CN109563060B

CN109563060B - Ido1抑制剂及其制备方法和应用

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Publication number: CN109563060B
Application number: CN201780039482.3A
Authority: CN
Inventors: 张杨; 付志飞; 罗妙荣; 黎健; 陈曙辉
Original assignee: Shandong Luye Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shandong Luye Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2016-08-02
Filing date: 2017-08-02
Publication date: 2021-01-01
Anticipated expiration: 2037-08-02
Also published as: AU2017306487A1; KR20190034318A; RU2019104899A3; RU2019104899A; BR112019001980A2; EP3495354A4; US20190169140A1; JP2019527699A; EP3495354A1; CN109563060A; SG11201900868XA; CA3032544A1; WO2018024208A1

Abstract

一类作为吲哚胺‑2,3‑双加氧酶1(IDO1)抑制剂的化合物，及其在与IDO1相关疾病领域的应用。具体为式(Ⅰ)所示化合物及其药学上可接受的盐。

Description

IDO1抑制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及了一类作为吲哚胺-2，3-双加氧酶1(IDO1)抑制剂的化合物，及其在与IDO1相关疾病领域的应用。具体涉及式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐。

背景技术

吲哚胺-2，3-双加氧酶(Indoleamine-2，3-dioxygenase，IDO)是1967年Hayaishi小组首次在细胞内发现的一种含有亚铁血红素的单体酶，cDNA编码蛋白由403氨基酸组成，分子量为455kDa，它是延着色氨酸-犬尿氨酸途径分解代谢的限速酶，并且在多种哺乳动物的组织中具有广泛的表达(Hayaishi O.etal Science，1969，164，389-396)。在肿瘤患者的细胞中，IDO常作为诱导肿瘤微环境免疫耐受产生重要的生理作用，其介导的色氨酸(Tryptophan，Trp)犬尿氨酸(Kynurenine，Kyn)代谢途径参与了肿瘤免疫逃逸，而IDO作为诱导肿瘤微环境免疫耐受也产生重要的作用。

色氨酸(Trp)是生物合成蛋白、烟酸和神经递质5-羟色胺(血清素)所需要的一种必要氨基酸。近来，Trp耗竭的免疫调节作用受到很多关注。IDO将色氨酸、5-羟色胺和褪黑素的吲哚部分降解，引发产生统称为犬尿氨酸的神经活性和免疫调节代谢物。通过局部消耗色氨酸和增加促凋亡的犬尿氨酸，树突细胞(DC)表达的IDO可极大影响T细胞增殖和存活。在DC中诱发IDO可能是调节性T细胞驱动的消耗耐受性的普通机制。因为，可预计此类耐受原性反应在多种生理病理病症中起作用，色氨酸代谢和犬尿氨酸产生可代表免疫和神经***之间的关键介面(Grohmann等人，2003，Trends Immunol.，24：242-8)。在持续免疫激活的状态中，可利用的游离血清Trp减少，并且由于5-羟色胺生成减少，5-羟色胺能功能可能也受影响(Wirleitner等人，2003，Curr.Med.Chem.，10：1581-91)。

正在开发治疗或预防IDO相关疾病的IDO抑制剂。面对巨大的未满足市场，该领域仍然需要活性更好的IDO抑制剂，以满足治疗需求。

发明内容

本发明提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，

D选自：O、S或-S(＝O)-；

L选自单键，或选自任选被1、2或3个R取代的：-C_1-10烷基-、-C_3-6环烷基-、-C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、-苯基-、-3～6元杂环烷基-、-3～6元杂环烷基-C_1-3烷基-；

R₁选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_1-6杂烷基、N，N-二(C_1-6烷基)氨基、3～6元杂环烷基、C_2-6烯基、苯基、5-9元杂芳基、

R₂选自：OH或CN；

R₃、R₄和R₅分别选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_1-6杂烷基、N，N-二(C_1-6烷基)氨基、3～6元杂环烷基；

R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R’取代的：C_1-6烷基、C_1-6杂烷基、N，N-二(C_1-6烷基)氨基、C_3-6环烷基、C_2-6烯基、苯基、噻吩基；

R’选自：F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂；

所述-3～6元杂环烷基-、-3～6元杂环烷基-C_1-3烷基-、C_1-6杂烷基、3～6元杂环烷基和5-9元杂芳基之“杂”分别独立地选自-C(＝O)NH-、-NH-、-S(＝O)₂NH-、-S(＝O)NH-、N、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-、-S(＝O)₂-、-NHC(＝O)NH-、-NHC(＝S)NH-、-H₂P(＝O)-NH-；

以上任何一种情况下，杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2或3。

本发明的一些方案中，上述R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R’取代的：C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氨基、N，N-二(C_1-6烷基)氨基、C_2-6烯基、C_3-6环烷基、苯基、噻吩基。

本发明的一些方案中，上述R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R’取代的：Me、Et、

本发明的一些方案中，上述R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、Me、Et、CF₃、CHF₂

本发明的一些方案中，上述L选自单键，或选自任选被1、2或3个R取代的：-C_1-5烷基-、-C_3-6环烷基-、-C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、-3～6元氮杂环烷基-C_1-3烷基-。

本发明的一些方案中，上述L选自：单键，或选自任选被1、2或3个R取代的：-CH₂-、

本发明的一些方案中，上述L选自：单键、-CH₂-、

本发明的一些方案中，上述R₁选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷硫基、C_1-6烷氨基、N，N’-二(C_1-3烷基)氨基、C_3-6环烷基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基、C_2-6烯基、苯基、噻吩基、吡啶基、咪唑基、噻唑基、2-酮-咪唑烷基、NH₂C(＝S)-NH-、C_1-6烷基-S(＝O)-、C_1-6烷基-S(＝O)₂-、C_1-6烷氧基-C(＝O)-NH-、NH₂-S(＝O)-NH-、-NH₂-C(＝O)-、NH₂-C(＝O)-NH-、H-C(＝O)-NH-、H-S(＝O)₂-NH-、

本发明的一些方案中，上述R₁选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Br、BOC-NH-、CH₂＝CH-、

本发明的一些方案中，上述R₁选自：H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、Me、CF₃、BOC-NH-、CH₂＝CH-、、

本发明的一些方案中，上述结构单元R₁-L-选自：H、NH₂、Me、BOC-NH-

本发明的一些方案中，上述R₃、R₄和R₅分别选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、C_3-6环烷基、C_1-3烷氧基。

本发明的一些方案中，上述R₃、R₄和R₅分别选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：Me、Et、

本发明的一些方案中，上述R₃、R₄和R₅分别选自：H、F、Cl、Br、I、CN、CH₂F、CHF₂、CF₃、

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自

本发明的一些方案中，上述结构结构单元

选自：

本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其选自：

其中，

R₂、R₃、R₄和R₅如上述所定义；

R₆选自H，或选自任选被1、2或3个R’所取代的：C_1-3烷基、C_3-6环烷基；

且R₆不选自Me。

本发明的一些方案，上述R₆选自：H、CF₃、Et、

本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受盐，其选自：

本发明还提供了上述化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的载体。

本发明还提供了上述化合物或其药学上可接受的盐或含有该化合物或其药学上可接受的盐的组合物在制备治疗IDO1相关病症的药物上的应用。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见Berge et al.，″PharmaceuticalSalts″，Journal of Pharmaceutical Science 66：1-19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。

本文所用的“药学上可接受的盐”属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱基比如胺的无机酸或有机酸盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机盐等等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季铵盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。常规的无毒性的盐包括但不限于那些衍生自无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸盐、羟基、羟萘、羟乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。

本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。

本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。

除非另有说明，用楔形键和虚线键

表示一个立体中心的绝对构型，用

表示一个立体中心的相对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。

术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington：The Science and Practice of Pharmacy，21st Ed.，Lippincott，Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。

针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。

术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。

“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。

当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)₀-，表示该连接基团为单键。

当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。

当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中包括但未具体提及的化合物时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。例如，结构单元

表示其可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。

除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、磷(P)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝(Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)₂-、

以及任选被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)₂N(H)-、或-S(＝O)N(H)-。

除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。

除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中S及O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中S及O原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香杂环上S和O原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即C、O、N或S)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳-氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。

杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1，2，3-恶二唑基、1，2，4-恶二唑基、1，2，5-恶二唑基、1，3，4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1，2，3-***基、1，2，4-***基、1，2，5-***基、1，3，4-***基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。

除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的(如烷基)、单元或多元不饱和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是单取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C₁-C₁₂表示1至12个碳，C_1-12选自C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂；C_3-12选自C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂。)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烃基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。

除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的烃原子团或其组合物，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一个典型实施例中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子或杂原子团可以位于杂烃基的任何内部位置，包括该烃基附着于分子其余部分的位置，但术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。实例包括但不限于-CH₂-CH₂-O-CH₃、-CH₂-CH₂-NH-CH₃、-CH₂-CH₂-N(CH₃)-CH₃、-CH₂-S-CH₂-CH₃、-CH₂-CH₂、-S(O)-CH₃、-CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃、-CH＝CH-O-CH₃、-CH₂-CH＝N-OCH₃和-CH＝CH-N(CH₃)-CH₃。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH₂-NH-OCH₃。

除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。

除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基，可以是单取代(如-CH₂F)或多取代的(如-CF₃)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。

除非另有规定，“烯基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳碳双键的烷基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁间二烯基，戊间二烯基，己间二烯基等。

除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。

除非另有规定，环烯基包括任何稳定的环状或多环烃基，该烃基在环的任何位点含有一个或多个不饱和的碳-碳双键，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烯基的实例包括，但不限于，环戊烯基、环己烯基等。

除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C₁-C₄)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。

“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C_1-6烷氧基包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环(比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自B、N、O和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。

除非另有规定，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁基羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH₃代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc₂O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl₂代表氯化亚砜；CS₂代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2，5-二酮；n-Bu₄NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；HCl代表盐酸，ACN代表乙腈，mp代表熔点；LDA代表二异丙基胺基锂；NFK代表N-甲基犬尿氨酸；DPBS代表杜氏磷酸缓冲溶液；LCMS代表液质联用色谱；HPLC代表高效液相色谱；TLC代表薄层制备板，MS代表质谱，ESI代表质谱的一种检测器，H NMR代表核磁共振，CDCl₃代表氘代氯仿，CD₃OD代表氘代甲醇，P-gp代表P-糖蛋白，细胞膜上表达的一种外排蛋白；HEPES代表2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪]乙磺酸；化合物231与化合物0231代表的同一化合物；化合物117与化合物0117代表同一化合物；化合物227与化合物0227代表同一化合物；化合物360代表INCB024360。化合物经手工或者

软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

作为新型的IDO1抑制剂，本发明的化合物体外活性显著、溶解度以及渗透性良好，药代动力学及效药良好。

附图说明：

图1：受试药物对荷瘤小鼠体重的影响；

图2：受试药对移植瘤体积的影响；

图3：受试药对移植瘤重量的影响。

具体实施方式

参考例1：片段BB-1

合成路线：

步骤1：化合物BB-1-2的合成

将BB-1-1(20.00g，302.76mmol，19.05mL，1.00eq)溶于水(436.00mL)中，搅拌5分钟，此反应液冰浴冷却至0℃，加入亚硝酸钠(22.98g，333.04mmol，18.09mL，1.10eq)，然后加入盐酸(6M，3.53mL，0.07eq)，15分钟后撤走冰浴，该反应液于25℃搅拌1.5小时后，一次性加入50％羟胺水溶液(60.00g，908.28mmol，3.00eq)，25℃下继续搅拌1小时后，慢慢加热至回流，回流反应2小时，慢慢冷却至25℃，继续反应16小时。0℃下用6N盐酸(70mL慢慢滴加约30分钟)调pH＝7.0，0℃下继续搅拌1小时，将析出的固体抽滤，水洗，收集抽滤得到的浅黄色固体。将得到的固体晾干，无需纯化。最终得到浅黄色固体产物BB-1-2(38.08g，收率：87.89％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：144[M+H]⁺。

步骤2：化合物BB-1-3的合成

将BB-1-2(38.08g，266.11mmol，1.00eq)溶于水(532.00mL)和醋酸(270.00mL)以及盐酸(6M，133.06mL，3.00eq)的混合液中，加热至45℃搅拌直至溶液完全澄清(约0.5小时)，加入氯化钠(46.65g，798.33mmol，3.00eq)，反应混和液冷却至0℃，亚硝酸钠(17.99g，260.79mmol，14.17mL，0.98eq)(溶于63mL水中)慢慢滴加至反应液中(超过0.5小时)，期间保持温度在0℃，加完后于0℃下继续搅拌2小时。LCMS监测显示原料反应完全，将析出来的固体抽滤，水洗(6*60mL)，抽滤所得的固体溶于乙酸乙酯(400mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，无需纯化。最终得到浅黄色固体产物BB-1-3(18.83g，收率：40.63％，纯度：93.33％)。MS(ESI)m/z：163[M+H]⁺。

步骤3：化合物BB-1-5的合成

将化合物BB-1-3(2.00g，12.30mmol，1.00eq)溶于乙醇(25.00mL)，加入化合物BB-1-4(4.67g，24.60mmol，2.00eq)，此反应混和液于85℃下反应16小时，加热后反应液逐渐变为褐色。LCMS监测显示原料反应完全，有所需的化合物生成，将反应液于减压蒸馏下旋干，粗品使用快速硅胶柱层析法进行分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)。得到浅灰色固体产物BB-1-5(3.60g，收率：88.39％，纯度：95.46％)MS(ESI)m/z：316，318[M+H]⁺。

步骤4：化合物BB-1-6的合成

将化合物BB-1-5(3.60g，11.39mmol，1.00eq)溶于四氢呋喃(30.00mL)，加入羰基二咪唑(2.03g，12.53mmol，1.10eq)，此反应混和液于65℃下反应1小时。LCMS监测显示原料反应完全。加入20mL水，乙酸乙酯萃取(25mL*3)，合并有机相，1M盐酸洗(20mL*2)，盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，于减压蒸馏下旋干，没有进一步纯化。得到土灰色固体产物BB-1-6(3.55g，收率：91.11％，纯度：100％)MS(ESI)m/z：342，344[M+H]⁺。

步骤5：化合物BB-1的合成

在0℃下将硫酸(35.00mL)缓慢加入到双氧水(41.30g，364.30mmol，35.00mL，30％纯度，41.97eq)，然后加入钨酸钠(2.55g，8.68mmol，1.00eq)，再加入化合物BB-1-6(2.97g，8.68mmol，1.00eq)，再升温至25℃下搅拌16小时。LCMS监测显示约有一半的原料剩余。加入250mL水稀释，抽滤，所得白色固体用水冲洗(25mL*3)，将此固体用乙酸乙酯(200mL)溶解，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干。使用快速硅胶柱层析法进行纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)，得到浅黄色固体产物BB-1(1.29g，收率：39.20％，纯度：98.14％)MS(ESI)m/z：372，374[M+H]⁺。

参考例2：片段BB-2

合成路线：

步骤1：化合物BB-2的合成

将化合物BB-2-1(25.00mg，328.73umol，20.00uL，1.00eq)与甲胺(44.39mg，657.46umol，2.00eq，盐酸盐)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，加入二异丙基乙胺(254.91mg，1.97mmol，344.47uL，6.00eq)，HATU(187.49mg，493.10umol，1.50eq)，反应液由无色变为黄色，该反应液于4℃下反应16小时。TLC监测(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)显示原料反应完全。向反应液中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(5mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干得粗品。反应成功，得到浅黄色液体产物BB-2(30.00mg，粗品)。

参考例3：片段BB-3

合成路线：

步骤1：化合物BB-3的合成

将化合物BB-3-1(571.78mg，4.04mmol，350.79uL，1.00eq)加入到二氯甲烷(5mL)，再在0℃下滴加叔丁醇(314.42mg，4.24mmol，403.10uL，1.05eq)的二氯甲烷(8mL)溶液，反应液在0℃下搅拌1小时。得到目标产物BB-3(871.00mg，粗品)的二氯甲烷溶液(13mL)直接用于下一步反应。

参考例4：片段BB-4

合成路线：

步骤1：化合物BB-4-2的合成

将化合物BB-1(1.00g，2.69mmol，1.00eq)溶于四氢呋喃(15.00mL)和水(500.00uL)中，再加入化合物BB-4-1(650.44mg，4.04mmol，625.42uL，1.50eq)，氢氧化钠(118.36mg，2.96mmol，1.10eq)，反应液在25℃下搅拌16小时。LCMS监测显示原料反应完全，有所需的化合物生成。加入5mL水，乙酸乙酯萃取(5mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，没有进一步纯化，得到黄色油状液体产物BB-4-2(1.73g，粗品)。

步骤2：化合物BB-4的合成

将化合物BB-4-2(1.73g，3.56mmol，1.00eq)溶于二氯甲烷(10.00mL)，加入盐酸/二氧六环(4M，889.46uL，1.00eq)，反应液由黄色变为白色混浊状，于25℃下反应1小时，有白色固体析出，LCMS监测显示原料反应完全，有一个主要的产物峰生成。反应液旋干得粗品，没有纯化，反应成功。得到白色固体产物BB-4(1.48g，粗品，盐酸盐)MS(ESI)m/z：386，388[M+H]⁺。

参考例5：片段BB-5

合成路线：

步骤1：化合物BB-5-2的合成

将化合物BB-1(2.50g，6.72mmol，1.00eq)溶于四氢呋喃(20.00mL)和水(1.00mL)，加入碳酸氢钠(846.74mg，10.08mmol，392.01uL，1.50eq)，该混和液于14℃下反应16小时。LCMS监测显示原料反应完全，有一个主要的新产物峰生成。向反应加入20mL水，乙酸乙酯萃取(30mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干。使用快速硅胶柱层析法进行纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)。反应成功，得到白色固体产物BB-5-2(3.29g，收率：97.47％)MS(ESI)m/z：502，504[M+H]⁺。

步骤2：化合物BB-5的合成

将化合物BB-5--2(4.09g，8.14mmol，1.00eq)溶于二氯甲烷(30.00mL)，加入盐酸/二氧六环(4M，30.00mL，14.74eq)，该反应液于14℃下反应1小时。LCMS监测显示有9.4％的原料剩余，有目标化合物生成。反应液直接于减压蒸馏下旋干得粗品。反应成功，得到白色固体产物BB-5(3.57g，粗品，盐酸盐)MS(ESI)m/z：402，404[M+H]⁺。

参考例6：片段BB-6

合成路线：

步骤1：化合物BB-6-2的合成

将化合物BB-1(200.00mg，537.55umol，1.00eq)溶于四氢呋喃(4.00mL)和水(800.00uL)中，再加入碳酸氢钠(112.90mg，1.34mmol，52.27uL，2.50eq)和化合物BB-6-1(68.47mg，645.06umol，58.52uL，1.20eq)，反应液在15℃下反应14小时。反应液与另一批30mg量的反应液合并浓缩除去四氢呋喃溶剂，再加水5mL稀释，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合并并用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩的到粗品。粗品采用10mL乙酸乙酯溶解，硅胶拌样，采用自动过柱机分离(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶0～3∶1)得到白色固体产物BB-6-2(200.00mg，收率：71.90％)。MS(ESI)m/z：431，433[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.66(dd，J＝5.77，2.51Hz，1H)，7.29-7.39(m，2H)，4.09(s，2H)，3.83(s，3H)。

步骤2：化合物BB-6的合成

将化合物BB-6-2(100.00mg，231.92umol，1.00eq)溶于甲醇(2.00mL)和水(1.00mL)中，再加入氢氧化钠(37.11mg，927.68umol，4.00eq)，反应液在15℃下反应1.5小时。反应液浓缩除去溶剂，加水5mL稀释，乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并浓缩得到淡黄色油状液体粗品。粗品加5mL二氯甲烷，浓缩除去溶剂得到白色固体产物BB-6(90.00mg，粗品)，直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z：413，415[M+Na]⁺。

参考例7：片段BB-7

合成路线：

以化合物BB-1，BB-7-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1-2，合成参考例BB-7。MS(ESI)m/z：412，414[M+H]⁺。

参考例8：片段BB-8

合成路线：

以化合物BB-1，BB-8-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1-2，合成参考例BB-8。MS(ESI)m/z：400，402[M+H]⁺。

参考例9：片段BB-9

合成路线：

以化合物BB-1，BB-9-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1-2，合成参考例BB-9。MS(ESI)m/z：462，464[M+H]⁺。

参考例10：片段BB-10

合成路线：

以化合物BB-1，BB-10-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1-2，合成参考例BB-10。MS(ESI)m/z：400，402[M+H]⁺。

参考例11：片段BB-11

合成路线：

以化合物BB-1，BB-11-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1-2，合成参考例BB-11。MS(ESI)m/z：400，402[M+H]⁺。

参考例12：片段BB-12

合成路线：

步骤1：化合物BB-12-2的合成

以化合物BB-1，BB-11-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1，合成片段BB-12-2。MS(ESI)m/z：534，536[M+Na]⁺。

步骤2：化合物BB-12的合成

将化合物BB-12-2(110.00mg，214.72umol，1.00eq)溶于二氯甲烷(10.00mL)，随后将三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1.00mL，62.90eq)加入到上述的反应液中，在25℃的条件下搅拌1小时。LCMS检测显示原料完全消失，所期望的产物生成。将反应液调至碱性pH约为8～9，随后加入100毫升的二氯甲烷，水洗(30mL*3)，有机相无水硫酸钠干燥，在水泵减压下浓缩得灰色油状液体产物BB-12(85.00mg，粗品)，未再进一步纯化直接进行下一步。MS(ESI)m/z：412，414[M+H]⁺。

参考例13：片段BB-13

合成路线：

以化合物BB-1，BB-13-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1-2，合成参考例BB-13。MS(ESI)m/z：440，442[M+H]⁺。

参考例14：片段BB-14

合成路线：

以化合物BB-1，BB-14-1为原料，参考参考例4中片段BB-4合成步骤1-2，合成参考例BB-14。MS(ESI)m/z：412，414[M+H]⁺。

参考例15：片段BB-15

合成路线：

步骤1：化合物BB-15-2的合成

以化合物BB-1，BB-15-1为原料，参考参考例6中片段BB-6合成步骤1，合成片段BB-15-2。MS(ESI)m/z：459，461[M+H]⁺。

步骤2：化合物BB-15的合成

将化合物BB-15-2(400.00mg，870.99umol，1.00eq)溶于水(600.00uL)和四氢呋喃(1.80mL)，加入水合氢氧化锂(73.09mg，1.74mmol，2.00eq)，20℃搅拌反应3小时，有产物生成，但量少，继续搅拌反应20小时。向反应液中加入盐酸(6M)调pH为6～7，旋干，加入甲醇(5mL)，过滤送机分，经高效液相色谱(Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um，water(0.05％HCl)-ACN)分离，冻干得黄色固体目标化合物BB-15(60.00mg，收率：17.00％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：405，407[M+H]⁺。

参考例16：片段BB-16

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-16-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-16。MS(ESI)m/z：319[M+H]⁺。

参考例17：片段BB-17

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-17-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，片段BB-4合成步骤1-2，合成片段BB-17。MS(ESI)m/z：376[M+H]⁺。

参考例18：片段BB-18

合成路线：

步骤1：化合物BB-18的合成

将化合物BB-1-4(1.00g，5.26mmol，1.00eq)，化合物BB-18-1(587.38mg，6.84mmol，1.30eq)，磷酸钾(3.91g，18.41mmol，3.50eq)，三苯基膦(137.96mg，526.00umol，0.10eq)，醋酸钯(59.05mg，263.00umol，0.05eq)溶于甲苯(24.00mL)和水(2.00mL)中，氮气保护下加热至100℃反应16小时，加热后反应液由褐色逐渐变为深褐色。LCMS监测显示原料反应完全，有目标化合物生成。将反应液冷却至23℃，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(20mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，使用快速硅胶柱层析法进行纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)。反应成功，得到黄色液体产物BB-18(790.00mg，收率：99.35％)。MS(ESI)m/z：152[M+H]⁺。

参考例19：片段BB-19

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-18为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-19。MS(ESI)m/z：334[M+H]⁺。

参考例20：片段BB-20

合成路线：

步骤1：化合物BB-20-2的合成

0℃下向化合物BB-3(5.39g，24.99mmol，1.00eq)的二氯甲烷溶液(20mL)中加入三乙胺(7.59g，75.03mmol，10.40mL，3.00eq)，0℃下搅拌30分钟后，加入化合物BB-20-1(1.60g，26.13mmol，1.58mL，1.05eq)，该混合液升温至23℃反应16小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)监测显示原料反应完全，反应液于减压蒸馏下旋去二氯甲烷，用1M盐酸调pH＝5，乙酸乙酯萃取(20mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干得白色固体产物BB-20-2(5.44g，粗品)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.83(s，1H)5.88(t，1H)3.73-3.80(t，2H)3.26(q，2H)1.48-1.50(m，9H)。

步骤2：化合物BB-20的合成

将化合物BB-20-2(2.00g，8.32mmol，1.00eq)溶于二氯甲烷(10.00mL)，加入盐酸/二氧六环(4M，10.00mL，4.81eq)，该混合液于24℃下反应2小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)监测显示原料反应完全。反应液直接于减压蒸馏下旋干得褐色液体产物BB-20(1.10g，粗品)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ6.49(s，2H)3.81-4.19(s，1H)3.43-3.52(t，2H)2.91-2.99(t，2H)。

参考例21：片段BB-21

合成路线：

步骤1：化合物BB-21的合成

将化合物BB-21-1(2.00g，10.47mmol，1.00eq)溶于甲醇(20.00mL)，然后加入10％钯炭(200.00mg)，该反应液在25℃下15Psi氢气下反应16小时。LCMS显示反应物1消耗完毕并有一个产物峰。反应液过滤，滤液旋干得黄色油状产物BB-21(1.60g，粗品)直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z：162[M+H]⁺。

参考例22：片段BB-22

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-21为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-22。MS(ESI)m/z：344[M+H]⁺。

参考例23：片段BB-23

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-23-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-23。MS(ESI)m/z：346[M+H]⁺。

参考例24：片段BB-24

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-24-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-24。MS(ESI)m/z：342[M+H]⁺。

参考例25：片段BB-25

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-25-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-25。MS(ESI)m/z：344[M+H]⁺。

参考例26：片段BB-26

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-26-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-26。MS(ESI)m/z：312[M+H]⁺。

参考例27：片段BB-27

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-27-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-27。MS(ESI)m/z：378[M+H]⁺。

参考例28：片段BB-28

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-28-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-28。MS(ESI)m/z：390，392[M+H]⁺。

参考例29：片段BB-29

合成路线：

以化合物BB-1-3，BB-29-1为原料，参考参考例1中片段BB-1合成步骤3-5，合成片段BB-29。MS(ESI)m/z：328[M+H]⁺。

参考例30：片段BB-30

合成路线：

以化合物BB-17-4，BB-5-1为原料，参考参考例5中片段BB-5合成步骤1-2，合成参考例BB-30。MS(ESI)m/z：392[M+H]⁺。

参考例31：片段BB-31

合成路线：

步骤1：化合物BB-31-2的合成

0℃下将硫酸(30.00mL)缓慢加入到双氧水(35.40g，312.26mmol，30.00mL，30％纯度，27.93eq)，然后加入钨酸钠(3.28g，11.18mmol，1.00eq)，再加入化合物BB-31-1(1.60g，11.18mmol，1.00eq)，升温至15℃反应3小时。LCMS监测显示有1.88％的原料剩余。向反应液中加入30mL水，乙酸乙酯萃取(50mL*3)，合并有机相，水洗(50mL*3)，饱和氯化钠溶液洗(50mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干得黄色液体产物BB-31-2。(1.40g，收率：72.35％，粗品)¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ4.00-4.02(s，3H)。

步骤2：化合物BB-31-3的合成

将化合物BB-31-2(1.40g，8.09mmol，1.00eq)溶于四氢呋喃(10.00mL)和水(1.00mL)，加入化合物BB-5-1(1.58g，8.90mmol，1.10eq)，再加入碳酸氢钠(1.36g，16.18mmol，629.63uL，2.00eq)，该混合液于15℃反应2小时。LCMS监测显示原料反应完全。加入10mL水，乙酸乙酯萃取(15mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干。使用快速硅胶柱层析法进行纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)。反应成功，得到浅粉色固体产物BB-31-3(2.57g，收率：96.28％，纯度：91.93％)。MS(ESI)m/z：304[M+H]⁺。

步骤3：化合物BB-31-4的合成

将化合物BB-31-3(2.57g，8.47mmol，1.00eq)溶于四氢呋喃(10.00mL)和水(5.00mL)，加入水合氢氧化锂(888.50mg，21.18mmol，2.50eq)，该反应液于15℃下反应1小时。LCMS监测显示原料反应完全。加入5mL水，用浓盐酸调pH＝6，乙酸乙酯萃取(15mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干。反应成功，得到浅黄色固体产物BB-31-4(2.70g，粗品)。MS(ESI)m/z：290[M+H]⁺。

步骤4：化合物BB-31-5的合成

将化合物BB-31-4(590.00mg，2.04mmol，1.00eq)加入到N，N-二甲基甲酰胺(10.00mL)，再加入化合物BB-33(531.68mg，2.24mmol，1.10eq)，HATU(930.50mg，2.45mmol，1.20eq)，二异丙基乙胺(527.13mg，4.08mmol，712.33uL，2.00eq)，该反应液在15℃下反应2小时。LCMS显示反应完全。反应液加1N盐酸调pH值至～5，乙酸乙酯(30mL x2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得黄色油状产物BB-31-5(850.00mg，收率：81.97％)。MS(ESI)m/z：531[M+Na]⁺。

步骤5：化合物BB-31-6的合成

将化合物BB-31-5(100.00mg，196.73umol，1.00eq)加入到甲苯(3.00mL)，再加入吡啶(147.00mg，1.86mmol，150.00uL，9.45eq)，五氯化磷(81.93mg，393.46umol，2.00eq)，该反应液在80℃下反应2小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)显示反应物1消耗完毕且有主要产物峰生成。反应液旋干得黄色固体产物BB-31-6(105.00mg，粗品)。

步骤6：化合物BB-31-7的合成

将化合物BB-31-6(100.00mg，189.84umol，1.00eq)加入到乙醇(3.00mL)，冷却至0℃，再加入50％羟胺水溶液(251.03mg，3.80mmol，20.02eq)，该反应液在0℃下反应2小时。LCMS显示反应完全。反应液加乙酸乙酯(30mL x2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得黄色油状粗品。粗品经厚制备板分离(乙酸乙酯)纯化得白色固体产物BB-31-7(70.00mg，收率：64.82％，纯度：92％)。MS(ESI)m/z：546[M+Na]⁺。

步骤7：化合物BB-31-8的合成

将化合物BB-31-7(80.00mg，152.87umol，1.00eq)加入到四氢呋喃(3.00mL)，再加入羰基二咪唑(27.27mg，168.16umol，1.10eq)，该反应液在60℃下反应1小时。LCMS显示反应完成。反应液加乙酸乙酯(50mL)稀释，饱和食盐水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得黄色固体产物BB-31-8(80.00mg，粗品)。MS(ESI)m/z：550[M+H]⁺。

步骤8：化合物BB-31的合成

将化合物BB-31-8(80.00mg，145.64umol，1.00eq)加入到二氯甲烷(2.00mL)，再加入盐酸/二氧六环(4M，1.90mL，52.31eq)，该反应液在15℃下反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液旋干得黄色油状产物BB-31(71.00mg，粗品，盐酸盐)。MS(ESI)m/z：450[M+H]⁺。

参考例32：片段BB-32

合成路线：

以化合物BB-31-4，BB-32-1为原料，参考参考例31中片段BB-31合成步骤4-8，合成参考例BB-32。MS(ESI)m/z：432[M+H]⁺。

参考例33：片段BB-33

合成路线：

步骤1：化合物BB-33-2的合成

将化合物BB-33-1(1.20g，7.69mmol，1.00eq)溶于盐酸(4.00mL)中，冷却至0℃，亚硝酸钠(583.67mg，8.46mmol，459.58uL，1.10eq)溶于2.6mL水中逐滴加入反应液中，搅拌15分钟后，此混合液缓慢加入到碘化钾(4.47g，26.92mmol，3.50eq)的水溶液(16mL)中，升至10℃搅拌16小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)监测显示原料反应完全，有目标化合物生成。加入乙酸乙酯稀释(30mL)，10％的氢氧化钠洗(25mL*2)，5％亚硫酸钠洗(25mL*2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干。使用快速硅胶柱层析法进行纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)。反应成功，得到黄色固体产物BB-33-2(550.00mg，收率：21.22％，纯度：79.22％)¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.60(dd，J＝5.3，2.8Hz，1H)，8.19(ddd，J＝9.0，4.3，2.8Hz，1H)，7.09-7.17(m，1H)。

步骤2：化合物BB-33的合成

将化合物BB-33-2(1.45g，5.43mmol，1.00eq)溶于醋酸(10.00mL)和乙醇(10.00mL)，加入铁粉(1.52g，27.15mmol，5.00eq)，该反应液于60℃下反应20分钟。LCMS监测显示原料反应完全，有目标化合物生成。将反应液过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，溶于40mL乙酸乙酯，饱和碳酸氢钠洗(30mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干。使用快速硅胶柱层析法进行纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)。反应成功，得到褐色液体产物BB-33(900.00mg，收率：53.92％，纯度：77.1％)。MS(ESI)m/z：238[M+H]⁺。

参考例34：片段BB-34

合成路线：

步骤1：片段BB-34的合成

将化合物BB-34-1(293.00mg，2.00mmol，1.00eq，HCl)溶于DMF(500.00uL)，加入DIEA(258.49mg，2.00mmol，349.31uL，1.00eq)，该反应液于25℃反应64hr，反应液逐渐变为白色浑浊液，得到片段BB-34(200.00mg，crude，HCl)的DMF溶液(0.5ml)。

实施例1：化合物0052

合成路线：

步骤1：化合物0052的合成

将化合物BB-1-7(300.00mg，806.32umol，1.00eq)溶于甲醇(4.00mL)，将氢氧化钠(129.01mg，3.23mmol，4.00eq)溶于水(1.00mL)加入反应液中，加入氢氧化钠后反应液由无色变为黄色，有固体析出，继续搅拌固体逐渐消失，室温下反应16小时-。LCMS监测显示原料反应完全，有所需的化合物生成。用1M盐酸调pH＝5，减压蒸馏下旋去甲醇，乙酸乙酯萃取(10mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，溶于甲醇，过滤。滤液通过高效液相色谱(Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um water(0.05％HCl)-ACN)分离。得到产物0052(167.72mg，收率：62.82％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：331，333[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.10-7.15(m，1H)，7.06(t，1H)，6.77-6.81(m，1H)，3.95(s，3H)。

实施例2：化合物0103

合成路线：

以化合物BB-16为原料，参考实施例1中化合物0052合成步骤1，合成化合物0103。MS(ESI)m/z：278[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.69(s，1H)，9.14(s，1H)，7.34(t，1H)，7.23(dd，1H)，7.07-7.17(m，1H)，4.00(s，2H)。

实施例3：化合物0124

合成路线：

步骤1：化合物0124的合成

将化合物BB-1-7(50.00mg，134.39umol，1.00eq)加入到水(100.00uL)和四氢呋喃(4.00mL)，再加入化合物0124-1(23.68mg，268.78umol，21.73uL，2.00eq)，氢氧化钠(21.50mg，537.56umol，4.00eq)，反应液在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应物1消耗完毕并有一个主要产物峰生成。反应液用6M盐酸调pH值至5，过滤。滤液经高效液相制备(column：Boston Green ODS 150*30 5u；mobile phase：[water(0.05％HCl)-ACN]；B％：40％-70％，10min)纯化得产物0124(35.00mg，收率：61.48％，纯度：100％，盐酸盐)。MS(ESI)m/z：387，389[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃0D)：δ＝7.19-7.11(m，1H)，7.10-7.01(m，1H)，6.82-6.72(m，1H)，5.19-5.09(m，1H)，3.88-3.63(m，4H)，2.25-2.13(m，1H)，1.92-1.81(m，1H)。

参照实施例3(化合物0124)中步骤1的合成方法，合成下表中各实施例：

实施例34：0026

合成路线：

步骤1：化合物0026的合成

将化合物BB-1(100.00mg，268.77umol，1.00eq)溶于四氢呋喃(2.00mL)和水(1.00mL)，然后加入氢氧化钠(43.00mg，1.08mmol，4.00eq)，再在25℃下搅拌2小时。反应液旋干得黄色油状粗品。粗品经高效液相制备(柱子：Boston Green ODS 150*30 5u，条件：water(0.05％HCl)-ACN)纯化得产物0026(15.00mg，收率：17.60％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：317，319[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.25-7.13(m，1H)，7.12-6.99(m，1H)，6.94-6.77(m，1H)。

实施例35：0077

合成路线：

步骤1：化合物0077的合成

将化合物0078(20.00mg，46.27umol，1.00eq)溶于二氯甲烷(500.00uL)，然后加入三氟乙酸(256.69mg，2.25mmol，166.68uL，48.65eq)再在25℃下搅拌1小时。LCMS显示大部分反应完全。反应液加饱和碳酸氢钠溶液调pH值至7，过滤，滤液旋干得粗品。粗品经高效液相制备(water(0.05％ammonia hydroxide v/v)-ACN，柱子：DuraShell 150*25mm*5um)纯化得产物0077(8.00mg，收率：51.16％，纯度：98.27％)。MS(ESI)m/z：332，334[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.21-7.15(m，1H)，7.08-6.97(m，2H)，6.85-6.79(m，1H)，6.76-6.67(m，2H)。

实施例36：0147

合成路线：

步骤1：化合物0147的合成

将化合物BB-4(560.00mg，1.33mmol，1.00eq，盐酸)加入到甲醇(6.00mL)和水(2.00mL)，再加入氢氧化钠(4M，1.33mL，4.00eq)，反应液在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完全。反应液加60mL乙酸乙酯稀释，用食盐水洗(20mL x 2)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得粗产品。取其中粗品(80.00mg)经高效液相制备(column：Boston Green ODS 150*30 5u；mobile phase：[water(0.05％HCl)-ACN]；B％：13％-43％，10min)得产物0147(60.00mg，收率：67.76％，纯度：99.5％，盐酸盐)。MS(ESI)m/z：360，362[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.23-7.14(m，1H)，7.11-7.03(m，1H)，6.88-6.78(m，1H)，4.60-4.49(m，2H)，3.42-3.36(m，2H)。

实施例37：0108

合成路线：

步骤1：化合物0108的合成

将化合物0147(80.00mg，222.14umol，1.00eq)加入到二氯甲烷(2.00mL)，再加入二异丙基乙胺(86.13mg，666.42umol，116.39uL，3.00eq)，苯甲酰氯(37.47mg，266.57umol，30.97uL，1.20eq)反应液在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应物完全，但有部分双苯甲酰基产物。反应液旋干得黄色油状粗品(120.00mg，粗品)。将该粗品(110.00mg，193.54umol，1.00eq)加入到甲醇(2.00mL)和水(1.00mL)中，再加入氢氧化钠(23.23mg，580.63umol，3.00eq)，反应液在25℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完全。反应液过滤。滤液送高效液相制备(Boston Green ODS 150*30 5u，water(0.1％TFA)-ACN)分离得产物0108(20.00mg，收率：22.26％)。MS(ESI)m/z：464，466[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.89-7.80(m，2H)，7.61-7.53(m，1H)，7.52-7.45(m，2H)，7.14-7.09(m，1H)，6.94-6.88(m，1H)，6.83-6.74(m，1H)，4.48-4.33(m，2H)，3.79-3.65(m，2H)。

实施例38：0015

合成路线：

步骤1：化合物0015-1的合成

将化合物BB-4(1.48g，3.50mmol，1.00eq，盐酸)加入到二氯甲烷(15mL)，加入二异丙基乙胺(452.63mg，3.50mmol，611.66uL，1.00eq)，反应液由混浊状变为褐色澄清液，再滴加化合物BB-3(830.25mg，3.85mmol，1.10eq)的二氯甲烷(13mL)溶液，反应液逐渐变为黄色，在0℃下搅拌2小时，反应液变为白色混浊状，LCMS监测显示约有40％的原料剩余，补加二异丙基乙胺(1.36g，10.50mmol，1.83mL，3.00eq)，反应液变为褐色澄清状，再滴加化合物BB-3(830.25mg，3.85mmol，1.10eq)，25℃下继续反应16小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)监测显示原料反应完全，反应液旋干得黄色油状液体产物0015-1(2.14g，粗品)。MS(ESI)m/z：565，567[M+H]⁺。

步骤2：化合物0015-2的合成

将化合物0015-1(2.14g，3.79mmol，1.00eq)溶于二氯甲烷(10.00mL)，加入盐酸/二氧六环(4M，10.00mL，10.55eq)，在25℃反应1小时。LCMS监测显示原料反应完全，反应液于减压蒸馏下旋干得黄色液体产物0015-2(1.78g，粗品)。MS(ESI)m/z：465，467[M+H]⁺。

步骤3：化合物0015的合成

将化合物0015-2(1.78g，3.83mmol，1.00eq)溶于甲醇(8.00mL)和水(4.00mL)，加入氢氧化钠(612.20mg，15.30mmol，4.00eq)，混合液于25℃下反应20小时。LCMS监测显示反应完成。用1M盐酸调pH＝5，乙酸乙酯萃取(15mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，溶于甲醇，过滤。滤液通过高效液相色谱(Phenomenex Synergi C18150*30mm*4um water(0.05％HCl)-ACN)分离得到产物0015(532.65mg，收率：31.66％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：439，441[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃0D)δ7.12-7.18(m，1H)，7.05-7.11(m，1H)，6.85(ddd，1H)，4.36(t，2H)，3.38(t，2H)。

参照实施例38(化合物0015)中步骤1-3的合成方法，合成下表中各实施例：

实施例51：0068

合成路线：

步骤1：化合物0068-1的合成

将化合物BB-1(50.00mg，134.39umol，1.00eq)溶于水(100.00uL)和四氢呋喃(5.00mL)，然后加入甲硫醇钠(18.84mg，268.78umol，17.13uL，2.00eq)，再在25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完全。反应液旋干得黄色油状产物0068-1(51.00mg，粗品)直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z：373，375[M+H]⁺。

步骤2：化合物0068的合成

将化合物0068-1(50.00mg，133.99umol，1.00eq)溶于水(300.00uL)和四氢呋喃(2.00mL)，然后加入氢氧化钠(18.76mg，468.97umol，17.13uL，3.50eq)，再在25℃下搅拌3小时。LCMS显示大部分反应完全。反应液加1M盐酸调pH值到～7，过滤，滤液通过高效液相色谱(water(0.05％HCl)-ACN，柱子：Boston Green ODS 150*30 5u)得产物0068(15.00mg，收率：32.25％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：347，349[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.08-7.04(m，2H)，6.78-6.77(m，1H)，2.62(s，3H)。

实施例52：0148

合成路线：

步骤1：化合物0148-2的合成

将化合物BB-4(50.00mg，118.32umol，1.00eq，盐酸)溶于二氯甲烷(1.00mL)，加入二异丙基乙胺(45.88mg，354.96umol，61.99uL，3.00eq)，化合物0148-1(15.17mg，130.15umol，8.67uL，1.10eq)，该混合液于23℃下反应2小时。LCMS监测显示原料反应完全。反应液直接于减压蒸馏下旋干得无色液体产物0148-2(56.00mg，粗品)。

步骤2：化合物0148的合成

将化合物0148-2(56.00mg，120.12umol，1.00eq)溶于甲醇(1.00mL)和水(120.00uL)，加入氢氧化钠(28.83mg，720.72umol，6.00eq)，反应液逐渐变为褐色溶液，该混合液于21℃下反应16小时。LCMS监测显示原料反应完全。反应液于减压蒸馏下旋去甲醇，加入3mL水，用1M盐酸调pH＝2，乙酸乙酯萃取(5mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，溶于3mL甲醇，过滤。滤液通过高效液相色谱(Phenomenex SynergiC18 150*30mm*4um water(0.05％HCl)-ACN)分离得到产物0148(15.73mg，收率：27.47％，纯度：100％，盐酸盐)。MS(ESI)m/z：438，440[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.18(dd，1H)，7.08(t，1H)，6.81-6.89(m，1H)，4.56-4.63(m，2H)，3.55-3.66(m，2H)。

参照实施例52(化合物0148)中步骤1-2的合成方法，合成下表中各实施例：

实施例67：0153

合成路线：

步骤1：化合物0153-1的合成

将化合物BB-4(50.00mg，129.49umol，1.00eq)和甲酸(8.94mg，194.24umol，7.33uL，1.50eq)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，加入二异丙基乙胺(66.94mg，517.96umol，90.46uL，4.00eq)，HATU(59.08mg，155.39umol，1.20eq)，该反应混合液于20℃下反应16小时。LCMS监测显示原料反应完全，有目标化合物生成。加入5mL水，乙酸乙酯萃取(5mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干得浅黄色液体产物0153-1(55.00mg，粗品)。MS(ESI)m/z：414，416[M+H]⁺。

步骤2：化合物0153的合成

将化合物0153-1(55.00mg，132.81umol，1.00eq)溶于甲醇(1.00mL)和水(200.00uL)，加入氢氧化钠(21.25mg，531.22umol，4.00eq)，该混合液于21℃下反应16小时。LCMS监测显示原料反应完全，有目标化合物生成。减压蒸馏下旋去甲醇，用1M盐酸调pH＝2，乙酸乙酯萃取(5mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干，溶于3mL甲醇，过滤。滤液通过高效液相色谱(Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4umwater(0.05％HCl)-ACN)分离得到产物0153(40.09mg，收率：71.09％，纯度：100％，盐酸盐)。MS(ESI)m/z：388，390[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.12(s，1H)，7.34(dd，1H)，7.09-7.19(m，1H)，6.86-7.02(m，1H)，4.27(t，2H)，3.54(t，2H)。

参照实施例67(化合物0153)中步骤1-2的合成方法，合成下表中各实施例：

参照实施例67(化合物0153)中步骤1的合成方法，合成下表中各实施例：

实施例80：0251

合成路线：

步骤1：化合物0251的合成

将甲醇/氨溶液(5.00mL，4M)加入称有化合物BB-6-2(50.00mg，115.96umol，1.00eq)的圆底烧瓶中，25℃搅拌反应3小时。向其中加入甲醇(2mL)，过滤，经高效液相色谱(Kromasil150*25mm*10um，water(0.05％ammonia hydroxide v/v)-ACN)分离，得产物0251(24.50mg，收率：54.15％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：390，392[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.13(dd，J＝2.6，5.9Hz，1H)，7.05(t，J＝8.7Hz，1H)，6.81(ddd，J＝2.6，4.0，8.9Hz，1H)，3.96(s，2H)。

实施例81：0262

合成路线：

步骤1：化合物0262的合成

向加有化合物BB-15-2(180.00mg，392.79umol，1.00eq)的圆底烧瓶内加入甲醇/氨溶液(13.00mL)(4M)，15℃搅拌反应6小时，无产物生成，继续搅拌反应20小时有产物生成，继续反应20小时。20℃下旋蒸掉一半溶剂后过滤，经高效液相色谱(DuraShell 150*25mm*5um，water(0.05％HCl)-ACN)分离，得产物0262(15.85mg，收率：9.98％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：404，406[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.10(dd，J＝2.6，5.9Hz，1H)，7.05(t，J＝8.7Hz，1H)，6.77(ddd，J＝2.8，4.0，8.8Hz，1H)，3.40(t，J＝6.9Hz，2H)，2.74(t，J＝6.9Hz，2H)。

实施例82：0231

合成路线：

步骤1：化合物0231-1的合成

将化合物BB-5(50.00mg，113.98umol，1.00eq，盐酸盐)和氰酸钾(9.25mg，113.98umol，1.00eq)溶于水(2.00mL)中，温度升高至100℃反应2小时。向反应液中加入水(5mL)，加乙酸乙酯(5mL*3)萃取，有机相合并后经无水硫酸钠干燥，旋干得淡黄色油状产物0231-1(50.00mg，粗品)。MS(ESI)m/z：445，447[M+H]⁺。

步骤2：化合物0231的合成

将化合物0231-1(50.00mg，112.30umol，1.00eq)溶于甲醇(1.50mL)和水(1.00mL)中，加入氢氧化钠(17.97mg，449.20umol，4.00eq)，20℃搅拌反应1.5小时。向反应液中加入盐酸(6M)调pH为6～7，加甲醇(2mL)过滤，滤液经高效液相色谱(Phenomenex Synergi C18150*30mm*4um，water(0.05％HCl)-ACN)分离，得产物0231(23.00mg，收率：48.51％，纯度：99.3％)。MS(ESI)m/z：419，421[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.11(dd，J＝2.8，6.0Hz，1H)，7.06(t，J＝8.7Hz，1H)，6.79(ddd，J＝2.8，4.0，8.8Hz，1H)，3.59(t，J＝6.4Hz，3H)，3.36(br.s.，1H)。

实施例83：0309

合成路线：

以化合物BB-32为原料，参考实施例82中化合物0231合成步骤1-2，合成化合物0309。MS(ESI)m/z：471[M+Na]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.33(d，1H)，7.18(t，1H)，6.95(t，1H)，6.75(dd，1H)，3.51(t，2H)，3.26-3.31(t，2H)。

实施例84：0239

合成路线：

步骤1：化合物0239的合成

将化合物0117(40.00mg，87.86umol，1.00eq)溶于二氯甲烷(1.00mL)，加入间氯过氧苯甲酸(27.57mg，87.86umol，纯度：55％，1.00eq)，该反应液于10℃反应1小时。LCMS监测显示原料反应完全，有目标化合物生成。加入3mL甲醇，将反应液过滤。滤液通过高效液相色谱(Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um water(0.05％HCl)-ACN)分离。得到产物0239(11.57mg，收率：25.94％，纯度：100％，盐酸盐)。MS(ESI)m/z：471，473[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.27(d，1H)，7.09(t，1H)，6.96(d，1H)，3.73-3.85(m，1H)，3.53-3.71(m，3H)。

实施例85：0069

合成路线：

步骤1：化合物0069-2的合成

将化合物0069-1(2.50g，19.37mmol，1.00eq)溶于N，N-二甲基甲酰胺(60.00mL)，然后依次加入化合物BB-1-4(3.68g，19.37mmol，1.00eq)，HATU(8.84g，23.24mmol，1.20eq)和二异丙基乙胺(5.01g，38.74mmol，6.77mL，2.00eq)，反应液在25℃下反应1小时。反应液变成黄色。LCMS显示反应完全。反应物加入240mL水，过滤，滤饼用水洗(20mL*3)，自然干燥得到灰色固体产物0069-2(5.50g，收率：92.43％，纯度：98％)直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z：301，303[M+H]⁺。

步骤2：化合物0069-3的合成

在0℃下将硫酸(9.00mL)缓慢加入到双氧水(10.62g，93.64mmol，9.00mL，纯度：30％，56.41eq)，然后加入钨酸钠(487.96mg，1.66mmol，1.00eq)，再加入化合物0069-2(500.00mg，1.66mmol，1.00eq)，再升温至25℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。反应液加20mL水稀释，过滤，滤饼旋干得产白色固体产物0069-3(520.00mg，收率：89.89％，纯度：95％)直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z：331，333[M+H]⁺。

步骤3：化合物0069-4的合成

将化合物0069-3(500.00mg，1.51mmol，1.00eq)溶于四氢呋喃(5.00mL)和水(100.00uL)和甲醇(1.00mL)，然后加入氢氧化钠(84.58mg，2.11mmol，1.40eq)。再在25℃下搅拌16小时。LCMS显示大部分反应完成。反应液加1N盐酸调pH值到～7，反应液加50mL乙酸乙酯稀释，饱和食盐水洗(10mL x 3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得黄色固体产物0069-4(430.00mg，粗品)直接用于下一步反应。MS(ESI)m/z：316，318[M+H]⁺。

步骤4：化合物0069-5的合成

将化合物0069-4(200.00mg，632.75umol，1.00eq)溶于甲苯(2.00mL)，然后加入劳森试剂(511.86mg，1.27mmol，2.00eq)再在90℃下搅拌16小时。LCMS显示大部分反应完成。反应液旋干得粗品。粗品经快柱过柱仪过柱(0-40％乙酸乙酯在石油醚中)得红色固体产物0069-5(120.00mg，收率：51.96％，纯度：91％)。MS(ESI)m/z：332，334[M+H]⁺。

步骤5：化合物0069-6的合成

将化合物0069-5(150.00mg，451.60umol，1.00eq)溶于二氯甲烷(3.00mL)，然后加入二异丙基乙胺(175.09mg，1.35mmol，236.61uL，3.00eq)再滴加三氟甲磺酸甲酯(111.16mg，677.40umol，74.11uL，1.50eq)再在25℃下搅拌3小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)显示反应完成。反应液旋干得粗品。粗品经快柱过柱仪过柱(0-40％乙酸乙酯在石油醚中)得黄色油状产物0069-6(130.00mg，收率：82.82％，纯度：99.6％)。MS(ESI)m/z：346，348[M+H]⁺。

步骤6：化合物0069的合成

将化合物0069-6(100.00mg，288.87umol，1.00eq)溶于乙醇(3.00mL)，然后加入二异丙基乙胺(112.00mg，866.60umol，151.35uL，3.00eq)再加入胺基氰(36.43mg，866.60umol，36.43uL，3.00eq)再移入微波管，在100℃下微波反应1小时。LCMS显示反应完全，有主要产物峰生成。过滤，滤液旋干得粗品。粗品经高效液相分离(water(0.05％HCl)-ACN，Boston Green ODS 150*30 5u)纯化得产物0069(18.00mg，收率：18.32％，纯度：100％)。MS(ESI)m/z：340，342[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ＝8.22-7.98(m，1H)，7.82-7.62(m，1H)，7.43-7.26(m，1H)，4.25(br.s.，3H)。

实施例85：化合物0310

合成路线：

步骤1：化合物0310-1的合成

将片段BB-5(100.00mg，227.97umol，1.00eq，HCl)与双氰胺钠(60.89mg，683.91umol，3.00eq)溶于DMF(2.00mL)，加入HCl(2M，115.12uL，1.01eq)，该反应液加热至110℃反应2hr。向反应液中加入8ml水，乙酸乙酯萃取(8ml*3)，合并有机相，盐水洗(20ml*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干得化合物0310-1。MS(ESI)m/z：469.0，471.0[M+H]⁺。

步骤2：化合物0310的合成

将化合物0310-1(106.00mg，225.89umol，1.00eq)溶于MeOH(1.00mL)和H2O(500.00uL)，加入NaOH(36.14mg，903.56umol，4.00eq)，该反应液于22℃反应2hr。将反应液过滤，滤液通过Pre-HPLC(Kromasil 150*25mm*10um water(0.05％ammonia hydroxide v/v)-ACN)分离纯化得到化合物0310。MS(ESI)m/z：464.9，466.9[M+Na]⁺

¹H NMR(400MHz，MeOD)：δ＝7.01-7.14(m，2H)，6.77(ddd，1H)，3.51-3.66(m，2H)，3.28-3.32(m，2H).

实施例86：化合物0383

合成路线：

步骤1：化合物0383-2的合成

将片段BB-5(50.00mg，113.98umol，1.00eq，HCl)溶于DMF(1.00mL)，加入DIEA(103.12mg，797.86umol，139.35uL，7.00eq)，再加入化合物0383-1(33.41mg，227.96umol，2.00eq)，该反应液于23℃反应2hr。加入5ml水，乙酸乙酯萃取(5ml*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于减压蒸馏下旋干得化合物0383-2。MS(ESI)m/z：444.0，446.0[M+H]⁺

步骤2：化合物0383的合成

将化合物0383-2(100.00mg，225.10umol，1.00eq)溶于THF(1.00mL)和H2O(500.00uL)，加入NaOH(18.01mg，450.20umol，2.00eq)，该反应液于25℃反应1hr。用浓盐酸调pH＝5，加入3ml甲醇，过滤，滤液通过pre-HPLC(YMC-Actus Triart C18 150*30 5uwater(0.05％HCl)-ACN)分离纯化得到化合物0383。MS(ESI)m/z：417.9，419.9[M+H]⁺ ¹HNMR(400MHz，MeOD)：δ＝7.13-7.03(m，2H)，6.85-6.73(m，1H)，3.70-3.54(m，2H)，3.45-3.35(m，2H).

实施例87：化合物0384

合成路线：

步骤1：化合物0384-1的合成

将片段BB-5(50.00mg，113.98umol，1.00eq，HCl)溶于CH3CN(1.00mL)，加入DIEA(58.92mg，455.92umol，79.63uL，4.00eq)，再加入片段BB-34(107.49mg，569.90umol，5.00eq，HCl)的DMF溶液(0.25ml)，该反应液于20℃反应64hr。反应液直接于减压蒸馏下旋干得到化合物0384-1。MS(ESI)m/z：485.9，487.9[M+H]⁺

步骤2：化合物0384的合成

将化合物0384-1(55.00mg，113.10umol，1.00eq)溶于THF(1.00mL)和H2O(500.00uL)，加入NaOH(36.19mg，904.80umol，8.00eq)，该反应液于20℃反应1hr。用浓盐酸调pH＝6，加入3ml甲醇，过滤。滤液通过pre-HPLC(YMC-Actus Triart C18 150*30 5uwater(0.05％HCl)-ACN)分离纯化，得到化合物0384。MS(ESI)m/z：460.0，462.0[M+H]⁺ ¹HNMR(400MHz，MeOD)：δ＝7.13-7.04(m，2H)，6.85-6.77(m，1H)，3.80(t，J＝6.8Hz，2H)，3.49(br t，J＝6.5Hz，2H).

试验例1：生物活性测试

一、hIDO1体外活性测试

1、hIDO1体外酶活性测试

1.1 实验目的：

通过NFK green^TM荧光分子检测IDO1酶代谢产物NFK生成的变化，以化合物的IC50值为指标，来评价化合物对重组人源IDO1酶的抑制作用。

1.2 实验材料：

NFK green^TM试剂，Netherlands Translational research center

IDO1酶活力检测试剂盒，NTRC#NTRC-hIDO-10K

384孔酶反应板，PerkinElmer#6007279

384孔化合物板，Greiner#781280

封板膜，PerkinElmer#6050185

Envision多功能读板仪，PerkinElmer

Bravo自动液体处理平台，Agilent

1.3 实验步骤和方法：

1.3.1 化合物加样：

用二甲基亚砜(DMSO)将化合物稀释成1mM，3倍稀释，10个梯度，双复孔。通过Bravo自动液体处理平台转移48μL 50mM磷酸盐缓冲液pH6.5加到化合物板中。然后再加入2μL稀释好的化合物DMSO溶液，混匀后转移10μL到酶反应板中。

1.3.2 IDO1酶活性检测实验：

于反应缓冲液(50mM磷酸盐缓冲液pH6.5，0.1％Tween-20，2％甘油，20mM抗坏血酸，20μg/ml过氧化氢酶和20μM亚甲蓝)中稀释IDO1酶至20nM，转移20μL到酶反应板中，23℃孵育30分钟。加入10μL 400μM L型色氨酸底物开始反应，23℃孵育90分钟。加入10μL NFKgreen^TM荧光染料，用封板膜封好，放置于37℃孵育4小时后，在Envision多功能读板仪上读数(Ex 400nm/Em 510nm)。

1.3.3 分析数据：

将加入IDO1酶但未加化合物的参照孔定为0％抑制率，未加IDO1酶的参照孔定为100％抑制率，用XLFit 5分析数据，计算化合物的IC50值。其测试结果如表1所示。

2、hIDO1细胞学活性测试

2.1 实验目的：

通过LCMS方法检测Hela细胞犬尿氨酸的变化，以化合物的IC50值为指标，来评价化合物对IDO1酶的抑制作用。

2.2 实验材料：

细胞系：Hela细胞

培养基：RPMI 1640 phenol red free，Invitrogen#11835030

10％胎牛血清，Gibco#10099141

1X青链霉素，Gibco#15140-122

沉淀剂：4μM L-犬尿氨酸-d4溶于100％乙腈，CacheSyn#CSTK008002

胰酶，Invitrogen#25200-072

DPBS，Hyclone#SH30028.01B

重组人源γ型干扰素，Invitrogen#PHC4033

5％(w/v)三氯乙酸，AlfaAesar#A11156

96孔细胞板，Corning#3357

96孔化合物板，Greiner#781280

96孔V底板，Axygen#WIPP02280

CO₂培养箱，Thermo#371

离心机，Eppendorf#5810R

Vi-cell细胞计数仪，Beckman Coulter

2.3 实验步骤和方法：

2.3.1 Hela细胞接种：

37℃水浴预热培养基、胰酶、DPBS。吸掉细胞培养的培养基，用10mL DPBS清洗；加入预热过的胰酶到培养瓶中，旋转培养瓶使胰酶均匀覆盖培养瓶，放到37℃、5％CO₂培养箱中消化1-2分钟；每个T150用10-15mL培养基垂悬细胞，800rpm离心5分钟，用10mL培养基重悬细胞，吸取1mL细胞重悬液，用Vi-cell计数；用培养基稀释Hela细胞到5×10⁵/mL，取80μL加入到96细胞板中，5％CO₂培养箱37℃培养5-6小时。

2.3.2 化合物加样：

用DMSO将化合物稀释成1mM，3倍稀释，9个梯度，双复孔。取5μL稀释好的化合物DMSO溶液加到含有95μL培养基的化合物板中。混匀后转移10μL到细胞板中。

1)细胞学活性测试：

加入10μL重组人源γ型干扰素至终浓度100ng/ml，诱导IDO1的表达。放置于5％CO₂培养箱37℃培养20小时。加入4μL 5％(w/v)三氯乙酸，混匀后于50℃孵育30分钟。2400rpm离心10分钟，取40μL上清到96孔V底板中，加入沉淀剂。混匀后4000rpm离心10分钟。转移100μL上清到新的96孔V底板中。LCMS检测犬尿氨酸的含量。

2)分析数据：

将加入γ型干扰素但未加化合物的参照孔定为0％抑制率，未加Hela细胞的参照孔定为100％抑制率，用XLFit 5分析数据，计算化合物的IC50值。其测试结果如表1所示：

表1：本发明化合物体外筛选试验结果

结论：本发明化合物体外活性良好。

二、测定热力学溶解度

1、热力学溶解度溶液

缓冲液A(pH 2.0)：50mM磷酸盐缓冲液，pH值2.0。

缓冲液B(pH 7.4)：50mM磷酸盐缓冲液，pH值7.4

2、标准溶液的制备

将50％的乙腈溶液和50％的缓冲溶液(A，B)混合，得到的稀释液。10mM(20μL/化合物)储备液加入至乙腈(480μL/化合物)中，与缓冲液(A，B)(500μL/化合物)混合为200μM的的紫外检测标准液。以10倍或200倍量的稀释液稀释200μM的紫外检测标准液，以获取20μM，1μM的紫外标准溶液。1，20和200μM的的紫外标准溶液作为热力学溶解性试验的标准样品。

3、方法

3.1 样品制备，震摇和过滤

称量不少于2毫克的样品粉末于Whatman miniuniprep的小瓶中。如果要求测试在多个缓冲溶液(A，B)中测试样品热力学溶解度，则每个测试都需要一个单独的小瓶。分别添加450μL缓冲液(A，B)到每个Whatman miniuniprep小瓶中。加入缓冲液后，将Whatmanminiuniprep带过滤的活塞盖装上并压至液面上方，使在震摇过程中过滤网与缓冲溶液(A，B)接触。涡旋摇动溶解度样品1分钟。并记录溶液现象。以600转每分钟的速度室温(约22～25℃)震摇24小时。按压Whatman Miniunipreps过滤瓶盖至底部，获得样品溶解度溶液的滤液。所有样品小瓶都应进行过滤前后不溶物质及其渗漏现象。缓冲液(A，B)稀释50倍得到样品稀释液。

3.2 分析检测

从低浓度到高浓度注入3个紫外标准液至HPLC中，然后注入待测化合物的稀释液和上清。待测样品一式两份。对紫外色谱峰进行积分。模拟标准曲线并计算样品的热力学学溶解度，结果见表2。HPLC条件如下：

试验方法：HPLC-UV检测

仪器：Agilent 1200

流动相：A：水+0.69％TFA；B：乙腈+0.62％TFA

色谱柱：Agilent TC C18(2.1×50mm，4.6μm)

比例：

时间(min)	B％	流速(mL/min)
			0.00	5	1
2.00	90	1
			2.50	90	1
2.60	5	1
			4.00	5	1

表2：本发明化合物的溶解度

结论：本发明化合物水溶解度较好。

三、渗透性测试

1、渗透性MDR1测试

1.1 储备液的配制

将供试品溶解于二甲基亚砜(DMSO)或其他适宜的溶剂，配制成10mM储备液。合适的内标(internal standard，IS)溶解于乙腈(acetonitrile，ACN)或其它有机溶剂作为终止液，具体信息将在研究报告中描述。

非诺特罗(fenoterol)，***(propranolol)和地高辛(digoxin)在本研究中分别作为低渗对照品，高渗对照品和P-gp底物。这些化合物的储备液用DMSO配制，储存于2-8存于，3个月内使用有效。

1.2 给药液和接收液的配制

本项目采用含10目采用含液的配制备的Hank液的平衡盐缓冲液作为转运缓冲液。给药液以及接收液的配制方法如表3所示。

表3：给药液以及接收液的配制方法

备注：ND表示“未检测”。

1.3 细胞培养

MDR1-MDCK II细胞用α-MEM培养基(α-Minimum Essential Media)培养，培养条件为37±1℃，5％CO₂和饱和相对湿度。之后将细胞接种于BD Transwell-96孔板(BDGentest)里，接种密度为2.3×105个细胞/cm²，然后将细胞置于二氧化碳培养箱中培养4-7天后用于转运实验。

1.4 转运实验

供试品和digoxin给药浓度为2μM，双向(A-B和B-A方向)给药，均做二个复孔。Fenoterol和propranolol测试浓度均为2μM，单向(A-B方向)给药，均做二个复孔。

将待使用的溶液置37±1℃水浴锅预孵育30分钟。将给药液和接收液分别加入到对应的细胞板孔位(每个顶端和基底端孔分别加样75和250μL)，启动双向转运实验。加样后，将细胞板置于37±1℃，5％CO₂和饱和相对湿度的培养箱中孵育150分钟。样品收集信息如表4所示。

表4：样品收集信息

所有的样品漩涡震荡后于3220g离心10分钟，转移适量体积的上清液到样品分析板，封板后样品若不立即分析则储存于2-8℃，采用LC/MS/MS的方法进行分析。

1.5 细胞膜完整性测试

转运实验结束后，采用荧光黄检测实验(Lucifer Yellow Rejection Assay)测试MDR1-MDCK II细胞的完整性。荧光黄溶液孵育30分钟后，收取荧光黄样品，2^e读板仪在425/528nm(激发/发射)波谱处检测样品中荧光黄的相对荧光强度(the relativefluorescence unit，RFU)。

1.6 样品分析

采用半定量分析供试品、对照品fenoterol、propranolol以及digoxin，用被分析物与内标的峰面积比值作为对照品的浓度。

表5：本发明化合物的渗透性MDR1：

2、渗透性Caco2测试

2.1 储备液的配制

非诺特罗(fenoterol)，***(propranolol)和地高辛(digoxin)在本研究中分别作为低渗对照品，高渗对照品和P-gp(P-glycoprotein)底物。这些化合物的储备液用DMSO配制，储存于2-8℃，3个月内使用有效。

2.2 给药液和接收液的配制

本项目采用含10mM HEPES的Hank’s平衡盐缓冲液作为转运缓冲液。给药液以及接收液的配制方法如表6所示。

HEPES：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid，供应商：gibco，货号：15630-080

Hank’s平衡盐缓冲液：Hank’s balanced salt solution，简称HBSS，购买于gibco，货号：14025-076

表6：给药液以及接收液的配制方法

备注：ND表示“未检测”。

2.3 细胞培养

Caco-2细胞用MEM培养基(Minimum Essential Media)培养，培养条件为37±1℃，5％CO₂和饱和相对湿度。之后将细胞接种于BD Transwell-96孔板里，接种密度为1×10⁵个细胞/cm²，然后将细胞置于二氧化碳培养箱中培养21-28天后用于转运实验。

2.4 转运实验

将待使用的溶液置37±1℃水浴锅预孵育30分钟。将给药液和接收液分别加入到对应的细胞板孔位(每个顶端和基底端孔分别加样75和250μL)，启动双向转运实验。加样后，将细胞板置于37±1℃，5％CO₂和饱和相对湿度的培养箱中孵育120分钟。样品收集信息如表7所示。

表7：样品收集信息

2.5 细胞膜完整性测试

转运实验结束后，采用荧光黄检测实验(Lucifer Yellow Rejection Assay)测试Caco-2细胞的完整性。荧光黄溶液孵育30分钟后，收取荧光黄样品，2^e读板仪在425/528nm(激发/发射)波谱处检测样品中荧光黄的相对荧光强度(the relative fluorescenceunit，RFU)。

2.6 样品分析

表8：本发明化合物的渗透性Caco2：

化合物	Ato B(10<sup>-6</sup>cm/s)	B toA(10<sup>-6</sup>cm/s)
			360	0.39	19.63
0117	2.97	12.19
			0231	2.58	20.13

结论：本发明化合物的渗透性良好。

试验例2：抗小鼠结肠癌CT26药效研究

1.研究目的

本研究采用结肠癌CT26模型，比较231化合物与360和117化合物抗肿瘤作用差异。

2.实验材料

2.1 细胞

表9：细胞株基本信息

细胞株名称	CT26.WT(ATCC CRL-2638)
		肿瘤类型	小鼠结直肠癌细胞
培养条件	RPMI 1640培养基，10％胎牛血清，37℃，5％CO<sub>2</sub>
		培养过程	隔天换液1次，每2-3天传代，按1∶2-1∶5比例传代
细胞来源	中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库

2.2 实验动物

表10：实验动物基本信息

2.3供试品

表11：不同IDO抑制剂的基本信息

化合物	分子量	提供单位	生产批号
				360	438.2	上海升德医药科技	SEND20160920-37-3
117	455.3
				231	419.2

3.剂量设计及给药途径和频率

前期实验研究显示，化合物360灌胃给予100mg/kg bid，对CT26的抑瘤率为30-50％，基本达到最大药效平台。因此，本实验中化合物360、化合物117两个化合物的剂量定为100mg/kg。为考察231的剂量-药效相关性，本实验中将231化合物的剂量设为25、50、100、200mg/kg。所有药物均经灌胃给药，每日2次。

4.模型选择与制备

文献报道，小鼠结肠癌CT26为评价免疫类药物的常用肿瘤模型，IDO抑制剂化合物360在上述模型上可有效抑制肿瘤生长。因此，本实验选择荷CT26的BALB/c模型进行药效和组织分布研究。

取对数生长期的肿瘤细胞，收集、重悬至无血清培养基中，调整细胞浓度为5×10⁵个/mL，向细胞悬液中加入等体积的Matrigel，使细胞的终浓度为5×10⁵个/mL。超净工作台中，于每只小鼠肩胛处皮下接种0.2mL肿瘤细胞悬液，接种量为1×10⁵个/只。待瘤快长至500-1000mm³时，剥出瘤快，剪刀剪碎，用皮埋植入穿刺针(直径1.2mm)接种至小鼠背部肩胛处皮下。

5.分组与给药

肿瘤接种当天定义为Day0，接种动物于接种当天随机分组。接种后第2天(Day1)开始给药。实验共分为7个组，每组12只动物，动物分组及给药信息详见表12。

表12：药效动物分组与给药(CT26模型)

6.观察指标

实验周期以对照组肿瘤体积长至3000mm³为止，实验期间观察以下指标：

(1)肿瘤生长曲线：肿瘤可测量后，每2天测量1次肿瘤最大直径(a)和最小直径(b)，计算肿瘤体积(计算公式为：V＝1/2×a×b²)，动态观察受试药物的抗肿瘤效应。

(2)转归率：实验结束时，观察各组动物的转归率。

(3)动物体重：每次测量瘤径时或给药前称量小鼠体重，每日观察1次动物死亡情况。

(4)肿瘤抑制率：实验结束时，脱颈椎处死小鼠，剥离瘤块并称重，计算抑瘤率，抑瘤率＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％，并用数码相机对瘤块拍照记录。

7.实验结果

7.1 荷瘤小鼠死亡及体重

整个试验期间，无动物死亡，各组存活动物的体重与给药前相比都有增加，试验结束时对照组动物体重增加16.0％，而各给药组增加的幅度有所降低(4.4％-12.0％)，结果见图1和表12。试验结束时，117组和23150-200mg/kg组动物的体重与对照组显著降低(P＜0.05)，360组和23125mg/kg组动物的体重与对照组无显著差异(P＞0.05)。因此，231化合物在较高剂量时，可轻度降低动物体重的增长幅度，但动物体重仍然在增加。

表12：受试药物对荷瘤小鼠体重的影响(单位：g，

)

注：^*P＜0.05，和对照组体重相比较。

7.2 肿瘤体积

试验期间，360组和117组平均肿瘤体积始终低于对照组，但无统计学差异(P＞0.05)。231低剂量25mg/kg组肿瘤体积在Day10和Day12显著低于对照组(P＜0.05)；23150mg/kg以上剂量组的肿瘤体积从Day10至试验结束始终显著低于对照组(P＜0.05)。结果与统计分析详见图2和表13。

表13：各时间点荷瘤模型各组的平均肿瘤体积(单位：mm³，

)

注：^*P＜0.05，和对照组比较。

7.3 肿瘤重量

实验结束时，360和117组的平均肿瘤重量低于对照组，但无统计学差异。231化合物的肿瘤抑制作用呈剂量依赖性，在25、50、100mg/kg时，平均肿瘤重量低于对照组，但无统计学差异；231在200mg/kg时，平均肿瘤重量显著低于对照组(P＜0.05)，肿瘤抑制率为56.8％。在100mg/kg相同剂量下，231和360的抑瘤作用相当，优于117；117组有1只动物在试验结束时仍未长出瘤块。结果与统计分析详见图3、附图和表14。

表14：受试药对移植瘤重量的影响

组别	肿瘤重量(g)	瘤重抑制率(％)
			对照	2.01±0.84	-
360	1.41±0.81	29.5
			117	1.71±0.76	14.4
23125mg/kg	1.49±1.16	25.9
			23150mg/kg	1.42±0.56	29.2
231100mg/kg	1.32±1.09	34.0
			231200mg/kg	0.87±0.74<sup>*</sup>	56.8

注：^*P＜0.05，和对照组比较。

8.结论

本实验的研究目的是评定供试品在CD-1小鼠、SD大鼠、和人肝微粒体中的一相代谢稳定性。本实验条件下，化合物231可剂量依赖性的抑制CT26移植瘤的生长，作用优于化合物117和化合物360，但可轻度降低荷瘤小鼠体重增长。

试验例3：人肝微粒体稳定性实验

该测试体系所用到的动物和人肝微粒体购买自BD Gentest、Xenotech、Corning或者BioreclamationIVT，在使用前储存在-80℃冰箱内。

供试品和对照品在37℃条件下，和微粒体共同孵育60分钟，在指定的时间点加入含有内标物的冷的乙腈溶液(或其他有机溶剂)来终止反应。离心后，所产生的上清液用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)进行半定量测定。分析物和内标的保留时间、色谱图采集和色谱图的积分采用软件Analyst(AB Sciex，Framingham，Massachusetts，USA)进行处理。

通过样品与内标峰面积的比值转化成剩余百分比求得样品的体外消除速率常数ke，计算供试品的体外清除率和半衰期。结果如表15所示：

表15

测试化合物	231	227
			Remaining％(60min)，H/R/M	81.6/64.8/35.8	56.9/21.6/11.0
Intrinsic clearance(mL/min/kg)	＜8.6，23.7，134.3	15.3，91.9，274.8

讨论：化合物231在人、大鼠肝微粒体中代谢比较稳定，在小鼠中快速代谢。化合物227在人肝微粒体中为中等代谢，在大鼠、小鼠中均快速代谢。代谢稳定性差于化合物231。

试验例4：人肝微粒体CYP抑制实验

研究项目的目的是采用CYP同工酶的5合1探针底物来评价供试品对人肝微粒体细胞色素P450同工酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)的抑制性。

混合人肝微粒体(HLM)购自Corning Inc.(Steuben，New York，USA)或者XenoTech，LLC.(Lenexa，KS，USA)或者其他的供应商，使用前都储存在低于-70℃条件下。

将稀释好的系列浓度的供试品工作液加入到含有人肝微粒体、探针底物和循环体系的辅助因子的孵育体系中，不含供试品而含有溶剂的对照作为酶活性对照(100％)。探针底物生成的代谢产物在样品中的浓度采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法进行测定。使用SigmaPlot(V.11)对供试品平均百分比活性对浓度作非线性回归分析。通过三参数或四参数反曲对数方程来计算IC⁵⁰值。测试结果如表16：

表16

讨论：化合物231对五个CYP同工酶抑制程度均较弱。化合物227对五个CYP同工酶的抑制均强于化合物231，对CYP2C19有中强度抑制。

试验例5：小鼠体内药代动力学实验

本实验旨在研究供试品单次静脉注射后在雄性CD-1小鼠血浆中的药代动力学情况。1.试验方法：

静脉组三只动物静脉注射给予1mg/kg的供试品，制剂为5％DMSO/95％(10％HP-β-CD)的0.2mg/mL澄清溶液。给药后5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时及24小时采集血液并制成血浆样品，抗凝剂为EDTA-K₂。样品经过LC-MS/MS分析获得血浆浓度数据。

2.数据分析

使用WinNonlin^TM Version 6.3(Pharsight，Mountain View，CA)药动学软件，以非房室模型对血浆药物浓度数据进行处理。使用对数线性梯形法计算下列药代动力学参数：消除相半衰期(T_1/2)，表观分布容积(V_dss)以及清除率(CL)，0点到末端时间点药物在体内的平均滞留时间(MRT_0-last)，0点到无限时间药物在体内的平均滞留时间(MRT_0-inf)，0点到末端时间点时间-血浆浓度曲线下面积(AUC_0-last)，0点到无限时间-血浆浓度曲线下面积(AUC_0-inf)，初始浓度(C₀)。结果如表17：

表17

讨论：两个化合物在小鼠体内均为中等清除速率，化合物231的AUC高于化合物227。其表观分布容积与半衰期也远大于化合物227。

Claims

1.式(Ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中，

D选自：O、S或-S(＝O)-；

R₁选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_1-6杂烷基、N,N-二(C_1-6烷基)氨基、3～6元杂环烷基、C_2-6烯基、苯基、5-9元杂芳基、

R₂选自：OH或CN；

R₃、R₄和R₅分别选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_1-6杂烷基、N,N-二(C_1-6烷基)氨基、3～6元杂环烷基；

R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R’取代的：C_1-6烷基、C_1-6杂烷基、N,N-二(C_1-6烷基)氨基、C_3-6环烷基、C_2-6烯基、苯基、噻吩基；

R’选自：F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂；

所述-3～6元杂环烷基-、-3～6元杂环烷基-C_1-3烷基-、C_1-6杂烷基、3～6元杂环烷基和5-9元杂芳基之“杂”分别独立地选自-C(＝O)NH-、-NH-、-S(＝O)₂NH-、-S(＝O)NH-、N、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-、-S(＝O)₂-、-NHC(＝O)NH-、-NHC(＝S)NH-、H₂P(＝O)-NH-；

以上任何一种情况下，杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2或3；

条件是，式(Ⅰ)所示化合物不包括如下化合物:

2.根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受盐，其中，R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R’取代的：C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氨基、N,N-二(C_1-6烷基)氨基、C_2-6烯基、C_3-6环烷基、苯基、噻吩基。

3.根据权利要求2所述化合物或其药学上可接受盐，其中，R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂，或选自任选被1、2或3个R’取代的：Me、Et、

4.根据权利要求3所述化合物或其药学上可接受盐，其中，R选自：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、

Me、Et、CF₃、CHF₂、CH₂F、

5.根据权利要求1～4任意一项所述化合物或其药学上可接受盐，其中，L选自单键，或选自任选被1、2或3个R取代的：-C_1-5烷基-、-C_3-6环烷基-、-C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、-3～6元氮杂环烷基-C_1-3烷基-。

6.根据权利要求5所述化合物或其药学上可接受盐，其中，L选自：单键，或选自任选被1、2或3个R

取代的:-CH₂-、

7.根据权利要求6所述化合物或其药学上可接受盐，其中，L选自：单键、-CH₂-、

8.根据权利要求1～4任意一项所述化合物或其药学上可接受盐，其中，R₁选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂，或选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷硫基、C_1-6烷氨基、N,N’-二(C_1-3烷基)氨基、C_3-6环烷基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基、C_2-6烯基、苯基、噻吩基、吡啶基、咪唑基、噻唑基、2-酮-咪唑烷基、NH₂C(＝S)-NH-、C_1-6烷基-S(＝O)-、C_1-6烷基-S(＝O)₂-、C_1-6烷氧基-C(＝O)-NH-、NH₂-S(＝O)-NH-、NH₂-C(＝O)-、NH₂-C(＝O)-NH-、H-C(＝O)-NH-、H-S(＝O)₂-NH-、