CN104126415A - 黄芪秸秆和芪头固体复合培养料及用其生产杏鲍菇的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黄芪秸秆和芪头固体复合培养料及用其生产杏鲍菇的方法，以解决生产杏鲍菇用的原料短缺以及现有方法生产杏鲍菇产量低的问题。该方法包括杏鲍菇菌种纯化与复壮、杏鲍菇液体菌种制备、复合固体培养料制备及杏鲍菇栽培步骤。本发明把黄芪秸秆与农作物秸秆复合成适宜杏鲍菇生长的固体复合培养料，以杏鲍菇液体菌种为栽培种生产杏鲍菇。在保护环境的同时为人们提供优质的菌类产品，可产生良好的社会、经济、生态效益。有利于食用菌生产企业调整产业结构，增加新产品，使食用菌产业可持续发展。
Description
技术领域
本发明属于食用菌生产领域，具体涉及一种黄芪秸秆和芪头固体复合培养料及用其生产杏鲍菇的方法。
背景技术
杏鲍菇是兼营养价值、药用价值及经济价值与一体的优质食用菌，而生产杏鲍菇用的原料短缺、栽培技术落后限制了杏鲍菇产业的发展。
现有技术公开了利用中药渣生产食用菌的方法，但中药渣组成复杂，药用成分含量低，栽培效果不理想。
发明内容
本发明的目的是提供一种黄芪秸秆和芪头固体复合培养料，以解决生产杏鲍菇用的原料短缺的问题。
本发明的另一个目的是提供一种用黄芪秸秆和芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法，以解决现有方法生产杏鲍菇产量低的问题。
本发明技术方案如下：一种黄芪秸秆和芪头固体复合培养料，它以黄芪秸秆和芪头为主料，以玉米秸秆、玉米芯为辅料，按以下重量份原料加水制成，黄芪秸秆和黄芪芪头25.0份～35.0份、玉米秸秆和玉米芯25.0份～35.0份、棉籽壳15.0份～25.0份、木屑25.0份～35.0份、麦麸10.0份～15.0份、玉米粉2.0份～3.0份、黄豆粉1.0份～3.0份、石膏1份、石灰1份、磷酸氢二钾0.05份-0.15份、磷酸二氢钾0.05份-0.15份、硫酸镁0. 05份-0.15份，料水比为１:1.25-1.50，黄芪秸秆和黄芪芪头的重量比为1:1，玉米秸秆和玉米芯的重量比为1:1。
用上述黄芪秸秆和芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法，包括下列步骤：A、杏鲍菇菌种纯化与复壮，B、杏鲍菇液体菌种制备，C、杏鲍菇栽培；其中步骤A杏鲍菇菌种纯化与复壮过程如下：
a.杏鲍菇的原生质体化与纯化：将杏鲍菇（Pleurotus eryngii ）(购买于中国医学科学院生物研究所生物技术室)的双核菌丝体接种于铺有玻璃纸环的加富PDA培养基上,20-28℃培养4-5天；菌丝长满玻璃纸环时，无菌操作将玻璃纸环连同菌丝体转入4-6ml纤维素酶与蜗牛酶的混合酶液中，在32-36℃温度、350-450rpm转速的摇床中酶解6-10h；酶解液用浓度为0.5-0.7摩尔的MgSO·7H2 O溶液稀释，MgSO·7H2 O溶液的用量为酶解液容积的2倍，过滤；滤液以2400-2600rpm转速离心；取中层液加MgSO4 溶液制成净化原生质体悬液；取原生质体悬液加入PDA培养液，在细胞培养瓶中于22-25℃温度下静置培养；取经过PDA培养液培养46-50h的原生质体液体培养液涂附有综合PDA培养基的平板，22-25℃温度下培养，培养约8-12天,当再生菌落出现时，随即转管培养，菌丝长满试管后进行镜检；菌丝体无锁状联合的为单核体X，具有锁状联合的为双核体Y, 双核体Y扩大培养，保存；
b.单核体交配培养：将两个拟交配的步骤a得到的单核体X相距约0.5cm接种于附有综合PDA培养基的平板上，25℃黑暗条件下倒置培养5-7d；当两菌落相交后5-7d，取两菌落交界处及其外缘的菌丝体，转到附有综合PDA培养基的平板中培养，菌丝萌发3d后显微镜检查，挑出具有锁状联合的双核菌丝扩大培养，保存；
c.出菇试验：用步骤a扩大培养的双核体Y和步骤b扩大培养的双核菌丝交配获得的双核体新菌株作出菇试验；评价选优，对理想子实体个体组织分离，双核化稳定，以生物学性状及产量稳定的菌种作为生产母种，保存备用,称杏鲍菇一级种。
优选的，所述步骤a中纤维素酶与蜗牛酶的混合酶液的质量百分比浓度为1.0%。
优选的，所述步骤a中制备净化原生质体悬液取中层液的过程为，取中层液2.0ml加3-5ml的浓度为0.5-0.7摩尔的MgSO4 溶液摇匀，离心、洗涤，如此重复洗涤2次；最后取中层液2.0ml加8.0ml的浓度为0.5-0.7摩尔的MgSO4溶液制成净化原生质体悬液。
优选的，所述步骤a中取原生质体悬液静置培养过程为，取原生质体悬液2.0ml加入7-9ml含0.4摩尔蔗糖的PDA培养液培养；然后取原生质体液体培养液0.2ml涂附有综合PDA培养基的平板或者涂含0.4摩尔蔗糖的附有综合PDA培养基的平板。
优选的，所述步骤B的具体过程如下：
(1) 制作二级固体发酵原种培养基：将颗粒状木屑和麦麸过筛，选用0.425-0.850mm之间的颗粒为原料；按二级固体发酵原种培养基的配方混合原料,搅拌均匀，使含水量在60-65%之间；将二级固体发酵原种培养基装入750ml的菌种瓶中，压紧、压平，每瓶装湿料约400-450g或干料180-240g，盖上棉塞，0.13mpa-0.15mpa压力下,灭菌80-100min；
上述二级固体发酵原种培养基的重量配比为：木屑35.0份～45.0份、麦麸40.0份～55.0份、玉米粉2.0份～6.0份、黄豆粉1.0份～5.0份，磷酸氢二钾0.05份-0.15份、磷酸二氢钾0.05份-0.15份、硫酸镁0. 05份-0.15份；料水比为１:1.25-1.50；
(2) 杏鲍菇二级固体发酵原种的培育：将上述杏鲍菇一级种接种于步骤（1）的杏鲍菇二级固体发酵原种培养基中,在23-25℃温度下培养,菌丝长满后即成；
(3)液体菌种制作：将杏鲍菇液体菌种培养基分装到三角瓶中（500ml三角瓶中装杏鲍菇液体菌种培养基300ml，1000ml三角瓶装中装杏鲍菇液体菌种培养基600ml）；盖上棉塞，在0.13mpa-0.14mpa压力下灭菌 30min；待培养基温度降至30℃以下时，接入步骤(2)得到的杏鲍菇二级固体发酵原种（500ml三角瓶中接入2接种勺杏鲍菇二级固体发酵原种，1000ml三角瓶中接入4接种勺杏鲍菇二级固体发酵原种）；接完种的三角瓶在23-28℃温度，120-180rpm转速下振荡器振荡培养3-8天，成为杏鲍菇液体菌种；
上述杏鲍菇液体菌种培养基的重量配比为：麦麸2.0%～5.0%、玉米粉1.0%～3.0%、黄豆粉1.0%～2.0%、蛋白胨0.10%～0.2%、磷酸氢二钾0.05%-0.15%、磷酸二氢钾0.05%-0.15%、硫酸镁0.05%-0.10%，余量为水；制作过程为将麦麸、玉米粉、黄豆粉煮汁，过滤，滤液与其余组分的水溶液合并，补足水份成为杏鲍菇液体菌种培养基；
若需要的生产的杏鲍菇液体菌种量较大时，可以直接用液体菌种培养器（发酵罐）生产；
按操作规程在发酵罐中注入杏鲍菇液体菌种培养基，灭菌，降温到30℃以下时接种；
(4)接种:将杏鲍菇二级固体发酵原种在无菌条件下捣碎，并入盛有800ml无菌水的1000ml灭菌三角瓶中，摇匀，在酒精火焰的保护下，到入发酵罐中，接种量为100L培养基接二级固体发酵原种2-5L；
（5）培养：在24-26℃温度、罐压0.02-0.04mpa的条件下,培养时间3-8d,经检验合格后，为杏鲍菇液体菌种。
优选的，所述步骤D的具体过程如下：
(1)菌包冷却:将权利要求1的黄芪秸秆和芪头固体复合培养料灭菌，将料袋置于洁净处冷却；在装袋灭菌冷却的全过程中，料袋最好盛放在周转筐内，减少搬动，降低污染率；
(2)液体菌种接种:当料袋温度冷却至28℃以下时，即可置于接种箱或接种室内接种；常规方法消毒，严格按无菌操作接种，直立出菇一头接种，墙式出菇两头接种，细棒长袋横卧出菇于袋身同侧打三眼接种；每个接种点用接种枪移入杏鲍菇液体菌种5.0ml,封口；
(3)发菌管理：接种完毕后，及时搬入事先清扫消毒的培养室内发菌；发菌期间的主要工作是控温、降湿、通风、遮光、翻堆和清除杂菌；培养室气温应控制在20-26℃之间，初期气温以25℃为宜；菌袋中的料温上升后，室温应调低至20-25℃；整个发菌阶段，料温都不要超过28 ℃；料温过高，轻则产生热害阻碍发菌，影响后期产量；重则烧菌，导致栽培失败；
在发菌阶段，培养室应遮光，维持黑暗，空气相对湿度控制在70％以内，经常通风换气，保持空气新鲜；每隔10 d翻堆一次，使菌袋发菌均匀，同时捡出污染菌袋；为加快菌丝生长，扎绳封口的菌袋应在菌丝封面并吃料2－3cm后扎眼透气；气温较高时，应注意防虫；在适宜的环境条件下，菌丝一般经40 d可长满菌袋；
(4)催蕾：菌丝长满袋后，继续培养10d，积累更多的养分；当气温下降至10—18 ℃时，就可进行催蕾管理；为了使其出菇整齐一致，可先进行搔菌处理；具体做法是：用小勺刮去袋口表层老菌种，并使袋口料面变平；搔菌时间一般在菌丝满袋后即可进行，因搔菌后还需要10 d的菌丝恢复时间，菌袋在此期间可进一步成熟；
如果袋口或菌袋中部已有原基形成，则不再进行搔菌；可以直接进入出菇管理；搔菌后要进行保湿管理，用塑膜将袋口覆盖，或用纸将套环口封住；约过10d，当料面重新长出新的白色气生菌丝时，即可喷水增湿催蕾；催蕾期间温度控制在10-18℃之间，低于8℃或高于20℃都难于形成原基，最佳催蕾温度为10—15℃；
催蕾期间，空气湿度应维持在90％-95％，增加散射光刺激，加强通风，保持空气新鲜；经过3-6d，即可出现白色原基，原基进一步分化形成菇蕾；
(5)出菇管理：当原基分化形成1－2 cm小菇蕾时，应及时开袋进行出菇期的管理；开袋过早，原基难于形成或出菇不整齐；开袋过迟，子实体己在袋内长大，会形成畸形菇，严重时子实体会萎缩腐烂；将袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2—3 cm，露出小菇蕾；
如果幼菇过密，可适当疏蕾，汰劣存优；短袋每袋留3—4个，长袋每穴留1-3朵，以保持菇体形美、个大，商品率高；出菇阶段，必须注意温度、湿度、光照和通风的调控，才能获得高产。
甘肃是我国重要的中药材原产地和主产地，药材资源覆盖区域广、资源种类多、种植面积大，产量高，特色优势十分明显，道地品种优势突出。近年来，不断加大对中药材产业的引导和扶持，全省现有2540种中药材品种资源，常年人工栽培的品种有350余种，大宗地道药材有30多种，尤其是甘肃地产的当归、党参、黄(红)芪、大黄、甘草等主要产品产量占全国的70%到95%。经过近年来的持续发展，已初步形成了一定规模的中药产业体系，成为全省医药经济的重要组成部分，具有较强发展优势和广阔市场前景。种植面积大，产量高。
中草药产业的发展积累了大量的秸秆、芪头等生物质原料，随意堆放，腐烂变质、焚烧，造成环境污染、资源浪费等诸多问题。
黄芪秸秆和芪头含有一定量的多糖、皂苷、黄酮类等活性成分和大量的粗纤维、粗脂肪、淀粉、粗多糖等营养成分。在黄芪种植区资源非常丰富,可以替代部分栽培原料栽培杏鲍菇。本发明把黄芪秸秆与农作物秸秆复合成适宜杏鲍菇生长的固体复合培养料，以杏鲍菇液体菌种为栽培种生产杏鲍菇。在保护环境的同时为人们提供优质的菌类产品，可产生良好的社会、经济、生态效益。有利于食用菌生产企业调整产业结构，增加新产品，使食用菌产业可持续发展。
经栽培试验表明本发明效果如下：1.降低成本：每袋降低成本0.35元。具体核算如下：每袋装干料1.0斤，含水量64%，湿料2.7斤，成本1.75元。用黄芪地上部分代替20%计，可节约0.35元∕袋。2.缩短菌丝体培养时间8-10天：利用杏鲍菇液体菌种栽培菌丝满袋时间为30-40天，而固体菌种接种菌丝体满袋时间为40-48天。3.提高生物学效率10%—20%：利用本发明方法生产杏鲍菇每袋产杏鲍菇子实体7-8两，而传统栽培杏鲍菇每袋产杏鲍菇子实体5-6两。4.杏鲍菇风味独特；用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产的杏鲍菇带有黄芪的特殊味道，口感更好。
具体实施方式
下面的实施例可以进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1.制备黄芪秸秆和芪头固体复合培养料，按照以下重量称料：
黄芪秸秆和黄芪芪头35.0kg、玉米秸秆和玉米芯25.0kg、棉籽壳15.0kg、木屑25.0kg、麦麸15.0kg、玉米粉3.0kg、黄豆粉3.0kg、石膏1kg、石灰1kg、磷酸氢二钾0.15kg、磷酸二氢钾0.15kg、硫酸镁0.15kg，料水比为１:1.50，黄芪秸秆和黄芪芪头的重量比为1:1，玉米秸秆和玉米芯的重量比为1:1。
制作过程为：将各种原料粉碎, 黄芪秸秆、黄芪芪头、玉米秸秆、玉米芯粉碎成3-5mm大小；分别称重，不溶于水的原料先干拌均匀，再加水充分混合,（如杂木屑、玉米芯等料颗粒较大，先预湿堆闷，充分吸足水分后再与其他料混合）；将溶于水的原料磷酸二氢钾、硫酸镁溶解于水后拌入料中,装袋灭菌；灭菌时间要求在0.15 MPa的压力下灭菌2h，或常压下100℃维持12—14h。
实施例2.制备黄芪秸秆和芪头固体复合培养料，按照以下重量称料：
黄芪秸秆和黄芪芪头25.0kg、玉米秸秆和玉米芯35.0kg、棉籽壳25.0kg、木屑35.0kg、麦麸10.0kg、玉米粉2.0kg、黄豆粉1.0kg、石膏1kg、石灰1kg、磷酸氢二钾0.05kg、磷酸二氢钾0.05kg、硫酸镁0.05kg，料水比为１:1.25，黄芪秸秆和黄芪芪头的重量比为1:1，玉米秸秆和玉米芯的重量比为1:1。制作过程同实施例1。
实施例3.制备黄芪秸秆和芪头固体复合培养料，按照以下重量称料：
黄芪秸秆和黄芪芪头30.0kg、玉米秸秆和玉米芯30.0kg、棉籽壳20.0kg、木屑30.0kg、麦麸12.0kg、玉米粉2.5kg、黄豆粉2.0kg、石膏1kg、石灰1kg、磷酸氢二钾0.10kg、磷酸二氢钾0.10kg、硫酸镁0.10kg，料水比为１:1.35，黄芪秸秆和黄芪芪头的重量比为1:1，玉米秸秆和玉米芯的重量比为1:1。制作过程同实施例1。
实施例4. 杏鲍菇一级种的制备过程如下：
a.杏鲍菇的原生质体化与纯化：将杏鲍菇（Pleurotus eryngii)的双核菌丝体接种于铺有玻璃纸环的加富PDA培养基上,20℃培养4天；菌丝长满玻璃纸环时，无菌操作将玻璃纸环连同菌丝体转入4ml质量百分比浓度为1.0%的纤维素酶与蜗牛酶的混合酶液中，在32℃温度下,350rpm转速的摇床中酶解6h；酶解液用浓度为0.5摩尔的MgSO·7H2 O溶液稀释，MgSO·7H2 O溶液的用量为酶解液容积的2倍，然后用孔径G 3号砂芯滤器过滤；滤液以2400rpm转速离心15min；取中层液2.0ml,加3ml的浓度为0.5摩尔的MgSO4 溶液摇匀，离心、洗涤，如此重复洗涤2次；最后取中层液2.0ml加8.0ml的浓度为0.5摩尔的MgSO4溶液制成净化原生质体悬液；取原生质体悬液2.0ml，加入7ml含0.4摩尔蔗糖的PDA培养液，在细胞培养瓶中于22℃温度下静置培养；取经过PDA培养液培养46h的原生质体液体培养液0.2ml涂附有综合PDA培养基的平板或者涂含0.4摩尔蔗糖的附有综合PDA培养基的平板，22℃温度下培养，培养约8天,当再生菌落出现时，随即转管培养，菌丝长满试管后,进行镜检，镜检过程为取剪成约8×5mm 的玻璃纸片，于空皿中灭菌。在无菌操作下用镊子夹取一片玻璃纸片，在长有菌丝的试管中轻触菌丝，然后置载片上加水及盖片镜检。菌丝体无锁状联合的为单核体X，具有锁状联合的为双核体Y, 双核体Y扩大培养，保存；
b.单核体交配培养：将两个拟交配的步骤a得到的单核体X相距约0.5cm接种于附有综合PDA培养基的平板上，25℃黑暗条件下倒置培养5d；当两菌落相交后5d，取两菌落交界处及其外缘的菌丝体，转到附有综合PDA培养基的平板中培养，菌丝萌发3d后显微镜检查，挑出具有锁状联合的双核菌丝扩大培养，保存；
c.出菇试验：用步骤a扩大培养的双核体Y和步骤b扩大培养的双核菌丝交配获得的双核体新菌株作出菇试验；评价选优，对理想子实体个体组织分离，双核化稳定，以生物学性状及产量稳定的菌种作为生产母种，保存备用,称杏鲍菇一级种。
实施例5. 杏鲍菇一级种的制备过程如下：
a.杏鲍菇的原生质体化与纯化：将杏鲍菇（Pleurotus eryngii)的双核菌丝体接种于铺有玻璃纸环的加富PDA培养基上, 28℃培养5天；菌丝长满玻璃纸环时，无菌操作将玻璃纸环连同菌丝体转入6ml质量百分比浓度为1.0%的纤维素酶与蜗牛酶的混合酶液中，在36℃温度下,450rpm转速的摇床中酶解10h；酶解液用浓度为0.7摩尔的MgSO·7H2 O溶液稀释，MgSO·7H2 O溶液的用量为酶解液容积的2倍，然后用孔径G 3号砂芯滤器过滤；滤液以2600rpm转速离心15min；取中层液2.0ml,加5ml的浓度为0.7摩尔的MgSO4 溶液摇匀，离心、洗涤，如此重复洗涤2次；最后取中层液2.0ml加8.0ml的浓度为0.7摩尔的MgSO4溶液制成净化原生质体悬液；取原生质体悬液2.0ml，加入9ml含0.4摩尔蔗糖的PDA培养液，在细胞培养瓶中于25℃温度下静置培养；取经过PDA培养液培养50h的原生质体液体培养液0.2ml涂附有综合PDA培养基的平板或者涂含0.4摩尔蔗糖的附有综合PDA培养基的平板， 25℃温度下培养，培养约12天,当再生菌落出现时，随即转管培养，菌丝长满试管后,进行镜检，镜检过程为取剪成约8×5mm 的玻璃纸片，于空皿中灭菌。在无菌操作下用镊子夹取一片玻璃纸片，在长有菌丝的试管中轻触菌丝，然后置载片上加水及盖片镜检。菌丝体无锁状联合的为单核体X，具有锁状联合的为双核体Y, 双核体Y扩大培养，保存；
b.单核体交配培养：将两个拟交配的步骤a得到的单核体X相距约0.5cm接种于附有综合PDA培养基的平板上，25℃黑暗条件下倒置培养7d；当两菌落相交后7d，取两菌落交界处及其外缘的菌丝体，转到附有综合PDA培养基的平板中培养，菌丝萌发3d后显微镜检查，挑出具有锁状联合的双核菌丝扩大培养，保存；
c.出菇试验：用步骤a扩大培养的双核体Y和步骤b扩大培养的双核菌丝交配获得的双核体新菌株作出菇试验；评价选优，对理想子实体个体组织分离，双核化稳定，以生物学性状及产量稳定的菌种作为生产母种，保存备用,称杏鲍菇一级种。
实施例6. 杏鲍菇液体菌种的制备过程如下：
(1) 制作二级固体发酵原种培养基：将颗粒状木屑和麦麸过筛，选用0.425mm之间的颗粒为原料；按二级固体发酵原种培养基的配方混合原料,搅拌均匀，使含水量在60%之间；将二级固体发酵原种培养基装入750ml的菌种瓶中，压紧、压平，每瓶装湿料约400g或干料180g，盖上棉塞，0.13mpa压力下,灭菌80min；
上述二级固体发酵原种培养基的重量配比为：木屑35.0kg、麦麸40.0kg、玉米粉2.0kg、黄豆粉1.0kg，磷酸氢二钾0.05kg、磷酸二氢钾0.05kg、硫酸镁0.05kg；料水比为１:1.25；
(2) 杏鲍菇二级固体发酵原种的培育：将实施例4制得的杏鲍菇一级种接种于步骤（1）的杏鲍菇二级固体发酵原种培养基中,在23℃温度下培养,菌丝长满后即成；
(3)液体菌种制作：将杏鲍菇液体菌种培养基分装到三角瓶中（500ml三角瓶中装杏鲍菇液体菌种培养基300ml）；盖上棉塞，在0.13mpa压力下灭菌 30min；待培养基温度降至30℃以下时，接入步骤(2)得到的杏鲍菇二级固体发酵原种（500ml三角瓶中接入2接种勺杏鲍菇二级固体发酵原种）；接完种的三角瓶在23℃温度，120rpm转速下振荡器振荡培养3天，成为杏鲍菇液体菌种；
上述杏鲍菇液体菌种培养基的重量配比为：麦麸2.0%、玉米粉1.0%、黄豆粉1.0%、蛋白胨0.10%、磷酸氢二钾0.05%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%，余量为水；制作过程为将麦麸、玉米粉、黄豆粉煮汁，过滤，滤液与其余组分的水溶液合并，补足水份成为杏鲍菇液体菌种培养基；
若需要的生产的杏鲍菇液体菌种量较大时，可以直接用液体菌种培养器（发酵罐）生产；按操作规程在发酵罐中注入杏鲍菇液体菌种培养基，灭菌，降温到30℃以下时接种；
(4)接种:将杏鲍菇二级固体发酵原种在无菌条件下捣碎，并入盛有800ml无菌水的1000ml灭菌三角瓶中，摇匀，在酒精火焰的保护下，到入发酵罐中，接种量为100L培养基接二级固体发酵原种2L；
（5）培养：在24℃温度、罐压0.02mpa的条件下,培养时间3d,经检验合格后，为杏鲍菇液体菌种。
实施例7. 杏鲍菇液体菌种的制备过程如下：
(1) 制作二级固体发酵原种培养基：将颗粒状木屑和麦麸过筛，选用0.850mm之间的颗粒为原料；按二级固体发酵原种培养基的配方混合原料,搅拌均匀，使含水量在65%之间；将二级固体发酵原种培养基装入750ml的菌种瓶中，压紧、压平，每瓶装湿料约450g或干料240g，盖上棉塞， 0.15mpa压力下,灭菌100min；
上述二级固体发酵原种培养基的重量配比为：木屑45.0kg、麦麸55.0kg、玉米粉6.0kg、黄豆粉5.0kg，磷酸氢二钾0.15kg、磷酸二氢钾0.15kg、硫酸镁0.15kg；料水比为１:1.25-1.50；
(2) 杏鲍菇二级固体发酵原种的培育：将实施例5制得的杏鲍菇一级种接种于步骤（1）的杏鲍菇二级固体发酵原种培养基中,在25℃温度下培养,菌丝长满后即成；
(3)液体菌种制作：将杏鲍菇液体菌种培养基分装到三角瓶中（1000ml三角瓶装中装杏鲍菇液体菌种培养基600ml）；盖上棉塞，在0.14mpa压力下灭菌 30min；待培养基温度降至30℃以下时，接入步骤(2)得到的杏鲍菇二级固体发酵原种（1000ml三角瓶中接入4接种勺杏鲍菇二级固体发酵原种）；接完种的三角瓶在28℃温度， 180rpm转速下振荡器振荡培养8天，成为杏鲍菇液体菌种；
上述杏鲍菇液体菌种培养基的重量配比为：麦麸5.0%、玉米粉3.0%、黄豆粉2.0%、蛋白胨0.2%、磷酸氢二钾0.15%、磷酸二氢钾0.15%、硫酸镁0.10%，余量为水；制作过程为将麦麸、玉米粉、黄豆粉煮汁，过滤，滤液与其余组分的水溶液合并，补足水份成为杏鲍菇液体菌种培养基；
(4)接种:将杏鲍菇二级固体发酵原种在无菌条件下捣碎，并入盛有800ml无菌水的1000ml灭菌三角瓶中，摇匀，在酒精火焰的保护下，到入发酵罐中，接种量为100L培养基接二级固体发酵原种5L；
（5）培养：在26℃温度、罐压0.04mpa的条件下,培养时间8d,经检验合格后，为杏鲍菇液体菌种。
实施例8.用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法,具体过程如下：
(1)菌包冷却:将实施例3制得的黄芪秸秆和芪头固体复合培养料灭菌，将料袋置于洁净处冷却；在装袋灭菌冷却的全过程中，料袋最好盛放在周转筐内，减少搬动，降低污染率；
(2)液体菌种接种:当料袋温度冷却至28℃以下时，即可置于接种箱或接种室内接种；常规方法消毒，严格按无菌操作接种，直立出菇一头接种，墙式出菇两头接种，细棒长袋横卧出菇于袋身同侧打三眼接种；每个接种点用接种枪移入杏鲍菇液体菌种5.0ml,封口；
(3)发菌管理：接种完毕后，及时搬入事先清扫消毒的培养室内发菌；发菌期间的主要工作是控温、降湿、通风、遮光、翻堆和清除杂菌；培养室气温应控制在25℃；
在发菌阶段，培养室应遮光，维持黑暗，空气相对湿度控制在70％以内，经常通风换气，保持空气新鲜；每隔10 d翻堆一次，使菌袋发菌均匀，同时捡出污染菌袋；为加快菌丝生长，扎绳封口的菌袋应在菌丝封面并吃料3cm后扎眼透气；气温较高时，应注意防虫；在适宜的环境条件下，菌丝一般经40d可长满菌袋；
(4)催蕾：菌丝长满袋后，继续培养10d，积累更多的养分；当气温下降至18℃时，就可进行催蕾管理；为了使其出菇整齐一致，可先进行搔菌处理；具体做法是：用小勺刮去袋口表层老菌种，并使袋口料面变平；搔菌时间一般在菌丝满袋后即可进行，因搔菌后还需要10 d的菌丝恢复时间，菌袋在此期间可进一步成熟；如果袋口或菌袋中部已有原基形成，则不再进行搔菌；可以直接进入出菇管理；搔菌后要进行保湿管理，用塑膜将袋口覆盖，或用纸将套环口封住；约过10d，当料面重新长出新的白色气生菌丝时，即可喷水增湿催蕾；催蕾期间温度控制在18℃；催蕾期间，空气湿度应维持在95％，增加散射光刺激，加强通风，保持空气新鲜；经过6d，即可出现白色原基，原基进一步分化形成菇蕾；
(5)出菇管理：当原基分化形成1－2 cm小菇蕾时，应及时开袋进行出菇期的管理；开袋过早，原基难于形成或出菇不整齐；开袋过迟，子实体己在袋内长大，会形成畸形菇，严重时子实体会萎缩腐烂；将袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2—3 cm，露出小菇蕾；
如果幼菇过密，可适当疏蕾，汰劣存优；短袋每袋留3—4个，长袋每穴留1-3朵，以保持菇体形美、个大，商品率高；出菇阶段，必须注意温度、湿度、光照和通风的调控，才能获得高产；
5.1温度调控：温度应保持在18℃，在该温度条件下，子实体生长发育正常健壮；不同生态型的杏鲍菇品种，对温度的适应性也有所不同，实际栽培时应具体品种具体对待；通常情况下，温度较高时子实体生长快，菇体小，易开伞，不洁白，品质差；因此，在子实体发育过程中，若气温偏高，应结合向地面喷水、夜间通风进行降温处理；如气温偏低，应适当关闭门窗，室外栽培加厚覆盖物，或采用人工加温办法，提高栽培室温度；
5.2湿度调节：水分与湿度管理对于子实体的分化和发育非常重要；初期空气相对湿度要保持在90％；当菌盖直径长至2－3 cm后，可适当调低，控制在88％，有利于防止病虫害发生；当气温高，空气湿度低于80％时，应适当喷水降温增湿，但主要用轻喷、勤喷的办法往地面和空间喷水；注意尽量不要把水喷到菇体上，以免引起子实体黄化萎缩，严重时感染细菌而腐烂死亡，影响子实体的产量和质量；采收前2—3 d，为了延长采后的保鲜期，空气相对湿度控制在85％为宜；当一潮菇结束后，菌袋失水较多，可用注水法和浸水法给菌袋补水；
5.3光照调节：子实体发生和发育阶段均需散射光，光照强度似1000 lx为宜；光照过弱，易形成无头菇；光照过强，子实体易失水干燥，颜色不白，商品性下降；
5.4空气调节：子实体发育阶段要求加大通风量，始终保持菇房内空气新鲜；当室温偏高(18℃以上)，湿度偏大时，更要注意加强通风，避免高温高湿引起子实体腐烂和病虫害危害；通风应与控温调湿统一管理，做到既能通风良好，又能保持良好的温度、湿度环境；
（6）采收与转潮管理：当菌盖平展，孢子尚未弹射，菌盖直径与菌柄一致或稍小于菌柄时，就要及时采收；第一潮菇采收后，应及时清理料面，停水养菌5d，再调节好菇房的温、湿度和通风等条件；相隔14 d，还可采收第二潮菇；杏鲍菇的产量主要集中在第一潮菇，占总产量的70％以上，第二潮菇朵形小，菌柄短，产量低；故工厂化栽培只采收一潮菇；若管理得当，袋栽的总生物效率可达60％；如将采收一潮菇的菌袋再脱袋覆土栽培，可明显提高二潮菇的产量。
实施例9.用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法,具体过程如下：
(1)菌包冷却:将实施例1制得的黄芪秸秆和芪头固体复合培养料灭菌，将料袋置于洁净处冷却；在装袋灭菌冷却的全过程中，料袋最好盛放在周转筐内，减少搬动，降低污染率；
(2)液体菌种接种:当料袋温度冷却至28℃以下时，即可置于接种箱或接种室内接种；常规方法消毒，严格按无菌操作接种，直立出菇一头接种，墙式出菇两头接种，细棒长袋横卧出菇于袋身同侧打三眼接种；每个接种点用接种枪移入杏鲍菇液体菌种5.0ml,封口；
(3)发菌管理：接种完毕后，及时搬入事先清扫消毒的培养室内发菌；发菌期间的主要工作是控温、降湿、通风、遮光、翻堆和清除杂菌；培养室气温应控制在20℃之间，初期气温以25℃为宜；菌袋中的料温上升后，室温应调低至20℃；整个发菌阶段，料温都不要超过28℃；料温过高，轻则产生热害阻碍发菌，影响后期产量；重则烧菌，导致栽培失败；
在发菌阶段，培养室应遮光，维持黑暗，空气相对湿度控制在70％以内，经常通风换气，保持空气新鲜；每隔10d翻堆一次，使菌袋发菌均匀，同时捡出污染菌袋；为加快菌丝生长，扎绳封口的菌袋应在菌丝封面并吃料2cm后扎眼透气；气温较高时，应注意防虫；在适宜的环境条件下，菌丝一般经40d可长满菌袋；
(4)催蕾：菌丝长满袋后，继续培养10d，积累更多的养分；当气温下降至10℃时，就可进行催蕾管理；为了使其出菇整齐一致，可先进行搔菌处理；具体做法是：用小勺刮去袋口表层老菌种，并使袋口料面变平；搔菌时间一般在菌丝满袋后即可进行，因搔菌后还需要10 d的菌丝恢复时间，菌袋在此期间可进一步成熟；
如果袋口或菌袋中部已有原基形成，则不再进行搔菌；可以直接进入出菇管理；搔菌后要进行保湿管理，用塑膜将袋口覆盖，或用纸将套环口封住；约过10d，当料面重新长出新的白色气生菌丝时，即可喷水增湿催蕾；催蕾期间温度控制在10℃；
催蕾期间，空气湿度应维持在90％，增加散射光刺激，加强通风，保持空气新鲜；经过3d，即可出现白色原基，原基进一步分化形成菇蕾；
(5)出菇管理：当原基分化形成1－2 cm小菇蕾时，应及时开袋进行出菇期的管理；开袋过早，原基难于形成或出菇不整齐；开袋过迟，子实体己在袋内长大，会形成畸形菇，严重时子实体会萎缩腐烂；将袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2—3 cm，露出小菇蕾；如果幼菇过密，可适当疏蕾，汰劣存优；短袋每袋留3—4个，长袋每穴留1-3朵，以保持菇体形美、个大，商品率高；出菇阶段，必须注意温度、湿度、光照和通风的调控，才能获得高产；
5.1温度调控：温度应保持在15℃，在该温度条件下，子实体生长发育正常健壮；不同生态型的杏鲍菇品种，对温度的适应性也有所不同，实际栽培时应具体品种具体对待；通常情况下，温度较高时子实体生长快，菇体小，易开伞，不洁白，品质差；因此，在子实体发育过程中，若气温偏高，应结合向地面喷水、夜间通风进行降温处理；如气温偏低，应适当关闭门窗，室外栽培加厚覆盖物，或采用人工加温办法，提高栽培室温度；
5.2湿度调节：水分与湿度管理对于子实体的分化和发育非常重要；初期空气相对湿度要保持在90％；当菌盖直径长至2－3 cm后，可适当调低，控制在85％，有利于防止病虫害发生；当气温高，空气湿度低于80％时，应适当喷水降温增湿，但主要用轻喷、勤喷的办法往地面和空间喷水；注意尽量不要把水喷到菇体上，以免引起子实体黄化萎缩，严重时感染细菌而腐烂死亡，影响子实体的产量和质量；采收前2d，为了延长采后的保鲜期，空气相对湿度控制在85％为宜；当一潮菇结束后，菌袋失水较多，可用注水法和浸水法给菌袋补水；
5.3光照调节：子实体发生和发育阶段均需散射光，光照强度似500lx为宜；光照过弱，易形成无头菇；光照过强，子实体易失水干燥，颜色不白，商品性下降；
5.4空气调节：子实体发育阶段要求加大通风量，始终保持菇房内空气新鲜；当室温偏高(18℃以上)，湿度偏大时，更要注意加强通风，避免高温高湿引起子实体腐烂和病虫害危害；通风应与控温调湿统一管理，做到既能通风良好，又能保持良好的温度、湿度环境；
（6）采收与转潮管理：当菌盖平展，孢子尚未弹射，菌盖直径与菌柄一致或稍小于菌柄时，就要及时采收；第一潮菇采收后，应及时清理料面，停水养菌4d，再调节好菇房的温、湿度和通风等条件；相隔14d，还可采收第二潮菇；杏鲍菇的产量主要集中在第一潮菇，占总产量的70％以上，第二潮菇朵形小，菌柄短，产量低；故工厂化栽培只采收一潮菇；若管理得当，袋栽的总生物效率可达50％-60％；如将采收一潮菇的菌袋再脱袋覆土栽培，可明显提高二潮菇的产量。
实施例10.与实施例8不同之处在于采用实施例2制得的黄芪秸秆和芪头固体复合培养料生产杏鲍菇。
Claims (7)
1.一种黄芪秸秆和芪头固体复合培养料，其特征在于：它以黄芪秸秆和芪头为主料，以玉米秸秆、玉米芯为辅料，按以下重量份原料加水制成，
黄芪秸秆和黄芪芪头25.0份～35.0份、玉米秸秆和玉米芯25.0份～35.0份、棉籽壳15.0份～25.0份、木屑25.0份～35.0份、麦麸10.0份～15.0份、玉米粉2.0份～3.0份、黄豆粉1.0份～3.0份、石膏1份、石灰1份、磷酸氢二钾0.05份-0.15份、磷酸二氢钾0.05份-0.15份、硫酸镁0. 05份-0.15份，料水比为１:1.25-1.50，黄芪秸秆和黄芪芪头的重量比为1:1，玉米秸秆和玉米芯的重量比为1:1。
2.用权利要求1所述黄芪秸秆和芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法，其特征在于它包括下列步骤：
A、杏鲍菇菌种纯化与复壮，
B、杏鲍菇液体菌种制备，
C、杏鲍菇栽培；
其中步骤A杏鲍菇菌种纯化与复壮过程如下：
a.杏鲍菇的原生质体化与纯化：将杏鲍菇（Pleurotus eryngii)的双核菌丝体接种于铺有玻璃纸环的加富PDA培养基上,20-28℃培养4-5天；菌丝长满玻璃纸环时，无菌操作将玻璃纸环连同菌丝体转入4-6ml纤维素酶与蜗牛酶的混合酶液中，在32-36℃温度、350-450rpm转速的摇床中酶解6-10h；酶解液用浓度为0.5-0.7摩尔的MgSO·7H2 O溶液稀释，MgSO·7H2 O溶液的用量为酶解液容积的2倍，过滤；滤液以2400-2600rpm转速离心；取中层液加MgSO4 溶液制成净化原生质体悬液；取原生质体悬液加入PDA培养液，在细胞培养瓶中于22-25℃温度下静置培养；取经过PDA培养液培养46-50h的原生质体液体培养液涂附有综合PDA培养基的平板，22-25℃温度下培养，培养约8-12天,当再生菌落出现时，随即转管培养，菌丝长满试管后进行镜检；菌丝体无锁状联合的为单核体X，具有锁状联合的为双核体Y, 双核体Y扩大培养，保存；
b.单核体交配培养：将两个拟交配的步骤a得到的单核体X相距约0.5cm接种于附有综合PDA培养基的平板上，25℃黑暗条件下倒置培养5-7d；当两菌落相交后5-7d，取两菌落交界处及其外缘的菌丝体，转到附有综合PDA培养基的平板中培养，菌丝萌发3d后显微镜检查，挑出具有锁状联合的双核菌丝扩大培养，保存；
c.出菇试验：用步骤a扩大培养的双核体Y和步骤b扩大培养的双核菌丝交配获得的双核体新菌株作出菇试验；评价选优，对理想子实体个体组织分离，双核化稳定，以生物学性状及产量稳定的菌种作为生产母种，保存备用,称杏鲍菇一级种。
3.根据权利要求2所述的用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法，其特征在于：所述步骤a中纤维素酶与蜗牛酶的混合酶液的质量百分比浓度为1.0%。
4.根据权利要求2所述的用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法，其特征在于：所述步骤a中制备净化原生质体悬液取中层液的过程为，取中层液2.0ml加3-5ml的浓度为0.5-0.7摩尔的MgSO4 溶液摇匀，离心、洗涤，如此重复洗涤2次；最后取中层液2.0ml加8.0ml的浓度为0.5-0.7摩尔的MgSO4溶液制成净化原生质体悬液。
5.根据权利要求2所述的用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法，其特征在于：所述步骤a中取原生质体悬液静置培养过程为，取原生质体悬液2.0ml加入7-9ml含0.4摩尔蔗糖的PDA培养液培养；然后取原生质体液体培养液0.2ml涂附有综合PDA培养基的平板或者涂含0.4摩尔蔗糖的附有综合PDA培养基的平板。
6.根据权利要求2所述的用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法，其特征在于所述步骤B的具体过程如下：
(1) 制作二级固体发酵原种培养基：将颗粒状木屑和麦麸过筛，选用0.425-0.850mm之间的颗粒为原料；按二级固体发酵原种培养基的配方混合原料,搅拌均匀，使含水量在60-65%之间；将二级固体发酵原种培养基装入750ml的菌种瓶中，压紧、压平，每瓶装湿料约400-450g或干料180-240g，盖上棉塞，0.13mpa-0.15mpa压力下,灭菌80-100min；
上述二级固体发酵原种培养基的重量配比为：木屑35.0份～45.0份、麦麸40.0份～55.0份、玉米粉2.0份～6.0份、黄豆粉1.0份～5.0份，磷酸氢二钾0.05份-0.15份、磷酸二氢钾0.05份-0.15份、硫酸镁0. 05份-0.15份；料水比为１:1.25-1.50；
(2) 杏鲍菇二级固体发酵原种的培育：将权利要求1中的杏鲍菇一级种接种于步骤（1）的杏鲍菇二级固体发酵原种培养基中,在23-25℃温度下培养,菌丝长满后即成；
(3)液体菌种制作：将杏鲍菇液体菌种培养基分装到三角瓶中（500ml三角瓶中装杏鲍菇液体菌种培养基300ml，1000ml三角瓶装中装杏鲍菇液体菌种培养基600ml）；盖上棉塞，在0.13mpa-0.14mpa压力下灭菌 30min；待培养基温度降至30℃以下时，接入步骤(2)得到的杏鲍菇二级固体发酵原种（500ml三角瓶中接入2接种勺杏鲍菇二级固体发酵原种，1000ml三角瓶中接入4接种勺杏鲍菇二级固体发酵原种）；接完种的三角瓶在23-28℃温度，120-180rpm转速下振荡器振荡培养3-8天，成为杏鲍菇液体菌种；
上述杏鲍菇液体菌种培养基的重量配比为：麦麸2.0%～5.0%、玉米粉1.0%～3.0%、黄豆粉1.0%～2.0%、蛋白胨0.10%～0.2%、磷酸氢二钾0.05%-0.15%、磷酸二氢钾0.05%-0.15%、硫酸镁0.05%-0.10%，余量为水；
(4)接种:将杏鲍菇二级固体发酵原种在无菌条件下捣碎，并入盛有800ml无菌水的1000ml灭菌三角瓶中，摇匀，在酒精火焰的保护下，到入发酵罐中，接种量为100L培养基接二级固体发酵原种2-5L；
（5）培养：在24-26℃温度、罐压0.02-0.04mpa的条件下,培养时间3-8d,经检验合格后，为杏鲍菇液体菌种。
7.根据权利要求2所述的用黄芪秸秆、芪头固体复合培养料生产杏鲍菇的方法, 其特征在于：所述步骤D的具体过程如下：
(1)菌包冷却:将权利要求1的黄芪秸秆和芪头固体复合培养料灭菌，将料袋置于洁净处冷却；在装袋灭菌冷却的全过程中，料袋最好盛放在周转筐内，减少搬动，降低污染率；
(2)液体菌种接种:当料袋温度冷却至28℃以下时，即可置于接种箱或接种室内接种；常规方法消毒，严格按无菌操作接种，直立出菇一头接种，墙式出菇两头接种，细棒长袋横卧出菇于袋身同侧打三眼接种；每个接种点用接种枪移入杏鲍菇液体菌种5.0ml,封口；
(3)发菌管理：接种完毕后，及时搬入事先清扫消毒的培养室内发菌；发菌期间的主要工作是控温、降湿、通风、遮光、翻堆和清除杂菌；培养室气温应控制在20-26℃之间，初期气温以25℃为宜；菌袋中的料温上升后，室温应调低至20-25℃；整个发菌阶段，料温都不要超过28 ℃；料温过高，轻则产生热害阻碍发菌，影响后期产量；重则烧菌，导致栽培失败；
在发菌阶段，培养室应遮光，维持黑暗，空气相对湿度控制在70％以内，经常通风换气，保持空气新鲜；每隔10 d翻堆一次，使菌袋发菌均匀，同时捡出污染菌袋；为加快菌丝生长，扎绳封口的菌袋应在菌丝封面并吃料2－3cm后扎眼透气；气温较高时，应注意防虫；在适宜的环境条件下，菌丝一般经40 d可长满菌袋；
(4)催蕾：菌丝长满袋后，继续培养10d，积累更多的养分；当气温下降至10—18 ℃时，就可进行催蕾管理；
为了使其出菇整齐一致，可先进行搔菌处理；具体做法是：用小勺刮去袋口表层老菌种，并使袋口料面变平；搔菌时间一般在菌丝满袋后即可进行，因搔菌后还需要10d的菌丝恢复时间，菌袋在此期间可进一步成熟；
如果袋口或菌袋中部已有原基形成，则不再进行搔菌；可以直接进入出菇管理；搔菌后要进行保湿管理，用塑膜将袋口覆盖，或用纸将套环口封住；约过10d，当料面重新长出新的白色气生菌丝时，即可喷水增湿催蕾；催蕾期间温度控制在10-18℃之间，低于8℃或高于20℃都难于形成原基，最佳催蕾温度为10—15℃；
催蕾期间，空气湿度应维持在90％-95％，增加散射光刺激，加强通风，保持空气新鲜；经过3-6d，即可出现白色原基，原基进一步分化形成菇蕾；
(5)出菇管理：当原基分化形成1－2 cm小菇蕾时，应及时开袋进行出菇期的管理；开袋过早，原基难于形成或出菇不整齐；开袋过迟，子实体己在袋内长大，会形成畸形菇，严重时子实体会萎缩腐烂；将袋口塑膜向外翻卷下折至高于料面2—3 cm，露出小菇蕾；如果幼菇过密，适当疏蕾，汰劣存优；短袋每袋留3—4个，长袋每穴留1-3朵，以保持菇体形美、个大，商品率高；出菇阶段，必须注意温度、湿度、光照和通风的调控。
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