CN104004670A - 一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂及其制备方法与应用，属于饲料添加剂技术领域。本发明首先经发酵、离心、清洗、添加载体和保护剂、挤压滚圆制粒、干燥等步骤制得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。通过该方法制备得到饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂颗粒大小较均匀，贮藏稳定性好，具有较好耐热性，能耐受饲料制粒过程中高温、高湿等的加工条件，具有较高成活率；存活率保持在90％以上，益生菌活菌数达5×10⁹cfu/g以上。

Description

一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于饲料添加剂领域，涉及一种益生菌，具体涉及一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂及其制备方法与应用。

背景技术

从上世纪50年代起，随着抗生素作为饲料添加剂被广泛应用，饲料抗生素在促进畜禽生长的同时，其弊端日益显现，如导致动物胃肠道正常菌群失调、产生耐药性、药物残留和降低畜产品品质等，从而给人类健康造成潜在的危害。这些问题已引起全世界的广泛关注。2002年世界卫生组织已提出减少食用动物中抗生素使用的全球原则，欧盟、日本和韩国分别于2006年和2008年禁止在饲料中使用抗生素。

目前，国内外公认的饲料中抗生素替代品包括微生态制剂、抗菌肽、酶制剂、中草药、植物提取物和酸化剂等6大类。益生菌(probiotics)可调节胃肠道微生物区系的平衡，提高动物生产性能已成为动物营养研究热点之一。

FAO/WHO定义益生菌为活的微生物，当摄入足够数量时，对宿主起有益健康作用。国内外益生菌研究主要集中在乳酸杆菌、芽孢杆菌、双歧杆菌上和活性酵母等种属。我国饲料微生物制剂的研究适于20世纪80年代，与国外同类产品相比有较明显的差距。主要表现为：(1)产品种类少，形式单一；(2)宿主特异性不强、与养殖方式配合差；(3)生产工艺落后，菌株活性低，热稳定性差。益生菌制剂可分为液体制剂和固体制剂。液体制剂是通过传统的发酵培养方式，最终得到益生菌发酵液作为产品。固体制剂一般是益生菌经过增殖后，通过冻干、喷雾干燥或包埋等手段，将液体制剂进一步加工成为固态形式。相比较而言，固态制剂较液体制剂更便于运输、储存和应用。冻干法耗时，设备昂贵，能耗高。喷雾干燥法尽管时间短，但活菌损失率高。

饲用微生态制剂要求具备较好储存稳定性，同时能够耐受饲料制粒加工过程中高温、高压、高湿等特殊环境。目前国内微生态制剂多为冻干型粉剂，颗粒饲料和膨化饲料在加工过程中添加微生态粉剂后，在高温高湿条件下可造成10％～30％的孢子失活，肠球菌失活达90％以上，乳杆菌几乎全部被杀灭，酵母的活细胞损失也达90％以上。因此需加强对益生菌剂型的研究，提高活菌浓度，提高益生菌制剂中活菌对不良环境的耐受力，延长产品保存期。

发明内容

为克服上述现有技术的缺点和不足，本发明首要目的在于提供一株以猪肠道微生物为筛选对象，分离得到的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，为酵母益生菌在饲料加工或制粒制备中应用奠定基础。

本发明的另一目的在于提供利用上述酿酒酵母制备饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂的制备方法，以便能耐受饲料制粒加工过程中高温高湿环境，提高益生菌制剂在饲料加工中存活量。

本发明的另一目的在于提供上述制备方法获得的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

本发明的再一目的在于提供上述酿酒酵母饲用耐高温颗粒制剂的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，名称为Saccharomyces cerevisiaeNKY1，于2013年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2013677。

所述的酿酒酵母的培养条件为将斜面酿酒酵母菌种接种至酵母培养基中，pH5.0，培养温度为30℃，150～250rpm振荡培养24～36h，即完成酿酒酵母的扩增，获得酿酒酵母培养液；

所述的酵母培养基优选为麦芽汁液体培养基或YPD培养基，且不限于此培养基；

所述的麦芽汁液体培养基优选通过如下步骤制备：麦芽膏粉130g/L，121℃高压灭菌20min后保存备用；

所述的YPD培养基优选通过如下步骤制备：溶解10g酵母膏，20g蛋白胨，于900mL水中，121℃高压灭菌20min后，加入100mL200g/L葡萄糖；其中，葡萄糖需过滤除菌或115℃灭菌15min；

一种利用上述酿酒酵母制备饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备酵母泥

将斜面酿酒酵母菌种接种至酵母培养基中，pH5.0，培养温度为30±1℃，振荡培养24～36h，获得液体种子培养液，将液体种子培养液按5～10％(v/v)的比例接种至发酵培养基中，pH5.0～5.5，温度30±1℃，采用流加方式补充适当碳源、氮源和磷源，培养24～36h，获得酿酒酵母乳，在酵母乳中加入2～3g/LNaCl、3～4g/L MgCl₂·6H₂O和1～2g/L吐温-80后，采用真空抽滤得到酿酒酵母泥；

(2)挤压滚圆制粒

往步骤(1)中得到的酿酒酵母泥1000质量份中加入60～65质量份的载体、15～20质量份的微晶纤维素和50～65质量份的热保护剂，加入1～2质量份的抗粘剂，充分搅拌混合均匀，将混合物料采用挤压滚圆制粒方式质粒，得到直径1.6～2mm球状颗粒；

(3)干燥：将步骤(2)中得到的球状颗粒进行干燥，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

步骤(1)中所述的酵母培养基优选为麦芽汁液体培养基或YPD培养基，且不限于此培养基；

所述的麦芽汁液体培养基优选通过如下步骤制备：麦芽膏粉130g/L，121℃高压灭菌20min后保存备用；

所述的YPD培养基优选通过如下步骤制备：溶解10g酵母膏，20g蛋白胨，于900mL水中，121℃高压灭菌20min后，加入100mL200g/L葡萄糖；配制平板时，需在高压灭菌前加入15～20g/L琼脂粉；其中，葡萄糖需过滤除菌或115℃灭菌15min；

步骤(1)中所述的发酵培养基优选通过如下步骤制备：葡萄糖10～20g/L，(NH₄)₂SO₄4～6g/L，酵母膏5～10g/L，K₂SO₄3～4g/L，KH₂PO₄5～8g/L，MgSO₄·7H₂O1～2g/L，CaCl₂·2H₂O0.2～0.3g/L，泡敌消泡剂(V/V)0.05～0.1％；121℃高压灭菌20～30min后备用；

步骤(1)中所述的发酵培养基更优选通过如下步骤制备：葡萄糖10g/L，(NH₄)₂SO₄5g/L，酵母膏5g/L，K₂SO₄3.6g/L，KH₂PO₄6g/L，MgSO₄·7H₂O1.5g/L，CaCl₂·2H₂O0.2g/L，泡敌消泡剂(V/V)0.06％；121℃高压灭菌20～30min后备用；

步骤(1)中所述的流加方式补充适当碳源、氮源和磷源的步骤如下：当发酵液的溶氧上升时开始用补料培养基进行补料，设定溶氧水平为15～25％，将补料控制与溶氧水平偶联，根据溶氧状态自动补料；补料体积为初始体积10～15％；

所述的补料培养基优选通过如下步骤制备：葡萄糖300～500g/L，(NH₄)₂SO₄5～10g/L，酵母膏10～20g/L，KH₂PO₄40～50g/L，MgSO₄·7H₂O5～10g/L，泡敌消泡剂(V/V)0.05～0.1％；121℃高压灭菌20～30min后备用；

所述的补料培养基更优选通过如下步骤制备：葡萄糖500g/L，(NH₄)₂SO₄7.5g/L，酵母膏15g/L，KH₂PO₄45g/L，MgSO₄·7H₂O7.5g/L，泡敌消泡剂(V/V)0.06％；121℃高压灭菌20～30min后备用；

步骤(2)中所述的载体优选为淀粉或糊精；

步骤(2)中所述的热保护剂优选为海藻糖；

步骤(2)中所述的抗粘剂优选为PEG4000或PVP中的一种；

步骤(2)中所述的挤压滚圆制粒方式优选的制粒装置为挤出滚圆机，孔板直径优选为2mm；

步骤(3)中所述的干燥，优选为用流化床或沸腾床进行干燥；其干燥温度为不高于50℃，更优选为45℃，球状颗粒终水份控制在8％以内，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

所述的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂通过上述制备方法制备获得。

所述的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂中每克含活菌数为5×10⁹cfu/g以上。

所述的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂在饲料上的应用，添加量为每吨饲料添加2～4kg上述饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

本发明的机理是：海藻糖在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下可在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征。微胶囊造粒技术将活酵母包埋封存在一种微型胶囊内成为一种固体微粒产品，可以减少酵母细胞与外界接触面积，降低酵母细胞在高温条件下死亡率。

本发明与现有技术相比，具有下列优点及效果：

(1)本发明从健康猪肠道内容物中分离得到一株酵母属益生菌，经鉴定为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，且该菌株不具备耐高温活性，通过采用微胶囊工艺制备得到活性酵母菌制剂颗粒大小较均匀，贮藏稳定性好，具有较好耐热性，能耐受饲料制粒过程中高温高湿环境，具有较高成活率。

(2)针对酵母类易失活益生菌而言，解决失活问题的途径就是采用微胶囊包埋技术对活菌体进行包埋，使其与外界不良环境分开，通过特殊处理(微球囊吸附、包衣处理等)之后，活菌制剂稳定性得到较大程度的改善，在耐受饲料制粒过程中高温高湿高压后较大部分存活下来。与此同时，经微胶囊包埋后的益生菌形成近似球状的微小颗粒，很容易添加到饲料中，便于分散混合均匀。

附图说明

图1是酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae NKY1在YPD培养平板上培养36h的生长图。

图2是本发明制备获得的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂的颗粒图。

图3是实施例2中进口对照品和自制样品的耐热性检测纯活率的菌体存活率的对比图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规实验条件。

淀粉、微晶纤维素、PEG4000、PVP和海藻糖均为市售食品级产品；

麦芽汁液体培养基通过如下步骤制备：麦芽膏粉130g/L，121℃高压灭菌20min后保存备用；

发酵培养基通过如下步骤制备：葡萄糖10g/L，(NH₄)₂SO₄5g/L，酵母膏5g/L，K₂SO₄3.6g/L，KH₂PO₄6g/L，MgSO₄·7H₂O1.5g/L，CaCl₂·2H₂O0.2g/L，泡敌消泡剂(V/V)0.06％；121℃高压灭菌20～30min后备用。

实施例1

利用现代微生物分离技术，从健康猪肠道内容物中分离得到一株酵母属益生菌。分离步骤如下：无菌条件下从刚屠宰14日龄健康仔猪肠道中收集食糜样品，置于无菌玻璃瓶中在冰浴条件下转移至实验室备用，然后在无菌条件下取少许食糜样品接种至YPD培养基中，30℃、200rpm振荡培养36h，稀释后涂布YPD培养平板，通过菌落形态观察并结合普通显微镜镜检，挑取单菌落划线分离，筛选得到一批酵母细胞菌株，通过摇瓶培养方式比较各菌株生长性能，筛选得到一株性状优异酵母菌株，再经18S rDNA分子鉴定，该菌株18S rDNA序列经测序采用BLAST工具与在线数据库比对，该酵母与Saccharomycescerevisiae strain FJU-YS5(GenBank:EF153845.1)菌株同源性高达99％，确认该酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(见图1)。

所述的酿酒酵母的培养条件为将斜面酿酒酵母菌种接种至酵母培养基中，pH5.0，培养温度为30℃，150～250rpm振荡培养24～36h，即完成酿酒酵母的扩增，获得酿酒酵母培养液。

18S rDNA序列是如SEQ ID No.1所示。

该酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，名称为Saccharomyces cerevisiaeNKY1，于2013年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2013677。

实施例2一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂的制备

(1)制备酿酒酵母泥

将斜面酿酒酵母菌种接种至麦芽汁液体培养基(麦芽膏粉130g/L，121℃高压灭菌20min后保存备用)中，pH5.0，培养温度为30℃，振荡培养24h，获得液体种子培养液，将液体种子培养液按5％(v/v)比例接种至20L发酵培养基中，pH5.5，温度30℃，采用流加方式补充适当碳源、氮源和磷源，培养36h，获得酿酒酵母乳，在酵母乳中加入2.5g/L NaCl、4g/L MgCl₂·6H₂O和1.5g/L吐温-80后，采用真空抽滤得到酿酒酵母泥；

所述的流加方式补充适当碳源、氮源和磷源的步骤如下：当发酵液的溶氧上升时开始用补料培养基进行补料，设定溶氧水平为15～25％，将补料控制与溶氧水平偶联，根据溶氧状态自动补料；补料体积为初始体积10～15％。

所述的补料培养基通过如下步骤制备：葡萄糖500g/L，(NH₄)₂SO₄7.5g/L，酵母膏15g/L，KH₂PO₄45g/L，MgSO₄·7H₂O7.5g/L，泡敌消泡剂(V/V)0.06％；121℃高压灭菌20～30min后备用。

(2)挤压滚圆制粒

称取步骤(1)制备的酿酒酵母泥1kg，加入淀粉65g、微晶纤维素20g、PEG4000(聚乙二醇4000)1g和海藻糖65g，充分搅拌混合均匀，采用挤出滚圆机(华东理工大学化机所)进行挤压滚圆制粒，孔板直径选用2mm，得到直径为1.6～2mm球状颗粒。

(3)干燥，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

步骤(3)中所述的干燥，为用流化床(江苏省范群干燥设备厂有限公司，FG-3系列)进行干燥；其干燥温度为45℃，干燥时间为3h，球状颗粒终水份控制在8％以内，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂，如图2所示。

(4)耐热性检测

模拟饲料制粒高温高湿环境，在95℃饱和蒸汽条件下考察不同时间段酵母菌颗粒成活率，采用稀释平板计数，同时以国外进口同类型耐热酵母菌(百福菌，购自法国乐斯福(明光)有限公司)做对照。结果见图3。上述制备的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂为自制样品，所得样品活菌数为7.3×10⁹cfu/g。

从图3可知，3min时，自制样品的活菌数达原样品的60％，而对照品的活菌数仅为原对照品的不足50％；10min时，对照品则完全失活，而自制样品仍有10％的菌存活，因此，本申请制备的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂，具有很好耐热性，能耐受饲料制粒过程中高温高湿环境，具有较高成活率。

实施例3一种酿酒酵母饲用耐高温颗粒制剂的制备

(1)制备酿酒酵母泥

将斜面酿酒酵母菌种接种至麦芽汁液体培养基(麦芽膏粉130g/L，121℃高压灭菌20min后保存备用)中，pH5.0，培养温度为30℃，振荡培养36h，获得液体种子培养液，将液体种子培养液按10％(v/v)的比例接种至20L发酵培养基中，pH5.0，温度30℃，采用流加方式补充适当碳源、氮源和磷源，培养24h，获得酿酒酵母乳，在酵母乳中加入2.5g/L NaCl、4g/L MgCl₂·6H₂O和1.5g/L吐温-80后，采用真空抽滤得到酿酒酵母泥；

所述的流加方式补充适当碳源、氮源和磷源的步骤如下：当发酵液的溶氧上升时开始用补料培养基进行补料，设定溶氧水平为15～25％，将补料控制与溶氧水平偶联，根据溶氧状态自动补料；补料体积为初始体积10～15％。

所述的补料培养基通过如下步骤制备：葡萄糖500g/L，(NH₄)₂SO₄7.5g/L，酵母膏15g/L，KH₂PO₄45g/L，MgSO₄·7H₂O7.5g/L，泡敌消泡剂(V/V)0.06％；121℃高压灭菌20～30min后备用。

(2)挤压滚圆制粒

称取步骤(1)制备的酵母泥1kg，加入淀粉60g、微晶纤维素15g、PVP(Polyvinylpyrrolidone，聚乙烯吡咯烷酮)2g和海藻糖50g，充分搅拌混合均匀，采用挤出滚圆机进行挤压滚圆制粒，孔板直径选用2mm，得到直径为1.6～2mm球状颗粒。

(3)干燥，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

步骤(3)中所述的干燥，为用沸腾床(江苏省范群干燥设备厂有限公司，FG-3系列)进行干燥；其干燥温度为45℃，干燥时间为3h，球状颗粒终水份控制在8％以内，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂，如图2所示。

(4)耐热性检测

模拟饲料制粒高温高湿环境，在95℃饱和蒸汽条件下考察不同时间段酵母菌颗粒成活率，采用稀释平板计数，同时以国外进口同类型耐热酵母菌(百福菌，购自法国乐斯福(明光)有限公司)做对照。上述制备的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂为自制样品，所得样品活菌数为8.0×10⁹cfu/g。

实施例4

试验选取14日龄断奶的三元杂仔猪，按体重和性别随机分为2个处理组，每个处理4个重复，每重复6头仔猪，公母各半，试验全期3周。对照组为不添加酵母的猪饲料，试验组为按3g/kg添加饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂的猪饲

料，试验全期3周，研究微胶囊活性酵母对早期断奶仔猪生长性能、肠道发育及黏膜免疫等方面的影响。试验结果显示：在生长性能方面：断奶3周后微胶囊活性酵母组饲料转化率比对照组提高了9.29％(P＜0.05)，血清尿素氮(SUN)含量比对照组降低了18.84％(P＜0.05)，表明微胶囊活性酵母可以提高断奶仔猪生长性能。在抗氧化指标方面：仔猪血清中SOD活性，微胶囊活性酵母组显著高于对照组，而血清中MDA含量，微胶囊活性酵母组显著低于对照组(P＜0.05)，表明微胶囊活性酵母可以提高断奶仔猪抗氧化能力。在肠道黏膜发育方面：断奶第3周添加微胶囊活性酵母组的十二指肠绒毛高度均高于对照组，微胶囊活性酵母组比对照组提高了8.36％(P＜0.05)，微胶囊活性酵母组对仔猪十二指肠隐窝深度的影响差异不显著，酵母处理组分别比对照组提高了3.14％(P＞0.05)。但十二指肠和空肠绒毛高度/隐窝深度比值微胶囊活性酵母组分别比对照组提高5.15％(P＜0.05)和8.57％(P＜0.05)，表明微胶囊活性酵母可以促进肠道发育。在黏膜免疫方面：断奶第3周小肠粘膜中IgA、IgG含量，微胶囊活性酵母组显著高于对照组(P＜0.05)，表明微胶囊活性酵母可以提高断奶仔猪黏膜免疫能力。添加微胶囊活性酵母可以提高仔猪回肠中有益菌类乳酸杆菌和酵母菌数量，并降低大肠杆菌数量。回肠内容物酵母菌数以微胶囊活性酵母组较对照组提高了11.98％(P＜0.05)；乳酸杆菌数量微胶囊活性酵母组较对照组提高了2.29％(P＞0.05)；而大肠杆菌数量较对照组降低了22.50％(P＜0.05)。

表1猪饲料的配比及营养成分含量表

预混料*为广东新南都饲料科技有限公司“宝宝乐”。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其特征在于：该酿酒酵母为Saccharomyces cerevisiae NKY1，于2013年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M2013677。

2.一种利用权利要求1所述酿酒酵母制备饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制备酵母泥

将斜面酿酒酵母菌种接种至酵母培养基中，pH5.0，培养温度为30±1℃，振荡培养24～36h，获得液体种子培养液，将液体种子培养液按体积比5～10％的比例接种至发酵培养基中，pH5.0～5.5，温度30±1℃，采用流加方式补充适当碳源、氮源和磷源，培养24～36h，获得酿酒酵母乳，在酵母乳中加入2～3g/LNaCl、3～4g/L MgCl₂·6H₂O和1～2g/L吐温-80后，采用真空抽滤得到酿酒酵母泥；

(2)挤压滚圆制粒

往步骤(1)中得到的酿酒酵母泥1000质量份中加入60～65质量份的载体、15～20质量份的微晶纤维素和50～65质量份的热保护剂，加入1～2质量份的抗粘剂，充分搅拌混合均匀，将混合物料采用挤压滚圆制粒方式质粒，得到直径1.6～2mm球状颗粒；

(3)干燥：将步骤(2)中得到的球状颗粒进行干燥，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的发酵培养基通过如下步骤制备：葡萄糖10～20g/L，(NH₄)₂SO₄4～6g/L，酵母膏5～10g/L，K₂SO₄3～4g/L，KH₂PO₄5～8g/L，MgSO₄·7H₂O1～2g/L，CaCl₂·2H₂O0.2～0.3g/L，泡敌消泡剂0.05～0.1％；121℃高压灭菌20～30min后备用；所述的百分数为体积百分数。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的流加方式补充适当碳源、氮源和磷源的步骤如下：当发酵液的溶氧上升时开始用补料培养基进行补料，设定溶氧水平为15～25％，将补料控制与溶氧水平偶联，根据溶氧状态自动补料；补料体积为初始体积10～15％。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述的补料培养基通过如下步骤制备：葡萄糖300～500g/L，(NH₄)₂SO₄5～10g/L，酵母膏10～20g/L，KH₂PO₄40～50g/L，MgSO₄·7H₂O5～10g/L，泡敌消泡剂0.05～0.1％；121℃高压灭菌20～30min后备用；所述的百分数为体积百分数。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的载体为淀粉或糊精；

步骤(2)中所述的热保护剂为海藻糖；

步骤(2)中所述的抗粘剂为PEG4000或PVP中的一种。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的挤压滚圆制粒方式的制粒装置为挤出滚圆机，孔板直径为2mm；

步骤(3)中所述的干燥，用流化床或沸腾床进行干燥；其干燥温度为不高于50℃，球状颗粒终水份控制在8％以内，获得饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。

8.一种饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂，通过权利要求1～7任一项所述的制备方法制备获得。

9.根据权利要求8所述的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂，其特征在于：所述的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂中每克含活菌数为5×10⁹cfu/g以上。

10.权利要求8或9所述的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂在饲料上的应用，其特征在于：添加量为每吨饲料添加2～4kg权利要求8或9所述的饲用耐高温微胶囊酵母益生菌制剂。