CN106260504A - 一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法。以豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠为固体发酵原料，以啤酒酵母泥中活酵母菌为主要菌种，以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌为辅助菌种，生产微生物发酵湿饲料。

Description

一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法

技术领域

本发明涉及微生物发酵湿饲料技术领域。特别涉及一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法。

背景技术

近年来，我国啤酒工业发展很快，年产量以10％的速度增加，2013年达到3900万吨。啤酒酵母泥是啤酒生产的主要副产物，约占啤酒产量的1.5％，啤酒酵母泥中含有50％～60％的蛋白质和8种人体必需氨基酸，其中,氨基酸中的赖氨酸含量很高，可以超过进口鱼粉，还含有多种酶类物质和酵母素。目前，对于在啤酒酵母泥的综合开发利用，有以下几种方式。

一、啤酒酵母泥生产于应用现状

1、啤酒酵母泥作为饲料直接饲喂

目前，在我国饲料工业的生产中，蛋白质资源短缺，每年需要从国外进口大量鱼粉。啤酒工业的迅速发展，产生大量的啤酒酵母泥，这是蛋白饲料的最宝贵资源。做好啤酒酵母泥的利用，可以减少环境污染和提高企业经济效益。啤酒酵母泥作为饲料添加剂70％替代进口鱼粉，在蛋鸡日粮中添加，试验结果证明：试验组全期死淘率比对照组降低4.2％，试验组蛋重比对照组大，料蛋比变化不显著。由于酵母的价格比进口鱼粉低，所以全期净收入试验组比对照组降低100元。在母猪基础日粮中添加5％的酵母，饲喂9月龄的母猪，试验组初生仔猪重量提高15％～17％，泌乳量提高3.0％～8.0％，断奶存活率分别提高5.0％～7.0％。酵母与多种矿物质螯合在基础日粮中添加，2～4月龄的仔猪重量提高14％～17％，4～7月龄重量提高2％～4％。在鲤鱼饲料中添加3％酵母，试验组平均产量提高3％～6％，成活率提高6％～9％，饵料系数低0.27。每生产1kg鲤鱼种，饲料费用降低20％。在基围虾饲料中添加5％酵母，平均产量提高10％～15％，饵料系数平均为2.94，成活率提高30％～50％。

2、啤酒酵母泥酶解破壁成浸膏制成微生物培养基

酵母浸膏是微生物菌种培养中最好的氮源。以啤酒酵母泥为原料采用现代生物技术，用酶解法将酵母细胞破壁，细胞内的蛋白质、核酸，降解后制成酵母浸膏，主要成分为多肽、氨基酸、5-核苷酸、B族维生素及微量元素。酵母浸膏具有纯天然、营养丰富、味道鲜美等优点。主要用于微生物检验和微生物发酵工厂的发酵培养基。酵母浸膏是天然调味品，欧洲将酵母浸膏作为酸水解植物蛋白和味精的替代品。日本酵母浸膏产品(谷胱甘肽含量高)，已经在方便面调料、家用调味料等方面应用。安琪公司生产的酵母浸膏，生产和应用已达到国际先进水平。

3、啤酒酵母泥制成食用营养酵母素干品

食用营养酵母素干品是将啤酒酵母泥经过清洗脱去苦味，用双辊筒干燥法或喷雾干燥法，得到含水分在10％以下的干燥酵母粉末。食用酵母素中蛋白质、维生素和各种生物酶含量非常高。目前，日本的味之素、麒麟、朝日等生物技术公司都生产食用酵母素。食用酵母素的生产，今后一定会有很大的发展。

4、啤酒酵母泥中生物活性物质的开发与利用

啤酒酵母泥中含有大量的生物活性物质。超氧化物歧化酶(SOD)、核糖核酸(RNA)、多糖、谷胱甘肽(GSH)、果糖二磷酸钠(FDP)、B族维生素等。①SOD酶：SOD是一种重要的氧自由基清除剂，具有延缓衰老、预防老年痴呆，提高人体免疫力、预防和治疗某些疾病的作用。②酵母RNA：酵母RNA的降解产物及其衍生物主要应用于食品及医药上。酵母中RNA含量比细菌和霉菌中RNA含量高达10倍。同时，酵母中RNA/DNA比率也是所有微生物中最高的，易于提取。③酵母多糖：啤酒酵母含有25％～30％的酵母多糖，主要是葡聚糖和甘聚糖(MOS)。酵母胞壁多糖是一种活性多糖，可用作膳食纤维，抗癌效果很好。葡聚糖和甘露聚糖在人体的消化道中难以被消化，可作为膳食纤维发挥作用，并具有增强细胞免疫力，提高巨噬细胞活性及治疗癌等功效。④谷胱甘肽(GSH)：啤酒酵母泥中的谷胱甘肽含量较高，谷胱甘肽在肝炎、解毒以及白内障治疗上都具有良好的应用效果。食品加工业将其作为食品添加剂可提高营养，加强食品风味和防止变质。⑤果糖二磷酸钠(FDP)：利用啤酒酵母泥中的酶系可以生产果糖二磷酸钠(FDP)。FDP是人体糖代谢中的一种活性生化物质，可为恢复和改善细胞代谢的分子水平药物。⑥维生素和矿物质：啤酒酵母泥中含有多种水溶性B族维生素、维生素及矿物质D的前体麦甾醇，可以制成补钙片。啤酒酵母泥中含量多种矿物质，可以通过发酵啤酒酵母泥，制成酵母铁、酵母锌、酵母硒，这些有机矿物质，易于吸收利用，可以预防克山病、大骨节病，硒作为抗衰老药物用在抗衰老食品中。⑦氨基酸：啤酒酵母泥中氨基酸营养组分齐全，配比合理，是营养品、保健品、化妆品等行业的天然添加剂，经过提纯可做成各种单体氨基酸和复合氨基酸，现在只有美国、日本、欧洲等少数国家已生产产品。利用啤酒酵母泥制成复合氨基酸经济效益巨大，具有重大的现实意义。

在当前的畜牧家禽和水产养殖业中，由于抗生素的全面使用，使养殖者不再惧怕养殖过程中的疾病，猪、鸡、水产养殖规模越来越大，养殖效益越来越好。饲料中添加抗生素作为日常药物保健成为一种习惯。长期使用亚治疗剂量或治疗剂量的抗生素，能够造成肝脏、肾脏损伤，机体免疫力下降，引发各种疾病，还会引发细菌对抗生素的耐药性等等。在生猪的养殖中，乳猪出生第一口食物就是“开口药”，目的是预防腹泻。开口药用的早，用量大,会培育出耐药性,形成越用药腹泻越难以控制的恶性循环。长期大量使用抗生素，会造成猪群肠道菌群失调，引起消化不良，饲料利用率不高，生长速度下降。规模化养殖违背动物的自然生长规律，猪群缺少运动，心肺功能衰退，密度湿度过大，通风不畅，营养不全，都会造成猪群体质下降，容易感染疾病，引发疾病的暴发和流行。提高猪群的免疫力，解决抗生素的耐药性，畜禽产品安全等问题，需要加强日常管理，改善环境，吸取先进的生态养殖理念，合理使用抗生素，使用无抗、高效、安全、环保、绿色的生物饲料产品。

二、微生物发酵饲料的生产于应用现状

1、微生物发酵饲料的定义及其内容

微生物饲料是第三代饲料，微生物饲料是根据健康养殖理念，以提高动物群体免疫力、抗病力为出发点，在配制饲料时利用微生物活菌制剂、酶制剂、功能性低聚糖、植物提取物、抗菌肽等，安全、高效、环保的绿色饲料添加剂替代抗生素，促进动物生长、防治疾病和提高饲料转化率，实现动物健康养殖和保证动物食品安全。微生物饲料主要是以枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和嗜酸乳酸菌为菌种，经过发酵将饲料原料转化为微生物菌体蛋白、氨基酸、小肽、生物活性物质、益生菌、生物酶等。微生物发酵湿饲料营养丰富，适口性好，能改善动物肠道菌群平衡，提高动物免疫力，减少疾病的发生。

2、微生物发酵饲料的主要功能和效果

①替代抗生素预防消化道疾病：当前，养殖现状是，大多数动物处在“亚健康”状态，肠道菌群失调，免疫力、消化率、吸收率下降，生长速度慢，饲料报酬低，消化道***疾严重。微生物发酵饲料是通过微生物与饲料原料混合好氧厌氧发酵制成。主要菌种为乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌等。枯草芽孢杆菌能产生细菌素，抑制病原微生物的生长繁殖，促进肠道有益菌占位，使肠道处于良性的生态平衡状态。乳酸菌可以产生小分子多肽、抗菌肽。抗菌肽作用于细菌的细胞膜，破坏其完整性，并产生穿孔现象，造成细胞内容物外溢而死。同时，抗菌肽可以阻止基因表达抑制病毒的增殖，或直接攻击病毒粒子，阻止病毒粒子与宿主细胞融合，达到抗病毒效果，其还能抑制寄生虫及肿瘤细胞，对正常细胞毒性较小。

②增强免疫机能：微生物发酵湿饲料中的有益菌能有效地调节肠道菌群平衡，促进肠道免疫***，使动物肠道健康。益生菌与肠道相关淋巴组织免疫机能密切相关，淋巴组织是动物最大的免疫组织。益生菌能激活体内吞噬细胞，提升吞噬能力；刺激肠道相关淋巴组织产生B淋巴细胞、T淋巴细胞。此外，益生菌还能刺激肠道黏膜产生大量的分泌型免疫球蛋白，直接对病原微生物具有杀灭作用，降低疾病发生率。试验组饲喂高活菌制剂饲料的抗氧化能力显著高于对照组，可以提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性，表明发酵饲料能提高仔猪机体的免疫功能和抗应激能力。

③提高饲料利用率和生产性能：饲料原料通过有益微生物混合厌氧发酵，原料中的淀粉、蛋白质等大分子物质部分降解成易被动物消化吸收的单糖、双糖、低聚糖和氨基酸、维生素等小分子物质,在饲料发酵过程中还会产生各种酶类，能有效优化肠道的多酶消化体系，可显著提高抗营养因子的消化利用率，而一些有用的代谢产物，氨基酸、有机酸、微量元素、糖类物质能使饲料***变香，营养增加，改变饲料的物理化学性质，提高其适口性、消化率、吸收率和营养价值。

④减轻异味，解决环境污染问题：发酵全价料能显著提高断奶仔猪的生产性能和饲料利用率，降低腹泻率；发酵饲料的饲喂可以减少牲畜异味和粪便恶臭。

本专利是根据上述啤酒酵母泥生产于应用现状和微生物发酵饲料的生产于应用现状提出来的，其宗旨是要解决在养殖过程中用药早，剂量大，污染环境等问题和饲料的蛋白质转化率、利用率低的问题。通过利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法

生产微生物发酵湿饲料，以啤酒酵母泥为主要菌种来源，以玉米浆干粉为发酵主要原料，生产工艺简单、费用低廉、节能环保。产品氨基酸，小肽、消化酶、有机酸含量高，有益于动物肠道健康，提高动物生产性能。在仔猪料中添加5％～10％，可提高适口性(偏食率)10％，降低腹泻率20％，改善日增重7.52％以上；在肉鸡料中添加1％～4％，可降低氨气浓度20％，降低腹泻率10％，提高日增重5％以上；在蛋鸡料中添加0.5％～2％，可降氨气浓度10％，改善蛋壳质量，提高产蛋率5％以上；在肉牛料、肉羊料中添加5％～10％，可提高日增重6％以上。总之，利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料是一种无抗、安全、高效、优质、绿色的功能性饲料原料。具有广阔的市场前景。

目前，中国科学院沈阳应用生态研究所从海洋中已经分离、纯化、鉴定出多株枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌，经过驯化、培育、提高得到多株产物含量高、活性好、生长速度快的优良菌种，经过应用生产性能效果非常好，已在辽宁、山东、河北和河南等地区广泛应用，取得了很好的经济效益，我们已将产品实现了商品化生产。

(枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌生产菌株均从中国食品发酵研究院购买。啤酒酵母泥由燕京啤酒厂提供。)

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法，该方法以豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠为固体发酵原料，以啤酒酵母泥中活酵母菌为主要菌种，以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌为辅助菌种，经啤酒酵母泥种子液和四种菌的种子液混合，加入到固体发酵原料中，经充分搅拌混合，放入到厌氧容器中承装发酵或者放到发酵床上堆置发酵，经过96h～120h厌氧固体发酵过程或者有氧厌氧固体发酵过程，直接作为饲料或者经过60℃低温烘干再经粉碎机粉碎到60目，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

本发明生产微生物发酵湿饲料，生产工艺简单、费用低廉、节能环保，产品质量好，促进养殖动物生长明显。

微生物湿饲料是指：固体原料经微生物发酵后，未经干燥，直接饲喂，质量含水量在安全水分以上的饲料。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：以豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠为固体发酵原料，以啤酒酵母泥中活酵母菌为主要菌种，以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌为辅助菌种，经啤酒酵母泥种子液和四种菌的种子液混合，加入到固体发酵原料中，经充分搅拌混合，放入到厌氧容器中承装发酵或者放到发酵床上堆置发酵，生产微生物发酵湿饲料，具体步骤如下：

(1)发酵原料的制备：按要求比例将豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠充分搅拌混合，得到发酵原料；

(2)啤酒酵母泥种子液的制备：将新鲜啤酒酵母泥接种到含有葡萄糖、玉米浆干粉、硫酸锌、硫酸亚铁、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钠、硫酸锰和纯净水制成的培养基中,经过48h～64h通气培养，得到啤酒酵母泥种子液；

啤酒酵母泥培养基和培养条件：啤酒酵母泥接种到含有终质量浓度葡萄糖2％～3％、玉米浆干粉2％～3％、硫酸锌0.1％～0.2％、硫酸亚铁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、氯化钠0.1％～0.2％、硫酸锰0.1％％～0.2％％的纯净水制成的培养基中，用氢氧化钠调pH值至5.0～6.0，啤酒酵母泥接种量为20～30％，在温度28℃～32℃，经过48～64小时通气培养，得到啤酒酵母泥种子液；

(3)枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液的制备：将经过活化的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌斜面菌种分别进行单菌落分离、纯化，得到枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌的单菌落种子；再分别进行固体种子培养和液体种子培养，得到枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液；

(4)按啤酒酵母泥种子液50～60重量份；枯草芽孢杆菌种子液10～20重量份、地衣芽孢杆菌种子液10～20重量份、嗜酸乳杆菌种子液10～20重量份、植物乳杆菌种子液10～20重量份的比例，将啤酒酵母泥种子液、枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、酒酿酵母菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液混合，接种到发酵原料中，发酵原料100～120份，混合液40～60份，进行固体发酵培养；

1)放入到厌氧容器中承装发酵，厌氧固体发酵96h后，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～24小时)：将混合种子液接种到粉碎成50目固体发酵原料中，混合搅拌均匀放入到厌氧容器中承装，压实，密封，发酵原料与外界不能有空气交流，能产生二氧化碳等气体，要及时排出。24小时后属于厌氧发酵，温度升高后，维持平衡升高，控制温度30℃～35℃，质量含水量35％～40％，开始分解发酵料中的产物；

②厌氧固体发酵阶段(24小时～96小时):当温度升到最高点35℃～40℃时，发酵料继续分解，温度开始下降，质量含水量30％～35％，水活度降低，pH值下降到4以下，发酵达到终点，质量含水量25％～30％，粒度≤50目，得到利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料；

2)或者放到发酵床上堆置发酵，有氧厌氧固体发酵120小时后，低温烘干再经粉碎，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～48小时)：接种后的固体发酵原料放到发酵床上时，发酵料内含有一定的溶解氧，24小时内有氧发酵，经过24小时后，发酵料内的溶解氧消耗完，为厌氧固体发酵；此阶段不翻到，不通风，温度升高后，维持平衡升高，控制温度35℃～45℃，质量含水量35％～40％，开始分解发酵料中的产物；

②有氧固体发酵阶段(48小时～64小时)：48小时后，当发酵料温度升到最高点45℃～50℃时，开始翻倒发酵料并通风，温度开始下降，质量含水量30％～35％，水活度变低。继续分解发酵料中的产物；

③厌氧固体发酵阶段(64小时～120小时)：发酵料经过64小时后，控制温度在35℃～45℃，质量含水量25％～30％，继续分解发酵料中的产物；发酵时间到120小时，质量含水量20％～25％，发酵达到终点，在洁净条件下，经过负压流化床50℃～60℃低温烘干，再经粉碎机粉碎到40目～60目，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

(5)枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的枯草芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的枯草芽孢杆菌的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；

种子罐培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；种子罐培养条件，罐压0.01～0.08MPa、通气量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度28℃～32℃、时间48～64h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

种子罐最佳培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉4.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、121℃、20min；种子罐培养条件，罐压0.08MPa、通气量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃、时间48h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

(6)地衣芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的地衣芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的地衣芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到地衣芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：地衣芽孢杆菌单菌落种子在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的地衣芽孢杆菌的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到地衣芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子液培养：将地衣芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到液体种子罐培养基中，经培养，得到地衣芽孢杆菌种子液；

种子罐培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；种子罐培养条件，罐压0.01～0.08MPa、通气量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度28℃～32℃、时间48～64h；玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢；地衣芽孢杆菌种子液中含地衣芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

种子罐最佳培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉4.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、121℃、20min；种子罐培养条件，罐压0.08MPa、通气量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃、时间48h；地衣芽孢杆菌种子液中含地衣芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

(7)嗜酸乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的嗜酸乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中36℃培养，得到嗜酸乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：嗜酸乳杆菌单菌落种子在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的200ml茄形扁瓶中接种,在恒温培养箱中36℃培养，得到嗜酸乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将嗜酸乳杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到嗜酸乳杆菌种子液；

种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0％～2.0％、玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；培养条件：罐压0.01～0.10MPa、通气量100:50～100:100vvm、转速80～120rpm、温度30℃～36℃、时间48～64h；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

种子罐最佳培养基以重量百分比计为：

葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间18min；培养条件：罐压0.08MPa、通气量100:50、转速80rpm、温度36℃、时间48h；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

(8)植物乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的植物乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中36℃培养，得到植物乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：植物乳杆菌单菌落种子在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的200ml茄形扁瓶中接种,在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将植物乳杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到植物乳杆菌种子液；

所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0％～2.0％、玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；培养条件：罐压0.01～0.10MPa、通气量100:50～100:100vvm、转速80～120rpm、温度30℃～36℃、时间48～64h；植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

种子罐最佳培养基以重量百分比计为：

葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间18min；培养条件：罐压0.08MPa、通气量100:50、转速80rpm、温度36℃、时间48h；植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

(1)本发明以啤酒酵母泥中活酵母菌为主要菌种，以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌为辅助菌种，菌种搭配合理，酵母菌扩繁生产简单，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌利用深层发酵技术，生产的菌数高，活性好，能够代谢多种生物活性物质如，多种氨基酸，小肽，复合酶类等物质，将原料中的大分子蛋白逐步分解为简单物质，再经过复杂的物理化学和生物化学的反应，形成具有独特的发酵料风味。

(2)本发明以豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠为主要发酵原料，原料来源广泛易得，价格低廉。玉米浆干粉中速效氮和速效磷，作为酵母菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌发酵的氮源和无机盐，迅速繁殖扩增，转变成微生物动物性蛋白，玉米浆中的非蛋白氮，发酵过程吸收利用，将其降解为可吸收利用的氨基酸和短链肽，从而使蛋白利用率大大提高。

(3)本发明生产的微生物发酵湿饲料，以啤酒酵母泥为主要菌种来源，以玉米浆干粉为发酵主要原料，生产工艺简单、费用低廉、节能环保。产品氨基酸，小肽、消化酶、有机酸含量高，有益于动物肠道健康，提高动物生产性能。在仔猪料中添加4％～10％，可提高适口性(偏食率)10％，降低腹泻率20％，改善日增重7.5％以上；在肉鸡料中添加1％～4％，可降低氨气浓度20％，降低腹泻率10％，提高日增重5％以上；在蛋鸡料中添加0.5％～2％，可降氨气浓度10％，改善蛋壳质量，提高产蛋率5％以上；在肉牛料、肉羊料中添加4％～10％，可提高日增重6％以上。总之，利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料是一种无抗、安全、高效、优质、绿色的功能性饲料原料。具有广阔的市场前景。

具体实施方式

本发明各采用的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌斜面菌种均从中国食品发酵研究院购买。啤酒酵母泥由燕京啤酒厂提供。

实施例1

(1)啤酒酵母泥种子液的制备：

1)将新鲜啤酒酵母泥接种到含有葡萄糖、玉米浆干粉、硫酸锌、硫酸亚铁、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钠、硫酸锰和纯净水制成的培养基中,经过48h～64h通气培养，得到啤酒酵母泥种子液；

2)啤酒酵母泥培养基和培养条件：啤酒酵母泥接种到含有终质量浓度葡萄糖2％～3％、玉米浆干粉2％～3％、硫酸锌0.1％～0.2％、硫酸亚铁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、氯化钠0.1％～0.2％、硫酸锰0.1％％～0.2％％的纯净水制成的培养基中，用氢氧化钠调pH值至5.0～6.0，啤酒酵母泥接种量为20～30％，在温度28℃～32℃，经过48～64小时通气培养，得到啤酒酵母泥种子液；

3)菌数的检测及其发酵结束的评价：酵母细胞形态大小约为2-5×5-30μm，酵母多数为单细胞微生物，常呈卵圆形或者圆柱形。酒酿酵母培养皿检查：平板培养基上的酵母菌落呈白色粒状凸起，培养成熟时，有酒香味。

4)采用平板计数法测定酒酿酵母种子液中含酒酿酵母活菌数≥50亿cfu/ml。菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(2)枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的枯草芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的枯草芽孢杆菌的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；

种子罐最佳培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉4.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、121℃、20min；种子罐培养条件，罐压0.08MPa、通气量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃、时间48h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：采用平板计数法测定枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml。显微镜下检查枯草芽孢杆菌种子液，菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(3)地衣芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离；2)固体种子培养；3)液体种子培养；4)菌数的检测及其发酵结束的评价等步骤同实施例1(2)枯草芽孢杆菌种子液的制备。

(4)嗜酸乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的嗜酸乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中36℃培养，得到嗜酸乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：嗜酸乳杆菌单菌落种子在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的200ml茄形扁瓶中接种,在恒温培养箱中36℃培养，得到嗜酸乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将嗜酸乳杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到嗜酸乳杆菌种子液；

种子罐最佳培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间18min；培养条件：罐压0.08MPa、通气量100:50、转速80rpm、温度36℃、时间48h；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：

嗜酸乳杆菌细胞形态为杆状，末端呈圆形，菌体呈“单个状”，或呈现链状，同PH值酸性有关。革兰氏阳性杆菌，主要存在小肠中，释放乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，但是益菌作用比较弱。嗜酸乳杆菌显微镜观察检测：

发酵12小时，18小时，24小时定时检测；

采用血球计数板计数方法：计数结果为20亿、50亿、80亿；

采用直接观察方法：用接种针挑入发酵液一环，在载玻片涂匀，放上盖玻片，在10倍镜，40倍镜观察，菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵时间大致需要36小时。发酵结束时，pH＝5以下，具有酸香味。发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(5)植物乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的植物乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中36℃培养，得到植物乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：植物乳杆菌单菌落种子在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的200ml茄形扁瓶中接种,在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将植物乳杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到植物乳杆菌种子液；

种子罐最佳培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间18min；培养条件：罐压0.08MPa、通气量100:50、转速80rpm、温度36℃、时间48h；植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

4)植物乳杆菌细胞形态为杆状，末端呈圆形，菌体呈“单个状”，或呈现链状，同PH值酸性有关。革兰氏阳性杆菌，主要存在小肠中，释放乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，但是益菌作用比较弱。

植物乳杆菌显微镜观察检测：

发酵12小时，18小时，24小时定时检测；

采用血球计数板计数方法：计数结果为20亿、50亿、80亿；

采用直接观察方法：用接种针挑入发酵液一环，在载玻片涂匀，放上盖玻片，在10倍镜，40倍镜观察，菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵时间大致需要36小时。发酵结束时，PH＝5以下，具有酸香味。发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(6)发酵原料制备：按要求比例将豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠充分搅拌混合，得到发酵原料；发酵原料中的豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠比例为：豆粕20重量份、玉米浆干粉20重量份、玉米胚芽粕20重量份、麦麸皮20重量份、米糠20重量份；

(7)按啤酒酵母泥种子液60重量份；枯草芽孢杆菌种子液10重量份、地衣芽孢杆菌种子液10重量份、嗜酸乳杆菌种子液10重量份、植物乳杆菌种子液10重量份的比例，将啤酒酵母泥种子液、枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、酒酿酵母菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液混合，得微生物菌种混合液；将混合液接种到发酵原料中，发酵原料100份，混合液40份，经充分搅拌混合，放入到厌氧容器中承装发酵或者放到发酵床上堆置发酵，经过96h～120h厌氧固体发酵过程或者有氧厌氧固体发酵过程，直接作为饲料或者经过50℃～60℃低温烘干再经粉碎机粉碎到40目～60目，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

1)放入到厌氧容器中承装发酵，厌氧固体发酵96h后，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～24小时)：将混合种子液接种到粉碎成50目固体发酵原料中，混合搅拌均匀放入到厌氧容器中承装，压实，密封，发酵原料与外界不能有空气交流，能产生二氧化碳等气体，要及时排出。24小时后属于厌氧发酵，温度升高后，维持平衡升高，控制温度30℃～35℃，质量含水量35％～40％，开始分解发酵料中的产物；

②厌氧固体发酵阶段(24小时～96小时):当温度升到最高点35℃～40℃时，发酵料继续分解，温度开始下降，质量含水量30％～35％，水活度降低，pH值下降到4以下，发酵达到终点，质量含水量25％～30％，粒度≤50目，得到利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料；

2)或者放到发酵床上堆置发酵，有氧厌氧固体发酵120小时后，低温烘干再经粉碎，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～48小时)：接种后的固体发酵原料放到发酵床上时，发酵料内含有一定的溶解氧，24小时内有氧发酵，经过24小时后，发酵料内的溶解氧消耗完，为厌氧固体发酵；此阶段不翻到，不通风，温度升高后，维持平衡升高，控制温度35℃～45℃，质量含水量35％～40％，开始分解发酵料中的产物；

②有氧固体发酵阶段(48小时～64小时)：48小时后，当发酵料温度升到最高点45℃～50℃时，开始翻倒发酵料并通风，温度开始下降，质量含水量30％～35％，水活度变低。继续分解发酵料中的产物；

③厌氧固体发酵阶段(64小时～120小时)：发酵料经过64小时后，控制温度在35℃～45℃，质量含水量25％～30％，继续分解发酵料中的产物；发酵时间到120小时，质量含水量20％～25％，发酵达到终点，在洁净条件下，经过负压流化床50℃～60℃低温烘干，再经粉碎机粉碎到40目～60目，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料。

实施例2

在畜禽养殖中应用本发明所得的利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料。在仔猪饲养中添加日粮重量5％～10％进行试验，试验结果见表1：

表1利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料对仔猪增重和降低腹泻率试验结果

*试验组1:日粮+10％利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

试验组2:日粮+5％利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

对照组：日粮。

通过表1的试验结果可以看出，试验组1与对照组进行比较，仔猪的日增重率提高7.52％,料重比降低3.03％；腹泻指数降低51.8％；试验组2与对照组进行比较，仔猪的日增重率提高3.29％，料重比降低2.73％；腹泻指数降低44.8％。

对仔猪的日增重进行方差分析的结果见表2：

表2.t-检验成对双样本均值分析

项目	变量1	变量2
			平均	457	439
方差	1	7
			观测值	3	3
泊松相关系数	0.755929
			假设平均差	0
df	2
			t Stat	15.58846
P(T<＝t)单尾	0.002045
			t单尾临界	2.919986
P(T<＝t)双尾	0.00409
			t双尾临界	4.302653

通过表2对仔猪的日增重进行方差分析,结果表明：试验组1与对照组t检验P＜0.01，差异极显著；试验组2与对照组t检验P＜0.01，差异极显著；试验组1与试验2t检验P＞0.01，差异极显著。

实施例3

畜禽养殖中应用本发明所得的利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料。在海蓝褐色壳蛋鸡日粮中日粮重量添加2％，进行饲养试验结果见表3；

表3利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料对蛋鸡鸡群生产性能的影响

试验组与对照组均为350只，试验期间：试验组死淘6只，对照组死淘13只

*试验组1:日粮+2％利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；对照组：日粮。

由表3可以看出：在350只海蓝褐色壳蛋鸡，经35天试验期，试验组(日粮中添加2％利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料)比对照组(日粮中不添加利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料),产蛋率提高1.47％，日单产提高2.07g/只，死淘率降低2.0％，料蛋比降低0.08％，总产蛋量提高20.21kg，并且蛋壳硬度加强，亮，光泽好，颜色均匀一致，改善蛋壳质量显著，鸡粪成型，降低氨气浓度10％，臭味、氨气味明显减轻,养殖环境明显改善。

实施例4

在畜禽养殖中应用本发明所得的利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料。在肉牛料中添加日粮重量5％～10％进行试验，试验结果见表4：

表4利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料对肉牛日增重的影响

*试验组1:牛料日粮+10％利用啤酒酵母泥生产的生物发酵湿饲料；

试验组2:牛料日粮+5％利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

对照组：牛料日粮。

试验用牛每组为20头。

通过表4的试验结果可以看出，肉牛的日增重，试验组1与对照组进行比较，增重率提高6.08％；试验组2与对照组进行比较，增重率提4.34％。

通过对肉牛的日增重进行t-检验成对双样本均值方差分析的结果表明：试验组1与对照组t检验P＜0.05，差异极显著；试验组2与对照组t检验P＜0.05，差异极显著；试验组1与试验2t检验P＞0.05，差异不显著。

实施例5

在畜禽养殖中应用本发明所得的利用啤酒酵母泥等5种菌生产的微生物发酵湿饲料与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌四种微生物微生物发酵湿料，在仔猪饲料中添加日粮重量10％进行试验，试验结果见表5：

表5含有啤酒酵母泥和不含有啤酒酵母泥微生物发酵湿饲料在保育猪上的应用效果

*试验时间：2014年12月1日～2014年12月9日

试验组1:正常日粮+10％利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

试验组2:正常日粮+10％含有四种微生物发酵生产的微生物发酵湿饲料；

对照组：正常日粮；

通过表5可以看出，在正常的日粮条件下，试验组1添加日粮重量的10％含有啤酒酵母泥微生物发酵湿饲料，试验组2添加10％含有四种微生物发酵生产的微生物发酵湿饲料，经过10天的喂养，试验结果表明：试验组1增重520g/日，试验组2增重488g/日，对照组增重446g/日，试验组1较对照组增重16.59％，试验组2较对照组增重9.41％，增重效果明显，

通过t-检验成对双样本均值方差分析，试验组1与对照组t检验P值小于0.05差异显著。

本发明具有生产工艺简单，易于操作、生产原料来源广泛,成本低易于推广、生产周期短发酵产物多，产品质量好，易于应用等特点。在畜禽养殖中应用，可以提高免疫力和成活率，可以加快生长发育和提高产量，可以净化水质和改善养殖环境，是一种理想的优质微生物发酵湿料。

Claims (8)

1.一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法，其特征在于：以豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠为固体发酵原料，以啤酒酵母泥中活酵母菌为主要菌种，以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌为辅助菌种，生产微生物发酵湿饲料；啤酒酵母泥中加入培养基经种子液培养；枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌经固体种子培养和液体种子培养，将啤酒酵母泥种子液和四种菌的种子液按照重量比例混合，加入到固体发酵原料中，经充分搅拌混合，放入到厌氧容器中承装发酵或者放到发酵床上堆置发酵，经过96h～120h厌氧固体发酵过程或者有氧厌氧固体发酵过程，直接作为饲料，或者经过50℃～60℃低温烘干再经粉碎机粉碎到40目～60目，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

固体发酵原料组成为：豆粕20～30重量份、玉米浆干粉20～30重量份、玉米胚芽粕20～30重量份、麦麸20～30重量份、米糠20～30重量份；

啤酒酵母泥种子液、枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液的重量份数百分比为：啤酒酵母泥种子液50～60重量份；枯草芽孢杆菌种子液10～20重量份、地衣芽孢杆菌种子液10～20重量份、嗜酸乳杆菌种子液10～20重量份、植物乳杆菌种子液10～20重量份，经混合，得微生物菌种混合液；

发酵原料与枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液的混合液的重量份数比为：发酵原料100～120份，混合液40～60份。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：啤酒酵母泥种子液活菌数30个亿/ml以上、枯草芽孢杆菌种子液活菌数为100个亿/ml以上、地衣芽孢杆菌种子液活菌数为100个亿/ml以上、嗜酸乳杆菌种子液活菌数为50个亿/ml以上；植物乳杆菌种子液活菌数为50个亿/ml以上；

所述发酵原料中各物质的质量含水量为豆粕10％、玉米浆干粉10％、玉米胚芽粕10％、麦麸10％、米糠10％；所述发酵原料的总质量含水量为10％。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：

固体发酵原料中的豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠比例为：豆粕20重量份、玉米浆干粉20重量份、玉米胚芽粕20重量份、麦麸皮20重量份、米糠20重量份；

啤酒酵母泥种子液、枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液的重量份数百分比为：啤酒酵母泥种子液60份；枯草芽孢杆菌种子液10份、地衣芽孢杆菌种子液10份、嗜酸乳杆菌种子液10份、植物乳杆菌种子液10份，经混合，得微生物菌种混合液；

发酵原料与微生物菌种混合液的重量比为发酵原料100份，混合液40份。

4.按照权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

(1)发酵原料的制备：按要求比例将豆粕、玉米浆干粉、玉米胚芽粕、麦麸、米糠充分搅拌混合，得到发酵原料；

(2)啤酒酵母泥种子液的制备：将新鲜啤酒酵母泥接种到含有葡萄糖、玉米浆干粉、硫酸锌、硫酸亚铁、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钠、硫酸锰和纯净水制成的培养基中,经过48h～64h通气培养，得到啤酒酵母泥种子液；

啤酒酵母泥培养基和培养条件：所述啤酒酵母泥接种到含有终质量浓度葡萄糖2％～3％、玉米浆干粉2％～3％、硫酸锌0.1％～0.2％、硫酸亚铁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、氯化钠0.1％～0.2％、硫酸锰0.1％％～0.2％％的纯净水制成的培养基中，用磷酸或氢氧化钠调pH值至5.0～6.0，啤酒酵母泥接种量的重量百分比为20％～30％，在温度28℃～32℃，经过48h～64h通气培养，得到啤酒酵母泥种子液；

(3)枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液的制备：将经过活化的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌斜面菌种分别进行单菌落分离、纯化，得到枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌的单菌落种子；再分别进行固体种子培养和液体种子培养，得到枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液；

(4)按啤酒酵母泥种子液50～60重量份；枯草芽孢杆菌种子液10～20重量份、地衣芽孢杆菌种子液10～20重量份、嗜酸乳杆菌种子液10～20重量份、植物乳杆菌种子液10～20重量份的比例，将啤酒酵母泥种子液、枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、酒酿酵母菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液混合，接种到发酵原料中，发酵原料100～120份，混合液40～60份，进行固体发酵培养；

1)放入到厌氧容器中承装发酵，厌氧固体发酵96h后，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～24小时)：将混合种子液接种到粉碎成50目固体发酵原料中，混合搅拌均匀放入到厌氧容器中承装，压实，密封，发酵原料与外界不能有空气交流，能产生二氧化碳等气体，要及时排出；24小时后属于厌氧发酵，温度升高后，维持平衡升高，控制温度30℃～35℃，质量含水量35％～40％，开始分解发酵料中的产物；

②厌氧固体发酵阶段(24小时～96小时):当温度升到最高点35℃～40℃时，发酵料继续分解，温度开始下降，质量含水量30％～35％，水活度降低，PH值下降到4以下，发酵达到终点，质量含水量25％～30％，粒度≤50目，得到利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料；

2)或者放到发酵床上堆置发酵，有氧厌氧固体发酵120小时后，低温烘干再经粉碎，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～48小时)：接种后的固体发酵原料放到发酵床上时，发酵料内含有一定的溶解氧，24小时内有氧发酵，经过24小时后，发酵料内的溶解氧消耗完，为厌氧固体发酵；此阶段不翻到，不通风，温度升高后，维持平衡升高，控制温度35℃～45℃，质量含水量35％～40％，开始分解发酵料中的产物；

②有氧固体发酵阶段(48小时～64小时)：48小时后，当发酵料温度升到最高点45℃～50℃时，开始翻倒发酵料并通风，温度开始下降，质量含水量30％～35％，水活度变低；继续分解发酵料中的产物；

③厌氧固体发酵阶段(64小时～120小时)：发酵料经过64小时后，控制温度在35℃～45℃，质量含水量25％～30％，继续分解发酵料中的产物；发酵时间到120小时，质量含水量20％～25％，发酵达到终点，在洁净条件下，经过负压流化床50℃～60℃低温烘干，再经粉碎机粉碎到50目～60目，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：啤酒酵母泥最佳的培养基和培养条件：所述啤酒酵母泥接种到含有终质量浓度葡萄糖3％、玉米浆干粉2％、硫酸锌0.1％、硫酸亚铁0.1％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.1％、氯化钠0.1％、硫酸锰0.2％％的纯净水制成的培养基中，用磷酸或氢氧化钠调pH值至5.0，啤酒酵母泥接种量为30％，在温度28℃条件下，经过48小时通气培养，得到啤酒酵母泥种子液。

6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：1)放入到厌氧容器中承装发酵，厌氧固体发酵96h后，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～24小时)：将混合种子液接种到粉碎成50目固体发酵原料中，混合搅拌均匀放入到厌氧容器中承装，压实，密封，发酵原料与外界不能有空气交流，能产生二氧化碳等气体，要及时排出；24小时后属于厌氧发酵，温度升高后，维持平衡升高，控制温度35℃，质量含水量35％，开始分解发酵料中的产物；

②厌氧固体发酵阶段(24小时～96小时):当温度升到最高点40℃时，发酵料继续分解，温度开始下降，质量含水量30％，水活度降低，PH值下降到4以下，发酵达到终点，质量含水量25％，粒度≤60目，得到利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料。

7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：放到发酵床上堆置发酵，有氧厌氧固体发酵120小时后，低温烘干再经粉碎，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料；

①有氧厌氧固体发酵阶段(0小时～48小时)：接种后的固体发酵原料放到发酵床上时，发酵料内含有一定的溶解氧，24小时内有氧发酵，经过24小时后，发酵料内的溶解氧消耗完，为厌氧固体发酵；此阶段不翻到，不通风，温度升高后，维持平衡升高，控制温度45℃，质量含水量35％，开始分解发酵料中的产物；

②有氧固体发酵阶段(48小时～64小时)：48小时后，当发酵料温度升到最高点50℃时，开始翻倒发酵料并通风，温度开始下降，质量含水量30％，水活度变低；继续分解发酵料中的产物；

③厌氧固体发酵阶段(64小时～120小时)：发酵料经过64小时后，控制温度在35℃，质量含水量30％，继续分解发酵料中的产物；发酵时间到120小时，质量含水量25％，发酵达到终点，在洁净条件下，经过负压流化床60℃低温烘干，再经粉碎机粉碎到60目，质量含水量≤10％，得到利用啤酒酵母泥生产的微生物发酵湿饲料。

8.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：

枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的枯草芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的枯草芽孢杆菌的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；

所述种子罐培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；种子罐培养条件，罐压0.01～0.08MPa、通气量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度28℃～32℃、时间48～64h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

所述种子罐最佳培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉4.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、121℃、20min；种子罐培养条件，罐压0.08MPa、通气量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃、时间48h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

地衣芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的地衣芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的地衣芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到地衣芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：地衣芽孢杆菌单菌落种子在盛有新配置的含有牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、琼脂粉2％的地衣芽孢杆菌的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到地衣芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子液培养：将地衣芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到液体种子罐培养基中，经培养，得到地衣芽孢杆菌种子液；

所述种子罐培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；种子罐培养条件，罐压0.01～0.08MPa、通气量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度28℃～32℃、时间48～64h；玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢；地衣芽孢杆菌种子液中含地衣芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

所述种子罐最佳培养基以重量百分比计为：玉米浆干粉4.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、121℃、20min；种子罐培养条件，罐压0.08MPa、通气量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃、时间48h；地衣芽孢杆菌种子液中含地衣芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

嗜酸乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的嗜酸乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中36℃培养，得到嗜酸乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：嗜酸乳杆菌单菌落种子在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的200ml茄形扁瓶中接种,在恒温培养箱中36℃培养，得到嗜酸乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将嗜酸乳杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到嗜酸乳杆菌种子液；

所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0％～2.0％、玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；培养条件：罐压0.01～0.10MPa、通气量100:50～100:100vvm、转速80～120rpm、温度30℃～36℃、时间48～64h；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml；

所述种子罐最佳培养基以重量百分比计为：

葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间18min；培养条件：罐压0.08MPa、通气量100:50、转速80rpm、温度36℃、时间48h；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml；

植物乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的植物乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中36℃培养，得到植物乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：植物乳杆菌单菌落种子在盛有新配置的葡萄糖1.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、琼脂粉2％培养基的200ml茄形扁瓶中接种,在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将植物乳杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到植物乳杆菌种子液；

所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0％～2.0％、玉米浆干粉2.0％～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；培养条件：罐压0.01～0.10MPa、通气量100:50～100:100vvm、转速80～120rpm、温度30℃～36℃、时间48～64h；植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml；

所述种子罐最佳培养基以重量百分比计为：

葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，乙酸钠0.5％、余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间18min；培养条件：罐压0.08MPa、通气量100:50、转速80rpm、温度36℃、时间48h；植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。