CN102948621B

CN102948621B - 一种益生肽生物饲料添加剂及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102948621B
Application number: CN201210450960.9A
Authority: CN
Inventors: 杜鹏; 李建秋; 霍贵成
Original assignee: Northeast Agricultural University
Current assignee: Daqing Shi Shi Yuan Dairy Co., Ltd.
Priority date: 2012-11-12
Filing date: 2012-11-12
Publication date: 2014-09-10
Anticipated expiration: 2032-11-12
Also published as: CN102948621A

Abstract

本发明涉及一种益生肽生物饲料添加剂及其制备方法和应用，本发明的一种益生肽生物饲料添加剂是通过将芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌的一种或几种种子液接入到植物蛋白酶解液中通过混合发酵而成。动植物蛋白恒温或变温酶解后按一定比例接入芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌的一种或几种种子液进行后发酵，将发酵液浓缩干燥制成粉状产品。该益生肽饲料添加剂解决了酸、碱、蛋白酶酶解等工艺所带来的苦味肽含量高、适口性不好的难题。本发明的益生肽生物饲料添加剂中的活性肽可刺激动物免疫功能，提高动物的免疫能力，有益菌可改善动物肠道环境，增强动物对多种疾病的抵抗能力，并且能够提高饲料转化率，降低了养殖成本。

Description

一种益生肽生物饲料添加剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种益生肽生物饲料添加剂及其制备方法和应用，具体的说是涉及一种利用动植物蛋白酶解液加入益生菌进行后发酵而成的含活性肽及有益菌的生物饲料添加剂。属于生物饲料领域。

背景技术

20世纪50年代以来，抗生素作为畜禽生长促进剂在养殖业中使用，大量研究表明，抗生素在消灭致病菌同时，也消灭对动物机体有益微生物，破坏肠道微生态平衡，导致动物特别是幼龄畜禽对病原微生物的易感性。另外，长期大剂量饲喂抗生素可使动物机体内产生对人畜均有害耐药性细菌，同时人类食用了残留抗生素的动物产品也会严重影响人类的健康。

近年来，国内外已对抗生素促生长剂替代品进行了较为广泛的研究试验，各种天然产品如生物活性肽、益生素、有机酸、益生元、酶制剂和中草药等都被用作抗生素的替代品进行试验，并取得较好效果。在较多的抗生素替代品中，以微生态制剂（益生素、益生菌）或经用微生物发酵的生物发酵饲料具有高效、安全、环保等优势越来越引起人们的重视。

微生态制剂，又称益生素或益生菌（probiotic），美国的食品与药物管理局定义为直接饲喂微生物（Direct-Fed Microbe，DFM），即“活的自然的微生物”。在畜禽和水产养殖业中，益生素已广泛应用于生产实践中，并能提高畜禽生长速度，降低仔畜的发病率，能部分替代抗生素的促生长和防病功能。

生物活性肽（或寡肽）指的是一类分子量小于3000D，在构象上较松散，具多种生物学功能的多肽。具有易消化吸收、抗疲劳、降血压、降胆固醇、调节胰岛素作用、促进矿物质吸收、促进脂肪代谢、促进微生物发酵和低过敏原性等特性。

在近几十年的研究中，动物营养学家们发现，动物对饲料中各种氨基酸的利用程度并不完全受单一限制性氨基酸水平的影响，也并不完全遵循营养学中“水桶法则”经典理论。另外，动物喂以按理想氨基酸模式配制的纯合日粮或低蛋白质氨基酸平衡日粮时，也不能获得最佳的生产状态。20世纪五六十年代，Newey和Smyth首先提出可以完整吸收的证据，但直至20世纪80年代，由于直接经验和间接经验的不断积累，肽被完整吸收的观点及其生理作用才被人们重视，其相关研究也变得空前活跃，并取得了许多研究成果。

生物活性肽在动物生产中的应用

1.改善饲料适口性

某些些肽能够促进甜、酸、苦、咸4种味觉。例如：阿斯巴甜是一种高度增甜肽，其甜味是蔗糖的100～200倍，已被70余个国家核准在500余种食品和药品中使用；一些肽还被用来作鱼饲料的化学诱食剂。通过模拟、掩盖或增进口味，可以被设计并用来改善适口。

2.提高动物生产性能

蛋白质经消化作用后并不一定要降解为完全游离氨基酸才被吸收，而是主要以小肽的形式吸收，小肽的吸收率比氨基酸大，比氨基酸更易、更快被机体吸收利用。同时，小肽的低抗原性使得食后不会引起过敏反应；且小肽的渗透压比氨基酸低，食后也不会引起痢疾等不良反应。

3.促进骨骼生长提高蛋壳质量

4.其他作用

通过减少饲料中蛋白质的含量，使用2～50个氨基酸残基片段的小肽替代蛋白质可进一步优化动物生产、降低动物粪便中的大量氮，减少对湖泊、河流和地下水的污染。

发明内容

本发明的目的是提供一种益生肽生物饲料添加剂的生产方法及由该方法制备得到的饲料添加剂，本发明将动植物蛋白质酶解至酸溶蛋白含量70～90%时，升温灭酶后接入芽孢菌、酵母菌、乳酸菌的一种或几种种子液进行后发酵，发酵液经浓缩、干燥、制粒而成含有益菌与生物活性肽的新型生物饲料添加剂。本生物饲料添加剂可代替抗生素应用于养殖和饲料工业中。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明的一种益生肽生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述方法包括将高温蒸煮后的动物或植物蛋白质经过蛋白酶酶解至酸溶蛋白的含量为质量百分数30～90%后，升温灭酶，降温，然后接入芽孢杆菌、酵母菌或乳酸菌其中一种或几种种子液进行混合发酵，最后将发酵液浓缩、干燥、制粒得到。

在本发明中，优选的，所述的动物蛋白质包括：各种动物的新鲜血液、肉或内脏；

所述的植物蛋白质包括：大豆蛋白、小麦蛋白、玉米蛋白、菜籽蛋白、棉籽蛋白。

在本发明中，优选的，所述的芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌中的一种或几种;

所述的酵母菌包括酿酒酵母、产朊假丝酵母中的一种或几种;

所述的乳酸菌包括干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌中的一种或几种。

在本发明中，优选的，所述的高温蒸煮是指将动物或植物蛋白质加水于95℃-120℃下搅拌加热30-60分钟（动植物蛋白须经高温蒸煮使其膨胀吸水，内部变得松软，有利于酶解的进行。），经高温蒸煮后的动物或植物蛋白质，通过胶体磨磨碎至颗粒大小100～200目，然后通过板式换热器加热后泵至酶解罐中进行蛋白酶酶解。

在本发明中，优选的，所述的蛋白酶包括木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶以及各种动植物蛋白水解酶，所述的水解酶包括蛋白内切酶、外切酶、风味酶。

在本发明中，优选的，所述的升温灭酶是在酶解结束后，将酶解液升温至85～90℃，恒温30～60min。

在本发明中，优选的，接种过程包括按照酶解液和发酵培养基的体积比1.5:1的比例加入灭菌的发酵培养基，然后将芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌菌种制成相应的种子液，待酶解液温度降至25～40℃时,按照体积百分比计算,加入10%-15%的芽孢杆菌、酵母菌或乳酸菌其中一种或几种种子液的混合液，当选用两种不同种子液时，两种种子液的加入体积比为1-2：1-2，当选用三种不同种子液时，三种种子液的加入体积比为1-2：0.5-2：1-2，更优选的，加入的三种种子液的体积比为1:1:1，恒温25～40℃，接种后以1.0～3.5vvm的速度通入无菌空气，混合发酵48～96h；

其中所述的发酵培养基是按照以下方法制备得到的：

称取大豆蛋白胨5.0g；葡萄糖5.0g；酵母浸粉5.0g；磷酸二氢钾4.0g；3.08%（w/w）硫酸锰溶液1mL，去离子水1000ml，调pH为6.50，0.1MPa灭菌20分钟，备用。

在本发明中，优选的，所述的浓缩是采用薄膜浓缩，即通过顺流双效降膜浓缩器浓缩至干物质含量为15～60%，浓缩时一效温度80～85℃、真空度0.90～0.95Mpa；二效温度70～80℃，真空度0.80～0.85Mpa。

在本发明中，优选的，所述的干燥、制粒是将浓缩后发酵液经70～80℃循环热风干燥，或者采用真空喷雾干燥的方式将浓缩液直接喷雾干燥成粉末，加入载体，采取低温制粒的方式制粒，颗粒成品水分为8～12%。

进一步的，本发明还提供了按照以上任一项所述的方法制备得到的益生肽生物饲料添加剂。

更进一步的，本发明还提供了所述的益生肽生物饲料添加剂在制备动物饲料中的应用。

本发明提供了一种益生肽生物饲料添加剂的生产方法，本发明所提供的益生肽为有益菌与活性肽复合而成，具有益菌与活性肽的双重生物学效应。此方法的菌种本身及其分泌物对人畜安全无害，并能够在蛋白质底物上良好表达，菌种能分泌合适的蛋白酶在体外将蛋白质切成长短合适的肽段。有益菌后发酵能较好地去除蛋白原料中抗营养因子和一些蛋白抗原成分，并且由于在微生物发酵过程中加入乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌等菌株，还可产生3%左右乳酸和发酵香味，具有酸化剂的作用，有利于提高动物采食量，改善动物胃肠道的微环境的作用。

具体实施方式

下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例1发酵培养基的制备

大豆蛋白胨5.0g；葡萄糖5.0g；酵母浸粉5.0g；磷酸二氢钾4.0g；3.08%（w/w）硫酸锰溶液1mL，去离子水1000ml，pH 6.50。0.1MPa灭菌20分钟，备用。

实施例2种子液的制备

1、所涉及的菌株的购买来源：所有菌株均购自中国工业微生物菌种保藏中心，菌株具体编号为：

枯草芽孢杆菌CICC 10066、地衣芽孢杆菌CICC 10037、纳豆芽孢杆菌CICC10260、酿酒酵母CICC 1562、产朊假丝酵母CICC 1314、干酪乳杆菌CICC 20266、植物乳杆菌CICC 20242、嗜酸乳杆菌CICC 21000、嗜热链球菌CICC 20364、保加利亚乳杆菌CICC 20247、瑞士乳杆菌CICC 22826。

2、种子液的制备

A：枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌种子液

1）芽孢杆菌培养基

2）种子液制备：

灭菌后的培养基按2%接种量（w/w）接入枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌，30℃摇瓶培养24h，备用。

B：产朊假丝酵母和酿酒酵母种子液：

1）酵母菌培养基：

大豆蛋白胨5.0g；葡萄糖10.0g；酵母浸粉3.0g；麦芽膏3.0g，去离子水1000ml，pH 6.00。

2）种子液制备：

灭菌后的培养基按2%（w/w）接种量接入产朊假丝酵母菌或酿酒酵母菌，30℃静置培养48h，备用。

C：嗜热链球菌种子液

1）嗜热链球菌培养基：

多聚蛋白胨（或胰蛋白胨）5g，植物蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏2.5g，β-磷酸甘油二钠19g，抗坏血酸0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.25g，乳糖5g，蒸馏水1000mL，pH7.1，0.07MPa灭菌20min。

2）种子液制备：

灭菌后的培养基按2%（w/w）接种量接入嗜热链球菌，37℃静置培养24h，备用。

D：乳酸杆菌（干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌）种子液

1）乳酸杆菌菌培养基：

蛋白胨5.0g；牛肉膏5.0g；胰蛋白胨10.0g；酵母粉5.0g；葡萄糖10.0g；吐温-801.0g；K₂HPO₄2.0g；乙酸钠5.0g；柠檬酸氢二铵2.0g；ZnSO₄·7H₂O 0.25g；MgSO₄·7H₂O 0.1g；去离子水1000mL；pH 6.20，0.07MPa灭菌20min。

2）种子液制备：

灭菌后的培养基按2%（w/w）接种量接入干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌或瑞士乳杆菌，37℃静置培养24h，备用。

实施例3 酶解猪血益生肽生物饲料添加剂的制备

1）猪血前期处理

将凝固后的新鲜猪血粉碎，按1:10的比例加水后升至115℃，恒温保持60min，期间不停搅拌，然后将其经过胶体磨磨碎，胶体磨调为200目，用浓浆泵将磨后的猪血通过板式换热器加热至58℃后泵至酶解罐中。

2）酶解

按蛋白酶与处理后的猪血重量比为1：250的比例加入碱性蛋白酶（2000U/g），pH8.5,恒温50℃，开启搅拌，每隔4小时无菌取样测其蛋白水解度，当酸溶蛋白含量大于70%（w/w）时进行下一步。

3）升温灭酶

将酶解液升温至85℃，恒温60min，使其中的蛋白酶失活。

4）接种

待酶解液温度降至28℃时，先加入灭菌的发酵培养基（实施例1制备），酶解液和发酵培养基的体积比为1.5:1，然后按10%（体积比）接入枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、嗜热链球菌（或植物乳杆菌）种子液（实施例2制备）。恒温30℃，接种后以2.0vvm的速度通入无菌空气，混合发酵72h。

枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、嗜热链球菌（或植物乳杆菌）种子液比例为1:1:1。

各发酵菌种菌龄如下：

枯草芽孢杆菌24h、产朊假丝酵母48h、嗜热链球菌（或植物乳杆菌）菌龄24h。

5）浓缩与干燥

真空薄膜浓缩：通过高效顺流降膜真空浓缩器浓缩至干物质含量为20%。浓缩时一效温度80℃、真空度0.95Mpa；二效温度70℃、真空度0.80Mpa。

真空浓缩后，75℃循环热风干燥。用真空喷雾干燥的方式将浓缩液直接喷雾干燥成粉末，成品含水量为8%。

实施例4 酶解鸡血益生肽生物饲料添加剂的制备

1）鸡血前期处理

将凝固后的新鲜鸡血粉碎，按1:10的比例加水后升至120℃，恒温保持45min，期间不停搅拌，然后将其经过胶体磨磨碎，胶体磨调为200目，用浓浆泵将磨后的血通过板式换热器加热至50℃后泵至酶解罐中。

2）酶解

按蛋白酶与鸡血重量比为1：300的比例加入碱性蛋白酶（2000U/g），pH8.5,恒温50℃，开启搅拌，每隔4小时无菌取样测其蛋白水解度，当酸溶蛋白含量大于70%（w/w）时进行下一步。

3）升温灭酶

将酶解液升温至75℃，恒温60min，使其中的蛋白酶失活。

4）接种

待酶解液温度降至30℃时，先加入灭菌的发酵培养基（实施例1制备），酶解液和发酵培养基的体积比为1.5:1，然后按15%（体积比）接入枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、嗜热链球菌（或植物乳杆菌）种子液（实施例2制备），恒温30℃，接种后以2.0vvm的速度通入无菌空气，混合发酵60h。

枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、嗜热链球菌（或植物乳杆菌）种子液比例为1:1:2。

各发酵菌种菌龄如下：

枯草芽孢杆菌36h、产朊假丝酵母48h、嗜热链球菌菌龄24h。

5）浓缩与干燥

真空薄膜浓缩：通过顺流双效降膜真空浓缩器浓缩至干物质含量为30%。浓缩时一效温度85℃、真空度0.95Mpa；二效温度75℃、真空度0.80Mpa。

真空浓缩后，60℃循环热风干燥。用真空喷雾干燥的方式将浓缩液直接喷雾干燥成粉末，成品含水量为12%。

实施例5 酶解猪肉益生肽生物饲料添加剂的制备

1）猪肉前期处理

将猪肉洗去血，割去油后，斩拌成肉泥，按1:4比例加水，升温至95℃，恒温保持45分钟，期间不停搅拌，然后将其经过胶体磨磨碎，胶体磨调为200目，料液加热至50℃后泵至酶解罐中。

2）酶解

按肉糜液重量的1.5%加入蛋白酶，蛋白酶由木瓜蛋白酶（8.0×10⁵IU/g）和中性蛋白酶（2.3×10⁵IU/g）按1：2比例组合，pH8.0，恒温50℃，开启搅拌，水解4小时后酸溶蛋白含量达30%（w/w）以上时进行下一步。

3）升温灭酶

将酶解液升温至85℃，恒温60min，使其中的蛋白酶失活。

4）接种

待酶解液温度降至28℃时，先加入灭菌的发酵培养基（实施例1制备），酶解液和发酵培养基的体积比为1.5:1，然后按10%（体积比）接入枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、干酪乳杆菌（或瑞士乳杆菌或嗜酸乳杆菌）种子液（实施例2制备）。恒温30℃，接种后以2.0vvm的速度通入无菌空气，混合发酵72h。

枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、干酪乳杆菌（或瑞士乳杆菌或嗜酸乳杆菌）种子液比例为1:1:1。

各发酵菌种菌龄如下：

枯草芽孢杆菌24h、产朊假丝酵母48h、干酪乳杆菌（或瑞士乳杆菌或嗜酸乳杆菌）24h。

5）浓缩与干燥

真空浓缩后，75℃循环热风干燥。用真空喷雾干燥的方式将浓缩液直接喷雾干燥成粉末，成品含水量为10%。

实施例6 酶解鱼肉益生肽生物饲料添加剂的制备

1）鱼肉或内脏前期处理

将鱼肉或内脏洗去血，斩拌成肉泥，按1:3比例加水，升温至95℃，恒温保持30分钟，期间不停搅拌，然后将其经过胶体磨磨碎，胶体磨调为200目，料液加热至50℃后泵至酶解罐中。搅拌均匀后泵至酶解罐中。

2）酶解

按2000U/g酶量加入碱性蛋白酶，pH9.0，恒温50℃，开启搅拌，水解7.5小时后酸溶蛋白含量达40%（w/w）以上时进行下一步。

3）升温灭酶

将酶解液升温至95℃，恒温15min，使其中的蛋白酶失活。

4）接种

待酶解液温度降至28℃时，先加入灭菌的发酵培养基（实施例1制备），酶解液和发酵培养基的体积比为1.5:1，然后按10%（体积比）接入枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、干酪乳杆菌（或保加利亚乳杆菌）种子液（实施例2制备）。恒温30℃，接种后以2.0vvm的速度通入无菌空气，混合发酵72h。

枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、干酪乳杆菌（或保加利亚乳杆菌）种子液比例为1:1:1。

各发酵菌种菌龄如下：

枯草芽孢杆菌24h、产朊假丝酵母48h、干酪乳杆菌（或保加利亚乳杆菌）菌龄24h。

5）浓缩与干燥

实施例7 酶解豆粕益生肽生物饲料添加剂的制备

1）豆粕前期处理

将豆粕粉碎，按1:4比例加水，升温至95℃，恒温保持30分钟，期间不停搅拌，然后将其经过胶体磨磨碎，胶体磨调为200目，料液加热至50℃后泵至酶解罐中。搅拌均匀后泵至酶解罐中。

2）酶解

按4000U/g酶量加入碱性蛋白酶，pH8.0，恒温50℃，开启搅拌，水解6小时后酸溶蛋白含量达30%（w/w）以上时进行下一步。。

3）升温灭酶

将酶解液升温至85℃，恒温15min，使其中的蛋白酶失活。

4）接种

待酶解液温度降至28℃时，先加入灭菌的发酵培养基（实施例1制备），酶解液和发酵培养基的体积比为1.5:1，然后按10%（体积比）接入枯草芽孢杆菌（或地衣芽孢杆菌）、产朊假丝酵母（或酿酒酵母）、植物乳杆菌（或瑞士乳杆菌）种子液（实施例2制备）。恒温30℃，接种后以2.0vvm的速度通入无菌空气，混合发酵72h。

枯草芽孢杆菌（或地衣芽孢杆菌）、产朊假丝酵母（或酿酒酵母）、植物乳杆菌（或瑞士乳杆菌）种子液种子液比例为1:1:1。

各发酵菌种菌龄如下：

枯草芽孢杆菌（或地衣芽孢杆菌）24h、产朊假丝酵母（或酿酒酵母）48h、植物乳杆菌（或瑞士乳杆菌）菌龄24h。

5）浓缩与干燥

实施例8 本发明的益生肽饲料添加剂在改善饲料利用率、提高动物生产性能中的应用

选择300只健康、活泼、体重相近的12日龄雌性肉鸡,随机分成2组，对照组145只，试验组155只。每组3个重复。饲粮处理：A组为对照组，饲喂基础饲粮；B组为基础饲粮+2%（w/w）益生肽饲料添加剂（按照实施例3所述的方法通过接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母以及嗜热链球菌制备得到），持续喂养35天。肉鸡生产性能如表1。

表1益生肽饲料添加剂对肉鸡始重、末重、日增重的影响

从上表可以看出，饲料中添加益生肽饲料添加剂对改善饲料利用率、提高动物生产性能有很大的促进作用，经过35d的饲养试验，试验组鸡的平均日增重为35.04g/d，比对照组提高了2.56g。试验组鸡采食量比对照组低，同时料肉比降低。

选择断奶的杜长大三元仔猪共46头进行试验，随机分成两组,其中试验组23头,对照组23头。两组由专人采用相同的饲养方法进行统一饲养。试验组采用该场仔猪基础料+5%（w/w）益生肽饲料添加剂（按照实施例3所述的方法通过接种枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母以及嗜热链球菌制备得到），对照组使用仔猪基础料，记录每组小猪的给料量及饲料浪费情况。试验开始前和结束后每头空腹称重。统计耗料情况，计算日增重及料肉比。试验共计15d。

1）益生肽饲料添加剂对腹泻的影响

试验开始时，两组仔猪都有部分猪会拉稀，但试验组仔猪在5d后不再拉稀，对照组在整个试验过程中都有少部分会拉稀，因此添加5%益生肽饲料添加剂中的活菌在改善肠道健康方面效果明显。

2）益生肽饲料添加剂对平均日增重影响

试验组平均日增重为326g，对照组平均日增重为267g，试验组比对照组每日多增重59g，提高22%，差异极显著（P＜0.01），见表2。

表2益生肽饲料添加剂对仔猪始重、末重、日增重的影响（kg）

试验组料肉比为1.70，对照组为2.08，试验组比对照组减少0.38，显著提高了饲料利用率（P＜0.01）。

以上仅是本发明较佳实施例，并非对本发明做任何形式上限制，任何未脱离本发明技术方案内容，根据本发明的技术实质对以上实施例进行的任何修改、等同变化与修饰，仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种益生肽生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述方法包括将高温蒸煮后的动物或植物蛋白质经过蛋白酶酶解至酸溶蛋白的含量为质量百分数30～90％后，升温灭酶，降温，然后接入芽孢杆菌、酵母菌以及乳酸菌种子液进行混合发酵，最后将发酵液浓缩、干燥、制粒得到；

其中，所述的高温蒸煮是指将动物或植物蛋白质加水于95℃-120℃下搅拌加热30-60分钟，经高温蒸煮后的动物或植物蛋白质，通过胶体磨磨碎至颗粒大小100～200目，然后通过板式换热器加热后泵至酶解罐中进行蛋白酶酶解；

其中，接种过程包括按酶解液和发酵培养基的体积比1.5:1的比例加入灭菌的发酵培养基，然后将芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌菌种制成相应的种子液，待酶解液温度降至25～40℃时,按照体积百分比计算,加入10％-15％的芽孢杆菌、酵母菌以及乳酸菌种子液的混合液，三种种子液的加入体积比为1:1:1，恒温25～40℃，接种后以1.0～3.5vvm的速度通入无菌空气，混合发酵48～96h；

其中，所述的发酵培养基是按照以下方法制备得到的：

称取大豆蛋白胨5.0g；葡萄糖5.0g；酵母浸粉5.0g；磷酸二氢钾4.0g；质量百分数为3.08％的硫酸锰溶液1mL，去离子水1000ml，调pH为6.50，0.1MPa灭菌20分钟，备用。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的动物蛋白质包括：各种动物的新鲜血液、肉或内脏；

所述的植物蛋白质为大豆蛋白、小麦蛋白、玉米蛋白、菜籽蛋白或棉籽蛋白。

3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于所述的芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌中的一种或几种；

所述的酵母菌包括酿酒酵母、产朊假丝酵母中的一种或几种；

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的蛋白酶包括木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白内切酶、外切酶以及风味酶其中一种或几种；所述的升温灭酶是在酶解结束后，将酶解液升温至85～90℃，恒温30～60min。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的浓缩是采用薄膜浓缩，即通过顺流双效降膜浓缩器浓缩至干物质含量为15～60％，浓缩时一效温度80～85℃、真空度0.90～0.95Mpa；二效温度70～80℃，真空度0.80～0.85Mpa。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的干燥、制粒是将浓缩后发酵液经70～80℃循环热风干燥，或者采用真空喷雾干燥的方式将浓缩液直接喷雾干燥成粉末，加入载体，采取低温制粒的方式制粒，颗粒成品水分为8～12％。

7.按照权利要求1-6任一项所述的方法制备得到的益生肽生物饲料添加剂。

8.权利要求7所述的益生肽生物饲料添加剂在制备动物饲料中的应用。