CN103221415A

CN103221415A - 噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物及其用于治疗癌症的用途

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Publication number: CN103221415A
Application number: CN2011800580092A
Authority: CN
Inventors: D.A.科亚特斯; R.吉尔摩尔; J.A.马丁; E.M.马丁德拉纳瓦
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2010-12-03
Filing date: 2011-11-17
Publication date: 2013-07-24
Anticipated expiration: 2031-11-17
Also published as: CA2819822A1; WO2012074761A1; TW201300397A; AU2011337033A1; CA2819822C; BR112013013282A2; IL226054A0; MX2013006184A; JP2013544835A; CL2013001518A1; EA021241B1; US20120142724A1; CN103221415B; TWI410425B; AR083868A1; ES2567271T3; UA109677C2; CR20130182A; DOP2013000116A; KR101514162B1

Abstract

本发明提供了可用于治疗癌症的噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物。

Description

噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物及其用于治疗癌症的用途

p38 MAP激酶是促***原活化蛋白(MAP)激酶，其属于丝氨酸/苏氨酸激酶超家族。该激酶会被细胞外应激（例如热、紫外线和渗透性应激）以及炎症性刺激（例如脂多糖）激活。当被激活时，p38 MAP激酶会将细胞内的蛋白底物磷酸化，所述底物调节致炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素-1β(IL-1β)、白介素6 (IL-6)和白介素8 (IL-8)的生物合成。这些细胞因子涉入许多慢性炎症性障碍的病理学。慢性炎症是癌症发展的一种关键风险因素。例如，p38 MAP激酶途径是卡波西氏肉瘤相关的疱疹病毒(KSHV)的靶标，所述KSHV导致慢性炎症和肉瘤的发展。另外，由p38 MAP激酶调节的细胞因子（诸如IL-8）已经涉入驱动与肿瘤生长有关的血管生成。促***原活化蛋白激酶-蛋白激酶2 (或pMAPKAPK2) 的磷酸化形式还是p38 MAP激酶途径中的激酶，并且可以被p38 MAP激酶直接活化。MAPKAPK2的小鼠敲除研究显示细胞因子产生的减少，这提示MAPKAPK2可以是炎症应答的关键调节剂，并且还可以是抗炎和/或癌症治疗的潜在靶标(WO2005120509)。

在本领域中已经公开了用于治疗抗炎疾病的氮杂苯并噻唑基p38 MAP激酶抑制剂(例如，WO2007016392)。另外，在本领域中已经公开了用于治疗癌症的氮杂苯并咪唑基p38 MAP激酶抑制剂(例如，WO2005075478)。此外，WO200917822公开了可用作PI3激酶抑制剂的咪唑基噁唑化合物和噁唑并[4,5-b]吡啶-6-基化合物。

但是，某些p38 MAP激酶抑制剂或细胞因子抑制剂可能具有生物利用度和吸收问题，所述问题会限制它们的体内作用和治疗用途。另外，某些p38 MAP激酶抑制剂可能呈现出对患者不利的毒理学效应(特别是胃肠毒性)，并包含患者药物-药物相互作用的风险。因此，需要替代性的细胞因子抑制药物。优选地，这样的化合物能够以提高的效能和更大的生物利用度抑制p38 MAP激酶。优选地，这样的化合物还具有改善的毒理学特性(特别是胃肠毒性)和降低的患者药物-药物相互作用风险。

本发明提供了新颖的噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物，其可能作为单一药剂在临床应用中用于治疗癌症，特别是卵巢癌和/或多发性骨髓瘤。此外，本发明提供了新颖的噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物，其可能与另一种治疗剂（诸如舒尼替尼）联合地在临床应用中用于治疗癌症，特别是肾癌。另外，本发明的化合物是有效的p38 MAP激酶抑制剂(癌细胞中的p38α、p38β和p38 MAP激酶信号传递)，且与某些以前已知的p38 MAP激酶抑制剂相比，可能具有改善的毒理学特性(特别是胃肠毒性)和降低的患者药物-药物相互作用风险。

本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

X是甲氧基乙基或乙氧基甲基；

Q是环丙基、2-甲基-丙醇-2-基、3-甲基氧杂环丁-3-基、1-羟基甲基-1-环丙基。

本发明还提供了结晶性的2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特征在于，其X-射线粉末衍射图样(Cu辐射, λ= 1.54060Å)包含在15.06 (2θ±0.2°)处的峰和一个或多个在19.94、10.31和20.78 (2θ±0.2°)处的峰。

本发明还提供了结晶性的2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特征在于，其X-射线粉末衍射图样(Cu辐射, λ= 1.54060Å)包含在13.73 (2θ±0.2°)处的峰和一个或多个在16.54、22.87和18.57 (2θ±0.2°)处的峰。

本发明提供了一种化合物，它是2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇或其药学上可接受的盐。

本发明提供了一种化合物，它是5-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其药学上可接受的盐。

本发明提供了一种化合物，它是5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其药学上可接受的盐。

本发明提供了一种化合物，它是[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]环丙基]甲醇或其药学上可接受的盐。

本发明提供了一种治疗哺乳动物的卵巢癌的方法，所述方法包括：给需要这样的治疗的哺乳动物施用有效量的本发明的化合物或盐。

本发明提供了一种治疗哺乳动物的多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括：给需要这样的治疗的哺乳动物施用有效量的本发明的化合物或盐。

本发明提供了一种治疗哺乳动物的癌症、特别是肾癌的方法，所述方法包括：与舒尼替尼以同时的、分开的或相继的组合，给需要这样的治疗的哺乳动物施用有效量的本发明的化合物或盐。

本发明还提供了药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相组合的本发明的化合物或盐。在一个具体实施方案中，所述组合物另外包含一种或多种其它的治疗剂。更具体地，所述其它的治疗剂是舒尼替尼。

本发明还提供了用于治疗中的本发明的化合物或盐。本发明还提供了用于治疗癌症的本发明的化合物或盐。另外，本发明提供了本发明的化合物或盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。另外，本发明提供了本发明的化合物或盐用于治疗癌症的用途。具体地，该癌症是卵巢癌。另外，该癌症是多发性骨髓瘤。

本发明还提供了作为联合制剂同时、分开或相继用于治疗中的本发明的化合物或其药学上可接受的盐和舒尼替尼。

本发明还提供了与本发明的化合物或其药学上可接受的盐以同时的、分开的或相继的组合用于治疗癌症的舒尼替尼。在替代方案中，本发明提供了与舒尼替尼以同时的、分开的或相继的组合用于治疗癌症的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。更具体地，所述癌症是肾癌。

技术读者会理解，式I的化合物能够形成盐。本发明的化合物含有碱性杂环，并因此会与许多无机酸和有机酸中的任一种反应，以形成药学上可接受的酸加成盐。这样的药学上可接受的酸加成盐和用于制备它们的常见方法是本领域众所周知的。参见，例如，P. Stahl, 等人 , HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008); S.M. Berge, 等人 , “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Sciences, 第66卷, 第1期, 1977年1月。

技术人员会明白，本发明的化合物含有至少一个手性中心。本发明包括所述化合物的所有单一对映异构体或非对映异构体、以及对映异构体和非对映异构体的混合物，包括外消旋体。优选的是，含有至少一个手性中心的本发明的化合物作为单一对映异构体或非对映异构体存在。单一对映异构体或非对映异构体可以从手性试剂开始制备，或通过立体选择性的或立体特异性的合成技术来制备。可替换地，通过标准的手性色谱或结晶技术，可以从混合物中分离单一对映异构体或非对映异构体。

舒尼替尼（作为SUTENT^®销售）是一种口服的、小分子的、多靶向的受体酪氨酸激酶抑制剂，其被FDA批准用于治疗肾细胞癌和伊马替尼耐药性的胃肠间质瘤。在WO200160814中公开了舒尼替尼。

路线图I

制备式I的化合物，其中R是环丙基或3-甲基氧杂环丁-3-基；X如上面所定义。

在加热下，在乙醇中，用异硫氰酸酯(B)处理邻-羟基吡啶基-3-胺(A)，所述异硫氰酸酯可以是外消旋的或单一对映异构体。在加热过程中定期加入过量的N, N’-二取代的碳二亚胺，以除去硫化氢。例如，可以使用N, N’-二环己基-碳二亚胺、N, N’-二异丙基-碳二亚胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐。在下面的制备例中描述了异硫氰酸酯(B)的合成，所述异硫氰酸酯可以是外消旋的或单一对映异构体。

路线图II

制备式I的化合物，其中R是2-甲基-丙烷甲酸甲酯-2-基（methyl 2-methyl-propanecarboxyate-2-yl）或环丙烷甲酸甲酯-1-基（methyl cyclopropane carboxylate-1-yl）；X如上面所定义。

在***（ether）中用硼氢化锂还原5-(1H-咪唑-4-基)噁唑并[5,4-b]吡啶(C)，得到式I的化合物。如在路线图I中所示，类似地用异硫氰酸酯(B)从对应的羟基吡啶基-3-胺(A)制备中间体(C) (路线图I)，其中R是2-甲基-丙烷甲酸甲酯-2-基或环丙烷甲酸甲酯-1-基。

路线图III

合成中间体(A)，其中R是2-甲基-丙烷甲酸甲酯-2-基、环丙烷甲酸甲酯-1-基、环丙基或3-甲基氧杂环丁-3-基

如下对6-(1H-咪唑-4-基)-3-硝基-吡啶-2-胺(D)的吡啶环进行官能团操作：将2-吡啶基胺基重氮化，然后用水淬灭，再氢化3-吡啶基硝基，得到中间体(A)。

路线图IV

合成中间体(D)，其中R如在路线图III中所定义。

通过在二噁烷中与乙酸铵一起加热，从1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(F)和已知的醛(E)制备中间体(D)。在下面的制备中描述了中间体(F)的合成。

基本上如在路线图、下面的制备例和实施例中所示，制备本发明的化合物。本领域普通技术人员可容易地得到试剂和原料，或者所述试剂和原料可以通过选自有机和杂环化学的标准技术（与已知的结构上类似的化合物的合成类似的技术）的操作和在下面的实施例中描述的操作（包括任何新颖的操作）来制备。应当理解，所述制备和实施例通过例证来阐述，且不是限制性的，并且本领域普通技术人员可以做出各种修改。

通常使用在SYMYX^®Draw 3.2.NET版中的IUPAC命名特征进行下述制备例和实施例的命名。

制备例1

(3S)-3-[苄基-[(1S)-1-苯乙基]氨基]丁酸叔丁酯

制备例1和2已经描述在WO 2006/076595中（关于R,R对映异构体）。关于3-氨基丁酸酯从(E)-丁-2-烯酸酯(巴豆酸酯)的不对称合成，也参见Davies, S. G.和Ichihara, O. Tetrahedron: Asymmetry 1991, 2, 183-186。

在氩气氛下，将(1S)-N-苄基-1-苯基-乙胺(28.53 g, 135 mmol)溶解在无水四氢呋喃(THF)中，并将溶液冷却至0℃。历时30 min逐滴加入n-丁基锂(2.5 M的在己烷中的溶液，54 mL, 135 mmol)。将所述反应混合物在0℃搅拌20 min，然后冷却至-78℃。历时20 min，将(E)-丁-2-烯酸叔丁酯(10 g, 70.32 mmol)在无水THF (75 mL)中的溶液加入所述反应混合物中。75 min以后，通过加入饱和NH₄Cl溶液(175 mL)和饱和NaCl水溶液(盐水, 100 mL)，淬灭反应。分离各层，并用***(2×125 mL)萃取水层。合并的有机层经无水MgSO₄干燥，过滤，并浓缩，得到黄色油。将粗产物溶解在己烷(250 mL)中，并用10% 柠檬酸水溶液(3×75 mL)洗涤。有机层经MgSO₄干燥，过滤，并浓缩，得到作为黄色油的标题化合物(24.12 g, 97%)。LC-ES/MS m/z 354 (M+1)。

制备例2

(3S)-3-[苄基-[(1S)-1-苯乙基]氨基]丁-1-醇

在氩气氛下，将(3S)-3-[苄基-[(1S)-1-苯乙基]氨基]丁酸叔丁酯(24 g, 67.9 mmol)溶解在无水THF (237 mL)中，并冷却至0℃。历时10 min逐滴加入1 M的氢化铝锂在THF中的溶液(237 mL, 237 mmol)。将所述反应混合物在0℃搅拌1 h，然后在60℃搅拌1 h。将混合物冷却至室温(RT)，并用***(500 mL)稀释。通过历时15 min逐份加入西莱特^®和Na₂SO₄·10 H₂O (1:1)的混合物，淬灭反应。过滤所述混合物，并在真空下浓缩，得到作为无色油的标题化合物(17.54 g, 90%)。LC-ES/MS m/z 284 (M+1)。

制备例3

(2S)-N-苄基-4-甲氧基-N-[(1S)-1-苯乙基]丁-2-胺

在氩气氛下，将(3S)-3-[苄基-[(1S)-1-苯乙基]氨基]丁-1-醇(17.54 g, 61.9 mmol)溶解在无水THF (186 mL)中，并冷却至0℃。历时10 min逐份加入氢化钠(4.95 g，在矿物油中的60% 混悬液，123.8 mmol)。将所述混合物在0℃搅拌15 min，然后将其温热至室温。历时30 min逐滴加入碘代甲烷(10.54 g, 74.28 mmol)。搅拌另外30 min以后，通过加入NH₄Cl在水中的饱和溶液，淬灭反应。分离各层，并用***(2×100 mL)萃取水层。合并的有机层经MgSO₄干燥，浓缩，并通过正相色谱法(2个120 g硅胶筒，在己烷中的10%甲基叔丁基醚溶液)纯化粗产物，得到作为无色油的标题化合物(14.96 g, 81%)。LC-ES/MS m/z 298 (M+1)。

制备例4

(S)-4-甲氧基丁-2-胺盐酸盐

将(2S)-N-苄基-4-甲氧基-N-[(1S)-1-苯乙基]丁-2-胺(14.96 g, 50.29 mmol)溶解在甲醇(400 mL)中。通过用氮气在其中鼓泡，将溶液除氧。将20% 的碳载氢氧化钯(1.50 g)加入溶液中，并用氢气饱和得到的混悬液，在氢气氛下搅拌16 h。在此时存在的主产物是单去苄基化的产物。穿过西莱特^®垫过滤混悬液，并将1.1 g 20%碳载氢氧化钯加入得到的溶液中。将所述混悬液在氢气氛下搅拌24 h。穿过西莱特^®垫过滤混悬液，将HCl在***中的2 N溶液(60 mL) 加入混合物中，并搅拌30 min。在减压下浓缩溶液，得到作为白色固体的标题化合物(7.01 g, 99%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl3)；δ1.48 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.8-1.9 (1H, m), 2.0-2.1 (1H, m), 3.37 (3H, s), 3.5-3.7 (3H, m), 8.3 (3H, br)。

制备例5

(R)-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺

下述操作改编自Ellman, J. A. 等人J. Org. Chem. 2007, 72, 626-629。

向HCl的1 N溶液(7.0 mL, 7.00 mmol)中逐滴加入1,3,3-三甲氧基丁烷(53.19 mL, 337.38 mmol)，将得到的溶液加热至50℃，并搅拌30 min。将碳酸氢钠(16.50 g, 196.41 mmol) 加入预先冷却至室温的混合物中，随后加入***和MgSO₄。过滤，随后蒸发溶剂，得到酮-醚中间体4-甲氧基丁-2-酮，为黄色油。在氮气氛下，在25℃，将该油加入(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(36.80 g, 303.64 mmol)和乙醇钛(IV) (123.14 g, 539.80 mmol)在THF (482 mL)中的溶液中。将得到的黄色混悬液加热至60℃，并在该温度搅拌16 h。将所述反应混合物冷却至室温，然后冷却至-48℃。逐滴加入1.0 M的三(仲丁基)硼氢化锂在THF中的溶液(539.80 mL, 539.80 mmol)。将所述反应混合物温热至室温。1 h以后，将所述反应混合物冷却至0℃，在快速搅拌的同时加入甲醇(1100 mL)，直到不再看到气体形成。穿过西莱特^®塞过滤得到的混悬液，并用乙酸乙酯洗涤滤饼。用盐水洗涤滤液，并用乙酸乙酯萃取盐水层2次。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并蒸发为黄色油。

将粗产物吸附在硅胶上，并使用己烷/乙酸乙酯梯度(从7:1至100%乙酸乙酯)穿过硅胶柱进行纯化，得到目标产物。收集含有非极性杂质和目标产物的其它级分，并通过硅胶色谱法再次纯化。用4:1的己烷/乙酸乙酯除去非极性杂质。用95:5的二氯甲烷/甲醇洗脱目标产物，得到额外的物质。将两批物质合并，得到38 g (54%)，通过LCMS发现，其为约3:1比例的希望的/不希望的非对映异构体。

将所述物质(38 g)与使用相同的一般操作制备的另一批物质(23 g)相混合，并通过手性相高效液相色谱法(固定相：OD-H；柱大小：(20µm，80×250 mm)；洗脱模式：等度；流动相：己烷/异丙醇；流速：300 mL/min；紫外检测：215.16 nm；加载：4 g/6 min)分离非对映异构体(3:1比例，61 g)。第一洗脱峰是次要非对映异构体，T_R = 4.75 min。第二洗脱峰是主要非对映异构体(标题化合物)，T_R = 6.61 min。从手性色谱法得到作为浅黄色油的标题化合物(43.5 g)。ES/MS m/z 208 (M+1)；> 98%对映体过量。

制备例6

(S)-4-甲氧基丁-2-胺盐酸盐

在0℃，将4.0 M的氯化氢在二噁烷中的溶液(110.15 g, 419.61 mmol)加入(R)-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(43.5 g, 209.80 mmol)在1,4-二噁烷(109 mL)中的溶液中，并将所述反应混合物在室温搅拌1 h。在减压下浓缩溶剂，将残余物再悬浮于甲苯中，并在减压下蒸发溶剂。将残余物在真空下干燥15 min。加入THF，形成白色固体沉淀物。滤出白色固体，用THF洗涤，进行干燥和收集，得到标题化合物(25.4 g, 87%)。

通过用(S)-(–)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯基-乙酸衍生化，并与从手性途径得到的制备例4的(S)-4-甲氧基丁-2-胺的相同衍生物进行NMR对比，可以证实胺的绝对构型。

制备例7

(3S)-3-异硫氰酰基-1-甲氧基-丁烷

将(S)-4-甲氧基丁-2-胺盐酸盐(25.4 g, 181.92 mmol)悬浮于THF (609 mL)中，并加入三乙胺(TEA, 32.17 mL, 230.78 mmol)。将1,1'-硫代羰基二咪唑(46.74 g, 251.76 mmol)加入该白色混悬液(轻微放热反应)中，并将得到的黄色混悬液在氮气氛下搅拌过夜。将乙酸乙酯(500 mL) 加入该黄色混悬液中，随后加入1 N HCl (500 mL)。分离有机相，并用1 N HCl (3×200 mL)、水(200 mL)和盐水(200 mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到标题化合物(25.3 g, 83%)，为黄色油。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)；δ1.37 (3H, d, J= 6.6 Hz), 1.83 (2H, q, J= 6.6 Hz), 3.35 (3H, s), 3.6-3.4 (2H, m), 3.99 (1H, 6个, J= 6.6 Hz)。

制备例8

2,2-二甲基-3-氧代-丙酸甲酯

将3-羟基-2,2-二甲基-丙酸甲酯(52.4 g, 396.49 mmol)溶解在二氯甲烷(495 mL)中，并将所述混合物在冰水浴中冷却。逐份加入三氯异氰尿酸(101.36 g, 436.14 mmol)，随后加入2,2,6,6-四甲基哌啶-N-氧化物(6.20 g, 39.65 mmol)。将所述混合物在0℃搅拌15 min，然后将其温热至室温，并搅拌另外60 min。然后穿过西莱特^®过滤固体，并用二氯甲烷(300 mL)冲洗。用Na₂CO₃在水中的饱和溶液洗涤滤液。有机相经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到标题化合物(41.24 g, 80%)，为浅绿色油。该产物不经进一步纯化用于下一反应步骤。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)；δ1.34 (6H, s), 1.34 (6H, s), 3.74 (3H, s), 9.64 (1H, s)。

制备例9

6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺

在氮下，将6-氯-3-硝基-吡啶-2-基胺(1254 g, 7.23 mol)、三乙胺(1510 mL, 10.84 mol)和乙腈(10 L)装入20 L的配有机械搅拌器的4-颈圆底烧瓶中。向得到的黄色混悬液中，加入碘化亚铜(I)(13.9 g, 72.3 mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(II)(50.72 g, 72.3 mmol)。将得到的淡橙色混悬液冷却至0–5℃，然后用氮气脱气10 min。历时60 min逐滴加入1-乙炔基-2,4-二氟-苯(1100 g, 7.95 mol)溶解在乙腈(2.5 L)中的溶液。将得到的混合物在室温(30℃)搅拌过夜。将所述混合物冷却至0–5℃。将甲苯(6 L)加入混悬液中，并将混合物搅拌45 min，穿过玻璃料过滤。用甲苯(3×3 L)、水(2×3 L)洗涤固体，并在真空干燥箱中干燥过夜，得到作为黄色固体的标题化合物(1750 g, 92%)。LC-ES/MS m/z 276 (M+1)。

制备例10

1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮

向6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺(500 g, 1.82 mol)在丙酮(10 L)中的冷混悬液(0–10℃)中，加入冷缓冲液[NaH₂PO₄ (0.8 M)/Na₂HPO₄ (0.8 M)= 85/15 (V/V)] (pH = 6.0; 0-10℃; 10 L)。将温度维持在15℃。逐份(3份)加入高锰酸钾(1035 g, 6.55 mol)。将混合物在15℃搅拌4 h。将pH调至pH = 5.0，并使温度保持在15℃以下。缓慢地加入28% 硫代硫酸钠溶液(2054 mL, 3.64 mol)，维持温度低于15℃和pH低于7.5。将盐水(7.5 L)以及甲基叔丁基醚(3.75 L)和乙酸乙酯(3.75 L)的混合物加入混悬液中。将混合物在13℃搅拌15 min。分离两相，并用甲基叔丁基醚(3.5 L)萃取褐色水性混悬液2次。收集合并的有机层，用盐水(2×3 L)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下蒸发溶剂，得到作为黄色固体的标题化合物(375 g)。在相同条件下重复该实验另外2次。合并得到的批料，得到1080 g。LC-ES/MS m/z 308 (M+1)。

制备例11

2-[4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯

向带有回流冷凝器的圆底烧瓶中，加入1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(50 g, 162.75 mmol)、乙酸铵(126.72 g, 1.63 mol)、2,2-二甲基-3-氧代-丙酸甲酯(42.36 g, 325.51 mmol)和1,4二噁烷(163 mL)。历时1.5 h将所述反应混合物加热至80℃。在加热的同时，最初的橙色溶液变成深色。在减压下浓缩反应混合物以消除二噁烷，并将残余物在高真空下干燥过夜。将残余物重新溶解于乙酸乙酯(800 mL)中，并用2 M的Na₂CO₃在水中的溶液萃取。有机相经MgSO₄干燥，浓缩，并在高真空下干燥过夜，得到作为粗橙色固体的标题化合物(80 g)，将其不经进一步纯化地用于下一步。LC-ES/MS m/z 418 (M+1)。

制备例12

2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-(6-羟基-5-硝基-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯

向2-[4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(56 g, 134.17 mmol)在二甲亚砜(DMSO, 400 mL)和水(320 mL)中的溶液中，逐滴加入硫酸95-97% (80 mL)。然后，将混合物冷却至0℃。在0℃历时15 min向上述混合物中逐滴加入亚硝酸钠(18.70 g, 268.35 mmol)在水(80 mL)中的溶液。将所述反应混合物在该温度搅拌20 min，然后除去冷却浴，并使温度升高至室温。向反应混合物中加入0.8 M的缓冲的磷酸二氢钠水溶液(1200 mL, pH = 6)。出现黄色混悬液。将该混悬液在室温搅拌1 h。过滤固体，用水洗涤，并在烘箱中干燥，得到作为橙色固体的标题化合物(49.5 g, 88%)。LC-ES/MS m/z 419 (M+1)。

制备例13

2-[4-(5-氨基-6-羟基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯

在氢(气球)气氛下，将2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-(6-羟基-5-硝基-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(49.5 g, 118.32 mmol)和活性炭负载的5重量%的钯(基于干重)(4.95 g, 2.33 mmol)在甲醇(1.18 L)中的混合物在室温搅拌过夜。穿过西莱特^®过滤该混悬液，用甲醇冲洗，并在减压下浓缩滤液，得到粗标题化合物(39 g)，为褐色固体。

如下纯化得自多次运行的粗物质(90 g, 231.74 mmol)。将所述物质悬浮于二氯甲烷(450 mL)和乙酸乙酯(450 mL)的1:1混合物中。将所述混悬液在室温搅拌过夜。滤出混悬液，并用二氯甲烷/乙酸乙酯的1:1混合物洗涤固体。将该褐色固体干燥，并收集，得到67 g标题化合物，通过液相色谱法质谱法联用确定其具有>98%纯度。LC-ES/MS m/z 389 (M+1)。

制备例14

2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯

在室温，将(3S)-3-异硫氰酰基-1-甲氧基-丁烷(24.68 g, 169.94 mmol)加入2-[4-(5-氨基-6-羟基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(55 g, 141.62 mmol)在乙醇(550 mL)中的混悬液中。将所述反应混合物在回流下搅拌过夜，然后冷却至50℃。将二环己基碳二亚胺(37.99 g, 184.10 mmol)加入该混合物中，并将得到的混悬液在回流下搅拌20 h。使反应物达到室温，并在减压下蒸发溶剂。将残余物吸附在硅胶中，并通过硅胶柱(首先使用二氯甲烷作为洗脱液以除去大部分非极性杂质，然后用95:5的二氯甲烷/甲醇作为洗脱液以洗脱目标产物)进行纯化，得到标题化合物(52 g, 74%)，为深褐色泡沫。LC-ES/MS m/z 500 (M+1)。

制备例15

2-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]异吲哚啉-1,3-二酮

将(2S)-2-氨基丙-1-醇(26 mL, 333 mmol)和邻苯二甲酸酐(51.7 g, 349.4 mmol)的混合物在140℃加热过夜。在这期间，固体变成橙色液体。将反应物冷却至室温，并用乙酸乙酯(10 mL/g)稀释。用饱和的NaHCO₃和10% 柠檬酸洗涤有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并浓缩，得到作为白色固体的标题化合物(68.3 g, 98%)，其不经进一步纯化地使用。LC-ES/MS m/z 206 (M+1)。

制备例16

2-[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]异吲哚啉-1,3-二酮

向2-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]异吲哚啉-1,3-二酮(47 g, 229 mmol)和碘乙烷(89.3 g, 572.5 mmol)在THF (376 mL)中的溶液中，一次性地加入叔丁醇钾(64.25 g, 572.5 mmol)。将所述混合物在氮气氛下搅拌15 h。用乙酸乙酯(200 mL)稀释混合物，并用盐水(200 mL)洗涤。用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取水相。合并的有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤，在减压下浓缩，然后在高真空下干燥，得到作为橙色固体的标题化合物(39.4 g,74%)，其不经进一步纯化地使用。LC-ES/MS m/z 234 (M+1)。

制备例17

(2S)-1-乙氧基丙-2-胺盐酸盐

将2-[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]异吲哚啉-1,3-二酮(12.84 g, 55 mmol)溶解在甲醇(120 mL)中。缓慢地加入一水合肼(6.9 mL, 138 mmol)，并将所述混合物在40℃搅拌4 h (形成白色固体)。加入NaOH (1 mL)，pH升高至13-14。过滤固体，并用二氯甲烷洗涤。分离滤液层，并用二氯甲烷进一步萃取水层。合并的有机层经MgSO₄干燥，并过滤。将2 N的HCl在***中的溶液(70 mL, 140 mmol)加入该溶液中。将所述混合物搅拌15 min，并在减压下蒸发溶剂，得到作为白色固体的标题化合物(6.61 g, 86%)。¹H NMR(400 MHz, CD₃OD)；δ1.22 (t, 3 H, J = 7.02 Hz), 1.28 (d, 3 H, J = 6.52 Hz), 3.42 (m, 2H), 3.58 (m, 3H)。

制备例18

(2S)-1-乙氧基-2-异硫氰酰基-丙烷

向(2S)-1-乙氧基丙-2-胺盐酸盐(2 g, 12.03 mmol)在二甲基甲酰胺(DMF, 20 mL)和TEA (1.85 mL, 13.24 mmol)中的溶液中，加入1,1'-硫代羰基二咪唑(2.36 g, 13.24 mmol)。将所述混合物在氮气氛下搅拌16 h。用乙酸乙酯稀释所述混合物，并用1 N HCl、水和盐水彻底洗涤，经MgSO₄干燥，并在减压下浓缩(浴温不超过20℃，以避免产物蒸发)，得到含有标题化合物的粗物质(1.84 g)，其不经进一步纯化地原样使用。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)；δ1.26 (t, 3H, J= 7.13 Hz), 1.33 (d, 2H, J = 6.63 Hz), 3.46 (dd, J = 5.86, 1.62 Hz, 2H), 3.55 (dd, J = 13.98, 6.97 Hz, 2H), 3.93 (m, 1H)。

制备例19

3-甲基氧杂环丁烷-3-甲醛

将(3-甲基氧杂环丁-3-基)甲醇(6.0 g, 58.75 mmol)溶解在二氯甲烷(117 mL)中。在-5℃逐份加入三氯异氰尿酸(13.93 g, 59.92 mmol)，随后加入2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基（2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl）(TEMPO)(0.92 g, 5.87 mmol)。将所述反应混合物在-5℃搅拌20 min，将其温热至室温，并搅拌另外20 min。穿过西莱特^®垫过滤混合物，用二氯甲烷(200 mL)稀释，并用饱和Na₂CO₃水溶液(100 mL)、1 N HCl (100 mL)和盐水(50 mL)洗涤。浓缩有机部分，得到作为橙色油的标题化合物(4.17 g, 71%)，其不经进一步纯化地使用。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)；δ 1.48 (s, 3H), 4.50 (d, 2H, J = 6.34 Hz), 4.88 (d, 2H, J = 6.34 Hz), 9.95 (s, 1H)。

替代制备例：

在0℃，将溴化钾(11.65 g, 0.098 mol)加入(3-甲基氧杂环丁-3-基)甲醇(200 g, 1.96 mol)和TEMPO (3.06 g, 0.019 mol)在二氯甲烷(2 L)中的混合物中。然后，将10% 次氯酸钠水溶液(1.6 L, 2.35 mol)（用固体NaHCO₃调至pH= 9）逐滴加入上述溶液中(加入3 h，保持内部温度< 10℃)。将得到的混合物搅拌15 min，并分离两相。用10% 2-丙醇/二氯甲烷混合物萃取水相，直到通过薄层色谱法在水相中不可检出产物。用饱和硫代硫酸钠溶液洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，过滤，并浓缩，得到作为橙色油的标题化合物(114 g, 58%)。

制备例20

1-甲氧基羰基环丙烷甲酸

将环丙烷-1,1-二甲酸二甲酯(26.08 mL, 189.87 mmol)溶解在甲醇(319 mL)中，并将溶液冷却至0℃。逐滴加入1 N的NaOH在水中的溶液(190 mL, 190 mmol, 1当量)。将得到的混合物在室温搅拌过夜。在减压下浓缩溶液以除去甲醇，并用二氯甲烷(3×50 mL)洗涤得到的水溶液，用1 N HCl (pH = 2–3)酸化。然后用乙酸乙酯(5×100 mL)和二氯甲烷(3×50 mL)萃取溶液。合并的有机部分经MgSO₄干燥，过滤，并浓缩，得到标题化合物(16.4 g, 60%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)；δ1.9-1.7 (m, 4H), 3.78 (s, 3H)。

制备例21

1-(羟甲基)环丙烷甲酸甲酯

将1-甲氧基羰基环丙烷甲酸(16.4 g, 113.89 mmol)、TEA (17.6 mL, 127.55 mmol)、和THF (325 mL)装入圆底烧瓶中。将所述混合物冷却至-10℃，并逐滴加入氯甲酸异丁酯(16.5 mL, 127.55 mmol)。将溶液搅拌1 h。在单独的烧瓶中，将硼氢化钠(13 g, 341.67 mmol)溶解在THF (165 mL)和水(40 mL)的混合物中，并冰浴中冷却。通过过滤，从第一溶液中除去不溶物。向所述硼氢化物溶液中历时1.5 h逐滴加入上述的1-甲氧基羰基环丙烷甲酸溶液。将得到的溶液在相同温度搅拌1 h。将所述反应混合物倒入冷的20% 柠檬酸水溶液中，并用乙酸乙酯(3×150 mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到标题化合物(13.5 g, 91%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)；δ0.9-0.8 (m, 2H), 1.3-1.2 (m, 2H), 3.62 (s, 2H)3.69 (s, 3H)。

制备例22

1-甲酰基环丙烷甲酸甲酯

将1-(羟甲基)环丙烷甲酸甲酯(16.0 g, 123.07 mmol)溶解在二氯甲烷(320 mL)中，并将所述混合物冷却至-5℃。逐份加入三氯异氰尿酸(29.1 g, 125.5 mmol)，随后加入TEMPO (1.9 g, 12.3 mmol)。将所述反应混合物在-5℃搅拌20 min，将其温热至室温，并搅拌20 min。穿过西莱特^®垫过滤混合物，并用二氯甲烷(500 mL)稀释。用饱和的Na₂CO₃ (300 mL)、1 N HCl (300 mL)、盐水(300 mL)和饱和的氯化铵(3×200 mL)洗涤该溶液。有机部分经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到19 g标题化合物，其仍然含有二氯甲烷(理论上15.75 g)。将该物质原样用于下一反应。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)；δ1.7-1.6 (m, 4H), 3.81 (s, 3H), 10.38 (s, 1H)。

制备例23

6-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-胺

给KIMAX^®试管装入1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(5 g, 16.28 mmol)、1,4-二噁烷(50 mL)和乙酸铵(6.27 g, 81.38 mmol)。将环丙烷甲醛(3.42 mL, 48.83 mmol)逐滴加入所述混合物中。用氮气净化得到的混合物，密封试管，并将其在80℃加热过夜；此后将混合物冷却至室温。然后将所述混合物在减压下浓缩至干燥。加入乙酸乙酯(700 mL)和饱和的NaHCO₃水溶液。分离有机层，用盐水(3×250 mL)洗涤，经MgSO₄干燥，并浓缩，得到粗标题化合物(5.5 g)，其不经进一步纯化地用于下一步。LC-ES/MS m/z 358 (M+1)。

基本上按照在制备例23中描述的操作，使用1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮和适当的醛作为原料，制备下表中的中间体。

*在90℃反应1.5 h。在后处理过程中，通过加入碳酸氢盐溶液，形成固体沉淀物，并收集。如前所述对滤液进行后处理，得到红色油。在乙酸乙酯/己烷的4:1混合物中对所述油进行声处理，得到混悬液，将其过滤。

制备例26

6-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-醇

将6-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-胺(5.51 g, 15.41 mmol)悬浮于二甲亚砜(DMSO, 32 mL)、水(25 mL)和浓H₂SO₄ (6 mL)中。在0℃冷却混悬液，以维持温度低于5℃的速率，逐份加入亚硝酸钠(2.13 g, 30.81 mmol)。将所述混合物在0℃搅拌30 min，然后将其温热至室温，并搅拌，直到液相色谱法/质谱法(LC/MS)显示原料的完全转化(1小时)。将0.8 M的磷酸二氢钠水溶液(200 mL)加入所述混合物中。形成黄色混悬液。然后加入1 N的NaOH水溶液，直到pH升高至8。将所述混合物搅拌30 h，过滤，并用水冲洗固体，然后在减压下干燥，得到标题化合物(4.53 g, 82%)。LC-ES/MS m/z 358.9 (M+1)。

基本上按照在制备例26中描述的操作，使用适当的3-硝基-吡啶-2-胺作为原料，制备下表中的中间体。

制备例29

3-氨基-6-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]吡啶-2-醇

将6-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-醇(4.525 g, 12.63 mmol)溶解在乙醇(63 mL)中。通过用氮气鼓泡，将溶液脱气。将10% Pd/C (920 mg)逐份加入所述混合物中，并用氢气饱和所述混合物。将所述混合物在氢气氛(气球)下在室温搅拌度过周末，此时LC/MS显示完全转化。穿过西莱特^®垫过滤混悬液以除去催化剂，并在减压下浓缩溶液，得到标题化合物(3.97 g, 89%)。LC-ES/MS m/z 328.9 (M+1)。

基本上按照在制备例29中描述的操作，使用适当的3-硝基-吡啶酚作为原料，制备下表中的中间体。

制备例32

1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]环丙烷甲酸甲酯

将1-[4-(5-氨基-6-羟基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]环丙烷甲酸甲酯(4 g, 10.35 mmol)和(2S)-1-乙氧基-2-异硫氰酰基-丙烷(2.379 g, 15.53 mmol)的混合物溶解在乙醇(34 mL)中。在密封烧瓶中，将所述混合物加热至85℃保持16 h。逐滴加入二异丙基碳二亚胺(3.21 g, 20.71 mmol)，并将所述混合物在85℃搅拌16 h，此后加入额外的3 g二异丙基碳二亚胺，并将所述混合物在85℃加热另外4 h。蒸发溶剂，并通过正相色谱法(120 g硅胶筒，使用己烷-乙醇梯度)纯化残余物，得到标题化合物(1.180 g, 24%)。LC-ES/MS m/z 498.1 (M+1)。

用于合成实施例 1 替代物的制备例

制备例33

(S)-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺

关于在N-叔丁烷亚磺酰基亚胺的还原中三仲丁基硼氢化锂（L-Selectride）相对于硼氢化钠的对比，参见Faul, M. M. J. Org. Chem. 2007, 71, 6859-6862。

将1,3,3-三甲氧基丁烷(145.4 g, 0.98 mol)与1 N盐酸水溶液(50.0 mL, 0.05 mol)相混合，并在氮气氛下在室温搅拌1–2 h。加入THF (1.5 L)，在标准大气压下在70℃以下蒸发溶剂2次。加入THF (1.5 L)，以制备4-甲氧基丁-2-酮在THF中的溶液。加入(S)-(–)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(124.4 g, 1.03 mol)和乙醇钛(IV)(447.0 g, 1.96 mol)，并将反应物加热至65–70℃保持16–17 h。将所述反应混合物冷却至-10至0℃。分份加入硼氢化钠(37.0 g, 0.98 mol)，然后将所述混合物在相同温度搅拌1–2 h。将所述反应混合物温热至室温，并搅拌1–2 h。然后将它冷却至10–20℃，并历时1–2 h逐滴加入甲醇(100 mL)。加入25% 氯化钠水溶液(300 mL)，并将所述混合物温热至室温。加入乙酸乙酯(500 mL)。将所述混合物在室温搅拌1-2 h，然后过滤。用额外的乙酸乙酯(807 mL)冲洗滤饼。分离各层，并用25% 氯化钠水溶液(1.0 L)洗涤有机相。用乙酸乙酯(500 mL)萃取水相。合并有机部分，在大气压(无真空)下在75℃以下蒸馏溶剂，得到300–500 mL总体积的溶液。加入乙酸乙酯(600 mL)和硫代硫酸钠(150.0 g)，并将所述混合物在20–30℃搅拌1–2 h。过滤所述混合物，并浓缩滤液。通过超临界流体色谱法分离非对映异构体，得到作为黄色油的标题化合物(205.0 g, 65%)。柱：ChiralPak^®AD 10 μm，50×300 mm；洗脱模式：等度；流动相：CO₂/乙醇；流速：280 mL/min；紫外检测：215.16 nm；加载：300 mg/mL。第一洗脱峰是次要非对映异构体，T_R = 15.17 min。第二洗脱峰是代表标题化合物的主要非对映异构体，T_R = 17.11 min。

制备例34

(3S)-3-异硫氰酰基-1-甲氧基-丁烷

在氮气氛下，混合甲醇(185 mL)、THF (1.76 L)和N-S-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(220.0 g, 1.06 mol)，并冷却至-10至0℃。逐滴加入盐酸(1.26 L, 5.3 mol, 4.2 N的在THF中的溶液)，并维持温度低于10℃。将所述反应混合物在0–10℃搅拌3–4 h，并在减压下在45℃以下浓缩成400.0–600.0 mL的溶液体积。加入THF (880 mL)，并将所述反应混合物在减压下在45℃以下浓缩成400-600 mL的溶液体积。将所述反应混合物冷却至20–30℃，并搅拌0.5–1 h。加入(S)-4-甲氧基丁-2-胺盐酸盐的晶种(5.0 g, 35.8 mmol)(晶种可以从得自制备例4或6的固体制备，或者可以使用本领域技术人员公知的其它方法诸如小等分试样的重结晶得到)。还加入甲基叔丁基醚(660 mL)，并将所述混合物在20–25℃搅拌2–4 h。将所述混合物冷却至0–5℃，并搅拌2–4 h。通过过滤收集固体，并用甲基叔丁基醚(110 mL)洗涤滤饼。在室温将所述固体转移至反应容器，并加入甲基叔丁基醚(660 mL)。加入硫代硫酸钠(270.0 g, 1.9 mol)和氢氧化钠(42.5 g, 1.06 mol)，并将所述混合物在10–20℃搅拌1–2 h。过滤所述混合物，并用甲基叔丁基醚(440 mL)洗涤滤饼，得到作为在甲基叔丁基醚中的粗溶液的(S)-4-甲氧基丁-2-胺(87.5 g)。如下将该物质用于下一反应。

在氮气氛下，加入N, N-硫代羰基二咪唑(97.0 g, 0.55 mol)和THF (470 mL)，并将所述混合物搅拌15–30 min。将所述混合物冷却至-10至0℃，加入(S)-4-甲氧基丁-2-胺(46.9 g, 0.455 mol)在甲基叔丁基醚(389 mL)中的溶液，并将所述反应混合物温热至10–20℃。将所述反应混合物在该温度搅拌15–20 h，然后冷却至0–10℃。加入盐酸(275 mL, 4 N在水中的溶液)，达到pH 1-2。将所述反应混合物温热至室温，并分离各层。用乙酸乙酯(235 mL)萃取水层，合并有机层，并用水(140 mL)洗涤。在减压下在45℃以下浓缩有机溶液，加入乙酸乙酯(211.5 mL)，并在减压下在45℃以下浓缩溶液2次，加入乙酸乙酯(235 mL)。加入硫代硫酸钠(32.3 g, 227.0 mmol)，过滤溶液，并用乙酸乙酯(104 mL)洗涤滤饼。在减压下在45℃以下浓缩滤液，得到作为黄色油的标题化合物(55.0 g, 77%)。

制备例35

2,2-二甲基-3-氧代-丙酸甲酯

在氮气氛下，在室温，在搅拌下，混合3-羟基-2,2-二甲基-丙酸甲酯(25.4 kg, 192.2 mol)和二氯甲烷(241 L)。加入(2,2,6,6-四甲基-哌啶-1-基)氧基(0.61 kg, 3.9 mol)，并将所述反应混合物冷却至0–5℃。在0–5℃逐份加入三氯异氰尿酸(31.2 kg, 134.5 mol)，并将所述反应混合物在该温度搅拌16–18 h。过滤所述反应物，并用二氯甲烷(25.4 L)洗涤滤饼，在减压下在50℃以下浓缩滤液。加入1,4-二噁烷(25.4 L)，在减压下在65℃以下浓缩有机相，得到作为黄色液体的标题化合物(127.8 kg, 77%)，其不经进一步纯化地使用。

制备例36

6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺

在氮气氛下，在20–25℃，在搅拌下，混合6-氯-3-硝基-吡啶-2-基胺(16.2 kg, 93.3 mol)、乙腈(130.8 L)、碘化亚铜(0.18 kg, 1.0 mol)、和双(三苯基膦)氯化钯(II)(0.66 kg, 0.9 mol)。加入三乙胺(19.7 L, 141.3 mol)，并将所述混合物加热至30–35℃。在氮气氛下，在30–35℃，加入1-乙炔基-2,4-二氟-苯(18.0 kg, 130.3 mol)在乙腈(32.6 L)中的溶液。将所述混合物在15–25℃搅拌2–4 h。加入甲苯(80.0 L)，并将所述混合物搅拌0.5–1 h，然后冷却至0–5℃，并搅拌2–4 h。将所述反应混合物离心，并用甲苯(2×64 L)和水(2×32.4 L)冲洗滤饼。在减压下在50℃以下干燥固体，得到作为黄色固体的标题化合物(21.7 kg, 83%)。

制备例37

1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮

在氮气氛下，将6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺(2.0 kg, 7.3 mol)和丙酮(40.5 L)加入反应器中，并在搅拌下将所述混合物冷却至0–10℃。在0–15℃，加入水(38.3 L)、磷酸二氢钠(3.3 kg)和磷酸氢二钠(0.7 kg)的缓冲溶液。将所述混合物冷却至3–6℃，并在3–6℃加入固体高锰酸钾(4.1 kg, 25.9 mol)。将所述混合物搅拌3 h至5 h，然后将所述反应混合物的各部分转移至装有在15–20℃的水(9.3 L)和五水合硫代硫酸钠(3.6 kg)的容器。在15–25℃搅拌所述混合物。加入水(50 L)，并将所述混合物搅拌0.5–1 h，并过滤。在减压下在45℃以下浓缩滤液。当溶剂的蒸馏结束时，在20–25℃加入水(40 L)，并将所述混合物搅拌0.5–1 h。通过过滤收集固体，并在40℃以下干燥滤饼，得到作为黄色固体的标题化合物(1.7 kg, 75%)。

制备例38

2-[4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯甲磺酸盐

在氮气氛下，在搅拌下，在20–25℃，将乙酸铵(30.0 kg, 389.2 mol)、1,4-二噁烷(193.6 L)和2,2-二甲基-3-氧代-丙酸甲酯(10.2 kg, 78.4 mol)混合0.5–1 h。加入1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(18.5 kg, 60.2 mol)，并将所述混合物在20–25℃搅拌10–14 h。加入甲苯(36.9 L)，在减压下在65℃以下浓缩溶液。加入甲苯(76.8 L)，然后在减压下在65℃以下浓缩溶液。加入甲苯(36.9 L)和乙酸乙酯(37.1 L)，并过滤所述混合物。将滤液放在一边，将滤饼转移进单独的反应器，并加入乙酸乙酯(37.1 L)。将所述混合物在搅拌下加热至50–60℃保持20–30 min。将所述混合物冷却至20–25℃，过滤，并将滤液与先前的滤液合并。在减压下在60℃以下浓缩合并的滤液，并加入甲苯(76.8 L)。在减压下在65℃以下浓缩所述混合物。加入乙酸乙酯(18.6 L)和甲苯(18.3 L)，并将所述溶液加热至50–70℃。加入甲磺酸(4.3 L, 66.2 mol)在乙酸乙酯(18.6 L)中的溶液，并将该反应物搅拌1–2 h。将所述反应物冷却至10–25℃，并搅拌2–5 h。通过过滤收集固体，并用乙酸乙酯(18.6 L)洗涤滤饼，得到作为褐色固体的标题化合物(17.0 kg, 96.2% 纯度, 46.2%收率)。¹H NMR (d ₆-DMSO, 400 MHz)δ1.69 (s, 6H), 2.36 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 6.89 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.00 (s, 1 H), 7.25 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.27 (dd, 1H, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz), 7.45 (ddd, 1H, J = 10.0 Hz, 10.0 Hz, 2.4 Hz), 7.83-7.68 (m, 2 H), 8.40 (d, 1H, J = 8.8 Hz)。

制备例39

在氮气氛下，加入2-[4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯甲磺酸盐(68.9 g, 134.2 mmol)、二甲亚砜(275.5 mL)、THF (116.2 mL)和水(303.2 mL)，并在20–25℃搅拌所述混合物。将硫酸95-97% (93.6 mL)逐滴加入所述反应混合物中，并维持温度低于30℃。将所述反应混合物冷却至0–5℃，并在0–10℃加入亚硝酸钠(18.6 g, 0.27 mmol)在水(82.7 mL)中的溶液。将所述反应混合物在该温度搅拌1–2 h。逐滴加入10% 磷酸二氢钠水溶液(930.0 mL)，以维持温度低于25℃。将得到的混合物在15–25℃搅拌2–3 h，并通过过滤收集固体。用水(138 mL)洗涤滤饼，并将固体转移进反应容器中。加入甲醇(566 mL)，并将所述混合物加热至60–65℃保持1–2 h。加入水(87 mL)，并将所述混合物在60–65℃搅拌1–2 h。将所述反应混合物冷却至15–25℃，并将所述混合物在15–25℃搅拌2–4 h。过滤所述混合物，用甲醇(87 mL)洗涤滤饼，并在真空下在70℃以下干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(53.28 g, 93%)。

制备例40

在15–25℃，混合2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-(6-羟基-5-硝基-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(90.0 g, 0.22 mol)、湿的10% Pd/C (4.5 g)和甲醇(1.77 L)。将所述反应物在20–25 psig氢气氛下搅拌3–6 h。穿过硅藻土过滤所述反应混合物，用甲醇(227 mL)洗涤助滤剂。在减压下在40℃以下浓缩滤液，并加入甲基叔丁基醚(729.3 mL)。在减压下在40℃以下除去MTBE，并加入更多的甲基叔丁基醚(729.3 mL)。在减压下在40℃以下除去MTBE。加入甲基叔丁基醚(182 mL)和甲醇(46 mL)，并将所述混合物加热至50–60℃保持1–2 h。将所述混合物冷却至10–15℃，并搅拌2–4 h。通过过滤收集固体，并用甲基叔丁基醚(61 mL)洗涤滤饼。在真空下在50℃以下干燥固体，得到作为黄色固体的标题化合物(75.0 g, 88%)。

制备例41

在氮气氛下，在25–30℃，用氮气将二甲亚砜(713 mL)脱气0.5–1 h。加入2-[4-(5-氨基-6-羟基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(35.0 g, 90.0 mmol)和(3S)-3-异硫氰酰基-1-甲氧基-丁烷(19.58 g, 0.14 mol)，并将反应物加热至63–68℃。将所述反应混合物在该温度搅拌18–24 h，然后分份加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(19.3 g, 100.7 mmol)。将所述反应混合物在60–65℃搅拌2–4 h。如果所述反应物没有达到完全转化，加入额外的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.9 g, 9.9 mmol)。将所述反应混合物冷却至20–30℃，并经硅藻土过滤。将乙酸乙酯(351 mL)和水(350 mL)加入所述滤液中。分离各层，并用乙酸乙酯(312 mL)萃取水相。合并有机层，并用水(2×210 mL)洗涤，然后加入庚烷(626 mL)。将所述溶液搅拌0.5–1 h，并经硅胶过滤，用乙酸乙酯(351 mL)和庚烷(348 mL)的混合物冲洗。在减压下在45℃以下浓缩溶液，并加入乙酸乙酯(156 mL)。加入活性炭(3.5 g)，并将所述混合物在搅拌下加热至60–70℃保持0.5–1 h。将所述混合物冷却至20–30℃，过滤，并在减压下在45℃以下浓缩滤液。将甲苯(242 mL)加入得到的残余物中，并在减压下在45℃以下浓缩所述物质。加入甲苯(40 mL)，将所述混合物在搅拌下加热至60–70℃保持0.5–1 h。将所述混合物冷却至25–30℃，搅拌2–4 h，然后冷却至0–5℃。将所述混合物在0–5℃搅拌2–4 h，并通过过滤收集固体。用甲苯(40 mL)洗涤滤饼，并在减压下在60℃以下干燥，得到作为灰白色固体的标题化合物(33.0 g, 71%)。

实施例1

2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇

将2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(497 mg, 0.99 mmol)溶解在***(5 mL)和THF (2.5 mL)的混合物中。将所述混合物冷却至0℃，并逐份加入硼氢化锂(45.6 mg, 1.99 mmol)。然后将所述反应混合物在室温在氮气氛下搅拌2 h。缓慢地加入1 M HCl，直到pH=1，并将所述混合物在室温搅拌15 min。用固体NaHCO₃碱化所述混合物，并分离各层。用二氯甲烷萃取水层，合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过正相色谱法(40 g硅胶筒, 20% 乙醇在己烷中的溶液)纯化粗物质。得到褐色固体(298 mg)，将其通过反相色谱法(XBRIDGE™柱(5 μm, 19×100 mm)：梯度为35-38%的乙腈在碳酸铵水溶液(pH = 9)中的溶液。流速25 mL/min)进一步纯化，得到193 mg (41%)标题化合物。LC-ES/MS m/z 472 (M+1)。[α]_D ²² +33.79°(c = 0.72, 甲醇)。

实施例1的替代纯化

将2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(50 g, 100.1 mmol)溶解在***(1 L)和THF (500 mL)的混合物中。将所述混合物冷却至0℃，并加入硼氢化锂(4.36 g, 200.19 mmol)。将所述反应混合物在室温在氮气氛下搅拌2 h。缓慢地加入1 M HCl (600 mL)(气体形成)，并将得到的混合物在室温搅拌1.5 h。分离各层，并用甲基叔丁基醚萃取水相。通过加入2 M NaOH (200 mL)来碱化水层(pH= 8)，并用二氯甲烷(3×400 mL)萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩为褐色泡沫。穿过硅胶柱(洗脱液：95:5的二氯甲烷/3N的NH₃在甲醇中的溶液)洗脱粗产物，得到作为紫色泡沫的目标产物(35 g)。将所述固体悬浮于2:1的庚烷/甲基叔丁基醚混合物中，并进行声处理。将所述混悬液在室温搅拌过夜。过滤固体，并在真空下干燥，得到作为结晶性灰白色固体的标题化合物(30 g, 64%)。MS (m/z): 472 (M+1)。

实施例1：制备例33–41的替代途径

在氮下，将2-甲基四氢呋喃(135 mL)冷却至-5到0℃，并分份加入硼氢化锂(4.95 g, 0.23 mol)，维持温度低于10℃。在-5到0℃，逐滴加入2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(45.0 g, 0.09 mol)在2-甲基四氢呋喃(225 mL)中的溶液，并搅拌12–14 h。在-5到0℃逐滴加入2 M盐酸水溶液(203 mL)，并将所述反应混合物在搅拌下加热至30–40℃保持1–2 h。将所述反应混合物冷却至15–25℃，并分离各层。用水(135 mL)和2 M盐酸水溶液(45 mL)的混合物萃取有机相，并弃去有机相。合并水层，并逐滴加入25% 氢氧化钠水溶液(75 mL)，以调至pH = 8-9。在室温用二氯甲烷(225 mL)萃取所述水层，并分离各层。用水(2×180 mL)洗涤有机部分，然后在减压下在40℃以下浓缩。加入甲基叔丁基醚(231 mL)，并在减压下在40℃以下浓缩溶液2次。加入乙酸乙酯(101 mL)，并将所述混合物在搅拌下加热至50–60℃保持1–2 h。将所述溶液在搅拌下冷却至0–5℃保持2–4 h。过滤固体，并用庚烷(66 mL)洗涤滤饼。将所述固体转移至反应容器，加入乙酸乙酯(181 mL)，然后将所述混合物在搅拌下加热至70–75℃保持0.5–1 h。将所述混合物冷却至50–60℃，并逐滴加入庚烷(157 mL)，搅拌2–4 h。然后将所述混合物在搅拌下冷却至10–15℃保持2–4 h。过滤固体，并用庚烷(66 mL)洗涤滤饼。将所述固体转移至反应容器，并加入乙酸乙酯(406 mL)。将所述混合物在搅拌下加热至60–75℃保持0.5–1 h。然后将它冷却至40–45℃，并在减压下在45℃以下浓缩，得到大约200 mL总体积的溶液。将所述混合物在搅拌下加热至70–75℃保持0.5–1 h，然后冷却回-50至60℃。加入庚烷(268 mL)，随后加入晶种(2.25 g)(晶种可以从得自实施例1的前面产物批次的固体制备，或者可以使用本领域技术人员公知的其它方法诸如小等分试样的重结晶得到)。将所述混合物在50–60℃搅拌2–4 h。将所述混合物冷却至10–15℃，并搅拌2–4 h。通过过滤收集固体，并用乙酸乙酯(18 mL)和庚烷(16 mL)的混合物洗涤滤饼。在减压下在65℃以下干燥滤饼，得到作为灰白色固体的标题化合物(27.5 g, 63%)。HPLC方法：柱：ChiralPak^®AD-H，5 μm，4.6×250 mm；洗脱模式：等度；流动相：己烷/异丙醇/二乙胺(92：8：0.1)；流速：1.0 mL/min；紫外检测：337 nm。T_R = 22.6 min，100%对映体过量。

实施例 1 的化合物， X- 射线粉末衍射 (XRPD)

在配有CuKa源（λ= 1.54060Å）和Vantec检测器的Bruker D4 Endeavor X-射线粉末衍射仪（在35 kV和50 mA运行）上，得到结晶固体的XRPD图样。在4°至40°2θ之间扫描样品，步长为0.009°2θ，扫描速率为0.5秒/步，并具有0.6 mm发散、5.28固定防散射和9.5 mm检测器狭缝。将干燥粉末装填在石英试样器上，并用载玻片获得光滑表面。在环境温度和相对湿度下采集晶体形式衍射图样。在本案中，±0.2 2θ的峰位变异考虑了这些可能的变化，而不妨碍所示晶体形式的明确鉴定。基于区别峰(以°2θ为单位)、通常是更显著峰的任意独特组合，可以进行晶体形式的确认。基于在2θ为8.853和26.774度的NIST 675标准峰，调节在环境温度和相对湿度下采集的晶体形式衍射图样。

表1：实施例1形式I的X-射线粉末衍射峰

。

因而，使用CuK_α辐射，通过X-射线衍射图样，可以将本发明的结晶性的2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇形式I表征为具有表1所示的衍射峰(2θ值)，特别是具有与一个或多个在19.94、10.31和20.78处的峰相组合的在15.06处的峰；且更特别地，具有在15.06处的峰；伴随有0.2度衍射角的容差。

实施例1 (游离碱形式II)：

如下制备实施例1的游离碱形式II：将8.01 g游离碱与100 mL甲基叔丁基醚一起在125 mL烧瓶中混合，得到固体的褐色浆。在300 rpm和50℃，将所述样品制浆过夜。18小时以后，样品是在酒红色上清液下面的灰白色固体浆。蒸发样品，使体积减少大约一半，并通过真空过滤回收灰白色固体。将得到的灰白色固体滤饼在65℃真空干燥箱中干燥2小时。回收7.15 g固体(89%)。

表2：实施例1形式II的X-射线粉末衍射峰

。

因而，使用CuK_α辐射，通过X-射线衍射图样，可以将本发明的结晶性的2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇形式II表征为具有表1所示的衍射峰(2θ值)，特别是具有与一个或多个在16.54、22.87和18.57处的峰相组合的在13.73处的峰；且更特别地，具有在13.73处的峰；伴随有0.2度衍射角的容差。

实施例2

2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，甲磺酸盐

将2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇(37.5 mg, 0.080 mmol)溶解在二氯甲烷/甲醇的1:1混合物(共1 mL)中。逐滴加入0.5 M的甲磺酸在甲醇中的溶液(0.16 mL)。将所述混合物在室温搅拌30 min。在减压下蒸发溶剂，将得到的残余物与叔丁基甲基醚一起研磨2次。在真空下干燥残余物，得到标题化合物(42 mg, 93%)。LC-ES/MS m/z 472 (M+1)。

实施例3

2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，盐酸盐

在60℃，向浅粉红色的2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇(25.7 g, 54.51 mmol)在甲基叔丁基醚(771 mL)中的混悬液中，加入4.0 M的HCl在二噁烷中的溶液(16.35 mL, 65.41 mmol)。将得到的混悬液加热至60℃保持30 min，然后使其逐渐达到室温。形成固体，在氮气惰性气氛下过滤，并迅速地收集，在真空下在60℃干燥过夜，得到作为奶油色（creamy）固体的标题化合物(27 g, 98%)。LC-ES/MS m/z 472 (M+1)。

实施例4

2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1R)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇

使用基本上与它的S对映异构体相同的合成途径制备标题化合物，差别是，在制备例1中，使用(1R)-N-苄基-1-苯基-乙胺替代S对映异构体。[α]_D ²²-32.11º, (c = 0.54, 甲醇)。

实施例5

2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1R)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇甲磺酸盐

使用基本上与在实施例2中关于它的S对映异构体描述的相同操作，制备标题化合物。

实施例6

5-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺

给KIMAX^®试管装入3-氨基-6-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]吡啶-2-醇(0.7 g, 2.13 mmol)和乙醇(7 mL)。加入(3S)-3-异硫氰酰基-1-甲氧基-丁烷(0.46 g, 3.2 mmol)，密封烧瓶，并将所述混合物加热至85℃。16 h以后，加入N,N'-二环己基碳二亚胺(0.88 g, 4.26 mmol)，并将所述混合物在密闭试管中在85℃搅拌4 h。在该时间以后，将额外的N,N'-二环己基碳二亚胺(0.44 g, 2.13 mmol)加入该混合物中。在85℃继续加热过夜。在该时间以后，将额外的N,N'-二环己基碳二亚胺(0.88 g, 4.26 mmol)加入该混合物中，并在85℃继续加热4 h。在减压下浓缩粗反应物，并通过正相色谱法(120 g硅胶筒，二氯甲烷–乙醇梯度)纯化残余物。使用XBRIDGE™柱(5µm, 19×100 mm)和36%的乙腈在20 mM NH₄HCO₃ (pH 9)中的溶液的等度程序，以25 mL/min的流速，历时5 min，通过半制备型反相高效(LC/MS)进一步纯化含有期望的化合物的级分，得到标题化合物(0.15 g, 16%)。LCES/MS m/z 440 (M+1)；[α]_D ²² +58.60°, (c = 0.50, 甲醇)。

实施例7

5-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺甲磺酸盐

将5-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺(0.090 g, 0.23 mmol)溶解在二氯甲烷和甲醇的1:1混合物(共3 mL)中。将0.5 M的甲磺酸在甲醇中的溶液(0.47 mL)逐滴加入所述溶液中。将所述混合物在室温搅拌30 min，然后在减压下蒸发溶剂。将残余物与甲醇混合，并浓缩2次，得到标题化合物(0.111 g, 89%)。LC-ES/MS m/z 440 (M+1)。

实施例8

5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺

给KIMAX^®试管装入3-氨基-6-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]吡啶-2-醇(2.28 g, 6.36 mmol)和乙醇(18 mL)。加入(3S)-3-异硫氰酰基-1-甲氧基-丁烷(1.39 g, 9.54 mmol)，密封烧瓶，并将所述混合物加热至85℃。16 h以后，加入(3S)-3-异硫氰酰基-1-甲氧基-丁烷(700 mg)，并将所述混合物在密闭试管中在85℃搅拌48 h。加入N,N'-二异丙基碳二亚胺(1.04 g)，并将所述混合物在密闭试管中在85℃搅拌3 h。在减压下浓缩粗反应混合物，通过正相色谱法(120 g硅胶筒，己烷–乙醇)纯化残余物。期望的化合物在3%的乙醇处洗脱，得到作为褐色固体的标题化合物(2.61 g, 87%)。LC-ES/MS m/z 470 (M+1)；[α]_D ²² +42.2°, (c = 0.50, 甲醇)。

实施例9

5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺甲磺酸盐

将5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺(0.72 g, 1.54 mmol)溶解在二氯甲烷/甲醇的1:1混合物(共15 mL)中。将0.5 M的甲磺酸在甲醇中的溶液(3.07 mL)逐滴加入该溶液中。将所述混合物在室温搅拌30 min，然后在减压下蒸发溶剂。将残余物与叔丁基甲基醚一起研磨，得到作为褐色固体的标题化合物(0.841 g, 97%)。LC-ES/MS m/z 470 (M+1)。

实施例10

[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]环丙基]甲醇

在氮气氛下，将1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]环丙烷甲酸甲酯(0.9 g, 1.99 mmol)溶解在干燥的***(20 mL)和干燥的THF (7 mL)中，并冷却至0℃。逐份加入硼氢化锂(87 mg, 3.99 mmol)，并将所述混合物在0℃搅拌1 h。通过在室温历时30 min向所述混合物中逐滴加入1 N HCl直到pH=1，淬灭剩余的反应物。用乙酸乙酯洗涤所述混合物，用NaOH碱化水层(直到pH = 8)，并用二氯甲烷萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩。使用己烷-乙醇的梯度，通过正相色谱法(120 g硅胶筒)纯化残余物，得到标题化合物(0.56 g, 60%)。LC-ES/MS m/z 470.2 (M+1)；[α]_D ²²-18.00º, (c = 0.50, MeOH)；[α]_D ²²-18.0°, (c = 0.50, CHCl₃)。

实施例11

[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]环丙基]甲醇甲磺酸盐

将[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]环丙基]甲醇(0.56 g, 1.19 mmol)溶解在二氯甲烷/甲醇的1:1混合物(共12 mL)中。将0.5 M的甲磺酸在甲醇中的溶液(2.37 mL)逐滴加入所述溶液中。将所述混合物在室温搅拌30 min，然后在减压下蒸发溶剂。将残余物与甲醇混合，并浓缩2次，得到标题化合物(0.64 g, 96%)。LC-ES/MS m/z 470.1 (M+1)。

生物学测定法

下述测定证实，本发明的实施例化合物是p38αMAP激酶的有效抑制剂，是p38βMAP激酶的有效抑制剂，也是癌细胞中的p38 MAP激酶信号传递的有效抑制剂。下述测定还证实，实施例1或实施例1的盐(实施例2或3)在体内具有有效活性，且是有效的抗癌剂（单独地和/或与其它溶瘤剂相组合地）。

p38 α MAP 激酶酶活性的抑制

试剂制备：

将激酶反应缓冲液制备为含有1440µL 1 M 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)pH 7.5、240µL 1 M MgCl₂、72µL 1 M二硫苏糖醇(DTT)、25µL 10% TRITON^®X-100、43223µL H₂O的储备溶液。通过混合下述物质，制备底物混合物：2775µL激酶反应缓冲液、75.0µL 10 mM三磷腺苷(ATP)、270µL 4 mM (9.17 mg/mL)EGFR肽(Upstate Biotechnology/Millipore)和12.5µL ³³P-ATP。通过在3000µL反应缓冲液中稀释0.1 mg/mL的纯化的人p38αMAP激酶溶液，制备p38 MAP激酶酶储备溶液。通过将试验化合物以10 mM溶解在100% 二甲亚砜(DMSO)中，制备试验化合物的储备溶液。通过在198µL 20% DMSO中稀释2µL 10 mM储备物，制备100µM储备物稀释板。使用Tecan液体处理器，从100µM储备物制备在20% DMSO中的1:3稀释液。

激酶测定：

就激酶测定而言，将5µL稀释的化合物转移至反应板，随后加入10µL酶储备溶液(使用MULTIDROP^®液体分配器加入)。为了开始反应，用MULTIDROP^®加入10µL底物混合物，并将所述平板摇振30秒。最终的反应条件如下：25 mM HEPES pH 7.5、4.25 mM MgCl₂、1.30 mM DTT、0.004% TRITON^®X-100、100µM ATP、100µM EGFR肽、11.8 nM p38αMAP激酶和4% DMSO。将所述反应物在室温温育60分钟，然后通过加入75µL 5% 醋酸(新鲜制备)来停止。停止后，将100µL反应混合物转移至用100µL 0.5% 醋酸预先洗涤的磷酸纤维素滤板(Millipore, NAPH)。将所述反应混合物在磷酸纤维素板上温育30分钟，使用多头抽真空装置过滤，并用300µL 0.5% 正磷酸洗涤1次，然后用200µL 0.5% 正磷酸洗涤2次。在洗涤步骤以后，加入80µL MICROSCINT^TM20，并在Trilux MICROBETA^®中计数放射性。使用Activity Base软件(IDBS)，计算IC₅₀值。所有实施例化合物具有小于0.050 μM的IC₅₀。例如，实施例1具有IC₅₀ = 0.003 μM。该测定证实，实施例1的化合物是p38αMAP激酶的有效抑制剂。

p38 β MAP 激酶酶活性的抑制

试剂制备：

基本上如上所述制备激酶反应缓冲液。通过混合下述物质，制备底物混合物：2840µL激酶反应缓冲液、15.0µL 10 mM的ATP、125µL 4 mM的EGFR肽(9.174 mg/ml)、18.75µL ³³P-ATP。通过在2000µL反应缓冲液中稀释2.25µL 0.57 mg/mL的商业p38βMAP激酶的溶液(Upstate Biotechnology/Millipore)，制备p38βMAP激酶酶储备溶液。基本上如上所述制备试验化合物的储备溶液。

激酶测定：

基本上如关于p38αMAP激酶所述，进行激酶测定。最终的反应条件如下：25 mM HEPES pH 7.5、4.25 mM MgCl₂、1.30 mM DTT、0.004% TRITON^®X-100、20µM ATP、65µM EGFR肽、0.25 ng/µL p38βMAP激酶、4% DMSO。所有实施例化合物具有小于0.050 μM的IC₅₀。例如，实施例1具有IC₅₀ = 0.007 μM。该测定证实，实施例1的化合物是p38βMAP激酶的有效抑制剂。

在基于细胞的测定中对 p38 MAP 激酶的抑制

通过测量在有试验化合物存在下的TNFα刺激以后的p-MAPKAPK2水平，测定HeLa细胞中的p38 MAP激酶抑制。在含有10% 胎牛血清(FBS, GIBCO)的Dulbecco氏改良的伊格尔培养基(DMEM培养基)中，培养人HeLa细胞(ATCC)。在含有0.1% 最终DMSO浓度的细胞培养基中，制备试验化合物的1:3稀释系列。就测定而言，将60,000个细胞/孔铺板在96孔聚-D-赖氨酸板内的100µL含有10%胎牛血清的DMEM培养基中。在5% CO₂培养箱中，将细胞在37℃温育过夜。次日，将平板倒置以除去培养基，并加入90µL含有DMSO (对照孔)或试验化合物稀释系列的新鲜培养基。在有5% CO₂存在下，将平板在37℃温育1小时。1小时以后，将20µL 100 ng/mL的人TNFα溶液(在DMEM/FBS中制备)加入孔中，得到18.2 ng/mL的终浓度。用TNFα处理所有孔，但是对照最小信号孔除外，其不接受TNFα。将细胞与TNFα一起温育15分钟(37℃/5% CO₂)，以便刺激MAPKAPK-2（p38 MAP激酶底物）的磷酸化。

就cELISA测定而言，通过倒置平板，除去培养基。通过加入PREFER^®固定剂(Anatech Ltd)在室温保持30分钟，固定细胞。用100µL含有0.1% TRITON^®X-100的磷酸盐缓冲盐水(PBS)(该混合物被称作PBST)洗涤细胞3次，每次5分钟。将100µL 0.6%的H₂O₂在PBST中的溶液加给细胞保持15分钟，以淬灭过氧化物酶，然后再用PBST洗涤3次，每次5分钟。通过加入5% 牛血清白蛋白(BSA)溶液在室温保持1小时，封闭细胞。用PBST洗涤细胞3次，每次5分钟。将细胞与针对p-MAPKAPK-2 Thr334(细胞信号传递(Cell Signaling))的第一抗体在含有5% BSA的PBST中的1/1000稀释液一起在4℃温育过夜。用PBST洗涤细胞3次，每次5分钟。用第二抗体即过氧化物酶缀合的抗-兔Ig抗体(Amersham)在含有5% BSA的PBST中的1/1000稀释液在室温处理细胞1小时。用PBST洗涤细胞3次，每次5分钟。

对于信号的检测，使用SUPERSIGNAL^®ELISA femto试剂盒(Pierce)。在使用之前，混合相等部分的Femto鲁米那/增强剂和过氧化物酶。将100µL混合物加入每个孔中，并使用微量培养板混合器摇振1分钟。使用Victor 1420光度计，测定相对光单位。使用Activity Base软件(IDBS)，确定相对IC₅₀值。所有实施例化合物具有小于0.050 μM的IC₅₀。例如，实施例1具有IC₅₀ = 0.0016 μM。该测定证实，实施例1的化合物是癌细胞中的p38 MAP激酶信号传递的有效抑制剂。

原初 C57BL/6 小鼠中的 p38 MAP 激酶的体内靶标抑制 (IVTI)

使用p-MAPKAPK2（p38 MAP激酶底物）的流式细胞计量术测定，测量口服施用试验化合物的小鼠的外周血单核细胞(PBMC)中的p38 MAP激酶的IVTI。

存活阶段：

将雄性C57BL/6小鼠(6-8周龄)随机分成4组。通过经口管饲法，在0.1 mL体积的媒介物(1% 羟乙基纤维素(HEC)、0.25% TWEEN^®80、0.05% 消泡剂)中施用试验化合物。给对照动物施用0.1 mL不含有试验化合物的媒介物。对于单次剂量和剂量响应研究而言，在给药后2小时，处死动物。对于时程研究而言，在给药后的不同时间点（通常，1、2、4、6、18和24小时）处死动物。在EDTA包被的试管(AQUISEL)中收集全血。

通过流式细胞计量术检测PBMC中的磷酸-MAPKAPK2：

将100 μL小鼠全血加入每个EDTA试管中，并在37℃温育10分钟。以下述稀释度，在染色剂/洗涤缓冲液中制备3种抗体的混合物：FITC–缀合的大鼠抗-小鼠Ly-6G mAb (BD Biosciences)1:25；APC缀合的大鼠抗-小鼠CD11b mAb (BD Biosciences)1:10；和小鼠BD Fc Block (BD Biosciences)1:100。以5 mg/mL的浓度，在DMSO中制备茴香霉素(Sigma)的储备溶液。将15 μL茴香霉素储备物等分在单个试管中，并在-20℃保存用于单次使用。在测定当天，在染色剂/洗涤缓冲液(BD)中，将茴香霉素从储备物(5 mg/mL)稀释至100 μg/mL。将等体积的稀释的茴香霉素与抗体混合物混合。

将20 μL上述混合物加入每个全血试管中，每20秒1个试管。在轻轻摇动下，在恒温混合器中在37℃温育样品15分钟。在水中5倍稀释Lyse/Fix缓冲液(BD Biosciences)，并温热至37℃。以与前述相同的次序，将1.6 mL稀释的Lyse/Fix缓冲液(= 1X工作浓度)加入每个试管中，每20秒1个试管。在摇动下，在37℃温育样品10分钟。然后将细胞在室温在600×g离心8分钟。用3 mL洗剂/染色剂缓冲液、PBS和5% 去补体的（decomplemented）（热灭活的）FBS洗涤细胞1次。小心地弃去上清液，以避免损失细胞沉淀物。在透化介质B (Caltag)中一起稀释抗-磷酸-MAPKAPK-2 (Thr334)抗体(Cell Signaling Technology, 27B克隆)和小鼠Fc片段(二者都是250倍稀释)。将200 μL稀释的抗体混合物用于重新悬浮细胞。

然后将细胞在室温温育30分钟。然后加入3 mL染色剂/洗涤缓冲液，并如上所述离心细胞。用3 mL染色剂/洗涤缓冲液重复洗涤。在染色剂/洗涤缓冲液中稀释山羊F(ab')2抗-兔免疫球蛋白-PE缀合物(Biosource)(250倍稀释)。然后将200 μL稀释的抗体加入每个试管中。

将样品在室温温育30分钟。然后加入3 mL染色剂/洗涤缓冲液，并离心细胞。用3 mL染色剂/洗涤缓冲液重复洗涤。最后，将细胞再悬浮于250 μL PBS +1% 的去补体的(热灭活的)FBS中。通过流式细胞计量术(FACScaliber, BD)分析样品。在通过侧向和前向散射确定存活的单细胞群体以后，测量由CD11b^hiLy6G^-限定的(门控的)单核细胞群体中的p-MAPKAPK2水平。

数据分析:

分析单核细胞中的中间荧光强度，以确定p-MAPKAPK2的水平。使用茴香霉素刺激的单核细胞中的p-MAPKAPK2(pMK2)水平减去未刺激的单核细胞的水平（得自媒介物对照动物），确定信号窗。使用下述方程式，确定试验化合物的% 抑制：

。

使用该方案，实施例1的化合物在给药后2小时的70% 抑制的阈值有效剂量(TED₇₀)是5.1 mg/kg。通过在相同测定中测量血浆中的循环化合物测得的在给药后2小时的70% 抑制的阈值有效浓度(TEC₇₀)是39.4 ng/mL (0.084 μM)。该测定证实，实施例1的化合物在体内具有有效活性。

荷瘤小鼠中的 p38 MAP 激酶的体内抑制

将使用人肿瘤细胞系U87MG的鼠异种移植物模型用于评估肿瘤中的p38 MAP激酶的抑制。

存活阶段：

在雌性无胸腺裸鼠(24-26 g, Harlan)后胁腹处皮下注射5 x 10⁶个U87MG细胞/动物。以0.2 mL体积，在细胞培养基和BD MATRIGEL™基质的1:1混合物中注射细胞。植入后7天，使用测径器测量肿瘤，并记录数据。此后每周测量肿瘤2次，并记录肿瘤大小。当肿瘤达到大约250 mm³的平均体积时(通常在植入后10-15天)，将动物随机分成8-10只的组用于处理。然后给动物口服施用0.2 mL单独的媒介物(1% HEC、0.25% TWEEN^®80、0.05% 消泡剂)或含有试验化合物的媒介物。给药后2小时，将动物安乐死。切离肿瘤，并立即通过在含有完全蛋白酶和磷酸酶抑制剂的混合液(Roche Standard片剂完全、无EDTA的蛋白酶抑制剂混合液. 目录号11873580001)的1% TRITON^®X-100溶液中匀浆化进行处理。另外，在乙二胺四乙酸(EDTA)包被的试管中收集血液，并以96孔板形式制备血浆用于暴露分析。

肿瘤裂解物中的p-MAPKAPK2测定：

使用Mesoscale Discovery (MSD)捕获ELISA试剂盒(2磷酸-MAPKAPK-2 (Thr334))，确定肿瘤裂解物中的p-MAPKAPK2水平。使用BioRad DC蛋白测定试剂盒(BioRad)，确定裂解物中的蛋白的浓度。使用1% TRITON^®X-100溶液，将得自每种肿瘤裂解物的蛋白样品调至2 mg/mL。对于p-MAPKAPK2的中尺度检测，将50µg肿瘤裂解物加入预置了捕获抗体(= 针对总MAPKAPK2蛋白的抗体)的含有碳电极的96-孔板中。使用钌-标记的抗p-MAPKAPK2检测抗体，探测p-MAPKAPK2水平。在与检测抗体一起温育以后，洗涤MSD板，随后加入MSD读出缓冲液。在通过电极通电以后，电化学发光导致光的产生，使用MSD Sector 6000仪器将所述光量化。对于每个研究，相对于媒介物对照组计算% 抑制，并使用JMP软件包进行ANOVA (计算统计方差分析的工具)分析，用于确定统计显著性。通过代表性研究中的免疫印迹，证实分析。从该研究可以确定，就肿瘤中的p38 MAP激酶靶标抑制而言，实施例1的化合物具有2.9 mg/kg的TED₇₀，且TEC₇₀是31.3 ng/mL。该数据证实，就实施例1的化合物而言，在肿瘤中的靶标抑制效能类似于在PBMC中的靶标抑制效能。

在异种移植物模型中确定体内效力

A2780异种移植物模型：

从Charles River Laboratories得到大约22-25 g的雌性CD1 nu/nu小鼠。顺应1周以后，以0.2 mL体积，在细胞培养基和BD MATRIGEL™基质的1:1混合物中，在每只小鼠的后胁腹处皮下注射2 x 10⁶个A2780人卵巢癌细胞。每周2次地通过测径器测量来监测肿瘤大小。当平均肿瘤大小达到150 mm³时，将动物随机分成10只的组。在随机化以后，开始p38 MAP激酶抑制剂治疗。在0.2 mL体积的1% HEC、0.25% TWEEN^®80、0.05% 消泡剂(HEC/TWEEN^®)中口服施用实施例2。以1、3和10 mg/kg的剂量施用化合物。按照4天给药、3天停药的计划，每天3次地(TID)进行定量给药。进行3个定量给药循环。在定量给药期间，每周2次地监测肿瘤体积，并相对于媒介物对照组(n=10只动物)监测效力(肿瘤生长抑制)。在最后一次p38 MAP激酶抑制剂给药后1、2和8小时，从动物得到血浆，以确定所述动物中的化合物的循环水平。

OPM-2多发性骨髓瘤异种移植物模型：

从Taconic得到20-22 g体重的雌性CB-17 SCID小鼠。在顺应1周后，以2.5 戈（Gray）的剂量辐照小鼠。在辐照后24小时内，以0.2 mL体积，在细胞培养基和BD MATRIGEL™基质的1:1混合物中，在小鼠的后胁腹处皮下注射1.0 x 10⁷个OPM-2细胞。每周2次地通过测径器测量来监测肿瘤大小。当肿瘤大小达到100-150 mm³时，将动物随机分入给药组。在随机化以后，开始化合物治疗。在0.2 mL体积的1% HEC、0.25% TWEEN^®80、0.05% 消泡剂(HEC/TWEEN^®)中口服施用实施例2。以15和30 mg/kg的剂量施用化合物。每天2次地(BID)进行定量给药，治疗28天。在定量给药期间，每周2次地监测肿瘤体积，并相对于媒介物对照组(n=10只动物)监测效力(肿瘤生长抑制)。

与舒尼替尼组合的786-O异种移植物模型：

从Harlan Labs得到24-26 g体重的雌性无胸腺裸鼠。在顺应1周后，以0.2 mL体积，在细胞培养基和BD MATRIGEL™基质的1:1混合物中，在每只小鼠的后胁腹处皮下注射5 x 10⁶个786-O人肾细胞癌细胞。每周2次地通过测径器测量来监测肿瘤大小。当平均肿瘤体积达到150-200 mm³时，将动物随机分成8-10只的组。在随机化以后，开始p38 MAP激酶抑制剂治疗。在0.2 mL体积的1% HEC、0.25% TWEEN^®80、0.05% 消泡剂(HEC/TWEEN^®)中口服施用化合物。每天2次地(BID)进行单独的或者与10 mg/kg或20 mg/kg舒尼替尼相组合的15 mg/kg的定量给药，所述舒尼替尼也在相同媒介物中每天2次地口服给药。每周2次地监测肿瘤体积，并相对于媒介物治疗的对照动物对比效力(肿瘤生长抑制)。

得自该研究的数据证实，p38 MAP激酶抑制(15 mg/kg BID)会增强以20 mg/kg施用的舒尼替尼的抗肿瘤效力。使用肿瘤体积对数（log tumor volume）相对于时间的双向重复测量方差分析，进行协同作用的统计评估。该分析证实了15 mg/kg BID的p38 MAP激酶抑制剂和20 mg/kg BID的舒尼替尼之间的总体上显著的协同作用(p> 0.0001)。

本发明的化合物优选地配制为通过多种途径施用的药物组合物。最优选地，这样的组合物是用于口服或静脉内给药。这样的药物组合物和它们的制备方法是本领域众所周知的。参见，例如，REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy 等人编, 第21版, Lippincott Williams & Wilkins, 2005)。

本发明的化合物通常在宽剂量范围内有效。例如，每日剂量通常在约14-155 mg的范围内。在有些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可能更合适，而在其它情况下，甚至可能采用更大的剂量，而不会造成任何有害的副作用，因此，以上剂量范围无意以任何方式限制本发明的范围。应该理解，实际施用的化合物的量将由医师按照相关情况来确定，所述相关情况包括：要治疗的病症，选择的给药途径，所施用的实际的一种或多种化合物，个体患者的年龄、重量和响应，以及患者症状的严重程度。

Claims

1.下式的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

X是甲氧基乙基或乙氧基甲基；

2.根据权利要求1所述的化合物，其是2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其是结晶性的2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特征在于，其X-射线粉末衍射图样(Cu辐射, λ= 1.54060Å)包含在15.06(2θ±0.2°)处的峰和一个或多个在19.94、10.31和20.78(2θ±0.2°)处的峰。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其是结晶性的2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特征在于，其X-射线粉末衍射图样(Cu辐射, λ= 1.54060Å)包含在13.73(2θ±0.2°)处的峰和一个或多个在16.54、22.87和18.57(2θ±0.2°)处的峰。

5.根据权利要求1所述的化合物，其是5-[2-环丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其药学上可接受的盐。

6.根据权利要求1所述的化合物，其是5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其药学上可接受的盐。

7.根据权利要求1所述的化合物，其是[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]氨基]噁唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]环丙基]甲醇或其药学上可接受的盐。

8.一种药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相组合的根据权利要求1-7中的任一项所述的化合物或盐。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其另外包含一种或多种治疗剂。

10.一种治疗哺乳动物的癌症的方法，所述方法包括：给需要这样的治疗的哺乳动物施用有效量的根据权利要求1-7中的任一项所述的化合物或盐，其中所述癌症选自卵巢癌和多发性骨髓瘤。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述癌症是卵巢癌。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。

13.一种治疗肾癌的方法，所述方法包括：给需要这样的治疗的哺乳动物施用有效量的与舒尼替尼相组合的根据权利要求1-7中的任一项所述的化合物或盐。

14.根据权利要求13所述的方法，其中与舒尼替尼以同时的、分开的或相继的组合施用所述化合物或盐。

15.用于治疗中的根据权利要求1-7中的任一项所述的化合物或盐。

16.用于治疗癌症的根据权利要求1-7中的任一项所述的化合物或盐。

17.根据权利要求16使用的化合物或盐，其中所述癌症是卵巢癌。

18.根据权利要求16使用的化合物或盐，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。

19.与舒尼替尼以同时的、分开的或相继的组合用于治疗癌症的根据权利要求1-7中的任一项所述的化合物或盐。

20.根据权利要求19使用的化合物或盐，其中所述癌症是肾癌。