CN105474994A - 一种灵芝原生态仿野生栽培方法 - Google Patents

Abstract

<b>一种灵芝原生态仿野生栽培方法，该方法包括如下步骤：(1)从野生灵芝子实体上分离的菌株经纯化后接种到母种培养基中培养获得灵芝母种；(2)灵芝母种接种到原种培养基上培养获得灵芝原种；(3)将灵芝原种接种到栽培袋内的装袋培养基中培养获得栽培种；(4)将所述的长满灵芝菌丝体的栽培种接种到桑木屑和桑木条混合物上；所述装袋培养基中，原料按按重量百分比，桑木屑40%、桑木条28%、麸皮15%、玉米粉15%、糖1%、碳酸钙1%，总重量计100%，另加硫酸铵0.5%。本发明的一种灵芝原生态仿野生栽培方法，栽培的灵芝干燥后灵芝质地厚实、坚硬、营养及药效成分齐全，药用价值高且产量稳定。</b>

Description

一种灵芝原生态仿野生栽培方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种灵芝原生态仿野生栽培方法。

背景技术

灵芝，又称木灵芝、菌灵芝、灵芝草，素有“仙草”、“瑞草”、“还魂草”之美誉，是我国传统名贵中药，具有多种生理活性和药理作用。灵芝的生物活性成分十分丰富，目前已分离到150余种活性成分，有多糖类、核苷类、生物碱类、氨基酸蛋白质类、三萜类和矿质元素等。其中，灵芝多糖能提高机体免疫力，刺激干扰素的形成，抗病毒，抗氧化，抗肿瘤，提高机体耐缺氧能力，增强肝脏、骨髓、血液合成DNA、RAN和蛋白质的能力，从而延长寿命。近年来，灵芝的开发利用越来越受到人们的重视，消费量增长迅速。但由于野生灵芝资源数量有限，且受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约，灵芝在自然界中形成子实体困难，造成天然的灵芝数量非常稀少，因此通过人工培植来弥补野生资源的不足显得尤为重要。但由于其先天的缺陷，目前人工栽培的灵芝只是“得其形而失其实”，药用效果远远不能和野生灵芝想媲美。因此，模拟灵芝生长的天然环境，创建一种灵芝仿生学的在么陪方法迫在眉睫。

灵芝为腐生菌，常腐生在阔叶树的倒木、枯木和树桩上，其以碳源、氮源和无机盐类为营养基础，也需要极少量的维生素。在菌丝生长时期，只能吸收利用一些低碳化合物，但很快就可以产生各种酶类来分解、转化、吸收、利用纤维素、半纤维素、木质素及一些矿物元素。因此在野生自然条件下，常在栋、锻、桦、杨和白松，桑树等腐木上生长，或以这些树种的锯木屑为生长基质。

目前灵芝的人工栽培主要有两种，一种是以杨树、栎树的段木栽培为主，但段木栽培需要大量的木材资源，资源浪费比较严重，难以规模化栽培；另一种是袋料栽培，但是存在培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题。又由于桑枝灵芝的灵芝多糖比杂木或椴木灵芝高30%以上，而且桑枝灵芝面市后，价格要比一般灵芝高50%以上。利用桑枝栽培灵芝，不但可变废为宝、增加蚕桑产业的附加值，而且还可以取得良好的社会效益和生态效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵芝原生态仿野生栽培方法，该方法以桑木屑和桑木条作为灵芝栽培的主要原料，人为增加这些主要原料感染灵芝菌的机率，栽培方式更加仿野生，子实体与野生相似，栽培的灵芝干燥后灵芝质地厚实、坚硬、营养及药效成分齐全，药用价值高且产量稳定。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种灵芝原生态仿野生栽培方法，该方法包括如下步骤：

(1)从野生灵芝子实体上分离的菌株经纯化后接种到母种培养基中培养获得灵芝母种；

(2)灵芝母种接种到原种培养基上培养获得灵芝原种；

(3)将灵芝原种接种到栽培袋内的装袋培养基中培养获得栽培种；

(4)将所述的长满灵芝菌丝体的栽培种接种到桑木屑和桑木条混合物上。

所述母种培养基的原料为：桑木屑浸汁l00ml、马铃薯300g、葡萄糖30g、琼脂18g～23g、硫酸铵1.5g、磷酸二氢钾lg、硫酸镁0.5g，加水至l000ml；

所述母种培养基的制作方法为：按配方称取所需原料，马铃薯去皮切片，马铃薯片煮后用纱布过滤，取其滤液加入琼脂、葡萄糖，加热至琼脂溶化；桑木屑煮汁得到桑木屑浸汁，与其它组分混合后，补足水至l000ml，调pH5～6.5。

所述原种培养基的配方为：桑木屑77%、麸皮15%、玉米粉15%、硫酸铵0.5%、糖1%、碳酸钙1%，另加0.5%的硫酸铵。

所述装袋培养基中，原料按按重量百分比，桑木屑35-45%、桑木条25-30%、麸皮15-20%、玉米粉12-15%、糖0.6-1.0%、碳酸钙0.8-1.6%，总重量计100%，另加硫酸铵0.5%。

所述装袋培养基中，原料按按重量百分比，桑木屑40%、桑木条28%、麸皮15%、玉米粉15%、糖1%、碳酸钙1%，总重量计100%，另加硫酸铵0.5%。

本发明的有益效果是：本发明的一种灵芝原生态仿野生栽培方法，该方法以桑木屑和桑木条作为灵芝栽培的主要原料，人为增加这些主要原料感染灵芝菌的机率，栽培方式更加仿野生，子实体与野生相似，栽培的灵芝干燥后灵芝质地厚实、坚硬、营养及药效成分齐全，药用价值高且产量稳定。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

l、蚕桑业是我国有5500多年历史的传统产业，截至2010年为止，我国有1210万亩桑园，利用昂书屑和桑树枝接种灵芝菌，可快速、规模化栽培灵芝子实体。

2、本发明培养方式简单，处于自然野生环境，因此近似野生灵芝，药用价值高且产量稳定，解决了目前人工袋料栽培技术中灵芝子实体难形成，袋料、段木人工栽培中灵芝子实体形态和药用成份差异的难题。

3、仿生态栽培灵芝及灵芝深加工产品良好的市场前景，将为桑园带来巨大经济效益，促进农民种桑保桑的积极性，对稳定我国桑园面积，实现蚕桑产业与药用菌产业的双赢作出一定成绩。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所述描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例l

l、灵芝菌种分离及灵芝母种的培养

以野生灵芝子实体作为分离材料。对灵芝子实体的表面冲洗消毒后，在无菌条件下将子实体切开，在子实体中间层挑取约0.5厘米见方的组织块按一定距离放在母种培养基平板上，每皿六块，置28℃左右条件下培养，24小时后组织块上长出细密绒毛菌丝，用接种刀将先端菌丝移接入母种培养基上，置25℃左右条件下培养10天，菌丝布满斜面。如发现糊状粘稠菌落或生长很快的真菌菌落则不予转管，需重新分离。灵芝菌种分离也可采用孢子分离、基内菌丝分离，无论哪种分离方法，在大面积栽培前必须进行出菇试验，证实确无异常现象，菌种才能扩大投入生产。

母种培养基可选择PDA培养基。本实施例采用如下配方（PDA改良培养基）：椴木屑浸汁适量、马铃薯250g、葡萄糖20g、琼脂18g～23g、硫酸铵1.5g、磷酸二氢钾lg、硫酸镁0.5g，加水至l000ml，121℃灭菌。

母种培养基的配制方法：按配方称取所需原料，马铃薯去皮挖切片，马铃薯片经煮后用纱布过滤，取其滤液加入琼脂、葡萄糖，加热至琼脂溶化；桑木屑煮汁得到桑枝屑浸汁，与其他组分混合后，补足水至l000ml，调pH5～6.5。趁热分装入试管内，每支试管的培养基容量约占试管高度的l/5，一般l000ml培养基可装20×200试管100支、管塞上棉塞，用薄膜包扎，121℃灭菌。

灵芝原种生产：取分离得到，经出菇试验无异常的优良灵芝母种，转管、扩大培养后用于原种、栽培种的生产。

灵芝原种生产一般采用750克蘑菇瓶或15×33cm低压聚乙烯袋，瓶子应事先置于烘箱中干热灭菌后装料。

灵芝原种培养基组分和配制方法：桑木屑77%、麸皮15%、玉米粉15%、硫酸铵0.5%、糖1%、碳酸钙1%，另加0.5%的硫酸铵。原种培养基必须进行高压灭菌，在121℃下高压灭菌保持2小时。自然下磅，冷却。

接种培养在无菌条件下在灭菌后的原种培养基上接入优良的灵芝母种，于25℃左右的恒温箱（室）中培养。一般情况下30天左右菌丝满瓶（袋）。菌丝满瓶（袋）后，再继续培养7天左右得到灵芝原种。

本发明选用桑枝条和桑枝屑为主的装袋培养基。

装袋培养基：桑木屑40%、桑木条28%、麸皮15%、玉米粉15%、糖1%、碳酸钙1%。上述组分混合后得到的混合物总重量计100%，再加入占该混合物总重量0.5%的硫酸铵。充分拌匀后装入15cm×33cm的低压聚乙烯袋（或蘑菇瓶）中。

将灵芝原种接种到栽培袋内的培养基中培养获得栽培种。在无菌条件下接入优良的灵芝原种，在温度25℃左右的培养箱中培养，一般情况下25~30天左右菌丝满袋。再继续培养7天左右，促使菌丝长透。栽培料拌好后用装袋机装袋，每袋装干料400~450克。聚乙烯袋采用常压灭菌10~12小时，待料冷却到30℃以下时入无菌室内接种。将长满灵芝菌丝体的装袋栽培种接种到桑木屑和桑木条混合物上进行自然培养。

灵芝接种季节：一般选择每年的3月中旬-6月或11月中旬-12月均可，按自然气温条件来说，气温稳定在10℃以上可以接种。

接种方法：菌种事先从瓶中取出或撕开菌袋，将菌种放入经消毒后的洁净盆内。将装袋栽培种塞入桑木屑和桑木条混合物中。选睛天接种，菌种避免阳光直射。工具、种瓶、容器、手部等操作前均需经过消毒。

发菌管理：其目的就是让接入的灵芝菌种能尽快在桑木屑和桑木条混合物中得定植和蔓延。因此接种7～10天后，应对接种处进行发菌检查，特别是接种后即遇雨天、低温时应及时检查。如发现接种处变黑、红、黑、绿等杂菌感染现象或死穴时，应及时进行补种。菌丝经3、4个月的生长后，一般在桑木屑和桑木条混合物上方阽续可见棕色黄或深黄色的灵芝子实体原基生成并不断延展增大。遇不适宜子实体生长的季节，子实体缓慢生长或暂时休眠，待环境条件适宜时，子实体又继续快速延展增大。灵芝子实体经2、3年自然生长后便可采收。

实施例2

具体方法同实施例l，不同之处在于：母种培养基采用如下配方：桑木屑60g、新鲜麸皮30g、马铃薯200g、葡萄糖15g、琼脂18g～23g、硫酸铵1.5g、磷酸二氢钾l.0g、硫酸镁0.5g。

母种培养基的配制方法：按配方称取所需原料，桑木屑和新鲜麸皮加500-600ml水混合煮汁，用纱布过滤，取滤液。马铃薯去皮挖芽眼、切片。马铃薯片煮后用纱布过滤，取其滤液加入琼脂、葡萄糖，加热至琼脂溶化，与前面制得的桑木屑和新鲜麸皮滤液混合，并补足水至l000ml，调pH5～6.5。趁热分装入试管内，每支试管的培养基容量约占试管高度的l/6，一般l000ml培养基可装20×200试管100支、管口塞上棉塞，用薄膜包扎，灭菌。

本发明省去了现有栽培技术中接种后室内培养的繁杂工序，大大降低了生产成本及劳动强度，保守计算只有传统方法的四十分之一左右。最重要的是本发明培养方式简单，处于自然野生环境，因此近似野生灵芝，药用价值高且产量稳定，解决了目前人工袋料栽培技术中灵芝子实体难形成，袋料、段木人工栽培中灵芝子实体形态和药用成份差异的难题。

以上所述的实施例只是本发明的较佳方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (5)

1.一种灵芝原生态仿野生栽培方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

(1)从野生灵芝子实体上分离的菌株经纯化后接种到母种培养基中培养获得灵芝母种；

(2)灵芝母种接种到原种培养基上培养获得灵芝原种；

(3)将灵芝原种接种到栽培袋内的装袋培养基中培养获得栽培种；

(4)将所述的长满灵芝菌丝体的栽培种接种到桑木屑和桑木条混合物上。

2.根据权利要求1所述的一种灵芝原生态仿野生栽培方法，其特征在于：所述母种培养基的原料为：桑木屑浸汁l00ml、马铃300g、葡萄糖30g、琼脂18g～23g、硫酸铵1.5g、磷酸二氢钾lg、硫酸镁0.5g，加水至l000ml；

根据权利要求1或2所述的一种灵芝原生态仿野生栽培方法，其特征在于：所述母种培养基的制作方法为：按配方称取所需原料，马铃薯去皮切片，马铃薯片煮后用纱布过滤，取其滤液加入琼脂、葡萄糖，加热至琼脂溶化；桑木屑煮汁得到桑木屑浸汁，与其它组分混合后，补足水至l000ml，调pH5～6.5。

3.根据权利要求1所述的一种灵芝原生态仿野生栽培方法，其特征在于：所述原种培养基的配方为：桑木屑77%、麸皮15%、玉米粉15%、硫酸铵0.5%、糖1%、碳酸钙1%，另加0.5%的硫酸铵。

4.根据权利要求1所述的一种灵芝原生态仿野生栽培方法，其特征在于：所述装袋培养基中，原料按按重量百分比，桑木屑35-45%、桑木条25-30%、麸皮15-20%、玉米粉12-15%、糖0.6-1.0%、碳酸钙0.8-1.6%，总重量计100%，另加硫酸铵0.5%。

5.根据权利要求1所述的一种灵芝原生态仿野生栽培方法，其特征在于：所述装袋培养基中，原料按按重量百分比，桑木屑40%、桑木条28%、麸皮15%、玉米粉15%、糖1%、碳酸钙1%，总重量计100%，另加硫酸铵0.5%。