CN103083523B - 一种用于治疗慢性***炎的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗慢性***炎的中药组合物，属于中药领域。该中药组合物的有效成分是以蛤蚧、赤芍、马鞭草、韭菜子、天冬和蜂房为原料药，经过水提、醇提等工艺加工而成，本发明同时公开了该中药组合物制剂的制备方法。该中药组合物对慢性***炎具有显著的治疗效果。

Description

一种用于治疗慢性***炎的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，尤其是一种用于治疗慢性***炎的中药组合物，属于中药领域。

背景技术

(一)慢性***炎的流行病学研究

慢性***炎是一个全球性的健康问题，据国内统计数据显示，慢性***炎患者可占到泌尿科门诊中的20％-30％，其病理发病率为24.3％，其第一个发病年龄高峰在30-39岁，约为34.4％，另一个高峰为60-69岁，发病率约为36.4％。

(二)慢性***炎的治疗现状与存在问题

慢性***炎的治疗应以缓解疼痛、改善排尿症状和提高生活质量为目标，对其疗效的评价应以症状的改善为主。目前对慢性***炎的治疗方法种类多样，临床常见的有药物疗法、物理疗法、免疫治疗、生物治疗、综合疗法等，各种治法效果不尽相同，临床报道数据不一，长期效果不稳定。目前尚有待新的治疗方法或药物的诞生，而将其实现不仅须在理论上有所突破，也需要在临床上不断的探索。

慢性***炎是一个全球性的健康问题，人群中的发病率相当之高，尤其是占临床90％的慢性非细菌性***炎/慢性骨盆疼痛综合征，在泌尿男科领域是公认的难治性疾病。主要原因是其病因、发病机制尚没有完全阐明，没有一种合理、公认的治疗方案指导临床。阐明慢性***炎的病因成为今后泌尿男科领域的重要课题，近年来，多数学者已将关于慢性***炎病因的研究聚焦到了免疫水平尤其是细胞因子的发病机制上。在药物治疗慢性***炎上，西医没有一种让医患双方都满意的药物，抗生素治疗效果不稳定，患者症状容易复发，而且临床引起了抗生素广泛滥用，造成了诸多不良后果，如耐药菌株增多、抗生素不良反应、医疗资源浪费等。中医药在临床上的作用和良好的疗果越来越受到国内外研究者的关注，找到具有良好免疫调节作用且能明确改善症状，可以在复发后反复使用而没有任何副作用的中药成为今后临床中探索的目标。

(三)本发明中药组合物的主治病证，拟解决的问题、作用特点和立题意义。

由于慢性***炎临床表现复杂，病程迁延，而且是男性性功能障碍(***减退、阳痿、早泄、遗精、***疼痛)的重要原因之一，直接影响到男性的身心健康，学习、工作和婚姻质量，因此积极开展对本病的治疗，具有一定意义。

中国医药学是一个伟大宝库，开展本发明中药组合物的研制具有三方面的意义：一是进一步发掘和继承祖国医药学的宝贵遗产，得以推广；二是目前面世治疗慢性***炎的中成药虽有一定数量，但治疗以肾精不足，湿热夹瘀证的成方制剂甚少，不能适应临床的需要，因此研制一种安全有效，疗程相对较短，且服药简便的以治疗肾精不足，湿热夹瘀证的中成药物是亟待解决的重要课题；三是本药的研制将增强其市场竞争力，更好地发挥社会效益，并给社会带来经济效益。

发明内容

本发明目的在于提供一种中药组合物，用于治疗慢性***炎；同时提供该中药组合物的制备方法和有效成分检测方法。本发明目的是通过以下技术方案实现的。

本发明提供一种用于治疗慢性***炎的中药组合物，其特征在于该中药组合物的有效成分是由如下重量配比的原料药制成的：蛤蚧10-14份、赤芍15-21份、马鞭草10-14份、韭菜子15-21份、天冬10-14份、蜂房14-18份。

优选的，该中药组合物中各原料药的配比为：蛤蚧11-13份、赤芍16-20份、马鞭草11-13份、韭菜子16-20份、天冬11-13份、蜂房15-17份。

更优选的，各原料药的配比为：蛤蚧12份、赤芍18份、马鞭草12份、韭菜子18份、天冬12份、蜂房16份。

上述各原料药均应符合《中国药典》的相关规定，具体地讲：

(1)蛤蚧，为壁虎科动物蛤蚧Gekko gecko linnaeus的干燥体；全年均可捕捉，除去内脏，拭净，用竹片撑开，使全体扁平顺直，低温干燥，即得；

(2)赤芍，为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；春秋二季采挖，除去根茎、须根及泥沙，晒干，即得；

(3)马鞭草，为马鞭草科植物马鞭草Verbena officinalis L.的干燥地上部分；6-8月花开时采割，除去杂质，晒干，即得；

(4)韭菜子，为百合科植物韭菜Allium tuberosum Rottl.的干燥成熟种子；秋季果实成熟时采收果序，晒干，搓出种子，除去杂质，即得；

(5)天冬，为百合科植物天冬Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.的干燥块根；秋冬二季采挖，洗净，除去须根，置沸水中煮或蒸至透心，趁热除去外皮，洗净，干燥，即得；

(6)蜂房，为胡蜂科昆虫果马蜂Polistes olivaceous(DeGeer)、日本长脚胡蜂Polistesjaponicus Saussure或异腹胡蜂Parapolybia varia Fabricius的巢；秋冬二季采收，晒干。

按照中医理论分析，原料药中的蛤蚧为血肉有情之品，该药性味咸，平，归肺、肾经，具有补肾益精之功，本方用其益肾填精，扶正固本。赤芍性味苦，微寒，归肝经，本方用其清热凉血利湿，活血化瘀止痛。二药相合补虚泻实，切中慢性***炎肾虚为本，湿热夹瘀为标之病机，故同为君药。马鞭草性味苦、辛，微寒，归肝、脾经，具有清热利湿，活血化瘀之功，本方用其助赤芍清热利湿，活血化瘀，为臣药。天冬性味甘、苦，寒，归肺、肾经，具有滋阴益肾之功；韭菜子性味辛、甘，温，归肝、肾经，具有补肾固精之功。以上二药共为佐药，一滋阴，一助阳，调补阴阳，共助蛤蚧益肾填精，扶正固本；本方用韭菜子还有另一作用，即用其辛温之性，佐赤芍、马鞭草等药苦寒伤阳之弊。蜂房性味甘平，具有攻毒、杀虫、止痛之功，味甘能和畅气血以生新，性平以调和诸药，兼用其攻毒、杀虫，以消浊通淋，是为使药。以上诸药相合，益肾填精，清利湿热，活血化瘀，符合慢性***炎肾虚湿热瘀血相夹为患之病机。因此，本发明中药组合物可用于治疗慢性***炎，该病证见：小便短赤，频数，尿道灼热、涩痛，少腹及***胀痛或刺痛，尿浊，尿道口滴白，腰酸乏力，早泄，阳痿，***减退等。

在临床应用时，可以依中医传统方法，将本发明中药组合物的各原料药以水煎煮后取汤剂服用。为便于患者使用，该中药组合物还可以制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等多种固体剂型，发明人在此提供了制成上述各种制剂的技术方案。通常地，该中药组合物制剂的制备过程需要以下步骤：

A、按比例取各原料药；

B、将蛤蚧粉碎成细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房一起加水煎煮，过滤，滤液浓缩成50℃时相对密度为1.05-1.15的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子一起用浓度为60-80％的乙醇回流提取，醇提液减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液和水提浓缩液合并，浓缩至50℃时相对密度1.20-1.30，减压干燥，所得干膏粉碎成细粉，与蛤蚧粉混合，得该中药组合物有效成分粉末；

F、在上述中药组合物有效成分粉末中添加适当的辅料，以中药制剂常规工艺制成临床所需剂型。

更确切的，该中药组合物制剂的制备过程为：

A、按比例取各原料药；

B、将蛤蚧粉碎成细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房一起加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩成50℃时相对密度为1.05-1.10的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子一起加5倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并醇提液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液和水提浓缩液合并，浓缩至50℃时相对密度1.25-1.30，减压干燥，所得干膏粉碎成细粉，与蛤蚧粉混合，得该中药组合物有效成分粉末；

F、在上述中药组合物有效成分粉末中添加适当的辅料，以中药制剂常规工艺制成临床所需剂型，如片剂、胶囊剂(含软胶囊)或颗粒剂。

为了检测某个药物制剂是否是本发明所述的中药组合物，或为了检测依据本发明技术方案制成的中药组合物中是否含有特定的成分，发明人还提供了一套本发明中药组合物有效成分检测方法，其中主要含有“定性鉴别”和“含量测定”的内容，具体技术方案如下。

“含量测定”的技术方案，是以高效液相色谱法测定药物中芍药苷的含量，具体参数为：

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30∶70∶0.5的甲醇-水-冰醋酸混合液为流动相；检测波长为230nm；

对照品溶液：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液：取中药组合物约0.2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加20％甲醇溶解，定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得。

“定性鉴别”的技术方案，是用薄层色谱法检测中药组合物，以确定原料药中是否使用了蛤蚧、马鞭草、赤芍和天冬，具体技术方案包括如下项目：

A、取中药组合物适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察，可见横纹肌碎片较多，近无色、淡黄色、黄绿色，多碎裂，侧面观有细密横纹，明暗相间，横纹呈平行的波峰状、微波状或平直；鳞片无色或淡灰黄色，表面可见半圆形，类圆形***，略作复瓦状排列，直径9～32μm；骨碎片较多，近无色或淡黄色，呈不规则形碎块，表面有细小裂缝状或针孔状孔隙，骨陷窝呈裂缝状，长条状或类长圆形，多为同方向排列，边缘骨小管隐约可见；皮肤碎片淡黄色或黄色，表面观细胞界限不清楚，布有棕色或棕黑色色素颗粒，常聚集成星芒状；

B、取中药组合物1g，加无水乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶14∶1的石油醚-二氯甲烷-甲酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

C、取中药组合物1g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，过中性氧化铝柱，湿法装柱，以水50ml洗脱，收集水洗液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40∶5∶10∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸香草醛溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

D、取中药组合物4g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加硫酸2ml、三氯甲烷20ml，水浴加热回流1小时，取出，放冷，分离三氯甲烷液备用，剩余酸水液加三氯甲烷振摇提取两次，每次20ml，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠脱水，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的甲苯-丙酮混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。

有益效果

为验证本发明中药组合物的功效，发明人根据该中药组合物的功能主治从抗炎、抑菌、活血、利尿等方面对其主要药效学进行了试验研究。

试验材料

受试药物：本发明中药组合物(暂定名“益肾通淋方”，按本发明实施例5处方和方法制成含3.732g生药/ml的浸膏，蛤蚧粉直接加入，0.59g蛤蚧/ml浸膏，批号：001208。试验时以蒸馏水配制成所需浓度。

剂量设计：人临床用量为0.176g生药/kg。按动物与人公斤体重折算，中剂量约相当于临床等效剂量，高剂量为中剂量的两倍，小剂量为中剂量的1/2。

因此，益肾通淋方小鼠剂量为4.0、2.0、1.0g生药/kg，大鼠剂量为2.0、1.0、0.5g生药/kg的三个剂量组。

阳性对照药：前列回春胶囊，吉林省东方制药一厂产品，批号：991012。

临床用量为5粒/次，3次/日，共计15粒，含13.56g生药，按60公斤计算，用药量为0.226g生药/kg。按动物与人公斤体重计算，小鼠用量为2.5g生药/kg，大鼠用量为1.25g生药/kg，相当于临床等效剂量，试验时选临床高一倍剂量，小鼠用量为5.0g生药/kg，大鼠用量为2.5g生药/kg，使用时以蒸馏水稀释至所需浓度。

特美力球丙沙星注射液，中美天津史克制药有限公司分装，德国拜尔公司制造，批号960711，实验时用注射用水配制到所需浓度。

给药体积：小鼠用量为0.2ml/10g体重，大鼠用量为1.0ml/100g体重。

试剂：消痔灵注射液，北京第四制药厂产品，批号：99031002；巴豆油、角叉菜胶均系日本系和光析式会社产品，批号为45F-0427.

菌种：金黄色葡萄球菌标准株、2-17、2-18；乙型溶血性链球菌10、11；大肠杆菌23、24；除标准株外其余均为临床上分离的菌株，购自北京医药生物技术研究所。

培养基：肉汤，英国产。

动物小鼠，瑞士种，雄性，体重20±1.0g，大鼠，Wistar系，160±10g体重或250-300g，雄性，均由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供。动物许可证号码为SCXK11-00-0006.

仪器UV-754连续式分光光度计，上海第三分析仪器厂制造。ZS-3半自动生化分析仪，中国科学院生物物理研究所和北京中生生物工程高技术公司共同研制；SAKUR自动脱水机；日本产；Leite旋转式切片机；德国生产；SAKURA RSH-100自动染色机；日本产；光学显微镜；日本尼康；OLYMPUS BH-2自动显微照相***，LG-R-20型自动血液流变仪，北京世帝科学仪器公司生产。

试验方法和结果：

1、益肾通淋方对大鼠***炎的影响

1.1益肾通淋方对大鼠无菌性***炎的影响

1.1.1方法：将250-300g雄性大鼠按体重随机分组。灌胃给药，每天2次，连续7天，对照组给予相同容积的蒸馏水，第6天第1次给药后1小时，***麻醉下无菌操作进行手术，在***头叶上的***注入1％角叉菜胶生理盐水溶液0.1ml/只，手术缝合，正常对照组在相同部位注射无菌生理盐水0.1ml/只。于术后24小时将全部大鼠麻醉剖腹，各取***液10μl，用显微镜检查单位体积***液的白细胞总数；再各另取***液1滴涂片，镜下观察卵磷质小体密度，根据卵磷质小体密度判断结果。白细胞总数用t检验进行统计学处理，卵磷质小体密度用铁和检验进行统计。

卵磷质小体密度分级标准：

“4”：卵磷质小体密集；“3”：卵磷质小体散在；“2”：卵磷质小体可见；“1”：卵磷质小体偶见；“0”：无卵磷质小体。

表1-1.益肾通淋方对大鼠无菌性***炎的影响

表1-2.益肾通淋方对大鼠无菌性***炎的影响(n＝10)

注：与模型对照组相比*P＜0.05**P＜0.01.

1.1.2结果从表1-1、1-2可见，正常***液中含有大量的卵磷质，***炎是巨噬细胞吞噬大量脂类，使***液内卵磷脂小体减少，白细胞数明显增高，给药后***液内卵磷质小体增加，白细胞数量减少，与模型对照组相比益肾通淋方三个剂量组均有显著性差异，阳性对照前列回春胶囊亦有相似的作用。

1.2益肾通淋方对大鼠慢性***炎的影响

1.2.1试验方法：

1.2.1.1模型制作：将250-300g大鼠用戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射，在无菌条件下腹正中切口，直达腹腔，提出膀胱及两侧精囊，暴露附于精囊内侧的***背叶，分别注入25％消痣灵注射液0.2ml，对照组注射相同体积的生理盐水，缝合肌肉、皮肤、。大鼠造模后，按体重随机分组，灌胃给药，每天2次，连续30天，对照组给予相同体积的蒸馏水，30天后处死大鼠取***组织标本观察。

1.2.1.2解剖观察：***形状，色泽及周围粘连情况。

1.2.1.3显微镜观察：10％***液固定标本，乙醇系列脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。切片厚度4～5μm，HE染色，普通光学显微镜观察***组织形态学变化。

表2慢性***炎病变程度积分表。

根据以上炎症细胞浸润程度判断结果，用铁和检验比较给药组与对照组有无显著性差异。

1.2.2结果

1.2.2.1解剖所见：正常***组织柔软、红润、有光泽。模型对照组50％的***组织与周围组织有不同程度的粘连，组织表面缺少光泽。给药组***组织与周围组织粘连程度轻，组织表面有光泽多正常。

1.2.2.2显微镜观察：

正常对照组***上皮形态正常，上皮表面有不规则绒毛，腺体外有平滑肌细胞，属于正常组织结构。

模型对照组***大部分腺上皮***样增生，管内有粉红色渗出物，间质有炎症细胞浸润，以淋巴细胞为主，并有少量粒细胞，间质明显瘀血。

阳性对照药前列回春胶囊组织腺上皮有轻度增生腺腔内有渗出物，间质内炎症细胞浸润明显好转。

益肾通淋方大剂量组个别腺上皮有轻度增生，间质炎症明显好转，替代炎症细胞的毛细血管内皮细胞有所增加。

益肾通淋方中剂量组腺上皮形态基本同大剂量组。

益肾通淋方小剂量组部分腺上皮有轻度***样增生，炎症细胞浸润明显减少。

表3-1益肾通淋方对大鼠慢性***炎的影响(n＝10)

注：与模型对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

表3-2益肾通淋方对大鼠慢性***炎的影响(n＝10)

注：与模型对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

从表3-1、3-2可见，模型对照组***重量指数明显增大，炎症细胞浸润和纤维母细胞增生程度积分明显增高；益肾通淋方各剂量组给药后***重量指数均有不同程度的缩小，炎症细胞浸润和纤维母细胞增生程度明显减轻。提示益肾通淋方对慢性***炎有明显的治疗作用。

2益肾通淋方的抗炎作用

2.1对于腹腔毛细血管透性增高的影响1

2.1.1方法：将小鼠按体重随机分组后，分别灌胃给予不同剂量的益肾通淋方及阳性对照药前列回春胶囊，对照组给予相同体积的蒸馏水，1小时后，尾静脉注射0.5％伊文思兰液0.2ml/10g小鼠，10分钟后腹腔注射0.8％冰醋酸0.2ml/只，20分钟后处死动物，腹腔注射5ml生理盐水，轻柔腹部，剪开小口，吸取腹腔液，离心取上清，在波长590nm下测光密度值，以t检验进行统计学处理。

2.1.2结果从表4结果可见，益肾通淋方和前列回春胶囊均能明显抑制醋酸刺激引起的小鼠腹腔毛细血管通透性的增高。

表4益肾通淋方对小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响(n＝10)

注：与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

2.2对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响

2.2.1方法：将150-170g雄性大鼠按体重随机分组，用自制软尺测量致炎前后大鼠踝关节周长(mm)。灌胃给药，药后1小时于每只大鼠右踝关节注射1％角叉菜胶质炎剂0.01ml，致炎后1、2、3、4小时分别测量大鼠踝关节周长，计算出肿胀值(致炎后周长与致炎前周长之差)，分别比较各时间点给药组与对照组之间的差异性，按下列公式计算给药组的肿胀抑制率。

2.2.2结果益肾通淋方灌胃给药鼠，对角叉菜胶性足肿胀有显著的抑制作用，大、中剂量组抗炎作用可持续5小时，见表5。

表5益肾通淋方对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响(n＝10)

注：同时间点与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01

2.3对大鼠棉球肉芽肿的影响

2.3.1方法：选150-170g雄性大鼠在***浅麻醉无菌条件下作腹部切口，将20mg的灭菌球植入两侧腹股沟皮下。术后按体重随机分组，手术当天开始给药，每天二次，连续7天，第8天称重，药后1小时将大鼠断头处死，剥离并取出棉球肉芽组织，与60℃烘箱内干燥12小时后称重，减去棉球重量，即为肉芽肿干重，比较各肉芽重量，以组间t检验进行统计学处理。

表6益肾通淋方对大鼠棉球肉芽肿增生的影响(n＝10)

注：与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01

2.3.2结果由表6可见，益肾通淋方大，中，小三个剂量组对肉芽组织增生均有显著的抑制作用，阳性对照药前列回春胶囊也有类似的作用。

3益肾通淋方的抑菌试验

3.1体外抑菌试验

3.1.1方法按试管内药液二倍稀释法：用肉汤将益肾通淋方(530mg/ml)、前列通片(680mg/ml)作二倍倍比稀释，每个稀释度各设2管，每管加入含不同药液浓度的培养基1ml，再加入10⁵个菌/ml0.1ml菌液，于37℃温箱中培养18个小时，观察各管中有无细菌生长，该药物抑制细菌生长的最低浓度即为最小抑菌浓度(MIC).

表7益肾通淋方体外抑菌作用(试管内药液稀释法)

注：细菌菌株均为临床分离株，“-”表示无细菌生长，“+”表示有细菌生长。

3.1.2结果由表7可见，培养18小时后，细菌对照管均有细菌生长。益肾通淋方对乙型溶血性链球菌、金光色葡萄球菌、大肠杆菌等3中细菌(7种菌株)的生长均有不同程度的抑制作用，从最低抑菌浓度来看，对乙型溶血性链球菌作用最为显著，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌次之，前列回春胶囊也有不同程度的抑菌作用。

3.2体内抑菌试验(对乙型溶血性链球菌致小鼠死亡的影响)

3.2.1方法将小鼠按体重随机分组，给药，细菌感染对照组给予药液同容积的蒸馏水。每天灌胃给药2次，连续五天。第四天，取已增菌18小时的乙性溶血性链球菌(10株)菌液(2亿/ml)，每只小鼠腹腔注射0.5ml(1亿/ml)，作致死性攻击，攻击后48小时记录动物死亡数，计算死亡率，以X²进行组间比较。

表8益肾通淋方对乙型溶血性链球菌致小鼠死亡的保护作用

注：与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

3.2.2结果表8可见，小鼠感染细菌后48小时，细菌感染对照组的动物90％死亡，而益肾通淋方大剂量组小鼠死亡率为50％，与细菌感染对照组相比，有显著性差异，表示益肾通淋方对小鼠感染乙型溶血性链球菌有明显的保护作用。

4镇痛作用

4.1采用小鼠扭体法

4.1.1方法取18-20g小鼠，按体重随机分组，灌胃给药，药后一小时小鼠腹腔注射0.8％醋酸0.2ml/只，5分钟后观察20分钟内典型的扭体发生次数(伸展后肢、腹部收缩和扭曲身体)，以扭体次数进行统计学处理，并计算给药组扭体次数的减少率。

表9益肾通淋方对小鼠的镇痛作用(扭体法)

注：与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

4.1.2结果表9结果表明，益肾通淋方三个剂量组均能明显降低小鼠因醋酸刺激引起扭体的发生频率，对化学性刺激引起的疼痛有明显的抑制作用。

4.1.2采用甲醛刺激

4.2.1方法取19-21g雄性小鼠，按体重随机分组，灌胃农药，药后30分钟，将3％甲醛溶液注入小鼠左前足爪背部皮下0.1ml，然后放置于2000ml烧杯内，记录每隔30分钟的痛反应分数，持续观察2小时，以痛反应分数进行统计学处理。

痛反应计分标准：

“0”：注射足活动自如；“1”：注射足轻微接触地面；“2”：注射足抬起，不接触地面。

表10益肾通淋方对小鼠的镇痛作用(甲醛致痛法)(n＝10)

注：与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

4.2.2结果小鼠左前足爪背部皮下注入甲醛溶液后，对照组多数小鼠左足抬起，不能接触地面，给药组均有不同程度的减轻，1.5小时所有给药组均有明显的减轻作用，大、中剂量组作用强，持续时间长。

5益肾通淋方对慢性***炎大鼠全血粘度的影响

5.1方法采用慢性***炎模型大鼠(试验方法同1.2)，试验结束时将大鼠用50mg/kg戊巴比妥钠麻醉，打开腹腔，腹主动脉采血，肝素抗凝，测全血粘度和血浆粘度，以t检验进行统计学处理。

表11益肾通淋方对慢性***炎大鼠血液流变学的影响(n＝10)

注：与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

5.2结果慢性***炎大鼠全血粘度与对照组相比显著提高，所有给药组均有不同程度的降低，益肾通淋方大、中剂量均有显著的降低作用。

6益肾通淋方对大鼠的利尿作用

6.1方法：选200-250g雄性大鼠，按体重随机分组，试验前禁食18小时，不禁水，各鼠按5ml/100kg灌胃给予蒸馏水(给药组的药物加入水负荷重中)，轻压大鼠下腹部使膀胱排空。立即将大鼠放入代谢笼，每笼1只，第2、4小时收集尿液，以累积尿量只进行检验。

表12益肾通淋方对大鼠的利尿作用(n＝10)

注：与对照组相比*P＜0.05**P＜0.01。

6.2结果表12结果可见，益肾通淋方大、中剂量组对水负荷大鼠有明显的利尿作用，前列回春胶囊也有类似的作用。

【结论】

通过以上实验证明，本发明中药组合物具有：

1、对大鼠***炎的治疗作用益肾通淋方对大鼠无菌性***炎有明显的抑制作用，是***液中卵磷质小体密度明显升高，白细胞总数明显降低；使大鼠慢性***炎腺上皮增生明显好转，间质炎症细胞浸润明显减轻。

2、抗炎作用益肾通淋方对小鼠和大鼠急性、慢性炎症均有明显的抑制作用。使巴豆油引起的小鼠耳水肿明显减轻，降低腹腔毛细血管通透性的增高，抑制角叉菜胶引起的大鼠踝关节肿胀及棉球肉芽肿的形成。

3、抑菌作用益肾通淋方对体外3种细菌(7种菌株)的生长均有不同程度的抑制作用；大剂量组对小鼠感染乙型溶血性链球菌所致死亡有明显的保护作用。

4、镇痛作用益肾通淋方对化学刺激诱发的疼痛有明显的镇通作用。

5、活血作用益肾通淋方对大鼠慢性***炎全学粘度升高有明显的降低作用。

6、利尿作用益肾通淋方对水负荷大鼠有明显的利尿作用。

以上实验结果证明该药对急性(无菌性)、慢性***炎均有明显的治疗作用；并在抗炎、抑菌、活血、镇痛、利尿等方面有明显的药理作用，为临床治疗慢性***炎提供了药效学依据。

具体实施方式

实施例1：

处方：蛤蚧10kg、赤芍15kg、马鞭草10kg、韭菜子15kg、天冬10kg、蜂房14kg。

制法：A、取上述各原料药；

B、将蛤蚧粉碎成细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房一起加水15倍量煎煮2小时，过滤，滤液浓缩成50℃时相对密度为1.10-1.15的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子一起用8倍量60％的乙醇回流提取1.5小时，醇提液减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液和水提浓缩液合并，浓缩至50℃时相对密度1.25-1.30，减压干燥，所得干膏粉碎成细粉，与蛤蚧粉混合，得该中药组合物有效成分粉末；

F、在上述中药组合物有效成分粉末中加入适量的淀粉和微晶纤维素，混合均匀，压成片剂，即得。

实施例2：

处方：蛤蚧14kg、赤芍21kg、马鞭草14kg、韭菜子21kg、天冬14kg、蜂房18kg。

制法：A、取上述各原料药；

B、将蛤蚧粉碎成细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房一起加水煎煮2次，第1次加15倍量水煎煮2小时，第2次加8倍量水煎煮1小时，分别过滤，合并滤液，浓缩成50℃时相对密度为1.05-1.10的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子一起用80％的乙醇回流提取2次，第1次加12倍量乙醇回流1.5小时，第2次加6倍量乙醇回流1小时，合并醇提液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液和水提浓缩液合并，浓缩至50℃时相对密度1.20-1.25，减压干燥，所得干膏粉碎成细粉，与蛤蚧粉混合，得该中药组合物有效成分粉末；

F、在上述中药组合物有效成分粉末中加入适量糊精和淀粉，以80％的乙醇制粒，制成颗粒剂，即得。

实施例3：

处方：蛤蚧11kg、赤芍16kg、马鞭草11kg、韭菜子16kg、天冬11kg、蜂房15kg。

制法：同实施例1。

实施例4：

处方：蛤蚧13kg、赤芍20kg、马鞭草13kg、韭菜子20kg、天冬13kg、蜂房17kg。

制法：同实施例2。

实施例5：

处方：蛤蚧12kg、赤芍18kg、马鞭草12kg、韭菜子18kg、天冬12kg、蜂房16kg。

制法：A、取以上六味原料药；

B、将蛤蚧粉碎成细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.05-1.10(50℃)的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子加5倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并醇提液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液与水提浓缩液合并，浓缩至相对密度1.25-1.30(50℃)的浸膏，减压干燥，粉成细粉，与蛤蚧粉混合，得药物有效成分粉末；

F、在上述有效成分粉末中加糊精适量，混匀，制粒，干燥，装胶囊，即得。

实施例6：

处方：蛤蚧14kg、赤芍21kg、马鞭草10kg、韭菜子18kg、天冬10kg、蜂房18kg。

制法：A、按比例取各原料药；

B、将蛤蚧粉碎成极细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房一起加10倍量水煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃)的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子一起加8倍量70％乙醇回流提取2次，每次1小时，合并醇提液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液和水提浓缩液合并，浓缩至相对密度1.20-1.25(50℃)，减压干燥，所得干膏粉碎成细粉，与蛤蚧粉混合，得该中药组合物有效成分粉末；

F、将上述中药组合物有效成分粉末与适量的聚乙二醇-400、丙二醇和司盘，混合均匀，压制成软胶囊。

实施例7：

处方：蛤蚧11kg、赤芍20kg、马鞭草13kg、韭菜子16kg、天冬11kg、蜂房17kg。

制法：同实施例5。

Claims (6)

1.一种用于治疗慢性***炎的中药组合物，其特征在于该组合物的有效成分是由如下重量配比的原料药制成的：蛤蚧10-14份、赤芍15-21份、马鞭草10-14份、韭菜子15-21份、天冬10-14份、蜂房14-18份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于各原料药的配比为：蛤蚧11-13份、赤芍16-20份、马鞭草11-13份、韭菜子16-20份、天冬11-13份、蜂房15-17份。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于各原料药的配比为：蛤蚧12份、赤芍18份、马鞭草12份、韭菜子18份、天冬12份、蜂房16份。

4.一种如权利要求1、2或3所述的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

A、按比例取各原料药；

B、将蛤蚧粉碎成细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房一起加水煎煮，过滤，滤液浓缩成50℃时相对密度为1.05-1.15的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子一起用浓度为60-80％的乙醇回流提取，醇提液减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液和水提浓缩液合并，浓缩至50℃时相对密度1.20-1.30，减压干燥，所得干膏粉碎成细粉，与蛤蚧粉混合，得该中药组合物有效成分粉末；

F、在上述中药组合物有效成分粉末中添加适当的辅料，以中药制剂常规工艺制成临床所需剂型。

5.根据权利要求4所述中药组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

A、按比例取各原料药；

B、将蛤蚧粉碎成细粉，备用；

C、将赤芍、天冬和蜂房一起加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩成50℃时相对密度为1.05-1.10的水提浓缩液，备用；

D、将马鞭草、韭菜子一起加5倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并醇提液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浓缩液；

E、将醇提浓缩液和水提浓缩液合并，浓缩至50℃时相对密度1.25-1.30，减压干燥，所得干膏粉碎成细粉，与蛤蚧粉混合，得该中药组合物有效成分粉末；

F、在上述中药组合物有效成分粉末中添加适当的辅料，以中药制剂常规工艺制成临床所需剂型。

6.权利要求1、2或3所述中药组合物在制备用于治疗慢性***炎的药物中的应用。