CN107782817A - 一种清热解毒凉血通淋药物的质量检测方法 - Google Patents

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张红茹
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Abstract

本发明公开了一种清热解毒凉血通淋药物的质量检测方法，特别是涉及一种利用高效液相色谱法测定中药制剂中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的测定方法，属于制药领域。一种癃清片中山银花的检测方法，步骤如下：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)采用高效液相色谱仪进行测定，色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与醋酸水的体积比为10～90∶90～10。本发明的优点是：方便、快速、专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于癃清片中金银花与山银花的检测。

Description

一种清热解毒凉血通淋药物的质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种清热解毒凉血通淋药物的质量检测方法，特别是涉及一种利用高效液相色谱法测定中药制剂中灰毡毛忍冬皂苷乙的测定方法，属于制药领域。
背景技术
癃清片是目前市场上销售的一种清热解毒，凉血通淋的中药。用于下焦湿热所致的热淋，症见尿频、尿急、尿痛、腰痛、小腹坠胀。临床药效学实验研究证明，癃清片适宜于治疗老年人泌尿***感染，有明显的抗炎、镇痛作用，用于治疗泌尿***感染的有效中成药。
本发明治疗***及***炎的药物(癃清片)具有明确地抑菌、抗炎、镇痛、利尿、改善微循环、增强机体免疫的作用。其组方中金银花、黄柏、黄连、败酱草、白花蛇舌草清热解毒；赤芍、丹皮、仙鹤草散瘀凉血；泽泻、车前子利水通淋。
《中华人民共和国药典》2015年版一部公开癃清片的处方和制法为：以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛，备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏。与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。每片0.6g。
《中华人民共和国药典》2015年版一部“癃清片”品种项下的检测指标包括：鉴别项下包括泽泻显微鉴别，盐酸小檗碱、丹皮酚、芍药苷薄层色谱鉴别；含量测定项下包括盐酸小檗碱的液相色谱测定。
《中华人民共和国药典》2015年版一部增补版“癃清胶囊”品种项下的检测指标包括：鉴别项下包括泽泻显微鉴别，黄连、黄柏、盐酸小檗碱、丹皮酚、芍药苷、金银花、绿原酸薄层色谱鉴别；含量测定项下包括盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的液相色谱测定。
据文献记载[张晓静,刘德福,丁菲菲,田华,邓雁如,郭利平.HPLC法测定癃清片中表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和丹皮酚[J].现代药物与临床,2015,05:527-530.]，采用HPLC法同时测定癃清片中表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、丹皮酚6种成分。
上述各检测方法中，并未涉及到制剂中金银花与山银花的鉴别。由于山银花与金银花均含有绿原酸，且山银花较金银花价格低很多，因此有必要对制剂中的金银花与山银花进行鉴别，而上述检测方法均未能显著区分这两种药材。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种检测癃清片制剂中山银花的高效液相检测方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种癃清片中山银花的检测方法，步骤如下：
(1)对照品溶液的制备：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加浓度为10％～100％有机溶剂制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.1～0.5mg的溶液，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10％～100％有机溶剂25～50ml，称定重量，超声或者回流处理20～60分钟，放冷，再称定重量，用10％～100％有机溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)高效液相色谱法测定：Diamonsil色谱柱；流动相∶乙腈与0.3～0.5％醋酸；流速：0.5ml/min～1.0ml/min；柱温20℃～40℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。
所述步骤(1)中有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
所述步骤(2)中有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
优选的，所述步骤(1)和步骤(2)中的有机溶剂为甲醇。
所述步骤(3)Diamonsil色谱柱为C18反相色谱柱，规格：5μm，250×4.6mm。
所述步骤(3)中乙腈与0.4％醋酸的体积比为10～90∶90～10。
优选的，所述步骤(3)中乙腈与0.4％醋酸的体积比为40∶60。
本发明优选的一种癃清片中山银花的检测方法，步骤为：
(1)对照品溶液的制备：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.2mg的溶液，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与0.4％醋酸的体积比为40∶60；流速：1.0ml/min；柱温30℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取上述溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。
本发明所述癃清片是一种现有的市售药品，处方为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏。
癃清片的制法为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏；以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛，备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏。与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。每片0.6g。
本发明的优点是：方便、快速、专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于癃清片中金银花与山银花的检测。
下面结合附图和具体实施例方式详细说明，并非对本发明的限制。凡依照本发明公开内容所做的本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。
附图说明
图1为灰毡毛忍冬皂苷乙对照品的高效液相色谱图
图2为金银花对照药材的高效液相色谱图
图3为山银花对照药材的高效液相色谱图
图4为癃清片的高效液相色谱图
图5为对照癃清片的高效液相色谱图
具体实施方式
实施例1：癃清片中山银花的检测
一、材料
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品111814-201303购自中国食品药品检定研究院
山银花药材121595-201202购自中国食品药品检定研究院
金银花药材121060-201107购自中国食品药品检定研究院
对照癃清片：按《中华人民共和国药典》2015年版一部公开癃清片的处方和制法，用山银花替换金银花，制法相同。
二、方法
(1)对照品溶液的制备：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.2mg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(3)对照药材溶液制备：分别取金银花和山银花对照药材1.0g，精密加入甲醇20ml，按供试品溶液制备方法制备即得。(本步骤用于进行方法学验证)
(4)对照癃清片溶液制备：取对照癃清片样品20片，按供试品溶液制备方法制备即得。(本步骤用于进行方法学验证)
(5)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与0.4％醋酸的体积比为40∶60；流速：1.0ml/min；柱温30℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取上述溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。
三、结果
图1为灰毡毛忍冬皂苷乙对照品的高效液相色谱图
图2为金银花对照药材的高效液相色谱图
图3为山银花对照药材的高效液相色谱图
图4为癃清片的高效液相色谱图
图5为自制含山银花癃清片(对照癃清片)的高效液相色谱图
由图可见，图1中保留时间约20分钟的色谱峰为灰毡毛忍冬皂苷乙，该峰在金银花中(图2)不存在，而存在于山银花中(图3)。而癃清片中(图4)不存在该色谱峰，对照癃清片中(图5)存在该色谱峰。故使用该方法即可对癃清片中是否含有山银花进行检测。
实施例2：癃清片中山银花的检测
一、材料
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品111814-201303购自中国食品药品检定研究院
山银花药材121595-201202购自中国食品药品检定研究院
金银花药材121060-201107购自中国食品药品检定研究院
对照癃清片：按《中华人民共和国药典》2015年版一部公开癃清片的处方和制法，用山银花替换金银花，制法相同。
二、方法
(1)对照品溶液的制备；取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.1mg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备；取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，回流处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与醋酸水的体积比为50∶50；流速：1.0ml/min；柱温30℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。
实施例3：癃清片中山银花的检测
一、材料
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品111814-201303购自中国食品药品检定研究院
山银花药材121595-201202购自中国食品药品检定研究院
金银花药材121060-201107购自中国食品药品检定研究院
对照癃清片：按《中华人民共和国药典》2015年版一部公开癃清片的处方和制法，用山银花替换金银花，制法相同。
二、方法
(1)对照品溶液的制备；取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加浓度10％的乙腈制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.5mg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备；取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10％乙腈50ml，称定重量，回流处理20分钟，放冷，再称定重量，用10％乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；另取对照药材约0.1g，精密加入10％乙腈10ml，同法制得对照药材溶液。
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与醋酸水的体积比为90∶10；流速：1.0ml/min；柱温20℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。
实施例4：癃清片中山银花的检测
一、材料
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品111814-201303购自中国食品药品检定研究院
山银花药材121595-201202购自中国食品药品检定研究院
金银花药材121060-201107购自中国食品药品检定研究院
对照癃清片：按《中华人民共和国药典》2015年版一部公开癃清片的处方和制法，用山银花替换金银花，制法相同。
二、方法
(1)对照品溶液的制备；取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.2mg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备；取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇50ml，称定重量，回流处理60分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。另取对照药材约1.0g，精密加入50％乙醇30ml，同法制得对照药材溶液。
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与醋酸水的体积比为10∶90；流速：0.5ml/min；柱温40℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。

Claims (10)

1.一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于步骤如下：
(1)对照品溶液的制备：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加浓度为10％～100％有机溶剂制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.1～0.5mg的溶液，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10％～100％有机溶剂25～50ml，称定重量，超声或者回流处理20～60分钟，放冷，再称定重量，用10％～100％有机溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)高效液相色谱法测定：Diamonsil色谱柱；流动相∶乙腈与0.3～0.5％醋酸；流速：0.5ml/min～1.0ml/min；柱温20℃～40℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。
2.根据权利要求1所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
3.根据权利要求1所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
4.根据权利要求2或3所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇。
5.根据权利要求1所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)Diamonsil色谱柱为C18反相色谱柱，规格：5μm，250×4.6mm。
6.根据权利要求1所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中乙腈与0.4％醋酸的体积比为10～90∶90～10。
7.根据权利要求6所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中乙腈与0.4％醋酸的体积比为40∶60。
8.根据权利要求1所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于所述步骤为：
(1)对照品溶液的制备：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.2mg的溶液，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)采用高效液相色谱仪进行测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与0.4％醋酸的体积比为40∶60；流速：1.0ml/min；柱温30℃；采用蒸发光散射检测器，分别精密取上述溶液各20μl，注入所述高效液相色谱仪，测定。
9.根据权利要求1至8中任何一项所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于，所述癃清片的处方为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏。
10.根据权利要求9所述的一种癃清片中山银花的检测方法，其特征在于：所述癃清片的制法为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏；以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛，备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。
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