CN102327309B - 一种小檗皮提取物及该提取物和小檗皮的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种小檗皮提取物。本发明还公开了小檗皮及该提取物的新用途。小檗皮及其提取物，能够激动PPAR δ、PPAR α、Lxr α，可以改善机体糖脂代谢，增加胰岛素敏感性，具有明显的降血糖、降血脂作用；同时，还可以部分拮抗PPAR γ，克服了单纯的PPAR γ激动剂所具有的不良反应，并且能阻止脂肪形成，可以避免现有胰岛素增敏剂(PPAR γ激动剂)产生的体重增加、胆固醇水平升高等副作用，为临床治疗代谢性疾病提供了一种新的选择。

Description

一种小檗皮提取物及该提取物和小檗皮的用途

技术领域

本发明涉及一种小檗皮提取物及该提取物和小檗皮的用途，属药物领域。

背景技术

随着生活水平及现代化程度的提高，生活节奏的加快，膳食结构与生活习惯的改变，糖尿病、高血脂、高血压、代谢综合征等一系列慢性疾病的发病率也逐渐增加。研究发现，胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)，不仅是II型糖尿病的发病基础，更是贯穿高血脂、代谢综合征等多种代谢相关疾病的主线，是连结它们的纽带，为这些疾病的共同病理生理基础。

目前，对代谢疾病的研究发现，过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARs)与胰岛素抵抗有着密切关系。PPARS包括α、δ、γ三个亚型。报道较多的为PPAR α和PPAR γ。其中，PPAR α主要在肝脏中表达，能够增强脂肪酸的β氧化，能降低血脂、改善胰岛素敏感性，在动物模型及人群中均可改善胰岛素敏感性[李全民，等.中国药学杂志.2005，40(14)：1070-1072]；PPAR γ主要在脂肪组织中表达，其功能是促进脂肪酸在脂肪组织的沉积和脂肪细胞的分化，目前已知PPAR γ与胰岛素抵抗密切相关[方朝晖，等.丹蛭降糖胶囊对胰岛素抵抗大鼠大网膜脂肪细胞PPAR-γmRNA表达的影响.]。常用的PPARγ激动剂，是吡格列酮和罗格列酮，为胰岛素增敏剂，但这两种药物会引起体重增加、浮肿、LDL胆固醇水平升高等副作用。这是因为PPAR γ在人体内涉及调节脂质合成、糖类代谢，以及脂肪细胞的分化，它的活化会促进脂肪细胞的分化和脂肪吸收的储存。而PPAR α主要在肝脏表达，它可以促进脂质的分解，目前市售的贝特类降脂药就是PPAR α激动剂。研究表明，若同时激动PPAR γ和PPAR α，则能够同时调节糖尿病患者血糖和脂质。

近年来，除PPAR γ和PPAR α以外，PPAR δ也逐渐受到人们的重视，研究发现PPAR δ在脂质及糖类代谢、炎症反应、细胞存活、创伤愈合等多方面都有重要作用。Chih-Hao Lee等[Chih-Hao Lee，et al.PPAR δ regulatesglucose metabolism and insulin sensitivity.Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America.2006，103(9)：3444～3449]报道，高糖高脂饮食诱导胰岛素抵抗的对比研究结果表明：PPAR δ基因敲除小鼠显示代谢低下和葡萄糖耐受降低；PPAR δ激活剂受体活化2型糖尿病模型小鼠(db/db)显示肝脏葡萄糖输出抑制，葡萄糖消耗增加，脂肪细胞游离脂肪酸释放抑制；通过不同组织的互补作用，PPAR δ调节新陈代谢平衡，改善机体糖脂代谢，增加胰岛素敏感性。因此，研制开发PPAR δ激动剂也已成为预防和治疗仪脂代谢紊乱和胰岛素抵抗为主要特征的代谢性疾病的新方向。

在对PPARs的不断认识过程中，人们考虑到PPARs各亚型对人体均有不同的作用，已经开始着手研发PPARs多重激动剂。如史克必成公司研发的含苯并恶唑结构的烷氧基苯丙酸类化合物，就是很好的α/γ双重激动剂；PPAR葛兰素-史克公司的GW2433，为PPAR α/δ双重激动剂；礼来研究实验室于2006年报道了PPAR γ/δ双重激动剂，具有良好的胰岛素增敏性，而体重增加等副作用轻于罗格列酮；甚至，默克公司还得到了一种PPAR完全激动剂，能够同时激活PPAR α、PPAR δ、PPAR γ的表达。目前，有研究表明，肝X细胞受体α(LXR α)激活也可能产生类似PPAR γ激活剂的作用[李婧.肝X受体在脂肪生成和脂肪细胞形成中的作用.国际生殖健康/计划生育杂志.2010，29(2)：92-95]。

综上，适度激活PPAR α、PPAR δ、PPAR γ、LXR α的表达，具有胰岛素增敏剂的作用机制，能够改善胰岛素抵抗。

目前，国内对该领域也有较多研究，发现了某些中药也具有PPARs激动剂的作用。如专利申请号：201010174927.9，发明名称：醋炙黄连炮制品的新用途，该申请公开了醋炙黄连在制备胰岛素增敏剂及PPAR γ激动剂的药物中的用途。黄连中主要含有小檗碱(6.68％)、药根碱(0.36％)、巴马汀(1.61％)、黄连碱(1.96％)、非洲防己碱(0.44％)、表小檗碱(0.97％)等6种生物碱。

藏药小檗皮，藏药名译音：杰唯哇兴、给尔驯、杰星、吉尔巴，为小檗科植物甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.及同属多种植物的干燥皮，主要包括甘肃小檗、直穗小檗、鲜黄小檗、小檗、西北小檗、川滇小檗、无粉刺红珠、无脉小檗、刺红珠、砂生小檗、大黄檗、粉叶小檗等12种(《藏药部颁标准》1995年版)，为藏医临床治疗常用药物，本品性凉、糙，味酸，敛诸毒、干黄水，功能清热解毒、燥湿，用于***、肾炎等疾病的防治(西藏等六省区卫生局.藏药标准.西宁：青海人民出版社.1979：11、***药典委员会.药品标准·藏药第一册.1995：340)(帝玛尔·丹增彭措.晶珠本草.上海：上海科学技术出版社.1986：76)，可使尿频和小便浑浊之症状得到改善。小檗皮中含有小檗碱、药根碱、巴马汀、小檗胺等生物碱类成分，干燥皮(根皮、茎皮)中的平均百分含量依次为1.274±0.973、0.421±0.464、0.097±0.104、0.840±0.772(郑晓峰，王勤.兰州大学学报(医学版).2009，35(1)：71-75)。

目前，尚未见将小檗皮或其提取物用于制备PPARs、LXR α激动剂的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种小檗皮提取物，以及该提取物和小檗皮的新用途；本发明的另一目的是提供一种激动PPARs和/或LXR α的药物组合物。

本发明提供了一种小檗皮提取物，它来源于小檗科植物甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.及同属多种植物的干燥皮，该提取物中，含有小檗胺5.2～11.0％W/W、药根碱2.6～5.5％W/W、巴马汀0.7～1.4％W/W、小檗碱7.9～16.5％W/W。其中，同属植物为直穗小檗、鲜黄小檗、小檗、西北小檗、川滇小檗、无粉刺红珠、无脉小檗、刺红珠、砂生小檗、大黄檗、粉叶小檗。(参见《藏药部颁标准》1995年版)

进一步地，该提取物中，各成分的重量比例为：

小檗胺∶药根碱∶巴马汀∶小檗碱＝(7.4～9.8)∶(3.7～5.2)∶1.0∶(11.3～16.3)。

其中，所述的小檗皮提取物为小檗皮的水或有机溶剂提取物。

其中，所述的有机溶剂提取物为60-95％V/V的乙醇提取物，优选70-90％V/V乙醇提取物，更优选为70％V/V乙醇提取物。

本发明还提供了小檗皮或上述小檗皮提取物在制备PPARs或/和LXR α激动剂中的用途。

其中，所述激动剂为PPAR α激动剂、PPAR δ激动剂、或PPAR α/PPAR δ双重激动剂。

进一步地，所述激动剂为改善胰岛素抵抗的药物。

其中，所述激动剂为治疗糖尿病、糖尿病高脂血症、糖尿病高胆固醇血症、糖尿病肾病、肥胖症的药物。

其中，所述小檗皮提取物来源于小檗科植物甘肃小檗Berberiskansuensis Schneid.及同属多种植物的干燥皮，该提取物中，含有小檗胺3.6～11.0％W/W、药根碱1.3～5.5％W/W、巴马汀0.35～1.4％W/W、小檗碱3.95～16.5％W/W。

进一步地，该提取物中，各成分的重量比例为：

小檗胺∶药根碱∶巴马汀∶小檗碱＝(7.4～9.8)∶(3.7～5.2)∶1.0∶(11.3～16.3)。

其中，所述的小檗皮提取物为小檗皮的水或有机溶剂提取物。

其中，所述的有机溶剂提取物为60-95％V/V的乙醇提取物。

本发明还提供了一种激动PPARs或/和LXR α的药物组合物，它是由有效量的小檗皮或上述的提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

其中，所述的制剂是口服制剂。

小檗皮及其提取物，能够激动PPAR δ、PPAR α、Lxr α，可以改善机体糖脂代谢，增加胰岛素敏感性，具有明显的降血糖、降血脂作用；同时，还可以部分拮抗PPAR γ，克服了单纯的PPAR γ激动剂所具有的不良反应，并且能阻止脂肪形成，可以避免现有胰岛素增敏剂(PPAR γ激动剂)产生的体重增加、胆固醇水平升高等副作用，为临床治疗代谢性疾病提供了一种新的选择。

附图说明

图1本发明小檗皮提取物的HPLC检测图谱，其中，1.盐酸小檗胺；2.盐酸药根碱；3.盐酸巴马汀；4.盐酸小檗碱；

图2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型PPARs、LXR α表达图。

具体实施方式

实施例1本发明小檗皮提取物的制备

取药材粉小檗皮(甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.的干燥皮)碎成粗粉，浸渍24小时，加70％乙醇9倍量，以2ml/min.kg的速度渗漉，收集渗漉液，浓缩，干燥即得。

实施例2本发明小檗皮提取物的制备

取药材粉小檗皮(甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.的干燥皮)碎成粗粉，加70％乙醇12倍量，回流提取2次，合并滤液，浓缩，干燥即得。

实施例3本发明小檗皮提取物的制备

取小檗皮(甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.的干燥皮)，去其杂质，切段，加水约高出药面6～10cm，加热，在沸腾状态，保持1～2小时，倾出煮液，残渣再照上法煎煮，残渣弃出，残渣再煎煮1次，煎煮液合并，静置12小时，使杂质沉淀，倾出上清液，底部浑浊液过滤，合并上清液及滤液，浓缩，即得。若测定该提取物的成分含量，也可对其进行干燥。

实施例4本发明药物组合物的制备

取小檗皮(甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.的干燥皮)，去杂质后，粉碎，过筛，装胶囊即得。

实施例5本发明小檗皮提取物中生物碱含量的测定

1、色谱条件

色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱XtimateTM C₁₈(4.6×250mm，5μm)。以0.1％三乙胺(碳酸氢铵，氨水调PH为10)为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，0～15min(10％～25％)B，15～25min(25％～30％)B，25～40min(30％～45％)B。检测波长为270nm；流速为1ml/min；柱温为30℃；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于6000，供试品色谱峰中其他杂质色谱峰与待测物质色谱峰的分离度应符合要求。本发明检测方法也可以参考文献：张艺，等.RP-HPLC测定不同产地黄连中6种生物碱的含量.中国中药杂志.2010，35(19)：2576-2580。

2、对照品溶液的制备

精密称取盐酸药根碱、非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量，以盐酸-甲醇(1∶100)分别制成1.06mg/ml、1.04mg/ml、0.256mg/ml、0.456mg/ml、0.48mg/ml、0.552mg/ml的溶液，做为对照品储备液。

分别吸取盐酸药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和盐酸小檗碱对照品储备液适量，以盐酸甲醇(1∶100)制成16.96μg/ml、24.96μg/ml、40.96μg/ml、72.96μg/ml、57.6μg/ml、264.96μg/ml的混合溶液，作为混合对照品储备液。

3、供试品溶液的制备

取待测样品约0.5g，精密称定，置150ml锥形瓶中，精密加入盐酸甲醇(1∶100)50ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，盐酸甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，过0.45μm微孔滤膜，作为供试品溶液。

4、测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果参见图1，表1-3。

表1各成分在药材中的含量

本发明中，采用70％乙醇提取(渗漉、回流，实施例1、2)，收膏率为10％；水煎煮提取(实施例3)，收膏率为20％，利用上述收膏率换算各个成分在药材中的含量。

表2小檗皮提取物中各成分的含量

由表2可知，小檗皮提取物中各成分的含量为：小檗胺3.6～11.0％W/W、药根碱1.3～5.5％W/W、巴马汀0.35～1.4％W/W、小檗碱3.95～16.5％W/W。

表3小檗皮提取物中各成分的含量比例

样品	小檗胺含量比例	药根碱含量比例	巴马汀含量比例	小檗碱含量比例
					实施例1	9.8	5.2	1.0	16.3
实施例2	7.8	3.9	1.0	11.8
					实施例3	7.4	3.7	1.0	11.3

表3中，四者的比例以含量最低的巴马汀为1.0进行换算，得出比例如下：

小檗胺∶药根碱∶巴马汀∶小檗碱＝(7.4～9.8)∶(3.7～5.2)∶1.0∶(11.3～16.3)。

对藏药小檗皮提取物的成分分析表明，其中主要含有异喹啉类生物碱成分(图1中，小檗碱-峰4、巴马汀-峰3、药根碱-峰2)、双苄基异喹啉类生物碱成分(图1中，小檗胺-峰1)。小檗皮中不含黄连碱、非洲防己碱、表小檗碱。

实施例6本发明小檗皮中生物碱成分的提取方法及提取参数考察

根据均匀设计试验和水煎提取工艺特点，考察加水量、提取时间、提取次数等三个因素，选择混合水平的均匀设计表U6(6×3²)。称取小檗皮，加水至规定量，水煎提取规定时间，提取规定次数，提取液浓缩至适当体积。

总生物碱含量测定方法：取提取液10ml，加乙醇至80％，离心10min(3000r/min)，沉淀用乙醇洗涤3次(40ml/次)，合并上清液，上清液浓缩，分次洗涤后移至100ml的量瓶中，用乙醇稀释至刻度。照柱色谱法(附录VIC)试验，精密量取2ml，加于已处理好的氧化铝柱(玻璃柱，内径约9mm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用乙醇约30ml预洗)上，用乙醇25ml分次洗脱，置50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置50ml量瓶中，用硫酸溶液(0.05mol.L-1)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法以硫酸溶液(0.05mol.L-1)为空白，在345nm波长处测定吸收度，按小檗碱(C₂₀H₁₈ClNO₄)的吸收系数(E1％1cm)为728计算其含量。

表4水煎提取工艺的均匀设计试验表和结果

采用DPS统计软件对总生物碱含量结果进行偏最小二乘回归分析，得到回归方程：Y＝0.97+0.12*x1-0.0074*x2+0.26*x3，最高指标时的因素水平组合：提取时间为3小时、溶剂用量为6倍、提取次数为3次。从确定了小檗皮水煎提取工艺的优化参数为：取净药材，加水煎煮3次，每次3小时，每次加水量为6倍量，滤过，合并提取液，浓缩成膏。

实施例7本发明小檗皮中生物碱成分的提取方法及提取参数考察

小檗皮中含有的生物碱成分醇溶性相对较差，故乙醇用量应略大。所以对影响提取的主要因素乙醇浓度、乙醇用量以及渗漉速度进行考察。采用L₉(3⁴)正交实验表。以指标性成分(小檗碱)含量以及出膏率为评价指标(小檗碱含量、出膏率的权重系数分别是0.5、0.4、0.1)综合评分。筛选最佳提取条件。

表5小檗皮渗漉方法的正交试验因素表

称取小檗皮粗粉(甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.的干燥皮)，按照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，浸渍24小时后，按正交表的安排进行渗漉，收集渗漉液，分别定容至500ml(每1ml药液含小檗皮药材0.04g)作为样品溶液。

(1)指标检测

①出膏率

精密吸取样品液100ml，水浴蒸干，残渣置烘箱105℃干燥3小时，取出，置干燥器中冷却30分钟，称定重量计算。

②小檗碱含量测定

盐酸小檗碱均为供含量测定用对照品，由中国药品生物制品检定所提供(批号0713-9906)。用归一法检查纯度，盐酸小檗碱含量98.14％

色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(55∶45)(含0.05mol/L十二烷基硫酸钠及0.037mol/L酒石酸)为流动相；柱温：40℃；灵敏度：0.04AUFS；流速：1ml/min；检测波长：346nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于2500。

对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.09lmg的溶液，作为对照品溶液。采用外标两点法计算。色谱条件与***适用性试验

供试品溶液的制备精密吸取样品液1ml至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，振摇均匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

测定法分别精密吸取上述供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)试验，测定。

表6小檗皮渗漉方法的正交试验表

综合评分＝出膏率值/最大出膏率值*50+小檗碱含量值/最大小檗碱含量值*50

表7小檗皮渗漉方法的正交试验的方差分析表

注：*P＜0.05

方差分析结果表明，因素B对提取工艺有显著影响。各因素的影响顺序为B＞A＞C，结合直观分析，提取工艺的最佳提取条件为：A1B1C2.即用70％乙醇9倍，以2ml/min.kg的速度渗漉。

综上所述，小檗皮提取的最佳条件为：药材粉碎成粗粉，浸渍24小时，加70％乙醇9倍量，以2ml/min.kg的速度渗漉。

(2)验证试验

根据正交分析结果所确定的提取条件，平行做三份样品，以判断该工艺是否稳定，具有重现性。

表8小檗皮渗漉方法验证试验结果

验证试验可知，验证结果与正交试验最佳结果相近。表明该渗漉工艺是稳定的、可重现的、可行的。最终确定小檗皮的渗漉条件为：药材粉碎成粗粉，浸渍24小时，加9倍量80％乙醇，渗漉速度为2ml/min·kg。

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1小檗皮对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型PPAR α、PPAR δ、PPAR γ、LXR α表达的影响

3T3-L1前脂肪细胞是具有脂肪母细胞形态的细胞，具有分化为成熟脂肪细胞的能力，是目前国际上研究肥胖及体外脂肪细胞增殖和分化的细胞模型。通过干预小鼠前脂肪细胞，观察对PPARs的影响，为肥胖、2型糖尿病的治疗提供基础。

实验方法：

将3T3-L1前脂肪细胞(市售)复苏，离心，洗涤，调整细胞浓度，移至含10％小牛血清的DMEM高糖培养基细胞培养瓶中，在37℃、5％CO₂饱和湿度条件下培养，2d换液1次。待细胞长到60～70％融合率时，进行细胞传代。首先吸除培养瓶中的旧培养液，瓶内加入少量0.25％胰酶消化液，轻轻晃动，在显微镜下观察发现细胞质稍有回缩，细胞间歇增大、变圆后立即加入含10％小牛血清的DMEM高糖培养基终止消化，吸除废液，再加入新培养液，弯头吸管吹打，制成细胞悬液，调整吸浓度为1×106/ml的密度接种到新的培养瓶中，添加培养液，封盖，放入37℃、5％CO₂饱和湿度的培养箱中培养，2d换液1次。

将上述3T3-L1前脂肪细胞悬液按5×10⁵/ml的密度接种到48孔培养板，于含10％小牛血清的DMEM高糖培养基中，在37℃、5％CO₂饱和湿度条件下培养，2d换液1次。待3T3-L1前脂肪细胞贴壁后，按表9设计剂量分别加入不同浓度的受试药物干预，空白对照组培养液中加入等体积药物溶剂PBS，每浓度组均设3个复孔。在37℃、体积分数5％CO₂中培养2d。

按设计剂量分别加入不同浓度的受试药物干预，Western b1ot检测PPARα、PPAR δ、PPAR γ、LXR α表达量，结果见图1及下表。

 小檗皮高浓度(实施例3制备)组为3.718mg原生药/L、低浓度组为0.744mg原生药/L，黄连高浓度组为3.718mg原生药/L、低浓度组为0.744mg原生药/L，小檗碱组为5mg/L，阳性药(罗格列酮)组为20μmol/L。

表9小檗皮对3T3-L1脂肪细胞模型蛋白表达的影响(内参校正后)

上述实验中，相对空白组，小檗皮可以极显著增加LXR α表达量(高剂量组达到11.04倍、低剂量组达到3.56倍)，可以显著增加PPAR δ表达量(高剂量组达到1.33倍、低剂量组达到2.47倍)，可以极显著增加PPAR α表达量(高剂量组达到13.14倍、低剂量组达到5.92倍)，轻度增加对PPARγ表达量(低剂量组达到1.03倍)，以上结果说明小檗皮提取物对Lxr α、PPAR δ、PPAR α表现为明确的激动作用，而对PPAR γ表现为轻度的激活(在高剂量还表现为抑制)；小檗皮提取物选择性针对Lxr α、PPAR δ、PPAR α表现为明确的激动作用，对糖尿病的脂质代谢有明显的改善作用，在整体动物实验中也发现小檗皮高剂量组能明显降低小鼠血清TC的含量(P＜0.05)，显示出具有一定改善脂代谢的作用，而高胆固醇是儿童后期发展为肥胖症的一项标记，因此小檗皮提取物有助于改善肥胖及脂代谢异常，且作用优于黄连。

试验例2小檗皮对小鼠血脂水平的影响

取ICR小鼠，雌雄各半，体质量18～22g。实验时按体质量分层随机分为2组，除20只为空白对照组外，其余小鼠均为模型筛选组，用于小鼠高血糖动物模型的筛选。

试验前小鼠禁食18h。次日除空白对照组外，其余小鼠均尾静脉注射(iv)四氧嘧啶溶液60mg/kg造成小鼠高血糖模型(空白对照组注射等容量的生理盐水)，注射后4h灌胃50％葡萄糖溶液，0.4ml/只。造模72h后，小鼠尾尖取血，One Touch UltraEasy型血糖仪测定小鼠空腹血糖(FBG)，选用血糖合格小鼠纳入正式试验，空腹血糖的模型成功标准为≥11.0mmol/L。

选用上述成模小鼠和空白对照组小鼠，按血糖及体质量分层随机分为8组，每组20只(其中10只用于小鼠糖异生实验)，即空白对照组、模型对照组、盐酸二甲双胍对照组、盐酸小檗碱对照组、小檗皮高、中、低剂量组(实施例3制备)和黄连生品对照组。各组小鼠按设计剂量灌胃给药，每日1次，连续14d。

第14d末次给药后1h(禁食不禁水8h)，小鼠眼眶取血，3000r/min离心10min，分离血清，按试剂盒测定说明书分别测定小鼠血清胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量。结果见表10。

表10对小鼠血脂水平TC、TG的影响

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；

由上表结果可知，与空白对照组相比较，模型对照组小鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量明显升高，表明四氧嘧啶糖尿病小鼠模型存在糖脂代谢的紊乱。与模型对照组相比较，小檗皮高剂量组能明显降低小鼠血清TC的含量(P＜0.05)，显示出具有一定改善脂代谢的作用，而高胆固醇是儿童后期发展为肥胖症的一项标记，因此小檗皮提取物有助于改善肥胖及脂代谢异常，且作用优于黄连。

试验例3小檗皮对四氧嘧啶致糖尿病模型小鼠的影响

(1)试验方法

取ICR小鼠，雌雄各半，体质量18～22g。按体质量分层随机分组，每组10只，即正常对照组、模型对照组、二甲双胍对照组、小檗皮组(实施例3制备)。试验前小鼠禁食18h(建议前1日下午3点禁食，第2日早晨9点造模)。第2日早晨小鼠尾静脉注射的四氧嘧啶溶液60mg/kg造模，注射后4h模型小鼠灌胃50％葡萄糖，0.4ml/只。造模次日，除空白组和模型组外，其余各组按表剂量灌胃给药(每只小鼠定量0.3ml)，每日1次，连续9天。

(2)观察指标

表11小檗皮对四氧嘧啶小鼠糖尿病模型糖化血清蛋白(GSP)、血糖(Glu)的影响

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

与空白组比较，模型组小鼠尾静脉注射四氧嘧啶72h后，均出现多食、多饮、多尿等症状，符合四氧嘧啶小鼠糖尿病模型的症状表现。

模型组小鼠糖化血清蛋白含量和空腹血糖含量明显升高，表明小鼠糖尿病模型造模成功(P＜0.01)。与模型组比较，小檗碱组能明显降低小鼠血清糖化血清蛋白和空腹血糖含量(P＜0.01)，表明小檗碱组能通过减弱四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤或改善受损伤的β细胞的功能来发挥降血糖作用。

试验例4对水负荷小鼠尿量的影响

动物：昆明种小鼠，一级，雄性，体重21±3g，由成都中医药大学实验动物中心提供；动物合格证号：川实动管第7号。

药物：小檗皮提取物(实施例1制备)，样品均用0.5％CMC配制成实验所需高、低2个浓度；阳性对照药：氢***片，天津市力生制药厂生产，批准文号：津卫药准字(1981)第001181号，批号：0101002。以蒸馏水配制成2.5％浓度，所有灌胃体积为0.2ml/10g。

方法与结果：选取健康雄性小鼠，按体重随机分组，空白对照组灌胃给予0.5％CMC作为空白对照组；给药组分别灌胃给予各样品高、低浓度的混悬液，即6.67g/kg、3.33g/kg(生药/体重)，作为给药组；阳性对照组灌胃给予氢***0.5g/kg作为阳性对照组。每天给药一次，连续3天，末次给药1h后ig蒸馏水1ml/只，作为水负荷，并轻压小鼠下腹以排尽余尿。随即将小鼠放入垫有滤纸的烧杯中，每小时换纸一次，称量滤纸，并记录下滤纸增重作为尿量的值，连续4h。

表12小檗皮提取物对水负荷小鼠尿量的影响(X±SD)

注：与空白组比较*P＜0.05 **P＜0.01

实验结果统计显示，与空白组比较，样品组有显著性差异(p＜0.01～0.05)。

结论：小檗皮提取物可以显著性增加小鼠水负荷小鼠尿量，而随着病程的延长糖尿病肾病可能出现尿量减少，进而肾功能不全、***，因此改善小鼠水负荷小鼠尿量有助于改善糖尿病肾病症状。

试验例5本发明药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

动物：昆明种小鼠，雄性，体重20±2g，由成都中医药大学实验动物中心提供；动物合格证号：川实动管第7号。

受试样品：小檗皮提取物(实施例1制备)，取小檗皮粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(《中国药典》2000年版一部附录I O)用10倍量75％乙醇，浸渍过夜，渗漉(2ml/min·kg)收集渗漉液，减压回收乙醇。样品均用0.5％CMC配制成实验所需高、低2个浓度；阳性对照药：***磷酸钠注射液，浙江省仙居制药有限公司生产，批号：010828，批准文号：浙卫药准字(1996)第118102号。以生理盐水配制成0.05％溶液。

方法与结果：选取健康小鼠，雌雄各半，按体重随机分组，空白对照组灌胃给予0.5％CMC溶液0.2ml/10g作为空白对照组；给药组分别灌胃给予各样品高、低浓度的混悬液0.2ml/10g，即6.67g/kg、3.33g/kg(生药/体重)，作为给药组；第十六组肌肉注射***磷酸钠0.1ml/10g作为对照组。每天给药一次，连续3天，末次给药30min后尾静脉注射1％伊文斯兰生理盐水溶液0.05ml/10g，随即腹腔注射(ip)0.6％醋酸0.1ml/10g。30min后将小鼠脱颈处死，剪开腹腔，用6ml生理盐水分数次冲洗腹腔，合并冲洗液，离心(3000r/min)，10min后取上清液，于610nm处测定吸光度。结果见表13。

表13小檗皮提取物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

注：与空白组比较*P＜0.05 **P＜0.01

实验结果统计显示，与空白组吸光度比较，样品高剂量组有极显著差异(p＜0.01)。

结论：小檗皮高剂量组可以显著性降低小鼠腹腔毛细血管通透性，而筛查早期糖尿病肾病要靠检测尿微量白蛋白，因此有助于改善糖尿病肾病蛋白尿症状。

小檗皮及其提取物，能够激动PPAR δ、PPAR α、Lxr α，可以改善机体糖脂代谢，增加胰岛素敏感性，具有明显的降血糖、降血脂作用；同时，还可以部分拮抗PPAR γ，克服了单纯的PPAR γ激动剂所具有的不良反应，并且能阻止脂肪形成，可以避免现有胰岛素增敏剂(PPAR γ激动剂)产生的体重增加、胆固醇水平升高等副作用，为临床治疗代谢性疾病提供了一种新的选择。

Claims (3)

1.小檗皮或小檗皮提取物作为唯一活性成分在制备PPARs或/和LXRα激动剂中的用途；其中，所述的小檗皮提取物为小檗皮的水或60-95%V/V乙醇的提取物；

所述小檗皮提取物来源于小檗科植物甘肃小檗Berberis kansuensis Schneid.及同属多种植物的干燥皮，该提取物中，含有小檗胺3.6~11.0%W/W、药根碱1.3~5.5%W/W、巴马汀0.35~1.4%W/W、小檗碱3.95~16.5%W/W；

各成分的重量比例为： 小檗胺：药根碱：巴马汀：小檗碱=（7.4~9.8）：（3.7~5.2）：1.0：（11.3~16.3）；

所述激动剂为治疗糖尿病、糖尿病高脂血症、糖尿病高胆固醇血症或糖尿病肾病的药物。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述激动剂为PPARα激动剂、PPARδ激动剂、或PPARα/PPARδ双重激动剂。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述激动剂是由有效量的权利要求1所述的提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

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