CN107205988A - 利用组蛋白脱乙酰酶抑制剂治疗白血病 - Google Patents

利用组蛋白脱乙酰酶抑制剂治疗白血病 Download PDF

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Abstract

本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用有效量的上述组合或HDAC抑制剂，以及用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用有效量的上述组合或HDAC抑制剂。

Description

利用组蛋白脱乙酰酶抑制剂治疗白血病
相关申请的交叉引用
本申请涉及于2014年7月7日提交的美国临时申请号62/021,473，于2014年10月8日提交的美国临时申请号62/061,233和于2015年4月14日提交的美国临时申请号62/147,218。这些申请的全部内容通过引用并入本文。
背景
癌症的特征在于细胞的不受控增殖。血液的细胞组分来源于多能造血干细胞。通过其再生和分化能力，干细胞产生淋巴和骨髓前体，后者然后产生淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、红细胞和血小板。在白血病中，存在高水平的未成熟白细胞或母细胞(blasts)。四种主要类型的白血病被认为是：急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)；尽管较不常见的类型也是已知的。
白血病的平均5年死亡率为40％，2012年在全球超过35万人中出现。因此，对针对白血病治疗的治疗的仍然存在持续和迫切的需求。
概要
在一个方面，本文提供了用于治疗白血病的药物组合，包含治疗有效量的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂。在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC1/2特异性抑制剂。在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC1/2/6特异性抑制剂。
在一个实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式I的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC1/2特异性抑制剂是式III的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC1/2/6特异性抑制剂是式IV的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，所述组合还包含药学上可接受的载体。
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的药物组合，所述药物组合物包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂。在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC1/2特异性抑制剂。在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC1/2/6特异性抑制剂。
在另一个实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式I的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC1/2特异性抑制剂是式III的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC1/2/6特异性抑制剂是式IV的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式I化合物：
或其药学可接受的盐。
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式II化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式III化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了用于在治疗有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式IV化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，式IV的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2特异性抑制剂。
在另一方面，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2/6特异性抑制剂。
附图简述
图1A-D是示出了HDAC抑制剂和阿扎胞苷在AML细胞上的协同作用的一组四个图。每个图示出了作为Fa的函数绘制的CI值。图1A示出了阿扎胞苷和化合物A在HL-60细胞上的数据，图1B示出了阿扎胞苷和化合物C在HL-60细胞上的数据，图1C示出了阿扎胞苷和化合物E在HL-60细胞上的数据，以及图1D示出了阿扎胞苷和化合物F在HL-60细胞上的数据。
图2A-D是示出了AML中HDAC抑制增加细胞凋亡并抑制AML1/ETO的一组三个图和图片。图2A-C示出了72小时时Kasumi-1细胞周期的数据。图2A示出了化合物B的数据，图2B示出了化合物G的数据，以及图2C示出了化合物E的数据。图2D示出了凝胶照片和融合蛋白AML1/ETO或ACTB的表达。示出了化合物A和帕比司他(panobinostat)的数据。
图3A-D是示出了单一药剂对AML细胞系存活力的活性的一组四个图。6个AML细胞系：HL-60(大实心圆)、THP-1(直立实心三角形)、MV-4-11(小实心菱形)、Kasumi-1(空心正方形)、NB4(空心倒立三角形)和MOLM-13(空心菱形)暴露于浓度增加的化合物B(图3A)、化合物A(图3B)、化合物E(图3C)或阿扎胞苷(图3D)，以确定其对药物处理的反应。
图4A-F是示出了AML细胞系中单一药剂对分化和凋亡的活性的一组6个图。用指示浓度的化合物处理3个AML细胞系：HL-60(图4A和4D)、Kasumi-1(图4B和4E)和NB4(图4C和4F)。在图4A-C中，测定骨髓分化标志物CD11b的表面水平。在图4D-F中，通过在处理后96小时测量碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性，通过流式细胞术评估凋亡。然后确定存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的细胞的相对分数。
图5A-F是示出了HL-60细胞系中HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合的一组6个图。将细胞用作为单一药剂或与阿扎胞苷组合的DMSO、化合物B、化合物A或化合物E处理96小时。测定骨髓分化标志物CD11b的表面水平(图5A、5C、5E)。通过在处理后96小时测量碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性，通过流式细胞术评估凋亡(图5B、5D、5F)。然后确定存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的细胞的相对分数。
图6A-F是示出了Kasumi-1细胞系中HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合的一组6个图。将细胞用作为单一药剂或与阿扎胞苷组合的DMSO、化合物B、化合物A或化合物E在指示浓度处理。测定骨髓分化标志物CD11b的表面水平(图6A、6C、6E)。通过在处理后96小时测量碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性，通过流式细胞术评估凋亡(图6B、6D、6F)。然后确定存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的细胞的相对分数。
图7A-F是示出了NB4细胞系中HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合的一组6个图。将细胞用作为单一药剂或与阿扎胞苷组合的DMSO、化合物B、化合物A或化合物E在指示浓度处理。测定骨髓分化标志物CD11b的表面水平(图7A、7C、7E)。通过在处理后96小时测量碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性，通过流式细胞术评估凋亡(图7B、7D、7F)。然后确定存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的细胞的相对分数。
图8A-F示出了将AML细胞系暴露于增加剂量的化合物E(图8A)、化合物H(图8B)、化合物C(图8C)、化合物A(图8D)、化合物B(图8E)和化合物G(图8F)72小时以确认其对HDAC抑制的敏感性。在本研究中使用6个AML细胞系：HL-60(大实心圆)、NB4(直立实心三角形)、Kasumi-1(小实心菱形)、MV4-11(空心正方形)、THP-1(空心倒立三角形)和MOLM-13(空心菱形)。
图9A-C示出了用指示剂量的化合物处理MV4-11。图9A示出了在处理后72小时通过FACS测定的骨髓分化标志物CD11b的表面水平。化合物E、化合物H、化合物A和化合物G增加CD11b阳性细胞的百分比。化合物C没有效果。图9B示出了在处理后72小时掺入EdU并且用远红色(Far Red)染色后通过流式细胞术评估细胞周期。测定细胞在G0/G1期、G2/M期、S期和亚G1期的分布。图9C示出了通过在处理后96小时测量碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性，通过流式细胞术评估凋亡。然后确定存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的细胞的相对分数。
图10A-F示出了用指示剂量的化合物处理以下AML细胞系：Kasumi-1(图10A和10B)、HL-60(图10C和10D)和NB4(图10E和10F)。图10A、10C和10E示出了在处理后72小时通过FACS测定的骨髓分化标志物CD11b的表面水平。图10B、10D和10F示出了处理后96小时通过FACS评估凋亡(参见例如图9C)。
图11A-D示出了HDAC1/2抑制与阿扎胞苷的组合导致HL-60细胞存活力的协同减少。用递增剂量的阿扎胞苷与化合物E(图11A)或与化合物A(图11B)或与化合物H(图11C)或与化合物C(图11D)处理HL-60细胞，并在72小时通过细胞滴度glo测定评估细胞存活力。使用CalcuSyn软件在每个剂量水平测定组合指数(CI)和相对受影响分数(Fa)。CI值小于1(阴影区)的测量强烈支持药物之间的协同相互作用。
图12A-F示出了用作为单一药剂或与阿扎胞苷组合的化合物E或化合物A或化合物B在指示剂量处理MV4-11细胞。图12A、12C和12E示出了在处理后72小时通过FACS测定的CD11b的表面水平。图12B、12D和12F示出了在处理后96小时通过FACS评估凋亡。
图13A示出了与单独用阿扎胞苷或载剂的处理相比，用化合物A加阿扎胞苷的处理降低体内肿瘤生长。
图13B示出了与单独用阿扎胞苷或载剂的处理相比，用化合物A加阿扎胞苷的处理降低肿瘤体积变化倍数。
图13C示出了与单独用阿扎胞苷或载剂的处理相比，用化合物A加阿扎胞苷的处理增加体内存活。
图14A示出了化合物A、化合物J和阿扎胞苷抑制来自AML患者的6个骨髓样品中的集落形成的IC50值。
图14B示出了单独的和与阿扎胞苷组合的HDAC1/2抑制对原代AML患者样品4031113SH的集落形成的影响。
图14C示出了单独的和与阿扎胞苷组合的HDAC1/2抑制对原代AML患者样品VMBM0007的集落形成的作用。
图14D示出了单独的和与阿扎胞苷组合的HDAC1/2抑制对原代AML患者样品184090514的集落形成的作用。
图14E示出了单独的和与阿扎胞苷组合的HDAC1/2抑制对原代AML患者样品103113SH的集落形成的作用。
图15A示出了阿扎胞苷、化合物A和化合物J对抑制新鲜来自AML患者骨髓的AML母细胞增殖的IC50值。
图15B示出了阿扎胞苷、化合物A和化合物J对抑制新鲜来自AML患者骨髓的AML母细胞增殖的AUC(曲线下面积)值。
图15C表明在5个骨髓样品中的4个中，阿扎胞苷与化合物J的组合导致两种药物之间抑制新鲜来自AML患者的原代AML细胞的增殖的协同相互作用。
图16示出了化合物E和阿扎胞苷在MV4-11AML细胞中协同诱导GATA2表达。
图17A表明各种AML细胞系对HDAC1/2抑制敏感。
图17B示出了用指示化合物处理72小时后通过FACS测定的MV4-11(AML)细胞中骨髓分化标志物CD11b的表面水平。
图17C示出了在用指示化合物处理72小时后通过流式细胞术测定的MV4-11(AML)细胞中的细胞周期评估。
图17D示出了在用指示化合物处理72小时后通过流式细胞术评估的存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的MV4-11(AML)细胞的相对分数。详述
本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用有效量的HDAC抑制剂，或者备选地施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的上述组合。本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用有效量的HDAC抑制剂，或者备选地施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的上述组合。
定义
下面列出的是本文使用的各种术语的定义。这些定义适用于在整个说明书和权利要求书中使用的术语，无论所述术语是单独的还是作为较大基团的一部分，除非在特定情况另有限定。
术语“约”通常表示不大于值的10％、5％或1％的可能变化。例如，在其最广泛的意义上，“约25mg/kg”通常表示22.5-27.5mg/kg，即25±2.5mg/kg的值。
术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃部分，在某些实施方案中，分别含有一至六个碳原子(C1-6烷基)或一至八个碳原子(C1-8烷基)。C1-6烷基部分的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基部分；C1-8烷基部分的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基、庚基和辛基部分。
烷基取代基中的碳原子数可以由前缀“Cx-y”表示，其中x是最小值，y是取代基中碳原子的最大数目。同样，Cx链是指含有x个碳原子的烷基链。
术语“烷氧基”是指-O-烷基部分。
术语“环烷基”或“环亚烷基”表示衍生自单环或多环饱和或部分不饱和碳环化合物的单价基团。C3-8-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基和环辛基；C3-C12-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1]庚基和双环[2.2.2]辛基。还涵盖衍生自具有至少一个碳-碳双键的单环或多环碳环化合物的基团。此类基团的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等。在一些实施方案中，环烷基具有三至六个碳原子(C3-6环烷基)。在一些实施方案中，环烷基具有三至八个碳原子(C3-8环烷基)。
术语“芳基”是指具有一个或多个稠合或非稠合的芳环的单环或多环碳环***，包括但不限于苯基，萘基，四氢萘基，茚满基，茚基等。在一些实施方案中，芳基具有6个碳原子。在一些实施方案中，芳基具有6至10个碳原子(C6-10-芳基)。在一些实施方案中，芳基具有6至16个碳原子(C6-16-芳基)。
术语“杂芳基”是指具有至少一个芳环的单环或多环(例如，双环或三环或更多环)稠合或非稠合部分或环系，所述芳环具有5至10个环原子，其中一个环原子选自S、O、N和Si；0、1或2个环原自是独立选自S、O、N和Si的额外的杂原子；其余环原子是碳。杂芳基包括但不限于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、恶唑基、异恶唑基、噻二唑基、恶二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并恶唑基、喹喔啉基等。
术语“卤代”是指卤素，例如氟、氯、溴和碘。
术语“烯基”表示衍生自具有至少一个碳-碳双键的烃部分的单价基团，在某些实施方案中，所述烃部分包含2至6个碳原子(C2-6烯基)或2至8个碳原子(C2-8烯基)。双键可以是或可以不是与另一个基团的连接点。烯基包括但不限于例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基、辛烯基等。
术语“环烷基”表示衍生自单环或多环饱和或部分不饱和碳环化合物的单价基团。C3-8-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基和环辛基；C3-12-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1]庚基和双环[2.2.2]辛基。还涵盖衍生自具有至少一个碳-碳双键的单环或多环碳环化合物的基团。此类基团的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等。在一些实施方案中，环烷基具有3至6个碳原子(C3-6环烷基)。在一些实施方案中，环烷基具有3至8个碳原子(C3-8环烷基)。
术语“杂环烷基”是指非芳香族的3-、4-、5-、6-或7-元环或双环或三环基团稠合或非稠合***，其中(i)每个环含有一至三个独立地选自氧、硫和氮的杂原子，(ii)每个5-元环具有0至1个双键，每个6元环具有0至2个双键，(iii)氮和硫杂原子可以任选地被氧化，(iv)氮杂原子可以任选地被季铵化，以及(iv)任何上述环可以与苯环稠合。代表性的杂环烷基包括但不限于[1,3]二氧戊环、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、恶唑烷基、异恶唑烷基、吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基和四氢呋喃基。在一个实施方案中，杂环烷基是4-7元环，例如4-6元环。
术语“HDAC”是指组蛋白脱乙酰酶，其是从核心组蛋白中的赖氨酸残基上除去乙酰基团的酶，从而导致形成浓缩的和转录沉默的染色质。目前有18种已知的组蛋白脱乙酰酶，分为四组。I类HDAC包括HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8，与酵母RPD3基因有关。II类HDAC包括HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10，与酵母Hda1基因有关。III类HDAC也称为sirtuin，与Sir2基因有关，包括SIRT1-7。IV类HDAC仅包包括HDAC11，具有I类和II类HDAC两者的特征。除非另有说明，术语“HDAC”是指18种已知组蛋白脱乙酰酶中的任何一种或多种。
术语“HDAC6特异性”是指与任何其他类型的HDAC酶，例如HDAC1或HDAC2相比，化合物以基本上更大的程度与HDAC6结合，例如为5X、10X、15X、20X或更多。也就是说，相对于任何其他类型的HDAC酶，所述化合物对HDAC6具有选择性。例如，以10nM的IC50与HDAC6结合并且以50nM的IC50与HDAC1结合的化合物是HDAC6特异性的。另一方面，以50nM的IC50与HDAC6结合并且以60nM的IC50与HDAC1结合的化合物不是HDAC6特异性的。
术语“HDAC1/2特异性”是指与任何其他类型的HDAC酶，例如HDAC3或HDAC6相比，化合物以基本上更大的程度与HDAC1和HDAC2结合，例如为5X、10X、15X、20X或更多。也就是说，相对于任何其他类型的HDAC酶，所述化合物对HDAC1和HDAC2具有选择性。例如，以10nM的IC50与HDAC1和HDAC2结合并且以50nM的IC50与HDAC3结合的化合物是HDAC1/2特异性的。另一方面，以50nM的IC50与HDAC1和HDAC2结合并且以60nM的IC50与HDAC3结合的化合物不是HDAC1/2特异性的。
术语“HDAC1/2/6特异性”是指与任何其他类型的HDAC酶，例如HDAC3相比，化合物以基本上更大的程度与HDAC1、HDAC2和HDAC6结合，例如为5X、10X、15X、20X或更多。也就是说，相对于任何其他类型的HDAC酶，所述化合物对HDAC1、HDAC2和HDAC6具有选择性。例如，以10nM的IC50与HDAC1、HDAC2和HDAC6结合并且以50nM的IC50与HDAC3结合的化合物是HDAC1/2特异性的。另一方面，以50nM的IC50与HDAC1、HDAC2和HDAC6结合并且以60nM的IC50与HDAC3结合的化合物不是HDAC1/2特异性的。
术语“组合”是指治疗本公开中所述的治疗病症或障碍的两种或更多种治疗剂。治疗剂的这种组合可以是单一丸剂、胶囊或静脉内溶液的形式。然而，术语“组合”还包括当两种或更多种治疗剂处于分开的丸剂、胶囊或静脉内溶液中时的情况。同样，术语“组合治疗”是指施用两种或更多种治疗剂以治疗本公开中所述的治疗病症或障碍。这样的施用包括以基本上同时的方式共同施用这些治疗剂，例如在具有固定比例的活性成分的单个胶囊中，或在多个中，或在用于每种活性成分的分开的容器(例如胶囊)中。此外，这样的施用还包括在大致相同的时间或在不同的时间以顺序方式使用每种类型的治疗剂。在任一情况下，治疗方案将提供药物组合在治疗本文所述的病症或障碍中的有益效果。
术语“白血病”是指血液恶性肿瘤。术语“白血病”包括但不限于急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性单核细胞性白血病(AML)、双表型急性白血病BAL)、毛细胞白血病(HCL)或急性早幼粒细胞白血病(APL)。
如本文所用，术语“表达CD11b”是指分化簇分子11B(CD11b)的表达。
术语“抑制剂”与术语拮抗剂同义。
组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂
本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法。本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病(例如，AML)的药物组合。
本文提供的组合和方法包括组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂。HDAC抑制剂可以是任何HDAC抑制剂。因此，HDAC抑制剂可以对特定类型的组蛋白脱乙酰酶是选择性的或非选择性的。优选地，HDAC抑制剂是选择性HDAC抑制剂。更优选地，HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂、HDAC1/2特异性抑制剂或HDAC1/2/6特异性抑制剂。
在一些实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
环B是芳基或杂芳基；
R1是芳基或杂芳基，其各自可以任选被OH、卤代或C1-6-烷基取代；并且
R是H或C1-6-烷基。
式I的代表性化合物包括但不限于：
或其药学上可接受的盐。
根据式I的选择性HDAC6抑制剂的制备和性质在国际专利申请号PCT/US2011/021982中提供，其全部内容通过引用并入本文。
在另一些实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
Rx和Ry与其各自连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基；
每个RA独立地为C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、OH、-NO2、-CN或-NH2；并且
m是0、1或2。
式II的代表性化合物包括但不限于：
或其药学上可接受的盐。
根据式II的选择性HDAC6抑制剂的制备和性质在国际专利申请号PCT/US2011/060791中提供，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，HDAC1/2特异性抑制剂是式III的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
R1是芳基或杂芳基；
R2和R3各自独立地选自C3-6-环烷基、C1-6-烷基-OR6、C1-6-烷基-C3-6-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基和C2-6-烯基；
R6是H或C1-6-烷基；并且
R7是H或C3-6-环烷基。
式III的化合物非限制性地由化合物E或其药学上可接受的盐表示。
在另一个实施方案中，HDAC1/2特异性抑制剂是N-(2-氨基-5-(苯硫-2-基)苯基)-2-(哌嗪-1-基)喹啉-6-甲酰胺(或药学上可接受的盐：
根据式III的选择性HDAC1/2抑制剂以及化合物J的制备和性质在美国专利申请号14/069,741中提供，其全部内容通过引用并入本文。
在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是4-乙酰氨基-N-(2-氨基-5-氟苯基)苯甲酰胺(化合物F)或其药学上可接受的盐。
HDAC抑制剂化合物F的制备和性质在国际专利申请号PCT/US2013/052572中提供，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，HDAC1/2/6特异性抑制剂是式IV的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
Rx独立地选自由–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
Ry选自由H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、–OH、–NO2、–CN、–NH2、–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
每个R1每次出现时独立地选自由H、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-6-烷基-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基、C1-6-烷基-芳基和C1-6-烷基-杂芳基组成的组；并且
Rz选自由C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基和杂芳基组成的组。
式IV的化合物非限制性地由化合物G或其药学上可接受的盐表示。
根据式IV的HDAC1/2/6特异性抑制剂的制备和性质在国际申请号PCT/US2014/059863中提供，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本文所述的化合物是非溶剂化物。在另一些实施方案中，一种或多种化合物是溶剂化物形式。如本领域中公知的，溶剂化物可以是任何药学上可接受的溶剂，例如水、乙醇等。
组合/药物组合
本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的组合。在一些实施方案中提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病(例如，AML)的包含组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和阿扎胞苷的组合。
在组合的一些实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂。在一些具体的实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式I的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些优选实施方案中，式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
在另一些优选实施方案中，式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
在另一些具体实施方案中，HDAC6特异性抑制剂是式II的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些优选实施方案中，式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
在另一些优选实施方案中，式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
在组合的一些实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC1/2特异性抑制剂。在一些具体实施方案中，HDAC1/2特异性抑制剂是式III的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些优选实施方案中，式III的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC1/2特异性抑制剂是化合物J：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，HDAC抑制剂是化合物F：
或其药学上可接受的盐。
在组合的一些实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC1/2/6特异性抑制剂。在另一些具体的实施方案中，HDAC1/2/6特异性抑制剂是式IV的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些优选实施方案中，式IV的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
在组合的一些实施方案中，阿扎胞苷可以是游离碱或其药学上可接受的盐。见Cihak，“Biological effects of 5-azacytidine in eukaryotes”,Oncology,卷30(5),第405-422页(1974)。5-氮杂胞苷(也称作阿扎胞苷和4-氨基-1-β-D-呋喃核糖基-S-三嗪-2(1H)-酮；国家服务中心(Nation Service Center)指定NSC-102816；CAS登记号320-67-2)以商品名Vidaza销售用于治疗骨髓增生异常综合征(MDS)。
虽然式I、II、III、IV的化合物、化合物F和化合物J以其中性形式描述，但在一些实施方案中，这些化合物以药学上可接受的盐形式使用。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中通过将现有的酸或碱部分转化为其盐形式对母体化合物进行修饰。合适的盐的列表可见于Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版,MackPublishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页和Journal of PharmaceuticalScience,66,2(1977)，其各自通过引用整体并入本文
施用/剂量
在一些实施方案中，HDAC抑制剂(式I、II、III、IV的化合物、化合物F或化合物J)与阿扎胞苷同时施用。同时施用通常意味着这两种化合物在完全相同的时间进入患者。然而，同时施用也包括HDAC抑制剂和阿扎胞苷在不同时间进入患者的可能性，但在时间上的差足够小，使得在第二施用化合物进入之前，第一施用化合物不提供在患者中起效的时间。这种延迟时间通常对应于小于1分钟，更通常小于30秒。在其中化合物在溶液中的一个实例中，同时施用可通过施用含有化合物组合的溶液来实现。在另一实例中，可以采用同时施用分开的溶液，其中一种含有HDAC抑制剂，另一种含有阿扎胞苷。在其中化合物是固体形式的一个实例中，同时施用可以通过施用含有化合物组合的组合物来实现。或者，同时施用可以通过施用两种分开的组合物来实现，一种含有HDAC抑制剂，另一种含有阿扎胞苷。
在另一些实施方案中，HDAC抑制剂和阿扎胞苷不同时施用。在一些实施方案中，HDAC抑制剂在阿扎胞苷之前施用。在另一些实施方案中，阿扎胞苷在HDAC抑制剂之前施用。在另一些实施方案中，在施用第二施用化合物之前，第一施用化合物提供在患者中起效的时间。通常，时间差不延长超过第一施用化合物在患者中完成其效果的时间，或超过第一施用化合物在患者中完全或基本上消除或失活的时间。
在一些实施方案中，HDAC抑制剂和阿扎胞苷中的一种或两种以治疗有效量或剂量施用。“治疗有效量”是当单独向患者施用时有效治疗白血病的HDAC抑制剂(式I、II、III、IV的化合物、化合物F或化合物J)或阿扎胞苷的量。对于特定受试者在给定情况下证明为“治疗有效量”的量可能不是对于对所考虑的疾病或病症进行类似治疗的100％受试者都有效，即使这样的剂量被熟练的从业者视为“治疗有效量”。对应于治疗有效量的化合物的量强烈依赖于癌症的类型、癌症的阶段、所治疗的患者的年龄和其他事实。通常，这些化合物的治疗有效量是本领域公知的，例如在上面引用的参考文献中提供的。
在另一些实施方案中，HDAC抑制剂和阿扎胞苷中的一种或两种以亚治疗有效量或剂量施用。亚治疗有效量是当单独向患者施用时，HDAC抑制剂(式I、II、III、IV的化合物、化合物F或化合物J)或阿扎胞苷的不随时间完全抑制预期靶标的生物活性的量。
无论以治疗量或亚治疗量施用，HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合应当有效治疗白血病，例如AML。例如，如果当与式I、II、III、IV的化合物、化合物F或化合物J(HDAC抑制剂)组合时，亚治疗量的阿扎胞苷化合物可能是有效量的，所述组合有效治疗白血病。例如，如果当与式I、II、III的化合物、化合物F或化合物J(HDAC抑制剂)组合时，亚治疗量的阿扎胞苷化合物可能是有效量的，所述组合有效治疗白血病，其中所述组合物以这样的剂量施用，当一种或两种化合物单独施用时，所述剂量不是有效的，但是在组合时所述量是有效的。
在一些实施方案中，化合物的组合在白血病的治疗中表现出协同效应(即，大于加性效应)。在另一些实施方案中，化合物的组合在治疗急性骨髓性白血病中表现出协同效应(即，大于加性效应)。术语“协同作用”是指两种药剂(例如HDAC抑制剂和阿扎胞苷)的作用产生例如减缓癌症或其症状的症状进展的效果，其大单独施用的每种药物的效果的简单相加。协同效应可以例如使用合适的方法计算，例如Sigmoid-Emax方程(Holford,N.H.G.和Scheiner,L.B.,Clin.Pharmacokinet.6:429-453(1981))、Loewe加性方程(Loewe,S.和Muischnek,H.,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326(1926))和中值效应方程(Chou,T.C.和Talalay,P.,Adv.Enzyme Regul.22:27-55(1984))。上面提到的每个方程可以应用于实验数据以产生相应的图以帮助评估药物组合的效果。与上述方程相关的相应图分别是浓度-效应曲线、等效线图曲线和组合指数曲线。
在一些优选实施方案中，本文提供了包括式I的HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合和方法。因此，在一个实施方案中，组合和方法包括化合物A和阿扎胞苷。在另一个实施方案中，组合和方法包括化合物B和阿扎胞苷。在本文提供的另一些优选实施方案中，组合和方法包括式II的HDAC抑制剂和阿扎胞苷。因此，在一个实施方案中，组合和方法包括化合物C和阿扎胞苷。在另一个实施方案中，组合和方法包括化合物D和阿扎胞苷。在本文提供的另一些优选实施方案中，组合和方法包括式III的HDAC抑制剂和阿扎胞苷。因此，在一个实施方案中，组合和方法包括化合物E和阿扎胞苷。在本文提供的另一个优选实施方案中，组合和方法包括HDAC抑制剂化合物J和阿扎胞苷。在本文提供的另一些优选实施方案中，组合和方法包括HDAC抑制剂化合物F和阿扎胞苷。在本文提供的另一些优选实施方案中，组合和方法包括式IV的HDAC抑制剂和阿扎胞苷。因此，在一个实施方案中，组合和方法包括化合物G和阿扎胞苷。
在一些不同的实施方案中，根据所使用的组合和有效量，化合物的组合可以抑制白血病生长、实现白血病停滞或甚至实现基本上或完全的白血病消退。
尽管HDAC抑制剂和阿扎胞苷的量应当导致白血病的有效治疗，但是当组合时，所述量优选对患者不是过度毒性的(即，所述量优选在通过医学指南确定的毒性极限内)。在一些实施方案中，为了防止过度的毒性和/或提供更有效的白血病治疗，提供了对总施用剂量的限制。通常，本文考虑的量是每天；然而，本文也考虑半天和两天或三天的周期。
不同的剂量方案可以用于治疗白血病。在一些实施方案中，每日剂量，例如上述任何示例性剂量，每天施用一次、两次、三次或四次，持续三、四、五、六、七、八、九或十天。取决于癌症的阶段和严重程度，可以使用更短的治疗时间(例如，多至五天)和高剂量，或可以使用更长的治疗时间(例如十天或更多天，或数周，或一个月，或更久)和低剂量。在一些实施方案中，每隔一天施用每日一次或两次的剂量。在一些实施方案中，每个剂量含有作为单一剂量递送的HDAC抑制剂和阿扎胞苷，而在另一些实施方案中，每个剂量含有作为分开的剂量递送的HDAC抑制剂或阿扎胞苷。
纯形式的或在合适的药物组合物中的式I、II、III、IV化合物、化合物F或化合物J或其药学上可接受的盐或溶剂化物形式可以通过本领域中是已知的任何可接受的施用方式或药剂施用。化合物可以例如口服、鼻、胃肠外(静脉内、肌内或皮下)、局部、经皮、***内、膀胱内、脑池内或直肠施用。剂型可以是例如固体、半固体、冻干粉末或液体剂型，例如片剂、丸剂、软弹性或硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂、栓剂、气雾剂等，优选以适于简单施用精确剂量的单位剂型。具体的施用途径是口服，特别是其中可以根据待治疗的疾病的严重程度调节方便的日剂量方案的途径。
如上所述，HDAC抑制剂和阿扎胞苷药物组合可以以单一单位剂量或分开的剂型施用。因此，短语“药物组合”包括单一剂型或分开的剂型中的两种药物的组合，即，整个申请中描述的药学上可接受的载体和赋形剂可与HDAC抑制剂和阿扎胞苷以单一单位剂量组合，以及当这些化合物分开施用时，分别与HDAC抑制剂和阿扎胞苷组合。
辅助剂和佐剂可包括例如防腐剂、润湿剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、加香剂、乳化剂和分散剂。通常通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等提供对微生物作用的预防。还可以包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。可注射药物形式的延长吸收可以通过使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。辅助剂还可以包括润湿剂、乳化剂、pH缓冲剂和抗氧化剂，例如柠檬酸、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羟基甲苯等。
固体剂型可以制备有包衣和壳，例如肠溶衣和本领域熟知的其他物质。其可以包含镇静剂，并且可以是这样的组合物，使得其以延迟的方式在肠道的某一部分释放活性化合物。可以使用的嵌入组合物的实例是聚合物质和蜡。活性化合物也可以是微囊化形式，如果合适，与一种或多种上述赋形剂一起。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。这样的剂型例如通过将本文所述的HDAC抑制剂或阿扎胞苷或者其药学上可接受的盐和任选的药物佐剂溶解、分散等在以下物质中以形成溶液或悬浮液来制备：载体，例如水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等；增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺；油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；或这些物质的混合物等。
通常，根据预期的施用方式，药学上可接受的组合物将包含约1重量％至约99重量％的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及99重量％至1重量％的药学上可接受的赋形剂。在一个实例中，组合物将是约5重量％至约75重量％的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，其余是合适的药物赋形剂。
制备这些剂型的实际方法是本领域技术人员已知的或将是显而易见的。参考例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版.(Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1990)。
方法
本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用本文提供的药物组合。本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用HDAC抑制剂。因此，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合，或者向受试者施用治疗有效量的HDAC抑制剂。在本文提供的方法的一个优选实施方案中，白血病是急性骨髓性白血病。在本文提供的方法的另一个优选实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂、HDAC1/2特异性抑制剂或HDAC1/2/6特异性抑制剂。在本文提供的方法的另一个优选实施方案中，HDAC抑制剂是式I、式II、式III或式IV的化合物。在本文提供的方法的另一个优选实施方案中，HDAC抑制剂是化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F、化合物G、化合物H或化合物J。
本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗表达CD11b的癌症的方法，包括向受试者施用本文提供的药物组合。本文还提供了用于在有需要的受试者中治疗表达CD11b的癌症的方法，包括向受试者施用HDAC抑制剂。因此，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗表达CD11b的癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合，或者向受试者施用治疗有效量的HDAC抑制剂。在本文提供的方法的另一个优选实施方案中，HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂、HDAC1/2特异性抑制剂或HDAC1/2/6特异性抑制剂。在本文提供的方法的另一个优选实施方案中，HDAC抑制剂是式I、式II、式III或式IV的化合物。在本文提供的方法的另一个优选实施方案中，HDAC抑制剂是化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F、化合物G、化合物H或化合物J。
本文考虑的受试者通常是人。然而，受试者可以是需要治疗的任何哺乳动物。因此，本文所述的方法可应用于人类和兽医应用。
术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”表示该方法至少具有缓解的异常细胞增殖。例如，该方法可以降低患者中白血病生长的速率，或防止白血病的持续生长或扩散，或甚至降低白血病的总体覆盖范围。
在一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2特异性抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或药学上可接受的其盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2/6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式II化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式IV化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物A或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物B或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种在有此需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物C或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物D或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物E或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物F或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物G或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物H或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物J或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2特异性抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2/6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式II化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式IV化合物或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物A或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物B或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物C或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物D或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物E或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物F或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物G或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物H或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物J或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2特异性抑制剂或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2/6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式II化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式IV化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物A或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种在有此需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物B或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种在有此需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物C或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物D或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种在有此需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物E或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种在有此需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物F或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物G或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物H或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物J或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2特异性抑制剂或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的HDAC1/2/6特异性抑制剂或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式II化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本文提供了用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式IV化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物A或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物B或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物C或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物D或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物E或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物F或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物G或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物H或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中是一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的化合物J或其药学上可接受的盐。
本文还提供了用于抑制白血病细胞迁移和/或侵袭的方法。特别地，本文提供了用于在有需要的受试者中抑制白血病细胞的迁移和侵袭或其两者的方法，包括向受试者施用治疗有效量的式I、II、III、IV、化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F、化合物G、化合物H或化合物J的HDAC抑制剂。在一个实施方案中，HDAC抑制剂是化合物J或其药学上可接受的盐。
本文还提供了通过施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合来降低癌细胞的细胞存活力的方法。在一个实施方案中，HDAC抑制剂是化合物J或其药学上可接受的盐。
本文还提供了通过施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合来诱导癌细胞分化的方法。在一个实施方案中，HDAC抑制剂是化合物J或其药学上可接受的盐。
本文还提供了通过施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷组合来诱导癌细胞凋亡的方法。在一个实施方案中，HDAC抑制剂是化合物J或其药学上可接受的盐。
试剂盒
在另一些实施方案中，提供了试剂盒。本文提供的试剂盒包括包含本文提供的化合物或组合物的包装。在一些实施方案中，试剂盒包含HDAC抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
短语“包装”是指含有本文提出的化合物或组合物的任何容器。在一些实施方案中，包装可以是盒或包裹(wrapping)。用于包装药物产品的包装材料是本领域技术人员公知的。药物包装材料的实例包括但不限于瓶、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶，以及适合于所选择的制剂和预期的施用和治疗模式的任何包装材料。
试剂盒还可以包括不包含在包装内，但附着在包装外部的物品，例如移液管。
试剂盒还可以包含用于向患者施用本文提供的化合物或组合物的说明书。试剂盒还可以包括由管理机构(例如美国食品和药物管理局)批准使用本文化合物的说明书。试剂盒还可以包含化合物的标记或产品***件。包装和/或任何产品***件本身可以由管理机构批准。试剂盒可以包括在包装中的固相或液相(例如提供的缓冲液)中的化合物。试剂盒还可以包括用于制备用于进行所述方法的溶液的缓冲液和用于将液体从一个容器转移到另一个容器的移液管。
实施例
下面为了说明的目的和描述本文提供的某些具体实施方案阐述了实施例。然而，权利要求书的范围不以任何方式受本文所阐述的实施例的限制。对所公开的实施方案的各种改变和修饰对于本领域技术人员将是显而易见的，并且可以进行这样的改变和修饰，包括但不限于与本文提供的化学结构、取代基、衍生物、制剂和/方法有关的那些，而不脱离本文提供的精神和所附权利要求书的范围。本文方案中结构中的变量的定义与本文提供的式中的相应位置的那些相当。
式I化合物(化合物A和B)的合成提供在PCT/US2011/021982中，其通过引用整体并入本文。式II化合物(化合物C和D)的合成提供在PCT/US2011/060791中，其通过引用整体并入本文。式III化合物以及化合物J的合成提供在美国申请号14/069,741中，其通过引用整体并入本文。式IV化合物(例如，化合物G)的合成提供在国际申请号PCT/US2014/059863中，其通过引用整体并入本文。
实施例1：2-(二苯基氨基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物A)的合成
化合物A
中间体2的合成：将苯胺(3.7g，40mmol)、化合物1(7.5g，40mmol)和K2CO3(11g，80mmol)在DMF(100ml)中的混合物脱气并在120℃下在N2下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(200ml)稀释，然后用饱和盐水(200ml×3)洗涤。分离有机层，用Na2SO4干燥，蒸发至干，通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化，得到为白色固体的所需产物(6.2g，64％)。
中间体3的合成：将化合物2(6.2g，25mmol)、碘苯(6.12g，30mmol)、CuI(955mg，5.0mmol)、Cs2CO3(16.3g，50mmol)在TEOS(200ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫。将所得混合物在140℃下搅拌14小时。冷却至室温后，将残余物用EtOAc(200ml)稀释。加入95％EtOH(200ml)和硅胶上的NH4F-H2O(50g，通过将水(1500ml)中的NH4F(100g)加入到硅胶(500g，100-200目)中预制备)，将所得混合物在室温下保持2小时。将固化材料过滤并用EtOAc洗涤。将滤液蒸发至干，残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化，得到黄色固体(3g，38％)。
中间体4的合成：将2N NaOH(200ml)加入化合物3(3.0g，9.4mmol)在EtOH(200ml)中的溶液中。将混合物在60℃下搅拌30分钟。蒸发溶剂后，溶液用2N HCl中和，得到白色沉淀。用EtOAc(2×200ml)萃取悬浮液，分离有机层，用水(2×100ml)、盐水(2×100ml)洗涤，并且用Na2SO4干燥。除去溶剂，得到棕色固体(2.5g，92％)。
中间体6的合成：将化合物4(2.5g，8.58mmol)、化合物5(2.52g，12.87mmol)、HATU(3.91g，10.30mmol)和DIPEA(4.43g，34.32mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物过滤后，将滤液蒸发至干，残余物通过硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化，得到棕色固体(2g，54％)。
2-(二苯基氨基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物A)的合成：将化合物6(2.0g，4.6mmol)、氢氧化钠(2N，20ml)在MeOH(50ml)和DCM(25ml)中的混合物在0℃下搅拌10分钟。将羟胺(50％)(10ml)冷却至0℃并加入混合物中。将所得混合物在室温下搅拌20分钟。除去溶剂后，将混合物用1M HCl中和，得到白色沉淀。将粗产物过滤并通过制备型HPLC纯化，得到白色固体(950mg，48％)。
实施例2：2-((2-氯苯基)(苯基)氨基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物B)的合成
中间体2的合成：参见实施例1中中间体2的合成。
中间体3的合成：将化合物2(69.2g，1当量)、1-氯-2-碘苯(135.7g，2当量)、Li2CO3(42.04g，2当量)、K2CO3(39.32g，1当量)，Cu(1当量，45μm)在DMSO(690ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫。将所得混合物在140℃下搅拌。进行反应后处理，得到化合物3，产率为93％。
中间体4的合成：参见实施例1中中间体4的合成。
中间体6的合成：参见实施例1中中间体6的合成。
2-((2-氯苯基)(苯基)氨基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物B)的合成：参见实施例1中化合物A的合成。
实施例3：2-((1-(3-氟苯基)环己基)氨基)-N-羟基嘧啶-5-甲酰胺(化合物C)的合成
中间体2的合成：向化合物1(100g，0.74mol)在无水DMF(1000ml)中的溶液中加入1,5-二溴戊烷(170g，0.74mol)。在将反应在冰浴中冷却的同时滴加NaH(65g，2.2当量)。将所得混合物在50℃剧烈搅拌过夜。将悬浮液小心地用冰水淬灭并用乙酸乙酯(3×500ml)萃取。将合并的有机层浓缩，得到粗产物，通过快速柱色谱法纯化，得到作为灰白色固体的化合物2(100g，67％)。
中间体3的合成：将化合物2(100g，0.49mol)在PPA(500ml)中的溶液在110℃加热约5-6小时。完成后，将所得混合物用饱和NaHCO3溶液小心地调节至约8-9的pH。收集所得沉淀，用水(1000ml)洗涤，得到作为白色固体的化合物3(95g，87％)。
中间体4的合成：向化合物3(95g，0.43mol)的n-BuOH(800ml)溶液中加入NaClO(260ml，1.4当量)。然后在0℃下加入3N NaOH(400ml，2.8当量)，将反应物在室温下搅拌过夜。将所得混合物用EA(2×500ml)萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤。真空除去溶剂，得到粗产物，将其通过用HCl盐处理进一步纯化，得到作为白色粉末的化合物4(72g，73％)。
中间体6的合成：向化合物4(2.29g，10mmol)在二噁烷(50ml)中的溶液中加入化合物5(1.87g，1.0当量)和DIPEA(2.58g，2.0当量)。将混合物在110-120℃下加热过夜。将所得混合物在硅胶柱上直接纯化，得到作为白色固体的偶联产物化合物6(1.37g，40％)。
2((1-(3-氟苯基)环己基)氨基)-N-羟基嘧啶-5-甲酰胺(化合物C)的合成：
向化合物6(100mg，0.29mmol)在MeOH/DCM(10ml，1:1)中的溶液中加入水中的50％NH2OH(2ml，过量)。然后在0℃下加入在MeOH中的饱和NaOH(2ml，过量)，将反应物搅拌3-4小时。完成后，将所得混合物浓缩并用2N HCl酸化至pH为4-5。收集沉淀物并用水(10ml)洗涤以除去过量的NH2OH。将沉淀干燥，得到作为白色粉末的2-((1-(3-氟苯基)环己基)氨基)-N-羟基嘧啶-5-甲酰胺(70mg，73％)。
实施例4：N-羟基-2-((1-苯基环丙基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物D)的合成
中间体2的合成：在氮气氛下将化合物1、苄腈(250g，1.0当量)和Ti(OiPr)4(1330ml，1.5当量)在MBTE(3750ml)中的溶液冷却至约-10℃至-5℃。经过60分钟的时间滴加EtMgBr(1610ml，3.0M，2.3当量)，在此期间反应的内部温度保持低于5℃。将反应混合物温热至15-20℃1小时。经过60分钟的时间滴加BF3-***(1300ml，2.0当量)，同时将内部温度保持在15℃以下。将反应混合物在15-20℃下搅拌1-2小时。并在剩余低水平的苄腈时停止。滴加1N HCl(2500ml)，同时保持内部温度低于30℃。滴加NaOH(20％，3000ml)使pH达到约9.0，同时仍保持温度低于30℃。将反应混合物用MTBE(3L×2)和EtOAc(3L×2)萃取，将合并的有机层用无水Na2SO4干燥并在减压下(低于45℃)浓缩，得到红色油状物。将MTBE(2500ml)加入到油状物中以得到澄清溶液，并且在用干HCl气体鼓泡时，沉淀固体。将该固体过滤并真空干燥，得到143g化合物2。
中间体4的合成：将化合物2(620g，1.0当量)和DIPEA(1080g，2.2当量)溶于NMP(3100ml)中并搅拌20分钟，加入化合物3(680g，1.02当量)，将反应混合物加热至约85-95℃4小时，使溶液缓慢冷却至室温。将该溶液倒在H2O(20L)上，并在强烈搅拌下从溶液中沉淀出大部分固体，过滤，滤饼在50℃减压干燥24小时，得到896g化合物4(固体，86.8％)。
N-羟基-2-((1-苯基环丙基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物D)的合成：在搅拌下将MeOH(1000ml)溶液冷却至约0-5℃。加入NH2OH HCl(1107g，10当量)，然后小心地加入NaOCH3(1000g，12.0当量)。将所得混合物在0-5℃下搅拌1小时，过滤除去固体。将化合物4(450g，1.0当量)一次性加入到反应混合物中，并在10℃下搅拌2小时，直到化合物4耗尽。通过加入HCl(6N)将反应混合物调节至约8.5-9的pH，导致沉淀。将混合物减压浓缩。在强烈搅拌下将水(3000ml)加入到残余物中，并通过过滤收集沉淀。将产物在45℃的烘箱中干燥过夜(340g，79％产率)。
实施例5：N-(2-氨基-5-(苯硫-2-基)苯基)-2-环丙基-1-(2-吗啉代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺(化合物E)的合成
实验程序
步骤1：向化合物1在DCE中的溶液中加入POBr3和咪唑。将反应物在80℃下搅拌过夜。将水和DCM加入到反应物中，并分离有机层，用盐水洗涤，减压干燥，得到化合物2。
步骤2：向化合物2在DMSO中的溶液中加入化合物a和KOH。将所得反应混合物在45℃下搅拌4小时，用H2O淬灭，并用EA萃取。将合并的有机层通过凝胶色谱法纯化，得到所需产物化合物3。
步骤3：将化合物3、环丙基硼酸、Pd(OAc)2、三环己基膦和K3PO4在甲苯和水中的混合物在100℃的N2气氛下搅拌过夜。将混合物冷却，过滤并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物4。
步骤4：将化合物4和NaOH在EtOH和THF中的混合物在60℃下搅拌5小时。将混合物浓缩，得到残余物，向其中加入饱和柠檬酸水溶液并用EA萃取。分离有机层，干燥，过滤并浓缩，得到化合物5。
步骤5：将化合物5、2-氨基-4-(苯硫-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯、HOAT、EDCI和DIPEA在DMF中的混合物在55℃下搅拌过夜。向混合物中加入水，并用EA萃取。分离有机层，干燥，过滤并浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC纯化，得到化合物6。
步骤6：向化合物6在DCM中的溶液中加入TFA，并在室温下搅拌1小时。将混合物浓缩，得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到化合物7。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.63(s,1H),8.16(s,1H),7.79–7.73(m,1H),7.51(d,J＝2.1Hz,2H),7.36(d,J＝5.1Hz,1H),7.29(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.25(d,J＝3.5Hz,1H),7.05(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),6.82(d,J＝8.3Hz,1H),6.24(s,1H),5.12(s,2H),4.43(s,2H),3.57(s,5H),2.77–2.58(m,2H),2.09(s,1H),1.02(d,J＝8.0Hz,2H),0.76(d,J＝4.4Hz,2H)。LCMS:m/z＝487.2(M+H)+。
实施例6：N-羟基-2-((4-苯基-1-(苯基氨基甲酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(化合物G)的合成。
步骤1：在室温下向化合物8(85mg，0.26mmol)在THF(4ml)中的溶液中加入异氰酸基苯(46mg，0.39mmol)、DIPEA(0.2ml)。将反应物搅拌2小时。并随后真空浓缩，得到化合物9(80g，产率：69％)。
步骤2：在0℃下向化合物9(80mg，0.18mmol)在MeOH(3ml)和DCM(1ml)中的溶液中加入NH2OH(0.2ml)。将反应物搅拌10分钟，此时加入NaOH/MeOH(0.4ml)。将反应物搅拌2小时。将所得反应混合物浓缩，使用2N HCl调节至pH＝5，用EA(10ml)萃取，通过制备型HPLC纯化，得到N-羟基-2-((4-苯基-1-(苯基氨基甲酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(14mg，17％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.83(s,1H),8.96(s,1H),8.60(s,1H),8.49(s,2H),8.37(s,1H),8.20(s,1H),7.47-7.46(d,J＝7.6Hz,2H),7.41-7.39(d,J＝7.4Hz,2H),7.29-7.26(t,J＝7.7Hz,2H),7.23-7.20(m,J＝7.7Hz,2H),7.18-7.15(t,J＝7.3Hz,1H),6.92(t,J＝7.3Hz,1H),4.03(d,J＝13.2Hz,2H),3.13(t,J＝12.1Hz,2H),2.64(d,J＝13.0Hz,2H),1.90(t,J＝11.0Hz,2H)。LCMS:m/z＝433(M+H)+。
实施例7：N-(2-氨基-5-(苯硫-2-基)苯基)-2-(哌嗪-1-基)喹啉-6-甲酰胺化合物J的合成
化合物J的制备在美国专利申请号14/069,741中提供，其总结如下。
反应方案：
实验程序
步骤1：将化合物1(10g，0.53mol)和m-CPBA(18.4g，0.106mol)在DCM(50ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。将NaHCO3水溶液(40ml，饱和)加入到反应混合物中并搅拌30分钟。分离有机层，干燥，过滤并浓缩，得到残余物，将其在乙酸乙酯(5ml)中重结晶，得到作为浅黄色固体的化合物2。
步骤2：在0℃下向化合物2(4.0g，0.020)和DMF(8ml)在DCM中的溶液中缓慢加入SOCl2(8ml)并在室温下搅拌5小时。将所得混合物浓缩，得到残余物，加入DCM(50ml)和NaHCO3水溶液(饱和，20ml)并搅拌30分钟。分离有机层并浓缩，得到残余物，将其通过硅胶色谱法纯化，得到作为白色固体的化合物3。
步骤3：将化合物3(10g，0.045mol)、CuI(10g，0.53mol)、N-boc-哌嗪(25g，0.135mol)和K2CO3(18.6g，0.135mol)在DMSO(120ml)中的混合物在100℃下搅拌过夜。通过TLC(薄层色谱)监测完成后，加入300ml EA(乙酸乙酯)，然后过滤。浓缩混合物得到残余物，向其中加入水(300ml)和柠檬酸水溶液(饱和，30ml)。在室温搅拌30分钟，然后过滤，得到作为黄色固体的化合物4，其可以不经纯化用于下一步骤。
步骤4：将化合物4(18g，粗品)和2M NaOH(50ml)在EtOH(100ml)和THF(100ml)中的混合物在70℃下搅拌4小时。TLC可用于监测反应。将反应混合物浓缩至残余物，向其中加入水(300ml)和饱和柠檬酸水溶液(40ml)。随后过滤得到为黄色固体的化合物5。
步骤5：将化合物5(1当量)、2-氨基-4-(苯硫-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1当量)、HOAT(1.5当量)、EDCI(2当量)和DIPEA(4当量)在DMF中的混合物在55℃下搅拌过夜。将水加入混合物中，并用EA萃取。分离有机层，干燥，过滤并浓缩，得到残余物，其可通过制备型TLC纯化，得到化合物7。
步骤6：将化合物7(95mg 0.15mmol)和TFA(2ml)在2ml DCM中的混合物在室温下搅拌2小时。蒸发溶剂，得到粗产物，其可以通过HPLC纯化，得到白色产物化合物J(19mg，30％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.79(s,1H),8.42(d,J＝1.8Hz,1H),8.17–8.09(m,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),7.51(d,J＝2.0Hz,1H),7.36(dd,J＝5.1,0.8Hz,1H),7.33–7.28(m,2H),7.25(d,J＝3.5Hz,1H),7.06(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),6.83(d,J＝8.3Hz,1H),5.18(s,2H),3.73(s,4H),2.89(s,4H)。LCMS:m/z＝430(M+H)+
实施例8：HDAC酶测定
将用于测试的化合物在DMSO中稀释至终浓度的50倍，并进行十点三倍稀释系列。将化合物在测定缓冲液(50mM pH 7.4的HEPES、100mM Kill、0.001％Tween-20、0.05％BASE、20μM TEC)中稀释至其终浓度的6倍。将HDAC酶(购自BPS Biosciences)在测定缓冲液中稀释至其终浓度的1.5倍。将二肽底物和0.05μM终浓度的胰蛋白酶在测定缓冲液中稀释至其终浓度的6倍。在这些测定中使用的最终酶浓度为3.3ng/ml(HDAC1)、0.2ng/ml(HDAC2)、0.08ng/ml(HDAC3)和2ng/ml(HDAC6)。使用的最终底物浓度为16μM(HDAC1)、10μM(HDAC2)、17μM(HDAC3)和14μM(HDAC6)。将5μl的化合物和20μl的酶一式两份加入黑色不透明384孔板的孔中。将酶和化合物在室温下一起孵育10分钟。每个孔中加入将5μl底物，将板振荡60秒，并置于Victor 2微升板读数器中。监测荧光的显色60分钟。并计算反应的线性速率。使用Graph Pad Prism通过四参数曲线拟合确定IC50。
实施例9：HDAC抑制剂和阿扎胞苷对AML细胞的协同作用
HDAC或DNMT(DNA甲基转移酶)的抑制已经显示出对AML细胞具有细胞毒性。不同的HDAC抑制剂(化合物A和化合物C是HDAC6选择性的，化合物E是HDAC1/2选择性的，化合物F是对照)和DNMT抑制剂阿扎胞苷在通过Cell Titer Glo AssayTM测量的AML细胞存活力测定中组合。在每孔中相同量的培养的AML细胞的情况下，从左到右向每一行孔加入一种化合物的系列稀释液，并将第二化合物的系列稀释液从上到下混合到这些孔的每一列中。因此，将测试板上的那些AML细胞暴露于不同浓度的两种化合物的各种组合。在37℃孵育72小时后测量每个孔中的活细胞，计算不可存活细胞的百分比并相对于总细胞标准化。这些值报告为0-1.0的范围内的Fa(分数活性)，以反映单独或组合的测试化合物的细胞毒性。使用软件CalcuSyn计算组合指数(CI)值，以确定组合是协同(CI<1.0)、加性(CI＝1.0)或拮抗(CI>1.0)。将CI值绘制为Fa的函数，如图1A-D所示。为了避免由于实验数据变异性引起的任何可能的假阳性，仅当CI<0.7时才确定组合“协同”，如每个图的阴影区域所示。从这些结果可以得出结论，基于来自三种测试的AML细胞系：HL-60、Kasumi-3和THP-1的协同作用数据，测试的组合对AML细胞具有协同的细胞毒性作用。HDAC1/2抑制似乎比HDAC3或HDAC6具有更显著的效果，因为从化合物E/阿扎胞苷组合观察到了最大的协同作用。这些结果示于图1A-D中，其中左上图(图1A)示出了阿扎胞苷和化合物A在HL-60细胞中的数据，右上图(图1B)示出了阿扎胞苷和化合物C在HL-60细胞中的数据，左下图(图1C)示出了阿扎胞苷和化合物E在HL-60细胞中的数据，右下图(图1D)示出了阿扎胞苷和化合物F在HL-60细胞。因此，图1A-D中的数据表明，在AML细胞系(Kasumi-3、HL-60和THP-1)中阿扎胞苷与化合物A和其他HDAC同种型抑制剂显示出显著的协同细胞杀伤。协同作用主要由HDAC1/2抑制驱动。
实施例10：HDAC抑制在AML中增加凋亡并抑制AML/ETO
在细胞暴露于不同浓度的HDAC抑制剂后，通过用碘化丙啶对AML细胞染色来测量引起AML细胞死亡(凋亡)的HDAC抑制。基于其碘化丙啶染色模式，分离和定量四个不同的细胞群体G1、S、G2和亚G1。亚G1细胞是垂死或死亡细胞，并且该群体的百分比反映了测试化合物的细胞毒性。作为HDAC抑制剂特别是HDAC1/2选择性抑制剂化合物E的增加的浓度的函数的增加的亚G1细胞的量提示HDAC1/2介导的AML细胞毒性。这些结果示在图2A-C中，其示出了72小时的Kasumi-1细胞周期的数据。图2A示出了化合物B的数据，图2B示出了化合物G的数据，图2C示出了化合物E的数据。
一种类型的AML具有标记(signature)染色体易位t(8:21)，因此表达独特的融合蛋白AML1/ETO。已经报道该融合蛋白对于AML细胞生长至关重要，并且pan-HDAC抑制剂帕比司他能够导致其在具有t(8:21)易位的AML细胞系Kasumi-1中的损失。在本研究中，将Kasumi-1细胞暴露于不同浓度的HDAC抑制剂化合物A或另一HDAC1/2/6选择性抑制剂化合物G(数据未示出了)24小时。通过SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离全细胞裂解物并转移至膜(Western印迹)。使用AML1特异性抗体在膜上检测AML1/ETO融合蛋白。结果表明，化合物A和化合物G均以浓度依赖性方式降低该融合蛋白的量。这些结果示于图2D中。
实施例11：同种型选择性组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂与阿扎胞苷的组合在性骨髓性白血病(AML)中的协同作用
AML是造血干细胞疾病的异质组，其特征在于骨髓分化中的缺陷和肿瘤性造血前体细胞的提高的增殖。异常表观遗传调节在AML的发病机理中起重要作用。DNA甲基转移酶抑制剂阿扎胞苷被批准用于治疗骨髓增生异常综合征，其经常发展为AML。
HDAC抑制剂作为治疗AML的有希望的药物正在显露。同种型选择性HDAC抑制剂具有减少用非选择性抑制剂观察到的药物毒性和其他副作用的组合的潜力，同时还实现有益的治疗效果。一个实例是ricolinostat(化合物A)，其是对HDAC6具有11倍选择性的第一类可口服的HDAC抑制剂，与硼替佐米(Blood,20[210]:4061)和免疫调节剂(Quayle等,ASH,2013)在多发性骨髓瘤的临床前模型中具有协同作用，并且迄今为止在I期试验中证明了改善的安全性和耐受性谱(Raje等，EHA，2014)。
这项工作评估阿扎胞苷和HDAC6或HDAC1/2的选择性HDAC抑制剂对AML细胞的组合效力。
时间过程研究表明，在延长暴露于HDAC抑制剂后诱导分化、细胞周期阻滞的累积和细胞凋亡的启动(参见图3-4)。
图3A-D示出了单一药剂对AML细胞系存活力的活性。简言之，将下列每种细胞系：HL-60、THP-1、MV-4-11、Kasumi-1、NB4和MOLM-13暴露于浓度增加的化合物B(图3A)、化合物A(图3B)、化合物E(图3C)或阿扎胞苷(图3D)以确定它们对药物治疗的反应。化合物B对于HDAC6具有约10倍的选择性。化合物A对HDAC6具有约10倍的选择性。化合物E对HDAC1/2是选择性的。该组细胞系也用阿扎胞苷处理以测量它们的灵敏度。因此，图3A-D中的数据示出了AML细胞系对HDAC抑制敏感。
图4A-F示出了AML细胞系中单一药剂对分化和凋亡的活性。简言之，用指示浓度的化合物处理AML细胞系HL-60(图4A和4D)、Kasumi-1(图4B和4E)和NB4(图4C和4F)。在图4A-C中，在处理后72小时通过FACS测定骨髓分化标志物CD11b的表面水平。化合物B、化合物A和化合物E增加所有三种细胞系中CD11b阳性细胞的百分比。阿扎胞苷增加HL-60(图4A)和Kasumi-1细胞(图4B)中的CD11b阳性细胞，并且在NB4细胞中具有最小的作用(图4C)。在图4D-F中，通过在处理后96小时测量对碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性，通过流式细胞术评估凋亡。然后确定存存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的细胞的相对分数。使用化合物B、化合物A和阿扎胞苷的处理导致相对于对照细胞的凋亡增加。化合物E诱导HL-60(图4D)和Kasumi-1(图4E)细胞中的凋亡，但在NB4细胞中具有最小的作用(图4F)。因此，图4A-F中的数据表明，用化合物B、化合物A、化合物E和阿扎胞苷处理AML细胞诱导分化和凋亡。
将HDAC抑制剂与阿扎胞苷组合在体外AML细胞中导致协同诱导分化和凋亡(参见图5-7)。
图5A-F示出了HL-60细胞系中HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。简言之，将细胞用作为单一药剂或与阿扎胞苷组合的DMSO、化合物B、化合物A或化合物E处理96小时。通过流式细胞术评估CD11b(图5A、5C、5E)的表面水平和凋亡(图5B、5D、5F)，如图4。与单一药剂治疗相比，化合物B与阿扎胞苷，化合物A与阿扎胞苷以及化合物E与阿扎胞苷的组合导致CD11b阳性细胞(图5A、5C、5E)和凋亡细胞(图5B、5D、5F)的协同增加。因此，图5A-F中的数据表明，用化合物B、化合物A或化合物E加阿扎胞苷处理HL-60细胞显著诱导分化和凋亡。
图6A-F示出了Kasumi-1细胞系中HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。简言之，将细胞用作为单一药剂或与阿扎胞苷组合的DMSO、化合物B、化合物A或化合物E在指示浓度处理。在处理后72小时测定CD11b的表面水平(图6A、6C、6E)，并在处理后96小时评估凋亡(图6B、6D、6F)。与单一药剂治疗相比，化合物B、化合物A或化合物E与阿扎胞苷的组合导致CD11b阳性细胞(图6A、6C、6E)和凋亡细胞(图6B、6D、6F)的协同增加。因此，图6A-F中的数据表明，用化合物B、化合物A或化合物E加阿扎胞苷处理Kasumi-1细胞显著诱导分化和凋亡。
图7A-F示出了NB4细胞系中HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。简言之，将细胞用作为单一药剂或与阿扎胞苷组合的DMSO、化合物B、化合物A或化合物E在指示浓度处理。在处理后72小时测定CD11b的表面水平(图7A、7C、7E)，并在处理后96小时评估凋亡(图7B、7D、7F)。化合物B或化合物A与阿扎胞苷的组合导致CD11b阳性细胞的协同增加(图7A、7C)。与单一药物治疗相比，化合物B、化合物A或化合物E与阿扎胞苷的组合导致凋亡细胞的协同增加(图7B、7D、7F)。因此，图7A-F中的数据表明，用化合物B、化合物A或化合物E加阿扎胞苷处理NB4细胞显著诱导分化和凋亡。
对HDAC1/2选择性的HDAC抑制剂示出了出最强的细胞活性。此外，HDAC抑制剂降低AML1-ETO融合蛋白的水平，后者对携带该融合蛋白的细胞系的存活是必需的。在AML的动物模型和原代AML细胞中正在研究药物组合的潜力。总之，这些发现为在AML患者中与阿扎胞苷组合的选择性HDAC抑制剂的临床评价提供了支持
实施例12：HDAC 1/2抑制降低细胞存活力
以下HDAC抑制剂用于评价暴露于HDAC抑制剂时HDAC选择性和AML细胞系的存活力之间的关系：
上图包括在美国专利申请序列号14/169,732中描述的HDAC3选择性抑制剂化合物H，其全部内容并入本文：
图8A-F示出了单一药剂对AML细胞系存活力的活性。简言之，将下列每种细胞系：HL-60、NB4、MV4-11、Kasumi-1、THP-1和MOLM-13暴露于增加剂量的化合物E(图8A)、化合物H(图8B)、化合物C(图8C)、化合物A(图8D)、化合物B(图8E)和化合物G(图8F)72小时以确认其对HDAC抑制的敏感性。存活力计算为对照(DMSO处理的细胞)的百分比。使用GraphPadPrism 6产生生长抑制曲线。化合物E的IC50在其HDAC1/2选择性范围内(图8A)。化合物A和化合物G的IC50在其IC50值对HDAC1/2具有一些抑制作用(图8D和8F)。化合物C和化合物H的IC50分别超过其对HDAC6和HDAC3的选择性范围，并且可能对HDAC1/2具有抑制作用(图8C和8B)。总之，这些数据表明HDAC1/2抑制降低细胞存活力。
实施例13：HDAC 1/2抑制足以诱导分化、细胞周期阻滞和细胞凋亡
图9A-C示出了用指示剂量的化合物的处理MV4-11。图9A示出了在处理后72小时通过FACS测定的骨髓分化标志物CD11b的表面的水平。化合物E、化合物H、化合物A和化合物G增加CD11b阳性细胞的百分比。化合物C对CD11b的阳性细胞没有影响。图9B示出了在处理后72小时渗入EdU和用远红色染色后通过流式细胞术评估细胞周期。测定细胞在G0/G1期、G2/M期、S期和亚G1期的分布。化合物E、化合物A和化合物G诱导细胞周期阻滞。图9C示出了通过在处理后96小时测量碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性通过流式细胞术评估凋亡。然后确定存活的、早期凋亡的、晚期凋亡的或死亡的细胞的相对分数。用化合物E、化合物A和化合物G处理导致相对于对照细胞增加细胞凋亡。
总之，HDAC1/2抑制足以诱导AML细胞系中的分化、细胞周期阻滞和细胞凋亡。HDAC3抑制仅诱导分化标志物CD11b(即，对细胞周期和细胞凋亡没有影响)。选择性HDAC6抑制没有明显的影响或作用。
实施例14：HDAC1/2抑制诱导AML细胞中的分化和凋亡
图10A-F示出了用指示剂量的化合物处理以下AML细胞系：Kasumi-1(图10A和10B)、HL-60(图10C和10D)和NB4(图10E和10F)。图10A、10C和10E示出了在处理后72小时通过FACS测定的骨髓分化标志物CD11b的表面水平。化合物E和化合物A增加所有三种细胞系中CD11b阳性细胞的百分比。图10B、10D和10F示出了通过FACS评估凋亡(参见例如图9C)。
使用化合物E和化合物A的处理导致相对于对照细胞的凋亡增加。此外，化合物E和化合物A在所有三种所述细胞系中以剂量依赖的方式诱导分化和凋亡。
实施例15：HDAC1/2抑制与阿扎胞苷在HL-60细胞中的协同作用
图11A-D示出了HDAC1/2抑制与阿扎胞苷的组合导致HL-60细胞存活力的协同减少。用增加剂量的阿扎胞苷与化合物E(图11A)或与化合物A(图11B)或与化合物H(图11C)或与化合物C(图11D)处理HL-60细胞，并在72小时通过细胞滴度glo测定评估细胞存活力。使用CalcuSyn软件在每个剂量水平测定组合指数(CI)和相对受影响分数(Fa)。CI值小于1(阴影区)的测量强烈支持药物之间的协同相互作用。
观察到与HDAC1/2抑制组合的阿扎胞苷活性的显著增强。化合物E示显示与阿扎胞苷的最强的协同相互作用。
实施例16：HDAC1/2抑制增强阿扎胞苷的活性
图12A-F示出了用阿扎胞苷加化合物E或加化合物A或加化合物B处理MV4-11细胞显著诱导分化和凋亡。用作为单一试剂或与阿扎胞苷组合的化合物E或化合物A或化合物B在指示剂量处理MV4-11细胞。图12A、12C和12E示出了在处理后72小时通过FACS测定的CD11b的表面水平。图12B、12D和12F示出了在处理后96小时通过FACS(如在例如图9C中)评估凋亡。
与任一单一药剂相比，化合物E与阿扎胞苷、化合物A与阿扎胞苷以及化合物B与阿扎胞苷的组合导致进一步增加CD11b阳性细胞的百分比和增强凋亡诱导。如上所述，该实施例示出了与HDAC1/2抑制组合的阿扎胞苷活性的显著增强。
实施例17：化合物A增强通过阿扎胞苷的肿瘤生长抑制
图13A-C示出了用化合物A加阿扎胞苷处理减少体内肿瘤生长。用载剂、阿扎胞苷(5mg/kg IV q3d)或阿扎胞苷(5mg/kg IV q3d)加化合物A(50mg/kg IP 5/2/5/2/5/2/5)处理植入MV4-11细胞的Ncr nu/nu小鼠长达4周。(A)每周两次测量肿瘤体积，并绘制平均肿瘤体积±SD。(B)绘制第19天相对于第1天的肿瘤体积变化。(C)绘制存活曲线。单一药剂阿扎胞苷降低肿瘤生长和增加MV4-11的存活。该效果通过加入化合物A进一步增强。
实施例18：在原代AML样品集落形成测定中HDAC1/2抑制增强阿扎胞苷的活性
图14A-E表明，单独的和与阿扎胞苷组合的HDAC1/2抑制剂减少原代AML患者样品的集落形成。(A)将来自AML患者的6个骨髓样品在基于甲基纤维素的培养基中培养，并且当集落达到合理大小时，用浓度增加的化合物A、化合物J和阿扎胞苷处理14天。绘制每种药物的IC50值。化合物A、化合物J和阿扎胞苷的中值IC50值分别为9.76uM、2.95uM和8.11uM。三种药物的相对效力为化合物J>阿扎胞苷>化合物A.(B-E)将来自AML患者的每个骨髓样品用浓度增加的阿扎胞苷单独或在1uM或3uM化合物J或1uM、3uM或10uM化合物A的存在下进行处理。对每个患者样品绘制IC50值。对于样品4031113SH(B)和样品VMBM0007(C)，化合物J和化合物A降低阿扎胞苷IC50值，表明HDAC1/2抑制与阿扎胞苷对这些原代AML细胞生长具有良好组合效应。对于样品184090514(D)，3uM的化合物J和10uM的化合物A(接近其IC50值的浓度)显著降低阿扎胞苷IC50值，表明良好的组合效果。对于样品103113SH(E)，只有3uM的化合物J降低阿扎胞苷IC50。总之，化合物J在抑制原代AML细胞生长方面比化合物A和氮胞苷更有效。接近或低于其自身IC50值的化合物J显著降低阿扎胞苷对所有4种原代AML细胞集落形成的IC50值。
实施例19：阿扎胞苷、化合物A和化合物J的离体药理学分析
图15A-C示出了单独的以及与阿扎胞苷组合的HDAC1/2抑制剂抑制新鲜来自AML患者骨髓的AML母细胞的增殖。(A-B)，用浓度增加的阿扎胞苷、化合物A和化合物J处理来自AML患者的5个骨髓样品，并通过流式细胞术在96小时定量活AML细胞。绘制IC50值(A)和AUC值(B)。化合物A、化合物J和阿扎胞苷的中值IC50值分别为7.2uM、0.6uM和2.1uM。三种药物的相对效力为化合物J>阿扎胞苷>化合物A，与图2中的结果一致。(C)用增加剂量的阿扎胞苷和化合物J处理来自AML患者的5个骨髓样品，通过流式细胞术在96小时定量活AML细胞。计算组合指数(Comb IDX)，并绘制中值Comb IDX值。在5个样品中的4个中，Comb IDX值小于1，支持两种药物之间对于抑制新鲜来源于AML患者的原代AML细胞的增殖的协同相互作用。
实施例20：基因表达谱分析
将MV4-11细胞以2×105个细胞/ml布板，并用1μM阿扎胞苷、1μM化合物E、2μM化合物E、1μM阿扎胞苷加1μM化合物E、1μM阿扎胞苷加2μM化合物E处理24小时和48小时。收集细胞并分离RNA。RNA样品进行Affymetrix PrimeView基因表达谱分析。在48小时时1μM阿扎胞苷和2μM化合物E是初始数据分析的焦点。通过GSEA(http://www.broadinstitute.org/gsea/index.jsp)分析分子标记。通过单一和组合处理上调的基因和标记显著大于下调的基因和标记，与化合物的机制一致。为了鉴定介导阿扎胞苷与化合物E的组合效应的途径和/或基因，鉴定了通过单一药剂上调和通过组合处理进一步上调的标记和基因。包括凋亡和CEBPA途径(驱动分化的主要转录因子)的标记是鉴定的顶部途径和/或基因之一。超过60基因(包括GATA2和CD86)遵循此表达模式。
实施例21：MV4-11AML细胞系中GATA2表达的诱导
图16.化合物E加阿扎胞苷的处理显著诱导MV4-11细胞中的Gata2。(A-B)将MV4-11细胞以2×105个细胞/ml以指定剂量布板48小时和72小时。制备RNA并分析GATA2和GAPDH作为内部对照。1μM阿扎胞苷和1μM化合物E在48小时和72小时诱导作为单一试剂的GATA2水平。阿扎胞苷和化合物E的组合进一步在两个时间点诱导GATA2表达。
实施例22：AML细胞系中的单一药剂活性
图17.化合物J在AML细胞中降低细胞存活力，诱导CD11b和凋亡。(A)将指示的AML细胞系暴露于浓度增加的化合物J，以确认其对HDAC1/2抑制的敏感性。(B-D)用指示浓度的化合物处理MV4-11细胞。(B)在处理后72小时通过FACS测定骨髓分化标志物CD11b的表面水平。化合物J在增加CD11b阳性细胞的百分比中示出了最高效力。(C)在处理后72小时掺入EdU和用远红色染色后通过流式细胞术评价细胞周期。确定细胞在G0/G1期、G2/M期、S期和亚G1期的分布。化合物J、化合物E和化合物A诱导细胞周期阻滞以及细胞凋亡。(D)通过在处理后96小时测量对碘化丙啶的膜联蛋白V结合和细胞通透性，通过流式细胞术评估凋亡。然后确定活的、早期凋亡、晚期凋亡或死亡细胞的相对分数。用化合物J、化合物E和化合物A的处理导致相对于对照增加细胞凋亡。
通过引用并入
本申请全文引用的所有参考文献(包括参考文献、授权的专利、公开的专利申请和共同未决的专利申请)的内容在此明确地整体并入本文。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语符合本领域普通技术人员通常已知的含义。
等同
本领域技术人员将承认或仅使用常规实验就能够确定本文所提供的具体实施方案的许多等同物。这些等同物旨在被所附权利要求书所涵盖。

Claims (53)

1.用于治疗白血病的药物组合，包含治疗有效量的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的组合，其中所述白血病是急性骨髓性白血病(AML)。
3.权利要求1的组合，其中所述HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂。
4.权利要求1的组合，其中所述HDAC抑制剂是HDAC1/2特异性抑制剂。
5.权利要求1的组合，其中所述HDAC抑制剂是HDAC1/2/6特异性抑制剂。
6.权利要求3的组合，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
环B是芳基或杂芳基；
R1是芳基或杂芳基，其各自可以任选被OH、卤代或C1-6-烷基取代；并且
R是H或C1-6-烷基。
7.权利要求6的组合，其中式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
8.权利要求6的组合，其中式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
9.权利要求3的组合，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式II的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
Rx和Ry与其各自连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基；
每个RA独立地为C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、OH、-NO2、-CN或-NH2；并且
m是0或1。
10.权利要求9的组合，其中式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
11.权利要求9的组合，其中式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
12.权利要求4的组合，其中所述HDAC1/2特异性抑制剂是式III的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
R1是芳基或杂芳基；
R2和R3各自独立地选自C3-6-环烷基、C1-6-烷基-OR6、C1-6-烷基-C3-6-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基、C2-6-烯基；
R6是H或C1-6-烷基；并且
R7是H或C3-6-环烷基。
13.权利要求12的组合，其中式III的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
14.权利要求4的组合，其中所述HDAC1/2特异性抑制剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
15.权利要求5的组合，其中所述HDAC1/2/6特异性抑制剂是式IV的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
Rx独立地选自由–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
Ry选自由H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、–OH、–NO2、–CN、–NH2、–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
每个R1每次出现时独立地选自由H、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-6-烷基-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基、C1-6-烷基-芳基和C1-6-烷基-杂芳基组成的组；并且
Rz选自由C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基和杂芳基组成的组。
16.权利要求15的组合，其中式IV的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
17.权利要求1的组合，其中所述HDAC抑制剂是：
或其药学可接受的盐。
18.权利要求1的组合，其中所述组合还包含药学上可接受的载体。
19.一种用于在有需要的受试者中治疗白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或其药学上可接受的盐和阿扎胞苷或其药学上可接受的盐。
20.权利要求19的方法，其中所述白血病是急性骨髓性白血病(AML)。
21.权利要求19的方法，其中所述HDAC抑制剂是HDAC6特异性抑制剂。
22.权利要求19的方法，其中所述HDAC抑制剂是HDAC1/2特异性抑制剂。
23.权利要求19的方法，其中所述HDAC抑制剂是HDAC1/2/6特异性抑制剂。
24.权利要求21的方法，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
环B是芳基或杂芳基；
R1是芳基或杂芳基，其各自可以任选被OH、卤代或C1-6-烷基取代；并且
R是H或C1-6-烷基。
25.权利要求24的方法，其中式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
26.权利要求24的方法，其中式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
27.权利要求21的方法，其中所述HDAC6特异性抑制剂是式II的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
Rx和Ry与其各自连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基；
每个RA独立地为C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、OH、-NO2、-CN或-NH2；并且
m是0或1。
28.权利要求27的方法，其中式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
29.权利要求27的方法，其中式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
30.权利要求22的方法，其中所述HDAC1/2特异性抑制剂是式III的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
R1是芳基或杂芳基；
R2和R3各自独立地选自C3-6-环烷基、C1-6-烷基-OR6、C1-6-烷基-C3-6-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基、C2-6-烯基；
R6是H或C1-6-烷基；并且
R7是H或C3-6-环烷基。
31.权利要求30的方法，其中式III的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
32.权利要求22的方法，其中所述HDAC1/2特异性抑制剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
33.权利要求23的方法，其中所述HDAC1/2/6特异性抑制剂是式IV的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中
Rx独立地选自由–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
Ry选自由H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、–OH、–NO2、–CN、–NH2、–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
每个R1每次出现时独立地选自由H、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-6-烷基-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基、C1-6-烷基-芳基和C1-6-烷基-杂芳基组成的组；并且
Rz选自由C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基和杂芳基组成的组。
34.权利要求33的方法，其中式IV的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
35.权利要求19的方法，其中所述HDAC抑制剂是：
或其药学可接受的盐。
36.一种在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
环B是芳基或杂芳基；
R1是芳基或杂芳基，其各自可以任选被OH、卤代或C1-6-烷基取代；并且
R是H或C1-6-烷基。
37.权利要求36的方法，其中式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
38.权利要求36的方法，其中式I的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
39.一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式II的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
Rx和Ry与其各自连接的碳一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基；
每个RA独立地为C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、OH、-NO2、-CN或-NH2；并且
m是0或1。
40.权利要求39的方法，其中式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
41.权利要求39的方法，其中式II的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
42.一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式III的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中，
R1是芳基或杂芳基；
R2和R3各自独立地选自C3-6-环烷基、C1-6-烷基-OR6、C1-6-烷基-C3-6-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基、C2-6-烯基；
R6是H或C1-6-烷基；并且
R7是H或C3-6-环烷基。
43.权利要求42的方法，其中式III的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
44.一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
45.一种在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
46.一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的式IV的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中
Rx独立地选自由–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
Ry选自由H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、卤代、–OH、–NO2、–CN、–NH2、–C(O)R1、–CO2R1和–C(O)N(R1)2组成的组；
每个R1每次出现时独立地选自由H、C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基、杂芳基、C1-6-烷基-环烷基、C1-6-烷基-杂环烷基、C1-6-烷基-芳基和C1-6-烷基-杂芳基组成的组；并且
Rz选自由C1-6-烷基、C3-8-环烷基、C3-7-杂环烷基、芳基和杂芳基组成的组。
47.权利要求46的方法，其中式IV的化合物是：
或其药学上可接受的盐。
48.一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的HDAC1/2特异性抑制剂。
49.一种用于在有需要的受试者中治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的HDAC1/2/6特异性抑制剂。
50.根据权利要求36-49中任一项所述的方法，其中所述方法还包括向所述受试者施用阿扎胞苷。
51.一种用于降低癌细胞的细胞存活力的方法，包括施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。
52.一种诱导癌细胞分化的方法，包括施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。
53.一种诱导癌细胞凋亡的方法，包括施用包含HDAC抑制剂和阿扎胞苷的组合。
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