CN104049084A - 胱氨酸蛋白酶抑制剂c检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,本发明试剂盒包括试剂1和试剂2。所述的试剂1为甘氨酸缓冲液,其浓度范围为0.01~5mol/L,试剂2为抗人CYS-C抗体胶乳颗粒,其浓度范围为100~500μl/mL。本发明具有反应快速,灵敏度高和准确性好,试剂稳定期长的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定血清中胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,具体涉及一种运用乳胶增强免疫比浊法测定人血清中胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒。
背景技术
胱氨酸蛋白酶抑制剂(CYS-C)是一种反映肾小球滤过率变化的理想的内源性标志物。在肾小球滤过功能试验中,血清肌酐、尿素及内生肌酐清除率是最常用的指标。由于以上指标尚存诸多不足,故人们一直在寻找新的反映肾小球滤过率变化的指标。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除,胱抑素C能够对肾病中早期、肾移植、糖尿病、肾病等提供早期诊断;同时由于不受年龄、肌肉量等因素的影响,对老人、儿童、孕妇的诊断结果更为准确可靠,其诊断效果要明显由于血清肌酐。
发明内容
发明的目的是克服现有技术存在的缺陷,提供一种反应速度快,灵敏度强,准确性高,稳定期长的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒。
实现本发明目的的技术方案是:提供一种胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,该试剂盒由试剂1和试剂2组成的液体双试剂,其中所述试剂1为甘氨酸缓冲液,其浓度范围为:0.01~5mol/L,试剂2为抗人CYS-C抗体胶乳颗粒,其浓度范围为:100~500μl/mL。
作为优选,本发明所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,所述试剂1为甘氨酸缓冲液,其浓度范围为:0.05~2mol/L,试剂2为抗人CYS-C抗体胶乳颗粒,其浓度范围为:200~400μl/mL。
作为最优选,本发明所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,所述试剂1为甘氨酸缓冲液,其浓度范围为:0.1mol/L,试剂2为抗人CYS-C抗体胶乳颗粒,其浓度范围为:300μl/mL。
本发明的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,所述试剂1和试剂2的体积比为:4:1。
本发明的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,所述试剂2中的抗人CYS-C抗体胶乳颗粒为单克隆抗体包被的胶乳颗粒,直径为100nm。
本发明的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒中试剂1和试剂2中的原料选择依据是:
甘氨酸缓冲液为稳定的缓冲液,利于试剂中各种成分的分散,可提高试剂的稳定性。抗人CYS-C抗体胶乳颗粒采用的单克隆抗体包被的胶乳颗粒,胶乳颗粒采用纳米技术,直径达100nm,使得反应速度加快,同时提高灵敏度。
本发明试剂盒试剂1和试剂2的配置方法为常规方法,即试剂1和试剂2分别加入蒸馏水后各自混合搅匀即可。
本发明的试剂盒通过下列方法测定胱氨酸蛋白酶抑制剂C,样品中的胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CYS-C)与试剂中抗人CYS-C抗体胶乳颗粒发生凝集反应,凝集反应形成抗原抗体复合物而产生浊度,其浊度高低在一定量抗体存在时与样品中CYS-C成正比。通过测定特定波长的吸光度值,参照校准曲线即可计算出血清中CYS-C的含量。
应用本发明胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒测定样本中胱氨酸蛋白酶抑制剂C的测定方法如下:样本加试剂1混匀,30~40℃反应3~5min后读取吸光度A1,加入试剂2混匀,30~40℃反应3~5min后读取吸光度A2,ΔA= A2-A1。其中样品用量8μL,试剂1用量200-300μL,试剂2用量30-110μL。
应用本发明胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒测定样本中胱氨酸蛋白酶抑制剂C的含量,计算公式如下:
胱氨酸蛋白酶抑制剂C=样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度ΔA0,
本发明具有积极的效果:与现有的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,本发明反应速度快,灵敏度高,试剂稳定期长,适用于全自动生化分析仪,有较大的临床应用价值。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解,下面根据具体实施例并结合附图,对本发明作进一步详细的说明,其中
图1是本发明试剂盒测定胱氨酸蛋白酶抑制剂C的实时反映曲线。
图2是对比试剂盒测定胱氨酸蛋白酶抑制剂C的实时反映曲线。
图1、图2中横坐标为读数点,纵坐标为吸光度A。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明,但本发明远不仅限于以下实施例。
实施例1
试剂1(R1)组分及其浓度范围:
R1 甘氨酸缓冲液0.01mol/L
其中试剂2(R2)组分及其浓度范围:
R2 抗人CYS-C抗体胶乳颗粒100μl/mL
试剂1和试剂2的配置方法为常规方法,即试剂1和试剂2所述的组分别加入蒸馏水后各自混合搅匀即可。
实施例2
试剂1(R1)及其浓度范围:
R1 甘氨酸缓冲液5mol/L
其中试剂2(R2)及其浓度范围:
R2 抗人CYS-C抗体胶乳颗粒500μl/mL
实施例2试剂盒的制备方法同实施例1。
实施例3
试剂1(R1)及其浓度范围:
R1 甘氨酸缓冲液0.05 mol/L
其中试剂2(R2)及其浓度范围:
R2 抗人CYS-C抗体胶乳颗粒200μl/mL
实施例3试剂盒的制备方法同实施例1。
实施例4
试剂1(R1)及其浓度范围:
R1 甘氨酸缓冲液2mol/L
其中试剂2(R2)及其浓度范围:
R2 抗人CYS-C抗体胶乳颗粒400μl/mL
以下实施例。
实施例4试剂盒的制备方法同实施例1。
实施例5
试剂1(R1)及其浓度范围:
R1 甘氨酸缓冲液0.1mol/L
其中试剂2(R2)及其浓度范围:
R2 抗人CYS-C抗体胶乳颗粒300μl/mL
实施例5试剂盒的制备方法同实施例1。
应用本发明胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒测定样本中胱氨酸蛋白酶抑制剂C的测定方法如下:样本加试剂1混匀,30~40℃反应3~5min后读取吸光度A1,加入试剂2混匀,30~40℃反应3~5min后读取吸光度A2,其中样品用量8μL,试剂1用量200-300μL,试剂2用量30-110μL。
根据胱氨酸蛋白酶抑制剂C=样本吸光度ΔA×标准液浓度/标准液吸光度ΔA0,得出胱氨酸蛋白酶抑制剂C的含量。
下面结合图1、图2和表格对对比的试剂盒与本发明试剂盒的性能进行比较。通过反应曲线、灵敏度、线性范围、准确性及各种干扰物等的影响比较这两种试剂盒。
对比例
对比例胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,其成分及配方为
试剂1: 缓冲液12mmol/L
试剂2: 胶体金包被的抗体 150mmol/L
本发明的试剂盒:试剂1和试剂2。
1、两种试剂盒的线性范围的比较:
配制0,1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0mg/L,胱氨酸蛋白酶抑制剂C标准溶液。分别用本发明试剂盒和对比试剂盒来测定其浓度,结果见表1。
表1 本发明试剂盒和对比试剂盒测定线性范围对比
本发明试剂盒的线性范围较对比试剂盒,在胱氨酸蛋白酶抑制剂C浓度大于6.0mg/L时,对比试剂盒不能检出,线性范围过小,说明本发明试剂盒具有线性测试范围大。
2、两种试剂盒的灵敏度的比较:
用现有的试剂盒和本发明的试剂盒测定1.88 mg/L的质控品,吸光度之差(∆A)读数如下:
吸光度 | A1 | A2 | ∆A=A2-A1 |
本发明的试剂盒 | 231 | 2570 | 2339 |
对比试剂盒 | 258 | 1850 | 1492 |
本发明试剂盒较比对试剂盒测定同样样本时吸光度数值大,说明本发明灵敏度高。
3、两种试剂盒效期稳定性的比较:
用对比的试剂盒和效期超过1.5年的过期试剂盒进行对比试验,结果见表2。
表2效期稳定性试验数据比对
从上表可以看出本发明试剂盒的精密度、灵敏度高于对比试剂盒,效期稳定性也大于对比试剂盒,超过1.5年后仍可以使用。
从上述实施例可知本发明胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒具有反应速度更快,灵敏度更高,试剂稳定期更长的优点。
以上所述的具体实施例,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施例而已,并不用于限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,其特征在于:该试剂盒是由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂,所述试剂1为甘氨酸缓冲液,其浓度范围为:0.01~5mol/L,
试剂2为抗人CYS-C抗体胶乳颗粒,其浓度范围为:100~500μl/mL。
2.根据权利要求1所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,其特征在于:所述试剂1为甘氨酸缓冲液,其浓度范围为:0.05~2mol/L,试剂2为抗人CYS-C抗体胶乳颗粒,其浓度范围为:200~400μl/mL。
3.根据权利要求2所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,其特征在于:所述试剂1为甘氨酸缓冲液,其浓度范围为:0.1mol/L,试剂2为抗人CYS-C抗体胶乳颗粒,其浓度范围为:300μl/mL。
4.根据权利要求1、2或3所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,其特征在于:所述试剂1和试剂2的试剂比为:4:1。
5.根据权利要求1、2或3所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒,其特征在于:所述试剂2中抗人CYS-C抗体胶乳颗粒为单克隆抗体包被的胶乳颗粒,直径为100nm。
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