CN105004833A - 一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，该中药制剂由金钱草1～30份、威灵仙1～20份、石楠藤1～20份、追风伞1～20份、北刘寄奴1～20份、泽泻1～20份和车前草1～10份以上7味中药材制成药剂学任一种剂型。具有清热散结、利尿通淋、化瘀止痛的功效，用于寒湿闭阻经络所致的痹病，症见四肢关节疼痛，腰膝冷痛，屈伸不利；急性痛风性关节炎及痛风发作间期见上述证候者。本发明提供的检测方法为薄层鉴别制剂中金钱草、威灵仙、泽泻；含量测定金钱草中的山奈素。该质量检测方法能有效的控制产品的真伪及质量的优劣，保证了患者用药的安全性、有效性。

Description

一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂(商品名为痛风舒缓胶囊)的检测方法。

背景技术

痛风，由于鸟嘌呤代谢紊乱和尿酸***减少，使尿酸含量持续升高而引起尿酸盐沉积在关节部位，在外界刺激性发生炎症反应，损害组织而产生的临床综合症。其临床症状主要是关节部位红、热、肿、痛，金元年代中医对“痛风”就有了认识，强调痛风疾病的病因是风寒湿邪气外袭，而对痛风现代中医基于前人的认识，有很多的不同的解释原因，综合上述原因，笔者认为痛风患者多有机体先天不足，脾肾乏虚，后天不良的饮食，食肥甘厚，以致湿热内积，易受风邪外袭，内外交加，湿热风邪，滞留于关节，易血脉不通，最后发展为痛风病。痛风最初的临床症状是急性痛风性关节炎，其表现是夜间突然发作的急性单个关节或多关节疼痛。成积在关节部位的尿酸钠结晶是急性痛风性关节炎的病原。由于一些原因，如鸟嘌呤代谢紊乱和尿酸***减少等，使血中尿酸的含量偏高，在一些关节及关节周围组织中，由于该部位血管少，易缺氧，易增加乳酸的生成而降低了关节部位的pH，而且关节部位的基质中含较多的***及黏多糖酸，因此尿酸盐较容易在关节部位沉积。尿酸钠盐结晶成积在关节部位后，在外界条件影响下，如寒冷、饮酒等，刺激肥大细胞脱颗粒和巨噬细胞激活增多，释放细胞因子和趋化因子，激活中性粒细胞释放超氧化酶，释放更多的粘附分子，也释放大量的细胞因子和趋化因子，等等引起非特异性的炎症反应而损害关节部位。血尿酸值突然的升高或降低，都会引起炎症反应。因为血尿酸值迅速的升高使尿酸结晶沉积在关节部位；而快速的降低，使沉积在关节部位尿酸盐溶解。

中医领域对痛风治疗有独特的一面，我公司2010年06月22日公开了公开号CN101926896A的专利，提供了一种治疗痛风的中药制剂及其制备方法，该中药制剂由金钱草30份、威灵仙15份、石楠藤10份、追风伞15份、北刘寄奴15份、泽泻12份和车前草10份制成药剂学上任一种剂型，有明显的抗炎作用和镇痛作用，对急性痛风性关节炎及痛风发作间期的各种病症有良好的治疗效果，且不易复发，无明显毒副作用和不良反应。

本发明现对该中药制剂提供一种检测方法，该检测方法稳定可靠，能有效确保产品质量。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，本发明检测方法简单方便且稳定可靠，可以有效地检测金钱草、威灵仙、泽泻等多种有效物质，有效确保产品质量。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，所述检测方法包括鉴别和/或含量的测定项目；其中鉴别是对金钱草、威灵仙和/或泽泻的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中金钱草的含量。

上述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，金钱草的鉴别方法具体为：取3～4g生药粉的该中药制剂，加80％甲醇30～50ml，加热回流0.5～1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水8～10ml使溶解，用***振药提取2～4次，每次10～30ml，弃去***液，水液加稀盐酸8～10ml，置水浴中加热0.5～1小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2～4次，每次20～30ml，合并乙酸乙酯，用水30～50ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材0.5～1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液3～4μl、对照品溶液3～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝10～8：8～6：1～0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，威灵仙的鉴别方法具体为：取2～3g生药粉的该药中药制剂，加乙醇30～50ml，加热回流1～2小时，滤过，滤液浓缩至15～20ml，加盐酸3～6ml，加热回流0.5～1小时，加水8～10ml，放冷，加入60～90℃石油醚15～25ml振摇提取3～4次，每次20～25ml，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇7～10ml溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成1ml含0.45mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液7～8μl、对照品溶液2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝20～17：3～1.5：0.2～0.1为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和5～10分钟，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，泽泻的鉴别方法具体为：取8～10g生药粉的该药中药制剂，加乙醇40～50ml，搅匀，超声处理70～90分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水40～50ml使溶解，滤去不容物，滤液用60～90℃的石油醚振摇提取3～4次，每次40～50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加60～90℃的石油醚1ml使溶解，作为供试品溶液；另取泽泻对照药材1.5～2g，加水40～50ml，加热回流30分钟，放冷，用脱脂棉滤过，滤液用石油醚振摇提取3～4次，每次30～50ml(必要时离心)，合并石油醚提取液，蒸干，残渣加60～90℃的石油醚0.5～1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各9～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃的石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯＝2～1：1～0.5：2～1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的斑点。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，金钱草含量测定方法是以山奈素对照品为对照，以甲醇-0.4％磷酸溶液＝50：50为流动相为流动相的高效液相色谱法。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，金钱草的含量测定方法具体为：

金钱草中山奈素的含量测定：

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液＝50：50为流动相；检测波长为360nm；板数按山奈素计算不低于2500；

对照品溶液的制备；取山奈素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含山奈素20μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备；取相当于1.5g生药粉的该药中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，该中药制剂按重量份由金钱草1～30份、威灵仙1～20份、石楠藤1～20份、追风伞1～20份、北刘寄奴1～20份、泽泻1～20份和车前草1～10份为原料药制成的。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，该中药制剂按重量份由金钱草30份、威灵仙15份、石楠藤10份、追风伞15份、北刘寄奴15份、泽泻12份和车前草10份制成。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，取金钱草用75％乙醇回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩至适量，得药渣和醇溶液，将药渣与威灵仙、石楠藤、追风伞、北刘寄奴、泽泻和车前草，加水煎煮三次，滤过，滤液与醇溶液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，与辅料混合，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

前述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法中，所述的中药制剂可制备成任何一种常规制剂，包括片剂、丸剂、胶囊剂、冲剂、口服液、喷雾剂、注射剂、混悬液、微球制剂

为了确保本发明检测方法科学、合理、可行，对本发明的检测方法进行了研究和考察。

一、金钱草的含量测定方法学考察：

金钱草为痛风舒缓胶囊(本发明制剂)中的君药，山奈素是其主要有效成分，故选择以山奈素作为本制剂内在质量的指标成分，采用酸水解进行前处理样品，采用高效液相色谱法进行样品测定，经试验，结果表明，该方法操作简单，成本低，检验时间短，同时具有分离效果好、灵敏、准确等优点。

1、仪器、试剂和样品

Agilent Technologies 1200series高效液相色谱仪，KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，甲醇(分析纯20130411，上海申博化工有限公司)，HCl(分析纯20140328，上海申博化工有限公司)，乙腈(色谱纯20140721，上海申博化工有限公司)，磷酸(分析纯20140421，上海申博化工有限公司)，山奈素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号为112542-201405)，其他均为分析纯。痛风舒缓胶囊(20140304、20140201、20140202、20140401、20140402、20140403、20140404、20140405、20140501、20140502、20140503，本发明制剂，由贵州百灵制药股份有限公司提供)。

2、色谱条件与***适应性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50：50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按山奈素计算不低于2500。

3、对照品溶液的制备

取山奈素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含山奈素20μg的溶液，即得。

4、供试品溶液的制备

取本品内容物约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5、阴性对照溶液的制备

按处方比例及制备工艺，配制不含金钱草药材的阴性样品，按“5项”同法制备阴性样品溶液。

6、方法学验证

6.1、***适应性试验

按照上述色谱条件及样品处理方法，进行***适应性试验，山奈素峰与其他成分达到基线分离，且峰形良好；阴性样品试验结果表明其它成分对山奈素的测定无干扰。结果见图1、图2、图3。

6.2、线性与范围的考察

取4项下的对照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL分别进样，按上述色谱条件记录色谱图，测定峰面积，以峰面积的对数值为纵坐标，山奈素对照品进样量的对数值为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y＝1.1465X+4.5823(Y为峰面积，X为浓度)，r＝0.9999。结果表明，山奈素在5.5850～27.9250μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

6.3、精密度试验

取4项下的对照品溶液，按3项色谱条件进行实验，进样量均为20μl，连续进样5次，测得其峰面积积分值，RSD为0.72％，表明仪器精密度良好。

6.4、重复性试验

取同一个批号的痛风舒缓胶囊(批号：20140304)，平行取样6份，按3项下方法操作并检测。山奈素平均质量分数为5.37mg/g，RSD为0.10％，表明方法重复性较好。

6.5、稳定性试验

取同一批号的供试品溶液(批号：20140304)，按3项色谱条件进行试验，于0、4、8、12、16、20、24h各进样一次，进样量均为20μL，按峰面积积分值计算，山奈素的RSD值为0.14％，表明供试品溶液中山奈素在24h内具有良好的稳定性。

6.6、加样回收率试验

称取已知山奈素含量的样品(质量分数为5.28mg/g)9份，分成3组(每组3份)，置锥形瓶中，每组分别精密加入2.5204mg/mL的山奈素对照品溶液4、5、6mL，精密称定，按5项下自“精密加入80％甲醇50mL”起，同法操作，并按3项下色谱条件进样，进样量均为20μl，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1山奈素加样回收率试验结果(n＝9)

由表1结果分析，加样回收率均值为99.90％，RSD为1.57％，表明该方法的准确度高。

6.7、耐用性试验

选取实验中对不同流动相比例、柱温和流速3个因素，按照“4”和“5”项下处理方法，分别对上述因素进行考察。

6.7.1、不同流动相比例的考察

色谱柱：Venusil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；体积流量0.8mL/min；进样量10μl。按照“4”和“5”项下对对照品溶液和同一批(20140304)供试品溶液分别进样，按表2不同流动相组成比例进行测定，结果见表2。

表2不同流动相组成比例考察

由表2结果表明，流动相为甲醇-0.4％磷酸＝60～50:40～50上下浮动，RSD值为0.38％，说明依然准确测定样品中山奈素的含量。

6.7.2、不同柱温的考察

色谱柱：Venusil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；甲醇-0.4％磷酸溶液(50：50)为流动相；体积流量0.8mL/min；进样量10μl。按照“4”和“5”项下对对照品溶液和同一批(20140304)供试品溶液分别进样，按表3不同柱温进行测定，结果见表3。

表3不同柱温考察

由表3结果表明，柱温在25℃～30℃上下浮动，RSD值为0.11％，说明柱温的短小变化，依然准确测定样品中山奈素的含量。

6.7.3、不同流速的考察

色谱柱：Venusil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；甲醇-0.4％磷酸溶液(50：50)为流动相；进样量10μl。按照“4”和“5”项下对对照品溶液和同一批(20140304)供试品溶液分别进样，按表4不同柱温进行测定，结果见表4。

表4不同流速考察

由表4结果表明，流速在1.0～0.4ml/min范围内，RSD值为0.11％；在1.5ml/min波动较大。故选取流速在1.0～0.4ml/min范围，较合适，能准确测定样品中山奈素的含量。

6.8、11批样品含量测定结果

取11批样品，按5项下方法处理样品，作为供试品溶液。用0.45μm微孔滤膜过滤，各取续滤液10μL，注入高效液相色谱仪，按3项色谱条件测定，用外标两点法对数方程计算样品中山奈素的含量，结果见表5。

表5 11批痛风舒缓胶囊山奈素含量测定结果(n＝3)

由表5结果分析，选取最低结果含山奈素5.19mg·g^－1下浮30％，可将含量限度定为：前列泰胶囊含金钱草以山奈素计，每1g不得少于3.5mg。

二、金钱草的鉴别：

金钱草为报春花科植物金钱草Lysimachia christinae Hance的干燥全草，收载于2010年版中国药典(一部)。金钱草作为痛风舒缓处方的君药，本实验将选取金钱草对照药材作为对照，先采用萃取法除杂，后用双相酸水解的方法提取痛风舒缓胶囊中金钱草的特征性成分，对金钱草药材进行薄层鉴别，并考察不同展开介质、不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对该制剂中金钱草药材薄层色谱的影响。试验结果表明：以金钱草对照药材为对照品，甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶1)为展开***，对金钱草药材薄层鉴别特征明显，专属性强，可作为痛风舒缓胶囊中金钱草药材的薄层鉴别方法，故列入本发明检测项目。

2.1仪器、试剂和样品

KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DGG-9246A电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)，十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，甲醇(分析纯20130411，上海申博化工有限公司)。乙酸乙酯(分析纯20140528，上海申博化工有限公司)，浓盐酸(分析纯20130721，上海申博化工有限公司)，金钱草对照药材(中国药品生物制品检定所，供鉴别用，编号为111532-201402)，痛风舒缓胶囊(20140304、20140201、20140202，本发明制剂，由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供)。

2.2供试品溶液制备

取本品内容物3g，加80％甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用***振药提取2次，每次10ml，弃去***液，水液加稀盐酸10ml，置水浴中加热1小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯，用水30ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解。

2.3对照品溶液的制备

取金钱草对照药材0.5g，按“2.2项”同法处理。

2.4阴性样品的制备

按处方比例及制备工艺，配制不含金钱草药材的阴性样品，按“2.2项”同法制备阴性样品溶液。

2.5展开***

甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：8：1)。

2.6显色剂

5％三氯化铝乙醇溶液。

2.7薄层色谱条件的考察

2.7.1薄层板的选择

分别吸取供试品溶液3μl和对照品溶液4μl，以薄层硅胶G板和聚酰胺薄膜2种不同类型材料薄层板，进行展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于365nm紫外灯下检视。见图4、图5。

由图4、图5可见，聚酰胺薄膜板并未将供试品分离；硅胶G板分离效果良好，斑点圆整，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。故选取硅胶G板展开。

2.7.2最佳点样量考察

分别吸取供试品溶液和对照品溶液1、2、3、4、5μl，分别点于不同薄层硅胶G板上，进行考察，展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于365nm紫外灯下检视。见图6、图7。

由图6、图7可见，供试品3μl点样量效果最佳，当点样量大于3μl时，供试品主斑点出现拖尾现象；对照品最佳点样量4～6μl皆可，故选择点样量为4μl。

结合上述2种因素考察实验结果，可确定薄层板为硅胶G板，供试品和最佳点样量为3μl，对照品最佳点样量为4μl。经预实验验证，确定金钱草的薄层鉴别方法，并按照《中国药典》2010版一部附录ⅩⅧA中药质量标准分析方法验证指导原则进行方法学验证。

2.8方法学验证

2.8.1专属性考察

用三个批次的痛风舒缓胶囊样品，照上述方法进行专属性实验，结果见图8。

由图8可见，阴性样品无干扰，主斑点Rf值约为0.42；在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。表明该方法专属性强，斑点显色清晰。

2.8.2耐用性试验

用三个批次的痛风舒缓胶囊样品，分别对3个不同厂家薄层板进行对比，3种不同温度及湿度作为变动因素，照上述鉴别方法进行实验。

2.8.2.1不同厂家薄层板试验，结果见图9-图11。

3个不同厂家耐用性实验结果表明，痛风舒缓胶囊中金钱草的薄层鉴别图主斑点分离效果均表现好，斑点圆整，不同厂家薄层板对主斑点影响不大，重复性较好。

2.8.2.2不同温度及湿度试验

不同温度及湿度设定参数见表1。试验图谱见图12-图14。

表1不同温度及相对湿度的考察

通过不同温度及相对湿度的考察实验图谱可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，分离效果好，Rf值适中，阴性对照无干扰。由此可知，温度及相对湿度在通常环境范围内变动，不影响该鉴别方法的有效性。

三、威灵仙的鉴别

威灵仙为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck、棉团铁线莲Clematishexa petalaPall.或东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根和根茎。收载于2010年版中国药典(一部)。威灵仙作为痛风舒缓处方的臣药，齐墩果酸为其主要的有效活性成分，因此，本实验将选取齐墩果酸作为指标性成分参照中国药典2010年版一部“威灵仙”下的TLC方法进行试验，以齐墩果酸对照品作为对照进行薄层鉴别，并考察不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度及不同湿度对痛风舒缓胶囊中威灵仙药材薄层色谱的影响。试验结果表明以齐墩果酸对照品作为对照，甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20:3:0.2)为展开***，对威灵仙药材薄层鉴别特征明显，专属性强。故可作为痛风舒缓胶囊中威灵仙药材的薄层鉴别方法，故列入本发明检测项目。

3.1仪器、试剂和样品

KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DGG-9246A电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)，十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，乙醇(分析纯20130411，上海申博化工有限公司)，石油醚(分析纯20140318，上海申博化工有限公司)，甲苯(分析纯20140721，上海申博化工有限公司)，齐墩果酸对照(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号为112542-201405)，痛风舒缓胶囊(20140304、20140201、20140202，本发明制剂，由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供)。

3.2供试品溶液制备

取本品内容物2g，加乙醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液浓缩至20ml，加盐酸3ml，加热回流1小时，加水10ml，放冷，加石油醚(60～90℃)25ml振摇提取4次，每次25ml，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解。

3.3对照品溶液的制备

取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成1ml含0.45mg的溶液。

3.4阴性样品的制备

按处方比例及制备工艺，配制不含威灵仙药材的阴性样品，按“3.2项”同法制备阴性样品溶液。

3.5展开***

甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20：3：0.2)。

3.6显色剂

10％硫酸乙醇溶液。

3.7最佳点样量考察

分别吸取供试品溶液1、2、3、5、7、10、11μl，对照品溶液1、2、3、4、5、6、7μl，分别点于不同薄层硅胶G板上，进行考察，展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于365nm紫外灯下检视。见图15、图16。

由图15、图16可见，供试品最佳点样量7μl，对照药材最佳点样量为3μl。

3.8方法学验证

3.8.1专属性考察

用三个批次的痛风舒缓胶囊样品，照上述方法进行专属性实验，结果见图17。

由图17可见，阴性样品无干扰；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。表明该方法专属性强，斑点显色清晰。

3.8.2耐用性试验

用三个批次的痛风舒缓胶囊样品，分别对3个不同厂家薄层板进行对比，3种不同温度及湿度作为变动因素，照上述鉴别方法进行实验。

3.8.2.1不同厂家薄层板试验，结果见图18-图20。

3个不同厂家耐用性实验结果表明，痛风舒缓胶囊中威灵仙的薄层鉴别图斑点分离效果均表现好，斑点圆整，不同厂家薄层板对威灵仙主斑点影响不大，重复性较好。

3.8.2.2不同温度及湿度试验

不同温度及湿度设定参数见表1。试验图谱见图21-图23。

表1不同温度及相对湿度的考察

通过不同温度及相对湿度的考察实验图谱可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，分离效果好，Rf值适中，阴性对照无干扰。由此可知，温度及相对湿度在通常环境范围内变动，不影响该鉴别方法的有效性。

四、泽泻的鉴别

泽泻为唇形科植物毛叶地瓜儿苗Lycopus lucidus Turcz.Var.hirtus Regel的干燥地上部分，收载于2010年版中国药典(一部)。泽泻作为痛风舒缓处方的使药，本实验将选取泽泻对照药材作为对照，先采用乙醇充分超声提取特征性成分，后用萃取的方法提取痛风舒缓胶囊中泽泻的特征性成分，对泽泻药材进行薄层鉴别，并考察不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对该制剂中泽泻药材薄层色谱的影响。试验结果表明：以泽泻对照药材为对照品，石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2：1：2)为展开***，对泽泻药材薄层鉴别特征明显，专属性强，可作为痛风舒缓胶囊中泽泻药材的薄层鉴别方法，故列入本发明检测项目。

4.1仪器、试剂和样品

KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DGG-9246A电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)，十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，石油醚(分析纯20130411，上海申博化工有限公司)。乙醇(分析纯20140528，上海申博化工有限公司)，三氯甲烷(分析纯20130721，上海申博化工有限公司)，泽泻对照药材(中国药品生物制品检定所，供鉴别用，编号为111532-201403)，痛风舒缓胶囊(20140304、20140201、20140202，本发明制剂，由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供)。

4.2供试品溶液制备

取本品内容物10g，加乙醇50ml，搅匀，超声处理90分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，滤去不容物，滤液用石油醚(60～90℃)振摇提取4次，每次50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解。

4.3对照品溶液的制备

取泽泻对照药材2g，加水50ml，加热回流30分钟，放冷，用脱脂棉滤过，滤液用石油醚(60～90℃)振摇提取4次，每次50ml(必要时离心)，合并石油醚提取液，蒸干，残渣加石油醚1ml使溶解。

4.4阴性样品的制备

按处方比例及制备工艺，配制不含泽泻药材的阴性样品，按“4.2项”同法制备阴性样品溶液。

4.5展开***

石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2：1：2)。

4.6显色剂

5％磷钼酸乙醇溶液。

4.7薄层色谱条件的考察

4.7.1最佳点样量考察

分别吸取供试品溶液4、6、8、9、12、14μl，对照品溶液2、4、6、8、10、14μl分别点于不同薄层硅胶G板上，进行考察，展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于365nm紫外灯下检视。见图24、图25。

由图24、图25可见，供试品9～12μl点样量效果最佳，当点样量小于9μl时，供试品主斑点不清晰；对照品最佳点样量9～12μl皆可。

结合上述考察实验结果，可确定薄层板为硅胶G板，供试品和对照品最佳点样量为9～12μl。经预实验验证，确定泽泻的薄层鉴别方法，并按照《中国药典》2010版一部附录ⅩⅧA中药质量标准分析方法验证指导原则进行方法学验证。

4.8方法学验证

4.8.1专属性考察

用三个批次的痛风舒缓胶囊样品，照上述方法进行专属性实验，结果见图26。

由图26可见，阴性样品无干扰，主斑点Rf值约为0.48；在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。表明该方法专属性强，斑点显色清晰。

4.8.2耐用性试验

用三个批次的痛风舒缓胶囊样品，分别对3个不同厂家薄层板进行对比，3种不同温度及湿度作为变动因素，照上述鉴别方法进行实验。

4.8.2.1不同厂家薄层板试验，结果见图27-图29。

3个不同厂家耐用性实验结果表明，痛风舒缓胶囊中金钱草的薄层鉴别图主斑点分离效果均表现好，斑点圆整，不同厂家薄层板对主斑点影响不大，重复性较好。

2.8.2.2不同温度及湿度试验

不同温度及湿度设定参数见表1。试验图谱见图30-图32。

表1不同温度及相对湿度的考察

通过不同温度及相对湿度的考察实验图谱可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，分离效果好，Rf值适中，阴性对照无干扰。由此可知，温度及相对湿度在通常环境范围内变动，不影响该鉴别方法的有效性。

本发明的有益之处在于：本发明提供的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法增加了金钱草、威灵仙、泽泻的鉴别项目和金钱草的含量测定项目。其中金钱草的含量测定方法具有操作简单，成本低，检验时间短，同时具有分离效果好、灵敏、准确等优点；金钱草、威灵仙、泽泻的鉴别方法具有准确度高、精密度高、回收率高、稳定性高、专属性强、重复性较好、无干扰等优点。本发明能够有效的检测产品是否合格、质量是否优劣，保证了药效的一致性和质量的稳定性，进一步确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。

附图说明

图1是HPLC测定山奈素的***适应性图；

图2是山奈素对照品的HPLC图；

图3是缺金钱草阴性对照样品的HPL图；

图4是用聚酰胺薄膜薄层板的金钱草薄层鉴别效果图；

图5是用硅胶G薄层板的金钱草薄层鉴别效果图；

图6是金钱草鉴别供试品点样量从左至右分别为1、2、3、4、5μl的薄层展开效果图；

图7是金钱草对照药材点样量从左至右分别为1、2、3、4、5μl的薄层展开效果图；

图8是金钱草薄层鉴别的专属性考察试验效果图；

图9是厂家1薄层板的金钱草薄层鉴别效果图；

图10是厂家2薄层板的金钱草薄层鉴别效果图；

图11是厂家3薄层板的金钱草薄层鉴别效果图；

图12是温度20℃、湿度50％条件下的金钱草薄层鉴别效果图；

图13是温度25℃、湿度55％条件下的金钱草薄层鉴别效果图；

图14是温度35℃、湿度70％条件下的金钱草薄层鉴别效果图；

上述图4-5及图8-14中，1、2、3分别为3个批次的痛风舒缓胶囊样品，S为金钱草对照药材，S1为缺金钱草阴性样品。

图15是威灵仙鉴别供试品点样量从左至右分别为1、2、3、5、7、10、11μl的薄层展开效果图；

图16是齐墩果酸对照品点样量从左至右分别为1、2、3、4、5、6、7μl的薄层展开效果图；

图17是威灵仙薄层鉴别的专属性考察试验效果图；

图18是厂家1薄层板的威灵仙薄层鉴别效果图；

图19是厂家2薄层板的威灵仙薄层鉴别效果图；

图20是厂家3薄层板的威灵仙薄层鉴别效果图；

图21是温度20℃、湿度50％条件下的威灵仙薄层鉴别效果图；

图22是温度25℃、湿度55％条件下的威灵仙薄层鉴别效果图；

图23是温度35℃、湿度70％条件下的威灵仙薄层鉴别效果图；

上述图15-23中，1、2、3分别为3个批次的痛风舒缓胶囊样品，S为齐墩果酸对照品，S1为缺威灵仙阴性样品。

图24是泽泻鉴别供试品点样量从左至右分别为4、6、8、9、12、14μl的薄层展开效果图；

图25是泽泻对照药材点样量从左至右分别为2、4、6、8、10、14μl的薄层展开效果图；

图26是泽泻薄层鉴别的专属性考察试验效果图；

图27是厂家1薄层板的泽泻薄层鉴别效果图；

图28是厂家2薄层板的泽泻薄层鉴别效果图；

图29是厂家3薄层板的泽泻薄层鉴别效果图；

图30是温度20℃、湿度50％条件下的泽泻薄层鉴别效果图；

图31是温度25℃、湿度55％条件下的泽泻薄层鉴别效果图；

图32是温度35℃、湿度70％条件下的泽泻薄层鉴别效果图；

上述图24-32中，1、2、3分别为3个批次的痛风舒缓胶囊样品，S为泽泻对照药材，S1为缺泽泻阴性样品。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。

本发明所述一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，不限于以下实施例。

实施例1

处方：

金钱草300g     威灵仙150g       石楠藤100g

追风伞150g     北刘寄奴150g     泽泻120g

车前草100g

制备方法：

以上七位，金钱草用75％乙醇回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩至适量。药渣与威灵仙等其余6味，加水煎煮三次，每次，滤过，滤液与上述醇溶液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，与适量辅料混合，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

该中药制剂的检测方法如下：

(1)取本品内容物3g，加80％甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用***振药提取2次，每次10ml，弃去***液，水液加稀盐酸10ml，置水浴中加热1小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯，用水30ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取金钱草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液3μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：8：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本品内容物2g，加乙醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液浓缩至20ml，加盐酸3ml，加热回流1小时，加水10ml，放冷，加石油醚(60～90℃)25ml振摇提取4次，每次25ml，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成1ml含0.45mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液7μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20：3：0.2)为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例2

处方：

金钱草300g     威灵仙150g       石楠藤100g

追风伞150g     北刘寄奴150g     泽泻120g

车前草100g

制备方法：

以上七位，金钱草用75％乙醇回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩至适量。药渣与威灵仙等其余6味，加水煎煮三次，每次，滤过，滤液与上述醇溶液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，与适量辅料混合，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

该中药制剂的检测方法如下

(1)取本品内容物2g，加乙醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液浓缩至20ml，加盐酸3ml，加热回流1小时，加水10ml，放冷，加石油醚(60～90℃)25ml振摇提取4次，每次25ml，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇10ml溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成1ml含0.45mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液7μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20：3：0.2)为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取本品内容物10g，加乙醇50ml，搅匀，超声处理90分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，滤去不容物，滤液用石油醚(60～90℃)振摇提取4次，每次50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材2g，加水50ml，加热回流30分钟，放冷，用脱脂棉滤过，滤液用石油醚振摇提取4次，每次50ml(必要时离心)，合并石油醚提取液，蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各9～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2：1：2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的斑点。

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50：50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按山奈素计算不低于2500。

对照品溶液的制备取山奈素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含山奈素20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品内容物约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例3

处方：

金钱草300g     威灵仙150g       石楠藤100g

追风伞150g     北刘寄奴150g     泽泻120g

车前草100g

制备方法：

以上七位，金钱草用75％乙醇回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩至适量。药渣与威灵仙等其余6味，加水煎煮三次，每次，滤过，滤液与上述醇溶液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，与适量辅料混合，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

该中药制剂的检测方法如下

(1)取本品内容物3g，加80％甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用***振药提取2次，每次10ml，弃去***液，水液加稀盐酸10ml，置水浴中加热1小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯，用水30ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取金钱草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液3μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：8：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50：50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按山奈素计算不低于2500。

对照品溶液的制备取山奈素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含山奈素20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品内容物约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例4

处方：

金钱草300g     威灵仙150g       石楠藤100g

追风伞150g     北刘寄奴150g     泽泻120g

车前草100g

制备方法：

以上七位，金钱草用75％乙醇回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩至适量。药渣与威灵仙等其余6味，加水煎煮三次，每次，滤过，滤液与上述醇溶液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，与适量辅料混合，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。或用常规方法制得片剂、丸剂、冲剂、口服液、喷雾剂、注射剂、混悬液、微球制剂等其它制剂。

该中药制剂的检测方法如下

(1)取本品内容物10g，加乙醇50ml，搅匀，超声处理90分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，滤去不容物，滤液用石油醚(60～90℃)振摇提取4次，每次50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材2g，加水50ml，加热回流30分钟，放冷，用脱脂棉滤过，滤液用石油醚振摇提取4次，每次50ml(必要时离心)，合并石油醚提取液，蒸干，残渣加石油醚(60～90℃)1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各9～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2：1：2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的斑点。

【含量测定】照高效液相色谱法(附录ⅥD)测定。

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50：50)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按山奈素计算不低于2500。

对照品溶液的制备取山奈素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含山奈素20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品内容物约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

Claims (10)

1.一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括鉴别和/或含量的测定项目；其中鉴别是对金钱草、威灵仙、泽泻的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中金钱草的含量。

2.根据权利要求1所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：金钱草的鉴别方法具体为：取3～4g生药粉的该中药制剂，加80％甲醇30～50ml，加热回流0.5～1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水8～10ml使溶解，用***振药提取2～4次，每次10～30ml，弃去***液，水液加稀盐酸8～10ml，置水浴中加热0.5～1小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2～4次，每次20～30ml，合并乙酸乙酯，用水30～50ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材0.5～1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液3～4μl、对照品溶液3～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝10～8：8～6：1～0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3.根据权利要求1所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：威灵仙的鉴别方法具体为：取2～3g生药粉的该药中药制剂，加乙醇30～50ml，加热回流1～2小时，滤过，滤液浓缩至15～20ml，加盐酸3～6ml，加热回流0.5～1小时，加水8～10ml，放冷，加入60～90℃石油醚15～25ml振摇提取3～4次，每次20～25ml，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇7～10ml溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成1ml含0.45mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液7～8μl、对照品溶液2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝20～17：3～1.5：0.2～0.1为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和5～10分钟，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4.根据权利要求1所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：泽泻的鉴别方法具体为：取8～10g生药粉的该药中药制剂，加乙醇40～50ml，搅匀，超声处理70～90分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水40～50ml使溶解，滤去不容物，滤液用60～90℃的石油醚振摇提取3～4次，每次40～50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加60～90℃的石油醚1ml使溶解，作为供试品溶液；另取泽泻对照药材1.5～2g，加水40～50ml，加热回流30分钟，放冷，用脱脂棉滤过，滤液用石油醚振摇提取3～4次，每次30～50ml，合并石油醚提取液，蒸干，残渣加60～90℃的石油醚0.5～1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各9～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃的石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯＝2～1：1～0.5：2～1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应位置上，显相同颜色的斑点。

5.根据权利要求1所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：金钱草含量测定方法是以山奈素对照品为对照，以甲醇-0.4％磷酸溶液＝50：50为流动相为流动相的高效液相色谱法。

6.根据权利要求1至5任一项所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：金钱草的含量测定方法具体为：

金钱草中山奈素的含量测定：

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液＝50：50为流动相；检测波长为360nm；板数按山奈素计算不低于2500；

对照品溶液的制备；取山奈素对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含山奈素20μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备；取相当于1.5g生药粉的该药中药制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液25ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

7.根据权利要求1至6任一项所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：该中药制剂按重量份由金钱草1～30份、威灵仙1～20份、石楠藤1～20份、追风伞1～20份、北刘寄奴1～20份、泽泻1～20份和车前草1～10份为原料药制成的。

8.根据权利要求7所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：该中药制剂按重量份由金钱草30份、威灵仙15份、石楠藤10份、追风伞15份、北刘寄奴15份、泽泻12份和车前草10份为原料药制成的。

9.根据权利要求7或8所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：取金钱草用75％乙醇回流提取，滤过，回收乙醇并浓缩至适量，得药渣和醇溶液，将药渣与威灵仙、石楠藤、追风伞、北刘寄奴、泽泻和车前草，加水煎煮三次，滤过，滤液与醇溶液合并，减压浓缩成稠膏，干燥，粉碎，过筛，与辅料混合，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

10.根据权利要求7或8所述的治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法，其特征在于：所述的中药制剂可制备成任何一种常规制剂，包括片剂、丸剂、胶囊剂、冲剂、口服液、喷雾剂、注射剂、混悬液、微球制剂。