CN106472932A - 一种复合微生物饮品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合微生物饮品及其制备方法,具体是公开了一种治疗高血压和冠心病的且兼具防治便秘,腹泻的复合微生物饮品及其制备方法;制备该复合微生物饮品的原料为:相贺链霉菌发酵液,丁酸梭菌发酵液,布拉氏酵母菌发酵液,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液,短乳杆菌发酵液,大豆粉,红糖,茶氨酸,低聚木糖,纯化水;本发明的微生物饮品复合了多种单一产品的治病保健功能,既含有防治冠心病、高血压,又具有调节胃肠内平衡、防治便秘,腹泻的微生物群及其代谢产物,集保健与治疗于一体,符合当前人们预防、保健、治疗与康复相结合的医学观点,市场前景将非常广泛。
Description
技术领域
本发明属于微生物与食品饮品技术领域,具体涉及一种复合微生物饮品及其制备方法。
背景技术
现代社会,人们物质生活有了很大改变,营养过剩、缺乏锻炼、工作压力大、环境污染导致人们身体出现亚健康状态,我们每天摄入的食物中被加入了过多的防腐剂、色素、香精,还有残留的农药、兽药、激素等有害物质,以及抗生素的滥用,导致我们体内的有益菌在不断减少,而有害菌在不断增加,产生并积累了大量毒素,从而导致人体百病丛生,冠心病、高血脂、高血压、肿瘤、癌症、肠胃病等疾病的发病率越来越高,靠大量服用药物改变病情,往往治标不治本,长期用药会产生很大的副作用,久而久之患者对药物产生依赖性,这不仅增加生活开支,还会导致身体器官因长期用药而遭到损害。
冠心病(CHD)是由心脏中的冠状动脉粥样硬化引起的。它是最常见的一种心脏病,大约700多万美国人患有这种病,更糟的是,不管是对女性还是男性来说,它都是头号杀手。每年有50多万美国人丧生于冠心病引起的心脏病突发。随着人们生活水平的提高,国内的冠心病与高血压的患病率持续上升。
大部分这种死亡是可以避免的,因为冠心病与生活方式相关。冠心病的常见危险因素—高血压、高胆固醇、吸烟、过度肥胖、体力活动不足、糖尿病和压力,这些都是可以控制的。一般来说,高血压、高胆固醇或吸烟会使患病几率增加几倍。因此,一个拥有这三种危险因素的人患上这种疾病的几率等于是一个没有任何危险因素的人的8倍。过度肥胖会提升高胆固醇和高血压的可能性,而且会增加心脏病突发的危险性。
其他一些危险因素就不能控制了,如遗传、年龄和性别。遗传涉及几方面的问题,其中之一就是种族划分。非洲裔美国人比欧洲裔美国人更容易患上严重的高血压,因此他们患上冠心病的危险性就会更高。墨西哥裔美国人、美国印第安人、本土的夏威夷人和部分亚裔美国人患冠心病的危险也较高。部分原因在于这些种族人群中的过度肥胖症和糖尿病。其他家族特征也会使人们患上冠心病的几率翻倍。例如,在很多有严重的心脏病家族史的人身上都能找到一种或多种危险因素,如高血压或高胆固醇。
年龄和性别也是不可控制的危险因素。冠心病是随着时间而发生的,也就是说,这种危险随着一个人年龄的增长而升高。4l5的死于冠心病的人都在65岁以上(包括6S岁)。与男士比起来,老年妇女更容易在心脏病发作的几周内死去。即使这样,男性发生心脏病的几率还是比女性高,而且发作的时间会比较早。
要想弄清楚冠心病的起因,必须先了解心脏是怎样工作的。像所有的肌肉一样,心脏同样需要不断的氧气和营养供给,而这些东西都是通过冠状动脉带入心脏的。当冠状动脉变窄或闭塞时,它们就不能为心脏供应足够的血液,这种情况会造成以下几种后果。
如果心脏里缺少了含氧的血液,它的反应可能是疼痛,也就是我们说的心绞痛。当血液供给完全被切断时,就是心脏病发作的时候。一旦发生这样的情况,心脏中得不到氧气供给的那部分就会死去,心脏中的部分肌肉可能会遭到永久性破坏。
冠状动脉内壁的加厚被称为“动脉硬化”,当一个人的血液中含有较高的胆固醇含量时,通常会发生动脉硬化。在血液循环中,胆固醇和脂肪构成了动脉血管壁,使它们变得狭窄,从而减慢甚至阻塞血液流通。当血液中的胆固醇含量较高时,它更有可能堆积在动脉血管壁上。这一过程在很多人的童年时期和少年时期就开始了,随着年龄越大,情况越来越严重。
什么是胆固醇?简单来说,胆固醇就是一种分子,身体把它当做一种积木,用来生产其他化合物质。胆固醇是人体不可缺少的物质,它是细胞膜的组成构件之一,与生物膜的通透性和神经传导有关,同时又是形成类固醇激素、胆汁酸及合成维生素D的前体物质。关于胆固醇,总会看到一大堆缩写,如HDL(高密度脂蛋白)、LDL(低密度脂蛋白)和HDL/LDL(这两种脂蛋白的比率)。HDL都是好的胆固醇,而LDL都是坏的胆固醇。坏胆固醇会阻塞你的动脉,使之变得坚硬和狭窄。这才是症结所在。一旦动脉失去柔软性,血压就会升高,最好的血液和营养物质就不能到达身体的各个部位一一身体肌肉和心脏也都会硬化。
最简单的冠心病信号就是胸痛和呼吸短促。人的胸腔可能会感到沉重、紧密、疼痛、像燃烧一样、有压力或有压迫感。感知部位通常是胸骨后面,有时候也会是胳膊、颈部或下巴。一旦出现了这些信号,人们就应该去看医生了。
尽管如此,有些人身上表现不出任何征兆,只能在心脏病发作后才能发现。值得一提的是,女性可能对那些专属于她们的冠心病信号尤其陌生,甚至在发病前都感觉不到它们。
在常规化学药物治疗冠心病和高血压时,只是起缓解作用,难以根治。同时,药物对人体本身产生很大的副作用。
薛松晓在专利号200910064998.0公开了一种治疗高血压和冠心病的复合益生菌及其制备方法,所述复合益生菌还可以是由下列重量配比的菌种制成的:保加利亚杆菌、双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌的配比分别为1-5, 1-4和3-7,其中它们的活菌含量均为18-26亿/毫升;利用补充复合益生菌可以调节肠道内的微生态平衡,并引发人体内的胆固醇调配机制的变化,通过快速清理人体血管内的低密度脂蛋白(LDL),使得血栓快速溶解,同时新的血栓难以形成,从而达到治疗冠心病和降低血压的目的,但其发酵时间长达10-14天,保加利亚乳杆菌,双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌其在长温下不耐储存,易死亡,因此其保质期不长,效果不稳定。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足,提供一种复合微生物活菌含量高、活性高、稳定性高、作用效果快的、无副作用,保存时间长,具有治疗高血压和冠心病的且兼具防治便秘与腹泻的复合微生物饮品。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案是:一种复合微生物饮品,其特征在于,该复合微生物饮品的原料配比为:相贺链霉菌发酵液20份,丁酸梭菌发酵液40份,布拉氏酵母菌发酵液15份,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液30份,短乳杆菌发酵液30份,大豆粉2份,红糖2份,茶氨酸1份,低聚木糖5份,纯化水60份;其具体的制备方法,包括以下步骤:
步骤一:按重量份纯化水60份,大豆粉2份,红糖2份,茶氨酸1份,低聚木糖5份依次加入至发酵罐中,搅匀,将低聚木糖溶解,加热至121℃灭菌30分钟;降温到30℃;
步骤二:向步骤一发酵罐依次加入丁酸梭菌发酵液40份,短乳杆菌发酵液30份,混匀,30℃厌氧培养3-4天,待pH低于4时,检测丁酸梭菌芽孢含量不低于20亿CFU/ ml;再向发酵罐中加入相贺链霉菌发酵液20份,布拉氏酵母菌发酵液15份,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液30份,混匀,无菌灌装100ml/瓶,包装成品。
其中,所述的相贺链霉菌发酵液的菌体浓度为不低于80g/L;
其中,所述的丁酸梭菌发酵液的芽孢含量为不低于40亿CFU/ml;
其中,所述的布拉氏酵母菌发酵液的活菌含量为不低于20亿CFU/ml;
其中,所述的左旋乳酸芽孢杆菌发酵液的芽孢含量为不低于100亿CFU/ml;
其中,所述的短乳杆菌发酵液的活菌含量为不低于60亿CFU/ml;
在步骤二中的相贺链霉菌发酵液、丁酸梭菌发酵液、布拉氏酵母菌发酵液、左旋乳酸芽孢杆菌发酵液、短乳杆菌发酵液可采用现有技术培养,本发明提供以下方法:
相贺链霉菌发酵液的制备:
取出相贺链霉菌菌种保藏管,用PDA固体培养基划平板进行复苏,30℃培养7天,在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中,在培养箱中30℃培养6-8天,待菌苔长满茄子瓶,产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱,调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml,即为相贺链霉菌种子液;
发酵:将上述制备的相贺链霉菌种子液以1%-3%的接种量接种至装有灭菌的600L的相贺链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中,控温28-32℃,开搅拌200r/min,前24小时,通气量为每分钟为300L空气,24-36小时,通气量为450L,36小时后,通气量为600L,培养40-48小时,待菌体含量超过80g/L,即可停罐,即得到相贺链霉菌发酵液;
其中,所述的PDA号固体培养基:土豆200克,蔗糖20克,琼脂:20克,蒸馏水补足1000ml;
其中,所述的相贺链霉菌发酵培养基:豆粕粉3%,葡萄糖1%,石粉1%,大豆糖蜜2%,磷酸氢二钾0.04%,硫酸镁0.05%,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟。
丁酸梭菌发酵液的制备:
取-80℃甘油管保藏的菌种1mL接种于装有9mLRCM培养基的试管中,37℃条件下静态厌氧活化48h,将活化好的菌种按1%(v/v)的接种量转接到灭过菌的100L丁酸梭菌种子培养基中。37℃条件下静态厌氧培养24h~36h,菌含量超过5亿CFU/ml,即可作为丁酸梭菌种子继续接种,将100L丁酸梭菌菌种子接至装有900L已经灭菌的丁酸梭菌发酵培养基的1吨的发酵罐中,抽真空,37℃培养4-6天,待丁酸梭菌产生芽孢,芽孢含量超过40亿CFU/ ml,即可停止培养,即为丁酸梭菌发酵液;
其中,所述的RCM培养基:胰蛋白陈10g/L,牛肉膏10g,酵母膏10g/L,葡萄糖5g/L,氯化钠5g/L,可溶性淀粉1g/L,半胱氨酸盐酸盐0.5克/L,醋酸钠3g/L,pH7.0,121℃灭菌20min;
其中,所述的丁酸梭菌种子培养基::酵母膏15g/L,牛肉膏5g/L,KH2PO4 2g/L硫酸镁1g/L,半胱氨酸盐酸盐1g/L,NaHCO3 1g/L,CaCO3 1g/L,葡萄糖20g/L, PH7.0,121℃灭菌20min;
丁酸梭菌发酵培养基:大豆粉40g/L,红糖40 g/L,酵母膏15g/L,牛肉膏5g/L,KH2PO42g/L硫酸镁1g/L,半胱氨酸盐酸盐1g/L,NaHCO3 1g/L,低聚木糖5g/L,CaCO3 1g/L,葡萄糖5g/L, PH7.0,121℃灭菌20min。
布拉氏酵母菌发酵液的制备:
取出菌种保藏管,用YPD固体培养基划平板进行复苏,30℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种150毫升YPD培养基中,在培养箱中30℃震荡培养24小时,种子采用2%的接种量,接种至装有350L酵母菌培养基的 500L发酵罐中,控温30℃,开搅拌200r/min,前10小时,通气量为每分钟100L,10小进后,通气量为每分钟350L,培养20-28小时,检测其菌液浓度,菌含量超过20亿CFU/ml,即为布拉氏酵母菌发酵液;其中所述的YPD培养基:酵母膏10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂20 g,水1000mL。其中所述的酵母菌培养基:红糖25 g/L,酵母膏5 g/L,蛋白胨10 g/L,硫酸铵1 g/L,硫酸镁0.5 g/L,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟。
短乳杆菌发酵液的制备:
取出菌种保藏管,用MRS固体培养基划平板进行复苏,37℃厌氧培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中,在培养箱中37℃厌氧培养24小时,种子采用5%的接种量,接种至装有450L乳酸菌培养基的 500L发酵罐中,37℃厌氧培养20-28小时,检测其菌液浓度,菌含量超过60亿CFU/ml,即短乳杆菌发酵液;
其中,所述的MRS固体培养基:蛋白胨10g/L,酵母提取物5 g/L,牛肉膏10 g/L,葡萄糖20 g/L,醋酸钠5 g/L,柠檬酸二铵2 g/L,吐温-80 1 ml/L,硫酸镁0.6 g/L,硫酸锰0.05 g/L,磷酸氢二钾2 g/L,琼脂20 g/L,碳酸钙20 g/L;其中,所述的乳酸菌培养基:葡萄糖3%,蛋白胨1.5%,牛肉膏0.75%,氯化钠0.1%,硫酸锰0.001%,硫酸镁0.02%,醋酸钠0.05%,碳酸钙1%,pH6.0。各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟。
左旋乳酸芽孢杆菌发酵液的制备:
取出菌种保藏管,用MRS固体培养基划平板进行复苏,37℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种500毫升MRS液体培养基中,在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量,接种至装有350L左旋乳酸芽孢杆菌液体培养基的 500L发酵罐中,控温37℃,开搅拌200r/min,前10小时,通气量为每分钟200L,10小进后,通气量为每分钟400L,培养32-48小时,检测其菌液浓度,芽孢含量超过100亿CFU/ml,即左旋乳酸芽孢杆菌发酵液;
其中,所述的MRS液体培养基:蛋白胨10g/L,酵母提取物5 g/L,牛肉膏10 g/L,葡萄糖20 g/L,醋酸钠5 g/L,柠檬酸二铵2 g/L,吐温-80 1 ml/L,硫酸镁0.6 g/L,硫酸锰0.05 g/L,磷酸氢二钾2 g/L,碳酸钙20 g/L;固体培养基中加入琼脂20 g/L:
其中所述左旋乳酸芽孢杆菌液体培养基:葡萄糖20g/L,玉米淀粉5 g/L, 豆粕粉30 g/L,玉米浆5 g/L,硫酸镁0.5 g/L,硫酸锰0.5 g/L,磷酸二氢钠0.5 g/L,氯化钠2 g/L,pH7.2,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;
研究表明,多种微生物具有通过氧化作用降解胆固醇的能力,如链霉菌(Streptomyces)、短杆菌(Brevibacterium)、棒状杆菌(Corynebacterium)、诺卡氏菌(Nocardia)、假单胞菌(Pseudomonas)、红球菌(Rhdococcus)、裂褶菌(Schizophyllum)、沙雷氏菌(Serratia)和节细菌(Arthrobacter)等。这些微生物含胆固醇氧化酶(CholesterolOxidase,EC,1.1.3.6,COX),能氧化降解胆固醇及其同系物。胆固醇氧化酶可氧化产生的胆甾-4-烯-3-酮是胆固醇(27C)完全分解成CO2和H2O的一系列过程中的关键前期中间产物,而产生的22C(22碳)羧酸又可能是侧链降解的关键步骤,但目前物降解胆固醇的具体途径还不十分清楚。 本发明的复合微生物饮品中含有相贺链霉菌(streptomyces ogaensis),其不仅仅能产生降解胆固醇的胆固醇氧化酶,能够快速将胆固醇氧化分解,还可通过细胞膜或壁结合胆固醇,通过共沉淀和吸收作用降解胆固醇;其还能产生一种抗肿癌的抗菌素--颈癌菌素,这种抗菌素对细菌,霉菌或酵母无活性,但其对肿瘤有明显的效果。
本发明的复合微生物饮品中含有布拉氏酵母菌,布拉氏酵母菌是一种非致病性,目前为止唯一在临床使用的真菌类微生态制剂,其具有独特的药理作用,通过抑制致病微生物的生长繁殖,减少致病微生物对粘膜上皮细胞的粘附和侵袭,释放短肽蛋白中和、钝化和降解细菌毒素,从而发挥抗致病微生物的作用,另一方面,在肠道内布拉氏酵母菌通过代谢释放多胺类物质(亚精胺和精胺)发挥许多生理功能,如提高小肠绒毛膜二糖酶水平,提高碱性磷酸酶,刺激肠道释放分泌型IgA,提高肠道局部抗感染能力,尤其最近研究发现,布拉氏酵母菌通过抑制炎症信号途径中NF-κB的易位而抑制炎症信号途径,发挥抗炎症作用。以上研究表明使用布拉氏酵母菌可加快病情恢复,缩短住院时间。对于腹泻的治疗和预防都有很显著的作用,并且具有较好的疗效及安全性,同时,布拉氏酵母菌富含维生素B群,能有效改善人体内消化道菌群平衡,增强机体免疫力,提供丰富的营养物质,从而达到防治消化道疾病和提高免疫等多重作用。布拉氏酵母菌可以在胃肠道内迅速复活,消耗氧气和分解过氧化氢造成的厌氧环境,其产生的酶可直接被肠胃组织代谢产生维生素以及挥发性脂肪酸,可改善肠道环境,降低肠道内的pH,抑制有害菌如大肠杆菌等的繁殖,同时有利于双歧杆菌和乳酸菌等微生物的生长。布拉酵母细胞内容物的内腔释放,可激活锌结合金属蛋白酶的活性,使肠道中多胺的含量显著增加,从而提高宿主双糖酶的分泌而改变肠道微生态环境。一些外国学者研究表明,人体中添加布拉氏酵母菌后,使其肠道内的病原性大肠杆菌的数量减少了,并且促进了有益菌(乳酸菌、粪肠球菌)的生长。
本发明中含有大量的丁酸梭菌,丁酸梭菌能促进有益的双歧杆菌、乳酸菌、拟杆菌的增殖和有效的抑制引起疾病的葡萄球菌、念珠菌、克雷伯菌、弯曲杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和伤寒沙门菌以及腐败菌的繁殖,从而减少了胺类、吲哚类和硫化氢等有害物质。丁酸梭菌通过利用大量的葡萄糖等还原糖代谢的主要产物为丁酸,而丁酸是肠道上皮组织细胞的再生和修复的主要营养物质。因此,对肠道上皮组织的再生和修复有很重要的意义。用丁酸梭菌或与乳杆菌、益生元等合用,对于因菌群失调而引起的急慢性腹泻、肠易激综合症、抗生素相关性肠炎、便秘等症状有良好的疗效,对于肠炎、肝硬化和放疗、化疗造成的免疫功能下降也能起到辅助的治疗作用。不少资料还说明,该菌还能促进维生素E的吸收,降解胆固醇,胆酸和提高抗氧能力。
本发明中含有低聚木糖(一种较好的益生元),低聚木糖对病原菌有较强的吸附力,如大肠杆菌、肠炎门氏菌、肺炎克雷伯氏菌、嗜水气单胞菌等都能吸附到低聚木糖上,由于低聚木糖不被肠道中的消化酶所降解,可携带附着的病原菌通过肠道排出体外,从而防止疾病在肠道中集群,达到防止腹泻的目的。低聚木糖可以促进肠道中的双歧杆菌快速生长,是其他低聚糖等益生元效果20倍以上。双歧杆菌利用低聚木糖,产生大量的短链脂肪酸;能刺激肠道蠕动,增加粪便湿润度,并保持一定的渗透压,从而防止便秘发生。摄入低聚木糖,可减少有毒代谢产物形成,大大减少了肝脏分解毒素的负担。摄入低聚木糖,持续2周至3个月,总血清胆固醇可降低20-50dl。还可提高女性血清中多密度脂蛋白胆固醇占总胆固醇的比率。研究表明,46个高血脂患者摄入低聚木糖持续5周后,其心脏舒张压平均下降了799.8Pa(6mmHg)。结果显示,人的心脏舒张压的高低与其粪便中双歧杆菌占总菌数的比率呈明显的负相关关系。
本发明中的微生物饮品中含有茶氨酸,茶氨酸(L-Theanine)是茶叶中特有的游离氨基酸。茶氨酸有甜味,是茶叶中生津润甜的主要成份; 茶氨酸的生理功效:(1)茶氨酸有降血压作用,降低胆固醇的功效;(2)茶氨酸有镇静作用,可能预防神经失调症、失眠症、经期综合症等;(3)茶氨酸能保护神经细胞可能用于对脑栓塞、脑出血、脑中风、脑缺血以及老年痴呆等疾病的防治;(4)茶氨酸能影响脑内神经传达物质的变化,增强记忆力;(5)茶氨酸能增强抗癌药物的疗效;(6)茶氨酸能抑制癌细胞的漫润;(7)茶氨酸能提高免疫力。
本发明中的微生物饮品中含有大量的活性的短乳杆菌与左旋乳酸芽孢杆菌,短乳杆菌能促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收,产生维生素B族等大量有益物质;使肠道菌群的构成发生有益变化,改善人体胃肠道功能,恢复人体肠道内菌群平衡,形成抗菌生物屏障,维护人体健康;抑制腐败菌的繁殖,消解腐败菌产生的毒素,清除肠道垃圾;抑制胆固醇吸收,降血脂、降血压作用;还具有抗肿瘤、预防癌症作用;可提高SOD酶活力,消除人体自由基,具抗衰老、延年益寿作用;有效预防女性泌尿生殖***细菌感染;控制人体内毒素水平,保护肝脏并增强肝脏的解毒、排毒功能。
短乳杆菌与左旋乳酸芽孢杆菌具有促吸收的作用。短乳杆菌与左旋乳酸芽孢杆菌在人体肠内发酵后可产生乳酸和醋酸,能提高钙、磷、铁的利用率,促进铁和维生素D的吸收。短乳杆菌发酵乳糖产生半乳糖,是构成脑神经***中脑苷脂的成分,与婴儿出生后脑的迅速生长有密切关系。乳杆菌与左旋乳酸芽孢杆菌可以产生维生素B1、B2、B6、B12及丙氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和苏氨酸等人体必需的营养物质,对于人体具有不容忽视的重要营养作用。
短乳杆菌与左旋乳酸芽孢杆菌可治疗慢性腹泻。通过用短乳杆菌与左旋乳酸芽孢杆菌对慢性腹泻患者临床观察研究表明,在服药两周以后,患者大便次数、形状异常,临床症状消失,对总有效率为90.3%,复发率低。抗生素相关性肠炎实际上是抗生素的使用,使原来过路菌或外籍菌(如肠杆菌)成为优势种群,它们大量增殖或分泌相关毒素与肠粘膜上皮细胞受体结合后使CAMP酶活性升高,大量水盐电解质丢失,而造成腹泻症状。增殖乳杆菌与双歧杆菌,扶植了肠道中的原籍菌,使机体定植抗力升高,有利于拮抗致病菌和条件致病菌的定植。短乳杆菌与左旋乳酸芽孢杆菌可治疗因大量使用抗生素而导致的伪膜性肠炎。有人采用短乳杆菌制剂治疗伪膜性肠炎380例,临床总治愈率无明显差异,但临床副作用和复发率均明显降低。
短乳杆菌可以治疗便秘。便秘是指排便次数减少或粪便干燥难解(一般两天以上无排便)而言,根据病因其大致上可分为器质性便秘和功能性便秘两大类。短乳杆菌主要用于功能性便秘这一类症状。引起功能性便秘一般来说与肠道菌失调密切相关,多半互为因果。成其是肠道外籍菌(或过路菌)等腐败菌增加,其产生相应有毒代谢产物如胺、酚、吲哚类等物质。通过调整肠道正常菌群,恢复肠道正常菌群平衡,使腐败菌数量大大减少,而其有毒代谢产物吸收减少,从而使便秘症状得以缓解。尤其补充短乳杆菌等原籍菌,其产生乙酸和乳酸pH值为2.8~3.1,使肠道呈酸性,其结果能控制由有害菌引起的异常发酵,并且刺激肠蠕动,从而减少水分的过度吸收而缓解便秘症状,还可以复活机体免疫功能,有利于调整内分泌—免疫功能恢复,恢复肠道蠕动功能从而缓解便秘等症状。
短乳杆菌能防治心血管疾病。人体血液中胆固醇含量会导致动脉硬化和高血压的发生,短乳杆菌等有益菌可以影响胆固醇的代谢,将其转化为人体不吸收的类固醇,降低血液中胆固醇的浓度,因而对高血压和动脉硬化有一定的防治作用。
左旋乳酸芽孢杆菌,在发酵过程中不仅仅能产生乳酸,而且可以产生胆固醇还原酶可使胆固醇转化为难以被人体胃肠道所吸收的粪甾醇,昌微生物降低胆固醇的另一条途径,而粪甾醇和粪甾酮等类固醇物质是被认为是无毒、不易重新吸收和代谢的饱和甾醇。
本发明的有益效果与优点:
本发明的复合微生物饮品使用的相贺链霉菌,丁酸梭菌,布拉氏酵母菌,左旋乳酸芽孢杆菌,短乳杆菌是经过严格筛选,在发酵与使用过程中是互惠互利的共生关系,其具体的配比:相贺链霉菌发酵液20份,丁酸梭菌发酵液40份,布拉氏酵母菌发酵液15份,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液30份,短乳杆菌发酵液30份,大豆粉2份,红糖2份,茶氨酸1份,低聚木糖5份,纯化水60份,是通过多次单因素与正交试验优化得到的,通过多年的临床验证,特别是加入相贺链霉菌与左旋乳酸芽孢杆菌发酵液后,本发明的复合微生物饮品在临床上对防治冠心病、高血压有特别明显的效果,是我们所未能预料到的。
本发明中的丁酸梭菌,布拉氏酵母菌,左旋乳酸芽孢杆菌,短乳杆菌,低聚木糖与茶氨酸都可以调节肠道菌群,抑制有害菌的生长,体内有大量微生物存在,而且它们都在积极消耗有害菌,其产生丁酸,乙酸和乳酸pH值为2.8~3.1,使肠道呈酸性,其结果能控制由有害菌引起的异常发酵,并且刺激肠蠕动,从而减少水分的过度吸收而缓解便秘症状,还可以复活机体免疫功能,有利于调整内分泌—免疫功能恢复,恢复肠道蠕动功能从而防治便秘。
本发明复合微生物饮品含有的多种微生物都能促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收,产生维生素B族等大量有益物质;使肠道菌群的构成发生有益变化,改善人体胃肠道功能,恢复人体肠道内菌群平衡,形成抗菌生物屏障,维护人体健康;抑制腐败菌的繁殖,消解腐败菌产生的毒素,清除肠道垃圾;抑制胆固醇吸收,降血脂、降血压作用;可提高SOD酶活力,消除人体自由基,具抗衰老、延年益寿作用;控制人体内毒素水平,保护肝脏并增强肝脏的解毒、排毒功能。
本发明中含有布拉氏酵母菌,低聚木糖与茶氨酸,低聚木糖对病原菌有较强的吸附力,如大肠杆菌、肠炎门氏菌、肺炎克雷伯氏菌、嗜水气单胞菌等都能吸附到低聚木糖上,由于低聚木糖不被肠道中的消化酶所降解,可携带附着的病原菌通过肠道排出体外,从而防止疾病在肠道中集群,配合布拉氏酵母菌达到防止腹泻的目的。
本发明中的丁酸梭菌,左旋乳酸芽孢杆菌,主要以芽孢形式存在,与布拉氏酵母菌,短乳杆菌复合,形成一种复合微生物活菌含量高、活性高、稳定性高、作用效果快的、无副作用,保存时间长(经过保质期试验,在常温下保存两年,其效果依然稳定),具有治疗高血压和冠心病的且兼具防治便秘,肿瘤与腹泻的复合微生物饮品。
本发明的复合微生物饮品通过安全性试验与临床验证其是安全有效的。
下面结合试验说明本发明复合微生物饮品的安全性与治病防病效果。
一、本发明复合微生物饮品的安全性试验效果
本发明复合微生物饮品在哈尔滨学院经大鼠急性毒性试验,结论结果表明复合微生物饮品对大鼠(按0.6ml/10g体重饲喂本发明复合微生物饮品14天)效果:大鼠全部存活,活动自如,毛发光滑,饮食正常,呼吸道、眼及口腔等处无分泌物外,未发现任何中毒症状,体重均有增加。与空白组对照组,比较,饲喂本复合微生物饮品的大鼠体重明显增加(P<0.001)。14天观察期结束,将大鼠脱臼处死解剖,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、小肠等脏器均未见明显异常表现。另外,大鼠胸腺系数和脾脏系数结果表明,与空白对照组比较,试验组大鼠脾脏系数明显增加(P<0.01),提示本复合微生物饮品具有免疫增强作用,属实际无毒类物质,安全度大。
本发明复合微生物饮品在河北农业大学经小鼠急性毒性试验,结论结果表明复合微生物饮品对小鼠(按0.4ml/10g体重饲喂本发明复合微生物饮品14天)效果:小鼠全部存活,活动自如,毛发光滑,饮食正常,呼吸道、眼及口腔等处无分泌物外,未发现任何中毒症状,体重均有增加。与空白组对照组,比较,饲喂本复合微生物饮品的小鼠体重明显增加(P<0.001)。14天观察期结束,将小鼠脱臼处死解剖,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、小肠等脏器均未见明显异常表现。提示本复合微生物饮品属实际无毒类物质,安全度大。
一、本复合微生物饮品在防治便秘上的应用效果
服用本发明复合微生物饮品治疗便秘效果如下:对便秘350人,餐后口服33ml一次,用一倍复合微生物饮品的温开水混合后饮服,一日三次,七天一疗程,经1-2个疗程,总有效可达100%,治愈率达90%以上,治愈以后,每两天至少喝一次复合微生物饮品,基本不再出现便秘症状。
主要病例
孙某,男,68岁,辽宁省绥中县某政府退休干部,患习惯性便秘10余年,虽经医治,但效果不佳,2015年4月,每天饭后服用本发明复合微生物饮品33ml,三天后,便秘改善,一周后便秘症状消失,以后每天喝一次,至今未再出现便秘。
赵某,女,58岁,辽宁省绥中县某政府退休教师,患习惯性便秘8余年,虽经医治,但效果不佳,2015年9月,每天饭后服用本发明复合微生物饮品33ml,两天后,便秘改善,一周后便秘症状消失,以后每天喝一次,至今未再出现便秘。
刘某,女,42岁,某公司技术高管,一年前胃穿孔将胃部分切除,近半年便秘,2015年10月,每天饭后服用本发明复合微生物饮品33ml,两天后,便秘改善,一周后便秘症状消失,以后每天喝一次,至今未再出现便秘。
二、本复合微生物饮品在防治腹泻上的应用效果
服用本发明复合微生物饮品治疗腹泻效果如下:对腹泻112人,口服33ml一次,用一倍复合微生物饮品的温开水混合后饮服,一日三次,三天一疗程,经1-2个疗程,总有效可达100%,治愈率达95%以上。
三、本复合微生物饮品在防治高血压及冠心病上的功效
高血压的诊断标准:在未服药的情况下,测量条件符合血压诊断标准,成年人(年满18岁)收缩压≥140mmHg或舒张压≥90mmHg为高血压。
血压水平分类如下:
理想血压:收缩压<120,舒张压<80;
正常血压:收缩压<130,舒张压<85;
正常高值:收缩压130—139,舒张压85—89;
1级高血压:收缩压140—159,舒张压90—99;
2级高血压:收缩压160—179,舒张压100—109;
3级高血压:收缩压≥180,舒张压≥110;
单纯收缩期高血压:收缩压≥140,舒张压<90;
亚组:临界收缩期高血压:收缩压140—149,舒张压<90;
高血压危险定义分层:
1、极高危险组:高血压3级或高血压1-2级伴靶器官损害(如糖尿病、心、脑、肾、血管病)及相关临床疾病;
2、高危组:高血压1-2级,伴至少3个靶器官损害,危险因素;
3、中危组:高血压1级,伴1-2个靶器官损害,危险因素,或高血压2级不伴有不超过2个靶器官损害,危险因素;
4、低危组:高血压1级,不拌有上述危险因素。
对上述标准的高血压患者(男女各半),服用本发明复合微生物饮品治疗效果如下:餐后口服33ml一次(一天100ml即一瓶),用一倍复合微生物饮品的温水混合后饮服,一日三次,十五天一疗程,经1-2个疗程。组分疗效:
正常高值:3256人达到正常血压69人,达到理想血压3187人;
1级高血压:1880人达到正常高值4人,达到正常血压226人,达到理想血压1650人;
2级高血压:656人达到正常高值56人,达到正常血压168人,达到理想血压432人;
3级高血压:336人达到2级高血压2人,达到1级高血压22人,达到正常高值38人,达到正常血压136人,达到理想血压138人;
低危组:1628人达到正常组32人,达到理想组1596人;
中危组:1880人达到了正常组230人。达到理想组1650人;
高危组:656人达到正常组224人,达到理想组432人;
极高危组:336人达到高危组2人, 达到中危组8人,达到低危险组14人,达到正常组174人,达到理想组138人。
主要病例
李某,男,50岁,沈阳市某政府公务员,发病时间:2年多,治疗时高血压160/100mmHg,治疗史:曾用复方降压片、丹参片,效果不佳。主诉:头病头晕,失眠。2016年3月4日至2016年3月20日,每天饭后饮用33ml本发明复合微生物饮品,血压回复正常,睡眠良好。
李某,男,58岁,私企老板,高血压,冠心病四年。曾用多种中西药治疗,效果不好。查体:精神欠佳,***、面色轻度紫绀,血压152/92mmHg。心脏:心浊音界向左扩大两横指,心音钝而弱。诊断:冠心病伴心衰。2015年6月2日至2015年8月10日,停掉所有中西药,每天饭后饮用33ml本发明的复合微生物饮品,身体状况恢复正常,心音及心脏大小恢复正常。
张某,女,68岁,辽宁省沈阳市某退休处长,发病时间:2015年9月30日,高血压最高175/100mmHg,常年便秘。治疗史:曾用卡托普利、三精斯乐平等,降压效果不好,仍有不适。2016年2月14日至2016年3月1日,停掉所有西药,每天饭后饮用33ml本发明复合微生物饮品(食用方法:用一倍复合微生物饮品的温水混合后饮服),血压恢复正常,便秘症状也消失。
具体实施方式
实施例1
一种复合微生物饮品,该复合微生物饮品的原料配比为:相贺链霉菌发酵液20份,丁酸梭菌发酵液40份,布拉氏酵母菌发酵液15份,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液30份,短乳杆菌发酵液30份,大豆粉2份,红糖2份,茶氨酸1份,低聚木糖5份,纯化水60份;其具体的制备方法,包括以下步骤:
步骤一:按重量份纯化水60份,大豆粉2份,红糖2份,茶氨酸1份,低聚木糖5份依次加入至发酵罐中,搅匀,将低聚木糖溶解,加热至121℃灭菌30分钟;降温到30℃;
步骤二:向步骤一发酵罐依次加入丁酸梭菌发酵液40份,短乳杆菌发酵液30份,混匀,30℃厌氧培养3-4天,待pH低于4时,检测丁酸梭菌芽孢含量不低于20亿CFU/ ml;再向发酵罐中加入相贺链霉菌发酵液20份,布拉氏酵母菌发酵液15份,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液30份,混匀,无菌灌装100ml/瓶,包装成品。
其中,相贺链霉菌发酵液的按以下方法制备:
取出相贺链霉菌菌种保藏管,用PDA固体培养基划平板进行复苏,30℃培养7天,在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中,在培养箱中30℃培养6-8天,待菌苔长满茄子瓶,产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱,调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml,即为相贺链霉菌种子液;
发酵:将上述制备的相贺链霉菌种子液以1%-3%的接种量接种至装有灭菌的600L的相贺链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中,控温28-32℃,开搅拌200r/min,前24小时,通气量为每分钟为300L空气,24-36小时,通气量为450L,36小时后,通气量为600L,培养44小时,检验其菌体含量为88g/L,即可停罐,即得到相贺链霉菌发酵液;
其中,所述的PDA号固体培养基:土豆200克,蔗糖20克,琼脂:20克,蒸馏水补足1000ml;
其中,所述的相贺链霉菌发酵培养基:豆粕粉3%,葡萄糖1%,石粉1%,大豆糖蜜2%,磷酸氢二钾0.04%,硫酸镁0.05%,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟。
其中,丁酸梭菌发酵液按以下方法制备:
取-80℃甘油管保藏的菌种1mL接种于装有9mLRCM培养基的试管中,37℃条件下静态厌氧活化48h,将活化好的菌种按1%(v/v)的接种量转接到灭过菌的100L丁酸梭菌种子培养基中。37℃条件下静态厌氧培养24h~36h,菌含量超过5亿CFU/ml,即可作为丁酸梭菌种子继续接种,将100L丁酸梭菌菌种子接至装有900L已经灭菌的丁酸梭菌发酵培养基的1吨的发酵罐中,抽真空,37℃培养6天,待丁酸梭菌产生芽孢,检测芽孢含量为46亿CFU/ ml,即可停止培养,即为丁酸梭菌发酵液;
其中,所述的RCM培养基:胰蛋白陈10g/L,牛肉膏10g,酵母膏10g/L,葡萄糖5g/L,氯化钠5g/L,可溶性淀粉1g/L,半胱氨酸盐酸盐0.5克/L,醋酸钠3g/L,pH7.0,121℃灭菌20min;
其中,所述的丁酸梭菌种子培养基::酵母膏15g/L,牛肉膏5g/L,KH2PO4 2g/L硫酸镁1g/L,半胱氨酸盐酸盐1g/L,NaHCO3 1g/L,CaCO3 1g/L,葡萄糖20g/L, PH7.0,121℃灭菌20min;
丁酸梭菌发酵培养基:大豆粉40g/L,红糖40 g/L,酵母膏15g/L,牛肉膏5g/L,KH2PO42g/L硫酸镁1g/L,半胱氨酸盐酸盐1g/L,NaHCO3 1g/L,低聚木糖5g/L,CaCO3 1g/L,葡萄糖5g/L, PH7.0,121℃灭菌20min。
其中,布拉氏酵母菌发酵液按以下方法制备:
取出菌种保藏管,用YPD固体培养基划平板进行复苏,30℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种150毫升YPD培养基中,在培养箱中30℃震荡培养24小时,种子采用2%的接种量,接种至装有350L酵母菌培养基的 500L发酵罐中,控温30℃,开搅拌200r/min,前10小时,通气量为每分钟100L,10小进后,通气量为每分钟350L,培养26小时,检测其菌液浓度,菌含量为24亿CFU/ml,即为布拉氏酵母菌发酵液;其中所述的YPD培养基:酵母膏10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂20 g,水1000mL。其中所述的酵母菌培养基:红糖25 g/L,酵母膏5g/L,蛋白胨10 g/L,硫酸铵1 g/L,硫酸镁0.5 g/L,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟。
其中,短乳杆菌发酵液按以下方法制备:
取出菌种保藏管,用MRS固体培养基划平板进行复苏,37℃厌氧培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中,在培养箱中37℃厌氧培养24小时,种子采用5%的接种量,接种至装有450L乳酸菌培养基的 500L发酵罐中,37℃厌氧培养26小时,检测其菌液浓度,菌含量为66亿CFU/ml,即短乳杆菌发酵液;
其中,所述的MRS固体培养基:蛋白胨10g/L,酵母提取物5 g/L,牛肉膏10 g/L,葡萄糖20 g/L,醋酸钠5 g/L,柠檬酸二铵2 g/L,吐温-80 1 ml/L,硫酸镁0.6 g/L,硫酸锰0.05 g/L,磷酸氢二钾2 g/L,琼脂20 g/L,碳酸钙20 g/L;其中,所述的乳酸菌培养基:葡萄糖3%,蛋白胨1.5%,牛肉膏0.75%,氯化钠0.1%,硫酸锰0.001%,硫酸镁0.02%,醋酸钠0.05%,碳酸钙1%,pH6.0。各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟。
其中,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液按以下方法制备:
取出菌种保藏管,用MRS固体培养基划平板进行复苏,37℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种500毫升MRS液体培养基中,在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量,接种至装有350L左旋乳酸芽孢杆菌液体培养基的 500L发酵罐中,控温37℃,开搅拌200r/min,前10小时,通气量为每分钟200L,10小进后,通气量为每分钟400L,培养42小时,检测其菌液浓度,芽孢含量为112亿CFU/ml,即左旋乳酸芽孢杆菌发酵液;
其中,所述的MRS液体培养基:蛋白胨10g/L,酵母提取物5 g/L,牛肉膏10 g/L,葡萄糖20 g/L,醋酸钠5 g/L,柠檬酸二铵2 g/L,吐温-80 1 ml/L,硫酸镁0.6 g/L,硫酸锰0.05 g/L,磷酸氢二钾2 g/L,碳酸钙20 g/L;固体培养基中加入琼脂20 g/L:
其中所述左旋乳酸芽孢杆菌液体培养基:葡萄糖20g/L,玉米淀粉5 g/L, 豆粕粉30 g/L,玉米浆5 g/L,硫酸镁0.5 g/L,硫酸锰0.5 g/L,磷酸二氢钠0.5 g/L,氯化钠2 g/L,pH7.2,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟。
Claims (6)
1.一种复合微生物饮品,其特征在于,该复合微生物饮品的原料配比为:相贺链霉菌发酵液20份,丁酸梭菌发酵液40份,布拉氏酵母菌发酵液15份,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液30份,短乳杆菌发酵液30份,大豆粉2份,红糖2份,茶氨酸1份,低聚木糖5份,纯化水60份;其具体的制备方法,包括以下步骤:
步骤一:按重量份纯化水60份,大豆粉2份,红糖2份,茶氨酸1份,低聚木糖5份依次加入至发酵罐中,搅匀,将低聚木糖溶解,加热至121℃灭菌30分钟;降温到30℃;
步骤二:向步骤一发酵罐依次加入丁酸梭菌发酵液40份,短乳杆菌发酵液30份,混匀,30℃厌氧培养3-4天,待pH低于4时,检测丁酸梭菌芽孢含量不低于20亿CFU/ ml;再向发酵罐中加入相贺链霉菌发酵液20份,布拉氏酵母菌发酵液15份,左旋乳酸芽孢杆菌发酵液30份,混匀,无菌灌装100ml/瓶,包装成品。
2.根据权利要求1所述的一种复合微生物饮品,其特征在于,所述的相贺链霉菌发酵液的菌体浓度为不低于80g/L。
3.根据权利要求1所述的一种复合微生物饮品,其特征在于,所述的丁酸梭菌发酵液的芽孢含量为不低于40亿CFU/ml。
4.根据权利要求1所述的一种复合微生物饮品,其特征在于,所述的布拉氏酵母菌发酵液的活菌含量为不低于20亿CFU/ml。
5.根据权利要求1所述的一种复合微生物饮品,其特征在于,所述的左旋乳酸芽孢杆菌发酵液的芽孢含量为不低于100亿CFU/ml。
6.根据权利要求1所述的一种复合微生物饮品,其特征在于,所述的短乳杆菌发酵液的活菌含量为不低于60亿CFU/ml。
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