CN106721026A - 一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料及其制备方法与应用 - Google Patents

一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料及其制备方法与应用 Download PDF

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朱秋凤
刘志芳
王继萍
赵恒波
曹岩峰
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Abstract

本发明属于饲料技术领域，涉及一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料及该饲料的制备方法与应用。饲料重量份组成：玉米蛋白粉5‑10份，花生粕8‑25份，米糠5‑10份，芝麻粕15‑25份，膳食纤维20‑50份，大豆油1‑10份，0.5％复合预混料5份，石粉8‑15份，磷酸氢钙8‑15份，食盐2.5‑4.5份，赖氨酸1‑3份，苏氨酸1‑3份，蛋氨酸1‑3份，优可宝0.1‑0.5份，酵母水解物1‑3份，酵母细胞壁粉0.3‑2份，酵母硒0.1‑0.5份，蛋氨酸锌0.1‑0.5份，血红素蛋白0.2‑0.5份，复合酶制剂0.2‑0.5份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份。能够显著提高产蛋率、产蛋量和蛋重。

Description

一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于饲料技术领域，具体地涉及一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，并涉及该饲料的制备方法与应用。
背景技术
随着蛋鸡养殖规模扩大，使用1％蛋鸡预混料、3％蛋鸡预混料和5％蛋鸡预混料的中大型蛋鸡养殖场日渐增多，甚至达到40％以上。养殖现场发现，使用预混料的养鸡场，蛋壳质量不好，粪便稀，死淘率高，严重影响蛋鸡养殖经济效益，每只蛋鸡每年的隐性损失至少5元以上，占蛋鸡利润的30％以上。蛋鸡养殖过程中受大肠杆菌、沙门氏菌等污染，呼吸道疾病、肠道疾病、输卵管疾病等发病率高；造成这些问题的主要原因是，用预混料配制成全价料喂鸡：一是原料单一，只有玉米、豆粕、石粉和预混料，氨基酸平衡和能量蛋白平衡不好把控；二是豆粕使用量大，里面的抗营养因子对鸡的肠道健康有一定损伤；三是粗纤维含量不足，难以保证优质纤维营养，不利于代谢毒素排出；四是混合均匀度差，鸡采食营养不均衡带来的营养不良，产生疾病隐患。蛋鸡养殖过程中饲料霉变容易引发肠炎；滥用消炎药物，促使肠道菌群失衡，引起厌氧菌等的局部优势而发病，产气荚膜梭菌、轮状病毒等侵袭等引起的肠道疾病普遍。
家禽肠黏膜屏障由肠黏膜上皮、肠道内正常菌群、肠道内分泌物和肠相关免疫细胞组成，肠黏膜表面生长着大量的厌氧菌；肠黏膜细胞主要是柱状上皮细胞及少量的杯状细胞，内分泌细胞及细胞肠屏障功能的维持依赖于由胃肠相关淋巴组织产生的特异性的分泌型免疫球蛋白IgA，以及非特异性的机械和化学屏障，如胃酸、蠕动、肠上皮紧密连接、黏液、消化酶和正常菌群等。肠内营养与肠粘膜的屏障功能发挥着机体健康程度和免疫功能的70％作用。因此说，养鸡就是养肠道，只有肠道健康，才会抗病力强，蛋鸡机体才会健康，才能够有效降低亚健康甚至疾病带来的隐形损失。加拿大圭尔夫大学教授Dr.Julang Li，明确了影响肠道健康的三个因素：给予肠道的营养，调整肠道生态环境，及根除肠道的病源；认为“抗菌肽”，不产生耐药性，有效抗菌，同时有助于组织的修复。具备了理想替抗产品的特征。中国农业大学动科院院长呙于明教授研究认为明确了肠道疾病的共性，来自于肠道微生态失衡、防疫屏障损伤、炎症反应、养分吸收障碍及应激代谢,造成生产性能降低及死淘率升高。而锌是六大酶促反应中含Zn酶的活性成分，同时，锌营养与肠道屏障功能密切相关，适宜锌营养有利于鸡粘膜免疫，锌缺乏不利于鸡小肠粘液蛋白的表达；锌缺乏不利于小肠机械屏障及其功能；缺锌时参与体液免疫的主要细胞B细胞细胞的绝对数量减少，并导致T细胞发育异常，甚至缺锌导致胸腺萎缩。
酵母细胞壁粉富含甘露寡糖(20％)、β-葡聚糖(20-40％)等免疫多糖。β-葡聚糖特有的β-1,3-1,6螺旋结构，易被免疫***识别，能提高动物非特异性和特异性免疫力。甘露寡糖能改善动物消化道菌群平衡，防止肠道病原菌定植，具有增强免疫、抗病毒、抗氧化、促生长、吸附细菌及霉菌毒素等多种重要的生物学功能，能够极大地提高人体免疫力。减少应激，充分发挥饲料的营养价值，稳定生产，减少病原菌的危害，降低发病率，降低死淘率，减少养殖用药成本。硒参与机体非特异性免疫、细胞免疫、体液免疫，在抗氧化和免疫功能方面发挥着重要作用。因此酵母硒与酵母细胞壁粉联合使用效果最好。
酵母细胞水解物含有游离氨基酸、小肽、核苷酸和酵母细胞壁成分，能显著提高动物采食量，显著改善动物肠道健康，显著提高机体免疫力，有效吸附霉菌毒素等功能。
水解单宁酸具有以下功能：一是收敛抗腹泻性：其机理为当单宁酸以疏水键、多点氢键与蛋白质反应理论。主要是其酚羟基与蛋白质主链中的肽基、侧链上的羟基、氨基以及羧基多点结合，而促进水分和营养物质更好的吸收。水解单宁酸能有效降低畜禽腹泻率，提高畜禽的生产性能；二是抑菌性、减少抗生素使用；其机理是直接通过抑制微生物氧化磷酸化过程中关键酶的活性，从而影响微生物等原生物质的新陈代谢。单宁酸对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲菌都具有抑制作用。Graz iani等、Molan等；三是抗病毒效果。其机理：单宁酸易与蛋白质结合,进入病毒内部并阻止糖蛋白复制，能使生物体内的原生质凝固,具有抑制病毒内部酶的活性从而使病毒凋亡。日粮纤维主要营养作用为：刺激胃肠道发育；维持肠胃正常蠕动,减少稀粪和便秘发生；
采食适量粗纤维可被后肠道内有益菌发酵降解，预防腹泻，同时因为粗纤维的吸水性，可以将粪便中的水分吸收，减少稀粪问题；维持肠道微生物平衡；解毒作用：日粮纤维可吸附饲料和消化道中产生的某些有害物质，使其排出体外。适量的日粮纤维在后肠发酵，可降低后肠内容物的pH，抑制大肠杆菌等病原菌的生长，防止腹泻。
申请号CN201110355692.8的发明《一种环保、无抗型肉鸡后期配合饲料》，表述了其动物消化利用率高,有效维持消化道菌群平衡,成本低,减少环境污染。本发明由以下原料制成：玉米580-630重量份,豆粕90-120重量份,次粉85-105重量份,菜粕25-45重量份,DDGS50-70重量份,玉米蛋白粉20-40重量份,肉骨粉20-30重量份,碳酸钙3-7重量份,复合维生素0.3-0.7重量份,油脂10-30重量份,赖氨酸2.0-6.0重量份,蛋氨酸0.2-0.6重量份,苏氨酸0.1-0.5重量份,食盐2.0-3.0重量份,抗氧化剂0.3-0.7重量份,微生态制剂0.3-0.7重量份和植酸酶0.1-0.5重量份。该发明是针对肉鸡的产品，在替代抗生素方面只选择了一种益生菌，实践中达不到有效作用，目前替代抗生素的方法必须采用***综合措施。
公开号:102742738A的发明《一种改善蛋壳质量的蛋鸡产蛋期预混合饲料》公开了一种改善蛋壳质量的蛋鸡产蛋期预混合饲料，由以下按重量记份的组分组成：0-40份豆粕、8-11份磷酸一二钙、0-15份酶力肽、0-20份肉骨粉、10-14份麦饭石、5份食盐、2份小苏打、2份胆碱、10-21份石粉、0.3-0.6份98％甜菜碱、1.6-2.2份蛋氨酸、0.24-0.3份植酸酶、0.1-0.2份抗氧化剂、0.06份产酶益生素、4份蛋鸡多矿、0.6份蛋鸡多维、0-23份沸石粉。本发明科学合理搭配，原料优选组合，满足蛋鸡的营养需要，使用先进的添加剂组合，提高抗病力，增强抗应激能力，优质复合酶制剂的使用，改善蛋鸡胃肠生物结构，鸡粪中氮磷等有害物质排放降低，鸡舍内氨等有害气体浓度下降，可以改善饲料利用率，产蛋率提高平均延长鸡产蛋期，降低饲养成本，降低蛋鸡死亡率，可有效改善蛋壳颜色，增强蛋壳强度，减少鸡蛋破损率。该发明核心点是提高蛋壳质量，没有考虑提高抗病力和替代抗生素问题，而本发明主要针对提高蛋鸡免疫功能和提高抗病力，减少蛋鸡养殖中用药。
公开号:106234822A的发明《蛋鸡产蛋期饲料及加工方法》公开的蛋鸡产蛋期饲料，由以下按重量份配比的原料组成：植物茎叶粉末30-60份，谷物和/或豆类粉末150-250份，植物壳类粉末50-150份，中药提取物7-15份，食盐1-3份，功能粉4-7份，鱼粉1-3份。所述功能粉为氨基酸粉、维生素粉、矿物质粉、石粉中的任意一种或几种混合而成。其中植物茎叶粉末、植物壳粉末虽然纤维素含量高，但是为天然状态，不利蛋鸡吸收利用，反而会阻碍营养物质的吸收，利用中药提取物，虽然避免了抗生素的危害，但是起效慢，且用量要求较大。
公开号:105995177A的发明《一种家禽产蛋期饲料及其制备方法》公开的饲料由以下重量份的原料组成：玉米粉30-40份、豆饼5-10份、蚕豆皮5-10份、西瓜皮3-5份、蚯蚓粉5-8份、鬼针草2-3份、山莴苣15-20份、鱼粉5-10份、蒲公英2-5份、蛋氨酸0.1-0.5份、贝壳粉2-3份、松针粉5-10份、食盐2-5份。本发明从家禽的生物特性着手，对饲料成分进行改善，营养均衡，适口性好，易被家禽消化吸收，各成分共同作用，提高了家禽的产蛋率，改善家禽所产蛋的内在品质；促进家禽的快速生长，降低料肉比；提高家禽的免疫力，增强家禽的抗病能力。但是该发明的很多原料都不是常用原料，原料不易得且受季节限制较大，不利于推广应用。
公开号:105876116A的发明《利用鱼虫替代鱼粉的蛋鸡产蛋期的饲料配方》公开了一种利用鱼虫替代鱼粉的蛋鸡产蛋期饲料配方，所述配方由以下原料的重量比重组成：玉米68％，鱼虫30％，磷酸氢钙1.7％，食盐0.3％。由于传统养殖配方中的鱼粉严重不足，不易消化，所述配方中的鱼虫取之不尽，用之不竭，又易于消化，因此，所述配方用鱼虫代替传统养殖配方中的鱼粉，在蛋鸡产蛋期，有利于降低成本，使蛋黄红，蛋清稠，延长产蛋周期，降低死亡率。所述配方适用于产蛋率5％-高峰阶段的蛋鸡应用。该发明的核心点是鱼虫的使用，于本发明的核心点明显不同。
公开号:105851613A的发明《一种蛋鸡的饲喂饲料》公开了一种蛋鸡的饲喂饲料，包括雏鸡饲料、青年鸡饲料、产蛋期饲料，其中所述产蛋期饲料按照质量份包括玉米65-70份、麸皮10-15份、豆粕10-20份、菜籽粕5-10份、鱼粉3-5份、石粉3-5份、骨粉1-3份、食盐1-2份、氨基酸0.5-1份、维生素1-2份、微量元素1-2份。本发明蛋鸡的饲喂饲料，在蛋鸡的不同成长过程中，提供不同的饲料配方，该饲料不仅具有丰富的营养成分，而且成本低，养殖户可以根据需要灵活地改变饲料成分配比。该发明组分过于简单，属于常规饲料，并且提高消化率的生物活性物质如酶制剂、微生态制剂等都没有使用，标准化程度低，不能满足蛋鸡产蛋期营养需求，易发生蛋鸡为了产蛋动用体储备，以健康为代价满足最大产蛋需求，造成体重不达标，抗病力降低的现象。
综上所述，目前普遍使用的蛋鸡预混料存在营养不均衡，容易造成使用预混料的养鸡场，蛋壳质量不好，粪便稀，死淘率高，养殖用药量大等严重影响蛋鸡养殖经济效益等诸多问题。
发明内容
本发明根据蛋鸡生理机能和营养特点，从日粮纤维营养、肠道健康的添加剂、提高免疫功能营养、功能性氨基酸等方面着手，有效降低呼吸道疾病、肠道疾病、输卵管疾病等，提高蛋壳质量和肠道健康水平，进而降低发病率，减少养殖用药，提供安全鸡蛋产品，提高蛋鸡养殖经济效益。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉5-10份，花生粕8-25份，米糠5-10份，芝麻粕15-25份，膳食纤维20-50份，大豆油1-10份，0.5％复合预混料5份，石粉8-15份，磷酸氢钙8-15份，食盐2.5-4.5份，赖氨酸1-3份，苏氨酸1-3份，蛋氨酸1-3份，优可宝0.1-0.5份，酵母水解物1-3份，酵母细胞壁粉0.3-2份，酵母硒0.1-0.5份，蛋氨酸锌0.1-0.5份，血红素蛋白0.2-0.5份，复合酶制剂0.2-0.5份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份；
进一步地，所述复合酶制剂由木聚糖酶、纤维素酶、脂肪酶和蛋白酶组成；
进一步，所述膳食纤维由洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维混合，经超声提取、生物酶解后发酵得到；
所述膳食纤维制备方法包括以下步骤：将洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维按质量比1:3:8:3均匀混合，加入混合物质量8倍的水，室温300W、40KHz条件超声提取20min，用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解45min，灭酶；酶解液70℃，18-20MPa均质，物料冷却至25-30℃后，加入混合物质量3-5％的葡萄糖，0.2-0.5％的混合菌种，25-30℃培养48-72小时，搅拌转速为20-30r/min，培养到50-55小时添加混合物质量0.005-0.1％的L-半胱氨酸和0.05-0.1％的甘草超微粉，发酵结束后减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得膳食纤维；
所述混合菌种含有如下有效活菌数：枯草芽孢杆菌≥100亿/g、地衣芽孢杆菌≥1000亿/g、酵母菌≥100亿/g、乳酸菌≥50亿/g；
优选的，所述酵母菌为酿酒酵母；
进一步的，所述酵母菌为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789；
所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:9:2:4:1均匀混合；
进一步，所述洋葱粉制备方法包括如下步骤：
新鲜洋葱去外皮，清洗，加入洋葱重量12倍的水打浆，之后加入洋葱重量0.03％的混合酶制剂进行酶解，调节pH值为4.5，温度55℃，酶解3h，将酶解液在55℃、300W、80KHz条件下超声提取20min，4-6℃放置12h，过滤后真空浓缩、冷冻干燥、粉碎即得洋葱粉；
所述混合酶制剂由如下重量份数的原料组成：纤维素酶2、蛋白酶1、α-淀粉酶2、木聚糖酶0.5；
所述真空浓缩，具体为：一效75-85℃，真空度0.07MPa，二效65-75℃，真空度0.05MPa，三效45-55℃，真空度0.04MPa。
进一步，所述酵母水解物的制备方法，包括以下步骤：
(1)摇瓶培养
取斜面酵母菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中，150rpm,30℃培养30h得酵母种子液；
摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；
(2)5L发酵罐培养
将酵母种子液按10％质量百分比接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h，得发酵液；
发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO4 10、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O 8、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1,pH6.0。
(3)制备酵母泥：将步骤(2)制得的发酵液通过离心机进行固液分离，收集酵母泥；
(4)酵母细胞破壁：将步骤(3)所得的酵母泥和水在自溶罐中按1∶1.5质量比例调浆，调整pH值6-8，加温到80℃，灭活40分钟；降温到40℃-50℃保温自溶24h；加入混合酶制剂，用量为酵母泥质量的1％-1.5％；搅拌，酶法水解10h-24h。
所述混合酶制剂由蛋白酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、耐高温淀粉酶等量混合而成；
(5)喷雾干燥120℃-140℃喷雾干燥使水分含量小于10％，即得酵母水解物。
较佳的，所述酵母为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。
本发明同时提供一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的制备方法，包括以下步骤：
按照配方准确称取各组分原料，将复合酶制剂、酵母细胞壁粉、酵母水解物与0.5％复合预混料预先混合，然后按重量份数自大至小依次加入各种原料，混合均匀，加工制粒，即得无抗蛋鸡产蛋期复合预混和饲料。
无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的应用方法为：按照以下配比，玉米62％，豆粕20％，石粉8％，无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料10％；将玉米、豆粕、石粉分别粉碎后，与本发明复合预混合饲料混匀后使用。
有益效果
本发明根据蛋鸡生理机能和营养特点，从日粮纤维营养、肠道健康的添加剂、提高免疫功能营养、功能性氨基酸等方面着手，有效降低呼吸道疾病、肠道疾病、输卵管疾病等，提高蛋壳质量和肠道健康水平，进而降低发病率，减少死淘率，减少养殖中抗生素使用，提供安全鸡蛋产品，提高蛋鸡养殖经济效益。经饲喂试验表明：产蛋率提高3.37％，产蛋量提高7.65％，蛋重提高4.13％，死亡率比对照组降低3.1％，每只鸡多赚钱5.39元，总抗氧化能力T-AOC等抗氧化指标提高54.1％，效果明显。
特别是采用特定方法制备的膳食纤维，可溶性膳食纤维含量高、生物活性强，并保留了一定数量的非水溶性膳食纤维，与益生元配合，能够显著地改善肠道菌群，提高肠道益生菌群的数量，调节和维持肠道益生菌群的定植时间，增强肠道的消化和吸收能力，提高动物免疫力。膳食纤维的制备，将酶解、超声提取与超微粉碎技术相结合，采用特定的工艺条件，在提高可溶性膳食纤维含量的同时，并可改善可溶性膳食纤维及非水溶性膳食纤维的特性，其持水性、膨胀性、增稠性均有不同程度提高。选用洋葱粉制备膳食纤维，洋葱：性味辛温，甜润白嫩，除含有常见的营养物质外，其所含的***素A和硫胺基酸，有扩张血管，调节血脂，防止动脉硬化的作用，赋予本发明膳食纤维与同类膳食纤维不同的重要特性。
采用特定工艺制备酵母水解液，能够明显提高谷胱苷肽的含量，谷胱苷肽具有抗氧化、清除自由基、解毒、增强免疫力、延缓衰老、抗癌、抗放射线危害等功能，是重要的功能因子，能够改善雏鸡的皮肤健康状况，及羽毛的光泽度，具有增强免疫功能、强化营养的作用。与益生元等协同作用，能够促进有益菌的增殖，改善雏鸡小肠绒毛发育，降低腹泻率，提高动物免疫力；特别是添加高产谷胱苷肽的保藏菌种tlj2016，更能够显著提高谷胱苷肽含量，发酵结束后，发酵液中GSH的含量能够达到3308mg/L，谷胱苷肽作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，能够把机体内有害的毒物转化为无害的物质，***出体外，对改善育成蛋鸡的身体机能，很有益处。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
所述酿酒酵母菌株具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，该菌株已于2016年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12789，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。
所述酿酒酵母tlj2016的最适生长pH为6.0-6.5，最适生长温度为28-35℃；
所述酿酒酵母tlj2016是从一株宁夏果园中分离得到的酿酒酵母出发菌株经以下步骤得到：
原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→高渗平板筛选→亚硝基胍(NTG)诱变筛选→高渗平板初筛→摇瓶筛选→发酵复筛(产谷胱苷肽GSH能力)→传代稳定性试验。
经过诱变后获得的菌株tlj2016，其葡萄糖耐受能力以及L-半胱氨酸耐受能力均得到提高，一方面在高浓度葡萄糖培养下能够提高细胞密度，另一方面L-半胱氨酸耐受能力的提高将有利于GSH在胞内大量合成，从而提高菌株大规模生产GSH的能力。
本发明所采用的酿酒酵母对葡萄糖的耐受能力达到300g/L，利于其在高浓度葡萄糖条件下生产GSH；在5L发酵罐中发酵生产GSH终浓度达到3308mg/L；耐受L-半胱氨酸的能力远高于出发菌株，在5mmol/L L-半胱氨酸作用下仍能缓慢生长，在40mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能保持GSH大量合成；耐盐能力达到18％，有利于扩展其应用领域。
1.DES诱变选育
1)在超净台上取试管斜面上的出发菌株1一环，接入装有50mL麦芽汁培养基的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培养10h左右，使菌体处于对数生长前期。
2)取5mL菌液，5000rpm离心10min收集菌体，用生理盐水洗涤2次。
3)用pH7.0磷酸缓冲液稀释成107个/mL菌悬液。
4)取32mL pH7.0的磷酸钾缓冲液、8mL菌悬液、0.4mL DES在预先放入转子的150mL三角瓶中充分混合，使DES最终浓度为1％(v/v)。
5)在30℃摇床中150rpm反应30min，取1mL混合液，加入0.5mL 25％Na2S2O3溶液中止反应。
6)稀释涂布于含150g/L KCl的麦芽汁培养基平皿中，在30℃培养2-3天后挑取菌落最大的菌株1。
2.亚硝基胍诱变
1)在超净台上取试管斜面上的酿酒酵母菌菌株1一环，接入装有50mL麦芽汁培养基的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培养10h左右，使菌体处于对数生长前期。
2)取5mL菌液5000rpm离心10min收集菌体，用生理盐水洗涤2次。
3)用pH6.0磷酸缓冲液稀释成107个/mL菌悬液。
4)取10mL菌悬液转移至100mL三角瓶中，加入10mg的NTG，配制成终浓度为10mg/mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。
5)在30℃下200rpm振荡反应30min，5000rpm离心10min收集菌体，用无菌生理盐水洗涤数次，中止反应。
6)适当稀释涂布，取最后稀释度的菌液0.2mL，涂布于含200g/L KCl的麦芽汁培养基平皿中。在30℃培养2-3天后挑取菌落20支。
3.摇瓶初筛
1)在超净台上分别取上述20支酿酒酵母菌各一环，分别接入装有50mL麦芽汁培养基的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培养12h左右，使菌体处于对数生长中期。
2)取5mL菌液，接入装有50mL高渗麦芽汁培养基(葡萄糖浓度为300g/L)中的250mL三角瓶中，200rpm，30℃培养3-4天，每天检测葡萄糖浓度和乙醇浓度变化。发酵结束后，比较20株菌种的葡萄糖和乙醇消耗速率、最终残糖浓度和乙醇浓度、葡萄糖对乙醇的转化率以及杂酸含量。
3)选择葡萄糖消耗速率快、最终残糖浓度低和乙醇浓度高的5株菌命名为Y-1，Y-2，Y-3，Y-4，Y-5。
4.发酵复筛
将步骤3中所得的5株菌Y-1，Y-2，Y-3，Y-4，Y-5以及出发菌株，分别按照10％接种量，在装有30mL液体培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h，取发酵液测定GSH浓度；
液体培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1；
GSH测定方法：发酵液离心洗涤后得新鲜酵母，30℃下，40％乙醇处理3h，离心取上清液做GSH测定样品；
采用四氧嘧啶法进行GSH测定：其原理为GSH上的-SH与四氧嘧啶反应，生成的物质在305nm处有吸收峰，且与谷胱甘肽浓度成线性关系，故可用紫外分光光度计进行定量测定GSH含量。
表1：GSH检测结果
菌株 出发菌株 Y-1 Y-2 Y-3 Y-4 Y-5
GSH浓度(mg/L) 127.9 195.7 172.3 263.2 216.5 185.2
由表1结果可知，菌株Y-3具有最高的GSH发酵能力，因此确定Y-3为最终的生产菌株，并将其命名为tlj2016。
5.遗传稳定性试验
将tlj2016菌在斜面上连续十次传代，并用摇瓶复筛的方法检测每次传代后的发酵情况。实验发现，在斜面上连续十次传代，该菌种性状没有明显变化，各项性能指标都正常，说明该菌种的遗传稳定性较强。
酿酒酵母tlj2016高糖条件下发酵产GSH能力实验
(1)摇瓶培养
取tlj2016斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；
摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；
(2)5L发酵罐培养
将种子液按10％质量百分比的接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h；
发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO4 10、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O 8、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1,pH6.0；
发酵结束后，测定发酵液中GSH的含量为3308mg/L。
酿酒酵母tlj2016L-半胱氨酸耐受力实验
将出发菌株以及tlj2016斜面菌种各一环，分别接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养进行培养，在培养至12h时，向摇瓶中加入不同终浓度的L-半胱氨酸，再培养10h，测定细胞干重，结果表2、3；
摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖20、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；
表2：出发菌株L-半胱氨酸耐受力
L-半胱氨酸浓度mmol/L 0 5 10 15 20 40
出发菌株干重g/L 22.6 15.7 10.2 4.3 2.2 0.8
GSH浓度(mg/L) 35.6 46.7 43.2 40.7 37.9 25.3
表3：tlj2016L-半胱氨酸耐受力
L-半胱氨酸浓度mmol/L 0 5 10 15 20 40
tlj2016干重g/L 25.7 28.5 23.6 21.2 20.6 18.7
GSH浓度(mg/L) 73.2 98.3 113.5 121.7 127.5 135.8
从表2的结果可以看出，对于出发菌株，培养基中添加L-半胱氨酸，细胞停止生长，并且开始自溶，导致GSH增长率随着L-半胱氨酸浓度的升高而降低；从表3的结果可以看出，低浓度L-半胱氨酸下，tlj2016仍能够缓慢生长，随着L-半胱氨酸浓度的提高，tlj2016菌株的细胞干重缓慢下降，而GSH浓度持续增长，这一结果将有利于GSH生产过程中通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸促进GSH的生产。
酿酒酵母tlj2016耐盐能力实验
取tlj2016菌液1mL接种菌种于含有不同NaCl浓度的(含量梯度为0％、2％、5％、10％、15％、18％)的10mL YPD液体培养基(pH＝6.5)，置于30℃下分别培养24h，每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀，制备稀释度溶液，取0.1ml稀释液于YPD固体平板中涂布，于30℃生化培养箱中倒置培养36小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表4，可知该菌的耐盐浓度为18％，说明tlj2016不仅可以在常规环境中生存，在高盐条件下依然具有活力，可应用于酱油、腌制品等高盐食品加工过程中耗糖产谷胱甘肽。
表4：耐盐能力检测(×107cfu/ml)
实施例1
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉8份，花生粕19份，米糠6份，芝麻粕20份，膳食纤维20份，大豆油1.5份，0.5％复合预混料5份，石粉10份，磷酸氢钙12份，食盐3.5份，赖氨酸1.3份，苏氨酸1份，蛋氨酸1.5份，优可宝0.2份，酵母水解物1份，蛋氨酸锌0.5份，复合酶制剂0.5份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份，酵母细胞壁粉1份，酵母硒0.3份，血红素蛋白0.3份；
所述膳食纤维由洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维混合，经超声提取、生物酶解后发酵得到；
所述膳食纤维制备方法包括以下步骤：
将洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维按质量比1:3:8:3均匀混合，加入混合物质量8倍的水，室温300W、40KHz条件超声提取20min，用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解45min，灭酶；酶解液70℃，18-20MPa均质，物料冷却至28℃后，加入混合物质量4％的葡萄糖，0.4％的混合菌种，28℃培养60小时，搅拌转速为25r/min，培养到52小时添加混合物质量0.05％的L-半胱氨酸和0.1％的甘草超微粉，发酵结束后减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.2mm即得膳食纤维；
所述混合菌种含有如下有效活菌数：枯草芽孢杆菌≥100亿/g、地衣芽孢杆菌≥1000亿/g、酵母菌≥100亿/g、乳酸菌≥50亿/g；
所述酵母菌为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789；
所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:9:2:4:1均匀混合；
所述洋葱粉制备方法包括如下步骤：
新鲜洋葱去外皮，清洗，加入洋葱重量12倍的水打浆，之后加入洋葱重量0.03％的混合酶制剂进行酶解，调节pH值为4.5，温度55℃，酶解3h，将酶解液在55℃、300W、80KHz条件下超声提取20min，4-6℃放置12h，过滤后真空浓缩、冷冻干燥、粉碎即得洋葱粉；
所述混合酶制剂由如下重量份数的原料组成：纤维素酶2、蛋白酶1、α-淀粉酶2、木聚糖酶0.5；
所述真空浓缩，具体为：一效75-85℃，真空度0.07MPa，二效65-75℃，真空度0.05MPa，三效45-55℃，真空度0.04MPa。
所述酵母水解物的制备方法，包括以下步骤：
(1)摇瓶培养
取斜面酵母菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中，150rpm,30℃培养30h得酵母种子液；
摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；
(2)5L发酵罐培养
将酵母种子液按10％质量百分比接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h，得发酵液；
发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO4 10、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O 8、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1,pH6.0。
(3)制备酵母泥：将步骤(2)制得的发酵液通过离心机进行固液分离，收集酵母泥；
(4)酵母细胞破壁：将步骤(3)所得的酵母泥和水在自溶罐中按1∶1.5质量比例调浆，调整pH值7，加温到80℃，灭活40分钟；降温到45℃保温自溶24h；加入混合酶制剂，用量为酵母泥质量的1.2％；搅拌，酶法水解18h。
所述混合酶制剂由蛋白酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、耐高温淀粉酶等量混合而成；
(5)喷雾干燥130℃喷雾干燥使水分含量小于10％，即得酵母水解物。
所述酵母为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的制备方法，包括以下步骤：
按照配方准确称取各组分原料，将复合酶制剂、酵母细胞壁粉、酵母水解物与0.5％复合预混料预先混合，然后按重量份数自大至小依次加入各种原料，混合均匀，加工制粒，即得无抗蛋鸡产蛋期复合预混和饲料。
所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的应用方法为：按照以下配比，玉米62％，豆粕20％，石粉8％，本发明无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料10％；将玉米、豆粕、石粉分别粉碎后，与本发明复合预混合饲料混匀后使用。
实施例2
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉10份，花生粕18份，米糠5份，膳食纤维28份，大豆油1.5份，0.5％复合预混料5份，石粉10份，磷酸氢钙12份，食盐3.5份，赖氨酸1.3份，苏氨酸1份，蛋氨酸1.5份，血红素蛋白0.2份，酵母硒0.3份，酵母细胞壁粉0.5份，复合酶制剂0.5份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份，芝麻粕15份，优可宝0.5份，酵母水解物3份，蛋氨酸锌0.1份；
所述膳食纤维由洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维混合，经超声提取、生物酶解后发酵得到；
所述膳食纤维制备方法包括以下步骤：将洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维按质量比1:3:8:3均匀混合，加入混合物质量8倍的水，室温300W、40KHz条件超声提取20min，用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解45min，灭酶；酶解液70℃，18-20MPa均质，物料冷却至25℃后，加入混合物质量5％的葡萄糖，0.5％的混合菌种，25℃培养72小时，搅拌转速为30r/min，培养到50小时添加混合物质量0.005％的L-半胱氨酸和0.1％的甘草超微粉，发酵结束后减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.1mm即得膳食纤维；
所述混合菌种含有如下有效活菌数：枯草芽孢杆菌≥100亿/g、地衣芽孢杆菌≥1000亿/g、酵母菌≥100亿/g、乳酸菌≥50亿/g；
所述酵母菌为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789；
所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:9:2:4:1均匀混合；
所述洋葱粉制备方法包括如下步骤：
新鲜洋葱去外皮，清洗，加入洋葱重量12倍的水打浆，之后加入洋葱重量0.03％的混合酶制剂进行酶解，调节pH值为4.5，温度55℃，酶解3h，将酶解液在55℃、300W、80KHz条件下超声提取20min，4-6℃放置12h，过滤后真空浓缩、冷冻干燥、粉碎即得洋葱粉；
所述混合酶制剂由如下重量份数的原料组成：纤维素酶2、蛋白酶1、α-淀粉酶2、木聚糖酶0.5；
所述真空浓缩，具体为：一效75-85℃，真空度0.07MPa，二效65-75℃，真空度0.05MPa，三效45-55℃，真空度0.04MPa。
所述酵母水解物的制备方法，包括以下步骤：
(1)摇瓶培养
取斜面酵母菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中，150rpm,30℃培养30h得酵母种子液；
摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；
(2)5L发酵罐培养
将酵母种子液按10％质量百分比接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h，得发酵液；
发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO4 10、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O 8、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1,pH6.0。
(3)制备酵母泥：将步骤(2)制得的发酵液通过离心机进行固液分离，收集酵母泥；
(4)酵母细胞破壁：将步骤(3)所得的酵母泥和水在自溶罐中按1∶1.5质量比例调浆，调整pH值6，加温到80℃，灭活40分钟；降温到40℃保温自溶24h；加入混合酶制剂，用量为酵母泥质量的1.5％；搅拌，酶法水解10h。
所述混合酶制剂由蛋白酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、耐高温淀粉酶等量混合而成；
(5)喷雾干燥120℃喷雾干燥使水分含量小于10％，即得酵母水解物。
所述酵母为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的制备方法和应用方法，同实施例1；
实施例3
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉5份，花生粕8份，膳食纤维36份，大豆油1.5份，0.5％复合预混料5份，石粉10份，磷酸氢钙12份，食盐3.5份，赖氨酸1.5份，苏氨酸1份，蛋氨酸1.5份，优可宝0.2份，酵母硒0.3份，酵母细胞壁粉0.5份，复合酶制剂0.5份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份，米糠5份，芝麻粕25份，酵母水解物3份，蛋氨酸锌0.5份，血红素蛋白0.5份；
所述膳食纤维由洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维混合，经超声提取、生物酶解后发酵得到；
所述膳食纤维制备方法包括以下步骤：将洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维按质量比1:3:8:3均匀混合，加入混合物质量8倍的水，室温300W、40KHz条件超声提取20min，用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解45min，灭酶；酶解液70℃，18-20MPa均质，物料冷却至30℃后，加入混合物质量3％的葡萄糖，0.2％的混合菌种，30℃培养48小时，搅拌转速为20r/min，培养到50小时添加混合物质量0.1％的L-半胱氨酸和0.05％的甘草超微粉，发酵结束后减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.3mm即得膳食纤维；
所述混合菌种含有如下有效活菌数：枯草芽孢杆菌≥100亿/g、地衣芽孢杆菌≥1000亿/g、酵母菌≥100亿/g、乳酸菌≥50亿/g；
所述酵母菌为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789；
所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:9:2:4:1均匀混合；
所述洋葱粉制备方法包括如下步骤：
新鲜洋葱去外皮，清洗，加入洋葱重量12倍的水打浆，之后加入洋葱重量0.03％的混合酶制剂进行酶解，调节pH值为4.5，温度55℃，酶解3h，将酶解液在55℃、300W、80KHz条件下超声提取20min，4-6℃放置12h，过滤后真空浓缩、冷冻干燥、粉碎即得洋葱粉；
所述混合酶制剂由如下重量份数的原料组成：纤维素酶2、蛋白酶1、α-淀粉酶2、木聚糖酶0.5；
所述真空浓缩，具体为：一效75-85℃，真空度0.07MPa，二效65-75℃，真空度0.05MPa，三效45-55℃，真空度0.04MPa。
所述酵母水解物的制备方法，包括以下步骤：
(1)摇瓶培养
取斜面酵母菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中，150rpm,30℃培养30h得酵母种子液；
摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；
(2)5L发酵罐培养
将酵母种子液按10％质量百分比接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h，得发酵液；
发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO4 10、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O 8、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1,pH6.0。
(3)制备酵母泥：将步骤(2)制得的发酵液通过离心机进行固液分离，收集酵母泥；
(4)酵母细胞破壁：将步骤(3)所得的酵母泥和水在自溶罐中按1∶1.5质量比例调浆，调整pH值8，加温到80℃，灭活40分钟；降温到50℃保温自溶24h；加入混合酶制剂，用量为酵母泥质量的1％；搅拌，酶法水解24h。
所述混合酶制剂由蛋白酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、耐高温淀粉酶等量混合而成；
(5)喷雾干燥140℃喷雾干燥使水分含量小于10％，即得酵母水解物。
所述酵母为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的制备方法和应用方法，同实施例1。
实施例4
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉6份，花生粕25份，米糠10份，芝麻粕15份，膳食纤维50份，大豆油1份，复合预混料5份，石粉8份，磷酸氢钙15份，食盐2.5份，赖氨酸3份，苏氨酸3份，蛋氨酸1份，优可宝0.1份，酵母水解物1份，酵母细胞壁粉0.3份，酵母硒0.5份，蛋氨酸锌0.1份，血红素蛋白0.2份，复合酶制剂0.2份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份；
所述膳食纤维制备方法同实施例1；
所述洋葱粉制备方法同实施例1；
所述酵母水解物的制备方法同实施例1；
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的制备方法和应用方法，同实施例1；
实施例5
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉8份，花生粕13份，米糠8份，芝麻粕20份，膳食纤维20份，大豆油10份，复合预混料5份，石粉15份，磷酸氢钙8份，食盐4.5份，赖氨酸1份，苏氨酸1份，蛋氨酸3份，优可宝0.5份，酵母水解物1份，酵母细胞壁粉2份，酵母硒0.1份，蛋氨酸锌0.5份，血红素蛋白0.4份，复合酶制剂0.4份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份；
所述膳食纤维制备方法同实施例2；
所述酵母菌为本领域常规的酿酒酵母；
所述洋葱粉制备方法同实施例2；
所述酵母水解物的制备方法同实施例2；
所述酵母菌为本领域常规的酿酒酵母；
一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的制备方法和应用方法，同实施例1；
上述实施例1-5中
0.5％复合预混料，辽宁禾丰牧业股份有限公司生产，Q/HF J02.03-2012，辽饲预字(2013)003024；
1万单位植酸酶：北京新大洋科技发展有限公司，生产许可证号为饲添(2012)0017，批准文号：京饲(添)字(2012)403711；
复合酶制剂：沈阳丰美生物技术有限公司生产，生产许可证号为饲添(2011)1986，批准文号：辽饲(添)字(2011)040008；
优可宝：意大利施华公司，(2011)外饲准字328号；产品有效成分：水解单宁酸75％；主要作用：收敛控制腹泻，选择性抑菌，抗病毒，天然抗氧化；提高蛋壳颜色、降低死亡率，改善鸡舍空气质量。
试验例：
以下通过与本领域同类饲料的对比试验，对本发明无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料对蛋鸡免疫功能和产蛋性能的影响做进一步说明
1实验材料和方法
1.1试验时间：试验于2015年8月20日——2015年12月20日，共计121天，其中预试期7天。
1.2试验地点：试验在桓仁新华鸡场实验场实施。
1.3试验组设计：试验组分为对照组和本发明饲料组；按照以下配方：玉米62％，豆粕20％，石粉8％，复合预混合饲料10％，分别将玉米、豆粕、石粉粉碎后，与本发明各实施例制备的预混料、市场销售较好的同类预混料混匀，试验组分别饲喂混有本发明实施例1-5预混料的的饲料，对照组饲喂混有市售同类预混料的饲料。试验采用单因子实验设计，随机选择1152只海兰褐220日龄蛋鸡，分为6组，每组设6个重复，每个重复32只鸡。
玉米容重要求710以上，豆粕粗蛋白44％以上，石粉粒度为4.0毫米以上达到65％。
1.4喂料方法：手动上料，每天3次，自由采食；自由饮水，自来水，水温15-21℃。
1.5鸡舍温度：采用纵向通风，鸡舍温度控制在20-22℃。按照海兰褐饲养管理严格控制。
1.6试验检测指标：1)称重：初始体重，结束体重。每个重复称量1笼鸡，逐只称量。采食量：自由采食，按周清算耗料量；期间累计死亡鸡只数。
2)产蛋枚数、蛋重、破蛋和软皮蛋；3)血液免疫指标：IgA,IgG,IgM；
抗氧化指标：谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX、超氧化物岐化酶T-SOD、丙二醛MDA和总抗氧化能力T-AOC。采血方法采用心脏采血。
1.7数据处理与分析
所有实验数据采用excel表格进行整理，然后用SPSS17.0软件进行统计分析，结果采用平均数±标准差(X±SD)表示。
2试验结果
将6栋鸡舍6个批次试验指标检测结果统计，将本发明各组数据取平均值，统计结果如表5、表6和表7：
表5：本发明对蛋鸡生产性能的影响
初始体重(千克) 结束体重(千克) 体增重(克) 死亡率(％)
本发明组 1.85 1.96 110 0.8
对照组 1.86 1.89 30 3.9
由表5可见，本发明组在220日龄到341日龄期间体增重达标，蛋鸡在此期间体重达标说明产蛋持久性强，多产蛋；而对照组体重没有达标；体增重达标，表明没有动用体储备进行产蛋，机体健康状态会好，抗病力增强。体重不达标，说明蛋鸡为了产蛋动用了体储备，以健康为代价满足最大产蛋需求，会降低抗病力。死亡率比对照组降低3.1％，1万只鸡少死亡310只鸡，减少经济损失9300元以上。
表6：本发明对蛋鸡产蛋性能的影响
本发明组 对照组
采食量(克) 113.2±0.27 117.3±0.34
产蛋率(％) 96.55±1.24a 93.39±1.31b
蛋重(克) 63.68±0.45a 61.15±0.83b
料蛋比 1.97±0.08 2.25±0.15
产蛋量(克/只/日) 61.48±1.08a 57.11±1.84b
只盈利(元/只) 26.95 21.56
由表6可见，本发明与对照组相比，产蛋率提高3.37％，产蛋量提高7.65％，蛋重提高4.13％，每只鸡多赚钱5.39元。
表7：本发明对蛋鸡免疫机能和抗氧化功能的影响
由表7可见，本发明饲料组蛋鸡免疫功能指标IgA、IgG、IgM均比对照组大幅度提高，说明采用增强免疫功能苏氨酸、蛋氨酸、维生素A、酵母细胞壁粉和酵母水解物、酵母硒等系列综合措施的免疫营养管理，有效的增强了免疫细胞的免疫活性，有利于维持高水平的健康状态，提高抗病力。本发明组谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX、超氧化物岐化酶T-SOD、丙二醛MDA和总抗氧化能力T-AOC等抗氧化指标也明显提高，说明饲料中的玉米蛋白粉中的天然叶黄素、水解单宁酸、蛋氨酸锌等相关营养直接影响蛋鸡血液的抗氧化指标，蛋鸡抗氧化能力增强，提高肠道健康状态，从而提高蛋鸡机体健康水平，增强抗病力，减少养殖用药。
以上实验说明本发明具有较好的肠道健康、产蛋性能、免疫功能强及抗病力强等效果，可以作为无抗日粮应用和普及。

Claims (10)

1.一种无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉5-10份，花生粕8-25份，米糠5-10份，芝麻粕15-25份，膳食纤维20-50份，大豆油1-10份，0.5％复合预混料5份，石粉8-15份，磷酸氢钙8-15份，食盐2.5-4.5份，赖氨酸1-3份，苏氨酸1-3份，蛋氨酸1-3份，优可宝0.1-0.5份，酵母水解物1-3份，酵母细胞壁粉0.3-2份，酵母硒0.1-0.5份，蛋氨酸锌0.1-0.5份，血红素蛋白0.2-0.5份，复合酶制剂0.2-0.5份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份；
其特征在于，所述膳食纤维由洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维混合，经超声提取、生物酶解后发酵得到；
所述膳食纤维制备方法包括以下步骤：将洋葱粉、大麦纤维、燕麦纤维、小麦胚芽纤维按质量比1:3:8:3均匀混合，加入混合物质量8倍的水，室温300W、40KHz条件超声提取20min，用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解45min，灭酶；酶解液70℃，18-20MPa均质，物料冷却至25-30℃后，加入混合物质量3-5％的葡萄糖，0.2-0.5％的混合菌种，25-30℃培养48-72小时，搅拌转速为20-30r/min，培养到50-55小时添加混合物质量0.005-0.1％的L-半胱氨酸和0.05-0.1％的甘草超微粉，发酵结束后减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得膳食纤维。
2.根据权利要求1所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，其特征在于，所述混合菌种含有如下有效活菌数：枯草芽孢杆菌≥100亿/g、地衣芽孢杆菌≥1000亿/g、酵母菌≥100亿/g、乳酸菌≥50亿/g。
3.根据权利要求2所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，其特征在于，所述酵母菌为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。
4.根据权利要求1所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，其特征在于，所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:9:2:4:1均匀混合。
5.根据权利要求1所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，其特征在于，所述洋葱粉制备方法包括如下步骤：
新鲜洋葱去外皮，清洗，加入洋葱重量12倍的水打浆，之后加入洋葱重量0.03％的混合酶制剂进行酶解，调节pH值为4.5，温度55℃，酶解3h，将酶解液在55℃、300W、80KHz条件下超声提取20min，4-6℃放置12h，过滤后真空浓缩、冷冻干燥、粉碎即得洋葱粉；
所述混合酶制剂由如下重量份数的原料组成：纤维素酶2、蛋白酶1、α-淀粉酶2、木聚糖酶0.5；
所述真空浓缩，具体为：一效75-85℃，真空度0.07MPa，二效65-75℃，真空度0.05MPa，三效45-55℃，真空度0.04MPa。
6.根据权利要求1所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，其特征在于，所述酵母水解物的制备方法，包括以下步骤：
(1)摇瓶培养
取斜面酵母菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中，150rpm,30℃培养30h得酵母种子液；
摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；
(2)5L发酵罐培养
将酵母种子液按10％质量百分比接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h，得发酵液；
发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO4 10、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O 8、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1,pH6.0；
(3)制备酵母泥：将步骤(2)制得的发酵液通过离心机进行固液分离，收集酵母泥；
(4)酵母细胞破壁：将步骤(3)所得的酵母泥和水在自溶罐中按1∶1.5质量比例调浆，调整pH值6-8，加温到80℃，灭活40分钟；降温到40℃-50℃保温自溶24h；加入混合酶制剂，用量为酵母泥质量的1％-1.5％；搅拌，酶法水解10h-24h；
所述混合酶制剂由蛋白酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、耐高温淀粉酶等量混合而成；
(5)喷雾干燥120℃-140℃喷雾干燥使水分含量小于10％，即得酵母水解物。
7.根据权利要求1所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，其特征在于，所述酵母菌为保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。
8.根据权利要求1所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料，由以下重量份数的原料制备：
玉米蛋白粉8份，花生粕19份，米糠6份，芝麻粕20份，膳食纤维20份，大豆油1.5份，0.5％复合预混料5份，石粉10份，磷酸氢钙12份，食盐3.5份，赖氨酸1.3份，苏氨酸1份，蛋氨酸1.5份，优可宝0.2份，酵母水解物1份，蛋氨酸锌0.5份，复合酶制剂0.5份，氯化胆碱0.8份，1万单位植酸酶0.2份，酵母细胞壁粉1份，酵母硒0.3份，血红素蛋白0.3份。
9.权利要求1-8任一所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的制备方法，包括如下步骤：
按照配方准确称取各组分原料，将复合酶制剂、酵母细胞壁粉、酵母水解物与0.5％复合预混料预先混合，然后按重量份数自大至小依次加入各种原料，混合均匀，加工制粒，即得无抗蛋鸡产蛋期复合预混和饲料。
10.权利要求1-8任一所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料的应用方法：将玉米、豆粕、石粉分别粉碎后，与权利要求1-8任一所述无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料混匀后使用；
按照以下配比：玉米62％，豆粕20％，石粉8％，无抗蛋鸡产蛋期复合预混合饲料10％。
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