w)存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，在5至6(例如，5.5)的pH，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂的缓冲剂；以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖和以0.03％至0.05％(例如，0.04％(w/w))的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，在5至6(例如，5.5)的pH，制剂(例如，液态制剂)包含以100mg/mL的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以20mM的浓度包含组氨酸缓冲剂(例如，组氨酸/HCL组氨酸)的缓冲剂；以220mM的浓度存在的碳水化合物或蔗糖，和以0.04％(w/w)的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
本文所述的制剂可以储存在容器中。用于本文所述的任何制剂的容器可以例如包括小瓶，和任选地，瓶塞、盖或这两者。在某些实施方案中，小瓶是玻璃小瓶，例如，6R白色玻璃小瓶。在其他实施方案中，瓶塞是橡胶瓶塞，例如，灰色橡胶瓶塞。在其他实施方案中，盖是钳口盖(flip-off cap)，例如，铝钳口盖。在一些实施方案中，容器包括6R白色玻璃小瓶、灰色橡胶瓶塞和铝钳口盖。在一些实施方案中，容器(例如，小瓶)是一次性使用容器。在某些实施方案中，25mg/mL至250mg/mL，例如，50mg/mL至200mg/mL、60mg/mL至180mg/mL、70mg/mL至150mg/mL、80mg/mL至120mg/mL、90mg/mL至110mg/mL、50mg/mL至150mg/mL、50mg/mL至100mg/mL、150mg/mL至200mg/mL或100mg/mL至200mg/mL，例如，50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL或150mg/mL的抗LAG-3抗体分子存在于容器(例如，小瓶)中。
在另一个方面，本公开以治疗用试剂盒为特征，所述治疗用试剂盒包含本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物或制剂，和例如，根据本文所述给药方案使用的说明。
治疗性用途
本文所述的抗LAG-3抗体分子可以抑制、减少或中和LAG-3的一种或多种活性，导致阻断或减少免疫检查点。因此，本文所述的抗LAG-3抗体分子可以用来治疗或预防疾病(例如，癌症)，其中需要在受试者中增强免疫应答。
因此，在另一个方面，提供一种调节受试者中免疫应答的方法。该方法包括根据本文所述的给药方案，向受试者施用单独或与一种或多种治疗药、程序或模式组合的本文所述的抗LAG-3抗体分子，从而调节受试者中的免疫应答。在一个实施方案中，抗体分子增强、刺激或增加受试者中的免疫应答。受试者可以是哺乳动物，例如，灵长类，优选地，高级灵长类，例如，人类(例如，患有本文所述疾病或面临患有前述疾病的风险的患者)。在一个实施方案中，受试者需要增强免疫应答。在一个实施方案中，受试者患有本文所述疾病(例如，如本文所述的癌症或感染性疾病)或面临患有本文所述疾病的风险。在某些实施方案中，受试者免疫受损或面临免疫受损风险。例如，受试者接受或已经接受过化疗治疗和/或放射疗法。备选地或组合下，受试者因感染而免疫受损或面临因感染而免疫受损的风险。
在一个方面，提供一种治疗(例如，如下一种或多种情况：减少、抑制或延迟其进展)受试者中癌症或肿瘤的方法。该方法包括根据本文所述的给药方案，向受试者施用单独或与一种或多种治疗药、程序或模式组合的本文所述的抗LAG-3抗体分子。
在某些实施方案中，用抗LAG-3抗体分子治疗的癌，包括但不限于实体瘤，血液学癌(例如，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤，例如，多发性骨髓瘤)和转移性病灶。在一个实施方案中，癌是实体瘤。实体瘤的实例包括恶性肿瘤，例如，肉瘤和癌，例如，多种器官***的腺癌，如那些影响肺、***、卵巢、淋巴样、胃肠道(例如，结肠)、***、生殖器和生殖泌尿道(例如，肾、尿路上皮、膀胱细胞、***)、咽、CNS(例如，脑、神经细胞或神经胶质细胞)、头颈部、皮肤(例如，黑素瘤)和胰脏的腺癌，以及这样的腺癌，其包括恶性肿瘤如结肠癌、直肠癌、肾癌(例如，肾细胞癌(透明细胞或非透明细胞肾细胞癌))、肝癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌(鳞状或非鳞状非小细胞肺癌))、小肠癌和食道癌。癌可以处于早期、中期或晚期或是转移性癌。
在一个实施方案中，癌症选自肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，伴有鳞状和/或非鳞状结构的NSCLC，或NSCLC腺癌)或小细胞肺癌(SCLC))、皮肤癌(例如，Merkel细胞癌或黑素瘤(例如，晚期黑素瘤))、卵巢癌、间皮瘤、膀胱癌、软组织肉瘤(例如，血管外皮细胞瘤(HPC))、骨癌(骨肉瘤)、肾癌(例如，肾癌(例如，肾细胞癌))、肝癌(例如，肝细胞癌)、胆管癌、肉瘤、脊髓发育不良综合征(MDS)、***癌、乳腺癌(例如，不表达***受体、孕酮受体或Her2/neu中一者、两者或全部的乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌)、结直肠癌、鼻咽癌、十二指肠癌、子宫内膜癌、胰腺癌、头颈癌(例如，头颈鳞状细胞癌(HNSCC))、***癌、胃-食管癌、甲状腺癌(例如，间变性甲状腺癌)、***、神经内分泌肿瘤(NET)(例如，非典型肺的类癌瘤)、淋巴细胞增生病(例如，移植后淋巴细胞增生病)、淋巴瘤(例如，T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)或白血病(例如，髓样白血病或淋巴样白血病)。
在某些实施方案中，所述癌是实体瘤。在一些实施方案中，癌是脑肿瘤，例如，胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤或复发性脑肿瘤。在一些实施方案中，癌是胰腺癌，例如，晚期胰腺癌。在一些实施方案中，癌是皮肤癌，例如，黑素瘤(例如，II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌。在一些实施方案中，癌是肾癌，例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性肾细胞癌)。在一些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，癌是病毒相关的癌。在一些实施方案中，癌是肛管癌(例如，肛管鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌或胃癌或胃食管结合部癌)。在一些实施方案中，癌是头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))。在一些实施方案中，癌是鼻咽癌(NPC)。在一些实施方案中，癌是***癌(例如，***鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是结直肠癌，例如，复发结直肠癌或转移性结直肠癌，例如，微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌。在一些实施方案中，癌是肺癌，例如，非小细胞肺癌(NSCLC)。
在某些实施方案中，癌是血液学癌。在一些实施方案中，癌是白血病。在一些实施方案中，癌是淋巴瘤，例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，复发性或难治性HL或DLBCL)。在一些实施方案中，癌是骨髓瘤
在另一个实施方案中，癌症选自癌(例如，晚期或转移性癌)、黑素瘤或肺癌，例如，非小细胞肺癌。在一个实施方案中，癌是肺癌，例如，非小细胞肺癌或小细胞肺癌。在一些实施方案中，非小细胞肺癌是I期(例如，Ia或Ib期)、II期(例如，IIa或IIb期)、III期(例如，IIIa或IIIb期)或IV期非小细胞肺癌。在一个实施方案中，癌是黑素瘤，例如，晚期黑素瘤。在一个实施方案中，癌是对其他治疗药无反应的晚期或不可切除性黑素瘤。在其他实施方案中，癌是具有BRAF突变(例如，BRAF V600突变)的黑素瘤。在另一个实施方案中，癌是肝癌，例如，晚期肝癌，伴随或未伴随病毒性感染，例如，慢性病毒性肝炎。在另一个实施方案中，癌是***癌，例如，晚期***癌。在又一个实施方案中，癌是骨髓瘤，例如，多发性骨髓瘤。在又一个实施方案中，癌是肾癌，例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性RCC、非透明细胞肾细胞癌(nccRCC)或透明细胞肾细胞癌(CCRCC))。
在一个实施方案中，癌微环境具有升高水平的LAG-3表达。在一个实施方案中，癌微环境具有升高水平的PD-L1表达。备选地或组合地，癌微环境可以具有增加的IFNγ和/或CD8表达。
在一些实施方案中，受试者具有或经鉴定具有以下一种或多种情况：高PD-L1水平或表达的肿瘤，或经鉴定为具有肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)+(例如，具有数目增加的TIL)或前述两种情况。在某些实施方案中，受试者患有或被鉴定为患有高PD-L1水平或表达并且呈TIL+的肿瘤。在一些实施方案中，本文所述的方法进一步包括基于患有下述肿瘤而鉴定受试者，其中所述肿瘤具有以下一种或多种情况：高PD-L1水平或表达，或呈TIL+，或前述两种情况。在某些实施方案中，本文所述的方法进一步包括基于患有高PD-L1水平或表达的肿瘤且呈TIL+鉴定受试者。在一些实施方案中，TIL+的肿瘤为CD8和IFNγ阳性。在一些实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有高百分数的对PD-L1、CD8和/或IFNγ中一者、两者或更多者为阳性的细胞。在某些实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有高百分数的对PD-L1、CD8和IFNγ均为阳性的细胞。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括基于具有高百分数的对PD-L1、CD8和/或IFNγ中一者、两者或更多者为阳性的细胞，鉴定受试者。在某些实施方案中，本文所述的方法还包括基于具有高百分数的对PD-L1、CD8和IFNγ全部为阳性的细胞，鉴定受试者。在一些实施方案中，受试者具有或经鉴定为具有PD-L1、CD8和/或IFNγ中一者、两者或更多者，并且患有或经鉴定患有以下一种或多种癌：肺癌，例如，鳞状细胞肺癌或肺腺癌(例如，NSCLC)；头颈癌；鳞状细胞***；胃癌；食管癌；甲状腺癌(例如，间变性甲状腺癌)；皮肤癌(例如，Merkel细胞癌或黑素瘤)、乳腺癌(例如，TNBC)和/或鼻咽癌(NPC)。在某些实施方案中，本文所述的方法进一步描述基于具有PD-L1、CD8、和/或IFNγ中一者或多者及患有肺癌，例如，鳞状细胞肺癌或肺腺癌(例如，NSCLC)；头颈癌；鳞状细胞***；胃癌；甲状腺癌(例如，间变性甲状腺癌)；皮肤癌(例如，Merkel细胞癌或黑素瘤)、神经内分泌肿瘤，乳腺癌(例如，TNBC)、和/或鼻咽癌中一者或多者，鉴定受试者。
本文公开的方法、组合物和制剂可用于治疗与前述癌症相关的转移性病灶。
在又一个方面，本公开提供一种治疗受试者中传染性疾病(例如，本文所述的传染性疾病)的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案，向受试者施用本文所述的抗LAG-3抗体分子。
仍然进一步，本发明提供一种增强受试者中针对抗原的免疫应答的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案，向受试者施用：(i)抗原；和(ii)抗LAG-3抗体分子，从而增强受试者中针对抗原的免疫应答。抗原可以例如是肿瘤抗原、病毒抗原、细菌性抗原或来自病原体的抗原。
可以向受试者全身性(例如，经口、肠胃外、皮下、静脉内、直肠的、肌内、腹腔内、鼻内、透皮或通过吸入或腔内滴注)、局部或通过施加至粘膜如鼻、咽喉和支气管，施用本文所述的抗LAG-3抗体分子。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按本文所述的***剂量静脉内施用。
组合疗法
本文所述的抗LAG-3抗体分子可以与其他治疗药、程序或模式组合使用。
在一个实施方案中，本文所述的方法包括以有效治疗或防止疾病的量，向受试者施用与治疗药、程序或模式组合的包含本文所述的抗LAG-3抗体分子的组合。在某些实施方案中，根据本文所述的给药方案施用或使用抗LAG-3抗体分子。在其他实施方案中，将抗体分子作为本文所述的组合物或制剂施用或使用。
可以将抗LAG-3抗体分子和治疗药、程序或模式同时地或以任何顺序依次施用或使用。可以使用抗LAG-3抗体分子和治疗药、程序或模式(例如，如本文所述)的任何组合和序列。可以在活动性疾病时间期间或在缓解或活动度更小的疾病时间期间施用或使用抗体分子和/或治疗药、程序或模式。抗体分子可以在治疗药、程序或模式治疗之前、与之同时或在其之后施用。
在某些实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与以下一者或多者组合施用：其他抗体分子、化疗、其他抗癌疗法(例如，靶向抗癌疗法、基因治疗、病毒治疗、RNA治疗骨髓移植、纳米疗法或溶瘤药物)、细胞毒药物、基于免疫的治疗药(例如，细胞因子或基于细胞的免疫治疗药)、外科手术(例如，肿块切除术或***切除术)或照射术或前述任一者的组合。额外的疗法可以为辅助疗法或新辅助疗法形式。在一些实施方案中，附加的疗法是酶抑制剂(例如，小分子酶抑制剂)或转移性抑制剂。可以组合施用的示例性细胞毒药物包括抗微管药物、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢药、有丝***抑制剂、烷基化剂、蒽环类、长春碱类生物碱、嵌入剂、能够干扰信号转导途径的药物、促凋亡药物、蛋白酶体抑制剂和照射(例如，局部或全身照射(例如，γ照射))。在其他实施方案中，额外的疗法是手术或辐射或其组合。在其他实施方案中，额外的疗法是靶向以下一者或多者的疗法：PI3K/AKT/mTOR途径、HSP90抑制剂或微管蛋白抑制剂。
备选地或与前述组合联合，本文所述的抗LAG-3抗体分子可以与以下一者或多者组合施用或使用：免疫调节剂(例如，共刺激分子的激活物或抑制性分子(例如，免疫检查点分子)的抑制剂)；疫苗，例如，治疗性癌疫苗；或其他形式的细胞免疫疗法。
在某些实施方案中，本文所述的抗LAG-3分子与共刺激分子或抑制性分子(例如，共抑制性配体或受体)的调节物组合施用或使用。
在一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与调节物(例如，共刺激分子激动物)组合施用或使用。在一个实施方案中，共刺激分子的激动物选自以下者的激动物(例如，激动性抗体或其抗原结合片段，或可溶性融合物)：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体。
在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与GITR激动剂(例如，抗GITR抗体分子)组合施用或使用。
在一个实施方案中，本文所述的抗LAG-3抗体分子与选自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG-3、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFβ的抑制性(或免疫检查点)分子的抑制剂组合施用或使用。在一个实施方案中，抑制剂是与PD-1、LAG-3、PD-L1、PD-L2或CTLA-4结合的可溶性配体(例如，CTLA-4-Ig)或者抗体或抗体片段。
在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与TIM-3抑制剂(例如，抗TIM-3抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与PD-L1抑制剂(例如，抗PD-L1抗体分子分子)组合施用或使用。
在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与化疗药组合施用或使用。在某些实施方案中，化疗药包括铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)。在某些实施方案中，化疗药包括顺铂、permetrexed或这两者。顺铂也称作顺铂(cisplatinum)、platamin、顺氯氨铂(neoplatin)、cismaplat或顺-双氯双氨络铂(II)(CDDP).Permetrxed也称作(S)-2-(4-(2-(2-氨基-4-氧代-4,7-二氢-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基)苯甲酰胺)戊二酸。在某些实施方案中，化疗药包括核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、阿糖胞苷、去氧氟尿苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、巯基嘌呤、甲氨蝶呤或tioguanine(硫鸟嘌呤))。在某些实施方案中，化疗药包括低甲基化药物(例如，地西他滨)。在一个实施方案中，化疗药包括纳米白蛋白结合型紫杉醇。
可以与抗LAG-3抗体分子组合使用的其他示例性化疗药包括但不限于烷基化剂(例如，双官能烷基化剂(例如，环磷酰胺、二氯甲二乙胺、苯丁酸氮芥、或美法仑))、单官能烷基化剂(例如，达卡巴嗪(DTIC)、亚硝基脲类或替莫唑胺(口服达卡巴嗪))、蒽环类(例如，佐柔比星、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌、或戊柔比星(valrubicin))、细胞骨架干扰物或紫杉烷(例如，紫杉醇、多西他赛、紫杉醇白蛋白(abraxane)或泰索帝)、环氧噻唑酮(epothilone)、组蛋白脱乙酰酶抑制剂(例如，伏立诺他(vorinostat)或罗米地辛)、拓扑异构酶I的抑制剂(例如，伊立替康或拓扑替康)、拓扑异构酶II的抑制剂(例如，依托泊苷、替尼泊苷或tafluposide)、激酶抑制剂(例如，硼替佐米、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、威罗菲尼或维莫德吉)、肽抗生素(例如，博来霉素或放线菌素D)、类视黄醇(例如，维甲酸(tretinoin)、阿利维甲酸或蓓萨罗丁)或长春碱类生物碱或其衍生物(例如，长春碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨)。
在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子)和TIM-3抑制剂(例如，抗TIM-3抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子)和PD-L1抑制剂(例如，抗PD-L1抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与TIM-3抑制剂(例如，抗TIM-3抗体分子)和PD-L1抑制剂(例如，抗PD-L1抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子)和化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))组合施用或使用。在另一个实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与CEACAM抑制剂(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5抑制剂)(例如，抗CEACAM抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与CEACAM-1抑制剂(例如，抗CEACAM-1抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与CEACAM-3抑制剂(例如，抗CEACAM-3抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与CEACAM-5抑制剂(例如，抗CEACAM-5抗体分子)组合施用或使用。
可以将本文公开的抗体分子组合独立施用，例如，作为独立抗体分子独立施用，或连接，例如，作为双特异性或三特异性抗体分子连接。在一个实施方案中，施用包含抗LAG-3-3抗体分子和抗PD-1、抗CEACAM(例如，抗CEACAM-1、CEACAM-3和/或抗CEACAM-5)、抗PD-L1或抗TIM抗体分子的双特异性抗体。在某些实施方案中，本文公开的抗体组合用来治疗癌，例如，如本文所述的癌(例如，实体瘤或血液学恶性病)。
在另一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与抗PD-1抗体分子组合施用或使用，例如，以治疗脑癌(例如，胶质母细胞瘤)、黑素瘤、肾癌(例如，肾细胞癌)、病毒相关的癌(例如，肛管癌、***、胃癌、头颈癌、鼻咽癌(NPC)、***癌、或者***或外阴癌)、结直肠癌或肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC))。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与抗PD-1抗体分子组合施用或使用，例如，以治疗乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。
在另一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与化疗药(例如，吉西他滨、紫杉醇)组合施用或使用，例如，以治疗胰腺癌或乳腺癌。
在另一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))组合施用或使用，例如，以治疗乳腺癌，例如，TNBC。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与抗PD-1抗体分子和化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))组合施用或使用，例如，以治疗乳腺癌，例如，TNBC。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与细胞因子组合施用或使用。细胞因子可以作为与抗LAG-3抗体分子的融合分子施用，或作为独立组合物施用。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与一种、两种、三个或更多种细胞因子(例如，作为融合分子或作为单独组合物)组合施用或使用。在一个实施方案中，细胞因子是选自IL-1、IL-2、IL-12、IL-15或IL-21中一者、两者、三者或更多者的白介素(IL)。在一个实施方案中，双特异性抗体分子具有针对第一靶(例如，针对LAG-3)的第一结合特异性、针对第二靶(例如，PD-1、TIM-3或PD-L1)的第二结合特异性，并且是任选地与白介素(例如，IL-12)结构域(例如，全长IL-12或其部分)连接。在某些实施方案中，本文所述的抗LAG-3抗体分子和细胞因子体组合用来治疗癌，例如，如本文所述的癌(例如，实体瘤)。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与HLA C特异性抗体(例如，对杀伤细胞免疫球蛋白样受体特异的抗体(本文也称作“抗KIR抗体”))组合施用或使用。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子和抗KIR抗体的组合用来治疗癌，例如，如本文所述的癌(例如，实体瘤，例如，晚期实体瘤)。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与细胞免疫疗法(例如，
Figure BDA0002415648750000311
(例如，Sipuleucel-T))组合施用或使用并且任选地与环磷酰胺组合施用或使用。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子、
Figure BDA0002415648750000312
和/或环磷酰胺的组合用来治疗癌，例如，如本文所述的癌(例如，***癌，例如，晚期***癌)。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与疫苗(例如，癌疫苗，(例如，树状细胞肾癌(DC-RCC)疫苗))组合施用或使用。在一个实施方案中，疫苗基于肽、基于DNA、基于RNA或基于抗原或其组合。在实施方案中，疫苗包含一种或多种肽、核酸(例如，DNA或RNA)、抗原或其组合。在某些实施方案中，抗TIM-3抗体分子和DC-RCC疫苗的组合用来治疗癌，例如，如本文所述的癌(例如，肾癌，例如，转移性肾细胞癌(RCC)或透明细胞肾细胞癌(CCRCC))。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与辅助剂组合施用或使用。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与化疗和/或免疫治疗组合施用或使用。例如，抗LAG-3抗体分子可以单独或与以下一者或多者组合用来治疗骨髓瘤：化疗药或其他抗癌药(例如，沙利度胺类似物，例如，来那度胺)、抗PD-1抗体分子、肿瘤抗原脉冲标记的树状细胞、肿瘤细胞和树状细胞的融合物(例如，电融合物)或用恶性浆细胞产生的免疫球蛋白独特型接种。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与抗PD-1抗体分子组合施用或使用，以治疗骨髓瘤，例如，多发性骨髓瘤。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与化疗组合施用或使用，以治疗肺癌，例如，非小细胞肺癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子配合标准肺化疗(例如，NSCLC化疗)(例如，铂剂双联疗法)施用或使用，以治疗肺癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子在晚期或转移性癌受试者(例如，转移性和复发性NSCL癌患者)中与吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂(例如，(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亚硝基亚甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺(也称作INCB24360)、吲哚莫德(indoximod)(1-甲基-D-色氨酸)、α-环己基-5H-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-乙醇(也称作NLG919)等)组合施用或使用。
在另外的其他实施方案中，在其他实施方案中，抗LAG-3抗体分子可以与以下一者或多者组合施用或使用：基于免疫的策略(例如，白介素-2或干扰素-α)、导引剂(例如，VEGF抑制剂如针对VEGF的单克隆抗体)；VEGF酪氨酸激酶抑制剂如舒尼替尼、索拉替尼、阿昔替尼和帕唑帕尼；RNAi抑制剂；或VEGF信号传导的下游介体的抑制剂，例如，雷帕霉素哺乳动物靶(mTOR)的抑制剂，例如，依维莫司和坦罗莫司。这类组合的任一者可以用来治疗肾癌，例如，肾细胞癌(RCC)(例如，透明细胞肾细胞癌(CCRCC)或非透明细胞肾细胞癌(nccRCC)或转移性RCC)或肝癌(例如，肝细胞癌)。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与MEK抑制剂(例如，如本文所述的MEK抑制剂)组合施用或使用。在一些实施方案中，抗LAG-3抗体分子和MEK抑制剂的组合用来治疗癌(例如，本文所述的癌)。在一些实施方案中，该组合治疗的癌选自黑素瘤、结直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、***癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤或肾细胞癌。在某些实施方案中，癌包含BRAF突变(例如，BRAF V600E突变)、BRAF野生型、KRAS野生型或激活性KRAS突变。癌可以处于早期、中期或晚期。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、奥沙利铂、顺铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))、亚叶酸(leucovovin)或5-FU(例如，FOLFOX联合疗法)中一者、两者或全体组合施用或使用。备选地或组合时，该组合还包含VEGF抑制剂(例如，如本文中公开的VEGF抑制剂)。在一些实施方案中，抗LAG-3抗体分子、FOLFOX联合治疗和VEGF抑制剂的组合用来治疗癌(例如，本文所述的癌)。在一些实施方案中，该组合治疗的癌选自黑素瘤、结直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、***癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤或肾细胞癌。癌可以处于早期、中期或晚期。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子配合酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿昔替尼)施用或使用，以治疗肾细胞癌和其他实体瘤。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子配合4-1BB受体导引剂(例如，通过4-1BB(CD-137)刺激信号传导的抗体，例如，PF-2566)施用或使用。在其他实施方案中，将抗TIM-3抗体分子与酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿昔替尼)和4-1BB受体导引剂组合施用或使用。
抗LAG-3抗体分子可以结合至物质，例如，细胞毒药物或部分(例如，治疗药物；发射辐射的化合物；植物源、真菌源或细菌源分子；或生物蛋白质(例如，蛋白质毒素)或颗粒(例如，重组病毒粒子，例如，病毒衣壳蛋白)。例如，抗体可以偶联至放射性同位素如α-、β-或γ-发射体或β-和γ-发射体。
免疫调节剂
本文所述的抗LAG-3抗体分子可以与一种或多种免疫调节剂组合使用。
在某些实施方案中，免疫调节剂是免疫检查点分子的抑制剂。在一个实施方案中，免疫调节剂是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFβ的抑制剂。在一个实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂抑制PD-1、PD-L1、TIM-3、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)、CTLA-4或其任意组合。
可以在DNA、RNA或蛋白质水平进行对抑制性分子的抑制。在实施方案中，抑制性核酸(例如，dsRNA、siRNA或shRNA)可以用来抑制抑制性分子的表达。在其他实施方案中，抑制性信号的抑制剂是与抑制性分子结合的多肽(例如，可溶性配体)(例如，PD-1-Ig或CTLA-4Ig)或抗体分子；例如，与PD-1、PD-L1、PD-L2、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)、CTLA-4、TIM-3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFβ或其组合结合的抗体分子。
在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子处于双特异性或多特异性抗体分子形式。在一个实施方案中，双特异性抗体分子具有针对LAG-3的第一结合特异性和第二结合特异性，例如，针对PD-1、PD-L1、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)、TIM-3或PD-L2的第二结合特异性。在一个实施方案中，双特异性抗体分子与(i)PD-1或PD-L1(ii)和LAG-3结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与LAG-3和TIM-3结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与LAG-3和CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与LAG-3和CEACAM-1结合。在又一个实施方案中，双特异性抗体分子与LAG-3和CEACAM-3结合。在又一个实施方案中，双特异性抗体分子与LAG-3和CEACAM-5结合。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与双特异性或多特异性抗体分子组合使用。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与PD-1或PD-L1结合。在又一个实施方案中，双特异性抗体分子与PD-1和PD-L2结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)和TIM-3结合。
可以在多特异性抗体分子(例如，三特异性抗体)中产生前述分子的任何组合，所述三特异性抗体包含针对LAG-3的第一结合特异性和针对以下两者或多者的第二及第三结合特异性：PD-1、PD-L1、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)、TIM-3或PD-L2。
在某些实施方案中，免疫调节剂是PD-1(例如，人PD-1)的抑制剂。在另一个实施方案中，免疫调节剂是PD-L1(例如，人PD-L1)的抑制剂。在一个实施方案中，PD-1或PD-L1的抑制剂是针对PD-1或PD-L1的抗体分子(例如，如本文所述的抗PD-1或抗PD-L1抗体分子)。
PD-1或PD-L1抑制剂与抗LAG-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如，与TIM-3、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)或CTLA-4的抑制剂组合。在一个实施方案中，PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗PD-1或PD-L1抗体分子)与抗LAG-3抗体分子和TIM-3抑制剂(例如，抗TIM-3抗体分子)组合施用。在另一个实施方案中，PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗PD-1或PD-L1抗体分子)与抗LAG-3抗体分子和CEACAM抑制剂(例如，CEACAM-1、-3和/或-5抑制剂)(例如，抗CEACAM抗体分子)组合施用。在另一个实施方案中，PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗PD-1或PD-L1抗体分子)与抗LAG-3抗体分子和CEACAM-1抑制剂(例如，抗CEACAM-1抗体分子)组合施用。在另一个实施方案中，PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗PD-1或PD-L1抗体分子)与抗LAG-3抗体分子和CEACAM-5抑制剂(例如，抗CEACAM-5抗体分子)组合施用。在另外的其他实施方案中，PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗PD-1或PD-L1抗体分子)与抗LAG-3抗体分子和TIM-3抑制剂(例如，抗TIM-3抗体分子)组合施用。免疫调节剂与抗LAG-3抗体分子和PD-1抑制剂(例如，包括PD-L2、CTLA-4、LAG-3、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFβ中一者或多者)的其他组合也属于本发明范围。本领域已知的或本文公开的任何抗体分子可以用于抑制剂与检查点分子的前述组合中。
在其他实施方案中，免疫调节剂是CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)(例如，人CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5))的抑制剂。在一个实施方案中，免疫调节剂是CEACAM-1(例如，人CEACAM-1)的抑制剂。在另一个实施方案中，免疫调节剂是CEACAM-3(例如，人CEACAM-3)的抑制剂。在另一个实施方案中，免疫调节剂是CEACAM-5(例如，人CEACAM-5)的抑制剂。在一个实施方案中，CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)的抑制剂是针对CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)的抗体分子。CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)抑制剂和抗LAG-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如，与TIM-3、PD-1、PD-L1或CTLA-4的抑制剂组合。
在其他实施方案中，免疫调节剂是TIM-3(例如，人TIM-3)的抑制剂。在一个实施方案中，TIM-3的抑制剂是针对TIM-3的抗体分子。TIM-3抑制剂和抗LAG-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如，与CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)、PD-1、PD-L1或CTLA-4的抑制剂组合。
在某些实施方案中，本文公开的组合中所用的免疫调节剂(例如，与选自抗原呈递组合的治疗药组合)是共刺激分子的激活剂或激动剂。在一个实施方案中，共刺激分子的激动物选自以下者的激动物(例如，激动性抗体或其抗原结合片段，或可溶性融合物)：OX40、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体。
在其他实施方案中，免疫调节剂是GITR激动剂。在一个实施方案中，GITR激动剂是针对GITR的抗体分子。抗GITR抗体分子和抗LAG-3抗体分子可以处于独立的抗体组合物形式，或作为双特异性抗体分子。GITR激动剂与抗LAG-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如，与PD-1、PD-L1、CTLA-4、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)或TIM-3的抑制剂组合。在一些实施方案中，抗GITR抗体分子是与GITR和PD-1、PD-L1、CTLA-4、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)或TIM-3结合的双特异性抗体。在其他实施方案中，GITR激动剂可以与共刺激分子的一种或多种附加激活物组合施用，例如与X40、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体的激动剂组合施用。
在其他实施方案中，免疫调节剂是OX40激动剂。在一个实施方案中，OX40激动剂是针对OX40的抗体分子。OX40抗体分子和抗LAG-3抗体分子可以处于独立的抗体组合物形式，或作为双特异性抗体分子。OX40激动剂与抗LAG-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如，与PD-1、PD-L1、CTLA-4、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)或TIM-3的抑制剂组合。在一些实施方案中，抗OX40抗体分子是与OX40和PD-1、PD-L1、CTLA-4、CEACAM(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)或TIM-3结合的双特异性抗体。在其他实施方案中，OX40激动剂可以与其他共刺激分子，例如，GITR、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体的激动剂组合施用。
应当指出，本文仅提供了检查点抑制蛋白的抑制剂或共刺激分子的激动剂的示例性组合。这些药物的附加组合处于本发明的范围内。
生物标记物
在某些实施方案中，本文所公开的任何方法还包括在受试者(例如，患有癌症(例如，本文所述的癌症)的受试者)中评估或监测本文所述的疗法(例如，单药疗法或联合疗法)的有效性。该方法包括采集疗法有效性的值，其中所述值表示该疗法的有效性。
在实施方案中，疗法有效性的值包括以下一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者或更多者(例如，全体)的量值：
(i)肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)表型的参数；
(ii)髓样细胞群体的参数；
(iii)表面表达标志物的参数；
(iv)免疫应答的生物标记物的参数；
(v)全身性细胞因子调节作用的参数；
(vi)循环型游离DNA(cfDNA)的参数；
(vii)全身性免疫-调节作用的参数；
(viii)微生物屏障的参数；
(ix)循环型免疫细胞中活化标记物的参数；或
(x)循环型细胞因子的参数。
在一些实施方案中，TIL表型的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，肿瘤样品)中)以下一者、二者、三者、四者或更多者(例如，全体)的水平或活性：用于TIL计数的苏木精和伊红(H&E)染色、CD8、FOXP3、CD4或CD3。
在一些实施方案中，髓样细胞群体的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，肿瘤样品)中)CD68或CD163之一或两者的水平或活性。
在一些实施方案中，表面表达标志物的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，肿瘤样品)中)以下一者、二者、三者或更多者(例如，全体)的水平或活性：TIM-3、PD-1、PD-L1或LAG-3。在某些实施方案中，通过免疫组织化学(IHC)法测定TIM-3、PD-1、PD-L1或LAG-3的水平。在某些实施方案中，测定TIM-3的水平。
在一些实施方案中，免疫应答的生物标记物的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，肿瘤样品)中)一个或多个基于核酸的标志物的水平或序列。
在一些实施方案中，全身性细胞因子调节作用的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中)以下一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者或更多者(例如，全体)的水平或活性：IL-18、IFN-γ、ITAC(CXCL11)、IL-6、IL-10、IL-4、IL-17、IL-15或TGF-β。
在一些实施方案中，cfDNA的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中)一种或多种循环型肿瘤DNA(cfDNA)分子的序列或水平。
在一些实施方案中，全身性免疫调节作用的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，PBMC样品)中)已活化免疫细胞(例如，表达CD3的细胞、表达CD8的细胞或这两者)的表型表征。
在一些实施方案中，微生物组的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，粪便样品)中)微生物组中一个或多个基因的序列或表达水平。
在一些实施方案中，循环型免疫细胞中活化标记物的参数包括样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中以下一者、二者、三者、四者、五者或更多者(例如，全体)的水平或活性：循环型CD8+、HLA-DR+Ki67+、T细胞、IFN-γ、IL-18或表达CXCL11(IFN-γ诱导的CCK)的细胞。
在一些实施方案中，循环型细胞因子的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中)IL-6的水平或活性。
在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，疗法包括本文所述的抗TIM-3抗体分子和免疫检查点分子的第二抑制剂(例如，PD-1的抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子)或PD-L1的抑制剂(例如，抗PD-L1抗体分子))的组合。
在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，从获自受试者的样品获得(i)-(x)中一者或多者的量值。在一些实施方案中，样品选自肿瘤样品、血液样品(例如，血浆样品或PBMC样品)或粪便样品。
在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，在接受治疗之前、其期间或其之后评价受试者。
在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，(i)-(x)中一者或多者的量值评价了基因表达、流式细胞术或蛋白质表达中一者或多者的概况。
在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，在受试者或样品中存在循环型CD8+、HLA-DR+Ki67+、T细胞、IFN-γ、IL-18或表达CXCL11(IFN-γ诱导的CCK)的细胞中一者、二者、三者、四者、五者或更多者(例如，全体)升高的水平或活性和/或存在的降低的IL-6水平或活性，是疗法有效性的正向预测指标。
备选地，或与本文公开的方法组合，响应于所述值，执行以下一者、二者、三者、四者或更多者(例如，全体)：
(i)向受试者施用该疗法；
(ii)施用该疗法的改变的剂量；
(iii)改变该疗法的安排或时间过程；
(iv)向受试者施用与该疗法组合的附加药剂(例如，本文所述的治疗药)；或
(v)向受试者施用替代疗法。
额外实施方案
在某些实施方案中，本文所公开的任何方法还包括在受试者或样品(例如，包含癌细胞和/或免疫细胞如TIL的受试者样品)中鉴定LAG-3的存在，因而提供LAG-3的值。该方法还可以包括将LAG-3值与参比值(例如，对照值)比较。如果LAG-3值大于参比值，例如，对照值，则向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗LAG-3抗体分子，并且任选地，与本文所述的第二治疗药、程序或模式联用，因而治疗癌症。
在其他实施方案中，本文所公开的任何方法还包括在受试者或样品(例如，包含癌细胞和/或免疫细胞如TIL的受试者样品)中鉴定PD-L1的存在，因而提供PD-L1的值。该方法还可以包括将PD-L1值与参比值(例如，对照值)比较。如果PD-L1值大于参比值，例如，对照值，则向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗LAG-3抗体分子，并且任选地，与本文所述的第二治疗药、程序或模式联用，因而治疗癌症。
在其他实施方案中，本文所公开的任何方法还包括在受试者或样品(例如，包含癌细胞和任选地免疫细胞如TIL的受试者样品)中鉴定PD-L1、CD8或IFN-γ中一者、两者或全体的存在，因而提供PD-L1、CD8和IFN-γ中一者、两者或全体的值。该方法还可以包括将PD-L1、CD8和/或IFN-γ值与参比值(例如，对照值)比较。如果PD-L1、CD8和/或IFN-γ值大于参比值，例如，对照值，则向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗LAG-3抗体分子，并且任选地，与本文所述的第二治疗药、程序或模式联用，因而治疗癌症。
患者可以患有本文所述的癌，如实体瘤或血液学癌，例如，脑肿瘤(例如，胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤、或复发性脑肿瘤)、胰腺癌(例如，晚期胰腺癌)、皮肤癌(例如，黑素瘤(例如，II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌)、肾癌(例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性肾细胞癌))、乳腺癌(例如，转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC))、病毒相关的癌、肛管癌(例如，肛管鳞状细胞癌)、***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)、胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌、或胃癌或胃食管结合部癌)、头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))、鼻咽癌(NPC)、***癌(例如，***鳞状细胞癌)、***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)、结直肠癌(例如，复发结直肠癌或转移性结直肠癌，例如，微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌)、肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC))、白血病，淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，例如，复发性或难治性HL或DLBCL)或骨髓瘤，或癌的转移病灶。
本文所提及的全部出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用的方式完整地并入。
本发明的其他特征、目的和优点将从本描述及附图并且从权利要求书中显而易见。
发明详述
LAG-3(CD223)是结合MHC II、LSECtin和半乳糖凝集素-3的免疫检查点抑制蛋白。LAG-3表达在免疫细胞的表面上，所述免疫细胞包括CD4+和CD8+ T效应细胞细胞、调节性T细胞(Tregs)、天然杀伤(NK)细胞和浆细胞样树状细胞。已经显示LAG-3接合过程负向地调节T细胞信号传导并增加Tregs的阻抑性功能，预计前者随后减少T细胞对肿瘤细胞的活性。已经显示，对LAG-3的阻断因通过增加T细胞增殖和细胞因子分泌(IFN-γ)而活化T细胞。
因此，本文至少部分地公开了以高亲和力和特异性结合LAG-3的抗体分子(例如，人源化抗体分子)。还提供了包含抗LAG-3抗体分子的药物组合物和剂量制剂。本文公开的抗LAG-3抗体分子可以(单独或联合其他治疗药、程序或模式)用来治疗或预防疾病，如癌疾病(例如，实体瘤和血液癌症)以及传染性疾病(例如，慢性传染病或败血症)。例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子可以与其他治疗药(例如，PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)或化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin))或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))中的一者或两者)组合使用，例如，以治疗或预防癌(例如，本文所述的癌)，例如，乳腺癌，例如三阴性乳腺癌(TNBC)。因此，本文公开了使用抗LAG-3抗体分子治疗多种疾病的方法，包括给药方案。在某些实施方案中，按***剂量或固定剂量施用或使用抗LAG-3抗体分子。
定义
下文和本申请通篇范围内定义额外的术语。
如本文所用，冠词“一个(a)”和“一种(an)”在本文中用来指该冠词的一个或多于一个(例如，至少一个)的语法对象。
除非内容明确提示，否则术语“或”在本文中用来意指术语“和/或”并且与之互换使用。
“约”和“大约”应当通常意指鉴于测量的性质或精度，所测量的量的可接受误差程度。示例性误差程度在所给出的值或值范围的20百分数(％)范围内，一般在其10％范围内和更一般在其5％范围内。
“某组合”或“与……组合”不意在暗示疗法或治疗药必须在相同的时间施用和/或配制在一起以递送，不过这些递送方法处于本文所述的范围内。组合的治疗药可以与一种或多种其它疗法或治疗剂同时施用，在其他疗法之前或之后施用。可以按任意顺序施用治疗药或治疗用方案。通常而言，每种药物将按确定用于该药物的剂量和/或按确定用于该药物的时间安排施用。将进一步领会，这种组合中所用的额外治疗药可以在单一组合物中一起施用或在不同组合物中分别施用。通常而言，预计以组合方式使用的额外治疗药应当按照不超过单独利用它们的水平利用。在一些实施方案中，以组合方式使用的水平将低于单独所用的那些水平。
在实施方案中，按治疗剂量或次治疗剂量施用附加的治疗药。在某些实施方案中，当第二治疗药与第一治疗药(例如，抗LAG-3抗体分子)组合施用时，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第二治疗药浓度比单独施用第二治疗药时低。在某些实施方案中，当第一治疗药与第二治疗药组合施用时，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第一治疗药浓度比单独施用第一治疗药时低。在某些实施方案中，在联合疗法中，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第二治疗药浓度比第二治疗药作为单药疗法的治疗性剂量低，例如，低10-20％、20-30％、30-40％、40-50％、50-60％、60-70％、70-80％或80-90％。在某些实施方案中，在联合疗法中，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第一治疗药浓度比第一治疗药作为单药疗法的治疗性剂量低，例如，低10-20％、20-30％、30-40％、40-50％、50-60％、60-70％、70-80％或80-90％。
术语“抑制”、“抑制剂”或“拮抗剂”包括给定分子(例如，免疫检查点抑制蛋白)的某些参数(例如，活性)降低。例如，这个术语包括抑制至少5％、10％、20％、30％、40％或更多的活性，例如，PD-1或PD-L1活性。因此，抑制不必是100％。
术语“激活”、“激活物”或“激动剂”包括给定分子(例如，共刺激分子)的某些参数(例如，活性)升高。例如，这个术语包括升高至少5％、10％、25％、50％、75％或更多的活性，例如，共刺激活性。
术语“抗癌作用”指可以通过多种手段展示的生物学效果，包括但不限于，例如，肿瘤体积减少、癌细胞数目减少、转移灶数目减少、预期寿命增加、癌细胞增殖减少、癌细胞存活减少或与癌状况相关的多种生理症状改善。“抗癌作用”也可以通过肽、多核苷酸、细胞和抗体预防癌在首发位置出现的能力展示。
术语“抗肿瘤作用”指可以通过多种手段展示的生物学效果，包括但不限于，例如，肿瘤体积减少、肿瘤细胞数目减少、肿瘤细胞增殖减少或肿瘤细胞存活减少。
术语“癌症”指以异常细胞快速且失控生长为特征的疾病。癌细胞可以局部地或通过血流和淋巴***扩散到身体其他部分。本文中描述了各种癌的实例并且它们包括但不限于实体瘤、例如，肺癌、乳腺癌、***癌、卵巢癌、***、皮肤癌、胰腺癌、结直肠癌、肾癌、肝癌及脑癌和血液学恶性病，例如，淋巴瘤和白血病等。术语“肿瘤”和“癌症”在本文中互换地使用，例如，两种术语涵盖实体瘤和液体肿瘤，例如，弥散型或循环型肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶变前以及恶性癌症和肿瘤。
术语“抗原呈递细胞”或“APC”指在其表面上呈递与主要组织相容性复合体(MHC)复合的外来抗原的免疫***细胞如附属细胞(例如，B细胞、树状细胞等)。T细胞可以使用其T细胞受体(TCR)识别这些复合物。APC加工抗原并将它们呈递至T细胞。
术语“共刺激分子”指T细胞上与共刺激配体特异性结合，因而介导通过T细胞的共刺激反应(如但不限于增殖)的同族结合配偶体。共刺激分子是有效免疫应答所需的除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子。共刺激分子包括但不限于MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号传导性淋巴细胞激活分子(SLAM蛋白)、NK细胞活化受体，BTLA、Toll配体受体、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、4-1BB(CD137)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS(CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a和与CD83特异性结合的配体。
如该术语在本文中所用那样，术语“免疫效应细胞”或“效应细胞”指涉及免疫应答，例如涉及促进免疫效应子反应的细胞。免疫效应细胞的实例包括T细胞，例如，α/β的T细胞和γ/δT细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、肥大细胞和骨髓源性吞噬细胞。
如该术语在本文中所用那样，“免疫效应子”或“效应子”、“功能”或“应答”例如指免疫效应细胞的增强或促进免疫攻击靶细胞的功能或应答。例如，免疫效应子功能或应答指促进杀伤靶细胞或抑制靶细胞生长或增殖的T细胞或NK细胞的特性。在T细胞的情况下，初级刺激和共刺激是免疫效应子功能或应答的例子。
术语“效应子功能”指细胞的特化功能。T细胞的效应子功能例如可以是溶细胞活性或辅助活性，包括分泌细胞因子。
如本文所用，术语“治疗”、“疗法”和“治疗着”指因施用一种或多种疗法而产生减少或改善某疾病(例如，增生性疾病)的进展、严重程度和/或持续时间，或改善该疾病的一个或多个症状(优选地，一个或多个可察觉症状)。在具体实施方案中，“治疗”、“疗法”和“治疗着”指改善增生性疾病的并不必然由患者可察觉的至少一个可度量身体参数，如肿瘤生长。在其他实施方案中，“治疗”、“疗法”和“治疗着”指在身体上(例如，通过稳定可察觉症状)、生理上(例如，通过稳定身体参数)或这两方抑制增生性疾病的进展。在其他实施方案中，“治疗”、“疗法”和“治疗着”指肿瘤尺寸或癌细胞计数减少或稳定。
本发明的组合物、制剂和方法涵盖这样的多肽和核酸，它们具有指定的序列或与其基本上相同或相似的序列，例如，与指定的序列至少85％、90％、95％或更高同一性的序列。在氨基酸序列的情况下，术语“基本上相同”在本文中用来指第一氨基酸序列，所述第一氨基酸序列含有足够或最少数目的i)与第二氨基酸序列中对齐的氨基酸残基相同或ii)作为其保守性置换的氨基酸残基，从而第一和第二氨基酸序列可以具有共同的结构域和/或共同的功能活性。例如，含有与参考序列(例如，本文中提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的共同结构域的氨基酸序列。
在核苷酸序列的情况下，术语“基本上相同”在本文中用来指这样的第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列含有足够或最少数目的与第二核苷酸序列中对齐的核苷酸相同的核苷酸，从而第一和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同结构的多肽结构域或共同功能的多肽活性。例如，与参考序列(例如，本文中提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
术语“功能性变体”指与天然存在序列具有基本上相同氨基酸序列或由基本上相同的核苷酸序列编码并能够具有天然存在序列的一种或多种活性的多肽。
如下进行序列之间同源性或序列同一性(这些术语在本文中互换地使用)的计算。
为确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分数，将所述序列出于最佳比较目的比对(例如，可以为最佳比对而在第一和第二氨基酸序列或核酸序列之一或二者中引入空位或可以为比较目的而抛弃非同源序列)。在一个优选实施方案中，为比较目的所比对的参考序列的长度是至少30％、优选地至少40％、更优选地至少50％、60％和甚至更优选地至少70％、80％、90％、100％的参考序列长度。随后比较在对应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置由第二序列中对应位置处的相同氨基酸残基或核苷酸占据时，则所述分子在这个位置处是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。
考虑到为最佳比对这两个序列而需要引入的空位的数目和每个空位的长度，两个序列之间的同一性百分数随所述序列共有的相同位置变化而变化。
可以利用数学算法实现两个序列间的序列比较和同一性百分数的计算。在一个优选实施方案中，使用已经集成至GCG软件包的GAP程序中的Needlema和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法(在www.gcg.com可获得)，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6，确定两个氨基酸序列之间的同一性百分数。在又一个优选的实施方案中，使用GCG软件包中的GAP程序(在www.gcg.com可获得)，使用NWSgapdna.CMP矩阵和空位权重40、50、60、70或80和长度权重1、2、3、4、5或6，确定两个核苷酸序列之间的同一性百分数。特别优选的参数集合(和除非另外说明否则应当使用的一个参数集合)是采用空位罚分12、空位延伸罚分4和移码空位罚分5的Blossum62评分矩阵。
还可以使用PAM120加权余数表、空位长度罚分12，空位罚分4，利用已经并入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller算法,((1989)CABIOS,4:11-17)确定两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的同一性百分数。
额外地或备选地，可以进一步使用本文所述的核酸序列和蛋白质序列作为“查询序列”以针对公共数据库执行检索，以例如鉴定其他家族成员序列或相关序列。例如，可以使用Altschul等人,(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的NBLAST及XBLAST程序(版本2.0)执行此类检索。BLAST核苷酸检索可以用NBLAST程序，评分＝100、字长度＝12执行，以获得与本发明核酸(SEQ ID NO:1)分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质检索可以用XBLAST程序、评分＝50、字长度＝3执行，以获得与本发明蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了出于比较目的获得带空位的比对结果，可以如Altschul等人,(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402中所述那样使用空位BLAST。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov。
如本文所用，术语“在低严格性、中等严格性、高严格性或极高严格性条件下杂交”描述了杂交和洗涤条件。开展杂交反应的指导可以在通过引用方式并入的CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6中找到。参考文献中描述了含水方法和非含水方法并且可以使用任一方法。本文中提及的特异性杂交条件如下：1)低严格性杂交条件是在约45℃于6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中，随后至少在50℃(对于低严格性条件，可以增加洗涤的温度至55℃)于0.2X SSC，0.1％SDS中洗涤两次；2)中等严格性杂交条件是在约45℃于6X SSC中、随后在60℃在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤一次或多次；3)高严格性杂交条件是在约45℃在6X SSC中、随后在65℃于0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤一次或多次；并且优选地4)极高严格性杂交条件是在65℃于0.5M磷酸钠、7％SDS中、随后在65℃于0.2X SSC、1％SDS中洗涤一次或多次。极高严格性条件(4)是优选的条件和除非另外说明，否则应当使用的一个条件。
可以理解，本发明的分子可以具有额外的保守性或非必需氨基酸置换，这些置换对其功能没有明显影响。
术语“氨基酸”意在包括包含氨基官能团和酸官能团并且能够纳入天然存在氨基酸的聚合物中的全部分子，无论是天然或合成的。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物和同类物；具有不同侧链的氨基酸类似物；和前述任一者的任一个的全部立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-光学异构体或L-光学异构体和肽模拟物。
“保守性氨基酸置换”是其中氨基酸残基以具有相似侧链的氨基酸残基替换的置换。已经在本领域中定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支的侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)，以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果为单链)在本文中互换地用来指任意长度的氨基酸聚合物。该聚合物可以是线形或分支的，它可以包含修饰的氨基酸，并且它可以由非氨基酸隔断。该术语也包括已经被修饰(例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，如以标记组分缀合)的氨基酸聚合物。多肽可以从天然来源分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主产生并且可以是合成方法的产物。
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”互换使用。它们指聚合物形式的任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果为单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸及核苷酸类似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分打断。可以在聚合后进一步修饰多核苷酸，如通过与标记组分缀合。核酸可以是重组多核苷酸或在自然界中不存在或与另一个多核苷酸以非自然布局连接的基因组来源、cDNA来源、半合成来源或合成来源的多核苷酸。
如本文所用，术语“分离”指从其原始或原初环境(例如，如果它天然存在，天然环境)取出的物质。例如，活动物中存在的天然存在多核苷酸或多肽不是分离的，然而通过人工干预与该天然***中一些或全部共存物质分开的相同多核苷酸或多肽是分离的。此类多核苷酸可能是载体的一部分和/或此类多核苷酸或多肽可能是组合物的一部分，并且仍是分离的，在于这种载体或组合物不是自然界中找到它的天然环境的一部分。
下文进一步详细描述本发明的多个方面。在整个说明书中列出了其他定义。
给药方案
可以根据本文所述的给药方案施用本文所述的抗LAG-3抗体分子，以治疗(例如，抑制、减少、减轻或防止)受试者中的疾病，例如，过度增生性病状或疾病(例如，癌症)。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约200mg至约2000mg的剂量例如，每两周、三周或四周一次施用至受试者。
在某方面，本公开以一种治疗受试者中癌症的方法为特征，所述方法包括按本文所述的剂量或给药方案，向受试者施用抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按导致结合(例如，饱和)受试者中可溶性LAG-3的剂量或给药方案施用。在一些实施方案中，例如在施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12、24、36或48周以内，将抗LAG-3抗体分子按这样的剂量或给药方案施用，所述剂量或给药方案导致对受试者中可溶性LAG-3的至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、98％或99％结合(例如，饱和)。
在一些实施方案中，例如在施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36或48周以内，将抗LAG-3抗体分子按这样的剂量或给药方案施用，所述剂量或给药方案导致对受试者肿瘤中LAG-3的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％结合(例如，占据)。
在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按这样的剂量或给药方案施用，所述剂量或给药方案导致对受试者中可溶性LAG-3的至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、98％或99％结合(例如，饱和)；并且导致对受试者的肿瘤中LAG-3的至少50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、98％或99％结合，例如，占据。在实施方案中，例如在施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36或48周以内，饱和/或占据出现。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按导致以下一种或两种情况的剂量或给药方案施用：
(a)受试者(例如，血液)中40％或更多(例如，50％或更多、60％或更多、70％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多、99％或更多)的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合；或
(b)受试者(例如，癌)中50％或更多(例如，60％或更多、70％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多、99％或更多)的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，在血液样品(例如，血清样品或血浆样品)中测定抗LAG-3抗体分子与可溶性LAG-3的结合。在一些实施方案中，在癌(例如，癌样品)中测定抗LAG-3抗体分子与膜结合型LAG-3的结合。
在一些实施方案中，当受试者具有抗LAG-3抗体分子的稳态谷浓度时测定抗LAG-3抗体分子与可溶性LAG-3的结合、抗LAG-3抗体分子与膜结合型LAG-3的结合或这两种结合。在一些实施方案中，谷浓度是在施用后约24周的抗LAG-3抗体分子的浓度，或在施用下一剂之前抗LAG-3抗体分子达到的最低浓度。在一些实施方案中，测定(例如，在体外(例如，通过ELISA或基于细胞的测定法)或体内(例如，通过成像法)测量)或从PK/PD模型(例如，本文所述的PK/PD模型)预测抗LAG-3抗体分子与可溶性LAG-3的结合、抗LAG-3抗体分子与膜结合型LAG-3的结合或这两种结合。
在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中50％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中60％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中70％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中80％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中90％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，来自受试者的癌或癌样品中85％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的癌或癌样品中95％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中50％或更多、60％或更多、70％或更多、80％或更多、或90％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中85％或更多、90％或更多、或95％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中50％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中60％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中70％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中80％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。在一些实施方案中，来自受试者的血清样品中90％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合，并且来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按降低以下一种或两种水平的剂量或给药方案施用：
(a)降低受试者中非占据可溶性LAG-3水平，例如，至非占据可溶性LAG-3参考水平的40％或更小(例如，50％或更小、40％或更小、30％或更小、20％或更小、15％或更小、10％或更小、5％或更小、或1％或更小)；或
(b)降低受试者中非占据膜结合型LAG-3水平，例如，至非占据膜结合型LAG-3参考水平的50％或更小(例如，40％或更小、30％或更小、20％或更小、15％或更小、10％或更小、5％或更小，或1％或更小)。
在一些实施方案中，在血液样品(例如，血清样品或血浆样品)中测定非占据可溶性LAG-3的水平。在一些实施方案中，非占据可溶性LAG-3的参考水平是例如，在例如根据给药方案施用抗LAG-3抗体分子之前，受试者中非占据可溶性LAG-3的基线水平。
在一些实施方案中，在癌(例如，癌样品)中测定非占据膜结合型LAG-3的水平。在一些实施方案中，非占据膜结合型LAG-3的参考水平是例如，在例如根据给药方案施用抗LAG-3抗体分子之前，受试者中非占据膜结合型LAG-3的基线水平。
在一些实施方案中，当受试者具有抗LAG-3抗体分子的稳态谷浓度时测定非占据可溶性LAG-3的水平、非占据膜结合型LAG-3的水平或这两种水平。在一些实施方案中，谷浓度是在施用后约24周的抗LAG-3抗体分子的浓度，或在施用下一剂之前抗LAG-3抗体分子达到的最低浓度。在一些实施方案中，测定(例如，在体外(例如，通过ELISA或基于细胞的测定法)或体内(例如，通过成像法)测量)或从PK/PD模型(例如，本文所述的PK/PD模型)预测非占据可溶性LAG-3的水平、非占据膜结合型LAG-3的水平或这两种水平。
在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的50％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的40％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的30％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的20％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的10％或更小。
在一些实施方案中，将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的15％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的癌或癌样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的5％或更小。
在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的50％或更小、40％或更小、30％或更小、20％或更小、或10％或更小，并且将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的15％或更小、10％或更小、或5％或更小。
在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的50％或更小，并且将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的40％或更小，并且将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的30％或更小，并且将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的20％或更小，并且将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。在一些实施方案中，将来自受试者的血清样品中非占据可溶性LAG-3的水平降低到非占据可溶性LAG-3的参考水平的10％或更小，并且将来自受试者的癌或癌样品中非占据膜结合型LAG-3的水平降低到非占据膜结合型LAG-3的参考水平的10％或更小。
在某些实施方案中，剂量或给药方案产生高于Ccrit的抗LAG-3抗体分子谷浓度(例如，稳态谷浓度)(例如，如实施例1中所述)。在一些实施方案中，Ccrit是低于其将观测到非线性PK的浓度。在一些实施方案中，Ccrit是约60nM。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按本文公开的给药方案施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约200mg至约1600mg、约300mg至约1500mg、约400mg至约1400mg、约500mg至约1300mg、约600mg至约1200mg、约700mg至约1100mg、约800mg至约1000mg、约200mg至约1400mg、约200mg至约1200mg、约200mg至约1000mg、约200mg至约800mg、约200mg至约600mg、约200mg至约400mg、约1400mg至约1600mg、约1200mg至约1600mg、约1000mg至约1600mg、约800mg至约1600mg、约600mg至约1600mg、约400mg至约1600mg、约200mg至约600mg、约300mg至约700mg、约400mg至约800mg、约500mg至约900mg、约600mg至约1000mg、约700mg至约1100mg、约800mg至约1200mg、约900mg至约1300mg、约1000mg至约1400mg、约1100mg至约1500mg或约1200mg至约1600mg的剂量，例如每两周一次、每三周一次或每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约200mg至约600mg、约250mg至约550mg、约300mg至约500mg、约350mg至约450mg、约200mg至约400mg、约400mg至约600mg，例如，约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg的剂量，例如每三周一次或每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg，例如，约300mg、约320mg、约340mg、约360mg、约380mg、约400mg、约420mg、约440mg、约460mg、约480mg或约500mg的剂量每三周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约350mg至约450mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约600mg至约1000mg、约650mg至约950mg、约700mg至约900mg、约750mg至约950mg、约600mg至约800mg、约800mg至约1000mg，例如，约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg的剂量，例如每三周一次或每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约900mg至约1100mg，例如，约900mg、约920mg、约940mg、约960mg、约980mg、约900mg、约920mg、约940mg、约960mg、约980mg或约1000mg的剂量每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约950mg至约1050mg(例如，约1000mg)的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至约900mg、约550mg至约850mg、约600mg至约800mg、约650mg至约750mg，例如，约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg的剂量例如每三周一次或每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约600mg至约800mg，例如，约600mg、约620mg、约640mg、约660mg、约680mg、约700mg、约720mg、约740mg、约760mg、约780mg或约800mg的剂量每三周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约650mg至约750mg(例如，约700mg)的剂量每三周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约1200mg至约1600mg、约1250mg至约1550mg、约1300mg至约1500mg、约1350mg至约1450mg，例如，约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg、约1500mg、约1550mg、约1600mg的剂量例如每三周一次或每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约1300mg至约1500mg，例如，约1300mg、约1320mg、约1340mg、约1360mg、约1380mg、约1400mg、约1420mg、约1440mg、约1460mg、约1480mg或约1500mg的剂量每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约1350mg至约1450mg(例如，约1400mg)的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约400mg至约700mg、约450mg至约650mg、约500mg至约600mg、约450mg至约550mg、约500mg至约600mg、约550mg至约650mg、约600mg至约700mg、约500mg至约550mg、约550mg至约600mg、约600mg至约650mg，例如，约400mg、约450mg、约500mg、约533mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg的剂量例如每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约450mg至约650mg，例如，约450mg、约500mg、约533mg、约550mg、约600mg或约650mg的剂量每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至约650mg，例如，约533mg或约600mg的剂量每四周一次施用。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约2000mg或更少、约1900mg或更少、约1800mg或更少、约1700mg或更少、约1600mg或更少、约1500mg或更少、约1400mg或更少、约1300mg或更少、约1200mg或更少、约1100mg或更少、约1000mg或更少、约900mg或更少、约800mg或更少、约700mg或更少、约600mg或更少、约533mg或更少、约500mg或更少、约400mg或更少、约300mg或更少、约250mg或更少、或约200mg或更小的剂量每两周一次、每三周一次或每四周一次施用。
在一些实施方案中，疾病是癌症，例如，本文所述的癌症。在某些实施方案中，所述癌是实体瘤。在一些实施方案中，癌是脑肿瘤，例如，胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤或复发性脑肿瘤。在一些实施方案中，癌是胰腺癌，例如，晚期胰腺癌。在一些实施方案中，癌是皮肤癌，例如，黑素瘤(例如，II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌。在一些实施方案中，癌是肾癌，例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性肾细胞癌)。在一些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，癌是病毒相关的癌。在一些实施方案中，癌是肛管癌(例如，肛管鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌或胃癌或胃食管结合部癌)。在一些实施方案中，癌是头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))。在一些实施方案中，癌是鼻咽癌(NPC)。在一些实施方案中，癌是***癌(例如，***鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是结直肠癌，例如，复发结直肠癌或转移性结直肠癌，例如，微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌。在一些实施方案中，癌是肺癌，例如，非小细胞肺癌(NSCLC)。在某些实施方案中，癌是血液学癌。在一些实施方案中，癌是白血病。在一些实施方案中，癌是淋巴瘤，例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，复发性或难治性HL或DLBCL)。在一些实施方案中，癌是骨髓瘤。
在其他实施方案中，癌是MSI高癌。在一些实施方案中，癌是转移性癌。在其他实施方案中，癌是晚期癌。在其他实施方案中，癌是复发性或难治性癌。在其他实施方案中，癌是不可切除性癌。
在一个实施方案中，癌是Merkel细胞癌。在其他实施方案中，癌是黑素瘤。在其他实施方案中，癌是乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)或HER2阴性乳腺癌。在其他实施方案中，癌是肾细胞癌(例如，透明细胞肾细胞癌(CCRCC)或非透明细胞肾细胞癌(nccRCC))。在其他实施方案中，癌是甲状腺癌，例如，间变性甲状腺癌(ATC)。在其他实施方案中，癌是神经内分泌肿瘤(NET)，例如，胰、胃肠(GI)道或肺部中的非典型肺部类癌瘤或NET。在某些实施方案中，癌是非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，鳞状NSCLC或非鳞状NSCLC)。在某些实施方案中，癌是输卵管癌。在某些实施方案中，癌是微卫星高不稳性结直肠癌(MSI高CRC)或微卫星稳定性结直肠癌(MSS CRC)。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子与抗PD-1抗体分子(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)组合施用。不希望受理论约束，认为在一些实施方案中，预计抗LAG-3疗法与抗PD-1治疗组合时具有加合效应，如已经在小鼠中观察到(Woo等人Cancer Research 72:917-927(2012))。抗PD-1抗体分子可以配合或不配合化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))施用。不希望受理论约束，认为在一些实施方案中，通过使肿瘤更具有免疫反应性和/或通过改变肿瘤微环境以实现最佳抗肿瘤免疫应答，化疗药的添加将进一步增强单用或与抗PD-1免疫疗法组合的抗LAG-3免疫治疗的疗效。
在某些实施方案中，将抗PD-1抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)每四周一次或约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用。在一些实施方案中，将抗PD-1抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周一次施用。在一些实施方案中，将抗PD-1抗体分子按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，并且将抗PD-1抗体分子按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，并且将抗PD-1抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至900mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用，并且将抗PD-1抗体分子按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至900mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用，并且将抗PD-1抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至650mg(例如，约533mg或约600mg)的剂量每四周一次施用，并且将抗PD-1抗体分子按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至650mg(例如，约533mg或约600mg)的剂量每四周一次施用，并且将抗PD-1抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周一次施用。
在另一个实施方案中，将抗TIM-3抗体分子与化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))组合施用。在一些实施方案中，化疗药是铂剂。在某些实施方案中，铂剂是卡铂。在某些实施方案中，铂剂是顺铂。在某些实施方案中，铂剂是奥沙利铂。在某些实施方案中，铂剂是tetraplatin。
在一些实施方案中，化疗药是核苷酸类似物或前体类似物。在某些实施方案中，核苷酸类似物或前体类似物是卡培他滨。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，并且将化疗药(例如，铂剂，例如，卡铂)按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的剂量每三周一次施用。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，将抗PD-1抗体分子按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用，并且将化疗药(例如，铂剂，例如，卡铂)按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的剂量每三周一次施用。
在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。
在一些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且化疗药是铂剂。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且铂剂是卡铂。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且铂剂是顺铂。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且铂剂是奥沙利铂。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且铂剂是tetraplatin。
在一些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525，化疗药是铂剂，并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525，铂剂是卡铂，并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525，铂剂是顺铂，并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525，铂剂是奥沙利铂，并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525，铂剂是tetraplatin，并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。
在一些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且化疗药是核苷酸类似物或前体类似物。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525并且核苷酸类似物或前体类似物是卡培他滨。
在一些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525，化疗药是核苷酸类似物或前体类似物，并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子是LAG525，核苷酸类似物或前体类似物是卡培他滨，并且抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。
可以将本文公开的任何剂量重复一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或更多次。
抗体分子
本文公开的方法、组合物和制剂包含与哺乳动物(例如，人)LAG-3结合的抗体分子。例如，抗体分子与LAG-3上的表位(例如，线性或构象表位)(例如，如本文所述的表位)特异性结合。
如本文所用，术语“抗体分子”指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如，免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”例如包括单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)。在一个实施方案中，抗体分子包括全长抗体或全长免疫球蛋白链。在一个实施方案中，抗体分子包括全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合或功能性片段。在一个实施方案中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如，它包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中多个免疫球蛋白可变结构域序列的第一免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第一表位的结合特异性并且多个免疫球蛋白可变结构域序列的第二免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第二表位的结合特异性。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。
在一个实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子并且结合单一表位。例如，单特异性抗体分子可以具有各自结合相同表位的多个免疫球蛋白可变结构域序列。
在一个实施方案中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如，它包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中多个免疫球蛋白可变结构域序列的第一免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第一表位的结合特异性并且多个免疫球蛋白可变结构域序列的第二免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第二表位的结合特异性。在一个实施方案中，第一和第二表位在相同抗原(例如，相同蛋白质(或多聚体蛋白的亚基))上。在一个实施方案中，第一和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白的不同亚基))上。在一个实施方案中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不多于两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子以针对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和针对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列为特征。在一个实施方案中，第一和第二表位在相同抗原(例如，相同蛋白质(或多聚体蛋白的亚基))上。在一个实施方案中，第一和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白的不同亚基))上。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序以及针对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的半部分抗体和针对第二表位具有结合特异性的半部分抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的半部分抗体或其片段和针对第二表位具有结合特异性的半部分抗体或其片段。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的scFv或其片段和针对第二表位具有结合特异性的scFv或其片段。在一个实施方案中，第一表位位于LAG-3上并且第二表位位于PD-1、TIM-3、CEACAM(例如，CEACAM-1和/或CEACAM-5)、PD-L1或PD-L2上。
产生多特异性(双特异性或三特异性)或异二聚抗体分子的方案是本领域已知的；包括但不限于，例如，“杵入臼”方案，例如在US5731168中描述；静电导引Fc配对，例如，如WO09/089004、WO 06/106905和WO 2010/129304中所述；链交换工程化的结构域(SEED)异二聚体形成，例如，如WO 07/110205中所述；Fab臂交换，例如，如WO 08/119353、WO 2011/131746和WO 2013/060867中所述；双抗体缀合物，例如，使用具有胺反应基团和硫氢基反应基团的异双官能试剂，通过抗体交联以产生双特异性结构，例如，如US4433059中所述；通过以下方式产生的双特异性抗体决定簇：借助两条重链之间二硫键的还原和氧化循环重组来自不同抗体的半部分抗体(重链-轻链对或Fab)，例如，如US 4444878中所述；三功能抗体，例如，通过巯基反应基团交联的三个Fab’片段，例如，如US5273743中所述；生物合成性结合蛋白，例如，通过C末端尾部、优选地通过二硫键或胺反应性化学交联作用交联的一对scFvs，例如，如US5534254中所述；双功能抗体，例如，通过已经替换恒定结构域的亮氨酸拉链(例如，c-fos和c-jun)二聚化的具有不同结合特异性的Fab片段，例如，如US5582996中所述；双特异性和寡特异性单价和寡价受体，例如，经一种抗体的CH1区和另一种抗体的VH区(一般具有缔合的轻链)之间的多肽间隔团连接的两种抗体(两个Fab片段)的VH-CH1区域，例如，如US5591828中所述；双特异性DNA-抗体缀合物，例如，通过双链DNA片段交联抗体或Fab片段，例如，如US5635602中所述；双特异性融合蛋白，例如，在两个scFv和完整恒定区域之间具有亲水螺旋肽接头的含有两个scFv的表达构建体，例如，如US5637481中所述；多价和多特异性结合蛋白，例如，多肽的二聚体，所述多肽具有含有Ig重链可变区的结合区的第一结构域和包含Ig轻链可变区的结合区的第二结构域，总体上称作双体抗体(还公开了产生双特异性、三特异性或四特异性分子的高级结构)，例如，如US5837242中所述；VL链和VH链连接的迷你抗体构建体，所述VL链和VH链还借助肽间隔团连接至抗体铰链区和CH3区，所述迷你抗体构建体可以二聚化以形成双特异性/多价分子，例如，如US5837821中所述；在任一个方向用短肽接头(例如，5或10个氨基酸)连接或根本没有接头的VH结构域和VL结构域，所述VH结构域和VL结构域可以形成二聚体以形成双特异性双体抗体；三聚体和四聚体，例如，如US5844094中所述；一系列通过肽键以可交联基团在C末端连接的VH结构域(或家族成员中的VL结构域)，所述结构域进一步与VL结构域缔合以形成一系列FV(或scFv)，例如，如US5864019中所述；和将VH结构域和VL结构域均通过肽接头连接的单一链结合多肽借助非共价交联或化学交联并入多价结构以使用scFV或双体抗体类型样式，形成例如同源双价、异源双价、三价和四价结构，例如，如US5869620中所述。例如以下文献中存在额外的示例性多特异性和双特异性分子及其产生方法：US5910573、US5932448、US5959083、US5989830、US6005079、US6239259、US6294353、US6333396、US6476198、US6511663、US6670453、US6743896、US6809185、US6833441、US7129330、US7183076、US7521056、US7527787、US7534866、US7612181、US2002/004587A1、US2002/076406A1、US2002/103345A1、US2003/207346A1、US2003/211078A1、US2004/219643A1、US2004/220388A1、US2004/242847A1、US2005/003403A1、US2005/004352A1、US2005/069552A1、US2005/079170A1、US2005/100543A1、US2005/136049A1、US2005/136051A1、US2005/163782A1、US2005/266425A1、US2006/083747A1、US2006/120960A1、US2006/204493A1、US2006/263367A1、US2007/004909A1、US2007/087381A1、US2007/128150A1、US2007/141049A1、US2007/154901A1、US2007/274985A1、US2008/050370A1、US2008/069820A1、US2008/152645A1、US2008/171855A1、US2008/241884A1、US2008/254512A1、US2008/260738A1、US2009/130106A1、US2009/148905A1、US2009/155275A1、US2009/162359A1、US2009/162360A1、US2009/175851A1、US2009/175867A1、US2009/232811A1、US2009/234105A1、US2009/263392A1、US2009/274649A1、EP346087A2、WO00/06605A2、WO02/072635A2、WO04/081051A1、WO06/020258A2、WO2007/044887A2、WO2007/095338A2、WO2007/137760A2、WO2008/119353A1、WO2009/021754A2、WO2009/068630A1、WO91/03493A1、WO93/23537A1、WO94/09131A1、WO94/12625A2、WO95/09917A1、WO96/37621A2、WO99/64460A1。上文所提及申请的内容是通过引用方式完整地并入本文。
在其他实施方案中，抗LAG-3抗体分子(例如，单特异性、双特异性或多特异性抗体分子)共价连接于(例如，融合于)另一个配偶体，例如，蛋白质，例如，一种、两种或更多种细胞因子，例如，作为融合分子，例如融合蛋白。在其他实施方案中，融合分子包含一种或多种蛋白质，例如，一种、两种或更多种细胞因子。在一个实施方案中，细胞因子是选自IL-1、IL-2、IL-12、IL-15或IL-21中一者、两者、三者或更多者的白介素(IL)。在一个实施方案中，双特异性抗体分子具有针对第一靶(例如，针对LAG-3)的第一结合特异性、针对第二靶(例如，PD-1或TIM-3)的第二结合特异性，并且是任选地与白介素(例如，IL-12)结构域(例如，全长IL-12或其部分)连接。
“融合蛋白”和“融合多肽”指具有共价连接在一起的至少两个部分的多肽，其中每个部分是具有不同特性的多肽。特性可以是生物学特性，如体外或体内活性。特性也可以是简单的化学特性或物理特性，如与靶分子结合、催化反应等。这两个部分可以通过单一肽键直接连接或通过肽接头连接，但是彼此符合可读框。
在一个实施方案中，抗体分子包含双体抗体(diabody)和单链分子以及抗体的抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2和Fv)。例如，抗体分子可以包括重链(H)可变结构域序列(本文中缩写为VH)和轻链(L)可变结构域序列(本文中缩写为VL)。在一个实施方案中，抗体分子包含一条重链和一条轻链或由其组成(在本文中称作半部分抗体)。在另一个例子中，抗体分子包含两个重链(H)可变结构域序列和两个轻链(L)可变结构域序列，因而形成两个抗原结合位点，如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(例如scFv)、单一可变域抗体、双体抗体(Dab)(双价和双特异性)和嵌合(例如，人源化)抗体，它们可以通过修饰完整抗体产生，或使用重组DNA技术从头合成的那些抗体分子。这些功能性抗体片段保留选择性地与其相应抗原或受体结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何抗体类别，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE并且来自任何抗体亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。抗体分子制备物可以是单克隆或多克隆的。抗体分子也可以是人抗体、人源化抗体、CDR移植抗体或体外生成的抗体。抗体可以具有例如选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗体还可以具有例如选自κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与术语“抗体”互换地使用。
抗体分子的抗原结合片段实例包括(i)Fab片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，一种包含由二硫键在铰链区连接的两个Fab片段的双价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；、(v)由VH域组成的双体抗体(dAb)片段；(vi)驼类或骆驼化可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)，参见，例如，Bird等人(1988)Science 242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)；(viii)单结构域抗体。使用本领域技术人员已知的常规技术，获得这些抗体片段，并且按照与完整抗体相同的方式筛选所述片段的用途。
术语“抗体”包括完整分子以及其功能性片段。可以改变(例如，突变)抗体的恒定区，旨在修饰抗体的特性(例如，旨在增加或下降以下一个或多个特性：Fc受体结合作用、抗体糖基化、半胱氨酸残基数目、效应细胞功能或补体功能)。
抗体分子也可以是单结构域抗体。单结构域抗体可以包括其互补决定区是单结构域多肽组成部分的抗体。例子包括但不限于重链抗体、天然缺少轻链的抗体、衍生自常规4-链抗体的单结构域抗体、工程化抗体和除衍生自抗体的那些支架之外的单结构域支架。单结构域抗体可以是现有技术的任何抗体，或将来的任何单结构域抗体。单结构域抗体可以衍生自任何物种，包括但不限于小鼠、人、骆驼、羊驼、鱼类、鲨鱼、山羊、兔和牛。根据本发明的另一个方面，单结构域抗体是天然存在的单结构域抗体，称作缺少轻链的重链抗体。这类单结构域抗体例如在WO 94/04678中公开。出于清晰原因，从天然缺少轻链的重链抗体衍生的这种可变结构域在本文中称作VHH或纳米体以将它与四链免疫球蛋白的常规VH区分。这种VHH分子可以衍生自骆驼属(Camelidae)物种(例如骆驼、羊驼、单峰驼、驼羊和原驼)中产生的抗体。除骆驼之外的其他物种可以产生天然缺少轻链的重链抗体；这类VHH处于本发明的范围内。
VH区和VL区可以再划分为超变区，称作“互补性决定区”(CDR)，其间插有更保守的区域，称作“构架区”(FR或FW)。
已经通过许多方法(参见，Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版,美国卫生和公众服务部,NIH出版编号91-3242；Chothia,C.等人(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；和Oxford Molecular's AbM抗体建模软件所使用的AbM定义)精确地界定构架区和CDR的范围。通常参见，例如，Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains.引自：Antibody Engineering LabManual(Duebel,S.和Kontermann,R.编著,Springer-Verlag,Heidelberg)。
如本文所用，术语“互补决定区”和“CDR”指在抗体可变区内部赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。通常，在每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)并且在每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
可以使用多种熟知方案的任一者，确定给定CDR的精确氨基酸序列界限，所述的熟知方案包括由Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest”,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)描述的那些。如本文所用，“Chothia”编号方案的CDR定义有时还称作“高变环”。
例如，根据Kabat，将重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且将在轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。根据Chothia，将VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且将VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过组合Kabat和Chothia二者的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)以及人VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)组成。
通常，除非专门指出，否则抗LAG-3抗体分子可以包括一种或多种KabatCDR和/或Chothia高变环的任何组合。在一个实施方案中，以下定义用于抗LAG-3抗体分子：根据Kabat和Chothia的联合CDR定义的HCDR1和根据Kabat的CDR定义的HCCDR 2-3及LCCDR 1-3。根据全部定义，每个VH和VL一般包含按以下顺序从氨基端至羧基端排列的三个CDR和四个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”指可以形成免疫球蛋白可变结构域的结构的氨基酸序列。例如，该序列可以包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可以包括或可以不包括一个、两个或更多个N-或C端氨基酸或可以包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。
术语“抗原结合位点”指包含决定簇的抗体分子组成部分，所述决定簇形成与LAG-3多肽或其表位结合的界面。相对于蛋白质(或蛋白质模似物)而言，抗原结合位点一般包括形成与LAG-3多肽结合的界面的一个或多个环(具有至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)。一般，抗体分子的抗原结合位点包含至少一个或两个CDR和/或高变环，或更一般地至少三、四、五或六个CDR和/或高变环。
术语“竞争”或“交叉竞争”在本文中可互换地用来指抗体分子干扰抗LAG-3抗体分子(例如，本文中提供的抗LAG-3抗体分子)与靶(例如，人LAG-3)结合的能力。对结合作用的干扰可以是直接或间接的(例如，通过抗体分子或靶的变构调节作用)。可以使用竞争结合测定法(例如，FACS测定法、ELISA或BIACORE测定法)确定抗体分子能够干扰另一种抗体分子与其靶结合的程度并且是否因此可以称它为竞争。在一些实施方案中，竞争结合测定法是定量性竞争测定法。在一些实施方案中，当第一抗体分子在竞争结合测定法(例如，本文所述的竞争测定法中)与靶的结合减少10％或更多，例如，20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多、98％或更多、99％或更多时，将第一抗LAG-3抗体分子称为与第二抗LAG-3抗体分子竞争与靶结合。
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指具有单一分子组成的抗体分子的制备物。一种单克隆抗体组合物对特定表位显示单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或通过不使用杂交瘤技术的方法(例如，重组方法)产生。
“有效人源化(effectively human)”蛋白质是不激发中和抗体反应(例如，人抗鼠抗体例如(HAMA)反应)的蛋白质。例如，如果反复施用抗体分子(例如，在治疗慢性或复发性疾病状况下)，则HAMA可以在许多情景下棘手。HAMA反应可以令重复的抗体施用潜在地无效，原因是抗体从血清中的清除增加(参见，例如，Saleh等人,CancerImmunol.Immunother.32:180-190(1990))并且还因为潜在过敏反应(参见，例如，LoBuglio等人,Hybridoma,5:5117-5123(1986))。
抗体分子可以是多克隆或单克隆抗体。在其他实施方案中，可以重组地产生抗体，例如，通过噬菌体展示法或通过组合方法产生。
产生抗体的噬菌体展示法和组合方法是本领域已知的(如以下文献中所述，例如，Ladner等人美国专利号5,223,409；Kang等人国际公开号WO 92/18619；Dower等人国际公开号WO 91/17271；Winter等人国际公开WO 92/20791；Markland等人国际公开号WO 92/15679；Breitling等人国际公开WO 93/01288；McCafferty等人国际公开号WO 92/01047；Garrard等人国际公开号WO 92/09690；Ladner等人国际公开号WO 90/02809；Fuchs等人(1991)Bio/Technology 9:1370-1372；Hay等人(1992)Hum Antibod Hybridomas 3:81-85；Huse等人(1989)Science246:1275-1281；Griffths等人(1993)EMBO J 12:725-734；Hawkins等人(1992)J Mol Biol 226:889-896；Clackson等人(1991)Nature 352:624-628；Gram等人(1992)PNAS 89:3576-3580；Garrad等人(1991)Bio/Technology 9:1373-1377；Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res 19:4133-4137；和Barbas等人(1991)PNAS 88:7978-7982，所述全部文献的内容均通过引用的方式并入本文)。
在一个实施方案中，抗体是全人抗体(例如，在已经被基因工程化，以从人免疫球蛋白序列产生抗体的小鼠中产生的抗体)或非人类抗体，例如，啮齿类(小鼠或大鼠)抗体、山羊抗体、灵长类(例如，猴)抗体、骆驼抗体。优选地，非人类抗体是啮齿类(小鼠或大鼠)抗体。产生啮齿类抗体的方法是本领域已知的。
可以使用携带人免疫球蛋白基因而非小鼠***的转基因小鼠，产生人单克隆抗体。采用目的抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞用来产生杂交瘤，所述杂交瘤分泌对来自人蛋白质的表位具有特异性亲和力的人mAb(参见，例如，Wood等人,国际申请WO 91/00906；Kucherlapati等人,PCT公开WO 91/10741；Lonberg等人,国际申请WO 92/03918；Kay等人,国际申请92/03917；Lonberg,N.等人,1994 Nature 368:856-859；Green,L.L.等人,1994 Nature Genet.7:13-21；Morrison,S.L.等人,1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855；Bruggeman等人,1993 Year Immunol 7:33-40；Tuaillon等人,1993 PNAS 90:3720-3724；Bruggeman等人,1991 Eur J Immunol 21:1323-1326)。
抗体可以是其中可变区或其部分(例如，CDR)在非人类生物(例如，大鼠或小鼠)中生成的一种抗体。嵌合抗体、CDR移植抗体和人源化抗体处于本发明范围内。在非人类生物(例如，大鼠或小鼠)中生成并且随后在可变构架或恒定区中修饰以减少人类中抗原性的抗体处于本发明范围内。
可以通过本领域已知的重组DNA技术产生嵌合抗体(参见Robinson等人，国际专利公布PCT/US86/02269；Akira等人，欧洲专利申请184,187；Taniguchi.M.，欧洲专利申请171,496；Morrison等人，欧洲专利申请173,494；Neuberger等人，国际申请WO 86/01533；Cabilly等人，美国专利号4,816,567；Cabilly等人，欧洲专利申请125,023；Better等人,(1988 Science 240:1041-1043)；Liu等人(1987)PNAS 84:3439-3443；Liu等人,1987,J.Immunol.139:3521-3526；Sun等人(1987)PNAS84:214-218；Nishimura等人,1987,Canc.Res.47:999-1005；Wood等人(1985)Nature 314:446-449；和Shaw等人,1988,J.NatlCancer Inst.80:1553-1559)。
人源化抗体或CDR移植抗体将使得至少一个或两个、但是通常全部三个(免疫球蛋白重链和或轻链的)受者CDR替换为供者CDR。抗体可以更换为非人类CDR的至少一部分或仅一些CDR可以更换为非人类CDR。仅需要更换人源化抗体与PD-1结合所需要的CDR数目。优选地，供者将是啮齿类抗体，例如，大鼠或小鼠抗体，并且受者将是人类构架或人共有构架。一般，提供CDR的免疫球蛋白称作“供者”并且提供构架的免疫球蛋白称作“接纳体”。在一个实施方案中，供者免疫球蛋白是非人类(例如，啮齿类)的。接纳体构架是天然存在的(例如，人类构架或共有构架或与之约85％或更高、优选地90％、95％、99％或更高同一性的序列)。
如本文所用，术语“共有性序列”指从相关序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)中形成的序列(参见，例如，Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,德国1987))。在蛋白家族中，共有序列中的每个位置由该家族中这个位置处出现最频繁的氨基酸占据。如果两个氨基酸以相同频率出现，则可以在共有序列中包括任一个。“共有性构架”指共有性免疫球蛋白序列中的构架区。
抗体可以通过本领域已知的方法人源化(参见，例如，Morrison,S.L.,1985,Science 229:1202-1207；通过Oi等人,1986,BioTechniques 4:214并且通过Queen等人US5,585,089、US 5,693,761和US 5,693,762，所述全部文献的内容因而通过引用的方式并入)。
可以通过CDR移植或CDR置换产生人源化抗体或CDR移植抗体，其中可以替换免疫球蛋白链一个、两个或全部CDR。参见，例如，美国专利5,225,539；Jones等人,1986 Nature321:552-525；Verhoeyan等人,1988 Science 239:1534；Beidler等人,1988J.Immunol.141:4053-4060；Winter US 5,225,539，所述全部文献的内容因而明确地通过引用的方式并入。Winter描述了一种可以用来制备本发明人源化抗体的CDR移植方法(1987年3月26日提交的英国专利申请GB 2188638A；Winter US 5,225,539)，所述文献的内容明确地通过引用的方式并入。
也处于本发明的范围内是其中已经置换、缺失或添加特定氨基酸的人源化抗体。从供者选择氨基酸的标准在US 5,585,089，例如，US 5,585,089的第12-16栏，例如，US 5,585,089的第12-16栏中描述，所述文献的内容因而通过引用的方式并入。1992年12月23日公开的Padlan等人EP 519596A1中描述了使抗体人源化的其他技术。
抗体分子可以是单链抗体。单链抗体(scFV)可以工程化(参见，例如，Colcher,D.等人(1999)Ann N Y Acad Sci 880:263-80；和Reiter,Y.(1996)Clin Cancer Res 2:245-52)。单链抗体可以二聚化或多聚化以产生对相同靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。
在另外的其他实施方案中，抗体分子具有例如选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区中；特别地，例如选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的(例如，人)重链恒定区中的重链恒定区。在另一个实施方案中，抗体分子具有例如选自κ或λ的(例如，人)轻链恒定区中的轻链恒定区。可以改变恒定区，旨在修饰抗体的特性(例如，旨在增加或下降以下一个或多个特性：Fc受体结合作用、抗体糖基化、半胱氨酸残基数目、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方案中抗体具有：效应子功能；并且可以固定补体。在其他实施方案中抗体不；招募效应细胞；或不固定补体。在另一个实施方案中，抗体具有结合Fc受体的减弱能力或没有这种能力。例如，它是不支持与Fc受体结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如，它具有诱变的或缺失的Fc受体结合区域。
用于改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。可以通过将抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基替换为不同残基，产生功能改变(例如，对效应子配体(如细胞上的FcR或补体C1组分)的亲和力改变)的抗体(参见，例如，EP 388,151A1、美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260，所述全部文献的内容因而通过引用的方式并入)。可以描述相似类型的改变，其中如果应用于鼠或其他物种免疫球蛋白，所述改变将减少或消除这些功能。
抗体分子可以用另一种功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)衍生化或与之连接。如本文所用，“衍生化的”抗体分子是已经被修饰的一种抗体分子。衍生化方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体如生物素。因此，本发明的抗体分子意在包括衍生化和否则修饰形式的本文所述抗体，包括免疫黏附分子。例如，抗体分子可以功能性连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方式)至一个或多个其他分子实体，如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双体抗体)、可检测物质、细胞毒药物、药剂(pharmaceutical agent)和/或可以介导所述抗体或抗体部分与另一种分子结合的蛋白质或肽(如，链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)。
通过交联两种或更多种抗体(相同类型或不同类型，例如，以产生双特异性抗体)产生一个类型的衍生化抗体分子。合适的交联剂包括这些试剂，它们是异双官能的，具有由适宜间隔序列分隔的两个不同反应性基团(例如，间-马来酰亚胺基苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯)，或同双官能的(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)。这类接头从Pierce ChemicalCompany,Rockford,Ill可获得。
可以用其衍生(或标记)化本发明的抗体分子的可用可检测物质包括荧光化合物、多种酶、辅基、发光物质、生物发光物质、发射荧光的金属原子，例如，铕(Eu)和其他镧系元素和放射性物质(下文描述)。示例性荧光的可检测物质包括荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。抗体也可以用可检测的酶，如碱性磷酸酶、辣根过氧化物、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等衍生化。当抗体用可检测的酶衍生化时，通过添加这种酶用来产生可检测反应产物的额外试剂而检测所述抗体。例如，当可检测物质辣根过氧化物存在时，添加过氧化氢和二氨基联苯胺导致有色的反应产物，其是可检测的。抗体分子也可以用辅基(例如，链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素)衍生化。例如，抗体可以用生物素衍生化并且通过间接测量抗生物素蛋白或链霉亲和素结合作用而检出。合适荧光物质的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光物质的例子包括鲁米诺；和生物发光物质的例子包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白。
标记的抗体分子可以在多种背景下例如诊断性和/或实验性使用，所述背景包括(i)通过标准技术(如亲和色谱或免疫沉淀法)分离预定的抗原；(ii)检测(例如，细胞裂解物或细胞上清液中)的预定抗原，以评价蛋白质的丰度和表达模式；(iii)作为临床检验方法的组成部分，监测组织中的蛋白质水平，例如，以便确定给定治疗方案的有效性。
抗体分子可以缀合至另一个分子实体，一般为标记物或治疗药(例如，细胞毒或细胞抑制药物)或部分。放射性同位素可以用于诊断应用或治疗应用中。
本发明提供放射标记的抗体分子和标记抗体分的方法。在一个实施方案中，公开了一种标记抗体分子的方法。该方法包括使抗体分子与螯合剂接触，因而产生缀合的抗体。
如上文讨论，抗体分子可以缀合至治疗药。已经提到有治疗活性的放射性同位素。其他治疗药的例子包括紫杉酚、松胞菌素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、佐柔比星、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、***、嘌呤霉素、类美登素(maytansinoid)，例如，美登醇(例如，参见美国专利号5,208,020)、CC-1065(例如，参见美国专利号5,475,092、5,585,499、5,846,545)及其类似物或同源物。治疗药包括但不限于抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪)、烷基化剂(例如，氮芥、硫代苯丁酸氮芥、CC-1065、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和罗莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C和顺-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类(例如，佐柔比星(以前柔红霉素)和多柔比星)、抗生素(例如，更生霉素(dactinomycin)(前称放线菌素D)、博来霉素、光神霉素和安曲霉素(AMC))和抗有丝***剂(例如，长春新碱、长春碱、紫杉酚和类美登素)。
在一个方面，本公开提供一种提供与本文公开的靶(例如，LAG-3)特异性结合的靶结合性分子的方法。例如，靶结合性分子是抗体分子。该方法包括：提供包含非人类蛋白质的至少一部分的靶蛋白，所述部分与人类靶蛋白的相应部分同源(与之具有至少70％、75％、80％、85％、87％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％相同)，但是差异至少一个氨基酸(例如，至少一、二、三、四、五、六、七、八或九个氨基酸)；获得与抗原特异性结合的抗体分子；并且评价结合物调节靶蛋白活性的有效性。该方法还可以包括施用结合物(例如，抗体分子)或衍生物(例如，人源化抗体分子)至人类受试者。
本公开提供编码上述抗体分子的分离的核酸分子、其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于RNA、基因组DNA和cDNA。
示例性抗LAG-3抗体分子
在一个实施方案中，LAG-3抑制剂是如2015年9月17日公开的名为“针对LAG-3的抗体分子及其用途”的US 2015/0259420中披露的抗LAG-3抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个五个或六个互补决定区(或总体上全部CDR)，所述重链可变区和轻链可变区包含表5中所示(例如，来自表5中公开的BAP050-克隆I或BAP050-克隆J的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表5中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据Kabat定义(例如，如表5中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据Chothia定义(例如，如表5中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据(例如，如表5中所述的)Kabat和Chothia的联合CDR定义限定CDR。在一个实施方案中，VH CDR1的Kabat和Chothia CDR组合包含氨基酸序列GFTLTNYGMN(SEQ ID NO:766)。在一个实施方案中，相对于表5中所示的或由表5中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换(例如，保守性氨基酸置换)或缺失。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:702的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:703的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:710的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:711的氨基酸序列VLCDR2和SEQ ID NO:712的氨基酸序列的VLCDR3，其各自在表5中公开。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含由SEQ ID NO:736或737的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:738或739的核苷酸序列编码的VHCDR2和由SEQ ID NO:740或741的核苷酸序列编码的VHCDR3；所述VL包含由SEQ ID NO:746或747的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ ID NO:748或749的核苷酸序列编码的VLCDR2和由SEQ IDNO:750或751的核苷酸序列编码的VLCDR3，其各自在表5中公开。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含由SEQ ID NO:758或737的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:759或739的核苷酸序列编码的VHCDR2和由SEQ ID NO:760或741的核苷酸序列编码的VHCDR3；所述VL包含由SEQ ID NO:746或747的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ IDNO:748或749的核苷酸序列编码的VLCDR2和由SEQ ID NO:750或751的核苷酸序列编码的VLCDR3，其各自在表5中公开。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列或与SEQ ID NO:706具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列或与SEQ ID NO:718具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:724的氨基酸序列或与SEQ IDNO:724具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:730的氨基酸序列或与SEQ ID NO:730具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:724的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:730的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:707或708的核苷酸序列或与SEQ ID NO:707或708具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:719或720的核苷酸序列或与SEQ ID NO:719或720具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:725或726的核苷酸序列或与SEQID NO:725或726具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:731或732的核苷酸序列或与SEQ IDNO:731或732具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:707或708的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:719或720的核苷酸序列编码的VL。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:725或726的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:731或732的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:709的氨基酸序列或与SEQ ID NO:709具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:721的氨基酸序列或与SEQ ID NO:721具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:727的氨基酸序列或与SEQ ID NO:727具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:733的氨基酸序列或与SEQ ID NO:733具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:709的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:721的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:727的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:733的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:716或717的核苷酸序列或与SEQ ID NO:716或717具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:722或723的核苷酸序列或与SEQ ID NO:722或723具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:728或729的核苷酸序列或与SEQ ID NO:728或729具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:734或735的核苷酸序列或与SEQ ID NO:734或735具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:716或717的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:722或723的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:728或729的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:734或735的核苷酸序列编码的轻链。
可以通过US 2015/0259420中描述的载体、宿主细胞和方法产生本文所述的抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
表5.其他示例性抗LAG-3抗体分子的氨基酸序列和核苷酸序列
Figure BDA0002415648750000811
Figure BDA0002415648750000821
Figure BDA0002415648750000831
Figure BDA0002415648750000841
Figure BDA0002415648750000851
Figure BDA0002415648750000861
Figure BDA0002415648750000871
Figure BDA0002415648750000881
Figure BDA0002415648750000891
Figure BDA0002415648750000901
Figure BDA0002415648750000911
Figure BDA0002415648750000921
Figure BDA0002415648750000931
Figure BDA0002415648750000941
Figure BDA0002415648750000951
Figure BDA0002415648750000961
Figure BDA0002415648750000971
Figure BDA0002415648750000981
Figure BDA0002415648750000991
Figure BDA0002415648750001001
Figure BDA0002415648750001011
Figure BDA0002415648750001021
Figure BDA0002415648750001031
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包括至少一个或两个重链可变结构域(任选地包含恒定区)、至少一个或两个轻链可变结构域(任选地包含恒定区)或这两者，所述可变结构域包含BAP050-hum01、BAP050-hum02、BAP050-hum03、BAP050-hum04、BAP050-hum05、BAP050-hum06、BAP050-hum07、BAP050-hum08、BAP050-hum09、BAP050-hum10、BAP050-hum11、BAP050-hum12、BAP050-hum13、BAP050-hum14、BAP050-hum15、BAP050-hum16、BAP050-hum17、BAP050-hum18、BAP050-hum19、BAP050-hum20、huBAP050(Ser)(例如，BAP050-hum01-Ser、BAP050-hum02-Ser、BAP050-hum03-Ser、BAP050-hum04-Ser、BAP050-hum05-Ser、BAP050-hum06-Ser、BAP050-hum07-Ser、BAP050-hum08-Ser、BAP050-hum09-Ser、BAP050-hum10-Ser、BAP050-hum11-Ser、BAP050-hum12-Ser、BAP050-hum13-Ser、BAP050-hum14-Ser、BAP050-hum15-Ser、BAP050-hum18-Ser、BAP050-hum19-Ser或BAP050-hum20-Ser)、BAP050-克隆-F、BAP050-克隆-G、BAP050-克隆-H、BAP050-克隆-I或BAP050-克隆-J中任一者的氨基酸序列；或如US 2015/0259420的表1中所述的氨基酸序列或由表1中的核苷酸序列编码的氨基酸序列；或与任一前述序列基本上相同(例如，具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
在又一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包括至少一个、两个、或三个互补决定区(CDR)，所述互补决定区来自本文所述的抗体(例如，选自BAP050-hum01、BAP050-hum02、BAP050-hum03、BAP050-hum04、BAP050-hum05、BAP050-hum06、BAP050-hum07、BAP050-hum08、BAP050-hum09、BAP050-hum10、BAP050-hum11、BAP050-hum12、BAP050-hum13、BAP050-hum14、BAP050-hum15、BAP050-hum16、BAP050-hum17、BAP050-hum18、BAP050-hum19、BAP050-hum20、huBAP050(Ser)(例如，BAP050-hum01-Ser、BAP050-hum02-Ser、BAP050-hum03-Ser、BAP050-hum04-Ser、BAP050-hum05-Ser、BAP050-hum06-Ser、BAP050-hum07-Ser、BAP050-hum08-Ser、BAP050-hum09-Ser、BAP050-hum10-Ser、BAP050-hum11-Ser、BAP050-hum12-Ser、BAP050-hum13-Ser、BAP050-hum14-Ser、BAP050-hum15-Ser、BAP050-hum18-Ser、BAP050-hum19-Ser或BAP050-hum20-Ser)、BAP050-克隆-F、BAP050-克隆-G、BAP050-克隆-H、BAP050-克隆-I或BAP050-克隆-J中任一者的抗体)的重链可变区和/或轻链可变区；或如US 2015/0259420的表1中所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或包括与任一前述序列基本上相同(例如，具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
在又一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或总体上全部CDR)，所述重链可变区包含在US 2015/0259420的表1中显示或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，相对于表1中所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换或缺失。
在又一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或总体上全部CDR)，所述轻链可变区包含在US 2015/0259420的表1中显示或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，相对于表1中所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换或缺失。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体分子包括在轻链CDR中的置换，例如，在轻链的CDR1、CDR2和/或CDR3中的一个或多个置换。
在又一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(或总体上全部CDR)，所述重链可变区和轻链可变区包含US 2015/0259420的表1中所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，相对于表1中所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换或缺失。
其他示例性抗LAG-3抗体分子
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)，也称作BMS986016。WO 2015/116539和US9,505,839中公开了BMS-986016和其他抗LAG-3抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含BMS-986016的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表6中公开。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是TSR-033(Tesaro)。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含TSR-033的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是IMP731或GSK2831781(GSK和PrimaBioMed)。WO 2008/132601和US 9,244,059中公开了IMP731和其他抗LAG-3抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含IMP731的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表6中公开。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含GSK2831781的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子是IMP761(Prima BioMed)。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子包含IMP761的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
其他已知的抗LAG-3抗体包括例如在WO 2008/132601、WO 2010/019570、WO 2014/140180、WO 2015/116539、WO 2015/200119、WO 2016/028672、US 9,244,059、US 9,505,839中描述的那些，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗LAG-3抗体是这样的抗体，其与本文所述的抗LAG-3抗体之一竞争结合LAG-3上的相同表位，和/或与其竞争结合于所述相同表位。
在一个实施方案中，抗LAG-3抑制剂是可溶性LAG-3蛋白，例如，IMP321(PrimaBioMed)，例如，如WO 2009/044273中公开，所述文献通过引用的方式完整并入。
表6.其他示例性抗LAG-3抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0002415648750001061
Figure BDA0002415648750001071
Figure BDA0002415648750001081
PD-1抑制剂
在某些实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与PD-1抑制剂组合施用。在一些实施方案中，PD-1抑制剂选自PDR001或Spartalizumab(Novartis)、纳武单抗(Bristol-Myers Squibb)、派姆单抗(Pembrolizumab)(Merck&Co)、Pidilizumab(CureTech)、MEDI0680(Medimmune)、REGN2810(Regeneron)、TSR-042(Tesaro)、PF-06801591(辉瑞公司)、BGB-A317(Beigene)、BGB-108(Beigene)、INCSHR1210(Incyte)或AMP-224(Amplimmune)。
示例性PD-1抑制剂
在一个实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子。在一个实施方案中，PD-1抑制剂是如2015年7月30日公开的名为“针对PD-1的抗体分子及其用途”的US 2015/0210769中所述的抗PD-1抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个五个或六个互补决定区(或总体上全部CDR)，所述重链可变区和轻链可变区包含表1中所示(例如，来自表1中公开的BAP049-克隆-E或BAP049-克隆-B的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据Kabat定义(例如，如表1中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据Chothia定义(例如，如表1中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据(例如，如表1中所述的)Kabat和Chothia的联合CDR定义限定CDR。在一个实施方案中，VH CDR1的Kabat和ChothiCDR组合包含氨基酸序列GYTFTTYWMH(SEQ ID NO:541)。在一个实施方案中，相对于表1中所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换(例如，保守性氨基酸置换)或缺失。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:501的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:502的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:503的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:510的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:511的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:512的氨基酸序列的VLCDR3，其各自在表1中公开。
在一个实施方案中，抗体分子包含VH和VL，所述VH包含由SEQ ID NO:524的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:525的核苷酸序列编码的VHCDR2和由SEQ ID NO:526的核苷酸序列编码的VHCDR3；所述VL包含由SEQ ID NO:529的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQID NO:530的核苷酸序列编码的VLCDR2和由SEQ ID NO:531的核苷酸序列编码的VLCDR3，其各自在表1中公开。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:506的氨基酸序列或与SEQ ID NO:506具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:520的氨基酸序列或与SEQ ID NO:520具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:516的氨基酸序列或与SEQ ID NO:516具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:506的氨基酸序列，所述VL包含SEQ IDNO:520的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ IDNO:506的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:516的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:507的核苷酸序列或与SEQ ID NO:507具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:521或517的核苷酸序列或与SEQ IDNO:521或517具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:507的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:521或517的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:508的氨基酸序列或与SEQ ID NO:508具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:522的氨基酸序列或与SEQ ID NO:522具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:518的氨基酸序列或与SEQ ID NO:518具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:508的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:522的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:508的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:518的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:509的核苷酸序列或与SEQ ID NO:509具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:523或519的核苷酸序列或与SEQ ID NO:523或519具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:509的核苷酸序列编码的重链和由SEQ IDNO:523或519的核苷酸序列编码的轻链。
可以通过US 2015/0210769中描述的载体、宿主细胞和方法产生本文所述的抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
表1.示例性抗PD-1抗体分子的氨基酸序列和核苷酸序列
Figure BDA0002415648750001111
Figure BDA0002415648750001121
Figure BDA0002415648750001131
Figure BDA0002415648750001141
Figure BDA0002415648750001151
Figure BDA0002415648750001161
Figure BDA0002415648750001171
Figure BDA0002415648750001181
Figure BDA0002415648750001191
Figure BDA0002415648750001201
Figure BDA0002415648750001211
Figure BDA0002415648750001221
Figure BDA0002415648750001231
Figure BDA0002415648750001241
其他示例性PD-1抑制剂
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗(Bristol-Myers Squibb)，也称作MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或
Figure BDA0002415648750001243
US 8,008,449和WO2006/121168中公开了纳武单抗(克隆5C4)和其他抗PD-1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含纳武单抗的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表2中公开。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是派姆单抗(Merck&Co)，也称作Lambrolizumab、MK-3475、MK03475、SCH-900475或
Figure BDA0002415648750001242
Hamid,O.等人(2013)New England Journal of Medicine 369(2):134–44、US 8,354,509和WO 2009/114335中公开了派姆单抗和其他抗PD-1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含派姆单抗的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表2中公开。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是Pidilizumab(CureTech)，也称作CT-011。Rosenblatt,J.等人(2011)J Immunotherapy 34(5):409-18、US 7,695,715、US 7,332,582和US 8,686,119中公开了Pidilizumab和其他抗PD-1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含Pidilizumab的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表2中公开。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是MEDI0680(Medimmune)，也称作AMP-514。US9,205,148和WO 2012/145493中公开了MEDI0680和其他抗PD-1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含MEDI0680的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是REGN2810(Regeneron)。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含REGN2810的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是PF-06801591(Pfizer)。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含PF-06801591的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是BGB-A317或BGB-108(Beigene)。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BGB-A317或BGB-108的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是INCSHR1210(Incyte)，也称作INCSHR01210或SHR-1210。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含INCSHR1210的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是TSR-042(Tesaro)，也称作ANB011。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含TSR-042的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
其他已知的抗PD-1抗体包括例如在WO 2015/112800、WO 2016/092419、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2014/194302、WO 2014/209804、WO 2015/200119、US 8,735,553、US 7,488,802、US 8,927,697、US 8,993,731和US 9,102,727中描述的那些，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体是这样的抗体，其与如本文所述的抗PD-1抗体之一竞争结合PD-1上的相同表位，和/或与其竞争结合于所述表位。
在一个实施方案中，PD-1抑制剂是抑制PD-1信号传导途径的肽，例如，如US 8,907,053中所述，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，PD-1抑制剂是免疫黏附素(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分的免疫黏附素)。在一个实施方案中，PD-1抑制剂是AMP-224(B7-DCIg(Amplimmune)，例如，在WO 2010/027827和WO 2011/066342中公开，所述文献通过引用的方式完整并入)。
表2.其他示例性抗PD-1抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0002415648750001261
Figure BDA0002415648750001271
Figure BDA0002415648750001281
Figure BDA0002415648750001291
PD-L1抑制剂
在某些实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与PD-L1抑制剂组合施用。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂选自FAZ053(Novartis)、阿特朱单抗(Genentech/Roche)、阿维鲁单抗(Merck Serono and Pfizer)、德瓦鲁单抗(MedImmune/AstraZeneca)或BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)。
示例性PD-L1抑制剂
在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是如2016年4月21日公开的名为“针对PD-L1的抗体分子及其用途”的US 2016/0108123中披露的抗PD-L1抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个五个或六个互补决定区(或总体上全部CDR)，所述重链可变区和轻链可变区包含表3中所示(例如，来自表3中公开的BAP058-克隆O或BAP058-克隆N的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表3中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据Kabat定义(例如，如表3中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据Chothia定义(例如，如表3中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据(例如，如表3中所述的)Kabat和Chothia的联合CDR定义限定CDR。在一个实施方案中，VH CDR1的Kabat和Chothia CDR组合包含氨基酸序列GYTFTSYWMY(SEQ ID NO:647)。在一个实施方案中，相对于表3中所示的或由表3中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换(例如，保守性氨基酸置换)或缺失。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:601的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:602的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:603的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:609的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:610的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:611的氨基酸序列的VLCDR3，其各自在表3中公开。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含VH和VL，所述VH包含由SEQ ID NO:628的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:629的核苷酸序列编码的VHCDR2和由SEQ IDNO:630的核苷酸序列编码的VHCDR3；所述VL包含由SEQ ID NO:633的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ ID NO:634的核苷酸序列编码的VLCDR2和由SEQ ID NO:635的核苷酸序列编码的VLCDR3，其各自在表3中公开。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:606的氨基酸序列或与SEQ ID NO:606具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:616的氨基酸序列或与SEQ ID NO:616具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:620的氨基酸序列或与SEQ IDNO:620具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:624的氨基酸序列或与SEQ ID NO:624具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:606的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:616的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:620的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:624的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:607的核苷酸序列或与SEQ ID NO:607具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:617的核苷酸序列或与SEQ ID NO:617具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:621的核苷酸序列或与SEQ ID NO:621具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:625的核苷酸序列或与SEQ ID NO:625具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:607的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:617的核苷酸序列编码的VL。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:621的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:625的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:608的氨基酸序列或与SEQ ID NO:608具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:618的氨基酸序列或与SEQ ID NO:618具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:622的氨基酸序列或与SEQ ID NO:622具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:626的氨基酸序列或与SEQ ID NO:626具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:608的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:618的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:622的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:626的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:615的核苷酸序列或与SEQ ID NO:615具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:619的核苷酸序列或与SEQ IDNO:619具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:623的核苷酸序列或与SEQ ID NO:623具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:627的核苷酸序列或与SEQ ID NO:627具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:615的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:619的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:623的核苷酸序列编码的重链和由SEQ IDNO:627的核苷酸序列编码的轻链。
可以通过US 2016/0108123中描述的载体、宿主细胞和方法产生本文所述的抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
表3.示例性抗PD-L1抗体分子的氨基酸序列和核苷酸序列
Figure BDA0002415648750001321
Figure BDA0002415648750001331
Figure BDA0002415648750001341
Figure BDA0002415648750001351
Figure BDA0002415648750001361
Figure BDA0002415648750001371
Figure BDA0002415648750001381
Figure BDA0002415648750001391
Figure BDA0002415648750001401
Figure BDA0002415648750001411
Figure BDA0002415648750001421
Figure BDA0002415648750001431
Figure BDA0002415648750001441
Figure BDA0002415648750001451
其他示例性PD-L1抑制剂
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子是阿特朱单抗(Genentech/Roche)，也称作MPDL3280A、RG7446、RO5541267、YW243.55.S70或TECENTRIQTM。US 8,217,149中公开了阿特朱单抗和其他抗PD-L1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含阿特朱单抗的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表4中公开。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子是阿维鲁单抗(Merck Serono andPfizer)，也称作MSB0010718C。WO 2013/079174中公开了阿维鲁单抗和其他抗PD-L1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含阿维鲁单抗的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表4中公开。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子是德瓦鲁单抗(MedImmune/AstraZeneca)，也称作MEDI4736。US 8,779,108中公开了德瓦鲁单抗和其他抗PD-L1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含德瓦鲁单抗的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表4中公开。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子是BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)，也称作MDX-1105或12A4。US 7,943,743和WO 2015/081158中公开了BMS-936559和其他抗PD-L1抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体分子包含BMS-936559的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表4中公开。
其他已知的抗PD-L1抗体包括例如在WO 2015/181342、WO 2014/100079、WO 2016/000619、WO 2014/022758、WO 2014/055897、WO 2015/061668、WO 2013/079174、WO 2012/145493、WO 2015/112805、WO 2015/109124、WO 2015/195163、US 8,168,179、US 8,552,154、US 8,460,927和US 9,175,082中描述的那些，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体是这样的抗体，其与如本文所述的抗PD-L1抗体之一竞争结合PD-L1上的相同表位，和/或与其竞争结合于所述表位。
表4.其他示例性抗PD-L1抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0002415648750001471
Figure BDA0002415648750001481
Figure BDA0002415648750001491
Figure BDA0002415648750001501
TIM-3抑制剂
在某些实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与TIM-3抑制剂组合施用。在一些实施方案中，TIM-3抑制剂是MGB453(Novartis)或TSR-022(Tesaro)。
示例性TIM-3抑制剂
在一个实施方案中，TIM-3抑制剂是抗TIM-3抗体分子。在一个实施方案中，TIM-3抑制剂是如2015年8月6日公开的名为“针对TIM3的抗体分子及其用途”的US 2015/0218274中披露的抗TIM-3抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个五个或六个互补决定区(或总体上全部CDR)，所述重链可变区和轻链可变区包含表7中所示(例如，来自表7中公开的ABTIM3-hum11或ABTIM3-hum03的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表7中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据Kabat定义(例如，如表7中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据Chothia定义(例如，如表7中所述)限定CDR。在一个实施方案中，相对于表7中所示的或由表7中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换(例如，保守性氨基酸置换)或缺失。
在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:801的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:802的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:803的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:810的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:811的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:812的氨基酸序列的VLCDR3，其各自在表7中公开。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:801的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ IDNO:820的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:803的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:810的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:811的氨基酸序列的VLCDR2和SEQID NO:812的氨基酸序列的VLCDR3，其各自在表7中公开。
在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:806的氨基酸序列或与SEQ ID NO:806具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:816的氨基酸序列或与SEQ ID NO:816具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:822的氨基酸序列或与SEQ IDNO:822具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:826的氨基酸序列或与SEQ ID NO:826具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:806的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:816的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:822的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:826的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:807的核苷酸序列或与SEQ ID NO:807具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:817的核苷酸序列或与SEQ ID NO:817具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:823的核苷酸序列或与SEQ ID NO:823具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:827的核苷酸序列或与SEQ ID NO:827具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:807的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:817的核苷酸序列编码的VL。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:823的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:827的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:808的氨基酸序列或与SEQ ID NO:808具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:818的氨基酸序列或与SEQ ID NO:818具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:824的氨基酸序列或与SEQ ID NO:824具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:828的氨基酸序列或与SEQ ID NO:828具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:808的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:818的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:824的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:828的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:809的核苷酸序列或与SEQ ID NO:809具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:819的核苷酸序列或与SEQ IDNO:819具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:825的核苷酸序列或与SEQ ID NO:825具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:829的核苷酸序列或与SEQ ID NO:829具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:809的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:819的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:825的核苷酸序列编码的重链和由SEQ IDNO:829的核苷酸序列编码的轻链。
可以通过US 2015/0218274中描述的载体、宿主细胞和方法产生本文所述的抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
表7.示例性抗TIM-3抗体分子的氨基酸序列和核苷酸序列
Figure BDA0002415648750001531
Figure BDA0002415648750001541
Figure BDA0002415648750001551
Figure BDA0002415648750001561
Figure BDA0002415648750001571
Figure BDA0002415648750001581
Figure BDA0002415648750001591
Figure BDA0002415648750001601
Figure BDA0002415648750001611
Figure BDA0002415648750001621
Figure BDA0002415648750001631
Figure BDA0002415648750001641
其他示例性TIM-3抑制剂
在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子是TSR-022(AnaptysBio/Tesaro)。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含TSR-022的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含APE5137或APE5121的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表8中公开。WO 2016/161270中公开了APE5137、APE5121和其他抗TIM-3抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子是抗体克隆F38-2E2。在一个实施方案中，抗TIM-3抗体分子包含F38-2E2的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
其他已知的抗TIM-3抗体包括例如在WO 2016/111947、WO 2016/071448、WO 2016/144803、US 8,552,156、US 8,841,418和US 9,163,087中描述的那些，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗TIM-3抗体是这样的抗体，其与如本文所述的抗TIM-3抗体之一竞争结合TIM-3上的相同表位，和/或与其竞争结合于所述表位。
表8.其他示例性抗TIM-3抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0002415648750001651
Figure BDA0002415648750001661
GITR激动剂
在某些实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与GITR激动剂组合施用。在一些实施方案中，GITR激动剂是GWN323(NVS)、BMS-986156、MK-4166或MK-1248(Merck)、TRX518(Leap Therapeutics)、INCAGN1876(Inc/Agenus)、AMG 228(Amgen)或INBRX-110(Inhibrx)。
示例性GITR激动剂
在一个实施方案中，GITR激动剂是抗GITR抗体分子。在一个实施方案中，GITR激动剂是如2016年4月14日公开的名为“用于增加的免疫应答的组合物与使用方法和癌疗法(Compositions and Methods of Use for Augmented Immune Response and CancerTherapy)”的WO 2016/057846中披露的抗GITR抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个五个或六个互补决定区(或总体上全部CDR)，所述重链可变区和轻链可变区包含表9中所示(例如，来自表9中公开的MAB7的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表9中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据Kabat定义(例如，如表9中所述)限定CDR。在一些实施方案中，根据Chothia定义(例如，如表9中所述)限定CDR。在一个实施方案中，相对于表9中所示的或由表9中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸置换(例如，保守性氨基酸置换)或缺失。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:909的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:911的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:913的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:914的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:916的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:918的氨基酸序列的VLCDR3，其各自在表9中公开。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:901的氨基酸序列或与SEQ ID NO:901具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:902的氨基酸序列或与SEQ ID NO:902具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:901的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:902的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含VH，所述VH由SEQ ID NO:905的核苷酸序列或与SEQ ID NO:905具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含VL，所述VL由SEQ ID NO:906的核苷酸序列或与SEQ ID NO:906具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:905的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:906的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:903的氨基酸序列或与SEQ ID NO:903具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:904的氨基酸序列或与SEQ ID NO:904具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:903的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:904的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由SEQ ID NO:907的核苷酸序列或与SEQ ID NO:907具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由SEQ ID NO:908的核苷酸序列或与SEQ IDNO:908具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由SEQ ID NO:907的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:908的核苷酸序列编码的轻链。
可以通过WO 2016/057846中描述的载体、宿主细胞和方法产生本文所述的抗体分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
表9：示例性抗GITR抗体分子的氨基酸序列和核苷酸序列
Figure BDA0002415648750001681
Figure BDA0002415648750001691
Figure BDA0002415648750001701
Figure BDA0002415648750001711
Figure BDA0002415648750001721
Figure BDA0002415648750001731
Figure BDA0002415648750001741
其他示例性GITR激动剂
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子是BMS-986156(Bristol-Myers Squibb)，也称作BMS 986156或BMS986156。例如US 9,228,016和WO 2016/196792中公开了BMS-986156和其他抗GITR抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含BMS-986156的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表10中公开。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子是MK-4166或MK-1248(Merck)。例如US 8,709,424、WO 2011/028683、WO 2015/026684和Mahne等人Cancer Res.2017；77(5):1108-1118中公开了MK-4166、MK-1248、和其他抗GITR抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含MK-4166或MK-1248的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子是TRX518(Leap Therapeutics)。例如，在US7,812,135、US 8,388,967、US 9,028,823、WO 2006/105021和Ponte J等人(2010)ClinicalImmunology；135:S96中公开了TRX518和其他抗GITR抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含TRX518的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子是INCAGN1876(Inc/Agenus)。例如US 2015/0368349和WO 2015/184099中公开了INCAGN1876和其他抗GITR抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含INCAGN1876的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子是AMG 228(Amgen)。例如US 9,464,139和WO2015/031667中公开了AMG 228和其他抗GITR抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，抗GITR抗体分子包含AMG 228的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，抗GITR抗体分子是INBRX-110(Inhibrx)。例如US 2017/0022284和WO 2017/015623中公开了INBRX-110和其他抗GITR抗体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，GITR激动剂包含INBRX-110的CDR序列中一者或多者(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施方案中，GITR激动剂(例如，融合蛋白)是MEDI 1873(MedImmune)，也称作MEDI1873。例如US 2017/0073386、WO 2017/025610和Ross等人Cancer Res 2016；76(14Suppl):摘要编号561中公开了MEDI 1873和其他GITR激动剂，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，GITR激动剂包含MEDI 1873的糖皮质激素诱导的TNF受体配体(GITRL)的IgG Fc结构域、有功能多聚化结构域和受体结合结构域中一者或多者。
另外已知的GITR激动剂(例如，抗GITR抗体)包括例如在WO 2016/054638中描述的那些，所述文献通过引用的方式完整并入。
在一个实施方案中，抗GITR抗体是这样的抗体，其与如本文所述的抗GITR抗体之一竞争结合GITR上的相同表位，和/或与其竞争结合在所述表位上。
在一个实施方案中，GITR激动剂是激活GITR信号传导途径的肽。在一个实施方案中，GITR激动剂是免疫黏附素结合片段(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的GITRL的胞外或GITR结合部分的免疫黏附素结合片段)。
表10：其他示例性抗GITR抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0002415648750001761
IL15/IL-15Ra复合体
在某些实施方案中，将本文所述的抗LAG-3抗体分子与IL-15/IL-15Ra复合体组合施用。在一些实施方案中，IL-15/IL-15Ra复合体选自NIZ985(Novartis)、ATL-803(Altor)或CYP0150(Cytune)。
示例性IL-15/IL-15Ra复合体
在一个实施方案中，IL-15/IL-15Ra复合体包含与人IL-15Ra的可溶性形式复合的人IL-15。该复合体可以包含与IL-15Ra的可溶性形式共价或非共价结合的IL-15。在一个具体实施方案中，人IL-15与IL-15Ra的可溶性形式非共价结合。在一个具体实施方案中，组合物的人IL-15包含表11中的SEQ ID NO:1001的氨基酸序列，并且可溶性形式的人IL-15Ra包含表11中的SEQ ID NO:1002的氨基酸序列，如WO 2014/066527中所述，所述文献通过引用的方式完整并入。可以通过WO 2007/084342中描述的载体、宿主细胞和方法产生本文所述的分子，所述文献通过引用的方式完整并入。
表11.示例性IL-15/IL-15Ra复合体的氨基酸序列和核苷酸序列
Figure BDA0002415648750001771
其他示例性IL-15/IL-15Ra复合体
在一个实施方案中，IL-15/IL-15Ra复合体是ALT-803、IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白(IL-15N72D:IL-15RaSu/Fc可溶性复合体)。WO 2008/143794中公开了ALT-803，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白包含如表12中公开的序列。
在一个实施方案中，IL-15/IL-15Ra复合体包含与IL-15Ra的sushi结构域融合的IL-15(CYP0150、Cytune)。IL-15Ra的sushi结构域指始于IL-15Ra的信号肽之后第一半胱氨酸残基并止于所述信号肽之后第四半胱氨酸残基的结构域。在WO 2007/04606和WO 2012/175222中公开了IL-15与IL-15Ra的sushi结构域融合的复合体，所述文献通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，IL-15/IL-15Ra sushi结构域融合物包含如表12中公开的序列。
表12.其他示例性IL-15/IL-15Ra复合体的氨基酸序列
Figure BDA0002415648750001781
Figure BDA0002415648750001791
药物组合物、制剂、和试剂盒
在另一个方面，本公开提供了组合物，例如，可药用组合物，所述组合物包含与可药用载体配制在一起的抗LAG-3抗体分子。如本文所用，“可药用载体”包括生理上相容的任何和全部溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等。载体可以适于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、直肠、脊髓或表皮施用(例如，通过注射或输注)。
本文所述的组合物可以处于多种形式。这些形式例如包括液体、半固体和固体剂型，如液态溶液剂(例如，可注射用溶液剂和可输注溶液剂)、分散体剂或混悬剂、脂质体剂和栓剂。优选的形式取决于预期的施用模式和治疗用途。常见的优选组合物处于可注射用溶液剂或可输注溶液剂形式。优选的施用模式是肠胃外施用(例如，静脉内、皮下、腹内、肌内)。在一个优选实施方案中，通过静脉内输注或注射施用抗体。在另一个优选实施方案中，通过肌内或皮下注射施用抗体。
如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外方式施用”意指除了肠内和局部施用之外的施用模式，通常通过注射施用，并且包括，而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、角皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
治疗性组合物一般应当是无菌的并且在制造和储存条件下稳定。可以将组合物配制为溶液、微乳液、分散体、脂质体或适合高抗体浓度的其他有序结构。可以通过将活性化合物(例如，抗体或抗体部分)以要求的量连同上文所列举的一种成分或成分组合在适宜的溶剂中并入，根据需要，随后过滤消毒，制备无菌可注射溶液剂。通常，通过将所述活性化合物并入无菌溶媒中来制备分散体，所述无菌溶媒含有基础分散介质和来自上文所列举那些成分中的所要求的其他成分。在用于制备无菌注射溶液剂的无菌粉末情况下，优选的制备方法是从其先前无菌过滤的溶液产生有效成分外加任何额外所需成分的粉末的真空干燥和冷冻干燥。可以例如通过使用涂料(如卵磷脂)，在分散体的情况下通过维持要求的粒度和通过使用表面活性剂，维持溶液剂的适宜流动性。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包含延迟吸收的物质例如单硬脂酸盐和明胶而引起。
可以将本文所述的抗LAG-3抗体分子或组合物配制成适于施用(例如，静脉内施用)至如本文所述的受试者的制剂(例如，剂量制剂或剂型)。本文所述的制剂可以是液态制剂、冻干制剂或复溶制剂(reconstituted formulation)。
在某些实施方案中，制剂是液态制剂。在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)和缓冲剂。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以25mg/mL至250mg/mL，例如，50mg/mL至200mg/mL、60mg/mL至180mg/mL、70mg/mL至150mg/mL、80mg/mL至120mg/mL、90mg/mL至110mg/mL、50mg/mL至150mg/mL、50mg/mL至100mg/mL、150mg/mL至200mg/mL或100mg/mL至200mg/mL，例如，50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL或150mg/mL的浓度存在的抗LAG-3抗体分子。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子以80mg/mL至120mg/mL，例如，100mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含缓冲剂，所述缓冲剂包含组氨酸(例如，组氨酸缓冲剂)。在某些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以1mM至100mM，例如，2mM至50mM、5mM至40mM、10mM至30mM、15至25mM、5mM至40mM、5mM至30mM、5mM至20mM、5mM至10mM、40mM至50mM、30mM至50mM、20mM至50mM、10mM至50mM或5mM至50mM，例如，2mM、5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM的浓度存在。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度存在。在其他实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)具有4至7，例如，5至6，例如，5、5.5或6的pH。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)具有5至6，例如，5.5的pH。在某些实施方案中，缓冲剂以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH。在某些实施方案中，缓冲剂包括组氨酸和HCl组氨酸。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；和以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH的缓冲剂。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)还包含碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物是蔗糖。在一些实施方案中，碳水化合物(例如，蔗糖)以50mM至500mM，例如，100mM至400mM、150mM至300mM、180mM至250mM、200mM至240mM、210mM至230mM、100mM至300mM、100mM至250mM、100mM至200mM、100mM至150mM、300mM至400mM、200mM至400mM或100mM至400mM，例如，100mM、150mM、180mM、200mM、220mM、250mM、300mM、350mM或400mM的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH的缓冲剂；和以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)还包含表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，表面活性剂或聚山梨醇酯20以0.005％至0.1％(w/w)，例如，0.01％至0.08％、0.02％至0.06％、0.03％至0.05％、0.01％至0.06％、0.01％至0.05％、0.01％至0.03％、0.06％至0.08％、0.04％至0.08％或0.02％至0.08(％w/w))，例如，0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/w)的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以0.03％至0.05％(例如，0.04％)的浓度(w/w)存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH的缓冲剂；以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖和以0.03％至0.05％(例如，0.04％(w/w))的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以100mg/mL的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以20mM的浓度包含组氨酸缓冲剂(例如，组氨酸/HCL组氨酸)并且具有5.5的pH的缓冲剂；以220mM的浓度存在的碳水化合物或蔗糖和以0.04％(w/w)的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，通过稀释包含本所述的抗LAG-3抗体分子的制剂，制备液态制剂。例如，可以用包含一种或多种赋形剂(例如，浓缩赋形剂)的溶液稀释原料药制剂。在一些实施方案中，溶液包含组氨酸，蔗糖，或聚山梨醇酯20中一者、两者或全体。在某些实施方案中，溶液包含与原料药制剂相同的赋形剂。示例性赋形剂包括但不限于氨基酸(例如，组氨酸)、碳水化合物(例如，蔗糖)或表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)。在某些实施方案中，液态制剂不是复溶的冻干制剂。在其他实施方案中，液态制剂是复溶的冻干制剂。在一些实施方案中，制剂作为液体储存。在其他实施方案中，在储存之前，将制剂作为液体配制并且随后干燥，例如，通过冻干或喷雾干燥法干燥。
在某些实施方案中，每个容器(例如，小瓶)灌装0.5mL至10mL(例如，0.5mL至8mL、1mL至6mL或2mL至5mL，例如，1mL、1.2mL、1.5mL、2mL、3mL、4mL、4.5mL或5mL)液态制剂。在其他实施方案中，将液态制剂灌装入容器(例如，小瓶)，从而每个容器(例如，小瓶)可以抽出至少1mL(例如，至少1.2mL、至少1.5mL、至少2mL、至少3mL、至少4mL或至少5mL)可提取量的液态制剂。在某些实施方案中，在临床场所不稀释的情况下从容器(例如，小瓶)提取液态制剂。在某些实施方案中，在临床场所，将液态制剂从原料药制剂稀释并且从容器(例如，小瓶)提取。在某些实施方案中，开始向患者输注之前，将制剂(例如，液态制剂)注射入输液袋，例如，在1小时内(例如，在45分钟、30分钟或15分钟内)。
本文所述的制剂可以储存在容器中。用于本文所述的任何制剂的容器可以例如包括小瓶，和任选地，瓶塞、盖或这两者。在某些实施方案中，小瓶是玻璃小瓶，例如，6R白色玻璃小瓶。在其他实施方案中，瓶塞是橡胶瓶塞，例如，灰色橡胶瓶塞。在其他实施方案中，盖是钳口盖，例如，铝钳口盖。在一些实施方案中，容器包括6R白色玻璃小瓶、灰色橡胶瓶塞和铝钳口盖。在一些实施方案中，容器(例如，小瓶)是一次性使用容器。在某些实施方案中，25mg/mL至250mg/mL，例如，50mg/mL至200mg/mL、60mg/mL至180mg/mL、70mg/mL至150mg/mL、80mg/mL至120mg/mL、90mg/mL至110mg/mL、50mg/mL至150mg/mL、50mg/mL至100mg/mL、150mg/mL至200mg/mL或100mg/mL至200mg/mL，例如，50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL或150mg/mL的抗LAG-3抗体分子存在于容器(例如，小瓶)中。
在一些实施方案中，制剂是冻干制剂。在某些实施方案中，冻干制剂冻干或干燥自包含本文所述的抗LAG-3抗体分子的液态制剂。例如，可以每个容器(例如，小瓶)灌装1至5mL，例如(1至2mL)的液态制剂并冻干。
在一些实施方案中，制剂是复溶制剂。在某些实施方案中，复溶制剂复溶自包含本文所述的抗LAG-3抗体分子的冻干制剂。例如，可以通过在稀释剂中溶解冻干制剂，配制复溶制剂，从而蛋白质分散于复溶制剂中。在一些实施方案中，用1mL至5mL(例如，1mL至2mL，例如，1.2mL)水或注射用缓冲液复溶冻干制剂。在某些实施方案中，用1mL至2mL注射用水复溶冻干制剂，例如，在临床场所复溶。
在一些实施方案中，复溶制剂包含抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)和缓冲剂。
在一些实施方案中，复溶制剂包含以25mg/mL至250mg/mL，例如，50mg/mL至200mg/mL、60mg/mL至180mg/mL、70mg/mL至150mg/mL、80mg/mL至120mg/mL、90mg/mL至110mg/mL、50mg/mL至150mg/mL、50mg/mL至100mg/mL、150mg/mL至200mg/mL或100mg/mL至200mg/mL，例如，50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL或150mg/mL的浓度存在的抗LAG-3抗体分子。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子以80mg/mL至120mg/mL，例如，100mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，复溶制剂包含缓冲剂，所述缓冲剂包含组氨酸(例如，组氨酸缓冲剂)。在某些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以1mM至100mM，例如，2mM至50mM、5mM至40mM、10mM至30mM、15至25mM、5mM至40mM、5mM至30mM、5mM至20mM、5mM至10mM、40mM至50mM、30mM至50mM、20mM至50mM、10mM至50mM或5mM至50mM，例如，2mM、5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM的浓度存在。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度存在。在其他实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)具有4至7，例如，5至6，例如，5、5.5或6的pH。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)具有5至6，例如，5.5的pH。在某些实施方案中，缓冲剂以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH。在某些实施方案中，缓冲剂包括组氨酸和HCl组氨酸。
在一些实施方案中，复溶制剂包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；和以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH的缓冲剂。
在一些实施方案中，复溶制剂还包含碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物是蔗糖。在一些实施方案中，碳水化合物(例如，蔗糖)以50mM至500mM，例如，100mM至400mM、150mM至300mM、180mM至250mM、200mM至240mM、210mM至230mM、100mM至300mM、100mM至250mM、100mM至200mM、100mM至150mM、300mM至400mM、200mM至400mM或100mM至400mM，例如，100mM、150mM、180mM、200mM、220mM、250mM、300mM、350mM或400mM的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
在一些实施方案中，复溶制剂包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH的缓冲剂；和以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
在一些实施方案中，复溶制剂还包含表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，表面活性剂或聚山梨醇酯20以0.005％至0.1％(w/w)，例如，0.01％至0.08％、0.02％至0.06％、0.03％至0.05％、0.01％至0.06％、0.01％至0.05％、0.01％至0.03％、0.06％至0.08％、0.04％至0.08％或0.02％至0.08(％w/w)，例如，0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/w)的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以0.03％至0.05％(例如，0.04％)的浓度(w/w)存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，复溶制剂包含以80至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以15mM至25mM(例如，20mM)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的pH的缓冲剂；以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖和以0.03％至0.05％(例如，0.04％(w/w))的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，复溶制剂包含以100mg/mL的浓度存在的抗LAG-3抗体分子；以20mM的浓度包含组氨酸缓冲剂(例如，组氨酸/HCL组氨酸)并且具有5.5的pH的缓冲剂；以220mM的浓度存在的碳水化合物或蔗糖和以0.04％(w/w)的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
在一些实施方案中，如此复溶制剂，从而可以从含有复溶制剂的容器(例如，小瓶)抽出至少1mL(例如，至少1.2mL、1.5mL、2mL、2.5mL或3mL)可提取量的复溶制剂。在某些实施方案中，在临床场所从容器(例如，小瓶)复溶和/或提取制剂。在某些实施方案中，开始向患者输注之前，将制剂(例如，复溶制剂)注射入输液袋，例如，在1小时内(例如，在45分钟、30分钟或15分钟内)。
可以在本文所述的制剂中使用的其他示例性缓冲剂包括但不限于精氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂或磷酸盐缓冲液。可以在本文所述的制剂中使用的其他示例性碳水化合物包括但不限于海藻糖、甘露糖醇、山梨醇或其组合。本文所述的制剂还可以含有张度剂，例如，氯化钠，和/或稳定剂，例如，氨基酸(例如，甘氨酸、精氨酸、甲硫氨酸或其组合)。
可以通过本领域已知的多种方法施用抗体分子，但是对于许多治疗用途，优选的施用途径/模式是静脉内注射或输注。例如，可以按超过20mg/分钟，例如，20-40mg/分钟和一般大于或等于40mg/分钟的速率，通过静脉内输注施用抗体分子，以达到约35至440mg/m2、一般约70至310mg/m2和更一般约110至130mg/m2的剂量。在实施方案中，可以按小于10mg/分钟；优选地小于或等于5mg/分钟的速率，通过静脉内输注施用抗体分子，以达到约1至100mg/m2、优选地约5至50mg/m2、约7至25mg/m2和更优选地，约10mg/m2的剂量。如熟练技术人员将理解，施用的途径和/或模式将取决于所想要的结果而变动。在某些实施方案中，活性化合物可以连同将保护化合物免于快速释放的载体一起制备，如控释制剂，包括植入物、经皮贴剂和微囊化输送***。可以使用生物可降解、生物相容性聚合物，如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的多种方法是专利授权的或总体上是本领域技术人员已知的。参见，例如，Sustained and ControlledRelease Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,编著,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。
在某些实施方案中，可以将抗体分子口服施用，例如随惰性稀释剂或可吸收性可食用载体一起口施用。化合物(和其他成分，如果需要)也可以封闭在硬壳或软壳明胶胶囊剂中、压缩成片剂或直接掺入受试者的膳食中。对于口服治疗施用，所述化合物可以随赋形剂一起掺入并且以可摄取的片剂、颊用片剂、药锭剂(troche)、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂(wafer)等形式使用。为了通过非肠胃外施用方法施用本发明的化合物，可以需要将化合物用防止其失活的材料包衣或随这种材料共施用。还可以用本领域已知的医疗装置施用治疗组合物。
调整给药方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单次快速浓注，可以随时间推移施用几个分开的剂量，或可以如治疗情况的危急性所示，按比例减少或增加该剂量。特别有利的是按剂量单位形式配制肠胃外组合物以易于剂量的施用和均匀性。如本文所用的剂量单位形式指适合作为用于待治疗受试者的单一剂量的物理分立的单元；每个单元含有预定量的活性化合物，所述的预定量经计算与所要求的药用载体结合时产生所需的治疗效果。用于本发明剂量单位形式的规定由以下决定并且直接取决于此：(a)活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗作用决定，及(b)针对个体中治疗敏感性配制这种活性化合物供治疗个体的现有技术中固有的限制作用。
抗体分子的治疗有效量或预防有效量的示例性非限制性范围是50mg至1500mg、一般80mg至1200mg。在某些实施方案中，通过注射(例如，皮下或静脉内)按约60mg至约100mg(例如，约80mg)、约200mg至约300mg(例如，约240mg)或约1000mg至约1500mg(例如，约1200mg)的剂量(例如，***剂量)施用抗LAG-3抗体分子。给药方案(例如，***给药方案)可以从例如一周一次变动至每2、3、4、5或6周一次。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约60mg至约100mg(例如，约80mg)的剂量每两周一次或每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约200mg至约300mg(例如，约240mg)的剂量每两周一次或每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约1000mg至约1500mg(例如，约1200mg)的剂量每两周一次或每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约80mg的剂量每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约240mg的剂量每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约1200mg的剂量每四周一次施用。尽管不希望受理论约束，在一些实施方案中，***给药或固定给药可能有益于患者，例如，以保存药物补给和减少药房差错。
可以按超过20mg/分钟，例如，20-40mg/分钟和一般大于或等于40mg/分钟的速率，通过静脉内输注施用抗体分子，以达到约35至440mg/m2、一般约70至310mg/m2和更一般约110至130mg/m2的剂量。在实施方案中，约110至130mg/m2的输注速率实现约3mg/kg的水平。在其他实施方案中，可以按小于10mg/分钟，例如，小于或等于5mg/分钟的速率，通过静脉内输注施用抗体分子，以达到约1至100mg/m2，例如，约5至50mg/m2、约7至25mg/m2或约10mg/m2的剂量。在一些实施方案中，经约30分钟时间输注抗体。应当指出，剂量值可以随待减轻的病状的类型和严重性变化。应进一步理解，对于任何特定的受试者，应当根据个体需要和施用组合物或监督其施用的人的专业判断，随时间推移调节特定给药方案，并且本文中所述的剂量范围仅是示例性和不意在限制要求保护的组合物的范围或实施。
本发明的药物组合物可以包含“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明抗体或抗体部分。“治疗有效量”指以需要的剂量并持续需要的时间段，有效实现所需治疗结果的量。修饰的抗体或抗体片段的治疗有效量可以根据多种因素如疾病状态、个体的年龄、性别和重量和抗体或抗体部分在个体中激发所需反应的能力而变动。治疗有效量也是这样的一个量，其中修饰的抗体或抗体片段的任何有毒或有害作用不及治疗有益作用。相对于未治疗的受试者，“治疗有效的剂量”优选地抑制可度量参数(例如肿瘤生长率)至少约20％、更优选地至少约40％、甚至更优选地至少约60％和仍更优选地至少约80％。可以在预示人肿瘤中的功效的动物模型***中评价化合物抑制可度量参数(例如，癌症)的能力。可选地，可以通过检验化合物抑制(依据熟练技术人员已知的测定法测定的这种体外抑制作用)的能力评价组合物的这种特性。
“预防有效量”指以需要的剂量并持续需要的时间段，有效实现所需预防结果的量。通常，由于在受试者中在疾病较早阶段之前或在疾病较早阶段使用预防性剂量，故预防有效量将小于治疗有效量。
也处于本公开的范围内是一种包含本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物或制剂的试剂盒。该试剂盒可以包含一种或多种其他要素，所述要素包括：(例如，根据本文所述给药方案的)使用说明书；其他试剂，例如，可用于螯合或否则偶联的标记物、治疗药或试剂、针对标记物或治疗药的抗体或放射防护组合物；配制抗体以便施用的装置或其他材料；可药用载体；和用于施用至受试者的装置或其他材料。
抗LAG-3抗体分子的用途
本文所述的抗LAG-3抗体分子可以用来调节受试者中的免疫应答。在一些实施方案中，增强、刺激或上调免疫应答。在某些实施方案中，抑制、减弱或下调免疫应答。例如，可以将这些抗体施用至(例如，体外或体内)培养的细胞或(例如，在体内)施用于受试者中，以治疗、预防和/或诊断多种疾病，如癌、免疫疾病和传染性疾病。
如本文所用，术语“受试者”意在包括人和非人类动物。在一些实施方案中，受试者是人类受试者，例如，患有以LAG-3功能异常为特征的疾病或病状的人类患者。通常，受试者至少具有某种LAG-3蛋白，包括抗体分子结合的LAG-3表位，例如，足够高水平的支持抗体与LAG-3结合的蛋白质和表位。术语“非人类动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者是需要增强免疫应答的人类患者。本文所述的方法和组合物适于治疗患有疾病的人类患者，其中可以通过通过调节(例如，增进或抑制)免疫应答，治疗所述疾病。在某些实施方案中，患者患有本文所述的疾病或具有患所述疾病的风险，例如，乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在某些实施方案中，患有免疫原性比其他乳腺癌亚型更高的TNBC的患者具有更高的PD-L1表达，和/或具有增加的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)浸润(Loi等人(2014)Ann Oncol；25:1544-50；Mittendorf等人(2014)Cancer Immunol Res；2:361-70)。在一个实施方案中，患者未显示出肝转移。
联合免疫治疗方案表明，协同阻断共抑制性受体显示出比单一药物的抗肿瘤活性更大(Wolchok等人(2013)New Engl J Med；369:122-33)。LAG-3是可以与PD-1协作以抑制免疫应答的共抑制性受体(Anderson等人(2016)Immunity；44:989–1004)。联合抑制PD-1和LAG-3检查点协同地增强抗肿瘤反应，胜过单纯抑制任一个检查点(Woo等人(2012)CancerRes；72:917-27)。
还存在增加的如下迹象：细胞毒药物影响肿瘤-宿主环境更有利于免疫应答，并且因此，免疫疗法与细胞毒药物组合可以协同以增加治疗功效(Zitvogel等人(2013)Immunity；39:74-88)。重要地，化疗可以诱导免疫原性细胞死亡，这促进高效抗原呈递并且已经证实这在临床前模型中触发强力T细胞应答(Kroemer等人(2013)Immunol；31:51–72；Pfirschke等人(2016)Immunity；44:343–54；Lu等人(2017)Biomedical Res；28:828-34)。不希望受理论约束，认为在一些实施方案中，化疗药(例如，铂剂)将在T细胞活化期间早期创造将会利于LAG-3+CD8+ T细胞出现的环境(例如，增加抗原浓度和/或抗原可用性)，这将仅要求LAG3抑制作用以分化成肿瘤抗原特异性效应细胞。尽管认为铂剂的主要作用机制是诱导癌细胞凋亡，作为其与DNA共价结合的反应，但最新研究已经表明，除DNA之外的细胞分子可能潜在地充当靶，并且铂类药物的部分抗肿瘤作用通过调节免疫***而出现(Hato等人(2014)Clin Cancer Res；20:2831–7)。这些免疫原性影响包括：STAT信号传导调节作用(Lesterhuis等人(2011)J Clin Invest；121:3100–08)；通过暴露钙网素和释放ATP及高迁移率族蛋白框-1(HMGB-1)，诱导免疫原性型的癌细胞死亡(Kroemer等人(2013)Immunol；31:51–72；Tesniere等人(2010)Oncogenel；29:482–91)；和通过调节程序性死亡受体1-配体和甘露糖-6-磷酸受体表达，增强效应子免疫应答(Liu等人(2010)Br J Cancer；102:115–23)。不希望受理论约束，认为在一些实施方案中，铂剂与免疫检查点阻断组合将增强免疫治疗，在于铂可以引起免疫原性细胞死亡、肿瘤细胞对CTL溶胞作用敏感和下调PD-L。
在一些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者尚未用治疗药、程序或模式治疗过。在其他实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者已用治疗药、程序或模式治疗过。
在某些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者尚未用抗LAG-3疗法治疗过。在其他些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者已用抗LAG-3疗法治疗过。
在某些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者尚未用PD-1/PD-L1疗法治疗过。在其他些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者已用抗PD-1/PD-L1疗法治疗过。
在某些实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者尚未用化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))治疗过。在其他实施方案中，在接受抗LAG-3抗体分子之前，受试者已经用化疗药(例如，铂剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin)或核苷酸类似物或前体类似物(例如，卡培他滨))治疗过。
在其他实施方案中，已经将受试者鉴定为肿瘤浸润型淋巴细胞中具有LAG-3表达。在其他实施方案中，受试者在肿瘤浸润型淋巴细胞中没有可检出的LAG-3表达水平。
治疗癌症的方法
在一个方面，本公开涉及在体内使用抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂(例如，本文所述的组合物或制剂)，从而抑制或减少癌性肿瘤生长，治疗受试者。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按照有效治疗癌或其转移性病灶的量施用。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约100mg至约2000mg的剂量每两周一次、每三周一次或每四周一次施用。例如，可以将抗LAG-3抗体分子按约200mg至约1000mg、约300mg至约900mg、约200mg至约600mg、约300mg至约500mg、约600至约1000mg、约700mg至约900mg或约400mg至约800mg的剂量每三周一次或每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至约900mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至约700mg(例如，约533mg或约600mg)的剂量每四周一次施用。
可以单独使用抗LAG-3抗体或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂以抑制癌性肿瘤的生长。备选地，抗LAG-3抗体或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂可以与如本文所述的以下一者或多者组合施用：标准护理治疗(例如，用于癌症或感染性疾病)、另一种抗体或其抗原结合片段、免疫调节剂(例如，共刺激分子的激活物或抑制性分子的抑制剂)；疫苗，例如，治疗性癌疫苗；或其他形式的细胞免疫疗法。
因此，在一个实施方案中，本公开提供一种抑制受试者中肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括例如，根据本文所述的给药方案，向受试者施用本文所述的治疗有效量的抗LAG-3抗体分子。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子以本文所述的组合物或制剂形式施用。
在一个实施方案中，该方法适于体内治疗癌症。为了实现抗原特异地增强免疫力，抗LAG-3抗体分子可以随目的抗原一起施用。当抗LAG-3抗体与一种或多种药物组合施用时，这种组合可以按任何顺序或者同时施用。
在另一个方面，提供一种在受试者中治疗受试者(例如，减少或缓解)过度增生性病状或疾病(例如，癌症)，例如，实体瘤、血液学癌、软组织肿瘤或转移性病灶的方法。该方法包括根据本文公开的给药方案，向受试者施用如本文中公开的抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂。
如本文所用，术语“癌”意在包括全部类型的癌性生长物或致瘤过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，无论侵袭力的组织病理学类型或阶段是什么。癌性疾病的例子包括但不限于实体瘤、血液学癌、软组织肿瘤和转移性病灶。实体瘤的实例包括多个器官***的恶性肿瘤，例如，肉瘤和癌(括腺癌和鳞状细胞癌)，如影响肝脏、肺、***、淋巴样、胃肠道(例如，结肠)、生殖泌尿道(例如，肾、尿路上皮、膀胱细胞)、***、CNS(例如，脑、神经细胞或神经胶质细胞)、皮肤、胰和咽的那些。腺癌包括恶性肿瘤如大部分结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌和食道癌。鳞状细胞癌包括恶性肿瘤，例如，在肺、食道、皮肤、头颈区域、口腔、***和子宫颈中的恶性肿瘤。在一个实施方案中，癌症是黑素瘤，例如，晚期黑素瘤。也可以使用本发明的方法和组合物治疗或预防前述癌的转移性病灶。
可以使用本文公开的抗体分子、组合物或制剂抑制其生长的示例性癌包括一般响应于免疫疗法的癌。用于治疗的常见癌的非限制性实例包括黑素瘤(例如，转移性恶性黑素瘤)、肾癌(例如透明细胞癌)、***癌(例如激素抵抗性***腺癌)、乳腺癌、结肠癌和肺癌(例如非小细胞肺癌)。额外地，难治性或复发性恶性肿瘤可以使用本文所述的抗体分子治疗。
可以治疗的其他癌的实例包括但不限于基底细胞癌、胆管癌；膀胱癌；骨癌；脑和CNS癌；原发性CNS淋巴瘤；中枢神经***肿瘤(CNS)；乳腺癌；***；绒毛膜癌；结直肠癌；***癌；消化***癌；子宫内膜癌；食管癌；眼癌；头颈癌；胃癌；上皮内肿瘤；肾癌；喉癌；白血病(包括急性髓样白血病、慢性髓样白血病、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性或急性白血病)；肝癌；肺癌(例如，小细胞肺癌和非小细胞肺癌)；淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；淋巴细胞的淋巴瘤；黑素瘤，例如，皮肤或眼内恶性黑素瘤；骨髓瘤；神经母细胞瘤；口腔癌(例如，唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；***癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸***的癌；肉瘤；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌；泌尿***的癌、肝癌、肛区癌、输卵管癌、***癌、外阴癌、小肠癌、内分泌***癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、儿童实体瘤、脊枢椎肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境所致癌，包括石棉诱导的那些癌以及其他癌和肉瘤以及所述癌的组合。
在一些实施方案中，疾病是癌症，例如，本文所述的癌症。在某些实施方案中，所述癌是实体瘤。在一些实施方案中，癌是脑肿瘤，例如，胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤或复发性脑肿瘤。在一些实施方案中，癌是胰腺癌，例如，晚期胰腺癌。在一些实施方案中，癌是皮肤癌，例如，黑素瘤(例如，II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌。在一些实施方案中，癌是肾癌，例如，肾细胞癌(RCC)(例如，转移性肾细胞癌)或初治转移性肾癌。在一些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，癌是病毒相关的癌。在一些实施方案中，癌是肛管癌(例如，肛管鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌或胃癌或胃食管结合部癌)。在一些实施方案中，癌是头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))。在一些实施方案中，癌是鼻咽癌(NPC)。在一些实施方案中，癌是***癌(例如，***鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌是结直肠癌，例如，复发结直肠癌或转移性结直肠癌，例如，微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌。在一些实施方案中，癌是肺癌，例如，非小细胞肺癌(NSCLC)。在某些实施方案中，癌是血液学癌。在一些实施方案中，癌是白血病。在一些实施方案中，癌是淋巴瘤，例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，复发性或难治性HL或DLBCL)。在一些实施方案中，癌是骨髓瘤。在一些实施方案中，癌是MSI-高癌。在一些实施方案中，癌是转移性癌。在其他实施方案中，癌是晚期癌。在其他实施方案中，癌是复发性或难治性癌。
在一个实施方案中，癌是Merkel细胞癌。在其他实施方案中，癌是黑素瘤。在其他实施方案中，癌是乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)或HER2阴性乳腺癌。在其他实施方案中，癌是肾细胞癌(例如，透明细胞肾细胞癌(CCRCC)或非透明细胞肾细胞癌(nccRCC))。在其他实施方案中，癌是甲状腺癌，例如，间变性甲状腺癌(ATC)。在其他实施方案中，癌是神经内分泌肿瘤(NET)，例如，胰、胃肠(GI)道或肺部中的非典型肺部类癌瘤或NET。在某些实施方案中，癌是非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，鳞状NSCLC或非鳞状NSCLC)。在某些实施方案中，癌是输卵管癌。在某些实施方案中，癌是微卫星高不稳性结直肠癌(MSI高CRC)或微卫星稳定性结直肠癌(MSS CRC)。
在其他实施方案中，癌是血液恶性肿瘤或癌，其包括但不限于白血病或淋巴瘤。例如，抗LAG-3抗体分子可以用来治疗癌和恶性肿瘤、所述癌和恶性肿瘤包括但不限于例如急性白血病，例如，B细胞急性淋巴样白血病(“BALL”)、T细胞急性淋巴样白血病(“TALL”)、急性淋巴样白血病(ALL)；慢性白血病，例如，慢性髓性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)；额外的血液学癌或血液学病状，例如，B细胞幼淋巴细胞白血病，母细胞性浆细胞样树状细胞肿瘤、Burkitt淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、多毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡淋巴瘤、恶性淋巴细胞增生性疾病、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良和脊髓发育不良综合征、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树状细胞肿瘤、
Figure BDA0002415648750001961
巨球蛋白血症，和作为依据髓样血细胞无效产生(或异型增生)联合的多样性血液学疾病集合的“白血病前期”等。
如本文所用，术语“受试者”意在包括人和非人类动物。在一些实施方案中，受试者是人类受试者，例如，患有以LAG-3功能异常为特征的疾病或病状的人类患者。通常，受试者至少具有某种LAG-3蛋白，包括抗体分子结合的LAG-3表位，例如，足够高水平的支持抗体与LAG-3结合的蛋白质和表位。术语“非人类动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者是需要增强免疫应答的人类患者。本文所述的方法和组合物适于治疗患有疾病的人类患者，其中可以通过通过调节(例如，增进或抑制)免疫应答，治疗所述疾病。
在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或化疗药)组合施用。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。在一些实施方案中，化疗药是铂剂。在某些实施方案中，铂剂是卡铂。在某些实施方案中，铂剂是顺铂。在某些实施方案中，铂剂是奥沙利铂。在某些实施方案中，铂剂是tetraplatin。
在一些实施方案中，化疗药是核苷酸类似物或前体类似物。在某些实施方案中，核苷酸类似物或前体类似物是卡培他滨。
在某些实施方案中，所述癌是实体瘤。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗实体瘤。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)组合施用，以治疗实体瘤。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是REGN2810。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药(例如，PD-1抑制剂)组合施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是REGN2810。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，并且将PD-1抑制剂按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)按约600mg至约1000mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用，并且将PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周一次施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。
在某些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药(例如，化疗药)组合施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。在一些实施方案中，化疗药是铂剂。在某些实施方案中，铂剂是卡铂。在某些实施方案中，铂剂是顺铂。在某些实施方案中，铂剂是奥沙利铂。在某些实施方案中，铂剂是tetraplatin。在一些实施方案中，化疗药是核苷酸类似物或前体类似物。在某些实施方案中，核苷酸类似物或前体类似物是卡培他滨。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，并且将化疗药按实现约4至约8或约5至约7的曲线下面积(AUC)(例如，约6的AUC)的剂量每三周一次施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。
在某些实施方案中，癌是乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与PD-1抑制剂和化疗药组合施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是REGN2810。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在一些实施方案中，化疗药是铂剂。在某些实施方案中，铂剂是卡铂。在某些实施方案中，铂剂是顺铂。在某些实施方案中，铂剂是奥沙利铂。在某些实施方案中，铂剂是tetraplatin。在一些实施方案中，化疗药是核苷酸类似物或前体类似物。在某些实施方案中，核苷酸类似物或前体类似物是卡培他滨。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用，将PD-1抑制剂按约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用，并且将化疗药按实现约4至约8或约5至约7的AUC(例如，约6的AUC)的剂量每三周一次施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。
在某些实施方案中，癌是脑肿瘤。在一些实施方案中，脑肿瘤是胶质母细胞瘤(例如，复发性胶质母细胞瘤)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗脑肿瘤。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)组合施用，以治疗脑肿瘤。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001(spartalizumab)。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌是胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是晚期胰腺癌。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗胰腺癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式组合施用，以治疗胰腺癌。在一些实施方案中，第二治疗药或模式包含化疗药(例如，吉西他滨)。
在某些实施方案中，癌是黑素瘤。在一些实施方案中，黑素瘤是HLA-A2阳性、II期、III期或IV期黑素瘤、不可切除性黑素瘤或转移性黑素瘤。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗黑素瘤。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式组合施用，以治疗黑素瘤。在一些实施方案中，第二治疗药或模式是HLA-A2肽。在某些实施方案中，向无病黑素瘤患者施用抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂，和任选地，HLA-A2肽。在一些实施方案中，第二治疗药或模式包含PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌是肾癌。在一些实施方案中，肾癌是肾细胞癌(RCC)，例如，转移性肾细胞癌。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗肾癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)组合施用，以治疗肾癌。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌是乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗乳腺癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式组合施用，以治疗乳腺癌。在某些实施方案中，第二治疗药或模式是化疗药(例如，紫杉醇)。在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至约900mg的剂量每四周一次施用，以治疗乳腺癌(例如，TNBC)。
在某些实施方案中，癌是病毒相关性肿瘤。在一些实施方案中，病毒相关性肿瘤选自肛管癌(例如，肛管的鳞状细胞癌)、***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)、胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌、或胃癌或胃食管结合部癌)、头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))、鼻咽癌(NPC)、***癌(例如，***鳞状细胞癌)、***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗病毒相关性肿瘤。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)组合施用，以治疗病毒相关性肿瘤。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌选自肛管癌(例如，肛管的鳞状细胞癌)、***(例如，子宫颈鳞状细胞癌)、胃癌(例如，EB病毒(EBV)阳性胃癌、或胃癌或胃食管结合部癌)、头颈癌(例如，HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))、鼻咽癌(NPC)、***癌(例如，***鳞状细胞癌)或***或外阴癌(例如，***或外阴鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗该癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)组合施用，以治疗该癌。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌是结直肠癌。在一些实施方案中，结直肠癌是复发结直肠癌、转移性结直肠癌、微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗结直肠癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)组合施用，以治疗结直肠癌。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌是肺癌。在一些实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗肺癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)组合施用，以治疗肺癌。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-1抗体。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是PDR001。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子。
在某些实施方案中，癌是血液学癌。在一些实施方案中，血液学癌是淋巴瘤，例如，霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DCBCL)(例如，复发性或难治性HL或DCBCL)。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂作为单一药物施用，以治疗血液学癌。在其他实施方案中，将抗LAG-3抗体分子或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂与第二治疗药或模式组合施用，以治疗血液学癌。
本文公开的方法和组合物可用于治疗与前述癌症相关的转移性病灶。
在一些实施方案中，该方法还包括确定肿瘤样品是否对PD-L1、CD8和IFN-γ中一者或多者呈阳性：并且如果肿瘤样品对一种或多种(例如，两个或全部三种)标志物呈阳性，随后向该患者施用治疗有效量的抗LAG-3抗体分子，任选地联用与如本文所述的一种或多种其他免疫调节剂或抗癌药组合。
在一些实施方案中，抗LAG-3抗体分子用来治疗表达LAG-3的癌。表达LAG-3的癌例如包括结直肠癌(Xiao和Freeman Cancer Discov.2015；5(1):16-8)、乳腺癌(Bottai等人Breast Cancer Res.2016；18(1):121)、***癌(Sfanos等人Clin Cancer Res.2008；14(11):3254-61)、肺癌(He等人J Thorac Oncol.2017；12(5):814-823)和肝癌(Pedroza-Gonzalez等人Oncoimmunology.2015；4(6):e1008355)。表达LAG-3的癌可以是转移性癌。
在其他实施方案中，抗LAG-3抗体分子用来治疗以微卫星不稳性高(MSI-H)或错配修复缺陷(dMMR)为特征的癌。例如，使用针对MSI-H状态的聚合酶链反应(PCR)试验或针对dMMR的免疫组织化学(IHC)试验，可以鉴定患者的MSI-H或dMMR肿瘤状态。例如在Ryan等人Crit Rev Oncol Hematol.2017；116:38-57；Dietmaier和Hofstadter.Lab Invest 2001,81:1453-1456；Kawakami等人Curr Treat Options Oncol.2015；16(7):30)中描述了用于鉴定MSI-H或dMMR肿瘤状态的方法。
本文所述的联合疗法可以包括与一种或多种额外治疗药，例如，一种或多种抗癌药、细胞毒的或细胞抑制药物、激素治疗、疫苗和/或其他免疫治疗药共配制和/或与之共施用的本发明组合物。在其他实施方案中，将抗体分子与其他治疗性疗法模式，包括手术、照射、低温手术和/或热疗组合施用。这类联合疗法可以有利地利用较低剂量的所施用治疗药，因此避免与多种单一疗法相关的可能毒性或并发症。
本文所述的方法、组合物和组合(例如，抗LAG-3抗体及其使用方法)可以与其他药物或治疗模式(例如，选自WO 2017/019897的表6中列出的一种或多种药物中的第二治疗药)组合使用，所述文献的内容通过引用的方式完整并入。在一个实施方案中，本文所述的方法包括向受试者以有效治疗或预防疾病(例如，如本文所述的疾病，例如，癌症)的量施用如WO2017/019894中所述的抗LAG-3抗体分子(任选地，与PD-1、PD-L1、TIM-3、CEACAM(例如，CEACAM-1和/或CEACAM-5)或CTLA-4)的一种或多种抑制剂的组合)，还包括施用选自WO2017/019897的表6列出的一种或多种药物的第二治疗药。当组合施用时，抗LAG-3抗体分子、额外的药物(例如，第二或第三药物)或前者全部可以按这样的量或剂量施用，所述量或剂量高于、低于或等于单独(例如，作为单药疗法)使用的每种药物的量或剂量。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体分子、额外的药物(例如，第二或第三药物)或前者全部的施用量或剂量比单独(例如，作为单药疗法)使用的每种药物的量或剂量低(例如，至少20％、至少30％、至少40％或至少50％)。在其他实施方案中，抗LAG-3抗体分子、额外的药物(例如，第二或第三药物)或前者全部的产生所需效果(例如，治疗癌症)的量或剂量较低(例如，至少20％、至少30％、至少40％或至少50％较低)。
在其他实施方案中，额外的治疗药选自WO WO 2017/019894的表6中列出的一种或多种药物。在一些实施方案中，额外的治疗药选自以下一种或多种：1)蛋白激酶C(PKC)抑制剂；2)热休克蛋白90(HSP90)抑制剂；3)磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和/或雷帕霉素(mTOR)靶的抑制剂；4)细胞色素P450的抑制剂(例如，CYP17抑制剂或17α-羟化酶/C17-20裂合酶抑制剂)；5)铁螯合剂；6)芳香酶抑制剂；7)p53的抑制剂，例如，p53/Mdm2相互作用的抑制剂；8)凋亡诱导物；9)血管生成抑制剂；10)醛固酮合酶抑制剂；11)平滑化(SMO)受体抑制剂；12)催乳素受体(PRLR)抑制剂；13)Wnt信号传导抑制剂；14)CDK4/6抑制剂；15)成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)/成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)抑制剂；16)巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制剂；17)以下一者或多者的抑制剂：c-KIT、组胺释放、Flt3(例如，FLK2/STK1)或PKC；18)以下一者或多者的抑制剂：VEGFR-2(例如，FLK-1/KDR)、PDGFRβ、c-KIT或Raf激酶C；19)生长抑素激动物和/或生长激素释放抑制剂；20)间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂；21)***1受体(IGF-1R)抑制剂；22)P-糖蛋白1抑制剂；23)血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂；24)BCR-ABL激酶抑制剂；25)FGFR抑制剂；26)CYP11B2的抑制剂；27)HDM2抑制剂，例如，HDM2-p53相互作用的抑制剂；28)酪氨酸激酶的抑制剂；29)C-MET的抑制剂；30)JAK的抑制剂；31)DAC的抑制剂；32)11β-羟化酶的抑制剂；33)IAP的抑制剂；34)PIM激酶的抑制剂；35)Porcupine的抑制剂；36)BRAF(例如，BRAF V600E或野生型BRAF)的抑制剂；37)HER3的抑制剂；38)MEK的抑制剂；或39)脂质激酶的抑制剂，例如，如WO 2017/019894的表6中所述。
WO 2017/019894中描述了包含本文所述的抗LAG-3抗体分子的联合疗法的附加实施方案，所述文献通过引用的方式完整并入。
治疗传染性疾病的方法
本文中公开了使用抗LAG-3抗体分子(例如，本文所述的抗LAG-3抗体分子)或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂(例如，本文所述的组合物或制剂)治疗传染性疾病的方法。在某些实施方案中，根据本文所述的给药方案，将抗体分子、组合物或制剂施用至受试者。
在某些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按照有效治疗传染性疾病或其症状的量施用。在一些实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约100mg至约2000mg的剂量每两周一次、每三周一次或每四周一次施用。例如，可以将抗LAG-3抗体分子按约200mg至约1000mg、约300mg至约900mg、约200mg至约600mg、约300mg至约500mg、约600至约1000mg、约700mg至约900mg或约400mg至约800mg的剂量每三周一次或每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约300mg至500mg(例如，约400mg)的剂量每三周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约700mg至约900mg(例如，约800mg)的剂量每四周一次施用。在一个实施方案中，将抗LAG-3抗体分子按约500mg至约700mg(例如，约533mg或约600mg)的剂量每四周一次施用。
本文所述的某些方法用来治疗已经暴露于特定毒素或病原体的受试者。不希望受理论约束，认为在一些实施方案中，抗LAG-3抗体可以刺激NK细胞介导对靶细胞的杀伤并且可以增强IFN-γ分泌及CD4+ T细胞增殖。因此，在某些实施方案中，本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物和制剂适用于刺激针对传染因子的免疫应答。因此，本发明的另一个方面提供一种治疗受试者中感染性疾病的方法，所述方法包括根据本文所述的给药方案，向受试者施用抗LAG-3抗体分子，或包含抗LAG-3抗体分子的组合物或制剂，从而针对感染性疾病治疗受试者。在治疗(例如，急性和/或慢性)感染中，除刺激宿主天然抗感染免疫防御之外或取而代之，抗LAG-3抗体分子的施用可以与常规治疗组合。宿主天然的抗感染免疫防御包括但不限于炎症、发热、抗体介导的宿主防御、T淋巴细胞介导的宿主防御，包括淋巴因子分泌和细胞毒T细胞(特别地在病毒性感染期间)、补体介导的溶解和调理作用(协助吞噬)和吞噬。抗LAG-3抗体分子再活化机能不良性T细胞的能力将可用于治疗慢性感染、尤其是其中细胞介导的免疫力对完全康复重要的那些感染。
类似于其应用至如先前部分讨论的肿瘤，可以将本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物和制剂单独使用或与第二治疗药或模式组合使用或作为佐剂与疫苗组合使用，以刺激针对病原体或毒素的免疫应答。可能对这种治疗方案特别有用的病原体的例子包括目前不存在有效疫苗的病原体或常规疫苗对其未及完全有效的病原体。这些包括但不限于HIV、(甲型、乙型和丙型)肝炎、流感、疱疹、贾弟鞭毛虫(Giardia)、疟疾、利什曼原虫(Leishmania)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)。抗LAG-3抗体分子疗法还用于对抗随感染过程推移呈现变异型抗原的病原体(如HIV)所建立的感染。
因此，在一些实施方案中，本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物或制剂用来治疗出现感染或面临出现感染风险的受试者。例如，感染指这样的疾病或病状，其归因于宿主中出现在宿主内部复制的外来生物或因子。感染一般涉及正常粘膜或其他组织屏障遭受传染性生物或因子侵犯。出现感染的受试者是这样的受试者，其具有可客观度量的在受试者体内存在的传染性生物或因子。面临出现感染风险的受试者是使其易于形成感染的受试者。这种受试者可以包括例如已知或疑似暴露于传染性生物或因子的受试者。面临出现感染风险的受试者还可以包具有下述病状的受试者，所述病状与针对传染性生物或因子发起免疫应答的能力受损相关，例如，具有先天性或获得性免疫缺陷的受试者、接受放射治疗或化疗的受试者、具有烧伤损伤的受试者、具有创伤性损伤的受试者、接受手术或其他侵入性医疗术或牙科术的受试者。
基于涉及的传染性生物或因子的类别，将感染广泛地划分为细菌性、病毒性、真菌性或寄生体性。其他不太常见的感染类型例如包括这样的感染，其涉及立克次体、支原体和造成痒病、牛海绵状脑病(BSE)和朊蛋白病(例如，库鲁病和Creutzfeldt-Jacob病)的因子。本领域熟知造成感染的细菌、病毒、真菌和寄生体的实例。感染可以是急性、亚急性、慢性或潜伏性的，并且它可以局限性或全身性的。另外，感染可以在宿主中传染性生物或因子的生活周期的至少一阶段期间优势地为胞内或胞外。
病毒
在某些实施方案中，本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物或制剂用来治疗与病毒相关的病毒性感染或疾病。
已经发现在人类中造成感染的病毒的实例包括但不限于：逆转录病毒科(Retroviridae)(例如，人免疫缺陷病毒、如HIV-1(也称作HTLV-III)、HIV-2、LAV或HTLV-III/LAV或HIV-III、和其他分离株，如HIV-LP；小RNA病毒科(Picornaviridae)(例如，脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒；肠病毒、人柯萨奇病毒、鼻病毒、埃可病毒)；杯状病毒科(Calciviridae)(例如，造成胃肠炎的毒株)；披膜病毒科(Togaviridae)(例如，马脑炎病毒、风疹病毒)；黄病毒科(Flaviviridae)(例如，登革病毒、脑炎病毒、黄热病毒)；冠状病毒科(例如，冠状病毒)；弹状病毒科(Rhabdoviridae)(例如，水泡性口炎病毒、狂犬病病毒)；丝状病毒科(Filoviridae)(例如，埃博拉病毒)；副粘病毒科(Paramyxoviridae)(例如，副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞体病毒)；正粘病毒科(Orthomyxoviridae)(例如，流感病毒)；布尼亚病毒科(Bunyaviridae)(例如，汉坦病毒、布尼亚病毒、白蛉热病毒和内罗毕病毒)；沙粒病毒科(Arenaviridae)(出血热病毒)；呼肠孤病毒科(Reoviridae)(例如，呼肠孤病毒、环状病毒和轮状病毒)；双RNA病毒科(Birnaviridae)；嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)(乙型肝炎病毒)；细小病毒科(Parvoviridae)(细小病毒)；乳多空病毒科(Papovaviridae)(***瘤病毒、多瘤病毒)；腺病毒科(Adenoviridae)(大部分腺病毒)；疱疹病毒科(Herpesviridae)(单纯疱疹病毒(HSV)1和2、水痘带状疱疹病毒、巨细胞病毒(CMV)、疱疹病毒；痘病毒科(Poxyiridae)(天花病毒、痘苗病毒、痘病毒)；和虹彩病毒科(Iridoviridae)(例如，非洲人猪瘟病毒)；和未分类病毒(例如，海绵状脑病的病因学因子、δ肝炎因子(据认为是乙型肝炎病毒的缺陷型卫星)、非甲非乙肝炎因子(1类＝经肠道传播；2类＝肠道外传播(即，丙型肝炎)；诺瓦克病毒及相关病毒、和星状病毒)。可通过本文方法治疗的病性病毒造成感染的一些实例包括HIV、肝炎病毒(甲型、乙型或丙型)、疱疹病毒(例如，VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、EB病毒)、腺病毒、流感病毒、黄病毒、艾柯病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞体病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、痘苗病毒、HTLV病毒、登革病毒、***瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒和虫媒脑炎病毒。
对于因病毒性病因产生的感染，可以通过与治疗病毒性感染的标准治疗药同时、在其之前或之后施加，联用抗LAG-3抗体分子。这类标准疗法根据病毒类型变动，不过在几乎全部情况下，施用含有对病毒特异的抗体(例如，IgA、IgG)的人血清性可能有效。
可通过本文方法治疗的致病性病毒造成感染的一些实例包括HIV、肝炎病毒(甲型、乙型和丙型)、疱疹病毒(例如，VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、EB病毒)、腺病毒、流感病毒、黄病毒、艾柯病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞体病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、痘苗病毒、HTLV病毒、登革病毒、***瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒、虫媒脑炎病毒和埃博拉病毒(例如，BDBV、EBOV、RESTV、SUDV和TAFV)。
在一个实施方案中，感染是流感感染。流感感染可以导致发热、咳嗽、肌痛、头痛和不适，这些经常在季节性流行中出现。流感还与多种感染后疾病，如脑炎、心肌心包炎、Goodpasture综合征和Reye综合征相关。流感感染还阻抑正常的肺抗菌防御，从而从流感康复的患者出现细菌性肺炎的风险增加。流感病毒表面蛋白显示因突变和重组所致的明显抗原变异。因此，溶细胞性T淋巴细胞是宿主在感染后消除病毒的主要工具。流感划分为三个主要类型：甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒的独特之处在于，它既感染人，又感染许多其他动物(例如，猪、马、禽类和海豹)，并且是大流行流感的主要原因。另外，当时细胞受两个不同的甲型流感毒株感染时，两个亲本病毒类型的分段RNA基因组片段在复制期间混合以产生杂合复制体，从而产生新的流行毒株。乙型流感病毒在动物中不复制并且因此具有较少的遗传性变异，并且丙型流感病毒仅具有单一血清型。
最常规的治疗是缓解因感染产生的症状，而宿主的免疫应答实际上清除疾病。但是，某些毒株(例如，甲型流感病毒)可以造成更严重的疾病和死亡。甲型流感可以通过施用抑制病毒复制的环状胺抑制剂金刚烷胺(amantadine)和金刚乙胺在临床上及预防性治疗。然而，这些药物的临床使用是有限的，原因在于不良反应的发生率相对高、它们的抗病毒谱窄(仅针对甲型流感)和病毒倾向于变得更耐药。施用针对流感主要表面蛋白、血凝素和神经氨酸酶的血清IgG抗体可以阻止肺感染，而需要粘膜IgA以阻止上呼吸道和气管的感染。当前最有效的流感治疗是施用***或β-丙内酯灭活的病毒接种疫苗。
在另一个实施方案中，感染是肝炎感染，例如，乙型肝炎或丙型肝炎感染。
乙型肝炎病毒(HB-V)是已知感染性最强的血源病原体。它是急性及慢性肝炎和肝癌以及终生慢性感染的主要病因。在感染后，病毒在肝细胞中复制，肝细胞随后还散播表面抗原HBsAg。检测血清中过多水平的HBsA是诊断乙型肝炎感染的标准方法。急性感染可以被治愈或它可以发展成慢性持续性感染。慢性HBV的当前治疗包括α-干扰素，其增加I类人白细胞抗原(HLA)在肝细胞表面上表达，因而促进细胞毒T淋巴细胞识别它们。另外，核苷类似物更昔洛韦、泛昔洛韦和拉米夫定也已经在临床试验中还显示有效治疗HBV感染。HBV的额外治疗包括聚乙二醇化α-干扰素、阿德福韦(adenfovir)、恩替卡韦和替比夫定。尽管可以通过肠胃外施用抗HBsAg血清抗体赋予被动免疫力，但是用灭活或重组HBsAg接种也赋予抗感染性。为了治疗益处，抗LAG-3抗体分子可以为了治疗优势与用于乙型肝炎感染的常规治疗组合。
丙型肝炎病毒(HC-V)感染可以导致慢性形式的肝炎，产生肝硬化。尽管症状类似于因乙型肝炎产生的感染，明显不同于HB-V，感染的宿主可以无症状10-20年。抗LAG-3抗体分子可以作为单药疗法施用或与丙型肝炎感染的标准治疗组合。例如，抗LAG-3抗体分子可以与以下一者或多者一起施用：Sovaldi(索非布韦)、Olysio(西米普韦(simeprevir))，外加利巴韦林或PEG化干扰素。尽管包括Incivek(特拉匹韦(telaprevir))或Victrelis(波普瑞韦(boceprevir))外加利巴韦林和PEG化干扰素的方案也获批准，但是它们与增加的副作用和较长的治疗持续时间相关并且因此不视为优选的方案。
HC-V感染的常规治疗包括施用α-干扰素和利巴韦林组合。一种有前景的潜在HC-V感染疗法是蛋白酶抑制剂特拉匹韦(VX-960)。额外的治疗包括：抗PD-1抗体(MDX-1106、Medarex)、巴维昔单抗(以B2糖蛋白I依赖性方式结合阴离子性磷脂磷脂酰丝氨酸的抗体，Peregrine Pharmaceuticals)、抗HPV病毒衣壳蛋白E2抗体(例如，ATL6865-Ab68+Ab65，XTLPharmaceuticals)和
Figure BDA0002415648750002111
(多克隆抗HCV人免疫球蛋白)。本发明的抗LAG-3抗体可以为了治疗优势与用于这些丙型肝炎感染治疗药中一者或多者组合。可以与抗LAG-3抗体分子组合使用以特异性治疗丙型肝炎感染的蛋白酶抑制剂、聚合酶抑制剂和NS5A抑制剂包括US 2013/0045202中描述的那些，所述文献通过引用的方式并入本文。
在另一个实施方案中，感染是麻疹病毒感染。在潜伏9-11天后，麻疹病毒感染的宿主出现发热、咳嗽、鼻炎和结膜炎。在1-2天内，红斑状、斑丘疹性皮疹形成，其迅速遍布全身。因为感染还抑制细胞免疫力，所以宿主面临出现细菌性双重感染(包括中耳炎、肺炎和感染后脑脊髓炎)的更大风险。急性感染与明显的病态和死亡率相关，尤其在营养不良的青少年中。
麻疹的治疗包括被动施用汇集的人IgG，这可以在无免疫力的受试者中防止感染，即使暴露后最长一周才给予。但是，用活的减毒病毒事先免疫是最有效的治疗并且在超过95％接受免疫的受试者中防止疾病。由于这种病毒存在一个血清型，所以单次免疫或感染一般导致终生保护免于后续感染。
在小比例的感染宿主中，麻疹可以发展成SSPE，它是一种因中枢神经***持续性感染产生的慢性进行性神经***疾病。SSPE由带缺陷的麻疹病毒克隆性变体引起，所述缺陷干扰病毒粒装配和出芽。对于这些患者，将需要用抗LAG-3抗体分子再活化T细胞从而促进病毒清除。
在另一个实施方案中，感染是HIV感染。HIV攻击CD4+细胞，包括T淋巴细胞、单核细胞-巨噬细胞、滤泡树状细胞和郎格罕氏细胞，并且CD4+辅助/诱导细胞耗尽。作为结果，宿主获得严重的细胞介导免疫力缺损。HIV感染在至少50％的个体中导致AIDS并且通过以下方式传播：性接触、施用感染的血液或血液制品、用感染的***人工授精、暴露于含血液的针头或注射器和在分娩期间从感染母亲传播至婴儿。
被HIV感染的宿主可以无症状或可以形成类似于单核细胞增多症的急性病情-发热、头痛、咽喉痛、不适和皮疹。症状可以进展成进行性免疫功能障碍，包持续发热、盗汗、体重减轻、原因不详的腹泻、湿疹、银屑病、脂溢性皮炎、带状疱疹、口腔念珠菌病和口腔毛状白斑。在其感染发展成AIDS的患者中常见因寄生体的宿主所致的机会感染。
HIV的治疗包括抗病毒治疗药，包括单独或与去羟肌苷或扎西他滨、双脱氧肌苷、双脱氧胞苷、拉米夫定(lamidvudine)、司他夫定组合的核苷类似物齐多夫定(AST)；逆转录抑制剂如地拉韦啶、奈韦拉平、洛韦胺，和蛋白酶抑制剂如沙奎那韦、利托那韦、茚地那韦和奈非那韦。抗LAG-3抗体分子可以为了治疗优势与用于HIV感染的常规治疗组合。
在另一个实施方案中，感染是巨细胞病毒(CMV)感染。CMV感染经常与持续性、潜伏和复发性感染相关。CMV感染单核细胞和粒细胞-单核细胞祖先细胞并且在其中保持潜伏。CMV的临床症状包括单核细胞增多症样症状(即发热、腺体肿大、不适)和对抗生素出现过敏性皮疹的倾向。该病毒通过直接接触扩散。病毒散播在尿、唾液、***中和更低程度地散播在其他体液中。传播还可以从感染的母亲至其胎儿或新生儿发生和通过输血和器官移植物发生。CMV感染通常导致细胞免疫力受损，其特征为对非特定有丝***原和特定CMV抗原的母细胞化反应受损、细胞毒能力削弱和CD8+淋巴细胞对CD4+淋巴细胞比例升高。
CMV感染的治疗包括抗病毒药更昔洛韦、膦甲酸和cidovir，但是一般仅在免疫受损的患者中开具这些药物。抗LAG-3抗体分子可以为了治疗优势与用于巨细胞病毒感染的常规治疗组合。
在另一个实施方案中，感染是Epstein-Barr病毒(EBV)感染。EBV可以建立持续性和潜伏感染并主要攻击B细胞。EBV感染导致传染性单核细胞增多症的临床状况，这包括发热、咽喉痛，经常伴渗出物、泛发性***病和脾脏肿大。还出现肝炎，这可以发展成黄疸。
尽管EBV病毒感染的常见治疗是缓解症状，但是EBV与某些癌(如Burkitt淋巴瘤和鼻咽癌)的形成相关。因此，在这些并发症产生前清除病毒性感染将具有巨大益处。抗LAG-3抗体分子可以为了治疗优势与用于Epstein-Barr病毒感染的常规治疗组合。
在另一个实施方案中，感染是单纯疱疹病毒(HSV)感染。HSV通过直接接触感染的宿主传播。直接感染可以是无症状的，但是一般产生含有感染性粒子的水泡。疾病表现为病情活跃阶段的循环，其中损害出现并随着病毒潜隐性感染神经节而消失以便后续暴发。损害可以在面部、生殖器、眼和/或手掌上。在一些情况下，感染还可以引起脑炎。
疱疹感染的治疗主要涉及使征候性暴发消散，并且包括全身性抗病毒药物如：阿昔洛韦(例如，
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)、万乃洛韦(valaciclovir)、泛昔洛韦、喷昔洛韦和局部用药物如二十二烷醇
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曲金刚胺(tromantadine)和zilactin。清除疱疹潜伏感染将具有巨大的临床获益。抗LAG-3抗体分子可以为了治疗优势与用于疱疹病毒感染的常规治疗组合。
在另一个实施方案中，感染是嗜人T淋巴细胞病毒(HTLV-1、HTLV-2)感染。HTLV通过性接触、母乳喂养或暴露于污染的血液传播。该病毒活化了称作Th1细胞的TH细胞亚群，导致Th1相关的细胞因子的过度增殖及过量产生(例如，IFN-γ和TNF-α)。这转而导致抑制Th2淋巴细胞及Th2细胞因子产生(例如，IL-4、IL-5、IL-10和IL-13)减少，造成感染宿主对入侵生物发起足够免疫应答的能力降低，其中所述能力需要Th2-依赖性反应以便清除(例如，寄生体感染、产生粘膜抗体和体液抗体)。
HTLV感染引起机会性感染，所述机会性感染导致支气管扩张症、皮炎和葡萄球菌属物种(Staphylococcus spp.)和类圆线虫属物种(Strongyloides spp.)双重感染，导致死于多菌性败血症(polymicrobial sepsis)。HTLV感染还可以直接导致成人T细胞白血病/淋巴瘤和进行性脱髓鞘性上运动神经元病，称作HAM/TSP。清除HTLV潜伏感染将具有巨大的临床获益。抗LAG-3抗体分子可以为了治疗优势与用于HTLV感染的常规治疗组合。
在另一个实施方案中，感染是人***瘤病毒(HPV)感染。HPV主要侵袭角质形成细胞并以两种形式出现：皮肤型和生殖器型。认为传播通过直接接触和/或性活动发生。皮肤和生殖器HPV感染均可以导致疣和潜伏感染及有时反复感染，这取决于宿主免疫力，所述宿主免疫力控制症状并阻止疣出现，但是留下能够向其他宿主传播感染的宿主。
HPV感染还可以导致某些癌，如子宫颈、***、外阴、***和口咽癌。不存在已知的HPV感染治愈措施，但是当前治疗是局部施用咪喹莫特，其刺激免疫***攻击受累区域。清除HPV潜伏感染将具有巨大的临床获益。本发明的抗LAG-3抗体可以为了治疗优势与用于HPV感染的常规治疗组合。
在另一个实施方案中，感染是埃博拉病毒(EBOV)。EBOV是埃博拉属内部的五种已知病毒之一。EBOV在人类中和哺乳动物造成严重和经常致命的出血热，称作埃博拉病毒病(EVD)。传播因接触于感染患者的血液、分泌物、器官或其他体液而出现。目前，不存在已证明的治疗或疫苗。
细菌
在某些实施方案中，本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物或制剂用来治疗与细菌相关的细菌性感染或疾病。
细菌包括革兰氏阴性和***。***的实例包括但不限于巴氏杆菌属(Pasteurella)物种、葡萄球菌属(Staphylococci)物种和链球菌属(Streptococcus)物种。革兰氏阴性细菌的实例包括但不限于大肠杆菌、假单胞菌属(Pseudomonas)物种和沙门氏菌属(Salmonella)物种。感染性细菌的具体实例包括但不限于：幽门螺杆菌(Helicobacter pyloris)、伯氏包柔氏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophilia)、分枝杆菌属某些物种(Mycobacteria spp.)(例如，结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、鸟分枝杆菌(M.avium)、胞内分枝杆菌(M.intracellular)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、戈登分枝杆菌(M.gordonae))、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、单核增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)(A型链球菌)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)(B型链球菌)、链球菌属(草绿色组)、粪链球菌(Streptococcus faecalis)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、链球菌属(某些厌氧性物种)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、弯曲杆菌属某些致病性物种(Campylobacter spp.)、肠球菌属某些物种(Enterococcus spp.)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、棒状杆菌属某些物种(Corynebacterium spp.)、红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、多杀巴氏菌(Pasturella multocida)、拟杆菌属某些物种(Bacteroides spp.)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)、念珠状链杆菌(Streptobacillus moniliformis)、苍白密螺旋体(Treponema pallidum)、细弱密螺旋体(Treponema pertenue)、钩端螺旋体属(Leptospira)、麻风分支杆菌(Mycobacterium leprae)、立克次体(Rickettsia)和以色列放线菌(Actinomyces israelii)。造成通过本文方法可治疗的感染的病原菌的一些实例包括衣原体、立克次体、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和***(conococci)、克雷伯菌、变形菌、沙雷菌、假单胞菌、军团菌、白喉杆菌、沙门氏菌、芽孢杆菌、霍乱菌、破伤风菌、肉毒杆菌、炭疽菌、鼠疫菌、钩端螺旋体和莱姆病菌。
造成通过本发明方法可治疗的感染的病原菌的一些实例包括梅毒、衣原体、立克次体、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和***(conococci)、克雷伯菌、变形菌、沙雷菌、假单胞菌、军团菌、白喉杆菌、沙门氏菌、芽孢杆菌、霍乱菌、破伤风菌、肉毒杆菌、炭疽菌、鼠疫菌、钩端螺旋体和莱姆病菌。抗LAG-3抗体分子可以与现有治疗模式组合用于前述感染。例如，梅毒治疗包括青霉素(例如，青霉素G)、四环素、多西环素、头孢曲松和阿奇霉素。
伯氏包柔氏螺旋体(Borrelia burgdorferi)引起的莱姆病通过蜱叮咬传播至人。本病起初表现为局限性皮疹，随后是流感样症状，包括不适、发热、头痛、颈部僵硬和关节痛。稍后，表现可以包括游走性和多关节型关节炎、神经***累及和心脏累及伴颅神经麻痹和神经根病、心肌炎和心率失常。一些莱姆病病例具有迁延性，导致类似于三期梅毒的不可逆性损伤。莱姆病当前疗法主要包括施用抗生素。可以用羟氯喹或甲氨蝶呤治疗抗生素耐药型菌株。具有神经病理性疼痛的抗生素难治性患者可以用加巴喷丁治疗。米诺环素可以有益于伴有神经***表现或其他炎性表现的晚期/慢性莱姆病。
其他形式的疏螺旋体病(borreliois)，如因回归热疏螺旋体(B.recurentis)、赫姆斯疏螺旋体(B.hermsii)、B.turicatae、B.parikeri、西班牙疏螺旋体(B.hispanica)、杜通疏螺旋体(B.duttonii)和波斯疏螺旋体(B.persica)产生的那些，以及钩端螺旋体病(例如，钩端螺旋体(L.interrogans))，一般自发治愈，除非血液滴度达到造成肝内阻塞的浓度。
真菌和寄生体
在某些实施方案中，本文所述的抗LAG-3抗体分子、组合物或制剂用来治疗与真菌和寄生体相关的真菌和寄生体感染或疾病。
真菌的实例包括：曲霉属某些物种(Aspergillus spp.)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、白假丝酵母(Candida albicans)、假丝酵母属其他某些物种(Candida spp.)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、新型隐球酵母(Cryptococcusneoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)、奴卡菌属某些物种(Nocardia spp.)、卡氏肺囊虫(Pneumocystiscarinii)。造成通过本文方法可治疗的感染的致病真菌的一些实例包括假丝酵母(白假丝酵母(Candida albicans)、克柔假丝酵母(Candida krusei)、光滑假丝酵母(Candidaglabrata)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)等)、新型隐球酵母(Cryptococcusneoformans)、曲霉(Aspergillus)(烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉(Aspergillus niger)等)、毛霉目(Mucorales)(毛霉(mucor)、犁头霉(absidia)、根霉(rhizophus))、申克孢子丝菌(Sporothrix schenkii)、皮炎芽生菌(Blastomycesdermatitidis)、巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。
寄生体包括但不限于血源性和/或组织寄生体如田鼠巴贝虫(Babesia microti)、分歧巴贝虫(Babesia divergens)，溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)、热带利什曼原虫(Leishmania tropica)、利什曼属某些物种(Leishmania spp.)、巴西利什曼原虫(Leishmania braziliensis)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、三日疟原虫(Plasmodiummalariae)、卵形疟原虫(Plasmodium ovale)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)和刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、冈比亚锥虫(Trypanosoma gambiense)和罗德西亚锥虫(Trypanosoma rhodesiense)(非洲睡眠病)、枯氏锥虫(Trypanosoma cruzi)(南美锥虫病)、和刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、扁虫、圆虫。造成通过本发明方法可治疗的感染的寄生体的一些实例包括包括溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)、棘阿米巴属物种(Acanthamoeba sp.)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lambia)、隐孢子虫属物种(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)、田鼠巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、枯氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、刚地弓形虫(Toxoplasmagondi)和巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。
造成通过本发明方法可治疗的感染的致病真菌的一些例子包括假丝酵母(白假丝酵母(Candida albicans)、克柔假丝酵母(Candida krusei)、光滑假丝酵母(Candidaglabrata)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)等)、新型隐球酵母(Cryptococcusneoformans)、曲霉(Aspergillus)(烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉(Aspergillus niger)等)、毛霉目(Mucorales)(毛霉(mucor)、犁头霉(absidia)、根霉(rhizophus))、申克孢子丝菌(Sporothrix schenkii)、皮炎芽生菌(Blastomycesdermatitidis)、巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。
造成通过本文所述方法可治疗的感染的寄生体的一些实例包括包括溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)、棘阿米巴属物种(Acanthamoeba sp.)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialambia)、隐孢子虫属物种(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、田鼠巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosomabrucei)、枯氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondi)和巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。
核酸
本文所述的抗LAG-3抗体分子可以由本文所述的核酸编码。核酸可以用来产生本文所述的抗LAG-3抗体分子。
在某些实施方案中，核酸包含如本文所述的编码抗LAG-3抗体分子的重链可变区和轻链可变区和CDR的核苷酸序列。例如，本公开的特征在于第一核酸和第二核酸，所述第一核酸和第二核酸分别编码选自本文公开的一种或多种抗体分子(例如，US 2015/0259420的表1的抗体)中的抗LAG-3抗体分子的重链可变区和轻链可变区。该核酸可以包含编码本文各表中任一个氨基酸序列的核苷酸序列或与之基本上相同的序列(例如，与之具有至少约85％、90％、95％、99％或更多同一性或者与表1中提供的序列差异不多于3、6、15、30或45个核苷酸的序列)。例如，本发明的特征在于如表1中总结的第一和第二核酸或与之基本上相同的序列，所述第一和第二核酸分别编码抗LAG-3抗体分子的重链可变区和轻链可变区，所述抗LAG-3抗体分子选自以下一者或多者(例如，以下任一者)：BAP050-hum01、BAP050-hum02、BAP050-hum03、BAP050-hum04、BAP050-hum05、BAP050-hum06、BAP050-hum07、BAP050-hum08、BAP050-hum09、BAP050-hum10、BAP050-hum11、BAP050-hum12、BAP050-hum13、BAP050-hum14、BAP050-hum15、BAP050-hum16、BAP050-hum17、BAP050-hum18、BAP050-hum19、BAP050-hum20、huBAP050(Ser)(例如，BAP050-hum01-Ser、BAP050-hum02-Ser、BAP050-hum03-Ser、BAP050-hum04-Ser、BAP050-hum05-Ser、BAP050-hum06-Ser、BAP050-hum07-Ser、BAP050-hum08-Ser、BAP050-hum09-Ser、BAP050-hum10-Ser、BAP050-hum11-Ser、BAP050-hum12-Ser、BAP050-hum13-Ser、BAP050-hum14-Ser、BAP050-hum15-Ser、BAP050-hum18-Ser、BAP050-hum19-Ser或BAP050-hum20-Ser)、BAP050-克隆-F、BAP050-克隆-G、BAP050-克隆-H、BAP050-克隆-I或BAP050-克隆-J。
在某些实施方案中，核酸可以包含一个核苷酸序列，所述核苷酸序列编码来自具有如表1中所述氨基酸序列的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR，或与之基本上同源的序列(例如，与之具有至少约85％、90％、95％、99％或更多同一性和/或具有一个或更多个置换(例如，保守性置换)序列)。在一些实施方案中，核酸可以包含一个核苷酸序列，所述核苷酸序列编码来自具有如表1中所述氨基酸序列的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR，或与之基本上同源的序列(例如，与之具有至少约85％、90％、95％、99％或更多同一性和/或具有一个或更多个置换(例如，保守性置换)序列)。在一些实施方案中，核酸可以包含一个核苷酸序列，所述核苷酸序列编码来自具有如表1中所述氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，或与之基本上同源的序列(例如，与之具有至少约85％、90％、95％、99％或更多同一性和/或具有一个或更多个置换(例如，保守性置换)序列)。
在某些实施方案中，核酸可以包含一个核苷酸序列或与之基本上同源的序列(例如，与之至少约85％、90％、95％、99％或更多相同和/或能够在本文所述的严格性条件下与之杂交的序列)，所述核苷酸序列编码来自具有如表1中所述核苷酸序列的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR。在一些实施方案中，核酸可以包含一个核苷酸序列或与之基本上同源的序列(例如，与之至少约85％、90％、95％、99％或更多相同和/或能够在本文所述的严格性条件下与之杂交的序列)，所述核苷酸序列编码来自具有如表1中所述核苷酸序列的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR。在某些实施方案中，核酸分子可以包含核苷酸序列或与之基本上同源的序列(例如，与之至少约85％、90％、95％、99％或更多相同和/或能够在本文所述的严格性条件下与之杂交的序列)，所述核苷酸序列编码来自具有如表1中所述核苷酸序列的重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR。本文公开的核酸包含脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果为单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸及核苷酸类似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分打断。可以在聚合后进一步修饰多核苷酸，如通过与标记组分缀合。核酸可以是重组多核苷酸或在自然界中不存在或与另一个多核苷酸以非自然布局连接的基因组来源、cDNA来源、半合成来源或合成来源的多核苷酸。
在某些实施方案中，编码抗LAG-3抗体分子的核苷酸序列是经密码子优化的。
在一些实施方案中，公开了包含如本文所述的核苷酸序列的核酸，所述核苷酸序列编码抗LAG-3抗体分子的重链可变区和轻链可变区和CDR。例如，本公开提供了第一核酸和第二核酸或与之基本上相同的序列，所述第一核酸和第二核酸分别编码根据表1的抗LAG-3抗体分子的重链可变区和轻链可变区。例如，核酸可以包含一种核苷酸序列或与该核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更高同一性或与前述核苷酸序列相异不多于3、6、15、30或45个核苷酸的序列)，所述核苷酸序列编码根据表1的抗LAG-3抗体分子。
在某些实施方案中，核酸分子包含核苷酸序列，其编码来自具有如表1中所述氨基酸序列的重链可变区，或与其基本上同源的序列(例如，与之具有至少约85％、90％、95％、99％或更多同一性，和/或具有一个、两个、三个或更多个置换、***或缺失(例如，保守性置换)序列)的至少一个、两个或三个CDR或高变环。
在某些实施方案中，核酸分子包含核苷酸序列，其编码来自具有如表1中所述氨基酸序列的轻链可变区或与其基本上同源的序列(例如，与之具有至少约85％、90％、95％、99％或更多同一性，和/或具有一个、两个、三个或更多个置换、***或缺失(例如，保守性置换)序列)的至少一个、两个或三个CDR或高变环。
在一些实施方案中，核酸分子可以包含核苷酸序列，其编码来自具有如表1中所述氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区，或与之基本上同源的序列(例如，与之具有至少约85％、90％、95％、99％或更多同一性和/或具有一个、两个、三个或更多个置换、***或缺失(例如，保守性置换)序列)的至少一个、两个、三个、四个五个或六个CDR或高变环。
在一些实施方案中，核酸是分离或重组的。
本文所述的核酸可以存在于单一载体或分立载体中，所述载体存在于相同的宿主细胞或分立的宿主细胞中，如本文中更详细描述。
载体和宿主细胞
使用含有本文所述的核酸的宿主细胞和载体，可以产生本文所述的抗LAG-3抗体分子。核酸可以存在于单一载体或分立载体中，所述载体存在于相同的宿主细胞或分立的宿主细胞中。
在一个实施方案中，载体包含编码本文所述的抗体分子的核苷酸。在一个实施方案中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
可以使用众多载体***。例如，一个类别的载体利用衍生自动物病毒的RNA元件，所述病毒例如牛***瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、痘苗病毒、杆状病毒、逆转录病毒(劳斯肉瘤病毒、MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一类载体利用衍生自RNA病毒的DNA元件，所述病毒如Semliki森林病毒、东方马脑炎病毒和黄病毒。
另外，可以通过引入允许选择已转染宿主细胞的一个或多个标记，选出已经稳定集成DNA至其染色体中的细胞。标记可以例如向营养缺陷型宿主提供原养型、提供杀生物抗性(例如，抗生素)或提供重金属(如铜)抗性等。选择标记基因可以与待表达的DNA序列直接连接或通过共转化引入相同的细胞中。也可能需要额外元件以便最佳合成mRNA。这些单元可以包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。
一旦已经制备了用于表达的含有表达载体或DNA序列的构建体，则可以将表达载体转染或引入适宜的宿主细胞中。多种技术可以用来实现这个目的，如，例如，原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒的转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情况下，将细胞在培养基中培育并且筛选适宜的活性。用于培养所产生的转染细胞和用于回收产生的抗体分子的方法和条件是本领域技术人员已知的，并且可以基于本说明书，根据使用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞变动或优化。
在某些实施方案中，宿主细胞包含核酸，所述核酸编码本文所述的抗LAG-3抗体分子。在其他实施方案中，将宿主细胞基因工程化以包含一种编码抗LAG-3抗体分子的核酸。
在一个实施方案中，通过使用表达盒，将宿主细胞基因工程化。短语“表达盒”指能够在与这类序列相容的宿主中影响基因表达的核苷酸序列。这类盒可以包含启动子、附带或不附带内含子的可读框和终止信号。也可以使用在实现表达时必需或有益的额外因子，如，例如，诱导型启动子。在某些实施方案中，宿主细胞包含本文所述的载体。
细胞可以是但不限于真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于Vero细胞、HeLa细胞、COS细胞、CHO细胞、HEK293细胞、BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于Sf9细胞。
在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如，哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或原核细胞，例如，大肠杆菌。例如，哺乳动物细胞可以是培养的细胞或细胞系。示例性哺乳动物细胞包括淋巴细胞系(例如，NSO)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS细胞、***和来自转基因动物的细胞，例如，乳腺上皮细胞。
实施例
描述以下实施例以辅助本发明的理解，而不意在且不应当以任何方式解释成限制其范围。
实施例1：示例性抗LAG-3抗体和可溶性LAG-3的群体药代动力学和药效动力学
发明简述
这项研究的目的是预测血清抗LAG-3抗体浓度和在血清中(可溶性LAG-3)LAG-3占据情况之间的关系，血清抗LAG-3抗体浓度和肿瘤中(膜结合型LAG-3)中LAG-3占据情况之间的关系；评估抗LAG-3抗体剂量和药代动力学(PK)之间的关系，及PK变化是否取决于剂量；评估来自固定给药和基于体重给药的抗LAG-3稳态谷浓度的预期变化；和评估抗PD-1抗体的联用是否影响抗LAG-3抗体暴露量。
这项研究中使用以下方法。一个两区室、线性群体PK模型用来描述抗LAG-3抗体浓度。一个描述靶介导的药物处置的标准结合模型用来描述可溶性LAG-3数据；使用了准平衡近似值。一个协变量分析用来评估体重对清除率和中央室容积与外周容积的影响。一个图形分析用来评估联用抗PD-1抗体对抗LAG-3抗体清除率的影响。随后进行模型模拟，以对血清中的可溶性LAG-3和肿瘤中的膜结合型LAG-3鉴定抗LAG-3抗体剂量和非占据LAG-3之间的关系。
从这项研究获得以下结果。表征了在剂量和血清中及肿瘤中的非占据LAG-3之间的关系。抗LAG-3抗体PK在低于每2-4周80mg的剂量出现非线性并且在高于每3-4周240mg的剂量出现线性。预测固定给药方案和基于体重的给药方案产生稳态时可比的谷浓度变化。未观察到与抗PD-1抗体联用对抗LAG-3抗体PK的显著影响。
通过该模型充分表征了240mg和以上的剂量时，抗LAG-3抗体剂量和血清可溶性LAG-3受体占据情况之间的关系、抗LAG-3抗体剂量和瘤内膜结合型LAG-3受体占据情况之间的关系。在较低剂量(例如每2-4周80mg)，一些患者中观察到抗LAG-3抗体PK的非线性。高于每3-4周240mg，抗LAG-3抗体PK出现线性。认为非线性归因于靶介导的药物处置，如对许多其他单克隆抗体所观察到那样。预测固定给药和基于体重给药产生抗LAG-3抗体稳态谷浓度的可比性变化。与抗PD-1抗体联用对抗LAG-3抗体PK未显示任何明显影响。
本实施例中说明的观察结果可以用来指导本文所述的抗LAG-3抗体分子的剂量选择。
数据
这项研究使用来自晚期实体肿瘤患者中剂量递增研究的数据，其中示例性抗LAG-3抗体(LAG525)作为单药疗法给予，和与示例性抗PD-1抗体(PDR001)组合给予。在多个时间(输注前、第1小时、第1、第7、第10、第14天)测量抗LAG-3抗体浓度和可溶性LAG-3浓度。
通过定量下限为250ng/ml(1.7nM)的液相色谱质谱法(LC/MS)，定量抗LAG-3抗体。人血清中通过定量下限为0.146ng/ml(1pM)的酶联免疫吸附测定(ELISA)，定量总可溶性LAG-3。
生成单一数据集并且在最关键水平验证。全部抗LAG-3抗体量值和可溶性LAG-3量值均纳入这项分析。无数据排除或分类为离群值。
方法
使用非线性混合效应建模方案，进行这项研究，其中该模型具有两个组件：解释数据中***趋势的结构模型，和解释关于那些趋势的受试者间变异性和残余变异性的随机效应模型。协变量模型描述怎样并入协变量。针对PK和可溶性LAG-3数据同时拟合PopPKPD模型。随后采用附加假设进行模型模拟，以预测肿瘤中的膜结合型LAG-3抑制。
使用Monolix软件***，2016R1版，利用MODESIM高性能计算环境，执行分析。技术计算软件包R用来探索数据、辅助模型建立并报告最终结果。
尽管首先分析该数据时探索过许多模型，但仅使用单一结构模型，原因是发现这个模型足以满足目的。
结构模型：抗LAG-3、可溶性LAG-3和复合物浓度的结构性PKPD模型是一个标准结合模型，其以准平衡近似值用于描述靶介导的药物处置(TMDD)(Mager和Krzyzanski.Pharmaceutical Research 22,1589–1596(2005))，从而微分方程描述了总药物浓度、总靶浓度和外周药物浓度，并且下文的代数表达式用来计算游离药物浓度、非占据靶浓度和复合物浓度。
还拟合了这个模型的Michaelis-Menten形式。在探索性分析中，这个模型并未改善拟合，并且因而不再探索它。
随机效应模型：该PK模型由以下四个参数参数化：清除率、中央室容积(centralvolume)、外周容积(peripheral volume)和区室间清除率，并且PD(可溶性LAG-3)模型增加以下四个参数：初始sLAG-3、大剂量抗LAG-3抗体的稳态sLAG-3、抗体-sLAG-3复合物消除率和解离常数。将对数正态随机效应添加至全部八个参数。
协变量模型：使用协变量分析评估体重对清除率和中央室容积的影响。使用图形分析通过比较患者中的抗LAG-3抗体浓度，评估抗PD-1抗体对抗LAG-3抗体PK的影响，所述患者接受相同抗LAG-3抗体给药方案并且接受或不接受抗PD-1抗体。未进行正式协变量分析，因为患者在最低抗LAG-3抗体剂量(0.3mg/kg q2w)时具有最快的消除速率，并且还总是接受抗PD-1抗体。认为，最低剂量时较快的消除归因于靶介导的药物处置，但观察到这种效应混淆了作为关于清除率协变量的抗PD-1抗体的正式评估。
比较固定给药方案和体重放大的给药方案：使用对于每2、3或4周给予的10mg/kg或700mg的模型，模拟1000名患者在第24周(大约6个月)时的抗LAG-3抗体谷浓度。初步模型拟合显示，抗LAG-3抗体的终末半寿期是2周左右，从而预期全部患者截止第24周时为稳态；另外，第24周是全部受测给药方案(q2w、q3w、q4w)的谷底。标出了中位数和95％预测区间值。假定常见患者体重80kg，从而可以计算等效性固定给药方案(例如1mg/kg对应于80mg)。但是，这项研究中群体的中位体重更接近于70kg。出于该原因，对于这个具体模拟，将10mg/kg与700mg比较。
预测血清中和肿瘤中的LAG-3抑制作用：来自上述PKPD模型的模拟用来评估6个月谷浓度时的LAG-3占据情况，此时PK为稳态。提供了两个不同的LAG-3占据情况评估值：(1)血清中非占据可溶性LAG-3与基线可溶性LAG-3的比率，其从PKPD模型直接计算；和(2)肿瘤中膜结合型LAG-3的占据情况(RO)。
认为，预测肿瘤内的LAG-3抑制作用对指导剂量选择更有意义，因为这是肿瘤浸润型淋巴细胞与肿瘤相互作用的位点。
使用这种方法预测肿瘤中的靶占据情况包括众多假设：(1)针对血清中sLAG-3的抗LAG-3抗体的估计解离常数与针对肿瘤中膜结合型LAG-3的抗LAG-3抗体的解离常数相同；(2)基于小鼠数据，人肿瘤中ABCISF＝30％(Deng等人MAbs,vol.8,593–603(2016))；(3)可以象均一组织那样处理肿瘤；(4)肿瘤中的膜结合型LAG-3在药物存在下不积累；(5)相对于肿瘤中膜结合型LAG-3的浓度，抗LAG-3抗体完全过量；和(6)LAG-3和其内源结合配偶体(例如MHCII)之间的结合未建模并且假定这并不显著地影响对抑制的预测。
除这些假设之外，还必须对所需的患者群体部分选择所需的抑制水平。一般，对于拮抗剂，需要60-90％抑制作用，从而这项分析以90-95％的占据情况为目标(Grimwood和Hartig.Pharmacology&Therapeutics122,281–301(2009)；Tiwari等人The AAPS Journal1-10(2016)；Agoram.British Journal of Clinical Pharmacology 67,153-160(2009))。
对于这些试验模拟，按q2w、q3w和q4w方案对1000位患者测试以下剂量：10、20、30、50、70、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000mg。随后，对PK及对血清中可溶性LAG-3占据情况和肿瘤中膜结合型LAG-3占据情况计算5、25、50、75、95百分位数。
结果
总计196位患者纳入这项分析，抗LAG-3抗体评估和可溶性LAG-3评估的中位数随访时间分别为30天和29.5天。表13中显示接受每种给药方案的患者人数的总结，依据每月总剂量(历经四周的平均总剂量)分选。
表13.给药方案和患者人数总结
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获得了抗LAG-3抗体数据和可溶性LAG-3数据。前4周期间的抗LAG-3抗体浓度数据依据首次剂量按mg归一化。基于估计的总月度给药量(历经28天，以mg)，将抗LAG-3抗体剂量划分成四个组(极低、低、中等和高)。对于体重放大的剂量，计算80kg患者的总mg剂量。相比中等剂量数据和高剂量数据，在一些患者中对极低剂量数据和低剂量数据观察到抗LAG-3抗体浓度下降较大，提示较低剂量时的非线性PK。选择分层组显示这种非线性。
首剂后二周(全部方案)获得归一化的抗LAG-3抗体浓度。在较低剂量(80mg及以下)，一些患者中归一化药物浓度下降，提示PK非线性。基于模型分析数据还可以有助于使用全部可获得的数据，更好地表征这种非线性。
PKPD模型拟合
使用的PK参数是单克隆抗体常见的。模拟这些参数，终末半寿期及其5-95％预测区间估计是17.0(7.0、59.9)天。估计的解离常数1.5nM(Kd)高于Biacore测定法中的测量值(0.1nM)，但与基于细胞的体外测定法的测量值(1.9-2.3nM)相当。直观预测检验依据总月度剂量归一化的抗LAG-3抗体浓度，显示PK数据描述良好，例外是其中观察到PK非线性的低剂量组和极低剂量组。每个小组内部进行最大抗LAG-3抗体剂量的模拟。该模拟良好描述了高于3mg/kg(或240mg)q4w的全部剂量的sLAG-3曲线。对于较低剂量数据，过高估计PK并因而也过高估计sLAG-3。
鉴于较低剂量消除更快，事先探索了采用非线性消除的Michaelis-Menten PK模型。但是，拟合并非明显地更好。另外，总体上估计加性误差(additive error)是大约20nM，其比0.3mg/kg q2w或80mg q4w时观察到的谷浓度大得多，甚至对于采用非线性消除的模型也是如此。因此在这个实施例中，仅使用线性模型，同时提醒：该模型过高估计较低剂量时的谷浓度(例如80mg q2w)。
为了建立PK非线性何时变得有意义的阈值，检查了抗LAG-3抗体群体预测值与测量值。注意，低于临界浓度Ccrit＝60nM，群体预测值过高预测了测量值；低于Ccrit，开始观察到非线性PK。使用试验模拟，表14中估计了预期在谷浓度时保持高于Ccrit的患者的比例。
固定剂量给药预测与基于体重的剂量给药预测
对固定剂量给药和体重放大剂量给药模拟按700mg和10mg/kg给药的6个月时的抗LAG-3抗体谷浓度。因为使体重与清除率有关的指数接近于0.5，对接受固定剂量给药或基于体重剂量给药的患者而言，抗LAG-3抗体谷浓度的预测变化是可比的，如从其他药物所观察的那样(Bai等人Clinical pharmacokinetics 51,119–135(2012)；Wang等人,TheJournal of Clinical Pharmacology 49,1012–1024(2009))。由于抗LAG-3抗体PK模型在240mg以上呈线性，对240mg以上的任何剂量将观察到相似的结果。
LAG-3占据情况预测
将模拟的非占据LAG-3浓度与来自PKPD模型的基线比较。回想一下，这个模型并不捕获较低剂量时观察到的PK非线性，并且因而在240mg剂量以下，可能存在比预测更小的LAG-3抑制作用。减少非占据可溶性LAG-3到10％需要的剂量比减少肿瘤内膜结合型LAG-3到10％的剂量高超过10倍。这是因为可溶性LAG-3在血清中蓄积约75倍，而预计膜结合型LAG-3将不蓄积。
表14中总结了来自以上模拟过程的结果，其中总结了稳态时75％、90％和95％患者满足以下三项标准所需的剂量：
1.高于Ccrit的LAG525谷浓度
2.肿瘤的膜结合型LAG-3非占据受体低于基线的10％
3.血清可溶性LAG-3非占据受体低于基线的10％
表14.稳态时75％、90％和95％患者满足依据q2w、q3w和q4w给药方案规定的PK标准或PD标准所需要的预测剂量(mg)。
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注意，线性PK(抗LAG-3抗体谷浓度>Ccrit)所需要的剂量和降低肿瘤非占据mLAG-3浓度到<10％基线所需要的剂量相似。这个结果与以下假设一致：肿瘤浸润型淋巴细胞所致的靶介导的药物处置驱动较低剂量时快速消除。
对于拮抗剂，常见的是，整个给药间隔期间以90-95％受体占据为目标(或与基线相比，5-10％非占据靶)，但是总体上未对LAG-3或免疫检查点抑制蛋白验证该经验法则。如果想要在大多数患者中实现这种受体占据情况，则给予足够大的剂量将至关重要，从而在较低浓度观察不到快速消除。直观预测检验依据总月度剂量归一化的抗LAG-3抗体浓度表明，高于240mg q4w的剂量可能足以避免这种非线性。表14预测400mg q3w或800mg q4w将在90％患者中产生90％受体占据(相比基线，10％非占据LAG-3)。
因此，这项研究显示，通过该模型充分表征了240mg和以上的剂量时，一种示例性抗LAG-3抗体(LAG525)的剂量和血清可溶性LAG-3受体占据情况之间的关系，和抗LAG-3抗体(LAG525)的剂量与瘤内膜结合型LAG-3受体占据情况之间的关系。在较低剂量(例如80mg每2-4周)，一些患者中观察到抗LAG-3抗体PK的非线性。高于240mg每3-4周，抗LAG-3抗体PK出现线性。认为非线性归因于靶介导的药物处置，如对许多其他单克隆抗体所观察到那样。预测，固定给药和基于体重给药产生抗LAG-3抗体稳态谷浓度的可比性变化。与抗PD-1抗体(PDR001)联用对抗LAG-3抗体PK未显示任何明显影响。
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等同物
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Claims (62)

1.一种抗LAG-3抗体分子，在治疗受试者中的癌症时，按约300mg至约500mg每三周一次或约700mg至约900mg每四周一次的剂量使用，
其中抗LAG-3抗体分子包含：重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:702的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ IDNO:703的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:710的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:711的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:712的氨基酸序列的VLCDR3。
2.一种治疗受试者中癌症的方法，所述方法包括将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg每三周一次或约700mg至约900mg每四周一次的剂量向受试者施用，
其中抗LAG-3抗体分子包含：重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:702的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ IDNO:703的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:710的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:711的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:712的氨基酸序列的VLCDR3。
3.根据权利要求1所述用途的抗体分子或根据权利要求2所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg的剂量每三周一次使用。
4.根据权利要求3所述用途的抗体分子，或根据权利要求3所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子按约400mg的剂量每三周一次使用。
5.根据权利要求1所述用途的抗体分子或根据权利要求2所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子按约700mg至约900mg的剂量每四周一次使用。
6.根据权利要求5所述用途的抗体分子，或根据权利要求5所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子按约800mg的剂量每四周一次使用。
7.根据权利要求1或3-6中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-6中任一项所述方法，其中抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列。
8.根据权利要求1或3-7中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-7中任一项所述方法，其中抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:709的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:721的氨基酸序列。
9.根据权利要求1或3-6中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-6中任一项所述方法，其中抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:724的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:730的氨基酸序列。
10.根据权利要求1、3-6或9中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-6或9中任一项所述方法，其中抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:727的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:733的氨基酸序列。
11.根据权利要求1或3-10中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-10中任一项所述方法，其中癌是实体瘤或血液学癌。
12.根据权利要求1或3-11中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-11中任一项所述方法，其中癌选自脑癌、胰腺癌、皮肤癌、肾癌、乳腺癌、病毒相关的癌、肛管癌症、***、胃癌、头颈癌、鼻咽癌(NPC)、***癌、***或外阴癌、结直肠癌、肺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或癌症转移病灶。
13.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中脑癌是胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤。
14.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中皮肤癌是黑素瘤或Merkel细胞癌。
15.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中肾癌是肾细胞癌(RCC)。
16.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中乳腺癌是乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
17.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中病毒相关的癌选自肛管癌症、***、胃癌、头颈癌、鼻咽癌(NPC)、***癌或者***或外阴癌。
18.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中结直肠癌选自微卫星不稳定性结直肠癌、微卫星稳定性结直肠癌、错配修复完整型结直肠癌或错配修复缺陷型结直肠癌。
19.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。
20.根据权利要求12所述用途的抗体分子，或根据权利要求12所述方法，其中淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤(HL)或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
21.根据权利要求1或3-20中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-20中任一项所述方法，其中癌症是晚期癌、转移性癌、复发性癌、复发的癌或不可切除性癌。
22.根据权利要求1或3-21中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-21中任一项所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子与第二治疗药或模式组合使用。
23.根据权利要求1或3-22中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-22中任一项所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子与PD-1抑制剂组合使用。
24.根据权利要求23所述用途的抗体分子，或根据权利要求23所述方法，其中PD-1抑制剂选自PDR001、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、pidilizumab、MEDI0680、REGN2810、PF-06801591、BGB-A317、INCHR1210、TSR-042或AMP-224。
25.根据权利要求23或24所述用途的抗体分子，或根据权利要求23或24所述方法，其中将PD-1抑制剂按约300mg每三周一次或约400mg每四周一次的剂量使用。
26.根据权利要求1或3-25中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-25中任一项所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子与PD-L1抑制剂组合使用。
27.根据权利要求26所述用途的抗体分子，或根据权利要求26所述方法，其中PD-L1抑制剂选自FAZ053、阿特朱单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗或BMS-936559。
28.根据权利要求1或3-27中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-27中任一项所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子与化疗药组合使用。
29.根据权利要求28所述用途的抗体分子，或根据权利要求28所述方法，其中化疗药选自铂剂和核苷酸类似物或前体类似物。
30.根据权利要求29所述用途的抗体分子，或根据权利要求29所述方法，其中铂剂选自卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin。
31.根据权利要求29所述用途的抗体分子，或根据权利要求29所述方法，其中核苷酸类似物或前体类似物包括卡培他滨。
32.根据权利要求1或3-31中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-31中任一项所述方法，其中抗LAG-3抗体分子用来治疗选自NSCLC、黑素瘤、肾癌、胶质母细胞瘤、病毒相关癌或结直肠癌的癌症。
33.根据权利要求32所述用途的抗体分子，或根据权利要求32所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子与抗PD-1抗体分子组合使用。
34.根据权利要求1或3-31中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-31中任一项所述方法，其中抗LAG-3抗体分子用来治疗胰腺癌或乳腺癌。
35.根据权利要求34所述用途的抗体分子，或根据权利要求34所述方法，其中乳腺癌是TNBC。
36.根据权利要求34或35所述用途的抗体分子，或根据权利要求34或35所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子与抗PD-1抗体分子组合使用。
37.根据权利要求34-36中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求34-36中任一项所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子与化疗药组合使用。
38.根据权利要求37所述用途的抗体分子，或根据权利要求37所述方法，其中化疗药选自铂剂和核苷酸类似物或前体类似物。
39.根据权利要求38所述用途的抗体分子，或根据权利要求38所述方法，其中铂剂选自卡铂、顺铂、奥沙利铂或tetraplatin。
40.根据权利要求38所述用途的抗体分子，或根据权利要求38所述方法，其中核苷酸类似物或前体类似物包括卡培他滨。
41.根据权利要求1或3-40中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-40中任一项所述方法，其中受试者具有或经鉴定为具有肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)中的LAG-3表达。
42.根据权利要求1或3-41中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求2-41中任一项所述方法，其中受试者患有或经鉴定为患有表达PD-L1的癌。
43.包含抗LAG-3抗体分子的药物组合物或剂量制剂，在治疗受试者中的癌症时，按约300mg至约500mg每三周一次或约700mg至约900mg的剂量每四周一次使用，
其中抗LAG-3抗体分子包含：重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:702的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ IDNO:703的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:710的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:711的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:712的氨基酸序列的VLCDR3。
44.根据权利要求43所述的药物组合物或剂量制剂，其中剂量是约300mg至约500mg每三周一次。
45.根据权利要求43所述的药物组合物或剂量制剂，其中剂量是约700mg和约900mg每四周一次。
46.根据权利要求43-45中任一项所述的药物组合物或剂量制剂，其中抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列。
47.根据权利要求43-46中任一项所述的药物组合物或剂量制剂，其中抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:709的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:721的氨基酸序列。
48.根据权利要求43-45中任一项所述的药物组合物或剂量制剂，其中抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:724的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:730的氨基酸序列。
49.根据权利要求43-45或48中任一项所述的药物组合物或剂量制剂，其中抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:727的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:733的氨基酸序列。
50.根据权利要求43-49中任一项所述的药物组合物或剂量制剂，用于治疗癌症。
51.根据权利要求50所述的药物组合物或剂量制剂，其中癌是实体瘤或血液学癌。
52.根据权利要求50或51所述的药物组合物或剂量制剂，其中癌选自脑癌、胰腺癌、皮肤癌、肾癌、乳腺癌、病毒相关的癌、肛管癌症、***、胃癌、头颈癌、鼻咽癌(NPC)、***癌、***或外阴癌、结直肠癌、肺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或癌症转移病灶。
53.抗LAG-3抗体分子，按导致以下一种情况或两种情况的剂量或给药方案用于治疗受试者中癌症：(a)来自受试者的血清或血清样品中50％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合；或(b)来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
54.治疗受试者中癌症的方法，所述方法包括按导致以下一种情况或两种情况的剂量或给药方案向受试者施用抗LAG-3抗体分子：(a)来自受试者的血清或血清样品中50％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合；或(b)来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
55.根据权利要求53所述用途的抗体分子，或根据权利要求54所述方法，其中给药方案导致以下一种情况或两种情况：(a)来自受试者的血清或血清样品中60％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合；或(b)来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
56.根据权利要求53或55所述用途的抗体分子，或根据权利要求54或55所述方法，其中给药方案导致以下一种情况或多种情况：(a)来自受试者的血清或血清样品中70％或更多的可溶性LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合；或(b)来自受试者的癌或癌样品中90％或更多的膜结合型LAG-3由抗LAG-3抗体分子结合。
57.根据权利要求53或55-56中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求54-56中任一项所述方法，其中抗LAG-3抗体分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO:702的氨基酸序列的VHCDR2和SEQ ID NO:703的氨基酸序列的VHCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:710的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO:711的氨基酸序列的VLCDR2和SEQ ID NO:712的氨基酸序列的VLCDR3。
58.根据权利要求53或55-57中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求54-57中任一项所述方法，其中抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列。
59.根据权利要求53或55-58中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求54-58中任一项所述方法，其中抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:709的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:721的氨基酸序列。
60.根据权利要求53或55-57中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求54-57中任一项所述方法，其中抗体分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:724的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:730的氨基酸序列。
61.根据权利要求53、55-57或60中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求54-57或60中任一项所述方法，其中抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:727的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:733的氨基酸序列。
62.根据权利要求54-61中任一项所述用途的抗体分子，或根据权利要求54-61中任一项所述方法，其中将抗LAG-3抗体分子按约300mg至约500mg每三周一次或约700mg至约900mg的剂量每四周一次施用。
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