CN101361799B - 一种含有褐藻多糖硫酸酯和五味子的组合物和其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种组合物，包含褐藻多糖硫酸酯和五味子。进一步的，还可以包含有维生素C和硫辛酸。本发明组合物可以用于防治化学性肝损伤药品和保健品。试验表明，本发明组合物应用于药品或者保健品长期服用对治疗化学性肝损伤、增强对疾病抵御能力有辅助作用。本发明同时公开了组合物的制备工艺。

Description

一种含有褐藻多糖硫酸酯和五味子的组合物和其应用

技术领域

本发明公开了一种组合物，特别公开了一种以褐藻多糖硫酸酯和五味子为活性成分的口服组合物。

背景技术

化学性肝损伤主要来自于工作环境、食物、药品和大量饮酒带来的有害物质，这些物质类型涵盖无机毒物(重金属、氯化物等)、农药、药品和酒精等。作为人体重要解毒器官的肝脏，具有肝动脉和肝静脉两个渠道血液供应，化学物质可通过胃肠道门静脉或者体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到这些物质中化学毒物的损害。自工业革命以来，大自然和工业生产中存在一些对肝脏有毒性的物质，研究人员称之为“亲肝毒物”，这些物质在人体中易导致患病，潜伏期短，病变过程与吸入剂量或者感染剂量呈现正相关，可引起肝脏细胞不同程度的坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。工业生产中的原料、中间产物和最终产品均可能具有肝毒性，因此需要十分警惕化学性肝损伤的发生。同时这也要求研究人员能够研究一些有效的防治肝损伤的药品和保健品。

肝脏是人体的重要器官，目前人类肝脏疾病患者越来越多，但是迄今为止尚缺乏疗效明显兼具副作用小的药物。一般认为，肝细胞损伤是多种作用的结果。化学物质(比如氯化碳、酒精等)所致肝损伤的病理机制多认为与肝内脂肪酸代谢障碍和自由基及其引发的过氧化有关。

研究认为，化学毒物可能通过如下病理机制侵染肝脏：

1.脂肪变性、四氯化碳、黄磷等干扰脂质蛋白的合成转运路径，最后形成脂肪肝。

2.脂质过氧化反应，这是一种毒性肝损伤的特定表现形式，例如四氯化碳等在体内代谢时产生一种氧化能力很强的中间产物，这种中间产物作用于生物细胞膜上的脂质形成过氧化，从而破坏膜的磷脂层空间结构，导致细胞的结构和功能发生病理性改变。

3.胆汁郁积反应，主要源于肝脏细胞膜和微绒毛受损，引起胆汁酸***障碍。

化学物质导致的肝损伤可由其在肝细胞内的物质代谢引起。比如细胞内的酒精能够通过升高NADH/NAD的值抑制线粒体三羧酸循环，导致肝内脂肪酸代谢障碍，氧化减弱以及NADH增多，促进了脂肪酸的合成，使得中性脂肪在肝细胞内堆积发生脂肪变性，严重的脂肪变性甚至导致肝细胞坏死和肝内纤维组织增生。肝损伤疾病，尤其是脂肪肝和肝功能异常多伴随血脂水平增高，这揭示脂肪酸代谢紊乱与脂肪肝和肝损伤有一定关系。

近年来的研究证实脂质过氧化是一个重要的化学性肝损伤路径，体内过氧化反应增强可引起机体抗氧化能力下降，从而自由基的生成增加。随之而来的自由基不仅氧化细胞膜脂质，更重要的是会氧化细胞膜蛋白，从而导致肝细胞功能和结构失常。SOD和CAT等自由基清除剂可分别清除脂质过氧化作用中产生的具备高度反应活性的超氧阴离子和羟自由基，防治脂质过氧化导致的细胞损伤。

海藻是海洋水产资源的重要组成部分，海藻门褐子纲海带目海带科海带属的海带(Lam/nar/ajaponica aresch)是产量最高的海藻，我国的海带产量位居世界首位。海带又称海洋蔬菜，含有丰富的功能性物质，如碘、甘露醇、维生素(A、B、C、F)、牛磺酸以及人体所需要的微量元素硒、钴、铬，是一种既有食用价值，又有药用、保健、工业、农业价值的大型藻类产品。

褐藻多糖硫酸酯是一类硫酸化的多糖，存在于褐藻中，根据国际命名原则统一称为fucoidan(褐藻糖胶或褐藻聚糖，岩藻聚糖，褐藻多糖硫酸酯)。现在人们对褐藻多糖硫酸酯的组成有了较为清晰地了解，它是一类化学组成和结构非常复杂的多糖，以岩藻糖和硫酸基为主，随着藻类的不同还含有半乳糖，木糖，糖醛酸等其他成分。海带Fucoidan由岩藻糖。半乳糖，木糖，糖醛酸，***糖等单糖组成。以岩藻糖和半乳糖为主，二者比例大约为3：1。

已有多篇文献公开了褐藻多糖硫酸酯的制备方法。日本专利昭46-2248采用十六烷氯化吡啶或十六烷三甲基溴化铵与褐藻多糖硫酸酯反应成季胺盐复合物，再利用该复合物对盐的溶解度差异，用乙醇、甲醇和离子交换树脂处理，纯化除去褐藻胶、中性多糖和其它杂质，而得到比较纯化的褐藻多糖硫酸酸酯。CN1129109A则公开了由干海带浸泡、数次过滤、二次乙醇提取、一次乙醇洗涤、配合调节PH范围等的碱凝析法。CN1344565A则公开了另一种制备方法，包括原料预处理、控温搅拌浸提、离心、浓缩、乙醇沉淀、无水乙醇脱水等步骤。CN1517356A则将岩藻聚糖硫酸酯配制成水溶液，加入过氧化氢、次氯酸或亚硝酸及其盐，将所得混合溶液加热，用截留分子量3000-5000的膜超滤，得到岩藻聚糖硫酸酯低聚糖。CN1616494A以天然海藻硫酸多糖为原料，将海藻硫酸糖溶液中加入抗坏血酸和过氧化氢，控制反应温度，恒温降解时间为0.5-3hr，再透析或超滤，减压浓缩，制得4-100KDa的低分子量海藻硫酸多糖产物。另外，CN1670028A、CN1392160A、CN1197674A也分别公开了采用絮凝等方法制备海藻多糖。在本发明中，以上发明公开的技术方案均可被引入获得本发明所用的褐藻多糖硫酸酯。

研究证实褐藻多糖硫酸酯能增加某些抗氧化酶的活性，减少自由基的产生，从而减轻自由基对肝脏、肾脏组织的攻击。因此，通过清除自由基及抗氧化作用，褐藻多糖硫酸酯可发挥保护作用。褐藻多糖硫酸酯在体外能直接清除超氧阴离子自由基和羟基自由基(·OH)，是一种很好的抗氧化剂；在体内也有较强的清除活性氧自由基的能力，能显著降低血清和组织中高脂质过氧化物(LPO)的含量，显著增强血清和组织中SOD活性。

五味子是一种常见的中药成分，多年以来被中医广泛应用于各种慢性肝损伤的治疗能够增强肝脏解毒功能、促进肝细胞再生从而改善肝功能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种褐藻多糖硫酸酯和五味子为活性成分的防治化学性肝损伤的组合物，申请人研究发现通过将褐藻多糖硫酸酯、五味子组合，对防治化学性肝损伤具有协同的、突出的效果，其长期使用安全性和防治效果均优于现有产品。

本发明在本领域第一次引入褐藻多糖硫酸酯和五味子组合作为防治化学性肝损伤的组合物。长期以来，褐藻多糖硫酸酯多用于药物，用来治疗心血管、肾衰等疾病，五味子则多与人参等中草药成分混合用于改善人体体质。发明人通过大量实验研究首次确定了将褐藻多糖硫酸酯和五味子组合物用于防治化学性肝损伤的可行性，实验证实本发明组合物在防治化学性肝损伤方面具有良好的效果。并且褐藻多糖硫酸酯生产工艺成熟，来源于植物获取成本较低，将其应用于防治化学性肝损伤保健品具有很大的社会价值。

本发明技术方案提供了一种褐藻多糖硫酸酯和五味子的组合物，包含活性成分褐藻多糖硫酸酯和具有明显协同作用活性的五味子，其中五味子可以是五味子提取物，也可以是五味子的有效成分：五味子素、五味子甲素、五味子乙素、五味子多糖中的一种或多种。本发明组合物中，褐藻多糖硫酸酯和五味子重量份数比可以是1：100-100：1，优选为1：30-30：1，最优选为1：10-10：1。

本发明发明人同时研究了将褐藻多糖硫酸酯、五味子或其有效成分组合物加入维生素C所带来的效果改善，申请人的实验显示维生素C可以在本发明组合的基础上进一步对本发明效果有所提高，因此本发明还包括着这样一个技术方案：在本发明组合物的基础上，加入适量维生素C来改善本发明的实施效果。

在目前针对肝炎治疗的药物中，硫辛酸被认为是一种具有广泛辅助作用的成分。是一种B族维生素。研究证实硫辛酸在清除体内老化自由基、抗氧化方面均有良好的作用，在对各种原因导致的急慢性肝炎、肝硬化、脂肪肝方面都存在一定的治疗作用，因此本发明组合物包括这样一个方案：在本发明基础上，加入适量的硫辛酸来改善本发明的实施效果。

本发明所用的褐藻多糖硫酸酯取材于海藻类生物，包括任何可以提供褐藻多糖硫酸酯的植物，包括马尾藻、裙带菜、羊栖菜、鼠尾藻、海黍子、昆布、泡叶藻或墨角藻等，优选的植物为海带、马尾藻，无论是人工养殖的还是天然生长的。从这些植物中获得的褐藻多糖硫酸酯方法可以引用背景技术中所述的技术方法，所获得的分子量在十万数量级水平上。从海带、马尾藻、海黍子中获得的褐藻多糖硫酸酯平均分子量分别为350KD、550KD、980KD。本发明应用时，可以使用这些分子量比较高的褐藻多糖硫酸酯，优先选用分子量在5000D-150KD之间的低分子量的褐藻多糖硫酸酯，所用低分子量褐藻多糖硫酸酯可以从海藻中提取也可以从高分子量褐藻多糖硫酸酯解聚而来。需要指出的是，随着技术的持续进步，可供本发明应用的褐藻多糖硫酸酯分子量变化是落在本发明范围内的。所用的褐藻多糖硫酸酯的纯度不小于50％，优选为不小于70％，更优选为不小于90％，最佳是不小于95％。

根据所用藻类种类不同，所获得的褐藻多糖硫酸酯主要的基团岩藻糖、硫酸基含量存在一定的差异，分子结构侧链上的基团有所变化，但这种差异不影响本发明应用于防治化学性肝损伤，所带来的只是保健效果的强化或者弱化，这是属于本发明范围之内的。本发明所指的褐藻多糖硫酸酯涵盖化学上所普遍接受的褐藻多糖硫酸酯定义的一类化学物质。

本发明所用的五味子有效成分为五味子果仁中的五味子素、五味子甲素、五味子乙素、五味子多糖等。本发明应用的五味子可以是五味子药材进行粉碎后的药粉、或将五味子进行提取后采用其提取物、或者可以直接采用五味子的活性成分，如五味子素、五味子甲素、五味子乙素和/或五味子多糖。优选采用五味子的提取物，更优选采用五味子的水溶性或脂溶性提取物，最优选的五味子提取物为五味子的醇或/和水提取物。本发明所用五味子并不受提取工艺的限制。

优选的五味子提取工艺可以是：取五味子原料，破碎过40目筛，然后加入80％浓度的乙醇加热回流进行提取，提取次数为1-5次，每次提取时间约为2-3小时。即可得五味子提取物。

本发明组合物可以直接制成制剂，也可以选择性地加入药学载体然后制成口服制剂。本发明组合物对防治人体化学性肝损伤具有积极作用，可以适用于亚健康人群做保健品。

本发明所述的保健品泛指可以提高和保护人体健康状态的产品，包括食物和饮料。所指的食物包括但不限于小麦制品、淀粉制品、肉类制品、植物提取物、奶乳、保健糖等；所指的饮料包括所有人体可饮用的液体制品包括普通的饮用饮料和用于提高特定机能的功能饮料，比如运动饮料。

本发明在应用时，还可以在最终制备为产品时加入其他营养成分使用，这些营养物质包括淀粉、葡萄糖、乳糖、甘露糖、蔗糖、糖浆、蜂蜜、多种氨基酸、钙铁锌、维生素等。

本发明组合物可以与辅料结合使用。辅料可包括赋形剂、抗氧剂、PH调节剂、防腐剂、等渗剂等任何药学/营养学上可接受的、安全性有保证的辅料。

本发明的产品可以制备为多种类型，包括胶囊、片剂、粉剂、颗粒剂、口服液或糖浆等，优选为胶囊和口服液。改变产品的外表存在形式属于本领域技术人员可以联想到的技术方案，因此改变最终产品的形状属于本发明的覆盖范围。

申请人对本发明组合物功效进行了研究，发现与褐藻多糖硫酸酯或五味子单独应用相比，褐藻多糖硫酸酯和五味子联合应用可显著降低肝脏、脑组织和血液中的过氧化物含量、提高体内抗氧化剂活性、清除自由基和脂质过氧化作用，具有协同的疗效。长期服用本发明产品具有护肝作用，并对预防治疗化学性肝损伤有积极作用。

具体实施方式

如下实施例旨在说明本发明具体实施方案，并不限定本发明保护范围。下列实施例中的五味子提取物是采用这样的方法获得的：取五味子原料，破碎过40目筛，然后加入80％浓度的乙醇加热回流进行提取，提取次数为3次，每次提取时间约为2小时，合并滤液减压蒸馏即可得五味子提取物。

制备实施例1

褐藻多糖硫酸酯        1mg

五味子提取物          10mg

淀粉                  20mg

甘露醇                20mg

葡萄糖                15mg

微晶纤维素            10mg

硅胶1mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

制备实施例2

褐藻多糖硫酸酯       18mg

五味子提取物         5mg

淀粉                 25mg

甘露醇               24mg

葡萄糖               16mg

微晶纤维素           10mg

硅胶                 2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

制备实施例3

褐藻多糖硫酸酯      50mg

五味子提取物        5mg

淀粉                24mg

甘露醇              28mg

葡萄糖              15mg

微晶纤维素          10mg

硅胶                2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

制备实施例4

褐藻多糖硫酸酯      40mg

五味子提取物        7mg

血红素铁            7mg

维生素C             10ug

叶酸                400ug

将上述成分混匀研磨成粉末溶解于去离子水至1000ml，进行密封、灭菌和分装，制备为符合特定规格的口服液。

制备实施例5

褐藻多糖硫酸酯    30mg

五味子提取物      10mg

离子态锌          7mg

硫辛酸            15ug

将上述成分混匀研磨成粉末溶解于去离子水至1000ml，进行密封、灭菌和分装，制备为符合特定规格的口服液。

在大规模生产中本发明制备口服液可以在用量上进行放大，充分溶解后进行罐装然后密封、灭菌和分装为符合规格的口服液，比如500ml，1L等。

对比实施例1

褐藻多糖硫酸酯     18mg

淀粉               25mg

甘露醇             24mg

葡萄糖             16mg

微晶纤维素         10mg

硅胶               2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

对比实施例2

五味子             5mg

淀粉               25mg

甘露醇             24mg

葡萄糖             16mg

微晶纤维素         10mg

硅胶               2mg

将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。

实验例1

实验材料：小白鼠，健康状况良好。本发明组合物，褐藻多糖硫酸酯:五味子提取物4:1，溶于水制为混悬液。

实验项目：急性毒性试验，30天喂养试验

实验方法：

1.急毒性试验：选择小白鼠40只，雌雄各20只，体重为18-22g。雌雄小鼠各随机分成四个剂量组16.00，7.27，3.31，1.50g/kg.bw，小鼠灌胃后连续观察15d，记录毒性表现和死亡情况。

2.30d喂养试验：采用的样品同急毒性试验，选用体重为55-70g的Wistar大鼠，将大鼠分为对照组和三个剂量组，高剂量B组采用4.50g/kg(bw)，中剂量C组0.90g/kg(bw)，低剂量D组0.16g/kg(bw)，每组十只大鼠，对照A组喂食正常基础饲料，饲料摄入量按照大鼠体重10％计算。连续观察三十天。观察指标包括：

(1)临床观察：动物的一般表现、行为、中毒症状、死亡症状，每周称取一次体重和摄入量，计算食物总利用率。

(2)血常规及生化指标：在试验第三十一天静脉取血，测定血红蛋白HGB、红细胞RBC、白细胞WBC。

试验结果：

1.小鼠急毒性试验结果：

假定生产的保健品以成人60kg体重日摄入量0.05g/kg.bw，对照我们采用的最高对照组，相当于成人摄入量的320倍。试验观察十四天未见中毒症状，死亡数为零。受试物对两种性别的小鼠急毒性LD₅₀均大于15.00g/kg.bw.根据现行的毒性分级，属于无毒级别(分级划分标准采用保健食品安全性评价规范，23页表D1)。

2.30天喂养试验结果

(1)对大鼠体重的影响

由上表可知，各组动物生长正常。与对照组比较，各剂量组与之不存在统计学差异(P>0.05).

(2)对大鼠食物吸收率的影响

动物喂食30天，动物未出现拒食现象。各剂量组动物与对照组动物食物吸收率不存在统计学差异(P>0.05)

(3)血清学检查结果

由此可见，剂量组与对照组没有显著的统计学差异(P>0.05)。

经过上述实验分析，可以认为本品无副作用。

实验例2

材料与方法：Wistar大鼠，188-212g；本发明组合物，褐藻多糖硫酸酯:五味子提取物4:1，溶于水制为混悬液；四氯化碳；谷丙转氨酶ALT；谷草转氨酶AST；甘油三酯TG。

剂量分组：设置三个剂量组：500，250，120mg/kd.bw.d，受试物稀释至所需要的浓度，另外设置褐藻多糖硫酸酯对照组(简写为A对照组)、五味子提取物对照组(B对照组)和四氯化碳模型组、阴性对照组。褐藻多糖硫酸酯对照组给与褐藻多糖硫酸酯250mg/kd.bw.d，五味子提取物对照组给与五味子提取物250mg/kg.bw.d，四氯化碳模型组，阴性对照组给与蒸馏水。

实验方法：以2％四氯化碳造急性化学肝脏损伤模型:各剂量组依据设定剂量给予本发明组合物(灌胃量5.00ml/kg.bw)，A，B对照组分别给予褐藻多糖硫酸酯、五味子提取物。阴性对照组、模型组给予蒸馏水，连续三十天。第30天将各组动物隔夜禁食16小时，然后将模型组、组合物剂量组、A，B对照组一次性灌胃给予四氯化碳(2％浓度、5ml/kg.Bw).剂量组、A、B对照组继续给与受试物至24小时后结束试验，处死动物。取血分离血清，测定ALT、AST以及肝组织中TG含量，并取肝脏作病理切片。病理组织学观察肝细胞以变性、坏死等为技术指标，试验结果：

*p<0.05，**p<0.01

由上表可见，本发明组合物中高剂量组的ALT低于四氯化碳模型组，差异显著；高剂量组的AST低于四氯化碳模型组，差异显著。同时还可以看出，在同等剂量250mg/kd.bw.d下，本发明组合物效果明显优于单独的褐藻多糖硫酸酯、五味子，差异显著。以单位质量评估，本发明组合物效果优于褐藻多糖硫酸酯、五味子提取物的单独使用，本发明组合物协同效果明显。

肝脏组织病理学检查结果如下表(病理改变程度采用平均打分法)：

*p<0.05，**p<0.01

由上可见，本发明高剂量组肝细胞病变程度明显小于四氯化碳模型组，差异显著。以病理改变程度指标衡量，同等剂量下本发明组合物相对于褐藻多糖硫酸酯、五味子提取物单独应用效果取得了9.2％、9.8％的改善，改善效果明显。

综合上述结果，可以看到本发明组合物应用防治化学性肝损伤无毒性、长期服用安全，并且有明显的防治效果。对比文献中记载的现有的防治化学性肝损伤的效果，本发明应用效果更好。

Claims (11)

1.一种用于保肝、防治化学性肝损伤的口服的组合物，含有褐藻多糖硫酸酯和五味子或其有效成分，其中的五味子有效成分选自五味子提取物、五味子素、五味子甲素、五味子乙素中的一种或多种，所述的五味子提取物为五味子的水提取物、醇提取物、或脂溶性提取物。

2.根据权利要求1的组合物，含有褐藻多糖硫酸酯和五味子提取物。

3.根据权利要求1的组合物，含有褐藻多糖硫酸酯和五味子药材。

4.根据权利要求1的组合物，含有褐藻多糖硫酸酯和五味子素、五味子甲素、五味子乙素的一种或多种。

5.根据权利要求1的组合物，其中褐藻多糖硫酸酯和五味子的重量比为1∶100-100∶1。

6.根据权利要求1的组合物，其中的组合物是药物或保健品的形式。

7.根据权利要求1的组合物，所述组合物中还含有药学接受的载体或保健品接受的添加剂。

8.根据权利要求1的组合物，其特征是组合物中还含有维生素C、硫辛酸中的一种或其混合物。

9.根据权利要求1的组合物，所述组合物为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、口服液或糖浆。

10.权利要求1的组合物在制备保肝药物或保健品中的用途。

11.权利要求1的组合物在制备治疗或预防化学性肝损伤的药物或保健品中的用途。