CN103923085A - 具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一类具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其具有如通式Ⅰ所示的结构。本发明的化合物具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物具有用于制备抗肿瘤药物的用途。

Description

具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物及其用途
技术领域
本发明涉及一类具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物及其用途，属于医药合成技术领域。
背景技术
恶性肿瘤是危害人类健康的最主要疾病之一，全球每年恶性肿瘤新发病例约1090万，而每年因恶性肿瘤而死亡的患者约670万。抗肿瘤药物研发近些年经历了巨大变化，以前临床治疗上常用的抗肿瘤药物主要是细胞毒类药物，这类抗癌药具有难以避免的选择性差、毒副作用强、易产生耐药等缺点。近年来随着生命科学研究的飞速进展，恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期的调控、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正逐步被阐明。以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶作为药物筛选靶点，发现选择性作用于特定靶点，同时具备高效、低毒性质的新型先导化合物已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向；曲妥珠单抗（trastuzumab）,伊马替尼（imatinib）,吉非替尼（gefitinib）以及埃罗替尼（erlotinib）等靶向药物的成功上市就是典型的例子。
转移与再生是恶性肿瘤的特点，也是治疗恶性肿瘤的难题。即使是新一代的靶向药物也对肿瘤的转移与再生疗效甚微。基于此，近年来Hedgehog(Hh)信号通路-刺猬通路的研究受到了科学界越来越多的重视，这不仅是因为Hh信号通路异常活化在许多肿瘤包括基底细胞癌、脑肿瘤、乳腺癌、***癌和一些消化***恶性肿瘤的发生发展过程都起了举足轻重作用，更重要的是，Hh信号通路是胚胎发育通路，对调控肿瘤干细胞，因而控制肿瘤转移与再生有重要作用。
Hedgehog信号通路是一个高度保守的细胞间信号转导***，1980年在果蝇中发现，由于果蝇的该通路基因突变可导致幼虫体表现出许多形似刺猬的刺突,故命名为刺猬通路Hedgehog(Hh)。Hh信号通路由Hh配体、两个跨膜蛋白受体patchedmembranereceptor(PTCH)和smoothenedtransmembraneprotein(SMO)及下游转录因子Gli蛋白等组成。PTCH和SMO是位于靶细胞膜上的两种跨膜蛋白,其中PTCH是由抑癌基因PTCH编码的12次跨膜蛋白,是一种细胞表面受体,具有隔离和转导Hh的双重作用。SMO是一个7次跨膜蛋白,结构上与G蛋白偶联受体家族高度相似,具有转导Hh信号的作用。PTCH和SMO在Hh信号传递过程中起到受体的作用,其中PTCH为Hh的受体。当不存在Hh时,PTCH阻止SMO转位到细胞膜,从而抑制SMO的活性;进而抑制下游基因的转录表达。当Hh信号存在,Hh与PTCH结合，诱导SMO羧基端的多个丝/苏氨酸残基发生磷酸化,导致SMO在细胞表面聚集并激活,激活的SMO与驱动蛋白样分子Costal2(Cos2)及丝/苏氨酸激酶fused(Fus)、Suppressoroffused(Sufu)形成复合物并从微管上解离出来,以全长的形式发挥转录激活作用,最终引起锌指样转录因子Gli活化，而后者进入细胞核内引起靶基因的转录。因此，在Hh信号通路中,Hh是该信号通路的起点,而Gli作为转录因子是该信号通路的终点;Hh与SMO作为激动因子，PTCH作为抑制因子,调控着信号通路的活性。
跨膜蛋白受体SMO作为Hh信号通路的关键成员，是Hh信号通路中的信息转换器，它能够把细胞外的Hh信号转换成细胞内的Gli1信号，从而启动细胞核内基因的转录，对Hh信号通路具有激活作用。绝大多数与Hh细胞通路激活相关的肿瘤细胞的发生、发展过程中均存在着SMO的功能性突变。小分子SMO蛋白拮抗剂通过对抗SMO而特异性阻断Hh信号通路,而Hh信号通路在正常成体处于失活状态,所以拮抗剂对机体的其他部位不会产生副作用,这是肿瘤的靶向性治疗可行性的理论基础。因此，SMO蛋白已经成为当前抗肿瘤药物研发中最令人关注的靶点之一，靶向SMO蛋白的小分子拮抗剂的合成也成为国际上各大制药公司的研发热点。
现今至少有5个靶向SMO蛋白的小分子拮抗剂在进行临床测试，美国Genentech公司和Curis公司共同研发的小分子SMO拮抗剂GDC-0449，于2012年1月被美国食品药品监督管理局FDA批准用于晚期基底细胞癌病人的治疗。这证明小分子SMO拮抗剂作为抗肿瘤新药的研发有着良好的应用价值和市场前景。
临床测试中的小分子SMO拮抗剂代表包括以下几种：
尽管vismodegib和其他临床化合物有较好的药效，它们也都有各自的问题。比如vismodegib理化性质较差，溶解度低，有较强的副作用并且已产生耐药性等等。我们合成出了一类全新的刺猬通路拮抗剂，有望解决上述的问题。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一类具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物及其用途。
本发明的吡啶杂环化合物，其具有如通式Ⅰ所示的结构：
其中，
A是N或C-R9；
R1,R2,R3,R4,R5,R6,R7,R8,R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，巯基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环；
n为0、1、2、3、4、5或6。
优选地，
本发明的吡啶杂环化合物，为具有下列通式所示的结构：
R9选自如下基团中的任意一个：
其中甲基胺也可由下类胺及他们的类似物代替：
R1选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，巯基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环；
本发明的吡啶杂环化合物还可以具有如下结构式所示的结构：
本发明的吡啶杂环化合物还可以具有如下任一通式所示的结构：
其中，R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，酰胺基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环。
本发明的吡啶杂环化合物还可以具有如下任一通式所示的结构：
其中，R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，酰胺基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环。
本发明的吡啶杂环化合物还可以具有如下任一通式所示的结构：
其中，R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，酰胺基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环。
优选地，
本发明的吡啶杂环化合物该可以为具有以下任意一个结构所示的化合物：
上述各基团的说明如下：
烷基和烷代基是指1-10个碳原子组成的直链或支链，环状，双环状和螺环状的碳氢烷基。
烯基和烯代基是指1-10个碳原子组成的直链或支链，环状，双环状和螺环状的碳氢化合物含有至少一个碳碳双键。
炔基和炔代基是指1-10个碳原子组成的直链或支链，环状，双环状和螺环状的碳氢化合物含有至少一个碳碳三键。
卤素是指氟，氯，溴和碘。
杂原子是指氮，氧，硫，包括它们的各种氧化态，以及氮的季铵盐等。
芳香环是指苯环，萘环及它们的取代衍生物，也指饱和环与芳环的衍生环状取代基。
杂环是指非芳香性的单环，双环，三环和螺环含有3-12个原子，其中包括至少一个氮，氧和硫及它们的各种氧化态形式的环状取代基。
芳香杂环是指5-12个原子组成的环，其中包括至少一个氮，氧和硫及它们的各种氧化态形式的环状取代基，也指饱和环与芳香杂环的衍生环状取代基。
本发明的化合物具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物具有用于制备抗肿瘤药物的用途。
本发明的化合物还也包括同位素的应用，常见同位素包括但不只限于2H,3H,11C,13C,14C,15N,17O,18O,18F,32P,35S,36Cl等。
本发明的化合物可用于制成药学上可以接受的盐。
本发明的化合物还包括化合物各种晶型,各种覆盖化合物的各种异构体，包括但不局限于，立体异构体，顺反异构体，互变异构体等。
本发明的化合物具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物具有用于制备抗肿瘤药物的用途,可用于与一种或多种***或其他疾病的药物联合应用。其中一种或多种***的药物可以是顺铂，紫杉醇，曲妥珠单抗，格列卫等药物。
附图说明
图1是被测化合物B1-5的检测结果曲线图；
图2是被测化合物B1的检测结果曲线图；
图3是被测化合物B3的检测结果曲线图；
图4是被测化合物B4的检测结果曲线图；
图5是被测化合物B5的检测结果曲线图；
图6是被测化合物B6的检测结果曲线图；
图7是被测化合物B2的检测结果曲线图；
图8是被测化合物B1-6的检测结果曲线图。
具体实施方式
以下实施例中，所用溶剂和药品均为分析纯或化学纯；溶剂在使用前均经过重新蒸馏；无水溶剂均按照标准方法或文献方法进行处理。柱层析硅胶(100-200目)和薄层层析硅胶(GF254)为青岛海洋化工厂和烟台化工厂产品；如未特别说明，均采用石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯(v/v)作为洗脱剂；显色剂用碘或磷钼酸的乙醇溶液；所有萃取溶剂未经说明均用无水Na2SO4干燥。1HNMR用美国Varianunity INOVA400NB和Vnmrs高分辨核磁共振仪记录，TMS为内标。LC-MS用美国Agilent公司1100型高效液相色谱-离子阱质谱联用仪(LC-MSDTrap)记录，二极管阵列检测器(DAD)，检测波长214nM和254nM，离子阱质谱(ESI源)。HPLC柱为Agela DurashellC18(4.6×50mm，3.5μm)；流动相为0.1%TFA水溶液：乙腈(6分钟内从5：95到95：5)；流速为1.2mL/min。
实施例1
合成路线如下：
1）中间体B1-2的合成：
B1-1（10g,10.5mmol）溶于乙二醇二甲醚中，加入α-溴代丙酮酸乙酯（(23.6g,13.0mmol），室温搅拌2.5小时，产物冷却至0℃，搅拌30分钟得到棕色沉淀。将沉淀溶解于乙醇中，回流2小时至溶液变为澄清。减压蒸馏，残液溶于二氯甲烷，用碳酸氢钠饱和溶液洗涤。二氯甲烷层用硫酸钠干燥，过滤，滤饼用乙醇洗涤，滤液减压蒸馏。经柱层析（二氯甲烷:甲醇=99:1-97:3)得到黄色固体（0.546g,27%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.21(s,1H),8.26(s,1H),8.09(dd,J=4.7,1.6Hz,1H),7.96(d,J=4.7Hz,1H),4.49(q,J=7.1Hz,2H),1.45(t,J=7.1Hz,3H)。
2）中间体B1-3的合成：
将B1-2(1g,5.2mmol)溶解于50毫升乙醇中，加入BOC酸酐、Pd/C(200mg)，体系用氢气置换三次，室温下反应24小时。产物过滤，用乙醇洗涤，滤液旋干。经柱层析（二氯甲烷:甲醇=50:1）得到黄色油状物B1-3（0.973g,63%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.51（s，1H),4.68(s,2H),4.30(q,J=7.1Hz,2H),4.00(t,J=5.2Hz,2H),3.82(t,J=5.2Hz,2H),1.43(s,9H),1.21(t,J=7.1Hz,3H)。
3）中间体B1-4的合成：
将B1-3（50mg,0.17mmol）溶于少量二氯甲烷后，加入氯化氢的饱和乙酸乙酯溶液（3mL）,常温搅拌3小时，减压旋去溶剂，溶质加入到饱和碳酸氢钠水溶液洗（5mL）和二氯甲烷（20mL）中，有机相用饱和食盐水（10mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后得一白色固体（27mg,83%）。
4）中间体B1-5的合成：
B1-4（385mg,4.0mmol），氟化铯（300mg,4.0mmol）和A1-9（500mg,1.98mmol）分别在搅拌条件下溶于二甲亚砜（1mL）中，加热至120℃，反应12小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯（50mL）和水（15mL），有机相用饱和食盐水（15mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:50）得到产物（0.7g,85%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),8.26(s,1H),7.58(s,1H),7.47(s,1H),6.65(s,1H),4.75(s,2H),4.36(q,J=7.2Hz,2H),4.34(brs,4H),2.62(s,3H),2.20(s,3H),1.39(t,J=7.1Hz,3H)；
ESI-MS(m/z):411.8[M+1]+。
5）中间体B1-6的合成：
700毫克B1-5（1.7mmol）溶在四氢呋喃和2M的氢氧化锂水溶液里，室温搅拌过夜，用1M的盐酸调节PH值为7.0，用反相（水:甲醇=45:55）纯化，溶液旋干得到白色固体（450mg,70%）。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.40(s,1H),8.21(s,1H),7.49(s,1H),7.44(s,1H),6.68(s,1H),4.69(s,2H),4.11(br,4H),2.37(s,3H),2.17(s,3H)；ESI-MS(m/z):383.8[M+1]+。
6）产物B1的合成：
B1-6(50mg,0.131mmol)、四氢吡咯（10mg,0.14mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（18.5mg,0.14mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（55mg,0.14mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（10mL）中，用饱和食盐水（5mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=50:1）纯化得到无色油状液体（15mg,26%）。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.36(s,1H),8.24(s,1H),7.53(s,1H),7.44(s,1H),6.68(s,1H),4.72(s,2H),4.15(br,4H),3.95(t,J=6.4Hz,2H),3.63(t,J=6.4Hz,2H),2.39(s,3H),2.18(s,3H)1.93-1.87(m,4H)；ESI-MS(m/z):436.8[M+1]+。
实施例2
按照实施例1中的方法合成得到中间体B1-6，再制备产物B2。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.131mmol)、4-羟基哌啶（14mg,0.14mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（18.5mg,0.14mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（55mg,0.14mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（10mL）中，用饱和食盐水（5mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=50:1）纯化得到无色油状液体（20mg,33%）。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.34(s,1H),8.24(s,1H),7.52(s,1H),7.44(s,1H),6.63(s,1H),4.63(s,2H),4.14(br,4H),3.91(m,1H),3.60(br,1H),3.25(br,1H),2.38(s,3H),2.17(s,3H)1.93(m,2H),1.56(m,2H)；ESI-MS(m/z):466.8[M+1]+。
实施例3
按照实施例1中的方法合成得到中间体B1-6，再制备产物B3。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.131mmol)、吗啉（22mg,0.253mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（32mg,0.246mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（60mg,0.157mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=50:1到20:1）纯化得到白色固体（32mg,54%）。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.41(s,1H),8.30(s,1H),7.53(s,2H),6.76(s,1H),4.81(s,2H),4.21(s,4H),3.80(m,8H),2.46(s,3H),2.25(s,3H)；ESI-MS(m/z):452.8[M+1]+。
实施例4
按照实施例1中的方法合成得到中间体B1-6，再制备产物B4。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.131mmol)、甲胺盐酸盐（18mg,0.265mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（68mg,0.524mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（60mg,0.157mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=50:1到20:1）纯化得到白色固体（32mg,62%）。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.41(s,1H),8.28(s,1H),7.64(brs,1H),7.54(s,1H),6.74(s,1H),4.89-4.69(m,2H),4.20(s,4H),2.95(s,3H),2.45(s,3H),2.23(s,3H)；ESI-MS(m/z):396.8[M+1]+。
实施例5
按照实施例1中的方法合成得到中间体B1-6，再制备产物B5。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.131mmol)、2,6-二甲基哌嗪（20mg,0.175mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（23mg,0.177mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（65mg,0.171mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40ml）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=20:1到10:1）纯化得到白色固体（45mg，72%）。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.32(s,1H),8.30(s,1H),7.72(s,1H),7.60(s,1H),7.02(s,1H),4.77(s,2H),4.12(d,J=4.8Hz,2H),4.07(d,J=4.0Hz,2H),2.34(s,3H),2.09(s,3H),1.21(s,6H)；ESI-MS(m/z):479.8[M+1]+。
实施例6
按照实施例1中的方法合成得到中间体B1-6，再制备产物B6。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.131mmol)、N-甲基胺基乙醇（29mg,0.387mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（36mg,0.277mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（65mg,0.171mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40ml）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=20:1到10:1）纯化得到白色固体（40mg,69%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.33-8.30(m,1H),8.29(s,1H),7.59(s,2H),7.07(s,1H),4.77(s,2H),4.14-4.03(m,4H),3.80(brs,1H),3.63-3.49(m,4H),2.99-2.87(m,2H),2.33(s,3H),2.09(s,3H)；ESI-MS(m/z):440.8[M+1]+。
实施例7
按照实施例1中的方法合成得到中间体B1-6，再制备产物B7。合成路线如下：
B1-6(38mg,0.099mmol)、乙胺盐酸盐（17mg,0.21mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（61mg,0.47mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（46mg,0.12mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=40:1）纯化得到无色油状物B7(20mg，49%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),8.18(s,1H),7.44(s,1H),7.39(s,1H),7.00(s,1H),6.60(s,1H),4.64(s,2H),4.07(s,4H),3.37(t,J=6.4Hz,2H),2.32(s,3H),2.10(s,3H),1.14(t,J=6.8Hz,3H)；ESI-MS(m/z):410.8[M+1]+。
实施例8
按照实施例1中的方法合成得到中间体B1-3，再制备产物B8。合成路线如下：
1）中间体B8-1的合成
将B1-3(50mg,0.17mmol)溶解于无水四氢呋喃(2mL)中，在冰水浴下缓慢分批加入四氢铝锂(13mg,0.34mmol)，将此混合液在0℃下搅拌30分钟，点板显示反应进行完毕。搅拌下往反应液中缓慢加入2mL乙酸乙酯，再加入饱和碳酸氢钠水溶液，直到无沉淀生成为止。停止搅拌，加入无水硫酸钠，过滤，滤液在减压下旋蒸，除去溶剂，溶质经柱层析（二氯甲烷:甲醇=50:1)得到白色固体(30mg,69.8%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.81(s,1H),4.67(s,2H),4.57(s,2H),3.95(t,J=4.6Hz,2H),3.84(d,J=4.0Hz,2H),1.48(s,9H)。
2）中间体B8-2的合成
将B8-1(200mg,0.79mmol)溶于4mL乙酸乙酯中，加入3M氯化氢的乙酸乙酯（4mL）溶液。室温下反应2h，减压旋去溶剂，溶质经柱层析(二氯甲烷:甲醇:氨水=100:10:1)得到黄色油状物(100mg,82.6%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.77(s,1H),4.57(s,2H),4.09(s,2H),3.94(t,J=5.4Hz,2H),3.24(t,J=5.2Hz,2H)。
3）B8的合成
B8-2（46mg,0.3mmol）、氟化铯（50mg,0.329mmol）和A1-9（41mg,0.162mmol）分别在搅拌条件下溶于二甲亚砜（1mL）中，加热至120℃，反应48小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯（10mL）和水（5mL），有机相用饱和食盐水（5mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:100）得一绿色油状物(20mg,33.37%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.24(s,1H),7.44(s,1H),6.84(s,1H),6.65(s,1H),4.70(s,2H),4.58(s,2H),4.15(s,2H),4.09(d,J=4.0Hz,2H),2.38(s,3H),2.16(s,3H)；ESI-MS(m/z):370.1[M+1]+。
实施例9
按照实施例1和8中的方法合成得到中间体B8-1，再制备产物B9。合成路线如下：
1）中间体B9-1的合成：
在B8-1(400mg,1.579mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三乙胺(320mg,3.158mmol)，然后在搅拌下冰水浴中逐滴加入甲磺酰氯（199mg，1.737mmol），此混合液在室温下搅拌30分钟。点板显示反应已毕。冷却至室温，加入10mL乙酸乙酯，用3mL水水洗2次。有机层在减压下旋蒸，得粗品（440mg），直接投下步反应。
2）中间体B9-2的合成
将B9-1(440mg,1.33mmol)和碳酸钾（395mg，3.98mmol）溶解于8mLDMF中，常温下加入吗啉(347mg,3.98mmol)，在100℃下搅拌2h。点板显示反应已毕，加入乙酸乙酯20mL和水5mL，用5mL盐水洗涤三次。有机层在减压下旋蒸，溶质经柱层析（二氯甲烷:甲醇=50:1）得到棕色油状物（220mg,51.43%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.75(s,1H),4.67(s,2H),3.95(t,J=5.0Hz,2H),3.83(t,J=5.4Hz,2H),3.74-3.72(m,4H),3.45(s,2H),2.53(s,4H),1.48(s,9H)。
3）中间体B9-3的合成
将B9-2(170mg,0.527mmol)加入3M氯化氢的乙酸乙酯溶液。室温下反应3h，减压旋去溶剂，溶质经柱层析(二氯甲烷:甲醇:氨水=100:10:1)得到黄色油状物(110mg,94.87%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.71(s,1H),4.08(s,2H),3.92(t,J=5.4Hz,2H),3.72(t,J=4.6Hz,4H),3.44(s,2H),3.23(t,J=5.6Hz,2H),2.52(s,4H)。
4）B9的合成：
B9-3(46mg,0.3mmol)、氟化铯（150mg,0.987mmol）和A1-9(40mg,0.158mmol)分别在搅拌条件下溶于二甲亚砜（1mL）中，加热至120℃，反应48小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯（10mL）和水（5mL），有机相用饱和食盐水（5mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:100）得一绿色油状物(11mg,15.82%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),8.24(s,1H),7.43(s,1H),7.00(s,1H),6.63(s,1H),4.68(s,2H),4.14(s,2H),4.08(s,2H),3.83(s,4H),3.66(s,2H),2.73(s,4H),2.38(s,3H),2.16(s,3H)；ESI-MS(m/z):438.8[M+1]+。
实施例10
合成路线如下：
1)中间体B10-1的合成
B1-1（10g,10.5mmol）溶于80mL吡啶中，加入对甲苯磺酰氯（22g,115.4mmol)。室温搅拌80分钟，减压蒸出吡啶，向溶质中加入1L水，混合物室温搅拌一小时后，过滤，所得固体依次用100mL水和200mL的***洗涤，干燥得到黄色固体(19g,72.4%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),8.29(d,J=5.6Hz,2H),7.80(d,J=7.6Hz,2H),7.29(s,1H),2.40(s,3H)。
2）中间体B10-2的合成
B10-1(8.6g,34.5mmol)溶于60mLDMF中，加入碘代乙酰胺(7g,37.8mmol)和N,N-二异丙基乙酰胺(6.6mL,37.9mmol)，常温搅拌28小时，反应完毕。反应液中加入40mL水，常温搅拌100分钟，静置，过滤，所得固体用200mL的水和100mL的***洗涤，得到灰色固体(7g,64.3%)。
3）中间体B10-3的合成
B10-2(7.14g,23.3mmol)溶解在110mL二氯甲烷中，加入43mL三氟醋酸酐，50℃下回流反应2小时。旋蒸出溶剂，残液中加入220mL乙酸乙酯，生成的沉淀过滤，所得固体用乙酸乙酯洗涤，得到灰色固体(5.2g,96.9%)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),8.98(s,1H),8.63(d,J=4.8Hz,1H),8.40(s,1H),7.93(d,J=4.4Hz,1H)。
4）中间体B10-4的合成
B10-3(5.2g,22.61mmol)溶解于130mL甲醇中，加入780毫克Pd/C(湿度50%),在通入氢气下反应10h。反应产物经硅藻土过滤，用甲醇洗涤，滤液在减压下旋蒸除去溶剂。溶质经柱层析（二氯甲烷:甲醇=30:1）得到白色固体(1.3g,24.6%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.74(s,1H),7.29(s,1H),4.02(s,2H),3.96(t,J=5.4Hz,2H),3.27(t,J=5.4Hz,2H)。
5）B10的合成
B10-4(800mg,3.1mmol)、氟化铯(2g,12.8mmol)和A1-9(500mg,2.1mmol)分别在搅拌条件下溶于二甲亚砜（6mL）中，加热至120℃，反应48小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯（100mL）和水（50mL），有机相用饱和食盐水（50mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:50）得到黄色固体(250mg,26%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.76(s,1H),8.34(s,1H),8.25(d,J=2.8Hz,1H),7.43(s,1H),7.36(d,J=2.4Hz,1H),6.64(s,1H),4.63(s,2H),4.11(s,4H),2.37(s,3H),2.16(s,3H)；ESI-MS(m/z):450.7[M+1]+。
实施例11
按照实施例10中的方法合成得到中间体B10-3，再制备产物B11。合成路线如下：
1）中间体B11-1的合成
将B10-3（4.2g,18.26mmol）溶解于50mL甲醇中，常温下加入20mL氨水，此混合液在70℃下回流搅拌6小时。冷却，减压旋蒸，除去甲醇。溶质经柱层析（二氯甲烷:甲醇=30:1）得到黄色固体（1.2g,44%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.88(d,J=4.8Hz,1H),7.79(d,J=4.4Hz,1H),7.01(s,1H),4.20(s,2H)。
2）中间体B11-2的合成
将B11-1(300mg,2.238mmol)、丙酸(216mg,2.91mmol)、HATU（1.1g,2.91mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（432mg,3.36mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺中（5mL），混合物在室温下搅拌24小时。加入乙酸乙酯（150mL）和水（40mL），有机相用饱和食盐水（40mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:60）得到产物（200mg,47%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.90(s,1H),8.57(s,1H),8.21(s,1H),8.05(d,J=4.8Hz,1H),7.91(d,J=4.4Hz,1H),2.50(q,J=7.6Hz,2H),1.28(t,J=7.6Hz,3H)。
3)中间体B11-3的合成
将B11-2(150mg,0.79mmol)溶解于10mL甲醇中，加入15mg二氧化铂,体系用氢气置换三次，室温下反应48h。产物过滤，用甲醇洗涤，滤液旋干。经柱层析（二氯甲烷:甲醇=30:1）得到白色固体（110mg,73%)。
4)B11的合成
B11-3(40mg,0.206mmol)、氟化铯(188mg,1.236mmol)和A1-9(104mg,0.412mmol)分别在搅拌条件下溶于二甲亚砜（1.5mL）中，加热至120℃，反应48小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯（30mL）和水（5mL），有机相用饱和食盐水（5mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:60）得到绿色固体(20mg,23.6%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.25(s,1H),8.22(s,1H),7.44(s,1H),7.25(s,1H),6.65(s,1H),4.63(s,2H),4.12(s,2H),4.07(d,J=4.0Hz,2H),2.38-2.35(m,5H),2.17(s,3H),1.22(t,J=7.8Hz,3H)；ESI-MS(m/z):410.9[M+1]+。
实施例12
按照实施例10和11中的方法合成得到中间体B11-1，再制备产物B12。合成路线如下：
1)中间体B12-1的合成
将B11-1(200mg,1.5mmol)、甲氧基乙酸(175.5mg,1.95mmol)、HATU（741mg,1.95mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（290mg,2.25mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（3mL）中，混合物在室温下搅拌24小时。加入乙酸乙酯（150mL）和水（40mL），有机相用饱和食盐水（40mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:60）得到产物（160mg,51.8%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.43(s,1H),8.95(s,1H),8.25(s,1H),8.05(d,J=4.0Hz,1H),7.92(d,J=4.0Hz,1H),4.11(s,2H),3.53(s,3H)。
2)中间体B12-2的合成
将B12-1(120mg,0.79mmol)溶解于10mL甲醇中，加入15mg二氧化铂,体系用氢气置换三次，室温下反应48h。产物过滤，用甲醇洗涤，滤液旋干。经柱层析（二氯甲烷:甲醇=30:1）得到B11-3(80mg,73%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.64(s,1H),7.21(s,1H),4.02(s,2H),4.00(s,2H),3.92(t,J=5.2Hz,2H),3.46(s,3H),3.24(t,J=5.4Hz,2H)。
3)B12的合成
B12-2(55mg,0.262mmol)、氟化铯(239mg,1.57mmol)和A1-9(165.6mg,0.655mmol)分别在搅拌条件下溶于二甲亚砜（1.5mL）中，加热至120℃，反应48小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯（30mL）和水（5mL），有机相用饱和食盐水（5mL）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（流动相为甲醇:二氯甲烷=1:60）得到绿色固体(20mg,18%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.65(s,1H),8.36(s,1H),8.26(s,1H),7.44(s,1H),7.29(s,1H),6.65(s,1H),4.64(s,2H),4.15-4.07(m,4H),4.02(s,2H),3.47(s,3H),2.39(s,3H),2.18(s,3H)；ESI-MS(m/z):426.8[M+1]+。
实施例13
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B13。合成路线如下：
B1-6（20mg,0.052mmol）溶于2mL异丙醇，冰浴下加入二氯亚砜(12mg,0.11mmol)，混合物在84℃下回流。减压旋蒸，除去异丙醇，滴加4M氢氧化钠水溶液至PH7，加入乙酸乙酯（20mL），用水（10mL×3）洗，再用饱和食盐水（10mL×3）洗。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=80:1）纯化得到白色固体B13(10mg,45.2%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),8.24(s,1H),7.56(s,1H),7.43(s,1H),6.62(s,1H),5.34-5.18(m,1H),4.74(s,2H),4.16(s,4H),2.38(s,3H),2.16(s,3H),1.37(s,3H),1.35(s,3H)；ESI-MS(m/z):425.8[M+1]+。
实施例14
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B14。合成路线如下：
B1-6（20mg,0.052mmol）溶于2mL环丙甲醇，冰浴下加入二氯亚砜(12mg,0.11mmol)，混合物在84℃下回流。减压旋蒸，除去异丙醇，滴加4M氢氧化钠水溶液至PH7，加入乙酸乙酯（20mL），用水（10mL×3）洗，再用饱和食盐水（10mL×3）洗。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=80:1）纯化得到白色固体B14(8mg,36.3%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.25(s,1H),7.59(s,1H),7.44(s,1H),6.63(s,1H),4.74(s,2H),4.23-4.10(m,6H),2.39(s,3H),2.16(s,3H),1.32-1.19(m,1H),0.62-0.54(m,2H),0.38-0.30(m,2H)；ESI-MS(m/z):437.8[M+1]+。
实施例15
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B15。合成路线如下：
B1-6（30mg,0.078mmol）、环戊醇（13mg,0.16mmol）和4-二甲氨基吡啶（14mg,0.12mmol）溶于二氯甲烷，冰浴搅拌下加入1-羟基苯并***（17mg,0.13mmol）和二环己基碳二亚胺（24mg,0.12mmol），混合物在室温下搅拌2天。加入乙酸乙酯（20mL）和水（10mL），有机相用饱和食盐水（10mL×3）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（二氯甲烷:甲醇=80:1）得到白色固体B15(10mg,28.4%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.24(s,1H),7.53(s,1H),7.44(s,1H),6.63(s,1H),5.38(s,1H),4.73(s,2H),4.16(s,4H),2.38(s,3H),2.16(s,3H),2.08-1.92(m,2H),1.89-1.73(m,4H),1.59-1.56(m,2H)；ESI-MS(m/z):451.8[M+1]+。
实施例16
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B16。合成路线如下：
B1-6（20mg,0.026mmol）、苯酚（10mg,0.10mmol）和4-二甲氨基吡啶（10mg,0.078mmol）溶于二氯甲烷，冰浴搅拌下加入1-羟基苯并***（10.6mg,0.078mmol）和二环己基碳二亚胺（16mg,0.078mmol），混合物在室温下搅拌6小时。加入乙酸乙酯（20mL）和水（10mL），有机相用饱和食盐水（10mL×3）洗，无水硫酸钠干燥过滤后，旋去溶剂，溶质经柱层析精制（二氯甲烷:甲醇=80:1）得到白色固体B16(16mg,66.9%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.26(s,1H),7.74(s,1H),7.47-7.33(m,3H),7.30-7.15(m,3H),6.66(s,1H),4.78(s,2H),4.21(s,4H),2.38(s,3H),2.17(s,3H)；ESI-MS(m/z):459.8[M+1]+。
实施例17
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B17。合成路线如下：
B1-6(20mg,0.052mmol)、苯胺（5.3mg,0.057mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（7.4mg,0.057mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1mL）。HATU（22mg,0.057mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（20mL）中，用饱和食盐水（10mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=80:1）纯化得到白色固体B17(14mg,58.7%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.87(s,1H),8.36(s,1H),8.27(s,1H),7.70(s,1H),7.68(s,1H),7.59(s,1H),7.45(s,1H),7.38-7.29(m,2H),7.14-7.06(m,1H),6.69(s,1H),4.75(s,2H),4.18(s,4H),2.39(s,3H),2.18(s,3H)；ESI-MS(m/z):458.8[M+1]+。
实施例18
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B18。合成路线如下：
B1-6(20mg,0.052mmol)、2-氟苯胺（6.4mg,0.057mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（7.4mg,0.057mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1mL）。HATU（22mg,0.057mmol）加至溶液中，室温下搅拌2天。反应液加入乙酸乙酯（20mL）中，用饱和食盐水（10mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=80:1）纯化得到白色固体B18(5mg,20.2%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ9.16(s,1H),8.53-8.45(m,1H),8.36(s,1H),8.27(s,1H),7.60(s,1H),7.44(s,1H),7.18-6.98(m,3H),6.70(s,1H),4.75(s,2H),4.19(s,4H),2.39(s,3H),2.18(s,3H)；ESI-MS(m/z):476.8[M+1]+。
实施例19
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B19。合成路线如下：
B1-6(20mg,0.052mmol)、4-氟苯胺（6.4mg,0.057mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（7.4mg,0.057mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1mL）。HATU（22mg,0.057mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（20mL）中，用饱和食盐水（10mL×3）洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=80:1）纯化得到白色固体B18(18mg,72.6%)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.85(s,1H),8.36(s,1H),8.27(s,1H),7.69-7.61(m,2H),7.59(s,1H),7.44(s,1H),7.08-6.96(m,2H),6.69(s,1H),4.74(s,2H),4.18(s,4H),2.39(s,3H),2.17(s,3H)；ESI-MS(m/z):476.8[M+1]+。
实施例20
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B20。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.13mmol)、环丙基甲基胺（12mg,0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（26mg,0.20mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=40:1）纯化得到白色固体B20（12mg,21%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.26(s,1H),7.50(s,1H),7.44(s,1H),7.12(s,1H),6.67(s,1H),4.72(s,2H),4.15(s,4H),3.26(t,J=6.4Hz,2H),2.39(s,3H),2.17(s,3H),1.48(m,1H),0.55-0.50(m,2H),0.27-0.23(m,2H);ESI-MS(m/z):437.4[M+1]+.
实施例21
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B21。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.13mmol)、3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐（19mg,0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（52mg,0.40mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=30:1）纯化得到白色固体B21（10mg,17%）。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.30(s,1H),7.75(s,1H),7.60(s,1H),7.00(s,1H),4.78(s,2H),4.66(m,1H),4.53(s,1H),4.25(s,2H),4.15(s,2H),4.06(s,2H),3.78(s,2H),2.34(s,3H),2.09(s,3H);ESI-MS(m/z):439.3[M+1]+.
实施例22
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B22。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.13mmol)、3-羟基吡咯烷（15mg,0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（26mg,0.20mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=30:1）纯化得到白色固体B22（12mg,20%）。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.30(s,1H),7.64(s,1H),7.60(s,1H),7.02(s,1H),4.94(s,1H),4.78(s,2H),4.29(d,J=18.8Hz,1H),4.13-4.07(m,4H),3.87(s,2H),3.54-3.47(m,2H),2.34(s,3H),2.10(s,3H),1.94-1.80(m,2H);ESI-MS(m/z):453.3[M+1]+.
实施例23
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B23。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.13mmol)、(R)-2-(甲氧甲基)-吡咯烷（20mg,0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（26mg,0.20mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=40:1）纯化得到白色固体B23（11mg,17%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),8.23(s,1H),7.59(s,1H),7.46(s,1H),6.71(s,1H),5.08(m,2H),4.64(s,1H),4.29(s,2H),4.09(s,2H),3.74(s,3H),3.38(m,1H),3.35(s,1H),3.21(s,1H),3.19(s,1H),2.39(s,3H),2.18(s,3H),2.07(s,2H),1.94(s,2H);ESI-MS(m/z):481.4[M+1]+.
实施例24
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B24。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.13mmol)、间氟苯胺（19mg,0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（26mg,0.20mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（石油醚:乙酸乙酯=3:1）纯化得到白色固体B24（28mg,45%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,1H),8.36(s,1H),8.27(s,1H),7.67(d,J=11.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.45(s,1H),7.30(t,J=7.2Hz,2H),6.80(t,J=7.8Hz,1H),6.69(s,1H),4.75(s,2H),4.19(s,4H),2.39(s,3H),2.18(s,3H);ESI-MS(m/z):477.3[M+1]+.
实施例25
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B25。合成路线如下：
B1-6(50mg，0.13mmol)、3,4-二氟苯胺（22mg，0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（26mg,0.20mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（石油醚:乙酸乙酯=3:1）纯化得到白色固体B25（30mg,46%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(s,1H),8.36(s,1H),8.27(s,1H),7.80(m,1H),7.59(s,1H),7.44(s,1H),7.21(m,1H),7.12(q,J=9.2Hz,1H),6.69(s,1H),4.74(s,2H),4.18(s,4H),2.39(s,3H),2.17(s,3H);ESI-MS(m/z):495.3[M+1]+.
实施例26
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B26。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.13mmol)、2-氨基吡啶（16mg,0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（26mg,0.20mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=30:1）纯化得到白色固体B26（26mg,43%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),8.35(d,J=6.4Hz,1H),8.31(m,1H),8.26(s,1H),7.70(m,1H),7.61(s,1H),7.44(s,1H),7.01(m,1H),6.68(s,1H),4.70(s,2H),4.18(s,4H),2.38(s,3H),2.17(s,3H);ESI-MS(m/z):460.3[M+1]+.
实施例27
按照实施例1中的方法合成得到中间体B6-1，再制备产物B27。合成路线如下：
B1-6(50mg,0.13mmol)、3-氨基吡啶（16mg,0.17mmol）、N,N`-二异丙基乙胺（26mg,0.20mmol）溶于N,N`-二甲基甲酰胺（1.5mL）。HATU（64mg,0.17mmol）加至溶液中，室温下搅拌过夜。反应液加入乙酸乙酯（40mL）中，用饱和食盐水（15mL×3）洗涤。有机相在无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱（二氯甲烷:甲醇=30:1）纯化得到白色固体B27（31mg,51%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(s,1H),8.72(d,J=2.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.34(d,J=4.8Hz,1H),8.31(d,J=8.8Hz,1H),8.27(s,1H),7.61(s,1H),7.44(s,1H),7.29(m,1H),6.69(s,1H),4.75(s,2H),4.19(s,4H),2.39(s,3H),2.18(s,3H);ESI-MS(m/z):460.3[M+1]+.
实施例28生物测试
1、NIH3T3-GRE-Luc荧光素酶报告基因检测实验
NIH3T3细胞是在含有10%FBS(Hyclone)的DMEM(11965,Gibico)中培养的。GRE-萤火虫荧光素质粒是经由放大八倍的细胞转录因子GLI-1响应元素植入MCS中获得。单克隆是经过重组苏尼克刺猬通路蛋白和结构式如下式所示的小分子激动剂SAG验证的。被验证的精选克隆用于检测刺猬通路信号。
表达GRE-萤火虫素的NIH3T3细胞是在完整的培养液中维持的。当需要做分析检测时，细胞被加到96孔板中，最终每孔含细胞约一万五千。96孔板在被培养48小时。被检测化合物由DMSO和检测缓冲液被序列稀释。10nMSAG作为刺猬通路激动剂。随后100微升包含有被测化合物和激动剂的分析缓冲液小心加入到含有细胞中96孔板中，并在37摄氏度培养48小时。
在培养48小时后，40微升萤火虫荧光素酶被加入到每一个孔中。96孔板在室温下轻摇5分钟。发光信号由读板器记录。化合物的活性通过其对发光信号的阻断计算而出，对所合成的化合物进行测试，结果如下表：
上述结果显示，已测的21个化合物中的12个都有活性，其中B1-5，B1，B6，B17都达到了300纳摩尔，具有很好的刺猬通路拮抗效果。
上述实验建立了化合物浓度与细胞中刺猬通路信号强度的拮抗剂关系。以2012年成功上市的vismodegib为标准物。这一测试的灵敏度高，重现性好，适合于对细胞的刺猬通路拮抗剂的筛选。

Claims (7)

1.一类具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其特征在于，其具有如通式Ⅰ所示的结构：
其中，
A是氮原子或C-R9；
R1,R2,R3,R4,R5,R6,R7,R8,R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，巯基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环；
n为0、1、2、3、4、5或6。
2.根据权利要求1所述的具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其特征在于，具有下列通式所示的结构：
R9选自如下基团中的任意一个：
其中甲基胺也可由下类胺及他们的类似物代替：
R1选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，巯基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环。
3.根据权利要求1所述的具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其特征在于，具有如下结构式所示的结构：
4.根据权利要求1所述的具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其特征在于，具有如下任一通式所示的结构：
其中，R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，酰胺基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环。
5.根据权利要求1所述的具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其特征在于，具有如下任一通式所示的结构：
其中，R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，酰胺基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环。
6.根据权利要求1所述的具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其特征在于，具有如下任一通式所示的结构：
其中，R9选自氢原子，卤素，烷代卤素，氰基，烷代氰基，三氟甲基，烷基，烯基，炔基，氨基，羟基，烷氧基，脂基，砜基，亚砜基，酰胺基，磺胺基，叠氮基，烷代烯基，烷代炔基，烷代氨基，烷代羟基，烷代脂基，烷代砜基，烷代亚砜基，烷代磺胺基，烷代叠氮基，环状烷基，环状烯基，3-12杂环，芳香环或5-12杂芳环。
7.根据权利要求1所述的具有刺猬通路拮抗剂活性的吡啶杂环化合物，其特征在于，所述的化合物为具有以下任意一个结构式所示的化合物：
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