CN102793715A - 一种马尾藻多糖及其在制备肾脏损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤药物中的应用，为草叶马尾藻中的活性提取物总多糖，具体涉及其在肾保护方面的应用，混合或单独应用作为解毒药物在制药领域中的应用。结果表明草叶马尾藻多糖对于大鼠的肾具有一定的保护作用，可以对抗由庆大霉素、顺铂、高草酸等药品和化学物质引起的肾损伤。

Description

一种马尾藻多糖及其在制备肾脏损伤药物中的应用

【技术领域】

本发明涉及肾脏损伤药物技术领域，具体地说，是一种马尾藻多糖及其在制备肾脏损伤药物中的应用。

【背景技术】

近年来，随着多种化学物质和药品的广泛应用，也随之带来负面效应，影响到人民的身体健康，例如由含三聚氰胺的奶粉使用诱发肾结石，造成肾损伤，导致肾脏炎症反应和纤维组织增生等病理改变，进一步引发肾脏代谢功能障碍，使血中尿素氮、肌酐等含量增加，最终会发生肾衰竭。而药物庆大霉素、顺铂均会导致急性肾损伤，以血中肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)迅速上升为特点。许多研究表明顺铂诱发肾毒性是一个复杂的过程，活性氧是顺铂诱发急性肾损伤的主要原因。急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是一组临床常见的原发或继发性肾功能受损，是对急性肾功能不全(acute renalinsufficiency，ARI或acute kidney dysfunction，AKD)或急性肾功能衰竭(acuterenal failure，ARF)的替代和扩展。目前，许多学者致力于减轻庆大霉素、顺铂和乙二醇等所诱致肾毒性的研究，但在临床上可应用的药物甚少。

多糖具有广泛的生理作用，可以清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性。近年来，海藻及其相关产品的开发已成为研究焦点，本课题组研究发现一种马尾藻多糖(SGP)在体内外抗氧化、治疗草酸钙结石等方面具有良好的效果，基于此，针对乙二醇、庆大霉素、顺铂引起的肾损伤开展了相关实验。结果显示，马尾藻多糖SGP具有保护受损大鼠肾脏方面的作用。

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种马尾藻多糖及其在制备肾脏损伤药物中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤药物中的应用。

药物由草叶马尾藻多糖和药学上可接受的载体组成。

所述的肾保护药物是片剂或口服液、注射液或粉针剂。

一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤保健品中的应用。

保健品由草叶马尾藻多糖和保健品领域可接受的载体组成。

所述的肾保护保健品是片剂或口服液或胶囊制剂。

马尾藻多糖对抗由庆大霉素、顺铂、高草酸等药品和化学物质引起的肾损伤。

所述的马尾藻多糖，为草叶马尾藻中的活性提取物，以草叶马尾藻为原料，利用热水浸提法从草叶马尾藻中提取多糖并用三氯乙酸除蛋白和过氧化氢除色素后干燥得到马尾藻多糖。具体制备步骤：取100克草叶马尾藻粉末，加水4500ml，提取温度为60℃、超声时间为45min后，滤过，将滤液进行浓缩至500ml，加入体积分数为95％乙醇，使乙醇的总浓度达到80％，静置24小时，8000r/min离心10min，将所得到的沉淀用水溶解至100ml，再加入1倍的三氯乙酸除蛋白，除蛋白时间2小时，然后离心15min，离心转速为8000r/min，除去沉淀后收集上清液，调pH值4～5后，添加质量分数为6～7％过氧化氢溶液进行脱色，脱色时间5～6h；脱色温度45℃，脱色后干燥得到马尾藻多糖。

草叶马尾藻多糖呈浅褐色粉末状，略带海藻腥味，溶于水，易溶于热水，不溶于高浓度乙醇、***、丙酮等有机溶剂中。多糖在Molish反应中产生紫色环，茚三酮反应呈阴性，碘-碘化钾反应呈阴性(棕色即颜色未变化)。经薄层色谱检测草叶马尾藻多糖中含有半乳糖、葡萄糖和岩藻糖等单糖。经测定草叶马尾藻多糖的分子量在5000～20000之间，其硫酸酯基的质量分数为10～15％，糖醛酸的质量分数在5～15％。

与现有技术相比，本发明的积极效果是：

现有的对药物或化学品引起的肾毒性问题还没得到充分解决，尤其是在寻求高效、副作用轻的天然活性物质方面。有研究报告枸杞多糖能减轻顺铂所致的肾损伤(《食品科学》，2012，5，268-271)，中国专利涉及200810115432.1具有肾保护作用的阿魏酸和黄芪甲苷组合物及其制备方法和用途，中国专利涉及200880113724.X作为肾保护剂的中链长度脂肪酸和甘油酯，但关于马尾藻多糖的肾保护作用未见报道。本发明的草叶马尾藻中的活性提取物总多糖体外具有显著抗氧化活性，动物实验证明其对乙二醇、庆大霉素、顺铂引起的肾损伤均有良好的治疗作用，这为临床肾损伤的防治提供了新的药源及选择。

本发明的草叶马尾藻中的活性提取物总多糖，具体涉及其在肾保护方面的应用，混合或单独应用作为解毒药物在制药领域中的应用。结果表明草叶马尾藻多糖对于大鼠的肾具有一定的保护作用，可以对抗由庆大霉素、顺铂、高草酸等药品和化学物质引起的肾损伤。

【具体实施方式】

以下提供本发明一种马尾藻多糖及其在制备肾脏损伤药物中的应用的具体实施方式。

实施例1

一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤药物中的应用。

药物由草叶马尾藻多糖和药学上可接受的载体组成。

所述的肾保护药物是片剂或口服液、注射液或粉针剂。

一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤保健品中的应用。

保健品由草叶马尾藻多糖和保健品领域可接受的载体组成。

所述的肾保护保健品是片剂或口服液或胶囊制剂。

马尾藻多糖对抗由庆大霉素、顺铂、高草酸等药品和化学物质引起的肾损伤。

所述的马尾藻多糖，为草叶马尾藻中的活性提取物。

动物分组及给药剂量

SD雄性健康36只(180～220g)，随机分为对照组、模型组、阳性药肾炎康复片组和枸橼酸钾组及SGP高、中、低3个剂量组，马尾藻多糖分别为400mg/kg、100mg/kg、25mg/kg剂量。枸橼酸钾剂量为50mg/kg，肾炎康复片剂量为600mg/kg。

模型建立和给药方案

乙二醇诱致大鼠肾损伤模型：

SD大鼠36只，随机分成6组，每组6只，然后按以下方法处理：单纯诱石组(模型组)：以1％乙二醇+1％氯化铵为唯一饮用水源，同时每天腹腔注射1％乙二醇+1％氯化铵1ml，诱石2周；诱石+马尾藻多糖干预组：以1％乙二醇+1％氯化铵为唯一饮用水源，同时每天腹腔注射1％乙二醇+1％氯化铵1ml，诱石2周后，分别灌胃10％马尾藻多糖高剂量400mg/kg、中剂量100mg/kg、低剂量25mg/kg，灌胃2周；空白对照组：饮用去离子水；阳性药枸橼酸钾组，以1％乙二醇+1％氯化铵为唯一饮用水源，同时每天腹腔注射1％乙二醇+1％氯化铵1ml，诱石2周后，灌胃50mg/kg的枸橼酸钾，给药体积为10mL/kg。各组大鼠均予相同的标准颗粒饲料，自由进食，在相同的环境条件下(25℃空调恒温，12h白昼循环)饲养。

庆大霉素致大鼠肾损伤模型：

SD大鼠36只，随机分成6组，每组6只。除对照组外，其余各组每天10:00腹腔注射庆大霉素100mg/kg，，给药体积为10mL/kg，对照组腹腔注射给予相同体积的生理盐水。给药组每天下午14:00给药，每天给药后观察2h内大鼠的一般活动情况，称体重，连续9天。阳性药为肾炎康复片组。

顺铂致大鼠肾损伤模型：

SD大鼠36只，随机分成6组，每组6只。空白对照组和顺铂模型组每天灌胃蒸馏水1mL，SGP低、中、高剂量组，每天灌胃相应剂量的SGP溶液，连续15d，第10天时顺铂模型组和SGP组一次性腹腔注射顺铂7.0mg/kg(以体重计)引起肾毒性，建立肾损伤动物模型。空白对照组注射等量的生理盐水。每天给药后观察2h内大鼠的一般活动情况，称体重。阳性药为肾炎康复片。

检测指标

上述三组肾损伤模型大鼠术次给药后4h腹主动脉取血，肝素抗凝，离心取血清，测定血液生化指标：BUN和SCr。

检测结果如下：

1.SGP对乙二醇诱致大鼠肾损伤的保护作用：

表1 SGP对乙二醇诱致大鼠肾损伤的影响

与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01

由表1可知，与空白对照组相比，模型组大鼠血清BUN和Scr含量显著升高(P＜0.05)。SGP各剂量组与模型组相比，高剂量组的血清BUN及Scr含量极显著降低(P＜0.01)，中剂量组的血清Scr含量极显著降低(P＜0.01)，剂量组的血清BUN含量显著降低(P＜0.05)，低剂量组血清BUN含量与模型组差异无显著性，但低剂量组血清Scr含量与模型组差异有显著性(P＜0.05)。

2.SGP对庆大霉素致大鼠肾损伤的保护作用：

表2 SGP对庆大霉素致大鼠肾损伤的影响

与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01

由表2可知，与空白对照组相比，模型组大鼠血清BUN和Scr含量显著升高(P＜0.01)。SGP各剂量组与模型组相比，高剂量组的血清BUN及Scr含量极显著降低(P＜0.01)，中剂量组的血清Scr含量显著降低(P＜0.05)，低剂量组血清BUN、Scr含量与模型组差异无显著性。

3.SGP对顺铂致大鼠肾损伤的保护作用：

表3 SGP对顺铂致大鼠肾损伤的影响

与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01

结论：由表3可知，与空白对照组相比，模型组大鼠血清BUN和Scr含量显著升高(P＜0.01)。SGP各剂量组与模型组相比，高剂量组的血清BUN及Scr含量极显著降低(P＜0.01)，中剂量组的血清Scr含量显著降低(P＜0.05)，低剂量组血清BUN、Scr含量与模型组差异无显著性。

实施例2

草叶马尾藻多糖制成的肾保护药物及保健品

1、片剂

(1)制剂处方如下：

(2)制备工艺是：

①提取分离：按前述的提取方法从_{草叶马尾藻}中提取分离多糖，备用；

②精制：上述草叶马尾藻多糖经浓缩至一定浓度的稠膏

③制粒：取上述稠膏状草叶马尾藻多糖10g，加适量适当浓度的乙醇、淀粉和糊精制软材，过一号筛(12-14目)制成颗粒；

④干燥：将上述制得的湿颗粒放在干燥箱中迅速干燥，在60℃下干燥24h；

⑤压片：加入滑石粉、硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，用蔗糖包糖衣或薄膜衣，即得；

⑥包装：选用复合铝塑料袋分装，该复合铝塑料袋不易透湿、透气，贮存期内不会出现吸潮、软化等现象。

2、口服液剂

(1)制剂处方如下：

草叶马尾藻多糖	10g
		蔗糖	70g
柠檬酸	2g
		苯甲酸钠	1.5g
蒸馏水	加至总量1000ml

(2)制备方法：

①在草叶马尾藻多糖加入少量蒸馏水，稍加热，不断搅拌使之溶解；

②将柠檬酸和苯甲酸钠溶解于少量蒸馏水中；

③合并两种液体，搅拌混匀；

④加入蔗糖，加蒸馏水至1000ml，搅拌使之溶解成透明溶液；

⑤将液体过滤除去不溶性杂质，得到透明均一的液体制剂；

⑥在无菌条件下分装于消过毒的安培瓶中密封保存。

本发明考虑到提取出来的草叶马尾藻多糖本身具有比较特殊的味道，可能会影响其被接受的程度，因此在口服液制剂中加入了一定量的矫味剂以改善其口味，并对本发明的口服液制剂做了口感调试，同时考虑到经济因素，最终选定蔗糖和柠檬酸作为矫味剂。此外，由于水溶性液体制剂容易霉变，所以必须加入防腐剂，本发明选用了苯甲酸钠作为防腐剂。

口服液剂具有下列优点：分散度大，吸收快，能迅速地发挥药效；易于分剂量，服用方便，特别适用于老年患者和吞咽有困难的人；口感好，易于被受众所接受等。

3注射液

(1)制剂处方如下：

精制草叶马尾藻多糖

100g

氯化钠	5g
		苯甲酸钠	1.5g
注射用水	加至总量10L

(2)制备方法：

按照上述配方，称量好精制草叶马尾藻多糖，氯化钠、苯甲酸钠，配制成无菌溶液后，灌装成每10mL一瓶的小包装，共1000瓶，灭菌后供注射用。

4粉针剂

(1)制剂处方如下：

精制草叶马尾藻多糖	85-100g
		甘氨酸	0-15g
甘露醇	0-15g
		聚乙二醇	0-15g
乳糖	0-15g
		PH调节剂	0-5g

(2)制备方法：

按照上述配方，称量好精制草叶马尾藻多糖，选取甘氨酸、甘露醇、聚乙二醇、乳糖的一种或几种，调节PH为7，配制成无菌溶液后，经无菌和热源检查合格后，灌装成每10mL一瓶的小包装，进行冷冻干燥，冻干后供注射用。

5胶囊剂

(1)制剂处方如下：

(2)制备方法：

按照上述配方，称量好草叶马尾藻多糖，用淀粉浆制粒，干燥后整粒，然后用硬胶囊剂填充机进行填充，再封口，即得。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤药物中的应用。

2.如权利要求1所述的一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤药物中的应用，其特征在于，所述的肾脏损伤为庆大霉素、顺铂、高草酸药品和化学物质引起的肾损伤。

3.如权利要求1所述的一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤药物中的应用，其特征在于，所述的马尾藻多糖的分子量在5000～20000之间，其硫酸酯基的质量分数为10～15％，糖醛酸的质量分数在5～15％。

4.一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤保健品中的应用。

5.如权利要求4所述的一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤保健品中的应用，其特征在于，所述的肾脏损伤为庆大霉素、顺铂、高草酸药品和化学物质引起的肾脏损伤。

6.如权利要求4所述的一种马尾藻多糖在制备肾脏损伤保健品中的应用，其特征在于，所述的马尾藻多糖的分子量在5000～20000之间，其硫酸酯基的质量分数为10～15％，糖醛酸的质量分数在5～15％。

7.一种马尾藻多糖的提取方法，其特征在于，其具体步骤为：以草叶马尾藻为原料，利用热水浸提法从草叶马尾藻中提取多糖，并用三氯乙酸除蛋白和过氧化氢除色素后，干燥得到马尾藻多糖。

8.如权利要求7所述的一种马尾藻多糖的提取方法，其特征在于，取100克草叶马尾藻粉末，加水4500ml，提取温度为60℃、超声时间为45min后，滤过，将滤液进行浓缩至500ml，加入体积分数为95％乙醇，使乙醇的质量总浓度达到80％，静置24小时，8000r/min离心10min，将所得到的沉淀用水溶解至100ml，再加入1倍的三氯乙酸除蛋白，除蛋白时间2小时，然后离心15min，离心转速为8000r/min，除去沉淀后收集上清液，调pH值4～5后，添加质量分数为6～7％过氧化氢溶液进行脱色，脱色时间5～6h；脱色温度45℃，脱色后干燥得到马尾藻多糖。