CN103896921A - 作为蛋白激酶抑制剂的化合物和组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一类新的式I化合物、含有此类化合物的药物组合物以及采用此类化合物治疗或预防疾病或障碍的方法，所述疾病或障碍与激酶活性异常或失控有关，尤其是涉及B-Raf异常激活的疾病或障碍。
Description
本申请是中国专利申请201080038197.8的分案申请，原申请的申请日是2010年8月27日，名称是“作为蛋白激酶抑制剂的化合物和组合物”。
与有关申请的相互参考
本申请要求于2009年08月28日提交的美国临时专利申请61／238,073和2010年03月11日提交的61／313,039的优先权。这两篇申请的全部内容在此引入作为参考并用于所有目的。
发明背景
发明领域
本发明提供了一类新的化合物、含有这些化合物的组合物以及采用这些化合物治疗或预防疾病或障碍的方法，所述疾病或障碍与激酶活性的异常或失控有关，尤其是与B-Raf激酶的异常激活有关的疾病或障碍。
背景
蛋白激酶代表了蛋白质的一个大家族，它们在调节各种细胞过程和维持控制细胞功能中起到了重要作用。这些激酶的部分、非限定性名单包括：受体酪氨酸激酶，如血小板衍生的生长因子受体激酶(PDGF-R)、神经生长因子受体(trkB、Met)和成纤维细胞生长因子受体(FGFR3)；非受体酪氨酸激酶，如Ab1和融合激酶BCR-Ab1、Lck、Csk、Fes、Bmx和c-src；以及丝氨酸/苏氨酸激酶，如B-RAF、sgk、MAP激酶(例如，MKK4、MKK6等)和SAPK2α、SAPK2β和SAPK3。在许多疾病状态中观察到了异常的激酶活性，包括良性和恶性增殖性障碍以及免疫和神经***的不适当的激活导致的疾病。
本发明的新化合物抑制B-Raf或其变体形式(例如V600E)的活性，因此预期可以用于治疗B-Raf相关的疾病。
发明概述
在一方面，本发明提供式I化合物及其N-氧化物衍生物、前药衍生物、被保护的衍生物、互变异构体、单个异构体和异构体的混合物；并且还提供此类化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物(如水合物)：
其中：
Y选自N和CR6；
R1选自氢、-X1R8a、-X1ＯX2R8a、-X1C(O)NR8aR8b、-X1NR8aX2R8b、-X1NR8aC(O)X2ＯR8b、-X1NR8aC(O)X2NR8aR8b、-X1NR8aS(O)0-2R8b；其中每个X1独立地为C1-4亚烷基；且X1任选地有1至3个氢被选自以下的基团替换：羟基、卤素、氰基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；X2选自价键和C1-4亚烷基；其中R8a和R8b独立地选自氢、C1-6烷基、卤素-取代的-C1-6烷基、C3-8环烷基、杂芳基和C3-8杂环烷基；其中R8a或R8b的所述环烷基、杂环烷基或杂芳基任选地被1至3个选自以下的基团取代：氨基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素-取代的-C1-4烷基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；条件是：当R1选自-X1NHC(O)OR8b和-X1NR8aS(O)0-2R8b时，R8b不是氢；
R2、R3、R5和R6独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；条件是，当R5是氟且R1选自氢、-X1R8a、-X1ＯX2R8a、-X1C(O)NR8aR8b、-X1NR8aX2R8b、-X1NR8aC(O)X2ＯR8b和-X1NR8aS(O)0-2R8b时，R3和R6不都是氢；
R4选自-R9和-NR10R11；其中R9选自C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基和杂芳基；其中R9的所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选地被1至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、氰基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；且R10和R11独立地选自氢和R9；
R7选自氢、C1-4烷基、C3-5环烷基和C3-5杂环烷基；其中R7的所述烷基、环烷基或杂环烷基任选地被1至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基。
在第二方面，本发明提供了药物组合物，它包含式I化合物或其N-氧化物衍生物、单个异构体和异构体混合物；或其药学上可接受的盐和一种或多种适当的赋形剂。
在第三方面，本发明提供了在动物中治疗疾病的方法，在所述疾病中激酶活性尤其是B-Raf活性的抑制可以预防、抑制或减轻疾病的病理和／或症状，该方法包括给动物施用治疗有效量的式I化合物或其N-氧化物衍生物、单个异构体和异构体混合物或其药学上可接受的盐。
在第四方面，本发明提供了式I化合物在药物生产中的用途，该药物用于在动物中治疗疾病，在所述疾病中激酶活性尤其是B-Raf、尤其是突变B-Raf(例如V600E)活性对疾病的病理和／或症状起作用。
在第五方面，本发明提供了用于制备式I化合物及其N-氧化物衍生物、前药衍生物、被保护的衍生物、单个异构体和异构体的混合物以及药学上可接受的盐的方法。
附图简述
图1：图1阐述了MEK小分子抑制剂的加入可逆转由Raf小分子抑制剂引起的降低的ERK信号转导、细胞生长和转化。
发明详述
定义
“烷基”作为基团和作为其他基团的结构成分，例如卤素-取代的烷基和烷氧基，其可以是直链或支链的。C1-4-烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。卤素取代的-C1-4烷基是指其中任何氢可被卤素取代的烷基基团(支链或直链)。例如，卤素-取代的-C1-4烷基可以是三氟甲基、二氟乙基、五氟乙基等。相似地，羟基取代的-C1-6烷基是指其中任何氢可被羟基取代的烷基基团(支链或直链)。例如，羟基取代的-C1-6烷基包括2-羟基乙基等。相似地，氰基-取代的-C1-6烷基是指其中任何氢可被氰基取代的烷基基团(支链或直链)。
“芳基”是指包含六至十个环碳原子的单环或稠合双环芳环。例如，芳基可以是苯基或萘基，优选苯基。“亚芳基”是指由芳基基团衍生的二价基团。
“环烷基”是指包含所指的环原子数的饱和或部分不饱和、单环、稠合双环或桥接多环的环集合。例如，C3-10环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
“杂芳基”如上文对芳基的定义，其中环成员的一个或多个是杂原子。例如，杂芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹噁啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并硫代吡喃基、苯并[1，3]二氧杂环戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、***基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。
“杂环烷基”是指在本申请中定义的环烷基，条件是一或多个指定的环碳原子被选自下列的基团代替：-O-、-N＝、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-，其中R为氢、C1-4烷基或氮保护基团。例如，在本申请中用于表述本发明化合物的C3-8杂环烷基包括2H-吡喃、4H-吡喃、哌啶、1，4-二噁烷、吗啉、1，4-二噻烷、硫代吗啉代、咪唑啉-2-酮、四氢呋喃、哌嗪、1，3，5-三噻烷、吡咯烷、吡咯烷基-2-酮、哌啶、哌啶酮、1，4-一二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基等。
“卤素”(或卤代)代表氯、氟，溴或碘。
“pMEK”是指磷酸化Mek。
“pERK”是指磷酸化ERK。
“治疗”是指缓解或减轻疾病和／或伴随的症状的方法。
本发明的化合物是使用Chemdraw Ultra(10.0版)和／或ChemAxon名称生成(Jchem5.3.1.0版)命名的。
优选实施方案的描述
本发明提供了用于治疗激酶相关疾病的化合物、组合物和方法，尤其是B-Raf激酶相关疾病，例如，转移性黑素瘤、实体瘤、脑瘤例如多形性胶质母细胞瘤(GBM)、急性骨髓性白血病(AML)、***癌、胃癌、甲状腺***状癌、低度卵巢癌和结直肠癌。
在一项实施方案中，涉及式I化合物，R1选自-X1R8a和-X1NHC(O)OR8b；其中每个X1独立地是C1-4亚烷基；且X1任选地具有1至3个氢被选自以下的基团替换：羟基、卤素、氰基、C1-4烷基和卤素-取代的-C1-4烷基；其中R8a和R8b独立地选自氢和C1-6烷基；条件是：当R1是-X1NHC(O)OR8b时，R8b不是氢。
另一个实施方案是式Ia化合物：
其中：Y选自N和CR6；R2、R3、R5和R6独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；条件是：当R5是氟时，R1选自氢、-X1R8a、-X1ＯX2R8a、-X1C(O)NR8aR8b、-X1NR8aX2R8b、-X1NR8aC(O)X2ＯR8b和-X1NR8aS(O)0-2R8b，R3和R6不都是氢；R4选自-R9和-NR10R11；其中R9选自C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基和杂芳基；其中R9的所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选地被1至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、氰基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；且R10和R11独立地选自氢和R9；且R7选自氢、C1-4烷基、C3-5环烷基和C3-5杂环烷基；其中R7的所述烷基、环烷基或杂环烷基任选地被1至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基。
在另外的实施方案中，R4是-R9；其中R9选自C1-3烷基和C3-8环烷基；其中R9的所述烷基或环烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和卤素-取代的-C1-4烷基的基团取代。
在另一个实施方案中，R2选自氢和氟；R3选自氯、氟和甲基；R5选自氢、氯和氟；Y选自N和CR6；且R6选自氢和氟。
在另一个的实施方案中，化合物选自：N-[(2S)-1-({4-[3-(3-氯-5-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[2-氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[3-氯-5-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，6-二氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[2，6-二氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-{[4-(3-{2-氟-3-[(3，3，3-三氟丙烷)亚磺酰氨基]苯基}-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基}丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-氯-2-甲亚磺酰氨基吡啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-氟-2-甲亚磺酰氨基吡啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氯-3-乙亚磺酰氨基-4，5-二氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，4-二氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[1-(丙-2-基)-3-(2，4，5-三氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-乙基亚磺酰氨基-2，4-二氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-2-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[2，4-二氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-环丙烷亚磺酰氨基-2，5-二氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-3-环丙烷亚磺酰氨基-2-氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；和N-[(2S)-1-[(4-{3-[5-氯-2-氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯。
另外的实施方案是式Ib化合物：
其中：R3选自氯、氟和甲基；R5选自氟和氯；R7选自乙基和异丙基。
在另外的实施方案中，化合物选自：N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，5-二氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氟-3-甲亚磺酰氨基-5-甲基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氯-3-甲亚磺酰氨基-5-甲基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氯-5-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2R)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，5-二氯-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；和N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯。
在另-个实施方案中，化合物选自：N-[5-氯-3-(4-{2-[(2-氰基乙基)氨基]嘧啶-4-基}-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟苯基]甲磺酰胺；N-{5-氯-3-[4-(2-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}嘧啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基]-2-氟苯基}甲磺酰胺；N-(5-氯-2-氟-3-{4-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基}苯基)甲磺酰胺；和N-{3-[4-(2-氨基嘧啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基]-5-氯-2-氟苯基}甲磺酰胺。
在另外的实施方案中，化合物选自下文的实施例与表。
在另外的实施方案中，中间化合物选自：3-溴-5-氯-2-氟苯胺；氰基-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-乙酸叔丁酯；1-异丙基-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺；2-((2-亚苄基-1-乙基肼基)亚甲基)-丙二腈；1-(3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮；1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮；1-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)乙酮；1-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙酮；3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮；3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮；3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮；4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；4-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；4-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-醇；2-氯-4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶；(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；(R)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；(S)-叔丁基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；3-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙腈；4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-N-甲基嘧啶-2-胺；N1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N2，N2-二甲基乙-1，2-二胺；N-(3-溴-2，4--二氟苯基)丙-1-磺酰胺；3-氟-4-碘代吡啶-2-胺；3-氯-4-碘代吡啶-2-胺；3-溴-2，5，6-三氟苯胺；2，4-二溴-3，6-二氯苯胺；3-溴-2-氯-5-甲基苯胺；3-溴-2，5-二氟苯胺；3-溴-5-氯-2-氟苯甲酸；3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯；3-溴-2-氟-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯；5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；2，6-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；N-(2，4-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基)丙-1-磺酰胺；2-(2-氟-3-硝基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环；2，5-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氯-5-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2，5-二氯-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氯-5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氟-5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；3-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)吡啶-2-胺；2，3，6-三氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)吡啶-2-胺；3-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；和3-甲氧基-2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺。
本发明还包括本发明化合物所有适宜的同位素变体，或其可药用盐。本发明的同位素变体或其可药用盐被定义为其中至少一个原子被具有相同原子数但原子量与自然中通常发现的原子量不同的原子替换。可加至本发明化合物及其可药用盐的同位素的实例包括但不限于氢、碳、氮和氧的同位素，例如：2H、3H、11C、13C、14C、15N、17Ｏ、18Ｏ、35S、18F、36Cl和123I。本发明化合物及其可药用盐的某些同位素变体，其中加入了放射性同位素例如3H或14C，用于药物和／或底物组织分布研究。在具体的实施例中，3H和14C同位素可被用于制备及可检测性的便利。在其他实施例中，用例如2H同位素取代可具有某些治疗优势，使得代谢稳定性更好，例如体内半衰期增加或剂量需求降低。本发明化合物或其可药用盐的同位素变体一般可通过使用适宜试剂的适当同位素变体的传统方法进行制备。
一些Raf抑制剂，除了增加野生型B-Raf细胞的MEK和ERK信号转导，还诱导癌细胞系的细胞生长，并引起成纤维细胞的转化与生长。下游信号转导的诱导前面已被归因于公开的Raf通路反馈回路。但是，pMEK和pERK的诱导可发生在Raf抑制治疗的数分钟内，甚至在报告的反馈以前，磷酸化作用事件见于B-Raf和C-Raf。信号转导与细胞生长两者以两相模式发生，低化合物浓度(0.01-0.1μM)引起最大的诱导作用，较高的化合物浓度(1-10μM)引起显著低的诱导作用。这种双相模式还在纯化野生型B-Raf或C-Raf的生化分析中被观察到，提示涉及到两种信号转导亚单位的相互作用的机制。此外，Raf的二聚作用可上调pMEK，不是通过Raf分子的反式磷酸化，但假定通过激酶的构象活化。与这一模型一致地，Raf抑制剂诱导细胞中B-Raf／C-Raf二聚体的形成。此外，A-或B-Raf伴随siRNA的敲除未停止Raf抑制剂的pMEK和pERK诱导作用，并且C-Raf的敲除仅略降低了这一诱导作用。显而易见地，K-Ras突变细胞的K-Ras敲除也仅略降低了这一诱导作用，隐含着该作用主要不是由Ras介导。一并考虑，这些数据提示了抑制剂与一个Raf分子结合诱导伴侣Raf分子二聚作用与构象激活的模型。这可解释为什么野生型Raf与突变Ras肿瘤对选择性Raf激酶抑制剂不敏感，并且也可能对毒性具有重要影响，因为强的促有丝***信号传导可导致正常组织的强增殖。理解Raf抑制剂的诱导机制可能带来改善抑制剂的设计。
MEK抑制剂的加入与Raf抑制剂组合带来对ERK信号传导的显著抑制作用，并因此降低细胞增殖与转化。因为单独MEK抑制剂处理已导致临床上的剂量限制毒性，Raf加MEK抑制剂组合可代表一种更优的治疗策略。
本发明还包括本发明中公开的Braf抑制剂与其他药物的组合。具体地，本发明提供了与MEK1／2抑制剂的组合。图1阐述了MEK小分子抑制剂的加入可逆转由Raf小分子抑制剂引起的已诱导的ERK信号转导、细胞生长与转化。例如式I化合物(本发明化合物9，名称为：((S)-甲基1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基亚磺酰氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯)可导致细胞增殖的诱导，如图1中使用SW620细胞的细胞荧光活性检测(Cell Titer Glo assay)中负的抑制作用所示。Y轴显示负的和正的抑制作用。每个试验以在10至0.002μM之间的9次递加稀释的一系列显示。化合物A1(N-(4-甲基-3-(1-(6-(4-甲基哌嗪-1-基氨基)嘧啶-4-基)-1H-咪唑-2-基氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺)为对照，A3是MEK抑制剂(PD0325901)。化合物9在MEK抑制剂A3不存在、含1μM、0.1μM和0.01μM下进行试验。
药理学和应用
本发明化合物能够调节激酶活性，所以可以用于治疗其中激酶对疾病的病理学和／或症状学起作用的疾病或障碍。本文所述的化合物和组合物以及针对采用的方法所抑制的激酶的实例包括但不限于B-Raf，包括B-Raf的突变形式。
促***原活化蛋白激酶(MAPK)通路介导许多协调控制细胞增殖、存活、分化与迁移的效应分子的活性。细胞被例如生长因子、细胞因子或激素的刺激导致血浆细胞膜相关Ras与GTP结合并借此被激活以招募Raf。这种相互作用诱导了Raf的激酶活性，导致MAPK／ERK(MEK)的直接磷酸化，其反过来磷酸化细胞外的信号相关激酶(ERK)。活化的ERK则磷酸化一系列效应分子，例如，激酶、磷酸酶、转录因子和细胞骨架蛋白。因此，Ras-Raf-MEK-ERK信号传导通路传输来自细胞表面受体的信号至细胞核，并且例如在细胞增殖与存活中是基本的。这种信号级联放大的调控进一步通过多种Ras同工型被进一步富集(包括K-Ras、N-Ras和H-Ras)、Raf(A-Raf、B-Raf、C-Raf／Raf-1)、MEK(MEK-1和MEK-2)和ERK(ERK-1和ERK-2)。因为10-20％的人癌症隐匿致瘤隐匿Ras突变和许多人癌症已激活了生长因子受体，该通路是用于干预的理想靶。
Raf在许多信号传到通路中的基本作用与地位已从使用哺乳动物细胞中解调控和显性抑制Raf突变的研究及对模式生物使用生化与遗传技术的研究得到证实。过去，对Raf是抗肿瘤药物靶的聚焦集中在其作为Ras下游效应器的功能上。但是，近期的发现提示Raf在某些肿瘤的形成中可能具有突出作用，无需致瘤Ras等位基因。具体地，B-Raf和N-Ras的活化等位基因已在～70％黑素瘤、40％甲状腺***状癌、30％低度卵巢癌和10％结直肠癌中被识别。K-Ras突变发生在约90％的胰腺癌中。大多数B-Raf突变见于激酶结构阈，单取代(V600E)占至少80％。突变的B-Raf蛋白或者通过对MEK升高的激酶活性或通过激活C-Raf激活Raf-MEK-ERK通路。
因此，对B-Raf激酶抑制剂的开发提供了治疗许多类型的人体癌症新的治疗机会，特别是转移性黑素瘤、实体肿瘤、脑瘤例如多形性成胶质细胞瘤(GBM)、急性髓性白血病(AML)、肺癌、甲状腺***状癌、低度卵巢癌和结直肠癌。已描述了数种Raf激酶抑制剂，在体外和／或体内分析中在抑制肿瘤细胞增殖方面呈现药效(见，例如美国专利6,391,636、6,358,932、6,037,136、5,717,100、6,458,813、6,204,467和6,268,391)。其他专利和专利申请提示Raf激酶抑制剂用于治疗白血病(见例如美国专利6,268,391、6,204,467、6,756,410和6,281,193；和放弃的美国专利申请20020137774和20010006975)，或用于治疗乳腺癌(见例如，美国专利6,358,932、5,717,100、6,458,813、6,268,391、6,204,467和6,911,446)。数据证明Raf激酶抑制剂可通过MAPK通路显著抑制信号传导，导致B-Raf(V600E)肿瘤的急剧缩小。
本发明化合物通过阻断在这些癌细胞中的信号级联递增抑制涉及B-Raf激酶的细胞过程，并最终诱导细胞的停滞和／或死亡。
按照上文，本发明还提供了用于预防或治疗肺癌、***癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌、结肠癌、髓系障碍、***癌、甲状腺癌、黑素瘤、腺癌和卵巢癌、眼、肝脏、胆道和神经***癌。此外，本发明还进一步提供了用于在需要这种治疗的个体中预防或治疗上述疾病或障碍的方法，方法包括对所述个体施用治疗有效量(见下文，“施用与药物组合物”)的式I化合物或其可药用盐。对于任何上述用途，所需剂量将随施用模式、待治疗的具体病症和所需作用而变化。
施用和药物组合物
通常，本发明化合物将以治疗有效量通过本领域已知的任何通常的并且可接受的方式、或单独或与一种或多种治疗剂组合施用。治疗有效量取决于疾病的严重程度、个体的年龄和相对健康、所用化合物的功效和其它因素而不同。通常，表明以约0.03至30mg／kg体重的日剂量全身获得满意的结果。在更大的哺乳动物(例如人)中的指定日剂量范围为约0.5mg至约2000mg，方便地例如以每天至多4次的分剂量或缓释形式施用。口服施用适合的单位剂型包含约1至500mg活性成分。
本发明化合物可以作为药物组合物通过任何常规途径施用，特别是肠内施用，例如口服，例如以片剂或胶囊剂的形式，或非肠道施用，例如以可注射溶液剂或混悬剂的形式，局部施用，例如以洗剂、凝胶剂、软膏剂或乳膏剂的形式，或以鼻内或栓剂形式。包含游离形式或可药用盐形式的本发明化合物以及至少一种可药用载体或稀释剂的药物组合物可以以常规方法通过混合、制粒或包衣方法制备。例如，口服组合物可以是片剂或明胶胶囊剂，所述的片剂或明胶胶囊剂包含活性成分以及a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和／或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、它的镁或钙盐和／或聚乙二醇；对于片剂，还包含c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和／或聚乙烯吡咯烷酮；和如果需要，d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或它的钠盐，或泡腾混合物；和／或e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。可注射组合物可以是水等渗溶液剂或混悬剂，并且栓剂可以由脂肪乳剂或混悬剂制备。组合物是灭菌的和／或包含辅剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和／或缓冲剂。另外，它们还可以包含其它有治疗价值的物质。例如，本发明化合物可被制成微乳预浓缩物(MEPC)。式I化合物可被制成40mg／ml56％PEG400、29％cremphor EL和15％油酸的混合物。先通过涡旋／振摇制备无式I化合物的该混合物。加入本发明的化合物并使用超声以分散粉末至基质中。该混合物在水浴中被加热至80℃搅拌约1小时，每15分钟超声。该混合物室温下物理、化学稳定约一周。
用于透皮应用的适合制剂包含有效量的本发明化合物和载体。载体可以包括可吸收的药理学可接受的溶剂以辅助通过宿主的皮肤。例如，透皮装置是如下形式：包含背衬膜的绷带、包含化合物任选和载体的贮库、任选的速率控制屏障以历经延长的时期以控制的并且预设的速率将化合物递送至宿主皮肤，并且这意味着将装置固定到皮肤上。还可以应用基质透皮制剂。用于局部应用(例如用于皮肤和眼睛)的适合的制剂优选为本领域众所周知的水溶液剂、软膏剂、乳膏剂或凝胶剂。其可以包含增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
本发明化合物可以以治疗有效量与一种或多种治疗剂组合(药物组合)施用。例如，与其它抗肿瘤剂或抗增殖剂可发生协调作用，例如，有丝***抑制剂、烷基化剂、抗代谢物、***抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶类、拓扑酶抑制剂、生物响应调节剂、抗体、细胞毒药物、抗激素类、抗雄激素、抗血管生成剂、激酶抑制剂、泛激酶抑制剂或生长因子抑制剂。
本发明的化合物可以治疗有效量与一种或多种适宜的选自玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉、淀粉糊、预胶化淀粉、糖类、明胶、天然胶类、合成胶类、海藻酸钠、海藻酸、黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、硅酸镁铝、聚维酮、滑石粉、碳酸钙、粉状纤维素、糊精类、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、琼脂、碳酸钠、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、聚克利林钾、羧甲基淀粉钠、粘土、硬脂酸钠、硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他二醇类、月桂醇硫酸钠、氢化植物油、花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油、大豆油、硬脂酸锌、油酸钠、油酸乙酯、月桂酸乙酯、硅胶及其组合。
本发明的一个实施方案是权利要求12或13的方法，另外包括给个体施用另外的治疗剂。另外的治疗剂包括抗癌药、止痛药、止吐药、抗抑郁药或抗炎药。此外，另外的治疗剂是不同的Raf激酶或MEK、mTOR、HSP90、AKT、P13K、CDK9、PAK、蛋白激酶C、MAP激酶、MAPK激酶，或ERK抑制剂，并与本发明化合物同时给个体施用。
例如，MEK抑制剂的加入与Raf抑制剂组合带来ERK信号转导的显著抑制，并因此降低细胞增殖与转化。因为单独MEK抑制剂治疗已在临床导致剂量限制毒性，Raf加MEK抑制剂组合为更优的治疗策略。MEK抑制剂的实例是AS703026(EMD Serono)；MSC1936369B(EMD Serono)；GSK1120212(GlaxoSmithKline)；AZD6244(Memorial Sloan-KetteringCancer Center)；PD-0325901(Pfizer)；ARRY-438162(Array BioPharma)；RDEA119(Ardea Biosciences，Inc.)；GDC0941(Genentech)；GDC0973(Genentech)；TAK-733(Millennium Pharmaceuticals，Inc.)；RＯ5126766(Hoffmann-La Ro che)；和XL-518(Exelixis)。
本发明的另一个实施方案是包含治疗有效量的本发明概述的化合物(Raf抑制剂)和至少一种MEK蛋白激酶抑制剂的组合与方法。
在本发明的化合物与其他疗法结合施用的情况下，联合施用的化合物的剂量当然取决于联合施用药物的类型、联合施用的具体药物及待治疗的病症等等。
本发明也提供药物组合，如药盒，它包括a)第一种成分，它是在本文公开的本发明化合物，可以是游离形式或是药学上可接受的盐的形式，和b)至少一种联合成分。所述药盒可以含有用于指导施用的说明书。
本文所用术语“联合施用”等是指包括将选定的治疗药物施用于单个患者，并且也包括通过相同或不同的途经在相同的时间或不同的时间施用的治疗方案。
本文所用术语“药物组合”是指将多于一种活性成分混合或组合得到的产物，它包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指将活性成分(如式I化合物和联合成分)以单一实体或剂型的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”是指将活性成分(如式I化合物和联合成分)以不同的实体施用于患者，可以同时、共同或顺序施用，没有具体的时间限制，其中此类施用在患者体内提供了2个化合物的治疗有效的水平。后者也应用于鸡尾酒疗法，例如，3种或以上的活性成分的施用。
制备本发明化合物的方法
本发明也包括用于制备本发明化合物的方法。在下述反应中，有可能需要保护反应官能团，例如羟基、氨基、亚氨基、巯基或羧基，因为期望这些官能团存在于终产物中，所以应避免它们参与不需要的反应。常规的保护基团可以采用标准操作，例如，参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts的“Protective Groups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基)”，JohnWiley and Sons，1991。
式I化合物可通过像以下反应流程图I那样进行制备：
反应流程图I
其中R1、R2、R3、R4、R5、R7和Y如本发明的概述中所定义，P是适宜的保护基团(例如，MEM、MOM、SEM、R4SO2等)，且M是离去基团(例如，氯、溴、碘、甲磺酰氧基、对-甲苯磺酰氧基等)。式I化合物可通过保护基P从式2化合物离去进行合成(例如，通过用强酸例如氯化氢在质子溶剂例如甲醇或水存在下处理，当P是MEM、MOM或SEM时；或者当P是第二磺酰基基团R4SO2时用碳酸钠或钾的水溶液或醇溶液处理，任选在例如甲苯的共溶剂存在下)。
式2化合物可通过式3化合物与式4的烷基化试剂在适宜溶剂(例如，DMF、DMSO等)和适宜的碱(例如，碳酸钾、氢化钠等)存在下反应制备。反应在约0℃至约150℃的温度范围进行，可需长达约24小时完成。任选将反应混合液进一步反应以脱去任何保护基。
还可通过以下反应流程图II进行式I化合物的制备：
反应流程图II
其中R1、R2、R3、R4、R5和Y如本发明概述中所定义。式I化合物可通过式5化合物与磺化试剂式6在适宜的碱(例如，吡啶、三乙胺、4-(N，N-二甲基氨基)吡啶等)和适宜的溶剂(例如吡啶、二氯甲烷、2-甲基THF等)存在下反应。反应在约0℃至约1000℃的温度范围下进行，可能需要长达约24小时完成。反应混合液任选进一步反应以除去任何保护基。在一些情况下，磺化试剂可反应两次以制备双磺基衍生物。在此情况下，双磺基化合物可通过用适宜的碱(例如，氢氧化钠或钾，或碳酸钠或钾)在质子溶剂例如甲醇或水存在下、任选在共溶剂例如甲苯或2-甲基THF存在下被转化为式a化合物。反应在约20℃至约100℃的温度范围发生，可能需要长达24小时完成。
还可通过以下反应流程图III进行式I化合物的制备：
反应流程图III
其中R1、R2、R3、R4、R5和Y如本发明概述中所定义，R50是一个离去基团(例如，碘、溴、氯、三氟甲磺酰氧基等)，每个R’可以是例如氢、甲基等，或两个R’基团可相连形成环硼酸酯。两个R90基团可以均为氢，或两个R90基团合在一起表示适合的氮保护基团(例如，一个R90可以是氢，另一个可以是BOC)。式Ia化合物可通过式7化合物与式8化合物在适宜的过渡金属催化剂(例如，四(三苯基膦)钯(0)或PdCl2(dppf)，适宜的溶剂(例如，DME、二噁烷、甲苯、乙醇等)和适宜的碱(例如，无水碳酸钾或碳酸钠水溶液等)存在下反应。反应在约20℃至约120℃的温度范围进行，可需长达约24小时完成。反应混合液任选进一步反应以脱去任何保护基团。
也可通过相似的铃木反应方案进行制备，在该方案中式7化合物与式8a化合物反应生成式9化合物。在如反应流程图II磺化反应脱掉R90基团保护后，生成式Ia化合物。
本领域技术人员应当理解，其他有机金属偶合反应，例如使用锡试剂(Stille偶合)或锌试剂(根岸偶合)，可能也可用于替换如反应流程图III中所述的使用硼试剂的铃木偶合反应。
式7化合物可通过以下反应流程图IV进行制备：
反应流程图IV
在此情况下，M是一个离去基团(例如，氯、溴、碘、甲磺酰基等)，R50是一个离去基团(例如，碘、溴、氯、三氟甲磺酰氧基等)，且R7如本发明概述中所定义。式7化合物可通过式10的胺化合物与式11化合物反应制备。反应在适宜的碱(例如，三乙胺、碳酸钾等)存在下在例如异丙醇、DMSO、NMP或二噁烷的溶剂中在约25至约120℃的温度下进行。在一些情况下，接下来新引入的R1基团可进一步转化以实现最终预期的R1基团。
式11化合物其中M是甲磺酰基亚组的式11a化合物，可通过以下反应流程图V进行制备：
反应流程图V
其中R7和R50如本发明概述中所定义。式11a化合物可通过将式12化合物与适宜的氧化体系(例如，间氯过氧苯甲酸在二氯甲烷溶剂中，或OxoneTM在甲醇水溶液中，等)在约-78℃至约50℃的温度下反应。反应需长达约24小时完成。
其中R50是氯、溴或碘的式12化合物可反过来通过式13胺化合物与适宜的重氮化试剂***(例如，硝酸与卤化铜(I)盐、亚硝酸异戊酯连同三氟化硼、碘和碘化钾在乙腈中，等)反应。反应在约0至约80℃的温度下发生，并需约1至约6小时完成。
式13化合物可如反应流程图I的描述通过式14化合物与式3化合物反应制备。
式14化合物可通过式15的烯烃氨基腈化合物与肼或肼盐在适宜的溶剂中(例如，乙醇等)环合制备。反应在约25至约100℃的温度下发生，并可能需约1小时至约24小时完成。
或者，式13化合物可从式15化合物通过式15化合物与单取代肼R7NH-NH2一步法制备。反应在约25至约100℃的温度下发生，并可能需约1小时至约24小时完成。
式15化合物可反过来通过式16化合物与DMF DMA或Bredereck试剂、任选在例如DMF共溶剂存在下，在约50至约150℃的温度下制备。反应需约1至约24小时完成。
式16化合物可通过式17化合物在适宜的惰性溶剂(例如，甲苯等)存在下用适宜的酸(例如，对甲苯磺酸等)处理进行制备。反应在约50至约120℃的温度下发生，并需约1至约24小时完成。
最终，式17化合物可通过4-氯-2-(甲硫基)嘧啶在适宜的碱(例如，氢化钠等)和适宜的溶剂(例如，DMSO等)存在下，在约25至约80℃的温度下与叔丁基氰基乙酯反应制备。反应需约1至约24小时完成。
M是卤素的式11化合物亚组式11b化合物，可通过以下反应流程图VI所示进行制备：
反应流程图VI
其中R7和R50如本发明概述中所定义。其中M是卤素的式11b化合物，可通过式20与适宜的重氮化试剂***(例如，硝酸与卤化铜(I)盐、亚硝酸钠与对甲苯磺酸和碘化钾)反应。反应在约0至约80℃的温度下发生，并需约1至6小时完成。或者，式20化合物在羧酸存在下(例如，三氟乙酸等)在0至40℃用重氮化试剂(例如，亚硝酸钠等)处理约0.5至约6小时，之后用碱水溶液(例如碳酸钾水溶液等)得到式21化合物(这类化合物可以互变异构体形式存在)。式21化合物在碱例如N，N-二甲基苯胺或DIPEA，和任选在惰性溶剂例如乙腈或甲苯和添加剂如DMF存在下，在约50至约110℃的温度下用氯化试剂(例如，三氯氧化磷等)后续处理约1至约72小时，得到式11b化合物，其中M是氯。
式20化合物可反过来通过式22化合物与胍或胍盐(例如，盐酸胍或碳酸胍)，任选在碱(例如，氢氧化锂等)存在下在适宜的溶剂中(例如，仲丁醇、NMP等)在约50至约180℃的温度下反应约2至约48小时。
式22化合物可通过式23化合物与DMF DMA或Bredereck试剂，任选在例如DMF的共溶剂存在下在约50至约150℃的温度下反应制备。反应需约1至约24小时完成。
其中R50是氯、溴或碘的式23A化合物可通过式24胺化合物与适宜的重氮化试剂***(例如，硝酸与卤化铜(I)盐、亚硝酸钠及对甲苯磺酸和碘化钾，或亚硝酸异戊酯及三氟化硼-THF、碘、碘化钾和乙腈)反应进行制备。反应在约0至约80℃的温度下发生，并需约1至约6小时完成。
式24化合物可反过来通过式25化合物与有机金属试剂例如甲基锂、甲基锂-溴化锂复合物、或甲基卤化镁试剂，在惰性溶剂例如THF、醚或环丙基甲基醚，在约0至约100℃的温度下反应制备，接着用终止水溶液处理。反应需约2至约48小时完成。
式25化合物可通过如反应流程图I所述通过式26化合物与式3化合物反应制备。或者，式25化合物可从式27化合物制备，其中两个R”基团合在一起形成酸不稳定保护基(例如，亚氨例如亚苄基或氨基甲酸酯例如氨基甲酸叔丁酯)。反应通过式27化合物在例如乙醇溶剂中在约25至约100℃温度下用酸水试剂(例如，浓盐酸等)处理。优选两个R”基团合在一起，形成例如亚苄基的亚胺。
式27化合物可反过来通过式28与式29化合物反应制备，其中两个R”基团合在一起形成酸不稳定保护基(例如，亚胺例如亚苄基或氨基甲酸酯例如氨基甲酸叔丁酯)。反应在溶剂(例如甲苯、甲醇或乙醇)中在约25至约120℃温度下，任选在催化剂例如DMAP存在下进行，并需约1至约24小时完成。任选地，反应在惰性溶剂(例如，THF等)中在碱存在下(例如，正丁基锂等)在约-80至约25℃下进行，约需0.5至12小时的时间。
式29化合物可通过本领域技术人员已知的方法进行制备。例如，式29化合物，其中两个R”基团一起形成亚苄基基团，可通过苯甲醛在例如乙醇或甲苯的溶剂中与单取代肼R7NHNH2在约25至约120℃的温度下约1至约24小时反应而制备。或者，反应可使用单取代肼盐(例如，盐酸盐或草酸盐，等)同一种碱(例如醋酸钠或三乙胺)进行。
式8或式8a化合物可如以下反应流程图VII所述制备：
反应流程图VII
其中R2、R3、R4、R5和Y如本发明概述中所定义，M是离去基团(例如，碘、溴、氯、三氟甲磺酰氧基等)，每个R’可以是例如氢、甲基等，或者两个R’基团可连接起来形成环硼酸酯。两个R90基团可以各自为氢，或两个R90基团合在一起可以是适宜的氮保护基(例如，一个R90可以是氢，另一个可以是BOC)。式8或式8a化合物可以分别通过式50或式50a化合物与二硼化合物(例如双戊酰二硼等)在适宜的过渡金属催化剂(例如PdCl2(dppf)))和适宜的碱(例如，醋酸钾等)在适宜的溶剂(例如，甲苯，二噁烷等)存在下反应制备。反应在约20℃至约120C的温度范围进行，并且可能需长达约24小时完成。式50化合物可反过来通过式51化合物如反应流程图II所述磺化进行制备。本领域技术人员应当理解式51或50a，例如3-溴苯胺类或N-BOC-保护的3-溴苯胺类，可通过各种方法，包括但不限于以下实施例中进一步描述的方法进行制备。
式70化合物可通过以下反应流程图VIII所述进行制备：
反应流程图VIII
其中R8b如本发明概述中所定义，R55选自C1-4烷基或卤素-取代的-C1-4烷基。式70化合物可通过式71化合物在适宜的溶剂中(例如，乙醇或乙酸乙酯)在约25至约75℃的温度下用适宜的还原***(例如，钯催化剂氢化等)处理约0.5至约12小时进行制备。
式71化合物可反过来通过式73化合物的羟基基团转化为适宜的离去基团、之后用叠氮化物阴离子替换的两步法进行制备。第一步，适宜的试剂包括三溴化磷，或甲磺酰氯与适宜的碱例如三乙胺。反应在适宜的溶剂中(例如，二氯甲烷等)在约0至约50℃的温度下进行。对于第二步，替换是用叠氮试剂(例如，叠氮钠等)在适宜的溶剂中(例如，DMF或DMSO)在约25至约150℃的温度下进行。反应需约1至约24小时完成。或者，可通过式73化合物用膦试剂(例如，三苯基膦等)和偶氮二甲酸酯试剂(例如，偶氮二甲酸二乙酯等)在叠氮酸存在下(原位形成叠氮盐，例如叠氮钠和酸)处理一步进行。反应在约-80℃至约75℃的温度下发生，需约1至约24小时完成。
式73化合物可通过式74化合物用氯甲酸酯(例如，氯甲酸甲酯等)或者烷氧基羰基化试剂例如二甲酸二叔丁酯处理进行制备。反应在惰性溶剂(例如，二氯甲烷等)中在约-80至约25℃的温度下进行，需约1至约12小时完成。可任选使用碱例如三乙胺。反应也可在包含例如THF或二噁烷溶剂和碱水溶液例如碳酸氢钠水溶液的两相***中在约25℃的温度下进行约2至约16小时。
式70化合物也可按以下反应流程图IX中所述进行制备：
反应流程图IX
其中R8b如本发明概述中所定义，R55选自C1-4烷基或卤素-取代的-C1-4烷基，且R56是适宜的保护基，例如苄氧基羰基(CBz)。式70化合物可通过式75脱保护制备。例如，式70化合物可通过其中R56是Cbz的式75化合物在适宜的溶剂中(例如，乙醇、甲醇、MTBE或乙酸乙酯)在约25至约75℃下，任选在例如盐酸的酸存在下在约25至约75℃的温度下，用适宜的还原***(例如，钯催化剂等上氢化)处理约0.5至12小时进行制备。或者，脱保护可在转移氢化条件使用适宜的氢供体例如甲酸、甲酸铵或1，4-环己二烯进行。式75化合物可反过来通过式76化合物与氯甲酸酯(例如，氯甲酸甲酯等)或者另外的烷氧基羰基化试剂例如二甲酸二叔丁酯反应制备。反应在惰性溶剂中(例如，二氯甲烷等)在约-80至约25℃的温度下发生，约需1至24小时完成。可任选使用例如三乙胺的碱。反应也可在包含例如THF或二噁烷和碱水溶液例如碳酸氢钠溶液的两相体系中在约25℃的温度下进行约2至约16小时。式76化合物可通过式77化合物保护制备。可选择保护条件以优先提供或基本上是式76的单个异构体。或者，可选择显示其中式77的单个异构体形成较少或不形成的条件，但是其中式76化合物不论怎样以充分的纯度被分离出来用于另外的用途。得到这种纯度的手段可包括游离碱或盐的结晶。其中R56是Cbz的式76化合物，可通过式77化合物用氯甲酸苄酯处理制备。反应在惰性溶剂中(例如，二氯甲烷等)在约-80至约25℃下发生，并需约1至约24小时完成。可任选使用碱例如三乙胺。反应也可在包含例如THF或二噁烷的溶剂和碱水溶液例如碳酸氢钠水溶液的两相***中在约25℃的温度下进行约2至约24小时。可使用式77化合物的盐，与例如三乙胺或碳酸钠的碱，作为加入替换游离碱。
本领域技术人员应当理解，式70化合物可以是单一对映体或对映体混合物，且式70化合物的单一对映体可通过用式74或式77适当的单一对映体化合物起始而得到。
式Ia化合物合成的详细实施例可见于下文的实施例。
制备本发明化合物的另外方法
本发明化合物可通过化合物的游离碱与可药用无机酸或有机酸反应制备成可药用酸加成盐形式。或者，本发明化合物的可药用碱加成盐可通过本发明化合物的游离酸与可药用无机碱或有机碱反应制备。
或者，本发明化合物的盐形式可使用起始物料或中间体的盐制备。
本发明化合物的游离酸或游离碱形式可分别从相应的碱加成盐或酸加成盐制备。例如本发明化合物的酸加成盐形式可通过用适宜的碱(例如，氢氧化铵溶液、氢氧化钠，等)处理被转化成相应的游离碱。本发明化合物的碱加成盐形式可通过适宜的酸(例如，盐酸等)处理被转化成相应的游离酸。
本发明化合物的未氧化形式可从本发明化合物的N-氧化物通过在适宜的惰性有机溶剂(例如，乙腈、乙醇、二噁烷水溶液等)在0至80℃下用还原剂(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷，三溴化磷等)处理进行制备。
本发明化合物的前药衍生物可通过本领域普通技术人员已知的方法(例如，详见Saulnier等人，(1994)，Bioorganic and Medicinal ChemistryLetters，第4卷，1985页)制备。例如，通过本发明的未衍生化化合物与适宜的氨甲酰化试剂(例如，1，1-酰氧基烷基氯甲酸酯、对硝基苯基碳酸酯，等)反应可制备适宜的前药。
本发明化合物的被保护的衍生物可通过本领域普通技术人员已知的手段制备。适用于产生保护基及脱掉保护基的技术可见于T.W.Greene，“有机化学中的保护基”(“Protecting Groups in Organic Chemistry”)，第3版，John Wiley and Sons，Inc.，1999。
本发明化合物可在本发明过程期间被方便地制备或形成，例如溶剂合物(例如，水合物)。本发明化合物的水合物可通过从水／有机溶剂混合溶剂中，使用二噁英、四氢呋喃或甲醇有机溶剂重结晶方便地制备。
本发明化合物可通过化合物的消旋混合物与光学活性的拆分剂反应形成一对非对映异构体化合物、分离非对映异构体并回收光学纯度的对映体，制备成其单个立体异构体。对映体拆分时可使用本发明化合物的共价非对映体衍生物进行，优选可解离的复合物(例如，结晶非对映体盐)。非对映体具有显著不同的物理性质(例如，熔点、沸点、溶解度，反应性，等)，并可通过这些不相似性的优势容易地得到分离。非对映体可通过色谱，优选通过基于溶解度的差异的分离／拆分技术进行分离。然后通过不会消旋化的任何实际手段，回收光学纯对映体，连同拆分试剂。适用于从消旋混合物开始拆分得到化合物立体异构体的技术的更详细的描述可见于JeanJacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“对映体、消旋体和拆分”(“Enantiomers，Racemates and Resolutions”)，John Wiley And Sons，Inc.，1981。
总之，式I化合物可通过涉及以下的方法进行制备：
(a)反应流程图I至IX；和
(b)任选将本发明化合物转化为可药用盐；
(c)任选将本发明化合物的盐转化为非盐形式；
(d)任选将本发明化合物的未氧化形式转化为可药用N-氧化物；
(e)任选将本发明的N-氧化物转化为未氧化形式；
(f)任选拆分单个异构体，例如从异构体混合物拆分为本发明化合物的立体异构体；
(g)任选将本发明的未衍生化化合物转化为可药用前药衍生物；和
(h)任选将本发明化合物的前药衍生物转化为其未衍生化形式。
未具体描述起始物料的制备，所述化合物是已知的，或可用本领域已知方法或下文实施例中公开的方法类似地制备。
本领域技术人员应当理解以上转化仅是本发明化合物制备方法的代表，可相似地使用其他熟知的方法。
实施例
本发明可进一步地通过以下中间体和实施例进行例证，阐述根据本发明的式I化合物制备，但并不限于此。
使用的缩略语如下：苄氧基羰基(Cbz)；叔丁氧基羰基(BOC)；细胞增殖(CP)；二氯甲烷(DCM)；N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)；二氯(1，1-双(二苯基膦)二茂铁)钯(II)(PdCl2(dppf))；1，2-二甲氧基乙烷(DME)；N，N二甲基乙酰胺(DMA)；N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)；N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(DMF DMA)；二甲基亚砜(DMSO)；乙酸乙酯(EtOAc)；高效液相色谱(HPLC)；乙酸异丙酯(iPrOAc)；甲磺酰基(Ms)；2-甲基四氢呋喃(2-甲基THF)；N-甲基吡咯烷酮(NMP)；四氢呋喃(THF)；薄层色谱(TLC)和对甲苯磺酸(pTsOH)。
中间体：氰基-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-乙酸叔丁酯
在23℃下向氢化钠(7.15g，179mmol，60％在油中)在DMSO(100mL)中的混悬液中加入氰基乙酸叔丁酯(24.8g，170mmol)。在氢停止产生后，加入4-氯-2-甲硫基嘧啶(13.7g，85mmol)。反应在80℃下加热16h。然后将反应混合液冷却至室温，并用冰冷的饱和氯化铵(300mL)终止反应。滤出固体，并用水洗涤(2×200mL)，向固体中加入300mL正己烷，将混悬液在60℃下加热1h，然后冷却至室温。滤出固体，并用正己烷洗涤得到标题化合物；1H NMR400MHz(CDCl3)δ7.82(d，1H)，6.74(d，1H)，2.63(s，3H)，2.61(s，1H)，1.52(s，9H)；MS m／z：266.0(M+1)。
中间体：(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-乙腈
向中间体氰基-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-乙酸叔丁酯(5.3g，20mmol)在无水甲苯中(100mL)的溶液中加入对甲苯磺酸(800mg)。将混合液加热回流8h，冷却至室温，用乙酸乙酯萃取。有机层用1N氢氧化钠水溶液和盐水洗涤，并用硫酸钠干燥，滤过并浓缩。粗品用硅胶色谱纯化(3∶1己烷／乙酸乙酯洗脱剂)得到标题化合物：1H NMR400MHz(CDCl3)δ8.56(d，1H)，7.12(d，1H)，3.84(s，2H)，2.57(s，3H)；MS m／z：166.0(M+1)。
中间体：4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺
步骤1：3-(二甲基氨基)-2-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)丙烯腈。将N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(30mL)加至中间体(2-甲硫基嘧啶-4-基)-乙腈(2.62g，15.7mmol)中，将混合液在100℃加热16h。将冷却的反应混合液浓缩，残留物不经进一步纯化使用。
步骤2：4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺。前一步骤的粗品3-(二甲基氨基)-2-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)丙烯腈(全量)和肼一水合物(2.36mL，47mmol)在无水乙醇(75ml)中的混合液在80℃下加热16小时。将反应混合液冷却至室温并浓缩。反应混合液在乙酸乙酯和盐水间分配。分离有机层并用盐水洗涤，硫酸钠干燥，滤过并浓缩。粗品用硅胶色谱(2至5％的甲醇在二氯甲烷中作为洗脱剂)纯化得到4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺：1H NMR400MHz(DMSO-d6)δ11.9(s，1H)，8.3(s，1H)，7.87(s，1H)，7.23(s，br1H)，6.43(s，1H)，5.74(s，1H)，2.53(s，3H)；MS m／z：208.0(M+1)。
中间体：1-异丙基-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺：
将中间体4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺(10.0g，40mmol)溶于THF(200mL)中，接着加入2-碘代丙烷(6.3mL，63mmol)和甲醇钠(25％重量在甲醇中的溶液，14.3ml，63mmol)。混合液在氮气氛下50℃加热搅拌3d，然后真空浓缩。将残留物吸收至乙酸乙酯(200mL)中，用碳酸钾水溶液和盐水洗涤，然后硫酸钠干燥，滤过并浓缩得到棕色残留物。将残留物在硅胶上(己烷／乙酸乙酯洗脱剂)进行色谱分离得到固体状的1-异丙基-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺；1H NMR400MHz(CDCl3)δ8.23(d，J＝5.6Hz，1H)，7.60(s，1H)，6.83(d，J＝5.6Hz，1H)，5.23(d，J＝2.8Hz，2H)，4.21-4.25(m，1H)，2.50(s，3H)，1.37(d，J＝6.8Hz，6H)；MS m／z：250.1(M+1)。
相似地制备：1-乙基-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺和1-甲基-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺。
中间体：4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶：
中间体1-异丙基-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺(4.0g，16.0mmol)、亚硝酸异戊酯(13.2g，112mmol)和亚甲基碘(30mL)的混合液在100℃加热3h。真空除去挥发性物质得到深色残留物，其通过硅胶色谱纯化(2：1己烷／乙酸乙酯洗脱剂)得到固体状的标题化合物；MS m／z：361.1(M+1)。
相似地制备：4-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶；4-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶和4-(3-碘-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶。
中间体：4-(3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶
将4-(3-碘-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶(270mg，0.85mmol)和对甲苯磺酸一水合物(32mg，0.17mmol)在3，4-二氢-2H-吡喃(1ml)中的溶液在60℃加热5h。将冷却的混合液用乙酸乙酯稀释，混合液用水和盐水洗涤，然后硫酸钠干燥，滤过，浓缩。残留物在硅胶上(10％乙酸乙酯在己烷中作为洗脱剂)进行色谱分离得到标题化合物。MS(m／z)：402.7(M+1)。
中间体：4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶：
0℃下向中间体4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶(4.51g，12.5mmol)在二氯甲烷(60mL)中的溶液中加入间氯过氧苯甲酸(3.65g，77％纯度，16.3mmol)。在氮气下0℃搅拌混合液3h，然后用乙酸乙酯稀释，并用碳酸钾水溶液和盐水洗涤。用硫酸镁干燥有机层，滤过并浓缩，得到固体状的4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶。MSm／z：393.0(M+1)。
相似地制备：4-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶和4-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶。
中间体：1-亚苄基-2-异丙基肼
向包含在125ml50％乙醇中的无水醋酸钠(8.2g，0.1mol)的圆底烧瓶中加入异丙基肼HCl盐(11.1g，0.1mole)和苯甲醛(10.6g，0.1mole)。室温下搅拌混合液20h。反应用醚萃取(3x250ml)。合并有机层，并用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，硫酸钠干燥。滤过、浓缩并与甲苯(3x)共蒸发得到油状的标题化合物。MS m／z163.3(M+1)。
相似地制备：1-亚苄基-2-乙基肼，从乙肼草酸盐开始，分别使用甲醇和三乙胺替换乙醇和醋酸钠；和1-亚苄基-2-甲基肼，从甲基肼开始，使用甲醇作为溶剂，不加碱。
中间体：2-((2-亚苄基-1-异丙基肼基)亚甲基)-丙二腈：
在氩气氛下将中间体1-亚苄基-2-异丙基肼(12.9g，0.079mol)在200ml无水THF中的溶液在干冰／丙酮浴中冷却。向该溶液中通过注射器加入正丁基锂(1.6M在己烷中，66ml，0.106mol)。加完后，将混合液在干冰温度下另搅拌5分钟。加入(2-(乙氧基亚甲基)丙二腈(13.6g，0.11mol)在THF(30ml)中的溶液。将混合液在干冰温度下搅拌0.5h，然后用饱和碳酸氢钠水溶液终止反应。使终止反应后的混合物温热至室温，并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用硫酸钠干燥，滤过并浓缩。将残留物超声混悬在乙醇中。滤过收集得到的沉淀，并用小量的冷乙醇洗涤得到黄色固体状的2-((2-亚苄基-1-异丙基肼基)亚甲基)丙二腈。将母液浓缩，残留物用硅胶柱色谱(1∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化残留物得到另外的2-((2-亚苄基-1-异丙基肼基)亚甲基)丙二腈。MS m／z239.2(M+1)。
中间体2-((2-亚苄基-1-乙基肼基)亚甲基)-丙二腈：
向2-(乙氧基亚甲基)丙二腈(15.2g，0.124mole)在100ml甲苯中的溶液中加入中间体1-亚苄基-2-乙基肼(18.4g，0.124mole)。使混合液在室温下静置，生成沉淀。反应混合液再搅拌16h。在滤器上收集沉淀，并用小量冷乙醇洗涤得到固体状的2-((2-亚苄基-1-乙基肼基)亚甲基)丙二腈。
相似地制备2-((2-亚苄基-1-甲基肼基)-亚甲基)丙二腈。
中间体：3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-腈
将中间体2-((2-亚苄基-1-异丙基肼基)-亚甲基)丙二腈(9.42g，40mmol)、浓盐酸(5ml)和乙醇(50ml)的混合液回流加热20min。将反应混合液浓缩，加入醚(50ml)。将混合液超声，然后弃去上面的醚层。向残留物中加入20ml的5N氢氧化钠水溶液，混合液用二氯甲烷萃取(3x)。合并有机层，用硫酸钠干燥，滤过并浓缩。残留物用硅胶柱色谱(1∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化得到棕色固体状的3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-腈。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.09(s，1H)，5.51(s，2H)，4.22(m，1H)，1.31(d，J＝7Hz，6H)；MS m／z151.2(M+1)。
相似地制备：3-氨基-1-乙基-1H-吡唑-4-腈和3-氨基-1-甲基-1H-吡唑-4-腈。
中间体：1-(3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮
0℃下向中间体3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-腈(5.29g，36.5mmol)在200ml无水THF中的溶液中加入甲基溴化镁溶液(3M在醚中，56.5ml，0.17mol)。反应混合液加热回流4h。将混合液冷却至0℃，然后用10％盐酸水溶液调至中性pH终止反应。反应用大量的9∶1二氯甲烷／异丙醇萃取。合并有机层并用硫酸钠干燥，滤过并浓缩。粗品用硅胶柱色谱(1∶1乙酸乙酯／己烷至9∶1乙酸乙酯／甲醇作为洗脱剂)纯化得到浅棕色固体状的标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.18(s，1H)，5.62(s，2H)，4.23(m，1H)，2.20(s，3H)，1.37(d，J＝7Hz，6H)；MS m／z168.2(M+1)。
相似地制备：1-(3-氨基-1-乙基-1H-吡唑-4-基)乙酮和1-(3-氨基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙酮。
中间体：1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮
0℃下向中间体1-(3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮(3.97g，24mmol)和p-TsOH.H2Ｏ(9.07g，48mmole，2eq)在150ml的乙腈中的溶液中滴加亚硝酸钠溶液(2.97g，43mmole，1.8eq)和碘化钾(8.0g，48mmol，2.0eq)在20ml水中的溶液。在此温度下搅拌混合液10分钟，然后使其温热至室温并搅拌3h。将混合液浓缩，然后用水稀释，并用碳酸钠水溶液中和至pH9至10。混合液用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的有机层用硫代硫酸钠溶液洗涤，硫酸钠干燥，滤过并浓缩。将残留物用硅胶柱色谱纯化(1∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)得到浅棕色固体状的标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.51(s，1H)，4.53(m，1H)，2.37(s，3H)，1.41(d，J＝7Hz，6H)；MSm/z279.1(M+1)。
相似地制备：1-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)乙酮和1-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙酮。
中间体：3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮：
将中间体1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮(5.0g，18.0mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(50mL)的混合液在155℃下加热20h。混合液真空浓缩得到粗品标题化合物。MS m／z334.0(M+1)。
相似地制备：3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮和3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮。
中间体：4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
在密封的反应容器中在110℃加热搅拌粗品中间体3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(4.0g，12.0mmol)、胍盐酸盐(2.63g，27.6mmol)、氢氧化锂(635mg，27.6mmol)和仲丁醇(50ml)的混合液20h。将冷却的反应混合液浓缩，然后加水，并用乙酸乙酯萃取混合液。合并的萃取物用硫酸钠干燥，滤过，并浓缩。向固体残留物中加入乙酸乙酯，超声混合液。滤器上收集固体产物，用乙酸乙酯洗涤，并干燥得到褐色固体状的标题化合物。MS m／z330.0(M+1)。
相似地制备：4-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺和4-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺。
中间体：4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-醇
0℃下向搅拌的中间体4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(500mg，1.52mmol)和三氟乙酸(15ml)的混合液中逐份加入亚硝酸钠(314mg，4.55mmol)。使混合液温热至室温并搅拌1h，然后真空除去溶剂。粗品混合液用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸钾水溶液和盐水洗涤，得到固体状的标题化合物。MS m／z331.0(M+1)。
相似地制备：4-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-醇和4-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-醇。
中间体：2-氯-4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶
将中间体4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-醇(438mg，1.33mmol)在三氯氧化磷(10ml)中的溶液在110℃加热16h。混合液真空浓缩，然后仔细加入碳酸氢钠水溶液，混合液用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取液用硫酸钠干燥，滤过并浓缩得到黄色固体状的标题化合物。MS m／z349.0(M+1)。
相似地制备：2-氯-4-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶和2-氯-4-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶。
中间体：(S)-甲基1-羟基丙-2-基氨基甲酸酯
0℃下向(S)-丙氨醇(alaninol)(10g，130mmol)和碳酸氢钠(32.8g，390mmol)在THF-H2Ｏ(1∶1，650mL)中的溶液中滴加氯甲酸甲酯(11.4mL，143mmol)。搅拌混合液并使其温热至室温持续4h，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用1N氢氧化钠水溶液和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，滤过并浓缩得到粗品标题化合物，其不经进一步纯化使用。MS m／z134.1(M+1)。
相似地制备：(R)-甲基1-羟基丙-2-基氨基甲酸酯，使用(R)-alinol替换(S)-丙氨醇；和(S)-1，1-二甲基乙基1-羟基丙-2-基氨基甲酸酯，使用二碳酸二叔丁酯替代氯甲酸甲酯。
中间体：(S)-甲基1-叠氮基丙-2-基氨基甲酸酯：
向中间体(S)-甲基1-羟基丙-2-基氨基甲酸酯(2.65g，20mmol)和三乙胺(7.0ml，50mmol)在无水二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入甲磺酰氯(1.91mL，23.9mmol)。混合液室温搅拌3h，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用1N氢氧化钠溶液和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，滤过，并浓缩。然后将粗品甲磺酸盐溶于干燥的DMF(70mL)中，并加入叠氮化钠(5.2g，80mmol)。80℃加热搅拌混合液2h。将冷却的反应混合液浓缩，残留物在乙酸乙酯和盐水之间分配。分离有机层并用盐水洗涤，硫酸钠干燥，滤过并浓缩。残留物用硅胶色谱(8∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化得到(S)-甲基1-叠氮基丙-2-基氨基甲酸酯。MS m／z159.1(M+1)。
相似地制备：(R)-甲基1-叠氮基丙-2-基氨基甲酸酯和(S)-1，1-二甲基乙基1-叠氮基丙-2-基氨基甲酸酯。
中间体：(S)-甲基1-氨基丙-2-基氨基甲酸酯
向中间体(S)-甲基1-叠氮基丙-2-基氨基甲酸酯(2.86g，18.2mmol)在乙酸乙酯(200ml)中的溶液中加入10％钯炭(湿，286mg)。将瓶脱气，并再充入氢气(气球，1个大气压)，并在室温下搅拌混合液16小时。将反应混合液通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。浓缩滤液得到粗品(S)-甲基1-氨基丙-2-基氨基甲酸酯，其不经纯化进一步使用。1H NMR400MHz(CDCl3)δ4.79(s，1H)，3.71-3.65(m，1H)，3.66(s，3H)，2.75(dd，1H)，2.65(dd，1H)，1.14(d，3H)；MSm/z133.1(M+1)。
相似地制备：(R)-甲基1-氨基丙-2-基氨基甲酸酯和(S)-1，1-二甲基乙基1-氨基丙-2-基氨基甲酸酯。
中间体：(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯：
将中间体2-氯-4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶(1.4g，4.01mmol)、(S)-1-氨基丙-2-基氨基甲酸甲酯(0.8g，6mmol)和三乙胺(2.8ml，20mmol)在异丙醇(30ml)和二噁烷(20mL)中的溶液在密封容器中在125℃下加热48小时。真空浓缩冷却的混合液，向残留物中加入碳酸氢钠水溶液。混合液用乙酸乙酯萃取，合并的萃取物用硫酸钠干燥。滤过并浓缩。粗品残留物用硅胶柱色谱(1∶2己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化得到白色固体状的标题化合物。MS m／z445.0(M+1)。
相似地制备：(R)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；(S)-叔丁基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；3-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙腈；4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-N-甲基嘧啶-2-胺和
N1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N2，N2-二甲基乙-1，2-二胺。
中间体：N-(3-溴-2，4-二氟苯基)丙-1-磺酰胺
将3-溴-2，4-二氟苯胺(4.16g，20mmol，EP184384)、正丙烷磺酰基氯(4.6ml，40mmol)、吡啶(8ml)、DMAP(97mg)和DCM(100ml)的溶液室温搅拌16h。加入碳酸氢钠水溶液，混合液用乙酸乙酯萃取。有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。粗品用硅胶色谱(8∶1至3∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化得到标题化合物。MS m／z313.9(M+1)。
中间体：3-氟-4-碘代吡啶-2-胺
-78℃下向2-氨基-3-氟吡啶(1.0g，8.9mmol)在无水THF(40ml)中的溶液中滴加正丁基锂(1.6M在己烷中，13.9ml，22.3mmol)。加完后，混合液在-78℃下搅拌1h，然后加入碘(10.2g，40.1mmol)在THF(20ml)中的溶液。混合液用乙酸乙酯萃取，有机萃取物用硫代硫酸钠、碳酸氢钠和盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥并浓缩。粗品用硅胶柱色谱(8∶1至2∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化得到标题化合物。MS m／z238.9(M+1)。
相似地制备：3-氯-4-碘代吡啶-2-胺。
中间体：3-溴-2，5，6-三氟苯胺
向微波管中加入1-溴-2，3，4，5-四氟苯(1.0g)和28％氢氧化铵水溶液(5mL)。150℃下微波照射加热混合液2小时，然后将混合液倾至水中，并用己烷萃取。分离有机层，用MgSＯ4干燥，然后浓缩。残留物用硅胶快速色谱纯化(9∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)得到无色液体状的标题化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.75(m，1H)，3.95(br s，2H)ppm；MS m／z：226，228(M+H)+。
中间体：2，4-二溴-3，6-一氯苯胺
2，5-一氯苯胺(0.2g)、N-溴代琥珀酰亚胺(0.48g)和THF(20mL)的混合液室温搅拌2小时。除去溶剂，残留物用硅胶快速色谱纯化(8∶2己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)得到标题化合物。MS m／z：318(M+H)+。
中间体：1，3-二溴-2，5-二-氯苯
将2，4-二溴-3，6-二氯苯胺(5.0g)、亚硝酸叔丁酯(3.3g)和EtOH(50mL)的搅拌的混合液在密封管中在50℃加热2小时。将混合液浓缩，残留物用硅胶快速色谱纯化(己烷作为洗脱剂)得到标题化合物。MS m／z：303(M+H)+。
中间体：3-溴-2-氯-5-氟苯胺
步骤1：3-溴-2-氯-N-(二苯基亚甲基)-5-氟苯胺。将2，6-二溴-4-氟-1-氯苯(865mg，3mmol)、二苯甲酮亚胺(0.61ml，3.6mmol)、Pd2(dba)3(137mg，0.15mmol)，叔丁醇钠(432mg，4.5mmol)、(S)-BINAP(280mg，0.45mmol)和甲苯(30ml)的混合液在80℃下加热16h。混合液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥，并浓缩。粗品用硅胶快速色谱(40∶1至20∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化得到粉末状标题化合物。MS m／z388.9(M+1)。
步骤2：3-溴-2-氯-5-氟苯胺。3-溴-2-氯-N-(二丙基亚甲基)-5-氟苯胺(1.16g)在THF(20ml)中的溶液用2N盐酸(1.5ml，1eq)处理，混合液室温搅拌2h。混合液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥并浓缩。粗品残留物在硅胶上进行色谱分离(40∶1至15∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)得到污染了二苯甲酮的标题化合物。MS m／z223.9(M+1)。
相似地制备：3-溴-2，5-二氯苯胺；3-溴-2-氯-5-甲基苯胺和3-溴-2，5-二氟苯胺。
中间体：3-溴-5-氯-2-氟苯甲酸
将2-溴-4-氯-1-氟苯(4.31g，20mmol)溶液滴加至-78℃LDA在THF中的溶液中(从二异丙基胺(3.38ml，24mmol)和n-BuLi(1.6M，13.1ml，21mmol)制钠。在-78℃下混合液搅拌1h，然后被缓慢通过插管转移(～30-60min)至搅拌的-78℃干冰与THF(40mL)混合液中。混合液在-78℃下搅拌1h，然后使其温热至室温(气体生成)。将混合液浓缩，并用50ml1N氢氧化钠溶液处理。混合液用乙酸乙酯萃取(弃去)。水层用1N盐酸酸化，然后用氯仿萃取(3x400ml)。用硫酸钠干燥氯仿萃取物，滤过，并浓缩得到粗品标题化合物。产品被少量异构体产物2-溴-6-氯-3-氟苯甲酸污染。标题化合物3-溴-5-氯-2-氟苯甲酸的1H NMR：(400MHz，CDCl3)δ7.93(dd，1H，J＝2.8，5.6Hz)，7.79(dd，1H，J＝2.8，5.6Hz)ppm。
相似地制备：3-溴-2，6-二氟苯甲酸和3-溴-2-氟-5-甲基苯甲酸。
中间体：3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯
粗品中间体3-溴-5-氯-2-氟苯甲酸(2.03g，8mmol)、叠氮化磷酸二丙酯(2.07mL，9.6mmol，1.2eq)和DIPEA(1.67mL，9.6mmol，1.2eq)在1∶1叔丁醇／甲苯(25ml)中的溶液在110℃下加热36h。将混合液浓缩，然后在乙酸乙酯和水之间分配。有机层用盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，滤过，并浓缩。粗品用硅胶色谱纯化(30∶1至10∶1己烷／乙酸乙酯作为洗脱剂)得到标题化合物。MS m／z：267.8(M+H)+。(M-tBu)。
相似地制备：3-溴-2，6-二氟苯基氨基甲酸叔丁酯和3-溴-2-氟-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯。
中间体：3-溴-5-氯-2-氟苯胺
3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(900mg，2.78mmol)在DCM／TFA(1∶1，20mL)中的溶液室温下搅拌1h。将反应混合液浓缩，然后将残留物吸收至乙酸乙酯中，并用碳酸氢钠水溶液与盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，滤过并浓缩得到标题化合物(736mg)。MS m／z223.9(M+1)。
中间体：5-溴-3-甲氧基-2-甲基苯胺：
4-溴-2-甲氧基-6-硝基甲苯(500mg，2.032mmol)、乙酸(20ml)和铁(1135mg，20.32mmol)的混杂反应混合液室温下搅拌24小时。加入乙酸乙酯，然后将混合液通过硅藻土滤过，将滤液浓缩。残留物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。水层用另外的乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，滤过并浓缩得到标题化合物。MS m／z：218.0(M+H)+。
中间体：5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
中间体3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(1.45g，4.46mmol)、联硼酸频那醇酯(1.7g，6.69mmol)、醋酸钾(1.53g，15.6mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(163mg，0.22mmol)和二噁烷(100ml)的混合液在密封管中100℃加热16h。粗品反应混合液被吸收至乙酸乙酯中，并用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，滤过并浓缩。粗品化合物用热己烷(600ml)稀释，加热至65℃持续30min，然后冷却至室温。棕色混合液通过硅藻土过滤，滤饼用己烷洗涤。浓缩合并的滤液得到黄色油状的粗品标题化合物。MSm/z233(M-频那醇-tBu)。
相似地制备：5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2，6-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；N-(2，4-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基)丙-1-磺酰胺；2-(2-氟-3-硝基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环；2，5-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氯-5-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2，5-二氯-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氯-5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氟-5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；3-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧杂硼戊环-2-基)吡啶-2-胺；2，3，6-三氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)吡啶-2-胺；3-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；3-甲氧基-2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺。
中间体：2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺
中间体2-(2-氟-3-硝基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环(500mg)、10％钯炭(50mg)和乙酸乙酯(20ml)的混合液在1大气压下氢气下搅拌16h。混合液通氮气并滤过。将滤液浓缩得到标题化合物，其不经进一步纯化使用。MS m／z237.1(M+1)。
实施例1
N-[(2S)-1-[(4-{3-[2，6-二氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑
-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物7)
将粗品中间体N-(2，4-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基)丙-1-磺酰胺(854mg)、中间体(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(350mg，90％pure)、四(三苯基膦)钯(0)(90mg)、2M碳酸氢钠水溶液(6ml)、甲苯(50ml)和乙醇(6ml)的混合液在80℃加热16h。冷却的混合液用乙酸乙酯萃取，合并的萃取物用盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥并浓缩。粗品用硅胶色谱纯化(70∶1至40∶1DCM／甲醇作为洗脱剂)得到标题化合物。
实施例2
N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氯-5-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]
嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物15)
步骤1：(S)-甲基1-(4-(3-(3-氨基-2-氯-5-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。粗品中间体2-氯-5-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺(214mg)、中间体(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(68mg，0.14mmol)、四(三苯基膦)-钯(0)(16mg)、2M碳酸氢钠水溶液(3ml)、甲苯(18ml)和乙醇(3ml)的混合液在85℃加热16h。混合液用乙酸乙酯萃取，合并的有机萃取物用盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥并浓缩。粗品用硅胶色谱纯化(60∶1至40∶1DCM／甲醇作为洗脱剂)得到被(S)-甲基1-(4-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯污染的标题化合物(46mg)。MS m／z462.1(M+1)。
步骤2：(S)-甲基1-(4-(3-(2-氯-5-氟-3-(甲亚磺酰氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。将步骤1的苯胺产物(46mg)、吡啶(2ml)、三乙胺(1mL)、DCM(4ml)和甲磺酰氯(23ul，0.3mmol)的混合液室温搅拌16h。将粗品反应混合液浓缩，然后将残留物吸收至甲苯(9ml)、乙醇(1ml)、碳酸钠(2g)和水(10ml)中。搅拌的混合液在85℃加热16h。步骤1后处理得到粗品，其经硅胶色谱纯化(60∶1至40∶1DCM／甲醇作为洗脱剂)得到标题化合物。
实施例3
N-[(2S)-1-[(4-{3-[5-氯-2-氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑
-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物1)
步骤1：(S)-甲基1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(叔丁氧基羰基氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。将粗品中间体5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(2.0g)、中间体(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(600mg，1.34mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(150mg，0.13mmol)、2M碳酸氢钠水溶液(6.7ml，13.5mmol)、甲苯(80mL)和乙醇(6mL)的混合液在80℃下加热16h。混合液用乙酸乙酯萃取，合并的有机萃取物用盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥并浓缩。粗品用硅胶色谱纯化(80∶1至60∶1DCM／甲醇作为洗脱剂)得到被三苯基膦氧化物污染的标题化合物。MSm／z562.1(M+1)。
步骤2：(S)-甲基1-(4-(3-(3-氨基-5-氯-2-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。部分纯化的(S)-甲基1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(叔丁氧基羰基氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(1.15g)在DCM(50mL)和TFA(20mL)中的溶液室温搅拌1h。除去溶剂，然后加入碳酸氢钠溶液。混合液用乙酸乙酯萃取，然后合并的有机萃取物用碳酸氢钠和盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥并浓缩。通过硅胶色谱(60∶1至40∶1DCM／甲醇作为洗脱剂)得到产物；MS m／z462.1(M+1)。
步骤3：N-[(2S)-1-[(4-{3-[5-氯-2-氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯。(S)-甲基1-(4-(3-(3-氨基-5-氯-2-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(41mg，0.09mmol)、三乙胺(1ml)和DCM(4ml)的混合液用丙磺酰氯(40mg，0.27mmol)处理。混合液室温搅拌16h。将粗品混合液浓缩，残留物被吸收至甲苯(9ml)、乙醇(1ml)、碳酸钠(2g)和水(10ml)的混合液中。将搅拌的混合液在85℃加热16h。对步骤1后处理得到粗品，其经硅胶色谱纯化(60∶1至40∶1DCM／甲醇作为洗脱剂)得到标题化合物。
实施例4
N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-4- 基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物33)和
N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}
氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物31)
步骤1：5-氯-2-氟-3-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)苯胺。按照实施例3、步骤1的方法制备，从中间体4-(3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶和中间体5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺开始。MSm/z420.0(M+1)。
步骤2：N-(5-氯-2-氟-3-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)苯基)甲磺酰胺)和N-(5-氯-2-氟-3-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)苯基)-N-(甲基磺酰基)甲磺酰胺。向5-氯-2-氟-3-(4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)苯胺(233mg，0.55mmol)和三乙胺(2mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入甲磺酰氯(0.13mL，1.66mmol)。混合液室温搅拌16h，得到标题化合物(LCMS分析)的混合物。加入乙酸乙酯，混合物用水和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥有机层，滤过，并浓缩得到粗品标题混合液，其不经进一步纯化使用。MS m／z单-磺酰胺498.0(M+1)；双-磺酰胺576.0(M+1)。
步骤3：N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯。将步骤2的粗品混合物溶于THF-H2O(1∶1，30mL)中，室温下用
(1.68g，2.75mmol)处理。混合液室温搅拌16h，然后加入乙酸乙酯。有机层用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，滤过并浓缩。粗品残留物溶于NMP(5mL)，用中间体(S)-甲基1-氨基丙-2-基氨基甲酸酯(146mg，1.1mmol)和碳酸钠(233mg，2.2mmol)处理。混合液在110℃搅拌加热16h。冷却的反应混合液用乙酸乙酯稀释，然后用水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，滤过，并浓缩。残留物在硅胶色谱上进行色谱分离(2％甲醇在二氯甲烷中作为洗脱剂)得到标题化合物。
步骤4：N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯。向(2S)-1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基亚磺酰氨基)苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸甲酯(94mg，0.16mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入浓盐酸(0.5mL)。混合液室温搅拌16h。加入碳酸氢钠水溶液调pH至9，混合液用乙酸乙酯萃取。有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。粗品经硅胶色谱纯化(30∶1至15∶1二氯甲烷／甲醇作为洗脱剂)得到标题化合物。
实施例5
N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]
嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物9)
将甲磺酰氯(0.277mL，3.57mmol)加至(S)-甲基1-(4-(3-(3-氨基-5-氯-2-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(550mg，1.2mmol)在DCM(30mL)和吡啶(10mL)中的溶液中，混合液室温搅拌16h。加入碳酸氢钠水溶液，混合液用乙酸乙酯萃取，并用盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥，并浓缩。粗品用硅胶色谱纯化(60∶1至40∶1DCM／甲醇)得到标题化合物。另外的合成方法见下文的实施例6。
从反应混合物中还分离出：N-[(2S)-2-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物32)；N-{3-[4-(2-氨基嘧啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基]-5-氯-2-氟苯基}甲磺酰胺(表1中的化合物30)。
实施例6
N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]
嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(表1中的化合物9)
步骤1：1-亚苄基-2-异丙基肼。向装有机械搅拌器、温度计和另外加料漏斗的反应器中，在氮气流下加入异丙基肼盐酸盐(712g，6.43mol)、醋酸钠(528g，6.43mol)和50％乙醇(4500mL)。混合液在20℃下搅拌5min。在保持批温度在23℃以下的同时加入苯甲醛(683g，6.43mol)。混合液在20℃下搅拌20h。加入甲苯(6500mL)，保持搅拌5min。分离有机层。将饱和碳酸氢钠水溶液(4800mL)缓慢加至剧烈搅拌的有机层中(注：水层的pH为～8.0)。分离有机层，并用饱和碳酸氢钠水溶液(3000mL)洗涤。然后分离有机层，并40℃真空浓缩(50→20毫米汞柱)得到黄色油状的标题化合物(不经进一步纯化使用)。
步骤2：2-((2-亚苄基-1-异丙基肼基)亚甲基)-丙二腈。向装有机械搅拌器、温度计和加料漏斗的反应瓶中，在氮气流下加入(乙氧基亚乙基)丙二腈(755g，6.18mol)、DMAP(150g，1.23mol)和乙醇(6400mL)。搅拌混合液得到深橙色溶液，从20至12℃观察到吸热现象。1-亚苄基-2-异丙基肼(1101g，粗品)在15min被缓慢加入，放热温度至32℃，并得到橙色混悬液。将橙色混悬液加热至50℃。50℃下保持30min得到深棕色混悬液。向混合液中加入乙醇(3200mL)，将混合液冷却至20℃并在20℃下保持1h。滤过混悬液，固体滤饼用乙醇(3000mL)洗涤。收集固体，并40℃／5毫米汞柱真空干燥3h，精制出黄色固体状的标题化合物。HPLC纯度>99％。
步骤3：3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-腈。在氮气流下向装有机械搅拌器、温度计、冷凝管和加料漏斗的反应瓶中加入2-((2-亚苄基-1-异丙基肼基)亚甲基)-丙二腈(632.6g，2.65mol)、MeOH(2.5L)和浓(12N)HCl(329.0mL，3.94mol)。将混合液加热至63℃，并在63℃保持30min得到橙色溶液。将混合液冷却至15℃。加入庚烷(4L)和MTBE(1L)，混合物搅拌5min。然后在30min里在15℃至25℃下以水流方式加水(7.5L)。水加完后混合液在25℃下搅拌10min。分离庚烷／MTBE层。水层用(4∶1v／v)庚烷／MTBE混合液(2x5L)洗涤。25℃下每次洗涤搅拌混合液10min。分层。将固体氯化钠(1Kg)加至水层。然后将碳酸钾水溶液缓慢加至水层，以控制CＯ2形成，并调pH至～9.0。然后水层用CH2Cl2(1x2.2L，1x800mL)萃取两次。合并的CH2Cl2层用MgSＯ4干燥，滤过并将滤液在浴温30℃真空浓缩(200毫米汞柱)直至残重为～1Kg。将庚烷(6.0L)搅拌下缓慢加(在～20min)至CH2Cl2溶液中，形成混悬液。将混合液在内温25℃下真空(60毫米汞柱)浓缩直至残留体积为～6.2L。将混悬液冷却至15℃，并保持在该温度下10min。产物滤过，固体用庚烷洗涤(1L)。30℃下真空干燥固体(5毫米汞柱)4h，精制出黄色固体状的标题化合物。HPLC纯度>99％。
步骤4：1-(3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-乙酮。向装有机械搅拌器、温度计、回流冷凝器、加热／冷却能力、加料漏斗和氮气入口／出口的反应瓶中在20℃氮气下加入3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-腈(274g，1.82摩尔)和环戊基甲基醚(2600mL)。将混悬液冷却至-10℃。在-10℃至0℃将1.5M甲基锂／溴化锂复合物在***中的溶液(6.0L，9.00mol)2.5h里滴加进去。当甲基锂加完时，将反应混悬液迅速温热至5℃至10℃，并保持在该温度范围1h。将混合液冷却至0℃，在5-10℃下滴加2N HCl(6.0L)。分出(上)有机层，用2N HCl(500mL)萃取。合并的水层在室温下搅拌16h。将混合液冷却至15℃，并用50％NaOH(260.0g)碱化得到～11.0的pH。混合液用CH2Cl2(1x2.0L，1x1L)萃取。合并的CH2Cl2层用MgSＯ4干燥，滤过并真空浓缩得到黄色固体(278g)。将固体溶于EtOAc(750mL)加热至65℃。将溶液冷却至室温，得到混悬液。室温下在40min里缓慢加入庚烷(1500mL)。将混悬液冷却至-10℃，并在-10℃保持30min。滤过混悬液并将滤饼用庚烷洗涤(300mL)。40℃真空干燥固体(5毫米汞柱)3h，得到浅棕色固体状的标题化合物。HPLC纯度>99％。M.P.136-139℃。
步骤5：1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-乙酮。向装有机械搅拌器、温度计和加料漏斗的反应瓶中在氮气流下加入1-(3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-乙酮(250.0g，1.49mol)和乙腈(3725mL)。将混合液冷却至-20℃。保持内温<-10℃的同时，滴加入BF3.THF(313.1g，2.23mol)。保持内温<-10℃的同时滴加亚硝酸异戊酯(227.5g，1.94mol)。使混合液温热至10℃，并在10℃下搅拌30min。在10-15℃在剧烈搅拌下将混合液以细流的方式加至含I2(28.5g，0.112mol)、KI(371.9g，2.24mol)和乙腈(1160mL)的混合液的瓶中。加入后产生氮气和略微放热。室温搅拌混合液30min。HPLC显示无重氮化物中间体剩余。然后在15-20℃下加入亚硫酸氢钠(157.1g，1.51mol)在8％氯化钠溶液(4360mL)中的溶液。混合液用饱和碳酸钾碱化至pH～8.5。分离上层的乙腈层并浓缩得到油状残留物。将油溶于iPrOAc(2770mL)，用饱和碳酸钠水溶液(1100mL)洗涤。分离iPrOAc层，并浓缩至残留物体积为～1.5L。得到混悬液。在20℃下在30min里向该混悬液中加入庚烷(5.5L)。在庚烷加入后，混悬液在20℃下搅拌10min。将混悬液滤过，固体用庚烷(1L)洗涤，然后在20℃下真空(5毫米汞柱)干燥16h得到标题化合物。MP：90-92℃。
步骤6：3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-丙-2-烯-1-酮。向装有机械搅拌器、温度计和加料漏斗的反应瓶中在氮气流下加入1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-乙酮(640g，2.30mol)和DMF(6.4L)。将得到的橙色溶液加热至120℃。将Bredereck试剂(598.6g，3.43mol)一次性加入。加入后引起批温度降低至114℃，溶液颜色变成深橙色。混合物在120℃搅拌20min。将混合液冷却至室温，然后在5mmHg60℃浓缩得到油状残留物。将残留物温热至74℃溶于iPrOAc(2400mL)。将混合液冷却至35℃，搅拌得到混悬液。在35℃至室温下1小时里将庚烷(6000mL)加入。将混合液冷却至-15℃，滤过，固体真空40℃下干燥3h，得到固体的标题化合物。HPLC纯度>98％。MP：106-109℃。
步骤7：4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶-2-胺。向装有机械搅拌器、温度计、Dean-Stark分离器和和冷凝器的反应瓶中在氮气流下加入(E)-3-二甲基氨基-1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-丙-2-烯-1-酮(735g，2.2mol)、碳酸胍(596g，3.3mol)和NMP(5200mL)。混合液被加热至130℃并在130℃下保持5h。(注：通过Dean-Stark分离器收集任何低沸点组分)。将混合液冷却至80℃，在80℃至35℃在～1h里加入15％氯化钠水溶液(7500mL)。因氯化钠水溶液的加入产物开始沉淀大约一半。将混合液进一步冷却至室温，并保持30min。滤过收集固体产物，并在65℃真空干燥16h得到固体状的标题化合物。HPLC纯度>99％。MP：167-169℃。
步骤8：4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶-2-醇。向装有机械搅拌器和温度计的反应瓶中在氮气流下加入TFA(748.8mL)。在使用冷水浴保持内温在30℃以下的同时，逐份地加入4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶-2-胺(300g，0.91mol)。混合液室温下搅拌10min得到溶液。将混合液冷却至20℃，逐份地在22-28℃迅速搅拌下5h里加入亚硝酸钠(79.7g，1.27mol)。(注：观察到一些气体产生，有微量放热，使用冷水浴即容易控制)。加入DCM(12L)，并将混合液温热至27℃。加水(4400mL)。(注：在开始时有气体产生)。缓慢向混合液中加入饱和碳酸钾溶液(～1500mL)以碱化至pH～9.0(注：有大量气体产生)。向混合液中加入亚硫酸氢钠(32g，0.30mol)的水(100mL)溶液。混合液在27℃下搅拌15min，将pH再调至～9.0。分离DCM层，并在浴温40℃下真空浓缩(200-100mmHg)直至残留物重量为～2300g(～1750mL)。在20℃下向残留物中加入MTBE(1500mL)。在20℃下混合液搅拌10min，然后滤过。固体在30℃真空(5毫米汞柱)干燥16h得到类白色固体的标题化合物。HPLC纯度>99％。MP：216-218℃。
步骤9：2-氯-4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶。向装有搅拌器、温度计、冷凝器、加料漏斗和氮气入口／出口的反应瓶中，加入4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶-2-醇(311g，942mmol)。20℃下向固体中加入乙腈(2500mL)。搅拌混合液得到混悬液。向混悬液中加入DIPEA(246.2mL，1.41mol)，接着加入DMF(218.8mL，2.83mol)。得到的混悬液在20℃下搅拌5min。在20-40℃下向混悬液中加入POCl3(217g，1.41mol)得到橙色溶液。将混合液温热至80℃并在80℃下保持3h。将混合液冷却至10℃，在1.5h里缓慢加入氢氧化铵去离子水溶液(622mL28％)(水体积5550mL)，保持温度在20℃以下。氢氧化铵溶液加入完成后，得到的混悬液在10-20℃下搅拌40min。滤过收集固体产物，并40℃真空(5毫米汞柱)干燥过夜得到棕色固体状的标题化合物。HPLC纯度>99％。
步骤10：(S)-苄基2-(甲氧基羰基氨基)丙基氨基甲酸酯。向(S)-1，2-二氨基丙烷二盐酸盐(50g，340mmol)在二氯甲烷(500mL)中的混悬液中加入碳酸钾(1190mmol)。搅拌混悬液并滤过收集滤液。将滤液冷却至0-5℃，搅拌同时滴加入氯甲酸苄酯(51ml，357mmol)。加入完成后，反应混合液在0-5℃下搅拌3h，然后使之温热至室温，并在室温下搅拌过夜。向该混合液中滴加入三乙胺(71ml，510mmol)，并将混合液冷却至0-5℃。在0-5℃下缓慢加入氯甲酸甲酯(28ml，357mmol)，使混合液温热至室温，并搅拌过夜。将混合液倾至水中。真空下除去有机挥发性物质。滤过得到的水性混悬液收集固体，然后用乙酸乙酯洗涤滤饼得到白色固体(65g，92-94％HPLC纯度)。用乙酸乙酯多次重结晶得到白色固体状的标题化合物，HPLC纯度99.5％。
步骤11：(S)-甲基1-氨基丙-2-基氨基甲酸酯盐酸盐。(S)-苄基2-(甲氧基羰基氨基)丙基氨基甲酸酯在甲醇中的溶液在50-60psi.下5％钯／C催化剂下氢化。将反应混合液滤过，真空浓缩滤液得到无色油状物。将60g无色油状物溶于200mL无水二氯甲烷，并将溶液在冰水浴中冷却至0-5℃。滴加HCl在甲醇(约75mL)中的溶液直至溶液pH<1。在0-5℃下搅拌得到的混悬液30min，然后滤过收集固体。固体用二氯甲烷洗涤，然后用己烷洗涤得到白色固体状的标题化合物。
步骤12：3-溴-5-氯-2-氟苯甲醛。氩气氛下将2，2，6，6-四甲基哌啶(327g，98％，2.274mol)在THF(1.9L，HPLC级)中的溶液冷却至-75℃(干冰-甲醇浴)。在-72至-67℃下向混合液中在1h缓慢加入1.6M n-BuLi／己烷溶液(1.47L，2.35mol)。在-72至-67℃下搅拌混合液得到浅黄色混悬液。在-72至-67℃下用30min将2-溴-4-氯-1-氟苯(435g，97％，2.02mol)30min里缓慢加至混合液中，然后在-72至-67℃下继续搅拌混合液30min。在-70至-65℃下，在30min中向混合液中缓慢加入二甲基甲酰胺(230g，99.5％，3.14mol)，然后在-70至-65℃下搅拌混合液30min得到浅棕色溶液。移去冷却浴，然后-60至-30℃下在15min里向该批中加入饱和氯化铵溶液(720mL)得到浑浊的混合液。在-30至10℃下15min里向混合液中迅速加入6N盐酸至pH1，然后在10至20℃下加入乙酸乙酯(2.0L)。分层并用乙酸乙酯(1x300mL)萃取水层。合并的有机萃取物用水(1x800mL)和盐水(1x500mL)洗涤，硫酸镁干燥，并滤过。滤液在真空下浓缩(60-65℃)得到褐色粘稠油状的标题化合物，静置数小时后固化。1H NMR(CDCl3)：δ7.76-8.30(m，2H)，10.0-10.8(br s，1H)；MS m／z238.0(M+1)。
步骤13：3-溴-5-氯-2-氟苯甲酸。将3-溴-5-氯-2-氟苯甲醛(415g)、叔丁醇(1.2L)和水(1.2L)的搅拌的混合液温热至30℃，然后在40-45℃下1h中加入高锰酸钾(335g，2.12mol)(分5份)至该批中。以分步的方式加热深粉色内容物，45-50℃30min，50-55℃30min，55-60℃30min得到粉色-棕色混悬液。使反应混合液冷却至20℃，然后在22-27℃下加入饱和亚硫酸钠溶液，直至过氧化物试验得到阴性结果为止。在15min里顺序向混合液中加入温水(2.5L，～50℃)和饱和碳酸钠溶液(100mL)。通过1cm硅藻土滤床滤过深色混悬液，并用温水洗涤滤饼(4x1L，～50C)。合并的滤液用6N盐酸溶液酸化至pH1得到黄色油状混悬液。向该混合液中加入乙酸乙酯(3L)，并将混合液搅拌10min。(上层)有机层用水洗涤(1.2L)，硫酸镁干燥，滤过，真空浓缩(60-65℃)得到稠厚的黄色混悬液。向残留物中加入正己烷(700mL)，并将混悬液冷却至5-10℃。滤过收集固体，并真空干燥滤饼(65℃)过夜得到黄色固体状的标题化合物。mp150-152℃；HPLC纯度(225nm)：97.5％；1H NMR(d6-DMSO)：δ7.82(s，1H)，8.10(s，1H)，13.82(br s，1H)；MSm/z254(M+H)。
步骤14：3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯。将3-溴-5-氯-2-氟苯甲酸(243g，97.5％，0.935mol)、三乙胺(105g，99.5％，1.02mol)和叔丁醇(1.4L)的混合液加热至74℃。叠氮化磷酸二苯酯(260g，97％，0.916mol)在甲苯(960mL)中的溶液在75-79℃1h里缓慢加至混合液中(温和回流)。将混合液在30min里缓慢加热至83℃并保持在83-84℃(温和回流)1h。将内容物真空浓缩(65-70℃)得到粘稠的油状物。向批料中顺序加入甲苯(2L)和水(1.5L)，然后在35℃下搅拌混合液15min。弃去水层。有机层用饱和碳酸氢钠溶液(400mL)和水(400mL)洗涤。真空(60-65℃)浓缩有机层得到～350mL残留物(～94％纯度)。向批料中加入10％乙酸乙酯／己烷(～1.2L，v／v)，并在50℃加热混合液15min得到浅黄色均匀溶液。将乙酸乙酯／正己烷溶液转移至在4-L Pyrex布氏漏斗(粗多孔圆板，40-60μm，16cm直径，18cm高)中的预先制备好的硅胶(1.8kg，70-200目)／正己烷床上。氨基甲酸叔丁酯产物用3-5％乙酸乙酯／正己烷(总体积～5L，v／v)缓慢洗脱(靠重力)收集到类白色固体状的标题化合物。mp87-88℃；HPLC纯度(225nm)：97-98％；1H NMR(d6-DMSO)：δ1.48(s，9H)，7.48-7.49(m，1H)，7.80-7.82(m，1H)，9.42(s，1H)；MS m／z325(M+H)。
步骤15：(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。向装有机械搅拌器、温度计和冷凝器的4-颈瓶中在氮气下加入2-氯-4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶(300.0g)、(S)-甲基1-氨基丙-2-基氨基甲酸酯盐酸盐(174.3g)、碳酸钠(365.7g)和DMSO(2400mL)。在90℃内温下，将混合液搅拌加热18h。将混合液冷却至40℃。在37-43℃搅拌下加入甲苯(3870mL)。在37-43℃下加水(7200mL)。在37-43℃下分出甲苯层，向甲苯层中加入15％氯化钠水溶液(3870mL)，在37-43℃下通过加入10％枸橼酸水溶液将水层调至pH～5.0。pH调整需要～20mL的10％枸橼酸水溶液。然后在37-43℃下用碳酸氢钠水溶液(2880mL)洗涤甲苯层。使用含标题化合物的甲苯层用作步骤17的投入。
步骤16：5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯。向装有机械搅拌器、温度计、冷凝器和加热套的反应瓶中在氮气流下加入3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(33.0g)、联硼酸频那醇酯(447.0g)、醋酸钾(405.6g)和甲苯(2700mL)。混合液室温搅拌15min，加入PdCl2(dppf)(50.4g)。然后将混合液加热至108±2℃。(注：混合液在50-60℃下变深)。在108±2℃下70min中加入3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(414g)在甲苯(1770mL)中的溶液。混合液在108±2℃下保持15h。将混合液在氮气流下冷却至室温，然后通过硅藻土滤过。将包含标题化合物的滤液用作步骤17的投入。
步骤17：(S)-甲基1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(叔丁氧基羰基氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。向反应瓶中加入(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(3870ml甲苯溶液，～382g，0.861mol)和5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(4470ml甲苯溶液，～467.0g，1.26mol)。向得到的棕色溶液中加入碳酸钠(349.8g，3.30mol)的水(1400mL)溶液。向该混合液中加入PdCl2(dppf)(34.5g，0.047mol)。将混合液搅拌下温热至80℃，并保持该温度2h。将混合液冷却至40℃并用硅藻土过滤。分离滤液层。含标题化合物的甲苯层直接用做步骤18的投入。
步骤18：(S)-甲基1-(4-(3-(3-氨基-5-氯-2-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。在20℃氮气氛下向反应瓶中加入(S)-甲基1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(叔丁氧基羰基氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(～7.3L甲苯溶液，～483.3g，0.86mol)。在～20min中保持温度在25℃以下向该溶液中加入12N HCl(574.3mL，6.95mol)。HCl加入引起放热，温度从19℃升高至24℃。在20-23℃下搅拌混合液1h。向反应混合液中加水(3100mL)。混合液在20℃下搅拌10min。分出水层，并用2-甲基THF(3100mL)洗涤。向水层中缓慢加入饱和碳酸钾溶液(～778mL)。水层pH为～8.5。水层用2-甲基THF(3825mL)萃取。真空浓缩(60mmHg，40℃)2-甲基THF层。残留物用2-甲基THF(～３800mL)稀释得到标题合物溶液，其直接用作步骤19的投入。HPLC纯度：95％。
步骤19：(S)-甲基1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(N-(甲基磺酰基)甲基亚磺酰氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯。在20℃下向反应瓶中加入(S)-甲基1-(4-(3-(3-氨基-5-氯-2-氟苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(～3.8L甲基THF溶液，～396.5g，0.86mol)。向该溶液中加入三乙胺(435.0g，4.3mol)。将溶液冷却至0至-5℃。在0至-5℃下20min里向溶液中搅拌滴加入甲磺酰氯(246.0g，2.15mol)。使混合液温热至18-20℃，并保持该温度20min。在18-20℃下30min向反应混合液中加水(2115mL)。加入完成后在20℃下搅拌混合液10min。然后用2N HCl(～1230mL)将pH调至6.0至6.5。然后用饱和碳酸氢钠水溶液将pH调至7-7.5。混合液在20℃下搅拌10min。分层。包含标题化合物的2-甲基THF层直接用于步骤20。
步骤20：N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯。向反应瓶中加入(S)-甲基1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(N-(甲基磺酰基)甲基亚磺酰氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯(～3.8L甲基THF溶液，～531.5g，0.86mol)。在15-20℃搅拌下向溶液中加入3N氢氧化钠水溶液(1782.8mL，5.34mol)。混合液在20-23℃下30min里剧烈搅拌，并停止搅拌。弃去水层。向有机层加入2N HCl(～410mL)，将pH调至6.0-6.5，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(～300mL)将pH调至～8.5。弃去水层。有机层用15％氯化钠水溶液(2000mL)洗涤。在45℃浴温下真空浓缩有机层(80毫米汞柱)得到棕色溶液(780g)。溶液用2-甲基THF(3500mL)稀释，然后加入PICA HP120N活性炭(90g，CDH858)在2-甲基THF(1L)中的混悬液。将得到的黑色混悬液温热至60℃，并保持60℃16h。在16h后保持Pd含量为309ppm。将混合液冷却至20℃，并通过硅藻土垫滤过(预先用2-甲基THF润湿)。反应瓶用2-甲基THF(500mL)洗涤。将该洗涤物倾至PICA/硅藻土滤饼中。向滤液中加入PL-TMT树脂(90g)。将得到的混悬液加热搅拌至60℃，并保持该温度4h。在60℃下4h后Pd含量为2.3ppm。将混合液冷却至20℃，并在20℃搅拌过夜。混合液硅藻土滤垫(用2-甲基THF预先润湿)过滤。将滤液40-45℃下真空浓缩(100-80毫米汞柱)得到橙色油状物。温热至78℃，将残留的油溶于3L200标准强度乙醇。然后将得到的澄清橙色溶液在3h中冷却至20℃，并生成沉淀。将混合液冷却至0℃并在0℃保持1h。滤过混合液并将用乙醇(300mL)洗涤滤饼。在40℃下干燥固体得到标题化合物；MP：186-189℃。
与以上实施例相似地使用适宜的起始物料制备下表1中的化合物：
表1
实施例122
B-Raf V600E／Mek扩增荧光近距离均相试验(B-Raf V600E生化)
将B-Raf(V600E；4pM)和生物素化Mek(激酶死亡；10nM)以试验缓冲液(50mM Tris，pH7.5，15mM MgCl2，0.01％BSA和1mM DTT)中的2X最终浓度结合，并在含0.5μl的用100％DMSO稀释的40X本发明化合物的实验板(Greiner白色384孔试验板#781207)中每孔分配10μl。将板室温下孵育60分钟。
通过每孔加入用缓冲液稀释的10μl2X ATP(10μM）启动B-Raf激酶活性反应。3小时后，加入10μl终止反应试剂(60mM EDTA，0.01％Tween20)终止反应。磷酸化产物使用家兔抗-p-MEK(细胞信号转导，#9121)抗体和Alpha筛选IgG(蛋白A)检测试剂盒(PerkinElmer#6760617R)，通过加入30μl至抗体(1∶2000稀释)和检测小珠(两种小珠1∶1000稀释)在小珠缓冲液(50mM Tris，pH7.5，0.01％Tween20)中的混合物的孔中进行测定。在小珠避光的黑暗条件下加入。将一个盖子置于板上面，将板室温下孵育1小时。在PerkinElmer Envision instrument上读取荧光值。每种化合物50％抑制(IC50)的浓度使用XL Fit数据分析软件用非线性回归的方法计算。
游离形式或可药用盐形式的本发明化合物，呈现有价值的药理学性质，例如，如本申请中描述的体外试验指出的那样。例如，本发明化合物优选地显示1x10-10至1x10-5M范围的IC50，优选地对V600E B-Raf低于500nM、250nM、100nM和50nM。
例如，在荧光近距离均相试验中，本发明的一些化合物的IC50数据显示于上文表中。
实施例123
A375细胞增殖试验(A375CP)
A375是包含B-Raf V600E突变的黑色素瘤细胞系。将工程表达荧光素酶的A375-luc细胞以1500个细胞／50μl／孔点板于含10％FBS的DMEM的384孔白色透明底板。将溶于100％DMSO的适当浓度的本发明的化合物用自动化针形工具转移至细胞中(100nl)。将细胞在25℃下孵育2天，然后向每孔加入25μl BrightGloTM，并读取板的荧光。每种化合物50％抑制的浓度(IC50)使用XL Fit数据分析软件用非线性回归的方法进行计算。
游离形式或可药用盐形式的本发明化合物，呈现有价值的药理学性质，例如，如本申请中描述的体外试验指出的。例如，本发明化合物优选地显示对野生型和V600E B-Raf低于500nM、250nM、100nM和50nM范围的IC50。
例如，在A375细胞增殖试验中，本发明的一些化合物的IC50数据显示于下文表中。
实施例124
免疫分析
在组织培养处理96孔板中，将细胞以30x103细胞／孔的密度植入1640RPMI+10％FBS中，然后在加入化合物以前，在37℃和5％CＯ2下孵育24小时。将试验化合物系列稀释于DMSO中，然后加至细胞中(最终的DMSO浓度0.1％)并在37℃和5％CＯ2下孵育3小时。使用夹心免疫检测试剂盒(Meso Scale Discovery)测定pMEK和pERK水平。除去培养上清液，加入冷裂解缓冲液(试剂盒中提供)轻轻振摇30分钟将细胞裂解。为了检测pMEK1／2(Ser217／221)和pERK1／2(Thr／Tyr202／204，Thr／Tyr185／187)，将裂解液加至试剂盒中提供的阻断抗体的包衣板并在4℃振摇孵育过夜。洗涤板，使用提供的标记抗体检测磷酸化蛋白并在Sector6000仪器上读取。
实施例125
SW620细胞活性测试
将SW620细胞以1500个细胞／孔的密度植入黑色孔、透明底组织处理96孔板的1640RPMI+10％FBS中。将试验化合物系列稀释至DMSO中，然后加入细胞(最终的DMSO浓度为0.1％)，并在37℃和5％CO2下孵育4天。为了测定细胞活性，使细胞板温度至室温，除去培养基，将200μl的Cell Titer-Glo试剂(Promega，按照生产商方案混合试剂盒成分，然后与生长基质1∶2稀释)加至各孔。板振摇5分钟，然后室温孵育5分钟，测定荧光(Trilux，Perkin Elmer)。
实施例126
Rat1软琼脂糖分析
将Rat1细胞以每孔1000个细胞的密度混悬于96孔板的1％琼脂糖(Lonza)中。将琼脂糖／细胞混合液固化。将试验化合物序列稀释于DMSO中，然后被加至琼脂糖细胞混合液的上部(最终DMSO浓度为0.2％)，并在37℃和5％CＯ2下孵育。17天后，集落生长通过用阿尔玛蓝(TREKDiagnostics)孵育细胞测定，用Spectramax微孔板测读分析仪(MolecularDevices，lnc；在562nm测定吸收值)测定代谢活性。
实施例127
肝微粒体清除率分析
设计体外微粒体清除率是用于评价与化合物的肝脏代谢稳定性相关的潜在危险。试验化合物(1μM)与不同物种(小鼠、大鼠、犬和人)的肝微粒体(0.5mg／mL)和NADPH(1mM)在100mM磷酸钾缓冲液在37℃孵育。在具体反应时间点(0、5、10和30分钟)，除去反应物，加入冰冷的含质谱内标的乙腈终止反应。将样品离心，上清液用LC-MS／MS分析。体外代谢半衰期(t1／2，min)和内在清除率(CLint，μL／min／mg)是基于试验化合物的代谢速率与程度，可由原形化合物从反应混合液中消失情况测定。这些数值可用于预测肝脏清除率(CLh，mL／min／kg)和摄取比(ER，以这些物种中预测的肝脏代谢清除率与肝脏血流的比值表示)。总之，在体外有高预测Clint或ER的化合物被视为对体内暴露限制代谢有较高危险。
本发明一些化合物测定的摄取比在下表中给出。
实施例128
A549p38αMAP激酶Bright-Glo报告基因分析
将A549细胞用IL-8启动子驱动的报告基因pGL3-IL8-Luc稳定转染。将细胞以4x105／ml点板至384孔固体白板(40ul／孔，5％CD-FBS，1xP／S，DMEM）并在37℃孵育过夜(18-20小时)。将试验化合物系列稀释于DMSO中，然后将50nl的供试液加入孵育(最终DMSO浓度为0.1％)。在与供试化合物孵育30min后，用1ng／ml IL-1β(5ng／ml溶液每孔10ul)刺激细胞。加入Bright-Glo(25ul／well)以测定在7-8小时刺激后荧光素酶表达。本发明一些化合物的IC50数据在下表中给出。
实施例129
体内药动学分析
全面的药动学研究：给雄性Balb／c小鼠(n＝3，体重22-25g)或雄性Wistar大鼠(n＝3，体重250-300g)通过侧尾静脉静脉施用或管饲口服施用试验化合物。制剂一般是化合物在75％PEG300和25％D5W中的2.5mg/mL溶液。在给药后24h系列采集每个时间点50μL的六份血样。将血样离心分离血浆。分析血浆样品并用LC-MS／MS定量。
迅速的药动学研究：给雄性Balb／c小鼠(n＝3，体重22-25g)或雄性Wistar大鼠(n＝3，体重250-300g)通过侧尾静脉静脉(IV)或管饲口服(PO)施用试验化合物。制剂一般是化合物在75％PEG300和25％D5W中的2.5mg/mL溶液。在给药后24h系列采集每点50μL的六份血样。将血样离心分离血浆并对每个剂量途径每个时间点合并三只动物的血浆。分析血浆样品并用LC-MS／MS定量。
为了全面与迅速的药动学研究，通过使用Winnonlin5.0软件(Pharsight，Mountain View，CA，USA)非房室回归分析计算以下参数：血浆清除率(Cl)、血浆峰浓度(Cmax)、血浆浓度时间曲线下面积(AUC0-inf)、百分口服生物利用度(F％)。
本发明的一些化合物在小鼠中的药动学参数在下表中给出。
游离形式或可药用盐形式的式I化合物呈现出有价值的药理学性质，例如，如本申请中描述的体外和体内试验结果表明的。例如，式I化合物优选显示A375CP细胞增殖分析中的IC50在250nM或更好，优选低于200nM、150nM、00nM和50nM。
R1的2-(甲氧基羰基氨基)-1-丙基基团为包括p38的其他激酶提供了优选水平的活性与选择性。例如，化合物9与29之间活性大30倍，其中A375IC50分别是2nM和76nM。
式Ib化合物的苯基取代模式，R5位被氟或氯取代，和R3位被氟、氯或甲基取代，对代谢稳定性(在小鼠和人体中的ER)是最佳的。相比较，例如，化合物9和6的ER(人体)分别<0.21和0.69。
R1、R3／R5取代模式的2-(甲氧基羰基氨基)-1-丙基基团和R4的甲基基团的组合对总的药物暴露(AUC)有令人惊奇的影响。参阅例如，化合物9(与化合物1、3、4、6和7比较)，在10mg／kg剂量下，AUC为30±4微摩尔*hrs。
实施例130
体内药效-14天A375小鼠异种移植物模型
A375细胞在无菌条件下在37℃有5％CO2孵育箱中生长四周。细胞在补充10％FBS的RPMI-1640基质中培养。细胞用0.05％胰蛋白酶／EDTA每周传代两次。在植入的当天，将细胞收集在HBSS(Hank’s平衡盐溶液)。在第1天时雌性Nu／Nu小鼠SQ右侧(Charles River，开始研究时10-11周)被植入0.22mL在50％基质胶中的5x106个A375细胞／小鼠。植入后第19天，将小鼠随机化为6组(每组9只小鼠)，平均肿瘤体积215mm3，平均体重24g。试验化合物从第19天开始BID给予，共14天，给予体积每次给药0.2mL，化合物被制成适当浓度以获得所需的剂量水平。每天进行临床观察。每周测定两次肿瘤体积与体重。终点：任何单只动物或组呈现体重减轻超过初始值的25％和／或肿瘤体积超过3000mm3。
化合物9(在20％PEG300／3％ETPGS／77％水中配制)按照以上方案使用以下给药方案给药：
第1组：溶媒，qd x14
第2组：1mg／kg化合物9，bid x14
第3组：3mg／kg化合物9，bid x14
第4组：10mg／kg化合物9，bid x14
第5组：20mg／kg化合物9，bid x14
在第一次给药后14天评价肿瘤体积结果。部分反应定义为肿瘤生长为对照肿瘤生长的20-50％。病况稳定定义为最终肿瘤体积在初始肿瘤大小的+／-20％。部分消退定义为最终肿瘤体积<80％初始肿瘤体积。
第2组：部分反应
第3组：病况稳定
第4组：部分消退
第5组：部分消退
可以理解的是，本文所述的实施例和实施方案仅仅是出于举例说明的目的，本领域技术人员可以据此进行各种修饰或改变，并且这些修饰和改变均包括在本申请的精神和范围内以及所附权利要求的保护范围之内。本文中引证的所有公开出版物、专利和专利申请的全部内容均引入本文作为参考并用于所有目的。
Claims (24)
1.式Ia化合物或其互变异构体、前药、立体异构体或可药用盐：
其中：
Y选自N和CR6；
R2、R3、R5和R6独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；条件是当R5是氟且R1选自氢、-X1R8a、-X1ＯX2R8a、-X1C(O)NR8aR8b、-X1NR8aX2R8b、-X1NR8aC(O)X2ＯR8b和-X1NR8aS(O)0-2R8b时，R3和R6不都是氢；
R4选自-R9和-NR10R11；其中R9选自C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8杂环烷基、芳基和杂芳基；其中R9所述的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选地被1至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、氰基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基；且R10和R11独立地选自氢和R9；
R7选自氢、C1-4烷基、C3-5环烷基和C3-5杂环烷基；其中R7的所述烷基、环烷基或杂环烷基任选地被1至3个独立地选自以下的基团取代：卤素、氰基、羟基、C1-4烷基、卤素-取代的-C1-4烷基、C1-4烷氧基和卤素-取代的-C1-4烷氧基。
2.权利要求1的化合物，其中R4是-R9；其中R9选自C1-3烷基和C3-8环烷基；其中R9的所述烷基或环烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和卤素-取代的-C1-4烷基的基团取代。
3.权利要求2的化合物，其中：R2选自氢和氟；R3选自氯、氟和甲基；R5选自氢、氯和氟；Y选自N和CR6；且R6选自氢和氟。
4.权利要求3的化合物，其选自：N-[(2S)-1-({4-[3-(3-氯-5-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[2-氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[3-氯-5-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，6-二氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[2，6-二氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-{[4-(3-{2-氟-3-[(3，3，3-三氟丙烷)亚磺酰氨基]苯基}-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基]氨基}丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-氯-2-甲亚磺酰氨基吡啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-氟-2-甲亚磺酰氨基吡啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氯-3-乙亚磺酰氨基-4，5-二氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，4-二氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[1-(丙-2-基)-3-(2，4，5-三氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-乙亚磺酰氨基-2，4-二氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-2-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-[(4-{3-[2，4-二氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(3-环丙烷亚磺酰氨基-2，5-二氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-3-环丙烷亚磺酰氨基-2-氟苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；和N-[(2S)-1-[(4-{3-[5-氯-2-氟-3-(丙-1-亚磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基]氨基甲酸甲酯。
5.权利要求1的式Ib化合物：
其中：
R3选自氯、氟和甲基；
R5选自氟和氯；和
R7选自乙基和异丙基。
6.权利要求5的化合物，其选自：N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，5-二氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-乙基-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氟-3-甲亚磺酰氨基-5-甲基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氯-3-甲亚磺酰氨基-5-甲基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2-氯-5-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2R)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；N-[(2S)-1-({4-[3-(2，5-二氯-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯；和N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲亚磺酰氨基苯基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯。
7.化合物，其选自：N-[5-氯-3-(4-{2-[(2-氰基乙基)氨基]嘧啶-4-基}-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基)-2-氟苯基]甲磺酰胺；N-{5-氯-3-[4-(2-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}嘧啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基]-2-氟苯基}甲磺酰胺；N-(5-氯-2-氟-3-{4-[2-(甲基氨基)嘧啶-4-基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基苯基)甲磺酰胺；和N-{3-[4-(2-氨基嘧啶-4-基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-3-基]-5-氯-2-氟苯基}甲磺酰胺。
8.化合物，其选自：3-溴-5-氯-2-氟苯胺；氰基-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-乙酸叔丁酯；1-异丙基-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-胺；2-((2-亚苄基-1-乙基肼基)亚甲基)-丙二腈；1-(3-氨基-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮；1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)乙酮；1-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)乙酮；1-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙酮；3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮；3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮；3-(二甲基氨基)-1-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-酮；4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；4-(3-碘-1-乙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；4-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺；4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-醇；2-氯-4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶；(S)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；(R)-甲基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；(S)-叔丁基1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙-2-基氨基甲酸酯；3-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氨基)丙腈；4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-N-甲基嘧啶-2-胺；N1-(4-(3-碘-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N2，N2-二甲基乙-1，2-二胺；N-(3-溴-2，4-二氟苯基)丙-1-磺酰胺；3-氟-4-碘吡啶-2-胺；3-氯-4-碘吡啶-2-胺；3-溴-2，5，6-三氟苯胺；2，4-二溴-3，6-二氯苯胺；3-溴-2-氯-5-甲基苯胺；3-溴-2，5-二氟苯胺；3-溴-5-氯-2-氟苯甲酸；3-溴-5-氯-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯；3-溴-2-氟-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯；5-氯-2-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；2，6-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；N-(2，4-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基)丙-1-磺酰胺；2-(2-氟-3-硝基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环；2，5-二氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氯-5-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2，5-二氯-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氯-5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；2-氟-5-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯；3-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)吡啶-2-胺；2，3，6-三氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)吡啶-2-胺；3-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺；和3-甲氧基-2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯胺。
9.包含权利要求1-7的任意一项的化合物的与至少一种可药用赋形剂混合的药物组合物。
10.权利要求9的药物组合物，其中所述赋形剂选自：玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉、淀粉糊、预胶化淀粉、糖类、明胶、天然胶类、合成胶类、海藻酸钠、海藻酸、黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、硅酸镁铝、聚维酮、滑石粉、碳酸钙、粉状纤维素、糊精类、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、琼脂、碳酸钠、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、聚克利林钾、羧甲基淀粉钠、粘土、硬脂酸钠、硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他二醇类、月桂醇硫酸钠、氢化植物油、花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油、大豆油、硬脂酸锌、油酸钠、油酸乙酯、月桂酸乙酯、硅胶及其组合。
11.权利要求9的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
12.权利要求11的药物组合物，其中另外的治疗剂选自抗癌化合物、镇痛剂、止吐剂、抗抑郁剂和抗炎剂。
13.用于治疗癌症的根据权利要求1-7的任意一项的化合物。
14.根据权利要求13的化合物，其中所治疗的癌症选自肺癌、胰腺癌、膀胱癌、结肠癌、髓系障碍、***癌、甲状腺癌、黑素瘤、腺癌和卵巢、眼、肝脏、胆道和神经***的癌。
15.治疗癌症的方法，包括给需要这种治疗的个体施用有效量的权利要求1-7的任意项的化合物或权利要求9-12的任意一项的药物组合物。
16.权利要求15的方法，其中所述癌症选自肺癌、胰腺癌、膀胱癌、结肠癌、髓系障碍、***癌、甲状腺癌、黑素瘤、腺癌和卵巢、眼、肝脏、胆道和神经***的癌。
17.权利要求15或16的方法，还包括给个体施用另外的治疗剂。
18.权利要求17的方法，其中另外的治疗剂包括抗癌药、止痛药、止吐药、抗抑郁药或抗炎药。
19.权利要求18的方法，其中另外的治疗剂是不同的Raf激酶抑制剂或MEK、mTOR、HSP90、AKT、P13K、CDK9、PAK、蛋白激酶C、MAP激酶、MAPK激酶或ERK的抑制剂。
20.权利要求19的方法，其中MEK抑制剂选自：AS703026；MSC1936369B；GSK1120212；AZD6244；PD-0325901；ARRY-438162；RDEA119；GDC0941；GDC0973；TAK-733；RＯ5126766和XL-518。
21.权利要求20的方法，其中所述另外的治疗剂与所述化合物同时施用给个体。
22.治疗通过Raf激酶介导的病症的方法，包括给需要其的个体施用有效量的根据权利要求1-7的任意一项的化合物，或权利要求9-12的任意一项的药物组合物。
23.权利要求22的方法，其中Raf激酶是突变的b-Raf激酶。
24.权利要求23的方法，其中突变的b-Raf激酶是b-Raf(V600E)。
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