CN102743742B - 一种低溶剂残留的糖蛋白组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种低溶剂残留的糖蛋白的组合物及其制备方法，所述糖蛋白组合物中有机溶剂含量不超过0.5％；所述的方法包括步骤：(a)将糖蛋白组合物的沉淀物与水***在0‑25℃共同真空干燥；(b)撤去水***后继续真空干燥得到低溶剂残留的糖蛋白的组合物。

Description

一种低溶剂残留的糖蛋白组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及蛋白质药物的纯化领域。尤其涉及含有治疗***症的糖蛋白的干燥方法。

背景技术

治疗***症的糖蛋白是一类结构接近的物质，包括绒毛膜***(HCG)、绝经期促性腺素(HMG)、***(FSH)、***(LH)，其中绝经期促性腺素是含有***和***且两者成一定比例(1∶0.1-1)的混合物。

HCG、FSH、LH都是由α链和β链两个亚基通过非共价键的形式结合，其中它们的α亚基完全相同，具有92个氨基酸，分子量约为14500D，第52和78位置上的天冬酰胺是发生N-糖基化的氨基酸。HCG的β亚基有145-147个氨基酸，分子量22200-39000D，其中第13、30位置上的天冬酰胺以及第121、127、132、145位置是发生糖基化的地方。FSH的β亚基由111个氨基酸组成，分子量约为18000D，其中第7和24位置上的天冬酰胺是发生N-糖基化的氨基酸。而LH的β亚基由121个氨基酸组成，分子量约为14800D。

临床上HCG、HMG、FSH、LH主要用于治疗不育症以及体外辅助生殖。它们可以从特定妇女(孕期或绝经期)的尿液中提取出来，也可通过DNA重组技术而制备。

治疗***症的糖蛋白的第一代产品是上世纪60年代Serono公司的Profasi(HCG)、Pergonal(HMG)，它们的纯度都较低，含有大量杂质。上世纪80年代之后，Serono公司分别推出了Metrodin-HP，它是一种杂质含量很低的高纯度的FSH制剂；后来又推出利用DNA重组技术生产的Gonal-F(rFSH)、Luveris(rLH)等，另外，Ferring公司也推出了高纯度绝经期促性腺素-Menopur。

由此可见，目前市场上都在致力于高纯度糖蛋白的开发和应用，来替代普通的低纯度产品，以克服普通低纯度产品中的杂蛋白造成的过敏反应。

CN1309567A公开了含有FSH或其变体的液体制剂。但是，因为液体形式必须保存在-20℃以下，否则糖蛋白容易失活，液体形式不容易保存和运输；液体形式由于会遇到冻结-溶解过程，甚至是反复的冻结-溶解过程，更容易导致糖蛋白失活；液体形式还会遇到包装容器在低温下接近脆性点容易破裂的危险等。而对于制剂成品来说，液体形式除了不容易运输外，还遇到液体形式的糖蛋白药物的稳定性较差，而且必须要加防腐剂才能保证在有效期内微生物不会滋生，给临床应用带来安全性的隐患。

因此，固体形式的糖蛋白组合物更适合工业化生产。而固体形式的获得主要是通过冷冻干燥和真空干燥的手段，但高纯度的糖蛋白在冷冻干燥的过程中很容易发生变性失活，其变性失活主要表现为完整分子降解成α链和β链两个亚基，而这些亚基也是杂质，它们是没有疗效或可能产生副作用的异构物，在投料时都要多加10-30％的量，以抵消冷冻干燥过程的失活情况，而且成品中还会产生一定量的亚基，降低了产品的纯度。CN101347613A公开了一种制备糖蛋白组合物的冻干方法可以制备高纯度的几乎不含亚基的糖蛋白冻干组合物，但是用此法去除有机溶剂的效果并不理想。

而真空干燥通常是将有机溶剂与糖蛋白溶液充分混和，形成沉淀后再脱水，然后将沉淀进行真空干燥，这种方法虽然可以减小糖蛋白变性失活，但是干燥后的糖蛋白中的有机溶剂含量较高，质量百分含量超过1％。有机溶剂大多都对人体有害，2010年中国药典明确规定药品中乙醇限度为0.5％。

因此，本领域迫切需要开发出一种能降低糖蛋白中有机溶剂残留的真空干燥方法，并由此获得低有机溶剂残留的糖蛋白组合物。

发明内容

本发明旨在提供一种低有机溶剂残留的糖蛋白组合物，以及获得上述糖蛋白组合物的真空干燥方法。

本发明一方面提供了一种低有机溶剂含量的糖蛋白组合物，其中有机溶剂质量百分含量不超过0.5％，优选不超过0.3％，更优地不超过0.1％。

其中，所述有机溶剂为乙醇，丙酮或甲醇。

其中，所述的糖蛋白选自绒毛膜***、绝经期促性腺素、***、***、或其混合。

其中，所述绒毛膜***是人尿来源和/或重组的人绒毛膜***、或其变体；所述绝经期促性腺素是人尿来源和/或重组的人绝经期促性腺素、或其变体；所述***是人尿来源和/或重组的人***、或其变体；所述***是人尿来源和/或重组的人***、或其变体。

本发明的另一方面，提供了一种简易制备得到低溶剂残留的糖蛋白组合物的方法。发明人经过深入研究，发现在将糖蛋白组合物与水***共同真空干燥，能有效去除有机溶剂，得到具有良好稳定性的低溶剂残留的糖蛋白组合物。

低溶剂残留的糖蛋白的组合物的干燥原理

由于糖蛋白类物质在高温下易变性失活，故不宜采用喷雾干燥或其它加热的方式进行干燥，而冷冻干燥的方式也存在一定的失活现象，并且冷冻干燥设备昂贵，干燥量小，能耗大。采用真空干燥法(不加水体系干燥)产品降解失活不明显，但有机溶剂残留高。发明人对其溶剂残留超标的原因进行了深入分析，在样品真空干燥的前期有机溶剂和水以一定的比例共同挥发，但随着样品中有机溶剂以及水含量的降低，挥发的量越来越小，当样品中的水含量不再降低时，有机溶剂的量也不再降低。因此有机溶剂的残留量与样品中的水含量有关。发明人惊人地发现在真空干燥器中放置能释放出水蒸汽的物质，不但能够得到低溶剂残留的糖蛋白的组合物，而且样品不存在降解失活现象。

发明人在获得低溶剂残留的糖蛋白的组合物后对其干燥原理进行了深入研究。在真空干燥器中放置能释放出水蒸汽的物质，目的是为了控制真空干燥过程中样品中的有机溶剂与水的挥发比例。真空干燥过程中有机溶剂与样品中的水共同挥发，在真空干燥箱内，有机溶剂和水蒸气各占一定比例的，但随着干燥的进行，水分含量有限，为了维持这一平衡，我们在干燥体系中放入能释放水蒸汽的物质，人为增加真空干燥箱内水气压，可以抑制样品中的水的挥发，同时又能促进样品中有机溶剂的挥发。从而有效的降低了样品中有机溶剂的残留，并且样品中的水含量也维持在较低水平，故样品不存在降解失活现象。

发明人在获得低溶剂残留的糖蛋白的组合物后对其干燥过程又再次进行了深入研究，又惊人地发现，当有机溶剂干燥合格后，再撤去释放出水蒸汽的物质，继续真空干燥一定时间，能将样品中的水分真空干燥到合格范围内，并且有机溶剂还能进一步降低，样品在这一水份范围内稳定性良好。因此本发明的干燥过程分为两阶段，第一阶段是将样品与水体系共同真空干燥除去有机溶剂，第二阶段是撤去水体系真空干燥到样品含水量合格为止。

制备方法

本发明提供了一种制备低有机溶剂含量的糖蛋白组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将有机溶剂与含有糖蛋白的组合物原料的溶液充分混合沉淀，收取沉淀物(1)，用有机溶剂脱水后，继续收取糖蛋白的组合物沉淀，获得含有糖蛋白组合物的沉淀物(2)；和

(b)将含有糖蛋白组合物的沉淀物(2)与水***共同真空干燥，得到本发明提供的低有机溶剂残留的糖蛋白组合物。

在另一优选例中，在步骤(a)中，所述有机溶剂温度-20至25℃，优选-20至0℃。

在另一优选例中，步骤(a)中，所述有机溶剂选自乙醇，丙酮或甲醇。

在另一优选例中，在步骤(a)中，所述脱水用有机溶剂量为湿沉淀物(1)重量0至10倍，优选1至4倍。

在另一优选例中，在步骤(b)中，所述干燥温度在0至25℃，优选0至20℃。

在另一优选例中，在步骤(b)中，所述水***包括固态、液态或气态的自来水、去离子水、反渗透水、纯水和注射用水，能释放水蒸汽的物体，以及水溶液，优选纯化水。

在另一优选例中，在步骤(b)中，所述干燥时间为1至48小时，优选10至24小时。

在另一优选例中，步骤a所述的含有糖蛋白组合物原料的溶液可以由以下步骤制备：

将含有糖蛋白组合物的原料溶解在水或缓冲液中，制备含有糖蛋白组合物原料的溶液。

在另一优选例中，所述的含有糖蛋白组合物的原料为固体。

在另一优选例中，所述的缓冲液选自：pH值缓冲范围在3至11的缓冲液；优选自；磷酸盐缓冲液，Tris缓冲液，醋酸钠缓冲液。

在另一优选例中，所述溶解温度在5至20℃，优选10至16℃。

在另一优选例中，所述含有糖蛋白组合物原料的溶液的pH值为3至11，优选4至10。

在另一优选例中，在步骤(b)后面还可以含有以下步骤：

(c)撤去水***后继续真空干燥得到本发明提供的低溶剂残留的糖蛋白的组合物。

在步骤(c)中，所述干燥时间为0至48小时，优选5至24小时。

在本发明的一个优选例中，制备低有机溶剂含量的糖蛋白组合物的方法包含以下步骤：

(a’)用-20～0℃的有机溶剂与含有糖蛋白的组合物原料的溶液充分混合沉淀，收取沉淀物(1)；

(b’)将沉淀物(1)，用有机溶剂脱水后，继续收取糖蛋白的组合物沉淀，获得含有糖蛋白组合物的沉淀物(2)；

(c’)将糖蛋白的组合物沉淀物(2)与水***在0～25℃共同真空干燥1～48小时，得到具有良好稳定性的低溶剂糖蛋白的组合物；和

(d’)在步骤(c’)后，撤去水***，于0～25℃继续真空干燥步骤(c’)制得的低溶剂糖蛋白的组合物0～48小时，得到更低溶剂残留的糖蛋白的组合物。

如本文所用，“糖蛋白”选自下述的一种或多种混合：绒毛膜***(chorionic gonadotropin，CG)、***(follicule-stimulatinghormone，FSH)、***(luteotropic hormone，LH)、绝经期促性腺素(human menopausal gonadotropin，HMG)。

如本文所用，“糖蛋白组合物原料”是指含有糖蛋白的组合物，其中包括糖蛋白，或者包括糖蛋白和药学上/食品学上可接受的载体。可以使用本领域现有的制备糖蛋白组合物的方法所获得的糖蛋白组合物作为原料，可以为固体或液体，例如但不限于，中国专利CN1246332C公开的制备方法获得的高纯度的HMG；中国专利CN1958603B公开的制备方法获得的HCG；以及CN101317103A公开的方法获得的FSH。

以上糖蛋白组合物原料的获得仅是举例，本发明所述的糖蛋白组合物原料应当不受此限制。

在本发明提供的获得低溶剂残留的糖蛋白组合物的方法中，所述的“将含有糖蛋白组合物的沉淀物(2)与水***共同真空干燥”是指将含有糖蛋白组合物的沉淀物(2)放置在真空干燥器通常放置样品的地方，并在真空干燥器周围(例如底部)放置盛着能释放水蒸汽的物质的敞开的容器，所述的能释放水蒸汽的物质选自自来水、纯水、或冰水混合物。

在本发明提供的获得低溶剂残留的糖蛋白组合物的方法中，所述的“撤去水体系”是指将盛着能释放水蒸汽的物质的敞开的容器移往真空干燥的环境之外。

本发明的主要优点在于：

1、本发明提供了一种新的低溶剂残留的糖蛋白的组合物。

2、本发明提供了一种新的低溶剂残留的糖蛋白的组合物的制备方法。

3、本发明具有条件温和、操作过程简单、降解失活现象小，产品稳定性好，能耗低，在很大程度上减轻了工艺操作难度系数，降低了生产成本。

附图说明

图1显示了乙醇含量为0.5％的标准品的GC图谱；其中溶剂的保留时间、峰面积和质量含量如下表所列：

保留时间(分钟)	峰面积	质量含量(％)	溶剂种类
				3.175	1040.5	0.5	乙醇

图2显示了对比例2中HMG样品中的乙醇含量GC图谱；其中溶剂的保留时间、峰面积和质量含量如下表所列：

保留时间(分钟)	峰面积	质量含量(％)	溶剂种类
				3.175	2368.5	1.1	乙醇

图3显示了实施例6中HMG样品中的乙醇含量GC图谱；其中溶剂的保留时间、峰面积和质量含量如下表所列：

保留时间(分钟)	峰面积	质量含量(％)	溶剂种类
				3.175	69.6	0.03	乙醇

图4显示了实施例9中HCG样品中的乙醇含量GC图谱；其中溶剂的保留时间、峰面积和质量含量如下表所列：

保留时间(分钟)	峰面积	质量含量(％)	溶剂种类
				3.175	414.1	0.20	乙醇

具体实施方式

糖蛋白的组合物有机溶剂残留测定

在本发明的实施方式中，采用GC测得本发明方法制备的样品的残留溶剂，所述的GC检测方法如下：

色谱柱：Varian CP-Select 624(94％氰丙基苯基-6％二甲基聚硅氧烷)

柱规格：30m×0.32mm×1.8μm

进样口温度：200℃

检测器温度：260℃

流速：2.5ml/分钟，恒流

炉温：

载气：氮气

分流比：1∶1(工作站)，实际分流比：17∶1(皂膜流量计测定值)

检测器气体：空气流量：400ml/分钟

氢气流量：40ml/分钟

尾吹气流量：25ml/分钟(氮气)

顶空进样器条件

加热平衡温度：80℃；定量环温度：85℃；传输线温度：90℃；平衡时间：20分钟；加压时间：0.5分钟；充样时间：0.2分钟；定量环平衡时间：0.10分钟；进样时间：1分钟；整个运行时间：30分钟；进样体积：1ml；振摇模式：轻微振动。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法基材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件、或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

对比例1

FSH的冷冻干燥

配制45mL 0.01M磷酸二氢钠溶液(用NaOH调pH约6.5)，加入5ml乙醇，加入2g乳糖，搅拌溶解后，用0.22μm过滤器过滤。取10mL滤过液，加入10.0mg上述高纯度FSH(上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价为8817国际单位/mg)，完全溶解后，装盘放入冻干机(购自Virtis)中，按CN101347613A实施例1的方法进行冷冻干燥，出箱，得391mg冻干粉末。

经测定，FSH的生物效价结果如下：

对比例2

传统真空干燥法制备HMG

配制10ml 0.1mol/L的醋酸钠溶液，用醋酸调节pH6.5，冷却至10℃，加入250mgHMG原料(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价以FSH计405IU/mg)，搅拌溶解。加入-20℃乙醇50ml，搅拌混匀，离心得湿沉淀931mg，用3ml乙醇脱水，离心得HMG湿沉淀901mg，在20℃下真空干燥96小时，得到249mgHMG样品。经测定，生物效价(以FSH计)以及溶剂含量结果如下：

实施例3

制备低溶剂残留HMG

配制10ml 0.1mol/L的醋酸钠溶液，用醋酸调节pH4.0，冷却至16℃，加入250mgHMG原料(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价以FSH计405IU/mg)，搅拌溶解。加入-20℃乙醇100ml，搅拌混匀，离心得HMG湿沉淀936mg，在20℃下与放有冰水混合物的水体系一起真空干燥10小时，得到257mgHMG样品。经测定，生物效价(以FSH计)以及溶剂含量结果如下：

结果如下：

实施例4

制备低溶剂残留HMG

配制10ml 0.1mol/L的醋酸钠溶液，用醋酸调节pH6.5，冷却至10℃，加入250mgHMG原料(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价以FSH计405IU/mg)，搅拌溶解。加入-20℃乙醇50ml，搅拌混匀，离心得湿沉淀956mg，用10ml乙醇脱水，离心得HMG湿沉淀916mg，在10℃与放有冰水混合物的水体系一起真空干燥24小时，得到252mgHMG样品。经测定，生物效价(以FSH计)以及溶剂含量结果如下：

结果如下：

实施例5

制备低溶剂残留HMG

配制10ml 0.1mol/L的醋酸钠溶液，用醋酸调节pH10，冷却至15℃，加入250mgHMG原料(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价以FSH计405IU/mg)，搅拌溶解。加入-10℃乙醇100ml，搅拌混匀，离心得HMG湿沉淀953mg，在0℃与放有纯化水的水体系一起真空干燥24小时，撤去水***，0℃继续干燥5小时，得到246mgHMG样品。经测定，生物效价(以FSH计)以及溶剂含量结果如下：

结果如下：

实施例6

制备低溶剂残留HMG

配制10ml 0.1mol/L的磷酸二氢钠溶液，用NaOH溶液调节pH7.0，冷却至10℃，加入250mgHMG原料(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价以FSH计405IU/mg)，搅拌溶解。加入0℃乙醇50ml，搅拌混匀，离心得湿沉淀952mg，用3ml乙醇脱水，离心得HMG湿沉淀932mg，在0℃与放有纯化水的水体系一起真空干燥24小时，撤去水***，20℃继续干燥24小时，得到244mgHMG样品。经测定，生物效价(以FSH计)以及溶剂含量结果如下：

结果如下：

实施例7

制备低溶剂残留HCG

配制10ml 0.1mol/L的Tris溶液，用盐酸调节pH7.5，冷却至10℃，加入300mgHCG原料(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价5702IU/mg)，搅拌溶解。加入0℃乙醇50ml，搅拌混匀，离心得湿沉淀1172mg，用11ml乙醇脱水，离心得HCG湿沉淀1022mg，在10℃与放有冰水混合物的水体系一起真空干燥24小时，撤去水***，20℃继续干燥得24小时，得到295mgHCG样品。经测定，生物效价以及溶剂含量结果如下：

结果如下：

实施例8

制备低溶剂残留的FSH

取10℃含有FSH原料的溶液1000ml(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价1958IU/ml)，加入-20℃乙醇5000ml，搅拌混匀，离心得湿沉淀15820mg，用48ml乙醇脱水，离心得FSH湿沉淀14958mg，在0℃与放有纯化水的水体系一起真空干燥24小时，撤去水***，20℃继续干燥24小时，得到3995mg FSH样品。经测定，FSH的生物效价以及溶剂含量结果如下：

实施例9

制备低溶剂残留的HCG

取16℃含有HCG原料的溶液10L(由上海天伟生物制药有限公司提供，生物效价68319IU/ml)，加入-10℃乙醇50L，搅拌混匀，离心得湿沉淀620g，用4L乙醇脱水，离心得HCG湿沉淀560g，在20℃与放有纯化水的水体系一起真空干燥20小时，撤去水***，20℃继续干燥20小时，得到122g的HCG样品。

经测定，HCG的生物效价以及溶剂含量结果如下：

实施例10

制备低溶剂残留HCG

按照实施例7的步骤操作，区别是用甲醇替代实施例7中的乙醇对原料进行沉淀、脱水制备湿沉淀，得到298mgHCG样品。经测定，生物效价以及溶剂含量结果如下：

结果如下：

实施例11

制备低溶剂残留HMG

按照实施例6的步骤操作，区别是用丙酮替代实施例6中的乙醇对原料进行沉淀、脱水制备湿沉淀，得到240mgHMG样品。经测定，生物效价(以FSH计)以及溶剂含量结果如下：

结果如下：

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (24)

1.一种低溶剂残留的糖蛋白组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(a)将有机溶剂与含有糖蛋白的组合物原料的溶液充分混合沉淀，收取沉淀物(1)，用有机溶剂脱水后，继续收取糖蛋白的组合物沉淀，获得含有糖蛋白组合物的沉淀物(2)，所述的糖蛋白选自绒毛膜***、绝经期促性腺素、***、***、或其混合；

(b)将含有糖蛋白组合物的沉淀物(2)与水***共同真空干燥，得到所述低溶剂残留的糖蛋白组合物，该低溶剂残留的糖蛋白组合物中有机溶剂质量百分含量不超过0.5％；所述有机溶剂的含量由GC法测定。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述脱水用有机溶剂量为湿沉淀物(1)重量的0至10倍。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述脱水用有机溶剂量为湿沉淀物(1)重量的1至4倍。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述有机溶剂选自乙醇，丙酮或甲醇。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述有机溶剂温度在-20至25℃。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述有机溶剂温度在-20至0℃。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述的真空干燥温度为0至25℃。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述的真空干燥温度为0至20℃。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述的真空干燥时间为1至48h。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述的真空干燥时间为10至24h。

11.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤b中，所述水***中的水为自来水、去离子水、反渗透水、纯水、或注射用水。

12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述水***中的水为液态、固态、气态、或混合形态。

13.如权利要求12所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述水***为水溶液。

14.如权利要求12所述的制备方法，其特征在于，步骤b中，所述水***为可以产生水蒸气的物体。

15.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤a所述的含有糖蛋白组合物原料的溶液由以下步骤制备：

将含有糖蛋白组合物的原料溶解在水或缓冲液中，制备含有糖蛋白组合物原料的溶液。

16.如权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述溶解在温度5至20℃下进行。

17.如权利要求16所述的制备方法，其特征在于，所述温度在10至16℃。

18.如权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述的缓冲液选自：pH值缓冲范围在3至11的缓冲液。

19.如权利要求18所述的制备方法，其特征在于，所述的缓冲液选自：磷酸盐缓冲液，Tris缓冲液，醋酸钠缓冲液。

20.如权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述含有糖蛋白组合物原料的溶液的pH值控制在3至11。

21.如权利要求20所述的制备方法，其特征在于，所述含有糖蛋白组合物原料的溶液的pH值控制在4至10。

22.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤b后面还含有以下步骤：

(c)撤去水***后继续真空干燥得到所述的低溶剂残留的糖蛋白组合物。

23.如权利要求22所述的制备方法，其特征在于，步骤c中，所述的真空干燥时间为0至48h。

24.如权利要求23所述的制备方法，其特征在于，步骤c中，所述的真空干燥时间为5至24h。