CN110651665A

CN110651665A - 一种灵芝培养基、制备方法及利用培养基培养灵芝的方法

Info

Publication number: CN110651665A
Application number: CN201911028382.8A
Authority: CN
Inventors: 马世宇; 马野
Original assignee: Huludao Agricultural University Hyun Woo Wild Edible Fungus Breeding Co Ltd A
Current assignee: Huludao Agricultural University Hyun Woo Wild Edible Fungus Breeding Co Ltd A
Priority date: 2019-10-25
Filing date: 2019-10-25
Publication date: 2020-01-07

Abstract

本发明公开了一种灵芝培养基、制备方法及利用培养基培养灵芝的方法。灵芝培养基包括如下质量份数的原料：玉米秸玉米芯混合体70～80份、玉米面5～10份、石灰1～5份、硫酸镁1～3份、麦麸10～20份、硫酸二氢钾1～3份、石膏1～5份和葡萄糖1～3份。灵芝培养方法包括如下步骤：灵芝菌丝体驯化培养、菌包的培养、出芝培养和采摘及后期管理。本发明取得的有益效果为：(1)通过生物驯化法，提高了灵芝菌丝体对秸秆培养基的适应性；(2)通过揉丝处理，降低了杂菌污染的几率，提高了成品率；(3)以农作物玉米秸为主料，更加经济环保；(4)通过调整培育过程中CO₂的浓度，抑制芝盖生长，促进芝柄生长，提高了灵芝的观赏价值。

Description

一种灵芝培养基、制备方法及利用培养基培养灵芝的方法

技术领域

本发明涉及食用菌栽培技术领域，更具体地说是涉及一种栽培灵芝培养基及灵芝栽培方法。

背景技术

灵芝性温，味淡，是多孔菌科真菌灵芝的子实体，具有安神助眠、健脑、消炎、利尿、益肾、健胃等功效，对于神经衰弱、食欲不振、慢性支气管炎、慢性心脑血管疾病、眼部疾病有一定的治疗作用，被广范地用于医药，保健及食品领域。随着灵芝消费需求的迅速增长，对灵芝大规模人工栽培技术的研究十分必要。

灵芝属于木腐菌，栽培的主要原料是木屑，由于国家限制伐木，所以筛选一种新原料替代木屑栽培灵芝十分必要；目前常用秸秆做主料，但是以秸秆栽培灵芝存在如下问题：发酵速度慢、杂菌感染率高、生物转化率低，不适宜大规模生产。

因此，如何提供一种发酵速度快、杂菌感染率低的以秸秆为主料的灵芝培养基、制备方法及利用培养基培养灵芝的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种发酵速度快、杂菌感染率低的以秸秆为主料的灵芝培养基、制备方法及利用培养基培养灵芝的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种灵芝培养基，包括如下质量份数的原料：玉米秸玉米芯混合体70～80份、玉米面5～10份、石灰1～5份、硫酸镁1～3份、麦麸10～20份、硫酸二氢钾1～3份、石膏1～5份和葡萄糖1～3份；所述玉米秸玉米芯混合体中，玉米秸与玉米芯的重量比为6∶4。

石灰对玉米秸秆有降解作用和调节pH值的作用；硫酸镁可以提高灵芝纤维素酶等酶的活性。

优选的，一种灵芝培养基，包括如下质量份数的原料：玉米秸玉米芯混合体78份、玉米面6份、石灰3份、硫酸镁1份、麦麸15份、硫酸二氢钾1份、石膏2份和葡萄糖1份；所述玉米秸玉米芯混合体中，玉米秸与玉米芯的重量比为6∶4。

一种灵芝培养基的制备方法，具体步骤如下：

(1)对玉米秸进行揉丝处理，处理后的玉米秸长度为35～100mm，宽度为3～10mm，得到预处理玉米秸，备用；

(2)将所述预处理玉米秸与玉米芯按比例混合，得到玉米秸玉米芯混合体，备用；

(3)将玉米秸玉米芯混合体、玉米面、石灰、硫酸镁、麦麸、硫酸二氢钾、石膏和葡萄糖按质量配比称量后混合均匀，得混合物料，备用；

(4)将所述混合物料建堆发酵，环境温度＞9℃，所述混合物料发酵温度60～69℃，发酵时间10～15d，发酵过程中所述混合物料水分含量55～60％、pH值8～9。

秸秆做主料时，由于被切割后的秸秆多呈筒状或块状，形态直端，其截口往往尖刺、菱角分明，因而容易刺破栽培袋。对秸秆进行揉丝处理，将秸秆喂入揉丝机，由旋转的多组切割刀具构件配合对秸秆进行纵向切割，即沿秸秆的茎向切割，同时又能充分破坏其硬性结节。高速旋转的各刀具刃口部分，在对应的栅栏夹缝中运转，带动对已经初步形成丝条状的秸秆在夹缝通道中穿行，一部分丝状秸秆未能及时排除被挂接在各栅栏条上，致使栅栏的各夹缝通道缝隙减小，物料在旋转的刀具带动下强行通过时，与夹缝中挂接的秸秆物料不断形成撞击、挤压、剧烈摩擦和挫动撕裂，最终形成柔嫩细腻、均匀的丝状体而被主动过滤排除，使之成为柔软的丝状，这就大大减少了刺破栽培袋的几率。

灵芝在培养过程中要经过发菌阶段、桑葚期、原基分化阶段、小芝蕾期、原基生长阶段和子实体阶段，其中，子实体阶段包括芝盖生长期和芝柄生长期。

一种利用灵芝培养基培养灵芝的方法，包括如下步骤：

(1)对灵芝菌丝体进行驯化培养，得到驯化菌丝体；

(2)菌包的培养：将灵芝培养基置于栽培袋中，接种所述驯化菌丝体，接种量为所述灵芝培养基重量的5％，将所述栽培袋袋口扎紧后进行培养，培养温度18～24℃、湿度65～70％、培养周期28～35d，培养过程中保持通风良好，待所述驯化菌丝体长满栽培袋得到菌包；

(3)出芝培养：在栽培场地以8个所述菌包为一捆垒码，所述菌包之间用菌粒填充空隙，之后覆土3～5cm；

(4)采摘及后期管理：当芝盖颜色由黄色变为褐色时进行第一潮芝采摘，采摘后继续对第二潮芝进行培养和管理。

通过生物驯化法，提高了灵芝菌丝体对秸秆培养基的适应性，提高了菌丝生长速度；通过揉丝处理，提高了玉米秸的柔软性，减少了玉米秸刺破栽培袋的几率，降低了杂菌污染的几率，提高了成品率；以农作物玉米秸为主料，更加经济环保。

优选的，所述步骤(1)的具体操作步骤如下：

(11)将所述灵芝菌丝体接种到第一继代培养基进行黑暗培养，接种量为5％，培养时间20d，培养温度24℃，得到第一驯化菌丝体；

(12)将第一驯化菌丝体接种到第二继代培养基进行黑暗培养，接种量为5％，培养时间20d，培养温度24℃，得到第二驯化菌丝体；

(13)将第二驯化菌丝体接种到第三继代培养基进行黑暗培养，接种量为5％，培养时间20d，培养温度24℃，得到驯化菌丝体。

灵芝是木腐菌，由于秸秆的理化性质与木屑不同，故灵芝在秸秆做主料的培养基上就存在适应性的问题。本发明按照微生物遗传学理论进行了菌丝驯化，使其适应于秸秆做主料的培养基。

优选的，所述第一继代培养基包括如下质量份数的原料：玉米秸秆粉10份、木屑粉30份、灵芝子实体粉10份、葡萄糖1份、土豆20份、琼脂2份、和水100份；

所述第二继代培养基包括如下质量份数的原料：玉米秸秆粉20份、木屑粉20份、灵芝子实体粉10份、葡萄糖1份、土豆20份、琼脂2份和水100份；

所述第三继代培养基包括如下质量份数的原料：玉米秸秆粉30份、木屑粉10份、灵芝子实体粉10份、葡萄糖1份、土豆20份、琼脂2份和水100份。

优选的，所述步骤(3)的培养条件为：芝柄生长期CO₂浓度为1000～1200ppm，芝盖生长期CO₂浓度为400～800ppm；白日湿度为85～90％，夜间湿度为80～90％；培养温度22～28℃。

在培育过程中，芝柄在长出土面后很快就停止了生长，开始了芝盖的发育，有的芝盖甚至沿着土面生长，芝柄很短，这样就失去了观赏性。本发明通过调整培育过程中CO₂的浓度，抑制芝盖生长，促进芝柄生长，解决了这一难题，提高了灵芝的观赏价值。

培养过程中若湿度太大，培养基料面形成水膜，水膜易变成黄色，一旦变成黄色，原基便难以分化；培养过程中若湿度太小，培养基料面干硬，原基也难以分化。

优选的，所述步骤(3)中每日通风3次，每次20min，桑葚期通风量为1.5～1.7N/m²，小芝蕾期通风量为3.0～3.5N/m²，芝盖生长期通风量为4.6～5.2N/m²。

培养过程中保持通风良好，才能长出厚度7mm以上的芝盖，如通风不良则芝盖较薄。

优选的，所述步骤(3)中菌丝阶段黑暗培养，原基分化阶段照度为200～300lux，子实体阶段照度为300～500lux。

优选的，所述步骤(3)还包括疏蕾处理，在子实体原基长出土面后进行疏蕾，每捆留两个健壮的芝蕾，两蕾间距≥12cm。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：(1)通过生物驯化法，提高了灵芝菌丝体对秸秆培养基的适应性，提高了菌丝生长速度；(2)通过揉丝处理，提高了玉米秸的柔软性，减少了玉米秸刺破栽培袋的几率，降低了杂菌污染的几率，提高了成品率；(3)以农作物玉米秸为主料，更加经济环保；(4)本申请通过调整培育过程中CO₂的浓度，抑制芝盖生长，促进芝柄生长，提高了灵芝的观赏价值。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

(1)对灵芝菌丝体进行驯化培养，得到驯化菌丝体：

(11)继代培养基的制备：将玉米秸、木屑、灵芝子实体按重量比称取，粉碎过80目筛，加入水，60℃浸泡1h，过滤取上清液，再按重量比加入葡萄糖、土豆、琼脂，加热融化后，0.15mpa下灭菌30min，备用；

(12)将所述灵芝菌丝体接种到第一继代培养基进行黑暗培养，接种量为5％，培养时间20d，培养温度24℃，得到第一驯化菌丝体；

第一继代培养基原料包括：玉米秸秆粉10g、木屑粉30g、灵芝子实体粉10g、葡萄糖1g、土豆20g、琼脂2g和水100g；

(13)将第一驯化菌丝体接种到第二继代培养基进行黑暗培养，接种量为5％，培养时间20d，培养温度24℃，得到第二驯化菌丝体；

第二继代培养基原料包括：玉米秸秆粉20g、木屑粉20g、灵芝子实体粉10g、葡萄糖1g、土豆20g、琼脂2g和水100g；

(14)将第二驯化菌丝体接种到第三继代培养基进行黑暗培养，接种量为5％，培养时间20d，培养温度24℃，得到驯化菌丝体。

第三继代培养基原料包括：玉米秸秆粉30g、木屑粉10g、灵芝子实体粉10g、葡萄糖1g、土豆20g、琼脂2g和水100g。

(2)制备灵芝培养基：

(21)对玉米秸进行揉丝处理，处理后的玉米秸长度为35～100mm，宽度为3～10mm；将预处理玉米秸和玉米芯按照重量比6∶4混合，制得玉米秸玉米芯混合体，备用；

(22)将玉米秸玉米芯混合体70kg、玉米面5kg、石灰1kg、硫酸镁1kg、麦麸10kg、硫酸二氢钾1kg、石膏1kg和葡萄糖1kg，称量后混合均匀备用，得混合物料；

(23)将混合物料建堆发酵，环境温度＞9℃，发酵温度60～69℃，发酵14d，所述混合物料水分含量55～60％，pH值8～9，具体操作如下：

将混合物料堆成宽1.8米、高1.5米、长10～15米的料堆，用直径5cm的光滑木棒在料堆上扎眼，每隔50cm扎一个眼，呈梅花形。根据季节决定是否在料堆上加盖覆盖物，如春、夏不加覆盖物，晚秋或初冬要求在料堆上加盖草帘子。发酵24h后，温度可达50℃以上，这时要进行翻料，翻料时，把外边的料翻到中间，把中间的料翻到外边，翻料后，同样堆好并扎通气孔。以后每24h翻料一次，方法同上。根据料堆含水情况决定是否补水，如含水量地域55％时，要补水。所补的水中加入石灰水上清液使pH值达到9。使用喷雾法补水，以达到水分均匀。随着发酵时间的延长，料堆中的废气也随之增多，后几次翻料时，用铁锹把料呈扇形散开，以利于废气挥发。

可以通过看、闻、摸等方法判断发酵程度，具体如下：

①看：发酵好的料，呈红棕色或土棕色。仍是玉米秸秆，浅黄并伴有浅白色的为没发酵好的，料堆中有雪花状放线菌菌落的为已发酵，料中有灰色及黑色毛霉菌的为杂菌污染，发酵失败。

②闻：料堆有酒香味，或玉米面糊味，为发酵很好，有酸味或氨味为发酵不好，有臭味为发酵失败，有发霉味为霉菌污染。

③摸：用手膜料，柔软不刺手、不发粘，料中的玉米秸丝一拉就断，为发酵好的；如手感发粘，料的颗粒用手碾易成饼状为发酵过度。

(3)菌包的培养：将所述灵芝培养基待温度降到30℃以下时置于栽培袋中，接种驯化菌丝体，接种量为5％，将栽培袋袋口扎紧后进行培养，培养温度20℃、湿度65％，保持良好通风，待驯化菌丝体长满栽培袋得到菌包；

(4)出芝培养：在栽培场地以8个所述菌包为一捆垒码，菌包之间用菌粒填充空隙，之后覆土3cm；在子实体原基长出土面后进行疏蕾，每捆留两个健壮的芝蕾，两蕾间距≥12cm；

芝柄生长期CO₂浓度为1000～1200ppm，芝盖生长期CO₂浓度为400～800ppm；白日湿度为85～90％，夜间湿度为80～90％；培养温度22～28℃；每日通风3次，每次20min，桑葚期通风量为1.5～1.7N/m²，小芝蕾期通风量为3.0～3.5N/m²，芝盖生长期通风量为4.6～5.2N/m²；菌丝阶段黑暗培养，原基分化阶段照度为200～300lux，子实体阶段照度为300～500lux。

(5)采摘及后期管理：当芝盖颜色由黄色变为褐色时进行第一潮芝采摘，采摘后继续对第二潮芝进行培养和管理。

采摘时用锋利的刀片沿料面将芝体割下，也可用手捏住芝柄，轻轻左右掰动，将芝体拔下。

实施例2

步骤(22)中混合物料原料为：玉米秸玉米芯混合体80kg、玉米面10kg、石灰5kg、硫酸镁3kg、麦麸20kg、硫酸二氢钾3kg、石膏5kg和葡萄糖3kg。

其余操作同实施例1。

实施例3

步骤(22)中混合物料原料为：玉米秸玉米芯混合体78kg、玉米面6kg、石灰3kg、硫酸镁1kg、麦麸15kg、硫酸二氢钾1kg、石膏2kg和葡萄糖1kg。

其余操作同实施例1。

对比例1

(1)分组：实验组、对照组。

(2)实验方案：

实验组：按照实施例3的方法培养；

对照组：不经过步骤(1)的驯化培养，其余操作同实施例3；

实验组和对照组均重复3次，每个重复设置101个菌包。

(3)测定指标：菌丝生长速率。

(4)实验结果：

实验组菌丝平均生长速率为7.1mm/日，对照组菌丝平均生长速率为6.9mm/日。

对比例2

(1)分组：实验组、对照组。

(2)实验方案：

实验组：按照实施例3的方法培养；

对照组：不经过步骤(21)的揉丝处理，采用常规粉碎的玉米秸秆，其余操作同实施例3；

实验组和对照组均设置1001个菌包。

(3)测定指标：感染率。

(4)实验结果：

实验组感染37袋，感染率为3.7％；对照组感染261袋，感染率为26.1％。说明通过揉丝处理显著降低了杂菌感染率。

对比例3

(1)分组：组1、组2、组3。

(2)实验方案：

组1：同实施例3；

组2：步骤(4)中，在栽培场地以5个菌包为一捆垒码，其余操作同实施例3；

组3：步骤(4)中，在栽培场地以10个菌包为一捆垒码，其余操作同实施例3。

组1、组2、组3均重复11次。

(3)测定指标：芝盖直径。

(4)实验结果：

组1芝盖直径49.91cm，组2芝盖直径35.75cm，组3芝盖直径50.12cm。

对比例4

(1)分组：组1、组2、组3。

(2)实验方案：

组1：同实施例3；

组2：步骤(4)中，不填空隙，其余操作同实施例3；

组3：步骤(4)中，使用田园土填充空隙，其余操作同实施例3。

组1、组2、组3均处理321袋。

(3)测定指标：芝盖直径及每个栽培袋的产量。

(4)实验结果：

组1处理平均每个栽培袋产量为252g，芝盖直径15.2cm；组2处理平均每个栽培袋产量为201g，芝盖直径11.2cm；组3处理平均每个栽培袋产量为247g，芝盖直径14.6cm。

对比例5

(1)分组：组1、组2、组3。

(2)实验方案：

组1：同实施例3；

组2：步骤(4)中，芝柄生长期CO₂浓度为400～800ppm，其余操作同实施例3；

组3：步骤(4)中，芝柄生长期CO₂浓度为1500～3000ppm，其余操作同

实施例3。

组1、组2、组3处理11次重复。

(3)测定指标：芝柄长度。

(4)实验结果：

组1芝柄平均长度4.2cm，光滑；组2芝柄平均长度2.2cm，光滑；组3芝柄长度5.5cm，芝柄上有大小不等的突起瘤状物。

组2芝柄最短，是由于达捆后营养集中，很快由营养生长转为生殖生长，快速进入了芝盖生长期；处理1提高了CO₂浓度，抑制了芝盖的生长，芝柄长度增长；处理3CO₂浓度过高，虽然抑制了芝盖生长，但由于过高的CO₂浓度的影响，造成芝柄生长也收抑制，从而芝柄上长出了***的瘤状物，降低了观赏性。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。

本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims

1.一种灵芝培养基，其特征在于，包括如下质量份数的原料：玉米秸玉米芯混合体70～80份、玉米面5～10份、石灰1～5份、硫酸镁1～3份、麦麸10～20份、硫酸二氢钾1～3份、石膏1～5份和葡萄糖1～3份；

所述玉米秸玉米芯混合体中，玉米秸与玉米芯的重量比为6∶4。

2.如权利要求1所述的一种灵芝培养基，其特征在于，包括如下质量份数的原料：玉米秸玉米芯混合体78份、玉米面6份、石灰3份、硫酸镁1份、麦麸15份、硫酸二氢钾1份、石膏2份和葡萄糖1份；

3.如权利要求1或2任一所述的一种灵芝培养基的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

4.一种利用灵芝培养基培养灵芝的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对灵芝菌丝体进行驯化培养，得到驯化菌丝体；

(2)菌包的培养：将权利要求3制备出的灵芝培养基置于栽培袋中，接种所述驯化菌丝体，接种量为所述灵芝培养基重量的5％，将所述栽培袋袋口扎紧后进行培养，培养温度18～24℃、湿度65～70％、培养周期28～35d，培养过程中保持通风良好，待所述驯化菌丝体长满栽培袋得到菌包；

5.如权利要求4所述的一种培养灵芝的方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体操作步骤如下：

6.如权利要求5所述的一种培养灵芝的方法，其特征在于，所述第一继代培养基包括如下质量份数的原料：玉米秸秆粉10份、木屑粉30份、灵芝子实体粉10份、葡萄糖1份、土豆20份、琼脂2份和水100份；

7.如权利要求6所述的一种培养灵芝的方法，其特征在于，所述步骤(3)的培养条件为：芝柄生长期CO₂浓度为1000～1200ppm，芝盖生长期CO₂浓度为400～800ppm；白日湿度为85～90％，夜间湿度为80～90％；培养温度22～28℃。

8.如权利要求7所述的一种培养灵芝的方法，其特征在于，所述步骤(3)中每日通风3次，每次20min，桑葚期通风量为1.5～1.7N/m²，小芝蕾期通风量为3.0～3.5N/m²，芝盖生长期通风量为4.6～5.2N/m²。

9.如权利要求8所述的一种培养灵芝的方法，其特征在于，所述步骤(3)中菌丝阶段黑暗培养，原基分化阶段照度为200～300lux，子实体阶段照度为300～500lux。

10.如权利要求9所述的一种培养灵芝的方法，其特征在于，所述步骤(3)还包括疏蕾处理，在子实体原基长出土面后进行疏蕾，每捆留两个健壮的芝蕾，两蕾间距≥12cm。