CN103860631A - 一种甘草活性物质的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甘草活性物质的制备方法，其步骤包括：原料的预处理、热水浸提处理、甘草渣的超声辅助浸提处理、醇沉处理、纯化处理、酸沉处理、复溶处理、氨化处理、酸化处理、结晶、纯化。本发明充分利用了甘草资源，在提取的过程中实现了不同有效组分的分离，避免单一提取时其它几种活性物质的损失。并且生产成本较低、操作简易、生产效率高、对环境无污染，能实现连续化生产，而且得的产品品质佳，易于推广和利用，为甘草的综合利用提供了一条新途径，提高了甘草的综合利用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种中草药综合利用技术，具体说，涉及一种甘草活性物质的制备方法。
背景技术
甘草（Glycyrrhizauralensis）别名甜草根、红甘草、国老、甜草、甜根子等，是我国传统常用中草药之一，为豆科（Leguminosae）甘草属（GlycyrrhizaLinn）多年生草本植物。甘草性平味甘，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效，具有极广的临床应用价值。在我国，甘草是2000多种草药中用量最大的一味草药，素有“十方九草，无草不成方”之说。同时，甘草还是迄今为止发现的最好的一种天然甜味剂。甘草广泛分布于北纬30-55°之间，北纬40°左右的干旱、半干旱区域被称做“甘草分布带”，主要产地在中亚、北美及东欧，尤以中亚及地中海沿岸为分布中心。甘草在我国集中分布于三北地区（东北、华北和西北各省区），以新疆、内蒙古、宁夏和甘肃为中心产区。
药用甘草质量与其化学成分的组成、积累变化有直接的关系。先后从甘草属植物中提取、分离、鉴定了200多种化学成分，其中最重要并已证实具有生物活性的成分主要是甘草酸、三萜皂苷类、黄酮类、香豆素类、多糖、生物碱、氨基酸等。药理研究表明，甘草酸及甘草次酸具有解毒、消炎、镇痛、抗肿瘤的作用。近年来，甘草还用于防治病毒性肝炎、癌症以及艾滋病等。甘草甜素具有糖药一体化的特点。除药用价值外，甘草在食品、饮料、卷烟、化妆品等工业中有着重要的用途。
我国是甘草生产大国，出口三十多个国家和地区，仅日本年需求量就达l万吨之多。但对甘草主要有效成分甘草酸的生物合成、作用机制、精制加工和综合利用的深入研究还落后于日本等国。受技术条件和工艺限制，应用 传统方法提取的甘草酸粗品的纯度低，在国际市场上的价格低，并且提取效率也低，对甘草资源的利用不充分，影响了我国甘草产业的发展。
目前，甘草制品多为甘草酸、甘草黄酮、多糖的初级提取物，而对于甘草的一步式加工却很少，现有的文献资料中没有关于一步式制备甘草酸单铵盐、甘草黄酮和甘草多糖的方法。中国专利（CN102836202A）公开了甘草地上部分综合开发利用的方法，利用有机试剂对甘草浸提液进行萃取，在经过浓缩得到粗黄酮。该专利文件并没有涉及甘草酸单铵盐的制备，此法有一定的溶剂残留的可能，存在潜在的安全问题。中国专利（CN101766680A）公布了甘草综合提取方法，经过3次用不同溶剂提取，得到粗甘草酸、甘草多糖和甘草黄酮，该步骤复杂耗时且产品纯度低。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种甘草活性物质的制备方法，实现了对甘草的深加工和综合利用，扩大了其应用范围，提高了其附加值。
技术方案如下：
一种甘草活性物质的制备方法，包括：
原料的预处理；将甘草予以筛选，去除各种杂质、用水洗净、干燥、粉碎过60目筛；
热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ，浸提温度为75-95℃，料液比为1:5-1:15，浸提次数为1-3次，每次浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；得到的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声功率300-500W，浸提温度为60-80℃，料液比为1:10-1:20，浸提次数为1-2次，每次浸提时间为20-30min，浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理，转速4200r/min，离心10min，得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30-40Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入 75-95%乙醇使之乙醇终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至25-35Brix，进行第二次醇沉，加入75-95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用60-90%乙醇洗涤1-3次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃～-80℃，干燥时间为36-48h，得到甘草多糖。
进一步：还包括酸沉处理、复溶处理、氨化处理、酸化处理和结晶的步骤，其中，
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩以除乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为浓缩至30-35Brix，使乙醇浓度低于5%，得浓缩液Ⅱ，将浓缩液Ⅱ用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix，使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至1.5-2.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂Ⅰ进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ30-60min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至7.5-9.0，搅拌1h，静止分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至4.0以下，70-90℃水浴保温30min，低温静置6-12h，得酸化液Ⅰ；
结晶；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置4-8h，以4200r/min离心20min，离心后得到上清液Ⅱ和沉淀，离心后的沉淀进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-40℃～-60℃，干燥时间为20-30h，沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐。
进一步：还包括纯化步骤，上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，树脂选用XDA-8，LX20B，D101，AB-8其中一种，室温下振荡8-12h进行静态吸附，70-90%乙醇室温下振荡8-12h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30-35Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度160-200℃，出口温度80-85℃，干燥后得甘草黄酮。
进一步：热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为75℃，料液比为1:5，浸提次数为1次，浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率300W、浸提温度为60℃、料液比为1:10、浸提次数为1次、浸提时间为20min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理，转速4200r/min，离心10min，得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入75%乙醇使之乙醇终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至25Brix，进行第二次醇沉，加入75%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用60%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%，得 浓缩液Ⅱ，将浓缩液Ⅱ用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix，使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至1.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂乙酸乙酯进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ30min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至7.5，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至4.0，保证醋酸过量，70℃水浴保温30min，低温静置6h，得酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置4h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-40℃，干燥时间为20h，沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶。利用XDA-8大孔树脂进行纯化，室温下振荡8h进行静态吸附吸，洗脱液70%乙醇室温下振荡8h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度160℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
进一步：热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ，浸提温度为85℃，料液比为1:15，浸提次数为3次，每次浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率500W、浸提温度为70℃、料液比为1:10、浸提次数为2次、浸提时间为30min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理，以转速4200r/min，离心10min。得 到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入85%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用70%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%；将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix；使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至2.0，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂乙酸乙酯进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ40min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至8.0，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.5，80℃水浴保温30min，低温静置8h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置6h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-50℃，干燥时间为25h；沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并 用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液70%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
进一步：热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ，浸提温度为85℃，料液比为1:10，浸提次数为2次，每次浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件，功率400W，浸提温度为70℃，料液比为1:20，浸提次数为1次，浸提时间为30min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入85%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入85%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用70%乙醇洗涤2次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%，将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix；使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至2.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂二氯甲烷进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ40min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至9.0，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.5，80℃水浴保温30min，低温静置8h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置6h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-50℃，干燥时间为25h，沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，真空浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液80%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
进一步：热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为85℃，料液比为1:15，浸提次数为2次，每次浸提时间为3h；浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率400W、浸提温度为80℃、料液比为1:15、浸提次数为2次、浸提时间为30min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min；得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入95%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液 比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用80%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-60℃，干燥时间为48h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物至35Brix，使乙醇浓度低于5%，将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix；使用体积比1:1硫酸水溶液搅拌添加，调溶液pH值至2.0，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂水饱和正丁醇进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ60min，使之完全溶解，得有机溶液Ⅰ；
氨化处理；将有机液Ⅰ用浓氨水调pH至8.5，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.0，80℃水浴保温30min，低温静置10h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置8h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-60℃，干燥时间为30h；沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和的上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液80%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性 固形物为35Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃，干燥后得甘草黄酮。
进一步：热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ；浸提温度为95℃，料液比为1:10，浸提次数为3次，每次浸提时间为3h；浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件，功率500W，浸提温度为80℃，料液比为1:15，浸提次数为2次，浸提时间为30min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为40Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入95%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min,沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至35Brix，进行第二次醇沉，加入75%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用90%乙醇洗涤3次，收集沉淀，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-80℃，干燥时间为48h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物30Brix，使乙醇浓度低于5%；将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix。使用体积比1:1硫酸水溶液搅拌添加，调稀释液pH值至1.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂水饱和正丁醇进行复溶，按照固液比1:3，搅拌溶解沉淀Ⅰ50min，使之完全溶解， 得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至8.5，磁力搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.0，90℃水浴保温30min，低温静置12h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置8h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-60℃，干燥时间为30h；沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡12h进行静态吸附吸，洗脱液90%乙醇室温下振荡12h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度200℃，出口温度85℃；干燥后得甘草黄酮。
与现有技术相比，本发明技术效果包括：
1、本发明充分利用了甘草资源，在提取的过程中实现了不同有效组分的分离，避免单一提取时其它几种活性物质的损失。并且，生产成本较低、操作简易、生产效率高、对环境无污染，能实现连续化生产，而且得的产品品质佳，易于推广和利用，为甘草的综合利用提供了一条新途径，提高了甘草的综合利用价值。甘草活性物质可以作为功能因子，应用于食品、药品加工，实现了对甘草的深加工和综合利用，扩大了其应用范围，提高了其附加值。
2、社会效益及经济效益：
（1）本发明主要应用范围及市场定位：甘草活性物质可以作为功能因子，应用于食品、药品加工，实现了对甘草的深加工和综合利用，扩大了其应用范围，提高了其附加值。本发明生产的甘草黄酮、甘草多糖可以作为一些功能性食品开发的优质原料或辅料，应用于食品、药品加工，添加在各种食品、保健品和医药制品中，主要目的是抗氧化、提高免疫等生理作用。甘草酸单 铵盐是天然甜味剂，高效安全，并且还是一种功能因子，保肝护肝，解毒。所以本发明一方面增加产品保健功能，另一方面提高产品品质和附加值等。
（2）本发明应用效益：可观的经济效益和良好的社会效益。本发明对于甘草初级加工等企业直接受益，开展甘草的深加工，对甘草的综合利用提供了可靠途径。
（3）推广价值：甘草一直是我国乃至全球的紧缺植物药材，目前甘草已经实现人工栽培，本发明以人工栽培甘草为原料，生产活性物质，最大限度对甘草进行了综合性开发，提高了其利用价值。
附图说明
图1为本发明中一种甘草活性物质的制备方法的工艺流程图；
图2为本发明中甘草多糖的标准曲线图（以葡萄糖计）；
图3a为本发明中甘草酸的标准曲线图；
图3b为本发明中甘草酸单铵盐标准品的高效液相分析结果图；
图3c为本发明中甘草酸单铵盐产品的高效液相分析结果图；
图4a是本发明中粗黄酮的紫外扫描图；
图4b为本发明中黄酮的标准曲线图（以芦丁计）。
具体实施方式
本发明以甘草为原料，通过分步浸提、分离纯化、干燥等步骤得到甘草活性物质（甘草黄酮、甘草酸单铵盐、甘草多糖）。
下面参考附图和优选实施例，对本发明技术方案作详细说明。
如图1所示，为本发明中一种甘草活性物质的制备方法的工艺流程图。
一种甘草活性物质的制备方法，步骤包括：
步骤1：原料的预处理；
将甘草予以筛选，去除各种杂质，然后用水洗净、去除灰尘，干燥，粉碎过60目筛。
步骤2：热水浸提处理；
甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为75-95℃，料液比为1:5-1:15(质量体积比w/v)，浸提次数为1-3次，每次浸提时间为3h。浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用。
步骤3：甘草渣的超声辅助浸提处理；
由步骤2得到的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ。超声功率300-500W，浸提温度为60-80℃，料液比为1:10-1:20（质量体积比w/v），浸提次数为1-2次，每次浸提时间为20-30min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去。
步骤4：醇沉处理；
粗滤液Ⅰ经过离心处理，转速4200r/min，离心10min，得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30-40Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入75-95%乙醇使之乙醇终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5（质量体积比w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至25-35Brix，进行第二次醇沉，加入75-95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5（质量体积比/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ。
步骤5：纯化处理；
将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用60-90%乙醇洗涤1-3次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃～-80℃，干燥时间为36-48h，得到甘草多糖。
步骤6：酸沉处理；
将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩以除乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为浓缩至30-35Brix，使乙醇浓度低 于5%，得浓缩液Ⅱ，将浓缩液Ⅱ用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix，使用1:1（体积比v/v）硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至1.5-2.5，得到酸沉液Ⅰ。
步骤7：复溶处理；
将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂Ⅰ（乙酸乙酯、水饱和正丁醇、二氯甲烷中的一种）进行复溶，按照固液比1:3（质量体积比w/v）搅拌溶解沉淀Ⅰ30-60min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ。
步骤8：氨化处理；
将有机液Ⅰ用浓氨水调pH至7.5-9.0，搅拌1h，静止分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ。
步骤9：酸化处理；
将上相Ⅰ（水相）使用冰醋酸调pH值至4.0以下（保证醋酸过量），70-90℃水浴保温30min，低温静置6-12h，得酸化液Ⅰ。
步骤10：结晶；
酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置4-8h，以4200r/min离心20min，离心后得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ，离心后的沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-40℃～-60℃，干燥时间为20-30h，沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐。
步骤11：纯化。
上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化（树脂选用XDA-8，XDB-8，LX20B，D101，AB-8其中一种），室温下振荡8-12h进行静态吸附，70-90%乙醇室温下振荡8-12h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30-35Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度160-200℃，出口温度80-85℃，干燥后得甘草黄酮。
产品验证：
1）甘草多糖的验证
甘草多糖的验证及含量测定方法采用苯酚-硫酸比色法（以葡萄糖计）。
如图2所示，为本发明中甘草多糖的标准曲线图，其中，横坐标为葡萄糖质量，纵坐标为吸光值，通过标准曲线的绘制，拟合得到标准方程：y=0.012x-0.006，R2=0.999，式中：Y代表吸光度，X代表葡萄糖质量（μg），R代表相关系数。通过标准方程，根据实验中所测得的吸光值来计算葡萄糖的含量，从而得到多糖的含量（以葡萄糖计）。
2）甘草粗黄酮测定方法
将甘草粗黄酮用体积百分比50%乙醇-水溶液适当稀释，于紫外-分光光度计分析，紫外全波段扫描结果如图4a。横坐标为扫描波长，纵坐标为吸光值，图4a结果显示，甘草粗黄酮在300～400nm之间和240～280nm之间各出现了一个吸收带，说明其为黄酮类化合物，此方法是黄酮的定性方法。紫外扫描能够说明该物质具有黄酮类化合物的特征吸收峰，说明此物质为黄酮类化合物，是黄酮的定性方法。
甘草粗黄酮含量的测定方法使用亚硝酸钠-氢氧化钠比色法（以芦丁计），所得标准曲线见图4b。横坐标为芦丁浓度，纵坐标为吸光值。通过标准曲线的绘制，拟合得到其标准曲线方程：y=0.516x+0.025，R2=0.999，式中：Y代表吸光度，X代表芦丁浓度（μg/mL），R代表相关系数。通过标准方程，根据实验中所测得的吸光值来计算芦丁的含量，从而得到黄酮的含量（以芦丁计）。
3）甘草酸单铵盐
图3a所示，为本发明中甘草酸的标准曲线图；本发明中，甘草酸测定方法采用高效液相法，其中横坐标为甘草酸标准品的浓度，纵坐标为峰面积，通过标准曲线的绘制，通过拟合得到标准曲线方程：y=5.926x+11.21，R2=0.999，式中：Y代表峰面积，X代表甘草酸标准品的浓度（μg/mL），R代表相关系数。通过标准方程，根据实验中所测得的峰面积来计算甘草酸的含量，从而得到甘草酸单铵盐的含量（以甘草酸计）。
图3b所示，为本发明中甘草酸单铵盐标准品的高效液相分析结果图；如图3c所示，为本发明中甘草酸单铵盐产品的高效液相分析结果图，横坐标为时间，做坐标为峰面积。图上所标为所测物质的出峰时间，分别为6.04和 5.95min，通过将甘草酸单铵盐产品的高效液相分析结果同甘草酸标准品的高效液相分析结果进行比对因此认为为同一种物质，即：甘草酸单铵盐。
实施例1
一种甘草活性物质的制备方法，其生产步骤为：
（1）原料的预处理：将甘草予以筛选，去除各种杂质，然后用水洗净、去除灰尘，干燥，粉粹过60目筛。
（2）热水浸提处理：甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为75℃，料液比为1:5（w/v），浸提次数为1次，浸提时间为3h。浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用。
（3）甘草渣的超声辅助浸提处理：步骤（2）所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率300W，浸提温度为60℃，料液比为1:10（w/v），浸提次数为1次，浸提时间为20min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去。
（4）醇沉处理：粗滤液Ⅰ经过离心处理，转速4200r/min，离心10min，得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入75%乙醇使之乙醇终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min,沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至25Brix，进行第二次醇沉，加入75%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ。
（5）纯化处理：将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用60%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖。
（6）酸沉处理：将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于 5%，得浓缩液Ⅱ，将浓缩液Ⅱ用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix，使用1:1（v/v）硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至1.5，得到酸沉液Ⅰ。
（7）复溶处理：将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂乙酸乙酯进行复溶，按照固液比1:3（w/v），搅拌溶解沉淀Ⅰ30min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ。
（8）氨化处理：将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至7.5，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ。
（9）酸化处理：将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至4.0（保证醋酸过量），70℃水浴保温30min，低温静置6h，得酸化液Ⅰ。
（10）结晶处理：酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置4h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ。沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-40℃，干燥时间为20h，沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐。
（11）纯化处理：上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶。利用XDA-8大孔树脂进行纯化，室温下振荡8h进行静态吸附吸，洗脱液70%乙醇室温下振荡8h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度160℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
此条件制备的甘草酸单铵盐得率1.23%，纯度为58%；甘草黄酮得率2.23%，纯度为30%；甘草多糖得率11.27%，纯度为57.8%。
实施例2
一种甘草活性物质的制备方法，其生产步骤为：
（1）原料的预处理：将甘草予以筛选，去除各种杂质，然后用水洗净、去除灰尘，干燥，粉粹过60目筛。
（2）热水浸提处理：甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为 85℃，料液比为1:15(w/v)，浸提次数为3次，每次浸提时间为3h。浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用。
（3）甘草渣的超声辅助浸提处理：将步骤（2）所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率500W，浸提温度为70℃，料液比为1:10(w/v)，浸提次数为2次，浸提时间为30min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去。
（4）醇沉处理：粗滤液Ⅰ经过离心处理，以转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入85%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min,沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ。
（5）纯化处理：将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用70%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖。
（6）酸沉处理：将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%。将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix。使用1:1（v/v）硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至2.0，得到酸沉液Ⅰ。
（7）复溶处理：将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂乙酸乙酯进行复溶，按照固液比1:3（w/v），搅拌溶解沉淀Ⅰ40min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ。
（8）氨化处理：将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至8.0，搅拌1h，静置分 层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ。
（9）酸化处理：将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.5（保证醋酸过量），80℃水浴保温30min，低温静置8h，得到酸化液Ⅰ。
（10）结晶处理：酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置6h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ。沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-50℃，干燥时间为25h；沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐。
（11）纯化处理：上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用LX20B大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液70%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
此条件制备的甘草酸单铵盐得率1.61%，纯度为60.2%；甘草黄酮得率2.92%，纯度为31.8%；甘草多糖得率9.66%，纯度为61.3%。
实施例3
一种甘草活性物质的制备方法，其生产步骤为：
（1）原料的预处理：将甘草予以筛选，去除各种杂质，然后用水洗净、去除灰尘，干燥，粉粹过60目筛。
（2）热水浸提处理：甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为85℃，料液比为1:10(w/v)，浸提次数为2次，每次浸提时间为3h。浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用。
（3）甘草渣的超声辅助浸提处理：将步骤（2）所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件，功率400W，浸提温度为70℃，料液比为1:20(w/v)，浸提次数为1次，浸提时间为30min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去。
（4）醇沉处理：粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为 0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入85%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min,沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入85%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ。
（5）纯化处理：将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用70%乙醇洗涤2次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖。
（6）酸沉处理：将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%。将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix。使用1:1（体积比v/v）硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至2.5，得到酸沉液Ⅰ。
（7）复溶处理：将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂二氯甲烷进行复溶，按照固液比1:3（w/v），搅拌溶解沉淀Ⅰ40min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ。
（8）氨化处理：将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至9.0，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ。
（9）酸化处理：将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.5（保证醋酸过量），80℃水浴保温30min，低温静置8h，得到酸化液Ⅰ。
（10）结晶处理：酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置6h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ。沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-50℃，干燥时间为25h，沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐。
（11）纯化处理：上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，真空 浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用D101大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液80%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
此条件制备的甘草酸单铵盐得率1.45%，纯度为59.7%；甘草黄酮得率2.52%，纯度为28.8%；甘草多糖得率11.32%，纯度为61.3%。
实施例4
一种甘草活性物质的制备方法，其生产步骤为：
（1）原料的预处理：将甘草予以筛选，去除各种杂质，然后用水洗净、去除灰尘，干燥，粉粹过60目筛。
（2）热水浸提处理：甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为85℃，料液比为1:15(w/v)，浸提次数为2次，每次浸提时间为3h。浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用。
（3）甘草渣的超声辅助浸提处理：将步骤（2）所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件，功率400W，浸提温度为80℃，料液比为1:15(w/v)，浸提次数为2次，浸提时间为30min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去。
（4）醇沉处理：粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入95%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min,沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ。
（5）纯化处理：将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用80%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-60℃，干燥时间为48h得到甘草多糖。
（6）酸沉处理：将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物至35Brix，使乙醇浓度低于5%。将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix。使用1:1（v/v）硫酸水溶液，搅拌添加，调溶液pH值至2.0，得到酸沉液Ⅰ。
（7）复溶处理：将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂水饱和正丁醇进行复溶，按照固液比1:3（w/v），搅拌溶解沉淀Ⅰ60min，使之完全溶解，得有机溶液Ⅰ。
（8）氨化处理：将有机液Ⅰ用浓氨水调pH至8.5，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ。
（9）酸化处理：将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.0（保证醋酸过量），80℃水浴保温30min，低温静置10h，得到酸化液Ⅰ。
（10）结晶处理：酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置8h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ。沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-60℃，干燥时间为30h；沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐。
（11）纯化处理：上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和的上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用AB-8大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液80%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为35Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃，干燥后得甘草黄酮。
此条件制备的甘草酸单铵盐得率1.80%，纯度为61.0%；甘草黄酮得率2.72%，纯度为29.4%；甘草多糖得率9.89%，纯度为59.3%。
实施例5
一种甘草活性物质的制备方法，其生产步骤为：
（1）原料的预处理：将甘草予以筛选，去除各种杂质，然后用水洗净、去除灰尘，干燥，粉粹过60目筛。
（2）热水浸提处理：甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为95℃，料液比为1:10(w/v)，浸提次数为3次，每次浸提时间为3h。浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用。
（3）甘草渣的超声辅助浸提处理：将步骤（2）所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件，功率500W，浸提温度为80℃，料液比为1:15(w/v)，浸提次数为2次，浸提时间为30min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去。
（4）醇沉处理：粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为40Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入95%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min,沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至35Brix，进行第二次醇沉，加入75%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5（w/v）用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ。
（5）纯化处理：将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用90%乙醇洗涤3次，收集沉淀，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-80℃，干燥时间为48h得到甘草多糖。
（6）酸沉处理：将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物30Brix，使乙醇浓度低于5%。将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix。使用1:1（v/v）硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至1.5，得到酸沉液Ⅰ。
（7）复溶处理：将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂水 饱和正丁醇进行复溶，按照固液比1:3（w/v），搅拌溶解沉淀Ⅰ50min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ。
（8）氨化处理：将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至8.5，磁力搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ。
（9）酸化处理：将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.0（保证醋酸过量），90℃水浴保温30min，低温静置12h，得到酸化液Ⅰ。
（10）结晶处理：酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置8h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ。沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-60℃，干燥时间为30h；沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐。
（11）纯化处理：上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用XDB-8大孔树脂进行纯化，室温下振荡12h进行静态吸附吸，洗脱液90%乙醇室温下振荡12h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度200℃，出口温度85℃；干燥后得甘草黄酮。
此条件制备的甘草酸单铵盐得率1.92%，纯度为62.1%；甘草黄酮得率3.30%，纯度为31.2%；甘草多糖得率10.61%，纯度为60.4%。
Claims (8)
1.一种甘草活性物质的制备方法，包括：
原料的预处理；将甘草予以筛选，去除各种杂质、用水洗净、干燥、粉碎过60目筛；
热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ，浸提温度为75-95℃，料液比为1:5-1:15，浸提次数为1-3次，每次浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；得到的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声功率300-500W，浸提温度为60-80℃，料液比为1:10-1:20，浸提次数为1-2次，每次浸提时间为20-30min，浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理，转速4200r/min，离心10min，得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30-40Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入75-95%乙醇使之乙醇终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至25-35Brix，进行第二次醇沉，加入75-95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用60-90%乙醇洗涤1-3次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃～-80℃，干燥时间为36-48h，得到甘草多糖。
2.如权利要求1所述一种甘草活性物质的制备方法，其特征在于：还包括酸沉处理、复溶处理、氨化处理、酸化处理和结晶的步骤，其中，
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩以除乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为浓缩至30-35Brix，使乙醇浓度低于5%，得浓缩液Ⅱ，将浓缩液Ⅱ用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix，使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至1.5-2.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂Ⅰ进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ30-60min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至7.5-9.0，搅拌1h，静止分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至4.0以下，70-90℃水浴保温30min，低温静置6-12h，得酸化液Ⅰ；
结晶；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置4-8h，以4200r/min离心20min，离心后得到上清液Ⅱ和沉淀，离心后的沉淀进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-40℃～-60℃，干燥时间为20-30h，沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐。
3.如权利要求2所述一种甘草活性物质的制备方法，其特征在于：还包括纯化步骤，上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，树脂选用XDA-8，LX20B，D101，AB-8其中一种，室温下振荡8-12h进行静态吸附，70-90%乙醇室温下振荡8-12h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30-35Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度160-200℃，出口温度80-85℃，干燥后得甘草黄酮。
4.如权利要求1所述一种甘草活性物质的制备方法，其特征在于：
热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为75℃，料液比为1:5，浸提次数为1次，浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率300W、浸提温度为60℃、料液比为1:10、浸提次数为1次、浸提时间为20min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理，转速4200r/min，离心10min，得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入75%乙醇使之乙醇终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至25Brix，进行第二次醇沉，加入75%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用60%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%，得浓缩液Ⅱ，将浓缩液Ⅱ用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix，使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至1.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂乙酸乙酯进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ30min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至7.5，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至4.0，保证醋酸过量，70℃水浴保温30min，低温静置6h，得酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置4h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-40℃，干燥时间为20h，沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶。利用XDA-8大孔树脂进行纯化，室温下振荡8h进行静态吸附吸，洗脱液70%乙醇室温下振荡8h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度160℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
5.如权利要求1所述一种甘草活性物质的制备方法，其特征在于：
热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ，浸提温度为85℃，料液比为1:15，浸提次数为3次，每次浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率500W、浸提温度为70℃、料液比为1:10、浸提次数为2次、浸提时间为30min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理，以转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入85%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用70%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%；将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix；使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至2.0，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂乙酸乙酯进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ40min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至8.0，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.5，80℃水浴保温30min，低温静置8h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置6h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-50℃，干燥时间为25h；沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液70%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥。喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
6.如权利要求1所述一种甘草活性物质的制备方法，其特征在于：
热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ，浸提温度为85℃，料液比为1:10，浸提次数为2次，每次浸提时间为3h，浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件，功率400W，浸提温度为70℃，料液比为1:20，浸提次数为1次，浸提时间为30min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入85%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入85%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用70%乙醇洗涤2次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-40℃，干燥时间为36h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为30Brix，使乙醇浓度低于5%，将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix；使用体积比1:1硫酸水溶液，搅拌添加，调稀释液pH值至2.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂二氯甲烷进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ40min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至9.0，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.5，80℃水浴保温30min，低温静置8h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置6h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-50℃，干燥时间为25h，沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，真空浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液80%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃；干燥后得甘草黄酮。
7.如权利要求1所述一种甘草活性物质的制备方法，其特征在于：
热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ。浸提温度为85℃，料液比为1:15，浸提次数为2次，每次浸提时间为3h；浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件：功率400W、浸提温度为80℃、料液比为1:15、浸提次数为2次、浸提时间为30min；浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min；得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为35Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入95%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至30Brix，进行第二次醇沉，加入95%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀按照固液比1:5用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用80%乙醇洗涤1次，收集沉淀物，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-60℃，干燥时间为48h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物至35Brix，使乙醇浓度低于5%，将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix；使用体积比1:1硫酸水溶液搅拌添加，调溶液pH值至2.0，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂水饱和正丁醇进行复溶，按照固液比1:3搅拌溶解沉淀Ⅰ60min，使之完全溶解，得有机溶液Ⅰ；
氨化处理；将有机液Ⅰ用浓氨水调pH至8.5，搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.0，80℃水浴保温30min，低温静置10h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置8h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-60℃，干燥时间为30h；沉淀干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ，下相Ⅰ和的上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡10h进行静态吸附吸，洗脱液80%乙醇室温下振荡10h进行解吸，收集洗脱液进行进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为35Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度180℃，出口温度80℃，干燥后得甘草黄酮。
8.如权利要求1所述一种甘草活性物质的制备方法，其特征在于：
热水浸提处理；甘草热水浸提处理，得到浸提液Ⅰ；浸提温度为95℃，料液比为1:10，浸提次数为3次，每次浸提时间为3h；浸提液Ⅰ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅰ，滤渣备用；
甘草渣的超声辅助浸提处理；将所得的滤渣用于超声辅助浸提，得到浸提液Ⅱ，超声辅助浸提条件，功率500W，浸提温度为80℃，料液比为1:15，浸提次数为2次，浸提时间为30min。浸提液Ⅱ通过200目滤布过滤得到粗滤液Ⅱ，滤渣弃去；
醇沉处理；粗滤液Ⅰ经过离心处理转速4200r/min，离心10min。得到澄清液Ⅰ，澄清液Ⅰ经过真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物为40Brix，得到浓缩液Ⅰ，浓缩液Ⅰ加入95%乙醇使之终浓度达到50%，常温静置4h，以4200r/min离心10min,沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀备用，将第一次醇沉上清液通过真空蒸发器浓缩至35Brix，进行第二次醇沉，加入75%乙醇使之终浓度达到70%，常温静置4h，以4200r/min离心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇复溶，90℃回流30min，离心过滤，上清液并入第二次醇沉上清液得最终醇沉上清液Ⅰ，两次乙醇复溶的沉淀物合并，为最终醇沉沉淀物Ⅰ；
纯化处理；将最终醇沉沉淀物Ⅰ于室温下用90%乙醇洗涤3次，收集沉淀，采用真空冷冻干燥工艺进行干燥处理，冷阱温度为-80℃，干燥时间为48h得到甘草多糖；
酸沉处理；将最终醇沉上清液Ⅰ采用真空蒸发器浓缩，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa；浓缩至可溶性固形物30Brix，使乙醇浓度低于5%；将脱除乙醇的浓缩液用去离子水进行稀释使可溶性固形物达到15Brix。使用体积比1:1硫酸水溶液搅拌添加，调稀释液pH值至1.5，得到酸沉液Ⅰ；
复溶处理；将酸沉液Ⅰ于4℃静置12h，以转速4200r/min，进行离心分离20min，得上清液Ⅰ和沉淀Ⅰ，上清液Ⅰ备用，沉淀Ⅰ用有机溶剂水饱和正丁醇进行复溶，按照固液比1:3，搅拌溶解沉淀Ⅰ50min，使之完全溶解，得有机液Ⅰ；
氨化处理；将有机溶液Ⅰ用浓氨水调pH至8.5，磁力搅拌1h，静置分层，得到上相Ⅰ、下相Ⅰ；
酸化处理；将上相Ⅰ使用冰醋酸调pH值至3.0，90℃水浴保温30min，低温静置12h，得到酸化液Ⅰ；
结晶处理；酸化液Ⅰ加入无水乙醇稀释，使乙醇浓度达到90%，低温静置8h，以4200r/min离心20min，得到上清液Ⅱ和沉淀Ⅱ；沉淀Ⅱ进行真空冷冻干燥，真空度为0.014MPa，冷阱温度为-60℃，干燥时间为30h；沉淀物干燥后即得甘草酸单铵盐；
纯化处理；上清液Ⅰ、粗滤液Ⅱ、下相Ⅰ和上清液Ⅱ合并，浓缩至干并用50%乙醇复溶，利用大孔树脂进行纯化，室温下振荡12h进行静态吸附吸，洗脱液90%乙醇室温下振荡12h进行解吸，收集洗脱液进行真空蒸发器浓缩以除去乙醇，浓缩温度为45℃，真空度为0.08MPa，浓缩至可溶性固形物为30Brix，进行喷雾干燥；喷雾干燥进口温度200℃，出口温度85℃；干燥后得甘草黄酮。
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