CN105400729A - 一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌株 - Google Patents
一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌株 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌株，属于微生物领域。抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（<i>Bacillus？subtilis</i>）DM-005菌株，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC？No：10915，其保藏时间为：2015年06月03日。抑菌性产木聚糖酶的芽孢杆菌不仅能够提高畜禽机体的免疫能力，还能够提高饲料的消化率，大大提高了饲料的品质，有利于畜禽养殖业的健康发展。因此，筛选性能稳定，抑菌性强，产木聚糖酶高的芽孢杆菌菌株对提高饲料的品质促进畜禽养殖业健康发展有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌株。
背景技术
抗生素作为饲料添加剂应用于畜禽养殖业，在防治畜禽疾病，促进畜禽生长等当面发挥了巨大的作用。但是由于抗生素的过分使用，对畜禽养殖业的可持续发展和人类健康造成了一定的威胁。本发明主要针对此问题，致力于研发可替代抗生素的新产品。
芽孢杆菌在逆境条件下以内生孢子的形势存在，对酸碱，高温高压，胆盐都有一定的耐受能力，而且芽孢杆菌还能产生木聚糖酶、纤维素酶等酶类，有人将芽孢杆菌称为“超乳酸菌”。芽孢杆菌不属于动物肠道中的正常菌群，它的含量相对较少，却发挥着突出的作用，其主要抑菌作用机理主要包括：
可产生对动物有益的活性物质：产生木聚糖酶、纤维素酶等多种酶类可以促进动物吸收饲料中的养分。产生乳酸，乙酸，丙酸，脂肪酸能够降低胃肠道中的pH值，阻碍有害菌群的生长，同时还能促进动物对微量元素铁、磷的吸收。
生物拮抗作用：芽孢杆菌可对病源性的大肠杆菌，沙门氏菌有一定的拮抗作用，减少动物疾病的产生。芽孢杆菌进入动物体后，通过大量繁殖，数量增多，粘附在消化道的上皮细胞上，会形成一层保护膜，阻止病源菌在消化道内的定植，从而减少肠道内有害菌的数量，达到预防疾病的作用。
生物夺氧，抑制有害微生物：芽孢杆菌进入动物消化道后，芽孢会发育为营养细胞，进行新陈代谢，消耗大量氧气，降低肠道内的氧化还原电位，从而使得体内的有害微生物减少，肠道内的微生态保持相对的平衡。
提高动物机体免疫力：芽孢杆菌进入机体后，还可以诱导免疫细胞产生大量的细胞因子，刺激体内的淋巴循环，使机体的免疫能力提高。
净化环境：芽孢杆菌可产生分解有害物质的酶类，包括分解硫化氢的酶，氨基氧化酶，SOD酶以及过氧化氢等杀菌物质，可以帮助动物消除体内的毒害物质，促进机体健康。
抑菌性产木聚糖酶的芽孢杆菌不仅能够提高畜禽机体的免疫能力，还能够提高饲料的消化率，大大提高了饲料的品质，有利于畜禽养殖业的健康发展。因此，筛选性能稳定，抑菌性强，产木聚糖酶高的芽孢杆菌菌株对提高饲料的品质促进畜禽养殖业健康发展有重要意义。
发明内容
为解决现有技术采用抗生素作为饲料添加剂应用于畜禽养殖业，对畜禽养殖业的可持续发展和人类健康造成威胁的问题，本发明提供了一种筛选性能稳定、抑菌性强、产木聚糖酶高的枯草芽孢杆菌菌株，该菌株作为添加至饲料中提高畜禽对饲料的消化率、极大地提高了饲料的品质且加入该菌株利于畜禽养殖业的健康房展，同时对人类健康没有威胁。
本发明的技术方案为：
抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo：10915，其保藏时间为：2015年05月27日。
所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株，其16SrDNA的部分基因序列为：
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将菌株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005的16SrDNA序列进行BLAST分析，结果表明菌株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005与GenBank库中的枯草芽孢杆菌的同源性最高，相似比均为98%。
通过使用美国生物工程信息中心（NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI）BLASTN程序比对，发现本发明的CGMCCNo：10915菌株16SrRNA的基因序列与NCBI注册的多株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）16SrRNA的基因序列具有高度同源性，说明CGMCCNo：10915菌株是一株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。
所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株的获取方法，其步骤为：
1）土样中的微生物经培养、筛选获得出发菌株，即芽孢杆菌（Bacillussubtilis）S-018菌株；
2）将出发菌株接种于种子培养基培养，经筛选获得对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈大、产木聚糖酶酶活力高的芽孢杆菌SD-006菌株；
3）将菌株SD-006接种于种子培养基培养，经复筛获得遗传性质稳定、抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌性能稳定，木聚糖酶酶活力高的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005。
作为优选方案，所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株的获取方法步骤1）土样中的微生物经富集培养、平板划线，挑选单菌落进行革兰氏染色及芽孢染色，筛选出革兰氏阳性和产芽孢的菌株S-018菌株；步骤2）中，出发菌株对数生长中期的菌体，做成菌悬液，进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌试验，初筛筛选出抑菌圈大并产木聚糖酶酶活力高的菌株SD-006；步骤3）中SD-006对数生长中期的菌体，做成菌悬液，依次做耐胆盐试验、人工胃液耐受试验、人工肠液耐受试验和高铜耐受试验，并测定其木聚糖酶的酶活力，复筛筛选出遗传性质稳定、抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌性能稳定，木聚糖酶酶活力达46U/g以上的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005。
所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株在制备益生饲料添加剂中的应用。枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株抑菌效果好且产木聚糖酶酶活力高，可作为益生饲料中抗生素的替代品。
采用所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂的方法，步骤为：
1）将菌株移接至活化培养基，活化菌株；
2）将活化菌株接种于种子培养基，扩大培养；
3）将扩大培养后的菌株接种到发酵培养基上，进行发酵，得到的菌体冻干处理，冻干处理后的菌体即为益生饲料添加剂。
作为优选方案，采用所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂，步骤1）中的活化培养基为斜面培养基，所述斜面培养基包括酵母提取物0.5%、胰蛋白胨1%、氯化钠1%、琼脂5%、水92.5%，pH为7.2-7.4；步骤2）中的种子培养基为液体种子培养基，所述液体种子培养基包括酵母提取物0.5%、胰蛋白胨1%、氯化钠1%、水97.5%，pH为7.2-7.4；步骤3）中的发酵培养基包括牛肉膏0.3%、葡萄糖0.2%、蛋白胨1%、氯化钠1%、水97.5%，pH为7.5。
作为优选方案，采用所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂，步骤2）配制液体种子培养基，250ml三角瓶装液量为30-40ml，灭菌后于室温下接种斜面菌种后置于摇床上，37℃培养18-36h，得种子液。
作为优选方案，采用所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂，步骤3）配制发酵培养基，250ml三角瓶装液量为30-40ml，灭菌后于室温下接种种子液2-3ml，然后置于摇床上，37℃培养18-36h，结束发酵，离心，所得菌体冻干。
作为优选方案，采用所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂，步骤3）以5L发酵罐按3L装液量配制发酵培养基，调整pH至7.5，实罐灭菌，循环水冷却至37℃后接种培养好的种子液200-400ml，进行发酵，初始发酵搅拌转速为200-400r/min，通气量1.5-2.5L/min，罐内压力0.055-0.075MPa；发酵过程中控制发酵温度37±0.2℃，通过调节搅拌转速和通气量控制溶解氧为30%-35%；发酵时间15-20h，结束发酵，离心，所得菌体冻干。
本发明的有益效果为：
本发明所述菌株可有效地抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长，并且产木聚糖酶，菌体经过简单的冻干处理，可作为益生饲料中抗生素的替代品，用于生产抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌益生饲料添加剂，是一株极具研究开发价值的生产菌株。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株抑制金黄色葡萄球菌筛选平板透明圈照片；
图2枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株抑制大肠杆菌筛选平板透明圈照片；
图3枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株菌落形态特征照片；
图4枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株结晶紫染色照片；
图5枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株构建***发育树；
图6枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株优化后的发酵进程曲线。
枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，其保藏编号为CGMCCNo：10915，其保藏时间为：2015年05月27日。
具体实施方式
实施例1枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005，CGMCCNo：10915菌的获取
本发明的收藏菌株，即，抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株，其获取步骤为：
1）称取猪圈内土样1g，加入到盛有49ml无菌生理盐水的三角瓶中，用磁力搅拌器震荡15-20min，待土样与生理盐水充分混合后，放置于80℃水浴中加热20min，梯度稀释制成10-1-10-7cfu/ml不同浓度的菌液。取稀释度为10-4-10-7cfu/ml的菌液100ul于LB培养基上，涂布平板，将涂布有稀释液的平板放置于恒温生化培养箱中，37℃培养24h，将平板上长出的菌落连续划线分离2-3次，直至得到纯的单菌落。对纯的单菌落进行革兰氏染色和芽孢染色，最终筛选出出革兰氏阳性和产芽孢的菌株，即，出发菌株芽孢杆菌（Bacillussubtilis）S-018菌株，4℃保藏备用。
2）出发菌株S-018对数生长中期的菌体，做成细胞浓度为1×108cfu/ml的菌悬液，做金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌试验。
将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌接种于NB培养基中，放置于摇床中，37℃，140r/min培养12-15h，细菌总数约为109cfu/ml，取2ml加入到300ml温热的LB培养基中倒平板，待其凝固后将无菌滤纸片（直径8mm）浸泡于芽孢杆菌菌悬液中，然后将滤纸片用无菌镊子取出，呈三角形贴于含指示菌的平板上，放置于恒温培养箱中，37℃培养24h-28h，观察平板透明圈的产生情况及大小，并记录抑菌圈直径，同时测定其产的木聚糖酶的酶活力，初筛筛选出抑菌圈大并产木聚糖酶酶活力高的菌株SD-006。
3）菌株SD-006对数生长中期的菌体，做成细胞浓度为1×108cfu/ml的菌悬液，依次做耐胆盐试验、人工胃液耐受试验、人工肠液耐受试验、高铜耐受试验，并测定其木聚糖酶的酶活力。
耐胆盐试验：向LB液体培养基中加入猪胆盐，使其终浓度为0.3%，接入1ml菌株SD-006的芽孢杆菌菌悬液，置于摇床中，37℃，180r/min培养24h，然后取100ul培养液涂布平板，置于恒温生化培养箱中，37℃培养24h后进行活菌落计数，测定各菌的生物量。
人工胃液耐受性试验：向9ml人工胃液中加入经耐胆盐试验筛选出的菌株SD-006的芽孢杆菌菌悬液1ml，37℃水浴放置3h，然后取100ul处理液涂布平板，置于恒温生化培养箱中，37℃培养24h后进行活菌落计数，分别计算各菌的生物量。
人工肠液耐受性试验：取1ml经人工胃液耐受试验筛选出的菌株SD-006的芽孢杆菌菌悬液，加入到50ml无菌人工肠液中，37℃，180r/min摇床培养3h，然后取100ul处理液涂布平板，放置于恒温生化培养箱中，37℃培养24h后进行活菌落计数，分别计算各菌的生物量。
高铜耐受性试验：向LB液体培养基中加入CuSO4试剂，使其终浓度为0.3%，接入1ml经人工肠液耐受试验筛选出的菌株SD-006的芽孢杆菌菌悬液，37℃，180r/min摇床培养24h，然后取100ul培养液涂布平板，放置于恒温生化培养箱中，37℃培养24h后进行活菌落计数，分别计算各菌的生物量。
复筛筛选出遗传性质稳定、抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌性能稳定，木聚糖酶酶活力高达46U/g的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005。
枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株抑制金黄色葡萄球菌筛选平板透明圈照片如图1所示；枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株抑制大肠杆菌筛选平板透明圈照片如图2所示。由图1、图2所示，枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果非常好。
而且，枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005是菌株SD-006依次经过耐胆盐试验、人工胃液耐受试验、人工肠液耐受试验、高铜耐受试验复筛得到的，适于作为饲料添加剂。
上述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆该菌株（Bacillussubtilis）DM-005已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市海淀区中关村北一条13号，邮政编码：100080，其保藏编号为CGMCCNo：10915，其保藏时间为：2015年05月27日。
上述LB液体培养基（g/L）：酵母提取物5，胰蛋白胨10，氯化钠10，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4；
上述LB培养基（g/L）：酵母提取物5，胰蛋白胨10，氯化钠10，琼脂15，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4；
上述NB培养基（营养肉汤液体培养基）（g/L）：牛肉膏3，蛋白胨10，氯化钠5，蒸馏水1000ml，pH7.4；
上述人工胃液：取稀盐酸16.4ml，加水约800ml和胃蛋白酶10g，摇匀后，加水稀释成1000ml，用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌待用；
上述人工肠液:磷酸二氢钾6.8g，加水500mL溶解，用0.4%的氢氧化钠溶液调pH值至6.8，加水稀释至1000mL，每100mL液体中加入1g胰蛋白酶,混匀,用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌待用；
实施例2抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆该菌株（Bacillussubtilis）DM-005即CGMCCNo：10915菌株生物学特征、生理生化特性及16SrRNA基因测序
该保藏菌株的生物学特征是：在LB培养基平板上划线接种筛选到的菌株，放置于恒温培养箱中，37℃培养24h，枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株菌落形态特征照片如图3所示；观察单菌落的菌落形态，菌落为白色、圆形、菌落小，边缘不整齐、中间凹陷，有分泌物产生，与培养基接触不紧密；通过油镜观察，枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株结晶紫染色照片如图4所示，菌体呈棒杆状，芽孢呈椭圆形。用于菌体形态观察的固体培养基组成（g/L）：酵母提取物5，胰蛋白胨10，氯化钠10，琼脂15，pH7.2-7.4，121℃灭菌30min。上述形态特征观测的实验方法参考东秀珠、蔡妙英等编著的《常见细菌***鉴定手册》，科学出版社，2001，第一版。
该菌株生理生化试验培养基及实验方法参考东秀珠、蔡妙英等编著的《常见细菌***鉴定手册》，科学出版社，2001，第一版。菌株DM-005生理生化实验结果详见表1。
表1菌株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005部分生理生化特征
注：“+”呈阳性；“-”呈阴性。
将实施例1选育得到的抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆该菌株（Bacillussubtilis）DM-005即CGMCCNo：10915：菌株委托上海生工生物科技公司进行16SrRNA基因测序。
测试方法：挑取斜面培养物于10μl灭菌水中，99℃变性后离心取上清液作为模板，根据原核生物16SrDNA保守序列选择引物:
27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’
1492R：5’-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’
扩增目的片段，取5μl进行琼脂糖凝胶电泳，PCR产物用回收试剂盒进行回收，并送往上海生工生物科技公司测序。
测序结果：抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆该菌株（Bacillussubtilis）DM-005即CGMCCNo：1091516SrDNA测序核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
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通过使用美国生物工程信息中心（NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI）BLASTN程序比对，发现本发明的CGMCCNo：10915菌株16SrRNA的基因序列与NCBI注册的多株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）16SrRNA的基因序列具有高度同源性，说明CGMCCNo：10915菌株是一株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。
枯草芽孢杆该菌株（Bacillussubtilis）DM-005构建***发育树如图5所示。
实施例3枯草芽孢杆该菌株（Bacillussubtilis）DM-005即CGMCCNo：10915菌株的应用
将枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株移接斜面培养基活化；配制液体种子培养基，250ml三角瓶装液量为30-40ml，121℃蒸汽灭菌，冷却至室温，接种斜面菌种2环后置于旋转转速为180r/min、旋转半径为40mm的摇床上，37℃培养24h，得种子液；配制发酵培养基，250ml三角瓶装液量为30-40ml，121℃蒸汽灭菌20min，冷却至室温，接种种子液2-3ml后置于转转速为180r/min、旋转半径为40mm摇床上，37℃培养24h结束发酵，离心，所得菌体冻干，计算菌体量，可直接添加到益生菌饲料中。
或者：
以5L发酵罐按3L装液量配制发酵培养基，调整pH7.5，121℃实罐灭菌，循环水冷却至37℃后接种培养好的种子液300ml，进行发酵，初始发酵罐参数设置为：搅拌转速为300r/min，通气量2L/min，罐内压力0.065MPa；发酵过程中控制发酵温度37±0.2℃，通过调节搅拌转速和通气量控制溶解氧为30%-35%；发酵周期为15-20h；离心，所得菌体冻干，计算菌体量，可直接添加到益生菌饲料中。
上述斜面培养基包括酵母提取物0.5%、胰蛋白胨1%、氯化钠1%、琼脂5%、水92.5%，pH为7.2-7.4；
上述液体种子培养基包括酵母提取物0.5%、胰蛋白胨1%、氯化钠1%、水97.5%，pH为7.2-7.4；
上述发酵培养基包括牛肉膏0.3%、葡萄糖0.2%、蛋白胨1%、氯化钠1%、水97.5%，pH为7.5。
上述菌株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005即CGMCCNo：10915发酵进程测定：将保藏的菌株在LB斜面上进行活化，然后接种到已经优化好的发酵培养基中，按优化后的发酵条件进行培养，间隔2h进行一次取样，并对样液进行一定的稀释，测定发酵液对指示菌的抑菌圈大小和选择波长为600nm测定吸光值，考查菌体的生物量。选择DNS法测定发酵培养基中的残糖含量。以吸光值和抑菌圈直径为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制菌株DM-005优化后的发酵进程曲线如图6所示。
由图6可知：枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最高达16mm，对大肠杆菌的抑菌圈直径最高大于12mm，枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果非常好。可以替代抗生素作为益生饲料添加剂。
Claims (10)
1.抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo：10915，其保藏时间为：2015年06月03日。
2.如权利要求1所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株，其特征在于，其16SrDNA的部分基因序列为：
gggccgtggcggcgtgctatacatgcaagtcgagcggacagatgggagcttgctccctga60
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3.如权利要求1所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株的获取方法，其特征在于，其步骤为：
1）土样中的微生物经培养、筛选获得出发菌株，即芽孢杆菌（Bacillussubtilis）S-018菌株；
2）将出发菌株接种于种子培养基培养，经筛选获得对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈大、产木聚糖酶酶活力高的芽孢杆菌SD-006菌株；
3）将菌株SD-006接种于种子培养基培养，经复筛获得遗传性质稳定、抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌性能稳定，木聚糖酶酶活力高的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005。
4.如权利要求3所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株的获取方法，其特征在于：步骤1）土样中的微生物经富集培养、平板划线，挑选单菌落进行革兰氏染色及芽孢染色，筛选出革兰氏阳性和产芽孢的菌株S-018菌株；步骤2）中，出发菌株对数生长中期的菌体，做成菌悬液，进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌试验，初筛筛选出抑菌圈大并产木聚糖酶酶活力高的菌株SD-006；步骤3）中SD-006对数生长中期的菌体，做成菌悬液，依次做耐胆盐试验、人工胃液耐受试验、人工肠液耐受试验和高铜耐受试验，并测定其木聚糖酶的酶活力，复筛筛选出遗传性质稳定、抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌性能稳定，木聚糖酶酶活力达46U/g以上的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005。
5.如权利要求1所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株在制备益生饲料添加剂中的应用。
6.采用所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂的方法，其特征在于，步骤为：
1）将菌株移接至活化培养基，活化菌株；
2）将活化菌株接种于种子培养基，扩大培养；
3）将扩大培养后的菌株接种到发酵培养基上，进行发酵，得到的菌体冻干处理，冻干处理后的菌体即为益生饲料添加剂。
7.如权利要求6所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂的方法，其特征在于，步骤1）中的活化培养基为斜面培养基，所述斜面培养基包括酵母提取物0.5%、胰蛋白胨1%、氯化钠1%、琼脂5%、水92.5%，pH为7.2-7.4；步骤2）中的种子培养基为液体种子培养基，所述液体种子培养基包括酵母提取物0.5%、胰蛋白胨1%、氯化钠1%、水97.5%，pH为7.2-7.4；步骤3）中的发酵培养基包括牛肉膏0.3%、葡萄糖0.2%、蛋白胨1%、氯化钠1%、水97.5%，pH为7.5。
8.如权利要求6或7所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂的方法，其特征在于：步骤2）配制液体种子培养基，250ml三角瓶装液量为30-40ml，灭菌后于室温下接种斜面菌种后置于摇床上，37℃培养18-36h，得种子液。
9.如权利要求6或7所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂的方法，其特征在于：步骤3）配制发酵培养基，250ml三角瓶装液量为30-40ml，灭菌后于室温下接种种子液2-3ml，然后置于摇床上，37℃培养18-36h，结束发酵，离心，所得菌体冻干。
10.如权利要求6或7所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）DM-005菌株生产益生饲料添加剂的方法，其特征在于：步骤3）以5L发酵罐按3L装液量配制发酵培养基，调整pH至7.5，实罐灭菌，循环水冷却至37℃后接种培养好的种子液200-400ml，进行发酵，初始发酵搅拌转速为200-400r/min，通气量1.5-2.5L/min，罐内压力0.055-0.075MPa；发酵过程中控制发酵温度37±0.2℃，通过调节搅拌转速和通气量控制溶解氧为30%-35%；发酵时间15-20h，结束发酵，离心，所得菌体冻干。
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