CN103550401A - 一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括以下工艺步骤：1）益生菌的制备；2）混合制剂的冻干；3）泡腾片制备。本发明具有以下有益效果：本发明所制备的复合微生态制剂泡腾片，降低了产品的运输要求，增加了用户使用的便利性；本发明所制备的复合微生态制剂泡腾片可以在饮水免疫活疫苗的同时进行微生态制剂的饲喂，减少了人力物力，减少了对鸡群的应激；本发明所制备的复合微生态制剂泡腾片可增强鸡群免疫力，提高鸡群饲料利用率，提高鸡群产蛋率，降低鸡舍氨气排放量，改善鸡群生活环境。

Description

一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法。

背景技术

益生菌对人畜都有益生作用。微生态制剂中的益生菌可以产生抗菌物质，并与有害细菌竞争生态位，抑制致病菌的生长繁殖，调整恢复肠道的菌群平衡。此外，微生态制剂可成为非特异性免疫因子，通过细菌本身或细胞壁成分刺激宿主细胞，激活免疫***，提高机体抗体水平或巨噬细胞活性，从而增强机体抵抗力。微生态制剂中的有益菌群在消化道繁衍，能促进消化道内多种氨基酸、维生素等一系列营养成分的有效合成和吸收利用，从而促进畜禽生长发育和增重。同时在环保方面，可以清除粪尿恶臭，净化生态环境。微生态制剂中的益生菌通过对有害物质进行发酵分解和合成，有效的降低了有毒有害物质的含量。

黄酮类化合物是自然界中存在的多元酚类物质，也是自然界药用植物中的主要活性成分之一。它是指具有15个碳原子并以C6-C3-C6的方式构成的三环天然有机物，是植物在长期自然选择中产生的二级代谢产物，现在已分离鉴定的有4000多种。它广泛存在于果蔬、中草药中，无毒副作用，它具有显著的清除机体内自由基、抗老化、抗突变、调血脂降血压等药理保健功能，是一类极具开发前景的天然有机抗氧化剂，这些抗氧化活性物质可以减少和清除机体内自由基，具有预防疾病的作用。

多糖是中药活性成分之一，大量研究表明，多糖及糖复合物在生物体内不仅是作为能量资源和构成材料，更重要的是它存在于一切细胞膜结构中，参与生命现象中细胞的各种活动。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的能力。

目前，市售微生态制剂大都是冻干粉，可以直接拌于饲料中，经口服方式被动物体吸收。这种饲喂方式虽然简单方便，但由于微生态制剂大多为乳酸菌，其生命力较为脆弱，拌于饲料中会显著降低活菌数。此外，由于同饲料共同饲喂，很难保证动物吸收的准确计量，从而影响疗效。另外冻干状态的产品在使用的整个贮存和运输过程中都要保持在较低的温度状态下的“冷链”环境，这给产品的贮存和运输以及用户的使用带来诸多不便。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法的技术方案。

所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）益生菌的制备

对乳酸菌和芽孢杆菌分别培养，得到乳酸菌菌液和芽孢杆菌菌液；

2）混合制剂的冻干

将乳酸菌菌液和芽孢杆菌菌液在无菌条件下混合均匀，调整至所需菌数，得到益生菌混合菌液，将益生菌混合菌液与冻干保护剂混合均匀，分装后经冷冻真空干燥制成混合制剂冻干粉；

所述的冻干保护剂为每1000ml磷酸缓冲液中含有中药多糖30～80g、中药黄酮20～50g、维生素组合6～10g、明胶4～6g和蔗糖40～70g，所述的中药多糖和中药黄酮由丹参、甘草、银杏叶、黄芪、人参、党参和枸杞中提取得到；

3）泡腾片制备

将混合制剂冻干粉与泡腾材料混合均匀，用压片机压制成片剂，定量分装，即得到复合微生态制剂泡腾片。

所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中乳酸菌的培养具体包括：将MRS液体培养基预热至37℃，同时按2％接种量接种乳酸菌种子液，37℃静置培养18～24小时，收获菌液至4℃保存备用；芽孢杆菌的培养具体包括：将芽孢杆菌培养基预热至37℃，同时按1％接种量接种芽孢杆菌种子液，37℃静置培养18～24小时，收获菌液至4℃保存备用。

所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中乳酸菌为两歧双歧杆菌（Bacillus licheniformis）、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）、长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）中的一种或几种；芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中的一种或几种。

所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中益生菌混合菌液与冻干保护剂的体积比为1:1～3。

所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中每1000ml磷酸缓冲液中含有中药多糖40～70g、中药黄酮30～40g、维生素组合7～9g、明胶5～6g和蔗糖50～60g。

所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的维生素组合中含有维生素C 20～40%、维生素E 10～30%、维生素D3 5～15%、维生素B1 15～35%、维生素K 10～20%、维生素B2 5～20%。

所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的中药多糖和中药黄酮按以下步骤制得：

a、按丹参10～30份、甘草10～20份、银杏叶10～30份、黄芪10～30份、人参10～20份、党参10～30份、枸杞10～30份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；

b、弃去步骤a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

c、将步骤b中上清进行醇沉，沉淀即为粗制中药多糖，上清即为粗制中药黄酮；

d、用灭菌纯化水洗涤步骤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

e、将步骤d中上清液经0.22um滤膜过滤除菌后，进行10倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；

f、将步骤e中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥即得到中药多糖；

g、将步骤c中粗制中药黄酮进行减压真空浓缩，浓缩物用次灭菌注射用水稀释清洗，再次进行减压真空浓缩，如此三次后，再经0.22um滤膜过滤除菌，然后经冷冻真空干燥即得到中药黄酮。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明所制备的复合微生态制剂泡腾片，降低了产品的运输要求，增加了用户使用的便利性。

2、本发明所制备的复合微生态制剂泡腾片可以在饮水免疫活疫苗的同时进行微生态制剂的饲喂，减少了人力物力，减少了对鸡群的应激。

3、本发明所制备的复合微生态制剂泡腾片可增强鸡群免疫力，提高鸡群饲料利用率，提高鸡群产蛋率，降低鸡舍氨气排放量，改善鸡群生活环境。

具体实施方式

为了使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按常规实验方法进行。

实施例1：益生菌的制备

（1）生产用种子制备

乳酸菌的培养

将MRS液体培养基预热至37℃，同时按2％接种量接种乳酸菌种子液，37℃静置培养18～24小时，收获菌液至-4℃保存备用。

芽孢杆菌的培养

将芽孢杆菌培养基预热至37℃，同时按1％接种量接种芽孢杆菌种子液，37℃静置培养18～24小时，收获菌液至4℃保存备用。

所述的乳酸菌菌为：两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）、长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）中的一种或几种。

所述的芽孢杆菌为：地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中的一种或几种。

所述的MRS液体培养基为：

蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母膏5.0 g、柠檬酸氢二铵2.0 g、葡萄糖20.0 g、吐温80 1.0ml、乙酸钠5.0 g、磷酸氢二钾2.0 g、硫酸镁0.58 g、硫酸锰0.25 g、琼脂18.0 g、蒸馏水1000 ml，pH6.2-6.6。

所述的芽孢杆菌培养基为：葡萄糖20g、蛋白胨15g、牛肉膏0.5g、氯化钠        5g、硫酸锰 1g、磷酸氢二钾3g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.5g、氯化铁0.1g

碳酸钙0.1g、蒸馏水1000ml，116℃ 高压灭菌25分钟。

实施例2：复合中药多糖与中药黄酮的制备

a、按丹参20份、甘草15份、银杏叶20份、黄芪20份、人参15份、党参20份、枸杞20份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；

b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

c、将b中上清进行醇沉，沉淀即为粗制中药多糖，上清即为粗制中药黄酮；

d、用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

e、将d中上清液经0.22um滤膜过滤除菌后，进行10倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；

f、将e中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥即得到中药多糖；

g、将c中粗制中药黄酮进行减压真空浓缩，浓缩物用次灭菌注射用水稀释清洗，再次进行减压真空浓缩，如此三次后，再经0.22um滤膜过滤除菌，然后经冷冻真空干燥即得到中药黄酮。

该实施例中步骤a中也可以按丹参10份、甘草10份、银杏叶10份、黄芪10份、人参10份、党参10份、枸杞10份称取各中药原料，也可以按丹参30份、甘草20份、银杏叶30份、黄芪30份、人参20份、党参30份、枸杞30份称取各中药原料。

实施例3：冻干保护剂制备

每1000ml磷酸缓冲液包含以下组分：中药多糖40g、中药黄酮30g、维生素组合8g（维生素C 1.6g、维生素E 0.8g、维生素D3 0.6g、维生素B1 2.2g、维生素K 1.6g、维生素B2 1.2g）、明胶5g、蔗糖50g；或每1000ml磷酸缓冲液包含以下组分：中药多糖70g、中药黄酮40g、维生素组合7g（维生素C 1.4g、维生素E 1.75g、维生素D3 0.7g、维生素B1 1.4g、维生素K 0.7g、维生素B2 1.05g）、明胶6g、蔗糖60g。所述的中药多糖和中药黄酮由实施例2制得。

制备方法：精确称取各组分，溶解于1000ml的磷酸缓冲溶液，无菌条件下经0.22um滤膜过滤除菌，4℃保存备用。

磷酸缓冲液由氯化钠6～10g，氯化钾0.05～0.5g，磷酸氢二钠1～1.2g，磷酸二氢钾0.05～0.5g，氯化钙0.05～0.2g，含6个结晶水的氯化镁0.05～0.2g溶于1000ml双蒸水中，经116℃，高压灭菌30分钟得到。

实施例4：泡腾材料的制备

a、酸性材料的制备

按质量份分别称取柠檬酸15份、乳糖10份、EDTA 15份、亮蓝指示剂0.5份，将上述成分充分混合，40～65℃烘干后过8～12目筛，制得酸性颗粒备用；

b、碱性材料的制备

按质量份分别称取碳酸氢钠15份、乳糖10份、亮蓝指示剂1份，将上述成分充分混合，40～65℃烘干后过8～12目筛，制得碱性颗粒备用；

c、将上述碱性材料与酸性材料按1:1混合均匀，并加入0.5～1质量份的左旋咪唑，经Co-60辐射灭菌制得泡腾材料。

实施例5：一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法

a、将实施例1得到的乳酸菌菌液和芽孢杆菌菌液混合均匀，并调整至160亿/ml（其中乳酸菌80亿/ml、芽孢杆菌80亿/ml），得到益生菌混合菌液。

b、将a中益生菌混合菌液按1:1、1：2或1:3（V:V）比例加入含实施例3制得的冻干保护剂，分装后经冷冻真空干燥制成微生态制剂复合冻干粉。

e、泡腾片制备

将按上述制备的冻干制剂与实施例4中的泡腾材料按2:1-3混合均匀后，用压片机压制成片剂，定量分装。

试验例1 本发明复合微生态制剂泡腾片的应用

1材料

1.1 复合微生态制剂泡腾片

按本发明实施例5制得。

1.2 试验用鸡  180日龄海兰蛋鸡1500只；10日龄三黄肉鸡1500只。

2 方法

2.1 将1500只180日龄海兰蛋鸡分为两组，第一组500只，作为实验一组，在饲喂全价饲料（参考鸡饲养标准NY/33-2004）的同时饲喂本发明复合微生态制剂泡腾片5片；第二组500只，作为实验二组，在饲喂全价饲料（参考鸡饲养标准NY/33-2004）的同时饲喂本发明复合微生态制剂泡腾片10片；第三组500只，作为对照组，只饲喂全价饲料。试验实施期记录各组产蛋率、蛋重、死淘率、新城疫抗体水平等指标，观察期为四周。

2.2将1500只10日龄三黄肉鸡分为两组，第一组500只，作为实验一组，在饲喂全价饲料（参考鸡饲养标准NY/33-2004）的同时饲喂本发明复合微生态制剂泡腾片5片；第二组500只，作为实验二组，在饲喂全价饲料（参考鸡饲养标准NY/33-2004）的同时饲喂本发明复合微生态制剂泡腾片10片；第三组500只，作为对照组，只饲喂全价饲料。试验实施期记录各组平均日增重、死淘率和新城疫抗体水平，观察期为4周。

3 结果

3.1 崩解时限结果

取1片泡腾片，置盛有200ml水的250ml烧杯中，水温15-25℃，观察并记录完全溶解的时间，结果见表1。

表1 崩解时限检验结果

3.2 180日龄海兰蛋鸡试验结果，见表2。

表2 180日龄海兰蛋鸡试验结果

3.3 10日龄三黄鸡试验结果，见表3。

表3 10日龄三黄鸡试验结果

4 结论

综上所述，本发明复合微生态制剂泡腾片可以提高机体免疫力，蛋鸡使用时可提高产蛋率，提高鸡蛋品质，降低死淘率；而肉仔鸡使用时可提高仔鸡日增重，提高仔鸡出肉率，同时也可降低仔鸡死淘率。

Claims (7)

1.一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）益生菌的制备

对乳酸菌和芽孢杆菌分别培养，得到乳酸菌菌液和芽孢杆菌菌液；

2）混合制剂的冻干

将乳酸菌菌液和芽孢杆菌菌液在无菌条件下混合均匀，调整至所需菌数，得到益生菌混合菌液，将益生菌混合菌液与冻干保护剂混合均匀，分装后经冷冻真空干燥制成混合制剂冻干粉；

所述的冻干保护剂为每1000ml磷酸缓冲液中含有中药多糖30～80g、中药黄酮20～50g、维生素组合6～10g、明胶4～6g和蔗糖40～70g，所述的中药多糖和中药黄酮由丹参、甘草、银杏叶、黄芪、人参、党参和枸杞中提取得到；

3）泡腾片制备

将混合制剂冻干粉与泡腾材料混合均匀，用压片机压制成片剂，定量分装，即得到复合微生态制剂泡腾片。

2.如权利要求1所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中乳酸菌的培养具体包括：将MRS液体培养基预热至37℃，同时按2％接种量接种乳酸菌种子液，37℃静置培养18～24小时，收获菌液至4℃保存备用；芽孢杆菌的培养具体包括：将芽孢杆菌培养基预热至37℃，同时按1％接种量接种芽孢杆菌种子液，37℃静置培养18～24小时，收获菌液至4℃保存备用。

3.如权利要求1或2所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中乳酸菌为两歧双歧杆菌（Bacillus licheniformis）、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）、长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）中的一种或几种；芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中的一种或几种。

4.如权利要求1所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中益生菌混合菌液与冻干保护剂的体积比为1:1～3。

5.如权利要求1所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中每1000ml磷酸缓冲液中含有中药多糖40～70g、中药黄酮30～40g、维生素组合7～9g、明胶5～6g和蔗糖50～60g。

6.如权利要求1或5所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的维生素组合中含有维生素C 20～40%、维生素E 10～30%、维生素D3 5～15%、维生素B1 15～35%、维生素K 10～20%、维生素B2 5～20%。

7.如权利要求1或5所述的一种复合微生态制剂泡腾片的制备方法，其特征在于所述的中药多糖和中药黄酮按以下步骤制得：

a、按丹参10～30份、甘草10～20份、银杏叶10～30份、黄芪10～30份、人参10～20份、党参10～30份、枸杞10～30份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；

b、弃去步骤a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

c、将步骤b中上清进行醇沉，沉淀即为粗制中药多糖，上清即为粗制中药黄酮；

d、用灭菌纯化水洗涤步骤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4℃吸附过夜，吸附后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

e、将步骤d中上清液经0.22um滤膜过滤除菌后，进行10倍浓缩，制得中药多糖浓缩液；

f、将步骤e中中药多糖浓缩液进行真空冷冻干燥即得到中药多糖；

g、将步骤c中粗制中药黄酮进行减压真空浓缩，浓缩物用次灭菌注射用水稀释清洗，再次进行减压真空浓缩，如此三次后，再经0.22um滤膜过滤除菌，然后经冷冻真空干燥即得到中药黄酮。