CN103160490A

CN103160490A - 约氏乳杆菌微胶囊的制备方法与其微胶囊及添加剂的应用

Info

Publication number: CN103160490A
Application number: CN2011104154791A
Authority: CN
Inventors: 杜建涛; 付维来; 王安如
Original assignee: Beijing Dabeinong Technology Group Co Ltd
Current assignee: Yangjiang Chang Nong agriculture and animal husbandry technology Co., Ltd.; Beijing Dabeinong Technology Group Co Ltd
Priority date: 2011-12-13
Filing date: 2011-12-13
Publication date: 2013-06-19
Anticipated expiration: 2031-12-13
Also published as: CN103160490B

Abstract

本发明涉及一种约氏乳杆菌微胶囊的制备方法及其微胶囊与其在制备饲料添加剂中的应用，属于乳酸菌高密度发酵和微胶囊包被技术领域。本发明的制备方法实现了约氏乳杆菌在常温下进行干燥，且制备工艺便于控制、菌存活率高、制得的产品贮藏期长，能够大幅度延长产品的贮藏时间。本发明采用超声波喷嘴进行物料喷雾制囊，得到大小均匀的微胶囊，且利用真空和保护性气体在常温下对微胶囊进行干燥，避免了低温冻干的低温和高温喷雾干燥的高温对微胶囊中约氏乳杆菌活性的影响；避免了高温蒸汽干燥过程中温度对物料的损坏，提高了产品的质量，降低了能耗和环境污染；也解决了真空冷冻干燥过程中的不能进行连续干燥的问题。

Description

约氏乳杆菌微胶囊的制备方法与其微胶囊及添加剂的应用

技术领域

本发明涉及一种约氏乳杆菌微胶囊的制备方法及其微胶囊与其在制备饲料添加剂中的应用，属于乳酸菌高密度发酵和微胶囊包被技术领域。

背景技术

乳酸菌是动物体内的常驻有益菌，它能够拮抗病原微生物，调节动物消化道微生物区系平衡；刺激免疫***，增强免疫力；此外，乳酸菌还可以防止畜禽腹泻、提高畜禽增重，在肠道内发挥着重要的生理功能。随着国内外人们对乳酸菌的认识和研究不断深入，越来越多的乳酸菌制品在营养、保健及医疗方面得到推广应用。

但是，以乳酸菌为主的微生态制剂主要是活菌剂，而且大多数乳酸菌并不产生芽孢，大多属专性厌氧菌，极易受到温度、氧气、水分及酸碱等外界环境因素的影响，菌活性保持比较困难。乳酸菌在进入动物的消化道后，会受到胃酸、胆汁等恶劣的环境，以至于大部分乳酸菌活菌在未到达靶位点就已经死亡。为了使得乳酸菌能够起到相应的效果，一方面人们对菌体进行筛选和定向驯化，使其具备良好的耐受性和抗逆性，另一方面采用一些材料和方法对菌体进行包被和处理，使其能够顺利通过胃、小肠，顺利到达大肠。而微胶囊包被乳酸菌是最有效和最有潜力的一种方式。现有微胶囊制备方法主要采用的是界面聚合法、相分离法、挤压法、双重乳状液法和喷雾干燥法。(1)界面聚合法现有工艺存在操作比较复杂、工艺难以控制、难以实现大规模生产和无法获得干燥乳酸菌微胶囊粉末产品的问题。(2)挤压法是最传统最普通的方法，以海藻酸钠作为材料的固定化应用最多，但是缺点也是难以获得干燥乳酸菌微胶囊粉末产品。(3)现有喷雾干燥法一般采用高温喷雾干燥，用单一工序将菌体和保护剂、载体的悬浮液进行喷雾干燥，得到干燥的粉末状微胶囊产品。但是这个方法存在着乳酸菌分散不均匀及制备过程中乳酸菌因高温死亡率高的问题。(4)界面聚合法和双重乳状液法都要采用具有一定毒性的交联剂会对乳酸菌的活性造成伤害，很难得到广泛的认可。

约氏乳杆菌是我国***等相关部门批准的可食用乳酸菌菌种之一，市场上已经有约氏乳杆菌的相关产品，但是主要是用于医药方面，而饲用方面却比较少，目前为止此菌还不是农业部批准的饲料添加剂品种。

发明内容

本发明的目的是提供一种约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，该工艺实现了约氏乳杆菌在常温下进行干燥，且制备工艺便于控制、菌存活率高、制得的产品贮藏期长。

本发明的另一目的是提供了该约氏乳杆菌微胶囊的制备方法制得的微胶囊产品及其应用，该微胶囊产品中的约氏乳杆菌CGMCC No.4926具有良好的益生功效，与其它约氏乳杆菌相比，有着较好的抗胃酸、抗胆盐的特性。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一种约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，该方法主要步骤如下：

(1)菌种活化：将冷冻保存的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)接种于MRS液体培养基中，在温度30℃-40℃下传代培养18-24h，如此传代培养1-2次，得到所述的活化约氏乳杆菌菌种；

(2)菌种发酵液的制备：配制发酵培养基，称取发酵培养基，称取步骤(1)得到的菌种，菌种的重量为发酵培养基重量的1-3％，将称好的菌种接种于称取的发酵培养基中，在温度30℃-40℃培养8-10h，得到约氏乳杆菌菌种发酵液；

(3)微胶囊的制备：配制微胶囊壁材溶液，将步骤(2)制备的约氏乳杆菌菌种发酵液与壁材溶液按1∶1-1∶2的比例混合，得混合悬浮液；将混合悬浮液通过超声波喷雾干燥设备喷雾干燥，即得约氏乳杆菌微胶囊。

其中，所述的发酵培养基的配制方法如下：分别称取下述原料：90-120重量份红糖、8-12重量份酵母浸粉、30-50重量份大豆蛋白胨、3.0-3.5重量份磷酸氢二钾、13-15重量份乙酸钠、0.8-1.0重量份MgSO₄·7H₂O、0.04-0.08重量份MnSO₄·5H₂O；将上述原料加入1000重量份水中，搅拌均匀，使用中和剂将其pH值调节到6.4-6.6，在温度115-121℃下灭菌15分钟，得到所述发酵培养基；所述的中和剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾中的一种、两种或几种的混合溶液，溶液的重量体积百分比浓度为30％-40％。

其中，所述的配制微胶囊壁材溶液方法如下：称取壁材，壁材在溶液中的重量体积百分比浓度为30-40％，将蒸馏水加热至93-95℃后，将壁材在水中充分搅拌或用乳化机乳化60-75min，混合均匀，pH自然，待冷却至室温后，得到所述微胶囊壁材溶液；所述的壁材为海藻糖、乳糖、麦芽糊精、玉米淀粉、抗性淀粉、葡萄糖干粉、脱脂牛奶粉中的任两种或者两种以上混合而成。

本发明所述的超声波喷雾干燥设备为申请人发明得到，此设备解决了现有喷雾干燥装置喷雾不均匀和干燥作业损害物料的问题；及进一步解决干燥不连续工作的问题。此设备、微胶囊包被材料及本发明的工艺实现了约氏乳杆菌在常温下进行干燥，此喷雾干燥设备组成如下：包括干燥室、超声波喷嘴和真空泵；所述干燥室的下方设有流化床，所述流化床通过物料收集管道与干燥室的底部相连；所述超声波喷嘴安装在干燥室的顶部，并与外部物料管道连接；所述真空泵通过管道与干燥室连接，所述真空泵包括第一真空泵和第二真空泵，第一真空泵通过第一真空管道连接在干燥室的上部，第二真空泵通过第二真空管道连接在干燥室的下部。

进一步，所述的超声波喷雾干燥设备组成还包括空气冷却室，所述空气冷却室位于真空泵与干燥室之间，用于冷凝真空泵与干燥室连接的管道中的水气；所述干燥室的下部设有挡料隔板，所述挡料隔板位于与干燥室的下部连接的管道下方；所述干燥室还包括物料收集室，所述物料收集室位于挡料隔板的下方，所述物料回收腔的底部设有挡板；所述干燥室的外壁中部安装有加热器，中部的外壁上设有观察窗所述超声波喷嘴连接有超声波控制器，所述超声波控制器调节超声波的频率以控制超声波喷嘴的喷量。

本发明的超生波干燥设备也可参见申请人的申请号为201120503311.1的中国专利。

本发明的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法中，将混合悬浮液通过超声波喷雾干燥设备喷雾干燥过程如下：

(1)开启超声波喷雾干燥设备，待干燥室内真空压力维持在2.3-3.7kpa后，启动物料泵，利用蒸馏水进行试喷雾，并调整流速为10-25ml/min，干燥室内的温度在20-30℃左右；干燥流化床内充保护气体，温度维持在10-15℃；

(2)待设备参数稳定后，将悬浮液通过物料泵进行送料，物料通过超声波喷嘴雾化后进入真空干燥室，即开始一级真空干燥；进入震动流化床，即进行二级震动流化床干燥，经20-60min，在出料口收集，即得到约氏乳杆菌微胶囊。

其中，所述的超声波喷嘴的频率为20kHz-30kHz；所述的保护气体是N₂、CO₂中的一种或二者混合。

本发明的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，菌种活化及菌种发酵液的制备中的培养温度优选35-37℃。

本发明还提供了该约氏乳杆菌微胶囊的制备方法所制得的约氏乳杆菌微胶囊，所述的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)可以为其它约氏乳杆菌，但本发明优选保藏编号为CGMCC No.4926的约氏乳杆菌。

本发明所述的约氏乳杆菌微胶囊可以制备成饲料添加剂添加到饲料中。

本发明所述的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)CGMCC No.4926是申请人从北京种猪大肠内筛选出来，经过胃酸、胆汁盐的驯化和选育得到的，此株约氏乳杆菌抗逆性比较强，具有良好的耐酸性、人工胃肠液耐受性及胆盐耐受性。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期为2011年6月8日，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，简称CGMCC，保藏号是CGMCC No.4926。

有益效果：

1、本发明工艺实现了约氏乳杆菌在常温下进行干燥，且制备工艺便于控制、菌存活率高、制得的产品贮藏期长，能够大幅度延长产品的贮藏时间，保存90天后，存活率仍在40％以上。2、本发明中所用的超声波喷雾干燥装置，采用超声波喷嘴进行物料喷雾，实现了物料喷雾均匀，超声波喷嘴可以将悬浮液均质喷散，得到20-40μm大小均匀的小液滴；使得微胶囊包被或者药物的胶囊包被完整；且利用真空和保护性气体在常温下进行干燥，避免了低温冻干的低温和高温喷雾干燥的高温对约氏乳杆菌活性的影响；避免了高温蒸汽干燥过程中温度对物料的损坏，提高了产品的质量，降低了能耗和环境污染。进一步地，采用流化床进行物料收集，解决了真空冷冻干燥过程中的不能连续进行干燥的问题。3、本发明的约氏乳杆菌CGMCC No.4926具有良好的益生功效、有着较好的抗胃酸、抗胆盐的特性；经发酵后，发酵液中活菌数能够达到5.0-8.0×10⁹/mL，再利用海藻糖、麦芽糊精、海藻酸钠和/或脱脂牛奶粉作为壁材，采用本发明的超声波设备进行雾化等，实现了约氏乳杆菌在常温下进行干燥，产品的菌存活率能够达到90％以上；且海藻糖和麦芽糊精都是天然多糖类，直接饲用对动物没有任何毒副作用。

附图说明

图1是本发明的超生波干燥设备结构示意图。

其中，1、干燥室；2、超声波喷嘴；3、物料管道；4、物料泵；5、流化床；6、物料收集管道；7a、第一真空泵；7b、第二真空泵；8a、第一真空管道；8b、第二真空管道；9、空气冷却室；10、挡料隔板；11、物料收集室；12、观察窗。

具体实施方式

以下实施例仅用于说明本发明，但不是以任何方式来限制本发明的保护范围。

本发明所用的仪器型号如下：

循环水机：北京长流科学仪器公司DX-208型；

空气压缩机：北京豪福机电技术开发应用有限公司HF-6100C型；

乳化机：上海索维机电设备有限公司SAII-2型；

显微镜：OLYMPUS CX31型；

海藻糖、麦芽糊精购自北京精求化工有限责任公司，其他试剂均购自北京奥博星生物技术责任有限公司。

超生波喷雾干燥设备：本发明的超声波喷雾干燥设备结构如图1所示。该超声波喷雾干燥设备包括干燥室1、超声波喷嘴2和真空泵。超声波喷嘴2安装在干燥室1的顶部，并与外部物料管道3连接，物料管道3设有物料泵4连接。真空泵通过管道与干燥室1连接。采用超声波喷嘴3进行物料喷雾实现了物料喷雾均匀，使得微胶囊包被或者药物的胶囊包被完整；且在物料干燥前采用真空泵进行抽真空的干燥室1，避免了高温蒸汽干燥过程中温度对物料的损坏，提高了产品的质量，降低了能耗和环境污染。

其中，超声波喷嘴2连接有超声波控制器，超声波控制器用于调节超声波的频率以控制超声波喷嘴2的喷量，以根据实际生产需要来调节物料的大小。干燥室1的外壁中部安装有加热器，该加热器使干燥室1的温度维持在适于物料干燥的温度范围内，一般为20-30℃的室温，以保证物料的特性。干燥室1中部的外壁上设有观察窗12，以便于观察干燥室1内的工作情况。

本设备为了实现真空冷冻干燥过程中的连续进行干燥和对物料进行二次干燥，在干燥室1的下方设有流化床5进行物料收集，流化床5通过物料收集管道6与干燥室1的底部相连。其中，干燥室1的下部还设有挡料隔板10，该挡料隔板10位于与干燥室1的下部连接的管道下方，该挡料隔板10设置为方便打开和闭合的结构。干燥室1还包括物料收集室11，物料收集室11位于挡料隔板10的下方，物料收集室11的底部设有方便打开和闭合的挡板。当该超声波喷雾干燥设备进行喷雾干燥的工作时，物料收集室11的挡板闭合，挡料隔板10呈打开状态，物料落入物料收集室11中，喷雾干燥工作完成后，关闭挡料隔板10打开物料收集室11的挡板以排出物料，在此关闭挡料隔板10以使得干燥室1一直保持真空状态以进入下一批物料喷雾干燥工作。当连接流化床5时，流化床5通过物料收集管道6与与干燥室1的底部紧密相连，挡料隔板10和物料收集室11的挡板一直处于打开状态以供物料连续进行干燥和排出。

为了使得物料处于一种缓慢下落的悬浮状态，以延长干燥时间得以充分干燥和冷却，以进一步减少高温蒸汽干燥过程中温度对物料的损坏，本设备的真空泵包括第一真空泵7a和第二真空泵7b，第一真空泵7a通过第一真空管道8a连接在干燥室1的上部，第二真空泵7b通过第二真空管道8b连接在干燥室1的下部。其中，可以根据实际生产需要调节第一真空泵7a和第二真空泵7b的功率，以调节物料在干燥室1内的下落速度。

本发明的超声波喷雾干燥设备还包括空气冷却室9，空气冷却室9位于真空泵与干燥室1之间，用于冷凝真空泵与干燥室1连接的管道中从干燥室1中抽出的水气，以加快干燥室1内物料的冷却速度。其中，第一真空泵7a通过第一真空管道8a在空气冷却室9中呈盘状分布，以充分冷却。

本发明的超生波干燥设备进行喷雾干燥作业时，将待喷雾和干燥的物料进行乳化后，将第一真空泵7a和第二真空泵7b打开，给干燥室1的抽真空，同时打开干燥室1外壁的加热器，使温度维持在20-30℃、真空压力2.27-3.35kpa时，将超声波喷嘴2的频率调制20-30khz范围内，利用水进行预喷，并调节第一真空泵7a和第二真空泵7b的功率使干燥室1内的气流流速稳定后。待设备运行良好，打入物料进行喷雾，物料经超声波喷嘴2喷出后，先进入干燥室1的上部分区域，水分迅速蒸发，由第一真空泵7a和第二真空泵7b的功率差异，使得物料处于一种缓慢下落的悬浮状态，延长干燥时间以充分干燥，物料通过超声波喷嘴2进行喷雾后进入干燥室，在干燥室内迅速脱水，形成微胶囊在干燥室1的下部区域进行集中；在这个过程中所蒸发的水分，由第一真空泵7a和第二真空泵7b抽出后回收。当一批次结束后，打开物料收集室11的挡板将物料收集或物料直接进入流化床5进行二次干燥，最后得到干燥后的微胶囊产品。

其中，将干燥室1内抽成真空后，物料只需要控制流速便可进入超声波喷嘴2；超声波喷嘴2对物料进行喷雾，不但得到的物料微粒的大小均匀，而且还可以通过调节超声波频率调节微粒的大小；采用真空干燥，可以将物料中的水分进行回收，降低了水源的浪费；同时整个干燥过程在常温(20-30℃)下进行，保护了物料的特性，同时也降低了能耗。

实施例1

a、菌种活化：

将冷冻保存的约氏乳杆菌接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养18h，如此传代1次得到活化的约氏乳杆菌菌种。

b、培养基的配制：

首先，分别称取下述原料：90重量份红糖、8重量份酵母浸粉、30重量份大豆蛋白胨、3重量份磷酸氢二钾、13重量份乙酸钠、0.8重量份MgSO₄·7H₂O、0.04重量份MnSO₄·5H₂O；将上述原料加入1000重量份水中，搅拌均匀，使用30％的氢氧化钠将其pH值调节到6.4，再在温度115℃下灭菌15分钟，得到所述发酵培养基；

c、菌种发酵液的制备：

以使用所述的培养基重量计，按照1％的比例将步骤a得到的活化约氏乳杆菌菌种接种于在步骤b得到的所述培养基中，在温度37℃培养12h得到约氏乳杆菌菌种发酵液，发酵液中活菌数为6.3×10⁹cfu/mL。

d、微胶囊壁材溶液的制备：

壁材的成分：选择海藻糖：麦芽糊精为1∶10；

按重量比配制30％壁材溶液，将蒸馏水加热至93℃后，将壁材在水中充分搅拌混合均匀、pH自然，待冷却至室温后，得到所述微胶囊壁材溶液。

e、微胶囊制备：

方法1(本发明方法)：将上述发酵液c与壁材溶液d按1∶1混合后，将此混合悬浮液通过超声波喷嘴进行均匀雾化，通过一级真空干燥和二级震动流化床干燥，具体超声波真空喷干的步骤如下：

(1)开动超声波喷雾干燥设备，待干燥室内真空压力维持在2.5kpa后，先用蒸馏水进行试喷，调整流速为15ml/min，干燥室内的温度在22℃左右。二级干燥流化床内充保护气体N₂，温度维持在12℃。

(2)将e中混合后的悬浮液经超声波喷嘴进行雾化后，进入真空干燥室。

(3)当混合液e通过雾化器进入真空干燥室内，经过3s左右便可进入二级干燥流化床，此时大部分水分被挥发。进入震动流化床后，经30min，便可在收集出料口对产品进行收集，得到约氏乳杆菌微胶囊产品。

(4)对收集到产品进行检测：将收到的微胶囊产品称取定量后，置入105℃，3h后，再称取重量，得到含水量。

所述约氏乳杆菌总活菌数是采用本技术领域的技术人员熟知的平板倾注的测定方法，例如用MRS培养基倾注平板计数。

方法2(对比：采用高温喷雾干燥法对该混合液进行喷雾和干燥)将上述发酵液c与壁材溶液d按1∶1混合后，采用高温喷雾干燥法对该混合液进行喷雾和干燥，其喷雾干燥的工艺为：进风160℃，出风70℃，流速0.2L/min，其具体操作步骤如下：

(1)开动喷雾干燥设备，将风机启动，调节进风和出风的速度，待进风温度稳定在160℃，出风温度70℃后，先用蒸馏水进行试喷，调整流速为200ml/min。

(2)待温度稳定，运行平稳后，将混合液通过蠕动泵，打入干燥塔内，流速180mL/min，然后在塔体收料口对干燥后的物料进行收集。

(3)对收集到产品进行检测：将收到的微胶囊产品称取定量后，置入105℃，3h后，再称取重量，得到含水量。

结果：本发明方法：(1)对收集到产品进行检测，微胶囊的含水量为8％，菌存活率90％；(2)在干燥、常温环境下，贮藏90天后，约氏乳杆菌存活率为42％。而对照的高温喷雾干燥法无论菌种的存活率和活性都比本发明得到的微胶囊的存活率和活性要低，其结果：(1)对收集到产品进行检测，微胶囊的含水量为10％，菌存活率23％；(2)在干燥、常温环境下，贮藏90天后，约氏乳杆菌存活率为10％，降低了一个数量级。

实施例2

a、菌种活化：

将冷冻保存的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)CGMCC No.4926接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养20h，如此传代2次得到所述的活化约氏乳杆菌菌种。

b、培养基的配制：

首先，分别称取下述原料：115重量份红糖、10重量份酵母浸粉、40重量份大豆蛋白胨、3.2重量份磷酸氢二钾、14重量份乙酸钠、0.9重量份MgSO₄·7H₂O、0.06重量份MnSO₄·5H₂O；将上述原料与1000重量份水中，搅拌均匀，使用35％NaOH将其pH值调节到6.6，再在温度121℃下灭菌15分钟，得到所述发酵培养基；

c、菌种发酵液的制备：

以使用所述的培养基重量计，按照重量比2％将步骤a)得到的活化约氏乳杆菌菌种接种于在步骤b)得到的所述培养基中，在温度37℃培养10h得到约氏乳杆菌菌种发酵液，发酵液中活菌数为8.0×10⁹cfu/mL。

d、微胶囊壁材溶液的制备：

选择海藻糖：玉米淀粉为1∶10；

按壁材占溶液重量的36％配制：将蒸馏水加热至93℃后，将壁材在水中充分搅拌混合均匀、pH自然，待冷却至室温后，得到所述微胶囊壁材溶液。

e、微胶囊制备：

将上述发酵液c与壁材溶液d按1∶1混合后，将此混合悬浮液通过超声波喷嘴进行均匀雾化，通过一级真空干燥和二级震动流化床干燥，具体超声波真空喷干的步骤如下：

(1)开动超声波喷雾干燥设备，待干燥室内真空压力维持在2.3kpa后，先用蒸馏水进行试喷，调整流速为10ml/min，干燥室内的温度在20℃左右。二级干燥流化床内充N₂，温度维持在15℃。

(3)当混合液e通过雾化器进入真空干燥室内，经过3.5s左右便可进入二级干燥流化床，此时大部分水分被挥发。进入震动流化床后，经20min，便可在收集出料口对产品进行收集，得到约氏乳杆菌微胶囊产品。

结果：(1)对收集到产品进行检测，微胶囊的含水量为6％，菌存活率92％；(2)在干燥、常温环境下，贮藏90天后，约氏乳杆菌存活率为43％。

实施例3

a、菌种活化：

b、培养基的配制：

首先，分别称取下述原料：120重量份红糖、12重量份酵母浸粉、50重量份大豆蛋白胨、3.5重量份磷酸氢二钾、15重量份乙酸钠、1.0重量份MgSO₄·7H₂O、0.08重量份MnSO₄·5H₂O；将上述原料加入1000重量份水中，搅拌均匀，使用40％NaOH将其pH值调节到6.6，再在温度115℃下灭菌20分钟，得到所述发酵培养基；

c、菌种发酵液的制备：

以使用所述的培养基重量计，按照重量比3％的量将步骤a得到的活化约氏乳杆菌菌种接种于在步骤b得到的所述培养基中，在温度37℃培养8h得到约氏乳杆菌菌种发酵液，发酵液中含有的活菌数在7.2×10⁹/mL。

d、微胶囊壁材溶液的制备：

壁材选择乳糖：麦芽糊精为1∶9。

按壁材占溶液体积的40％配制，将蒸馏水加热至93℃后，将壁材在水中充分搅拌混合均匀、pH自然，待冷却至室温后，得到所述微胶囊壁材溶液。

e、微胶囊制作：

将上述发酵液c与壁材溶液d按1∶1.2混合后，将此混合悬浮液通过超声波喷嘴进行均匀雾化，通过一级真空干燥和二级震动流化床干燥，具体超声波真空喷干的步骤如下：

(1)开动超声波喷雾干燥设备，待干燥室内真空压力维持在3.7kpa后，先用蒸馏水进行试喷，调整流速为25ml/min，干燥室内的温度在27℃左右。二级干燥流化床内充保护气体，温度维持在15℃。

(3)、当混合液e通过雾化器进入真空干燥室内，经过4s便可进入二级干燥流化床，此时大部分水分被挥发。进入震动流化床后，经25min，便可在收集出料口对产品进行收集，得到约氏乳杆菌微胶囊产品。

(4)对收集到产品进行检测：

将收到的微胶囊产品称取定量后，置入105℃，3h后，再称取重量，得到含水量。

结果：(1)对收集到产品进行检测，微胶囊的含水量为7％，菌存活率90％；(2)在干燥、常温环境下，贮藏90天后，约氏乳杆菌存活率为45％。

Claims

1.一种约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于该方法主要步骤如下：

2.权利要求1所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于：所述的发酵培养基的配制方法如下：分别称取下述原料：90-120重量份红糖、8-12重量份酵母浸粉、30-50重量份大豆蛋白胨、3.0-3.5重量份磷酸氢二钾、13-15重量份乙酸钠、0.8-1.0重量份MgSO₄·7H₂O、0.04-0.08重量份MnSO₄·5H₂O；将上述原料加入1000重量份水中，搅拌均匀，使用中和剂将其pH值调节到6.4-6.6，在温度115-121℃下灭菌15分钟，得到所述发酵培养基；所述的中和剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾中的一种、两种或几种的混合溶液，溶液的重量体积百分比浓度为30％-40％。

3.权利要求1所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于：配制微胶囊壁材溶液方法如下：称取壁材，壁材在溶液中的重量体积百分比浓度为30-40％，将蒸馏水加热至93-95℃后，将壁材在水中充分搅拌或用乳化机乳化60-75min，混合均匀，pH自然，待冷却至室温后，得到所述微胶囊壁材溶液；所述的壁材为海藻糖、乳糖、麦芽糊精、玉米淀粉、抗性淀粉、葡萄糖、脱脂牛奶粉中的任两种或者两种以上混合而成。

4.权利要求1所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于：所述的超声波喷雾干燥设备组成如下：包括干燥室、超声波喷嘴和真空泵；所述干燥室的下方设有流化床，所述流化床通过物料收集管道与干燥室的底部相连；所述超声波喷嘴安装在干燥室的顶部，并与外部物料管道连接；所述真空泵通过管道与干燥室连接，所述真空泵包括第一真空泵和第二真空泵，第一真空泵通过第一真空管道连接在干燥室的上部，第二真空泵通过第二真空管道连接在干燥室的下部。

5.如权利要求4所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于：所述的超声波喷雾干燥设备组成还包括空气冷却室，所述空气冷却室位于真空泵与干燥室之间，用于冷却真空泵与干燥室连接的管道；所述干燥室的下部设有挡料隔板，所述挡料隔板位于与干燥室的下部连接的管道下方；所述干燥室还包括物料收集室，所述物料收集室位于挡料隔板的下方，所述物料回收腔的底部设有挡板；所述干燥室的外壁中部安装有加热器，中部的外壁上设有观察窗所述超声波喷嘴连接有超声波控制器，所述超声波控制器调节超声波的频率以控制超声波喷嘴的喷量。

6.如权利要求1所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于：将混合悬浮液通过超声波喷雾干燥设备喷雾干燥过程如下：

(1)开启超声波喷雾干燥设备，待干燥室内真空压力维持在2.3-3.7kpa后，先采用蒸馏水进行试喷，并调整流速为10-25ml/min，干燥室内的温度在20-30℃左右；干燥流化床内充保护气体，温度维持在10-15℃，待运行稳定后，进物料开始进行喷雾干燥；

(2)将混合悬浮液经超声波喷嘴在真空干燥室进行雾化后，即开始一级真空干燥；而后进入震动流化床，即进行二级震动流化床干燥，经20-60min，在出料口收集，即得到约氏乳杆菌微胶囊。

7.如权利要求6所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于：所述的超声波喷嘴的频率为20kHz-30kHz；所述的保护气体是N₂、CO₂中的一种或二者混合。

8.如权利要求1所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于：菌种活化及菌种发酵液的制备中的培养温度优选35-37℃。

9.如权利要求1-8任一项所述的约氏乳杆菌微胶囊的制备方法所制得的约氏乳杆菌微胶囊，其特征在于，所述的约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)的保藏编号为：CGMCC No.4926。

10.如权利要求9所述的约氏乳杆菌微胶囊在制备饲料添加剂中的应用。