CN107334788A - 一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法,所述灵芝粉由以下重量百分比的组分组成:灵芝超微粉10%~25%、灵芝提取物粉25%~40%和灵芝破壁孢子粉40%~60%。以灵芝破壁孢子粉为主要组成成分,加上灵芝提取物粉,再配以灵芝超微粉,恰好成熟的灵芝子实体中灵芝三萜和灵芝多糖以及其他微量元素,补充了灵芝破壁孢子粉和灵芝提取物粉中成分的不足,以上三者通过一定的比例混合,使灵芝多糖和灵芝三萜达到一定量,协同发挥药效,从而增强其抗肝肿瘤活性。
Description
技术领域
本发明涉及中成药工艺技术领域,特别涉及一种抗肝肿瘤灵芝粉及其制备方法和应用。
背景技术
灵芝又称仙草,是担子菌纲(Basidiomycetes)多孔菌目(Polyporales)多孔菌科(Polyporaceae)灵芝属(Ganodermae)真菌,是传统珍贵药材,最早记载于《神农本草经》中,被列为上品。灵芝作为药用真菌已被《中国药典》(2015版)和《美国草药药典》收录。灵芝性温、味甘,有补中益气、滋外强壮、扶正固本之功效,主治虚劳、咳嗽、气喘、失眠、消化不良。现代药理和临床研究表明,灵芝在抗肝肿瘤,抗病毒,调节血糖,增强免疫力等方面均具有显著的作用。灵芝被誉为“生物活性化合物的细胞工厂”,国内外科学家已经从灵芝中分离得到400多种活性成分,其中三萜和多糖是灵芝的主要活性成分。
灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一,目前从灵芝中已分离到的灵芝多糖有200多种,其中大部分为β-葡聚糖,少数为α-葡聚糖,多糖链由三股单糖链构成。灵芝多糖在热水中溶解,大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖能够通过提高机体免疫力来抑制肿瘤细胞的扩散增殖,具有广谱抑制瘤作用,是临床***的良好辅助药物。
灵芝三萜是灵芝中另一类有效成分。目前,从灵芝中分离得到的三萜类化合物达170余种。与灵芝多糖不同的是,灵芝三萜能够抑制肿瘤细胞的***与增殖、促进肿瘤细胞死亡、抑制肿瘤细胞的侵袭和转移、调节免疫***,以及辅助常规治疗等方法发挥抗肝肿瘤作用。灵芝三萜类是灵芝菌丝体的代谢产物。因此,由灵芝菌丝体发酵生产制成的产品,由于没有经过子实体成熟过程,三萜类化合物含量很低。同时,未成熟子实体内三萜类化合物含量也不高。
此外,灵芝子实体含有镁、钙和锗等多种微量元素。灵芝对锗的富集能力较强,有机锗的含量是人参的4-6倍、枸杞的100倍,它能增强人体血液供氧量,能增强人体血液吸氧的能力达1.5倍以上,促进血液新陈代谢,消除体内自由基,防止细胞老化;可以从癌细胞中夺取电,使其电位下降,从而抑制癌细胞恶化和扩散。
灵芝多糖与三萜都具有抗肝肿瘤功效,但其作用机制不同。因此,通过灵芝多糖与灵芝三萜按比例结合,配合手术、放疗或者化疗,在进一步提升治疗效果的同时,有望实现“零毒化疗”。
目前,灵芝食用方式有:
(1)以灵芝子实体片炖汤、煎水或泡酒。灵芝子实体中灵芝三萜含量不高,且没有破壁分所的灵芝子实体,灵芝多糖利用率较低。
(2)以灵芝孢子粉或灵芝孢子油直接服用。灵芝孢子粉或灵芝孢子油是目前市面上的主流产品,该类产品大多宣称含有较高含量的灵芝三萜,而忽略了灵芝多糖,无法发挥灵芝多糖的免疫调节作用。
(3)以灵芝多糖提取物直接服用。
发明内容
鉴以此,本发明提出一种抗肝肿瘤灵芝粉,解决了有效成分含量低、抗肝肿瘤效果差的作用。
本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供的一种抗肝肿瘤灵芝粉,由以下重量百分比的组分组成:灵芝超微粉10%~25%、灵芝提取物粉25%~40%和灵芝破壁孢子粉40%~60%。
优选地,由以下重量百分比的组分组成:灵芝超微粉17.5%、灵芝提取物粉32.5%和灵芝破壁孢子粉50%。
本发明提供的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎后过筛,粉碎温度为-25℃~-5℃,粉碎时间10min~30min。
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮,过滤,在压力为0.1Mpa~0.5Mpa下进行减压浓缩,喷雾干燥至含水量为1%~5%,粉碎过筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过800~1000目筛。
(4)混匀:将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(5)制剂:将混合料制备成胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂、口服液。
优选地,所述步骤(1)中,粉碎后过600~800目筛。
优选地,所述步骤(2)中,粉碎后过70~100目筛。
优选地,所述步骤(2)中,过滤浓缩至相对密度为1.10~1.15。
优选地,所述步骤(3)中,干燥温度为40℃~60℃。
优选地,所述步骤(3)中,所述灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉的质量比为8~10:4~8:1~3。
本发明提供的一种抗肝肿瘤灵芝粉在制备抗肝肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
灵芝多糖与三萜都具有抗肿瘤功效,但其作用机制不同。灵芝多糖的抑瘤的作用途径主要有以下几方面:增强人体免疫功能,提高机体抗肿瘤作用;活化巨噬细胞;活化淋巴细胞;影响肿瘤细胞的信号转导;诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的诱导分化;影响肿瘤细胞的超微结构;抑制肿瘤细胞的核酸和蛋白质合成;影响癌基因;促进细胞因子分泌;活化补体等。灵芝三萜是一种有效的肿瘤细胞凋亡诱导剂,能够通过诱发肿瘤细胞凋亡而达到***的目的。因此,以灵芝破壁孢子粉为主要组成成分(含有较高含量的灵芝三萜)加上灵芝提取物粉(含有较高含量的灵芝多糖),再配以灵芝超微粉(恰好成熟的子实体中灵芝三萜和灵芝多糖以及其他微量元素,补充了灵芝孢子破壁粉和灵芝提取物粉中成分的不足),以上三者通过一定的比例混合,使灵芝多糖和灵芝三萜达到一定的比例范围,其中灵芝三萜主要诱导肿瘤细胞凋亡,灵芝多糖增加机体免疫作用,协同发挥抗肝肿瘤作用,从而增强其抗肝肿瘤活性。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容,下面提供具体实施例,对本发明做进一步的说明。
实施例1
一种抗肝肿瘤灵芝粉,由以下重量的组分组成:灵芝超微粉20g、灵芝提取物粉30g和灵芝破壁孢子粉50g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎,粉碎温度为-25℃,粉碎时间为10min,再过600目筛。
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮1h,过滤后在压力为0.1Mpa下进行减压浓缩,浓缩至相对密度为1.10,在温度为40℃下进行喷雾干燥,干燥至含水量为1%,再粉碎过70目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过800目筛。
(4)混匀:将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(5)制剂:将混合料制备成胶囊剂。
实施例2
一种抗肝肿瘤灵芝粉,由以下重量的组分组成:灵芝超微粉15g、灵芝提取物粉25g和灵芝破壁孢子粉60g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎,粉碎温度为-5℃,粉碎时间为30min,再过800目筛。
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮2h,过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩,浓缩至相对密度为1.15,在温度为60℃下进行喷雾干燥,干燥至含水量为5%,再粉碎过100目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过1000目筛。
(4)混匀:将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(5)制剂:将混合料制备成散剂。
实施例3
一种抗肝肿瘤灵芝粉,由以下重量的组分组成:灵芝超微粉15g、灵芝提取物粉40g和灵芝破壁孢子粉45g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎,粉碎温度为-20℃,粉碎时间为15min,再过700目筛。
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮1h,过滤后在压力为0.2Mpa下进行减压浓缩,浓缩至相对密度为1.2,在温度为45℃下进行喷雾干燥,干燥至含水量为2%,再粉碎过80目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过800目筛。
(4)混匀:将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(5)制剂:将混合料制备成颗粒剂。
实施例4
一种抗肝肿瘤灵芝粉,由以下重量的组分组成:灵芝超微粉20g、灵芝提取物粉25g和灵芝破壁孢子粉55g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎,粉碎温度为-10℃,粉碎时间为25min,再过700目筛。
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮2h,过滤后在压力为0.3Mpa下进行减压浓缩,浓缩至相对密度为1.13,在温度为55℃下进行喷雾干燥,干燥至含水量为4%,再粉碎过90目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过900目筛。
(4)混匀:将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(5)制剂:将混合料制备成片剂。
实施例5
一种抗肝肿瘤灵芝粉,由以下重量的组分组成:灵芝超微粉17.5g、灵芝提取物粉32.5g和灵芝破壁孢子粉50g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎,粉碎温度为-15℃,粉碎时间为20min,再过800目筛。
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮2h,过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩,浓缩至相对密度为1.15,在温度为50℃下进行喷雾干燥,干燥至含水量为3%,再粉碎过80目筛。
(3)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过900目筛。
(4)混匀:将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(5)制剂:将混合料制备成胶囊剂。
上述灵芝粉在制备抗肝肿瘤药物中的应用。所述制剂还可制备成其它的医药学上的剂型。
为了进一步验证本发明的有益效果,做了以下实验:
一、设置对照组
对照组1
该对照组与实施例5的区别在于:所述灵芝粉由以下重量的组分组成:灵芝提取物粉20g和灵芝破壁孢子粉80g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮2h,过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩,浓缩至相对密度为1.15,在温度为50℃下进行喷雾干燥,干燥至含水量为3%,再粉碎过80目筛。
(2)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过900目筛。
(4)混匀:将制备得的灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(5)制剂:将混合料制备成胶囊剂。
对照组2
该对照组与实施例5的区别在于:所述灵芝粉由以下重量的组分组成:灵芝超微粉30g和灵芝破壁孢子粉70g。
所述抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎,粉碎温度为-15℃,粉碎时间为20min,再过800目筛。
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮2h,过滤后在压力为0.5Mpa下进行减压浓缩,浓缩至相对密度为1.15,在温度为50℃下进行喷雾干燥,干燥至含水量为3%,再粉碎过80目筛。
(3)混匀:将制备得的灵芝超微粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料。
(4)制剂:将混合料制备成胶囊剂。
检测实施例1~5、对照组1、对照组2的有效成分:
组别 | 多糖含量(%) | 三萜含量(%) |
实施例1 | 13.65 | 3.62 |
实施例2 | 14.08 | 3.58 |
实施例3 | 13.92 | 3.65 |
实施例4 | 14.10 | 3.62 |
实施例5 | 14.17 | 3.68 |
对照组1 | 9.12 | 3.02 |
对照组2 | 10.32 | 2.86 |
其中实施例5制备的灵芝粉与孢子粉、提取物粉、超微粉的主要有效成分含量:
灵芝多糖的抑瘤的作用途径主要有以下几方面:增强人体免疫功能,提高机体抗肿瘤作用;活化巨噬细胞;活化淋巴细胞;影响肿瘤细胞的信号转导;诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的诱导分化;影响肿瘤细胞的超微结构;抑制肿瘤细胞的核酸和蛋白质合成;影响癌基因;促进细胞因子分泌;活化补体等。灵芝三萜是一种有效的肿瘤细胞凋亡诱导剂,能够通过诱发肿瘤细胞凋亡而达到***的目的。虽然本发明制备的超微粉中多糖和三萜的含量比例最高,但是三萜的含量是最少的,因此,发挥不出抑制肿瘤的良好效果;提取物粉的三萜含量虽然最高,相比于产品中的多糖含量却是低的,发挥不出增强免疫力抑制肿瘤的良好效果。产品中灵芝三萜主要诱导肿瘤细胞凋亡,而灵芝多糖增加机体免疫作用,通过灵芝多糖和灵芝三萜达到一定的比例范围,二者最优含量比例3.9:1,使得二者协同发挥最优抗肝肿瘤作用,从而增强其抗肝肿瘤活性。
二、活性测试:本实验检测了灵芝粉对小鼠肝癌细胞H22的细胞毒性。
1、实验方法:
(1)取对数生长的细胞,加入不含有FBS的培养液,培养6小时,调节细胞状态使处于同一水平。
(2)用0.25%的胰酶1ml消化2分钟,1000rmp下离心5分钟。
(3)去除上清,加10%FBS重悬,进行细胞计数。
(4)将H22稀释至5×105cell/ml,96板每孔加入100μl细胞悬液进行铺板。外圈加入PBS,防止边缘效应。并设置对照组(加细胞,含血清培养基,MTT,DMSO)和调零组(只加含血清的培养基,MTT和DMSO)。
(5)铺板后24小时,加药。药物以及提取物事先用DMSO溶解,并用10%FBS的1640稀释到一定浓度(根据不同种细胞的耐受程度决定)。
(6)加药后24小时,加5mg/ml的MTT 10μl,37℃5%CO2孵育4小时后490nm下测量OD值。
(7)数据整理,药物抑制率(%)=OD(对照)-OD(实验)/OD(对照)-OD(调零)。
2、实验结果
实施例1~5制备灵芝粉的水提取物(浓度0.8mg/mL)对肝癌细胞的抑制率见下表:
组别 | 抑制率(%) |
实施例1 | 18.49 |
实施例2 | 18.76 |
实施例3 | 18.63 |
实施例4 | 18.89 |
实施例5 | 19.33 |
由上表可知,本发明制备的灵芝粉对肝癌细胞具有一定的抑制效果,三种原料通过一定的配比,使得灵芝三萜和灵芝多糖的比例达到最优,并且具有很好的抑制肝肿瘤细胞的效果。采用上述活性测试方法检测上述对照组1、2的抑制效果,其中对照组1和2的抑制率分别为15.63%和14.14%。
三、本发明用于临床实验的数据
1、尤先生,64岁,肝癌患者,2005年检查结果显示体内肝肿瘤块达7公分大小,手术后仍有残留肿瘤块,服用本品,10年没有复发。
2、林先生,59岁,2016年8月检查发现肝肿瘤块达8公分,2016年年底再次检查肿瘤块已达15公分,之后开始服用本品,6个月后,肿瘤块没有继续扩散,且肿瘤块开始出现萎缩迹象。
3、尤先生,73岁,2016年年底体检时发现体内肝肿瘤块3.5公分,遂开始服用本品,6个月后没有发现肿瘤扩散。
综上所述,采用本发明所提供的以灵芝破壁孢子粉为主要组成成分(含有较高含量的灵芝三萜)加上灵芝提取物粉(含有较高含量的灵芝多糖),再配以灵芝超微粉(恰好成熟的子实体中灵芝三萜和灵芝多糖以及其他微量元素,补充了灵芝孢子破壁粉和灵芝提取物粉中成分的不足),以上三者通过一定的比例混合,使灵芝多糖和灵芝三萜达到一定的比例范围,协同发挥抗肿瘤作用,从而增强其抗肝肿瘤活性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种抗肝肿瘤灵芝粉,其特征在于,由以下重量百分比的组分组成:
灵芝超微粉10%~25%、灵芝提取物粉25%~40%和灵芝破壁孢子粉40%~60%。
2.根据权利要求1所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉,其特征在于,由以下重量百分比的组分组成:灵芝超微粉17.5%、灵芝提取物粉32.5%和灵芝破壁孢子粉50%。
3.根据权利要求1或2所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备灵芝超微粉:取成熟的灵芝子实体,破壁粉碎后过筛,粉碎温度为-25℃~-5℃,粉碎时间10min~30min;
(2)制备灵芝提取物粉:取灵芝加水煎煮,过滤,在压力为0.1Mpa~0.5Mpa下进行减压浓缩,喷雾干燥至含水量为1%~5%,粉碎过筛;
(3)制备灵芝破壁孢子粉:取灵芝孢子,干燥粉碎,过800~1000目筛;
(4)混匀:将制备得的灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉进行混合,得混合料;
(5)制剂:将混合料制备成胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂、口服液。
4.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,粉碎后过600~800目筛。
5.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,粉碎后过70~100目筛。
6.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,过滤浓缩至相对密度为1.10~1.15。
7.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,干燥温度为40℃~60℃。
8.根据权利要求3所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述灵芝超微粉、灵芝提取物粉和灵芝破壁孢子粉的质量比为8~10:4~8:1~3。
9.根据权利要求1或2所述的一种抗肝肿瘤灵芝粉在制备抗肝肿瘤药物中的应用。
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