CN105624071A - 一株唾液乳杆菌xjp2及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一株唾液乳杆菌XJP2及其应用，本发明提供的唾液乳杆菌XJP2分离自健康肉鸡盲肠黏膜，所述唾液乳杆菌<i>Lactobacillus？salivarius？</i>XJP2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC？No.11386。所述唾液乳杆菌XJP2对酸、胆盐具有较好的耐受性，可在动物肠道定植。所述唾液乳杆菌XJP2体外培养繁殖快，且L-乳酸产量高，具有预防肉鸡细菌性腹泻，改善肠道菌群等功能，可用于微生态制剂的开发。

Description

一株唾液乳杆菌XJP2及其应用
技术领域
本发明主要涉及微生物技术领域，具体涉及一株唾液乳杆菌XJP2及其应用。
背景技术
正常情况下，肠道菌群与动物机体保持着平衡关系，维持机体的健康状态：一方面通过菌膜屏障或竞争排斥作用于进入机体的病原菌争夺黏膜附着位点，使病原菌无法定植，增强机体免疫力，降低发病率；另一方面菌群参与机体的物质代谢，营养转化与合成等，促进动物健康生长。乳酸菌是动物体内的有益菌群之一，是动物肠道的正常定植菌群，具有生物拮抗、改善动物肠道生态环境、提高动物免疫力等多种作用，已被广泛地应用于动物养殖中。
目前，乳酸菌的研究与应用较多，市场相关产品种类繁多，但共同的问题是乳酸菌对酸、胆盐的耐受性较差，能否定植于肠道黏膜，在肠道中长期生存并发挥作用。乳酸菌摄入后只有在消化道黏膜粘附、定植，才可通过竞争性排斥抑制病原菌繁殖，产生代谢产物或生理活性物质杀灭有害病原微生物，进而达到恢复宿主抵抗力，修复肠道菌群屏障，治愈肠道疾病的作用。所以筛选能在动物消化道黏膜上定植的菌种至关重要。
发明内容
本发明提供了一株唾液乳杆菌XJP2及其应用，所述唾液乳杆菌XJP2具有较好的酸耐受性和胆盐耐受性，可在肠道内粘附定植，同时还可预防肉鸡细菌性腹泻，具有调节肠道菌群的作用。
为实现上述发明目的，本发明通过下述技术方案予以实现：
本发明提供了一株唾液乳杆菌XJP2，其分类命名为唾液乳杆菌Lactobacillussalivarius，其保藏编号为CGMCCNo.11386。
进一步的：所述唾液乳杆菌XJP2呈革兰氏阳性，菌落圆形，边缘整齐，乳白色，菌落光滑平整。
进一步的：所述唾液乳杆菌XJP2培养20h后L-乳酸产量大于18.2g/L。
进一步的：所述唾液乳杆菌XJP2对酸、胆盐具有较好的耐受性。
本发明还提供了所述的唾液乳杆菌XJP2在制备用于肉鸡养殖的微生态添加剂中的应用。
进一步的：所述唾液乳杆菌XJP2能显著提高盲肠中乳酸菌数量。
进一步的：所述唾液乳杆菌XJP2能预防肉仔鸡细菌性腹泻。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和技术效果：本发明从健康肉鸡盲肠黏膜中筛选到一株唾液乳杆菌XJP2，可在动物肠道粘附定植；对酸和胆盐具有较好的耐受性；而且唾液乳杆菌XJP2体外培养繁殖快，可用于微生态制剂的开发，应用于肉鸡养殖中，具有预防细菌性腹泻、调节动物肠道菌群的功能。
附图说明
图1为所述唾液乳杆菌XJP2在MRS平板上的菌落形态；
图2为所述唾液乳杆菌XJP2生长曲线；
图3为所述盲肠食糜样品DGGE实验结果。
具体实施方式
结合以下具体实例对本发明的技术方案作进一步详细的说明。
实施例1、唾液乳杆菌的筛选
1、唾液乳杆菌XJP2的分离筛选
以健康肉鸡为样品，用无菌载玻片刮取盲肠黏膜于无菌水中，振荡混匀进行梯度稀释，MRS培养基倾注培养筛选“溶钙圈”明显的菌落，多次纯化后得到单菌落，命名为XJP2，保存。所述MRS培养基为培养乳酸菌的通用培养基，其配方为：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母粉5g/L，葡萄糖20g/L，吐温801ml/L，磷酸氢二钾2g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸三铵2g/L，硫酸镁0.58g/L，硫酸锰0.25g/L，碳酸钙5g/L，pH6.2。
所述菌株XJP2在MRS平板的菌落形态如图1所示，其生物学特性：革兰氏阳性、镜检为短杆状；菌落圆形、光滑平整，边缘整齐，较湿润，乳白色。生理生化指标显示菌株XJP2不能还原硝酸盐，不液化明胶，不产生吲哚和硫化氢，且接触酶试验阴性。
2、唾液乳杆菌XJP2的16SrRNA序列测定
以所述菌株XJP2的DNA为模板，16SrRNA通用引物进行扩增，扩增片段进行序列测定；Blast比对显示该菌株序列与GenBank基因库中Lactobacillussalivarius的16srRNA序列同源度最高，同源率为99％。通过DNAMAN6.0对Genbank中已有的乳杆菌属的16SrRNA序列进行遗传进化分析，结果显示，菌株XJP2与Lactobacillussalivarius同源性最高，判定该菌株XJP2为唾液乳杆菌。
将筛选到的菌株XJP2进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2015年9月16日；唾液乳杆菌Lactobacillussalivarius的保藏编号为CGMCCNo.11386。
实施例2、唾液乳杆菌XJP2的生长测定
将活化的XJP2菌液以1％(约107cfu/mL)的接种量接种于所述MRS液体培养基中，37℃，160rpm培养24h，每隔3h取样，在600nm下测定吸光值，绘制生长曲线图。如图2所示，实验结果表明，XJP2培养3h即进入对数生长期，12h进入稳定期。培养20h时L-乳酸产量为18.2g/L。
实施例3、唾液乳杆菌XJP2对酸、胆盐的耐受性测定
将活化的XJP2菌液以1％(约107cfu/mL)的接种量分别接种于pH为2.5、3.5、4.5的MRS培养基中，37℃静置培养。在0h、2h、4h取样，MRS倾注计数。用同样的方法处理菌株，将菌液接种于猪胆盐浓度为0.1％、0.2％、0.3％的MRS培养基中，37℃静置培养。在0h、2h、4h取样，MRS倾注计数。
从表1、表2结果可以看出，菌株XJP2对酸、胆盐具有较好的耐受性，pH2.5或0.3％胆盐的MRS培养基中培养2h后活菌存活率均超过70％，具有较好的抗逆性。
表1菌株XJP2对酸耐受性结果(cfu/mL)
表2菌株XJP2对胆盐耐受性结果(cfu/mL)
实施例4、唾液乳杆菌XJP2预防肉鸡细菌性腹泻试验
选1日龄肉仔鸡100只，随机分为2组，每组100只。试验组饮水中添加唾液乳杆菌菌液，添加量为106cfu/L，对照组不添加菌液，两组均按正常程序饲喂，观察、统计腹泻率，成活率。试验期间，试验组成活率明显高于对照组，腹泻死亡率比对照组减少85％，试验表明所述唾液乳杆菌XJP2对预防肉仔鸡细菌性腹泻，减少死亡率具有显著效果。
实施例5、唾液乳杆菌XJP2对肉鸡体内益生作用试验
试验采用单因素完全随机设计，135只健康1日AA肉鸡随机分为3组，每组3个重复，每个重复15只鸡。对照组日粮和饮水中不添加唾液乳杆菌，试验组日粮中分别添加106cfu/g、107cfu/g唾液乳杆菌，42日龄取盲肠食糜样品，实时荧光定量PCR测定样品总菌、乳酸杆菌、大肠杆菌菌量；DGGE分析总菌多样性。表3和表4实验结果显示，日粮中添加107cfu/g唾液乳杆菌XJP2，可显著提高盲肠中乳酸菌数量(P<0.05)；提高肠道菌群多样性(如图3所示)，对肠道菌群具有一定的调节作用。
表3盲肠内容物菌数结果(Logcfu/g)
表4盲肠总菌多样性指数
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一株唾液乳杆菌XJP2，其特征在于：其分类命名为唾液乳杆菌Lactobacillussalivarius，其保藏编号为CGMCCNo.11386。
2.根据权利要求1所述的唾液乳杆菌XJP2，其特征在于：所述唾液乳杆菌XJP2呈革兰氏阳性，菌落圆形，边缘整齐，乳白色，菌落光滑平整。
3.根据权利要求1所述的唾液乳杆菌XJP2，其特征在于：所述唾液乳杆菌XJP2培养20h后L-乳酸产量大于18.2g/L。
4.根据权利要求1所述的唾液乳杆菌XJP2，其特征在于：所述唾液乳杆菌XJP2对酸、胆盐具有较好的耐受性。
5.权利要求1所述的唾液乳杆菌XJP2在制备用于肉鸡养殖的微生态添加剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的唾液乳杆菌XJP2在制备用于肉鸡养殖的微生态添加剂中的应用，其特征在于：所述唾液乳杆菌XJP2能显著提高盲肠中乳酸菌数量。
7.根据权利要求5所述的唾液乳杆菌XJP2在制备用于肉鸡养殖的微生态添加剂中的应用，其特征在于：所述唾液乳杆菌XJP2能预防肉仔鸡细菌性腹泻。
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