CN102579323B

CN102579323B - 一种紫杉醇醇质体凝胶剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102579323B
Application number: CN 201210044384
Authority: CN
Inventors: 谭剑平; 蒋立新; 常坦然; 周志文
Original assignee: Staidson Beijing Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Staidson Beijing Biopharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-02-21
Filing date: 2012-02-21
Publication date: 2013-06-19
Anticipated expiration: 2032-02-21
Also published as: CN102579323A

Abstract

本发明公开了一种紫杉醇醇质体凝胶剂及其制备方法。该紫杉醇醇质体凝胶剂，其包括醇质体和凝胶体；所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在；所述醇质体是含有紫杉醇、低分子量醇、磷脂、胆固醇、稳定剂和抗氧化剂的微粒；所述凝胶体含有凝胶基质、促渗透剂、保湿剂、防腐剂、pH调节剂和水；所述醇质体和凝胶体以一定的重量比例进行配合，并且醇质体和凝胶体分别具有特定的组成。根据本发明所提供的紫杉醇醇质体凝胶剂，可以降低对皮肤的刺激作用，而且经皮渗透效果好。

Description

一种紫杉醇醇质体凝胶剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种紫杉醇的经皮给药制剂及其制备方法，具体来说涉及一种紫杉醇醇质体凝胶剂及其制备方法。

背景技术

紫杉醇(Paclitaxel)是从红豆杉科红豆杉属植物中提取、分离得到的一种复杂的次生代谢产物，是一种四环二萜类化合物。早在1971年，由美国科学家M.E.Wani和M.C.wal从短叶红豆杉的树皮中提取、分离得到，并证实了其抗癌活性。1992年，紫杉醇注射液首次由美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，用于卵巢癌的治疗，随后在加拿大获批上市。目前，其已在世界上50多个国家获批上市，临床上广泛用于卵巢癌、乳腺癌、***癌、非小细胞肺癌等的治疗，也有研究表明其在银屑病、类风湿性关节炎以及皮肤癌的治疗方面同样具有明显效果。

紫杉醇的抗肿瘤作用机制独特且十分复杂，目前普遍认同的作用机制有以下几种：1)微管解聚稳定机制，紫杉醇可通过结合到游离微管蛋白而诱导和促使微管蛋白装配成稳定微管，同时抑制已形成微管的解聚，使微管束不能与微管组织中心互相连接，阻断细胞周期，导致有丝***异常或中断，从而破坏细胞有丝***和***期间功能所必需的微管***动态再生，使肿瘤细胞复制受到阻断而死亡；2)免疫机制，紫杉醇与细菌性脂多糖(LPs)有相似作用，能激活巨噬细胞，杀伤或抑制肿瘤细胞；3)诱导细胞凋亡机制，紫杉醇可作用于细胞凋亡受体途径的Fas/Fasl通路，或激活半胱氮酸天冬氮酸蛋白酶家族，诱导细胞凋亡；4)抑制肿瘤细胞迁移机制。

目前，临床上紫杉醇的给药途径主要为注射给药，常用剂型为注射液，随着药物制剂技术的发展，不断有新的剂型批准上市应用于临床，如注射用紫杉醇脂质体等。检索药品审评中心(CDE)已受理的剂型，其新剂型主要有注射用紫杉醇聚合物胶束、紫杉醇前体脂质体注射液、紫杉醇微乳注射液、注射用紫杉醇白蛋白微粒、注射用紫杉醇纳米粒、紫杉醇脂质微球注射液、注射用紫杉醇磷脂复合物、注射用紫杉醇混悬液等。由此可见，已上市和受理的紫杉醇药物主要采用注射方式给药，尽管不断有新的剂型出现，但均未改变其给药途径，这与紫杉醇的理化性质及生物学特性有关，紫杉醇为水不溶性药物，体内生物利用度较低，而注射给药生物利用度相对较高。但，紫杉醇自身为细胞毒性药物，注射给药毒副作用大，临床顺应性差。

例如，在现有技术中，公开号为CN 101190214A的专利公开了一种紫杉醇注射液，该注射液不含聚氧乙烯蓖麻油的混合溶液，降低了由此引起的毒副作用与过敏反应。但，紫杉醇本身为细胞毒性药物，采用注射液给药不可避免带来全身的毒副作用，且安全、可控以及临床顺应性性较差。

在现有技术中，公开号为CN 101015525A的专利制备了三种新型紫杉醇脂质体(长循环脂质体、热敏脂质体、热敏长循环脂质体)，均采用注射方式给药。这三种新型脂质体，解决了紫杉醇水不溶性的缺点，同时降低了药物的毒副作用与使用增溶剂引起的过敏反应。专利中将脂质体冻干保存，一定程度上提高了脂质体稳定性，但是采用冻干工艺，会对脂质体产生不可逆的破坏，冻干过程中也会造成药物的渗漏，同时，在应用过程中需要医务人员对其进行水化，水化质量不仅影响脂质体的粒径及粒径分布，也会对其体内过程造成一定的差异性，质量控制难以解决。

另外，由于紫杉醇水溶性差，目前，临床上常用的注射液通常使用聚氧乙烯蓖麻油与无水乙醇作为混合溶媒，从而所述溶媒也会引发一定的毒副作用、过敏反应。因此，如何采用新的制剂技术与更为安全的给药途径，提高其生物利用度，降低毒副反应，成为目前亟待解决的问题。

经皮给药(Transdermal Delivery System，TDS)***或透皮给药***(Transdermal Therapeutic System，TTS)是指通过皮肤表面给药，以达到局部或全身治疗作用的一种给药途径。采用经皮方式给药，药物可免受胃肠道环境的影响，避免肝脏的首过效应，给药速度可控且血药浓度平稳，生物利用度高，毒副作用低，临床顺应性好，同时用药部位在体表，可以随时终止给药。由于其独特的优点，国内外研究广泛。但，在经皮给药***中，致密的角质层结构是药物透过皮肤的最大屏障，使许多大分子药物和溶解性较差难以透过皮肤达到局部或全身治疗疾病的目的。紫杉醇分子量为853.92，且在水中溶解度极差，在经皮给药***中，现有技术通常认为分子量大于600，在水中或矿物油中溶解度较差的药物较难透过皮肤屏障经皮给药。此外，传统外用制剂，通常具有一定的皮肤刺激性，且存在经皮渗透效果差的不足；同时，紫杉醇本身对皮肤也存在较大的刺激作用，直接接触皮肤会对其造成一定的损伤。

因此，如何将紫杉醇经皮给药，如何需采用新的制剂技术增加药物的溶解度与经皮渗透效果，以达到紫杉醇经皮给药治疗疾病的目的，是目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术紫杉醇注射液给药毒性大、经皮给药难度大的缺点，提供一种紫杉醇醇质体凝胶剂及其制备方法。该紫杉醇醇质体凝胶剂可以降低对皮肤的刺激作用，而且经皮渗透效果好。该制备方法能够制备得到上述紫杉醇制剂。

本发明提供了一种紫杉醇醇质体凝胶剂，其包括醇质体和凝胶体；

所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在；

所述醇质体是含有紫杉醇、低分子量醇、磷脂、胆固醇、稳定剂和抗氧化剂的微粒；

所述凝胶体含有凝胶基质、促渗透剂、保湿剂、防腐剂、pH调节剂和水；

以所述醇质体的总重量为100％计，所述醇质体的组成为：

紫杉醇 0.05～0.50％；

磷脂 1.00～8.00％；

胆固醇 0.00～2.00％；

稳定剂 0.10～0.80％；

抗氧化剂 0.10～0.60％；

低分子量醇 25.0～45.0％；

水 43.1～73.75％；

以所述凝胶体的总重量为100％计，所述凝胶体的组成为：

凝胶基质 1.00～3.00％；

保湿剂 4.00～12.0％；

防腐剂 0.10～0.80％；

促渗透剂 0.00～8.00％；

pH调节剂 1.20～4.50％；

水 71.7～93.7％。

本发明还提供了上述紫杉醇醇质体凝胶剂的制备方法，其包括如下步骤：

首先，以本发明上述的醇质体的组成为原料，制备紫杉醇醇质体；

其次，利用机械方法对所得到的紫杉醇醇质体进行整粒；

最后，将整粒过的紫杉醇醇质体与凝胶体混合研制均匀，得紫杉醇醇质体凝胶剂，所述凝胶体为不含有紫杉醇的凝胶体。

与现有技术紫杉醇的注射制剂相比，在本发明中，醇质体生物相容性良好，醇质体可将紫杉醇包封于其所形成的膜囊内，降低了紫杉醇直接接触皮肤所导致的刺激性大的问题；而且，本发明中醇质体和凝胶体相互穿插包围，在这样的构造下，未包封的紫杉醇和醇质体直接接触皮肤的面积较小，进一步降低了对皮肤的刺激作用。醇质体(Ethosomes)主要由磷脂、低分子量醇和水组成，是一种新型的柔性脂质体。柔性脂质体双分子层膜的流动性良好，易于变形，皮肤透过性高；同时，醇质体中含有较高浓度的低分子量醇，一定程度上也促进了其经皮渗透效果；另外，将药物制备成醇质体也解决了其溶解性不足的问题。因此，将紫杉醇制备成醇质体，再以凝胶形式经皮给药，能够提高制剂的载药量和经皮渗透效果，为其临床应用提供一种有效的给药新途径。

附图说明

图1为测试例5中实施例4和对比例3经皮渗透效果对比图；

图2为测试例6中实施例4和实施例16-17经皮渗透效果对比图；

图3为测试例7中实施例4和实施例18-19经皮渗透效果对比图；

图4为测试例8中实施例4经皮渗透效率图；

图5为测试例12中实施例4和实施例20累计经皮渗透量对比图。

具体实施方式

所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在，优选地，所述醇质体和所述凝胶体的混合比例为重量比1∶2至2∶1；更优选为所述醇质体和所述凝胶体的混合比例为重量比1∶1。

所述醇质体是含有紫杉醇、低分子量醇、磷脂、胆固醇、稳定剂、抗氧化剂和水的微粒；

以所述醇质体的总重量为100％计，所述醇质体的组成为：

紫杉醇 0.05～0.50％；

磷脂 1.00～8.00％；

胆固醇 0.00～2.00％；

稳定剂 0.10～0.80％；

抗氧化剂 0.10～0.60％；

低分子量醇 25.0～45.0％；

水 43.1～73.75％；

以所述凝胶体的总重量为100％计，所述凝胶体的组成为：

凝胶基质 1.00～3.00％；

保湿剂 4.00～12.0％；

防腐剂 0.10～0.80％；

促渗透剂 0.00～8.00％；优选2.00～8.00％

pH调节剂 1.20～4.50％；

水 71.7～93.7％。优选71.7～91.7％。

所述磷脂优选选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂胆酰碱、磷脂酰乙醇胺、神经鞘磷脂、PEG化磷脂、磷脂酰肌醇、二鲸磷酸酯、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱中的至少一种。更优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂胆酰碱、磷脂酰乙醇胺、神经鞘磷脂、PEG化磷脂中的至少一种。最优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂中的至少一种。以所述醇质体的总重量为100％计，所述磷脂的含量优选为2％～6％。

所述稳定剂优选选自二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)、十八胺、磷酸二鲸蜡脂、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸和荷负电磷脂中的至少一种。更优选二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)。所述低分子量醇为碳原子数为5以下的醇，优选选自乙醇、丙二醇、异丙醇和正丁醇中的至少一种。更优选乙醇。以所述醇质体的总重量为100％计，乙醇的含量优选为25％～45％，更优选所述乙醇的含量为30％～40％，最优选所述乙醇的含量为30％～35％。

所述抗氧化剂优选选自维生素E、维生素C、没食子酸丙酯、苹果酸、二叔丁基对甲酚、叔丁基对羟基茴香醚和β-胡萝卜素中的至少一种。更优选维生素E。

所述凝胶基质优选选自羟丙甲基纤维素、卡波姆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、吐温和泊洛沙姆中的至少一种。更优选卡波姆。

所述保湿剂选自丙三醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠中的至少一种。更优选丙三醇。

所述促渗透剂选自月桂氮卓酮类、甲基亚砜类、有机醇类、醋酸乙酯以及萜烯类中的至少一种。更优选所述促渗透剂选自氮酮、冰片、薄荷醇、二甲基亚砜、丙二醇、樟脑油、枫香油、桉树脑、茴香酮、杜香萜烯、柠檬烯、尿素、癸基甲基亚砜和醋酸乙酯中的至少一种。更优选氮酮、薄荷醇、二甲基亚砜、丙二醇、樟脑油、杜香萜烯、尿素和醋酸乙酯中的至少一种；优选丙三醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠。最优选氮酮。

所述防腐剂选自山梨酸、山梨酸钾、苯甲醇、三氯叔丁醇、苯甲酸钠、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和苯扎溴铵中的至少一种。更优选山梨酸、苯甲醇、三氯叔丁醇、尼泊金甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和苯扎溴铵中的至少一种。最优选羟苯乙酯。

所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾和三乙醇胺中的至少一种。优选所述pH调节剂为三乙醇胺。

所述醇质体中，紫杉醇的包封率为50％以上，优选为70％以上。优选地，所述醇质体中，紫杉醇的包封率为70％～90％。本发明的发明人研究发现，药脂比(所述药脂比是指紫杉醇同磷脂的质量比)对紫杉醇醇质体的包封率有显著影响，优选的药脂比是1∶20～1∶30，更优选为1∶18～1∶25，最优选的药脂比为约1∶20。其中所述包封率的测定方法可以为现有技术的常规方法。

所述醇质体的粒径范围为30～450nm，更优选30～220nm，最优选80～160nm(使用Malvern nano ZS90激光粒度分析仪测试)。本发明的发明人研究发现，乙醇浓度对紫杉醇醇质体的平均粒径、粒径分布均有显著影响，结果表明，以所述醇质体的总重量为100％计，乙醇的含量优选为25～45％，更优选所述乙醇的含量为30～40％，最优选所述乙醇的含量为30％～35％。

所述醇质体的D50～D90粒径为80～160nm更优选D70～D90粒径为80～160nm。最优选所述醇质体的D70粒径为80～160nm。

另外，本发明还提供上述紫杉醇醇质体凝胶剂的制备方法，其包括如下步骤：

其次，利用机械方法对所得到的紫杉醇醇质体进行整粒；

优选地，使用注入法或薄膜分散法制备所述紫杉醇醇质体。

优选地，使用注入法制备所述紫杉醇醇质体，所述注入法例如包括将本发明紫杉醇醇质体的组成中除水之外的其他成分在密闭条件下混合，然后以所述醇质体的组成中的水的总重量为100％计，将蒸馏水以2～10％/分钟；更优选2～7％/分钟，最优选2～4％/分钟的速度注入所得混合物。

优选地，采用薄膜分散法制备紫杉醇醇质体混悬液，具体地在有机溶剂中分散不包括水和低分子量醇的本发明醇质体的组成中的其他成分，可以使用旋转蒸发仪，其水浴温度45～55℃、转速150～300rpm、真空度200～800mbar(毫巴)，旋转蒸发充分挥除有机溶剂；待有机溶剂挥发完全后，加入乙醇和水混合溶液，涡旋条件下进行水化，水化温度45～55℃，优选45℃；水化时间20～40min，优选30min，得紫杉醇醇质体。其中所述有机溶剂选自氯仿和/或甲醇。

优选地，所述整粒的方法选自探头超声仪法、挤出仪法、高速分散匀质机法，以及它们的合用方法。其中探头超声仪法，优选地，超声时间优选0.5～10min，更优选2～7min，最优选4min。其中高速分散均质机法，优选采用数显高速分散匀质机结合微孔滤膜滤过的方法进行整粒，数显高速分散匀质机的搅拌速度为5000～16000转/分钟(rpm)，优选10000～16000转/分钟。所述均质可以分1～5次，优选3次进行。持续均质的时间为10分钟以下，更优选持续均质的时间为1～3min。更优选地，冰水浴条件下，数显高速分散匀质机(上海昂尼仪器仪表有限公司)12000rpm，分散匀质3次，每次3分钟，将分散匀质后的醇质体依次过0.45μm、0.22μm微孔滤膜。

本发明还提供一种紫杉醇醇质体凝胶剂，其是根据上述的制备方法所得到的紫杉醇醇质体凝胶剂。

下面说明本发明中的一些符号及术语：

nm代表纳米，mL代表毫升，min代表分钟。

关于D50、D70粒径，详细说明如下：

D50粒径是指：一个样品的累计粒度分布百分数达到50％时所对应的粒径。结合本发明，D50粒径为80～160nm是指，有50％以上的醇质体的粒径在80～160nm的范围之内。

D70粒径是指：一个样品的累计粒度分布百分数达到70％时所对应的粒径。结合本发明，D70粒径为80～160nm是指，有70％以上的醇质体的粒径在80～160nm的范围之内。

本发明中所述的粒径，可以使用本领域常用的仪器进行测定，例如使用Malvern nano ZS90激光粒度分析仪，按照其使用说明书记载的方法进行测定。

本发明提供一种优选的实施方式是，把醇质体和凝胶体以重量比1∶1的比例均匀混合。

根据本发明所提供的紫杉醇醇质体凝胶剂，可以降低对皮肤的刺激作用，而且经皮渗透效果好。

另外，本发明的技术方案或者改进的技术方案中还具有如下的技术效果：

(1)本发明中，紫杉醇醇质体凝胶剂为外用经皮给药制剂，与注射给药制剂相比，大大降低了其毒副作用，同时其给药方便、安全、可控、顺应性良好。

(2)本发明中，将紫杉醇包封形成醇质体后再制备成凝胶剂经皮给药，降低了其直接接触皮肤导致的刺激性。

(3)本发明中，紫杉醇醇质体稳定性良好，与普通脂质体相比，高浓度低分子量醇(在醇质体中，25～45重量％的低分子量醇)的存在增加了醇质体的稳定性，同时低分子量醇也提高了药物的经皮渗透效果。

(4)本发明中，醇质体为一种新型柔性脂质体结构，双分子层膜的流动性良好，易于变形，经皮渗透性能优越，能携带药物较好的透过皮肤屏障。

(5)本发明中，紫杉醇醇质体的整粒过程采用多种方法，经过一种或一种以上方法联合整粒后，醇质体的粒径及粒径分布理想。

(6)本发明中，紫杉醇醇质体的粒径范围在30～450nm，优选粒径范围在30～220nm，进一步优选粒径D70在80～160nm的醇质体，此粒径分布的醇质体经皮渗透效果最好。

(7)本发明中，紫杉醇醇质体的包封率均在50％以上，优选70％以上，进一步在70～90％之间，包封率高，载药量大，且此包封率的紫杉醇醇质体经皮渗透效果好，包封率的指标在现有处方工艺下易于实现。

(8)本发明中，制备紫杉醇醇质体时应用了一定比例的稳定剂和抗氧化剂，进一步增加了所述制剂储存、运输、使用过程中的稳定性。

(9)本发明中，处方中含有一定组成的促渗透剂，促渗透剂的应用进一步改善了所制紫杉醇醇质体凝胶剂的经皮渗透效果。

(10)本发明中，紫杉醇醇质体凝胶剂的经皮渗透效率较高，在30％以上，一定程度上提高了其生物利用度，同时降低了经济成本。

(11)本发明中，紫杉醇醇质体凝胶剂在皮肤癌和银屑病的治疗方面应用效果明显，临床顺应性好，且无明显不良反应。

(12)本发明中，紫杉醇醇质体凝胶剂经皮给药后，紫杉醇在表皮层中的累积量明显高于真皮层，具有一定意义上的表皮层被动靶向特性，可提高其在治疗皮肤癌、银屑病类浅表皮疾病方面的效果。

为了使得本领域的技术人员能够更加清楚地了解本发明所提供的技术方案，下面提供实现本发明的技术方案的实施例以及对比例。

制备实施例1(注入法制备紫杉醇醇质体凝胶剂)

本实施例1用于说明本发明紫杉醇醇质体凝胶剂及其制备方法。

1、紫杉醇醇质体的制备

称取紫杉醇0.04g、磷脂0.8g、胆固醇0.08g、稳定剂0.08g和抗氧化剂0.04g，溶于7.0g乙醇中，形成含有紫杉醇的乙醇溶液，而后将该乙醇溶液置于磁力搅拌器上，600rpm(转/分)高速搅拌并密闭条件下，将蒸馏水(11.96g)缓慢、匀速的注入其中，注入速度为0.3mL/min，待蒸馏水注入完毕后继续搅拌5min，即得紫杉醇醇质体。将所得紫杉醇醇质体进行整粒，具体方法为：冰水浴条件下，探头超声仪(宁波新芝JY-92 2D)超声整粒，超声时间为5分钟，将超声后的醇质体依次过LF-50挤出仪(加拿大奥维斯汀(AVESTIN)公司)400nm、200nm的挤出滤膜，即得所需粒径分布的紫杉醇醇质体。

2、空白凝胶的制备

称取凝胶基质0.4g，室温条件下用蒸馏水(16.81g)充分溶胀，并加入保湿剂1.0g、防腐剂0.05g、促渗透剂1.2g，搅拌条件下缓慢加入三乙醇胺(0.54g)调节其pH至中性，充分混合均匀即得无色透明空白凝胶。

需要说明的是，所谓的空白凝胶(也就是本发明的凝胶体)是指不含有紫杉醇的凝胶体。“空白”指的是“紫杉醇”是空白的。

3、紫杉醇醇质体凝胶剂的制备

将步骤1得到的紫杉醇醇质体(即，经过整粒的紫杉醇醇质体)与步骤2得到的空白凝胶等重量份混合研制均匀，即得本发明的紫杉醇醇质体凝胶剂。

本实施例中磷脂为氢化大豆卵磷脂，低分子量醇为乙醇，稳定剂为二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)，凝胶基质为卡波姆，抗氧化剂为维生素E，保湿剂为丙三醇，防腐剂为羟苯乙酯，促渗透剂为氮酮，pH调节剂为三乙醇胺。

因此，所得紫杉醇醇质体凝胶剂的处方为：醇质体(紫杉醇0.04g、氢化大豆卵磷脂0.80g、胆固醇0.08g、二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)0.08g、维生素E 0.04g、乙醇7.0g、水11.96g)和凝胶体(卡波姆0.4g，丙三醇1.0g、羟苯乙酯0.05g、氮酮1.2g、三乙醇胺0.54g水16.81g)。

制备实施例2(薄膜分散法制备紫杉醇醇质体凝胶剂)

本实施例2用于说明本发明紫杉醇醇质体凝胶剂及其制备方法。

1、紫杉醇醇质体的制备

称取紫杉醇0.06g，磷脂1.2g，胆固醇0.24g，稳定剂0.12g，抗氧化剂0.06g，溶于体积比为4∶1的100mL氯仿/甲醇的有机溶剂中；设定旋转蒸发仪的水浴温度50℃、转速200rpm、真空度200～800mbar(毫巴)，旋转蒸发充分挥除有机溶剂；待有机溶剂挥发干净后，加入乙醇/水(乙醇8.0g，水10.32g)混合溶液，涡旋条件下进行水化，水化温度45℃，水化时间30min，得紫杉醇醇质体。将所得紫杉醇醇质体进行整粒，具体方法为：冰水浴条件下，数显高速分散匀质机(上海昂尼仪器仪表有限公司)12000rpm，分散匀质3次，每次3分钟，将分散匀质后的醇质体依次过0.45μm、0.22μm微孔滤膜，即得所需粒径分布的紫杉醇醇质体。

2、空白凝胶的制备

称取凝胶基质0.4g，室温条件下用16.39g蒸馏水充分溶胀，并加入保湿剂1.2g、防腐剂0.07g、促渗透剂1.4g，搅拌条件下缓慢加入三乙醇胺(0.54g)调节其pH至中性，充分混合均匀即得无色透明空白凝胶。

3、紫杉醇醇质体凝胶剂的制备：

因此，所得紫杉醇醇质体凝胶剂的处方为：醇质体(紫杉醇0.06g、氢化大豆卵磷脂1.20g、胆固醇0.24g、二棕榈磷脂酰甘油(DPPG)0.12g、维生素E 0.06g、乙醇8.0g、水10.32g)和凝胶体(卡波姆0.4g，丙三醇1.20g、羟苯乙酯0.07g、氮酮1.40g、三乙醇胺0.54g、水16.39g)。

实施例3-12

按照实施例1的方法制备实施例3-8的紫杉醇醇质体凝胶剂，按照实施例2的方法制备实施例9-12的紫杉醇醇质体凝胶剂，制备的组分不同之处如表1所示；制备过程中的参数不同之处如表2和表3所示。

表1

续表1

g表示克，是质量单位。

上表各实施例所制得的紫杉醇醇质体凝胶剂均为40g。

表2

表3

对比例1

本对比例用于说明药脂比对于包封率的影响。

采用与实施例1步骤1相同的方法制备紫杉醇醇质体，不同之处在于大豆卵磷脂的含量低，药脂比为1∶5，除水之外的其它组分含量不变，最后用水补足量即可。

对比例2

本对比例用于说明药脂比对于包封率的影响。

采用与实施例2步骤1相同的方法制备紫杉醇醇质体，不同之处在于大豆卵磷脂的含量低，药脂比为1∶10，除水之外的其它组分含量不变，最后用水补足量即可。

实施例13

本实施例用于说明药脂比对于包封率的影响。

采用与实施例2相同的方法制备紫杉醇醇质体凝胶剂，不同之处在于本实施例制备醇质体的步骤1中的大豆卵磷脂的含量高，药脂比为1∶30，除水之外的其它组分含量不变，最后用水补足量即可。

测试例1包封率的测定方法1

本测试例说明使用低温超速离心法测定实施例1-13的步骤1所获得的紫杉醇醇质体的包封率以及对比例1-2得到的醇质体。

分别精密移取实施例1-13步骤1所获得的紫杉醇醇质体和对比例1-2的紫杉醇醇质体2.0mL置于离心管中，在4℃的低温、14000rpm条件下离心30min，移去上清液，并补足等量空白上清液(即配制的除不含紫杉醇外，所有成份组成均同移去的上清液)，同样条件下再离心30min，移去并合并上清液，HPLC(高效液相色谱法)测定上清液中紫杉醇的量记为M；将离心沉降得到的紫杉醇醇质体破乳(0.2mL甲醇破乳)后，用HPLC测定紫杉醇的量，即为包封于醇质体的紫杉醇的量，记为N；按下式计算紫杉醇醇质体的包封率1(EE％)：

EE％＝N/(M+N)×100％。测试结果见表4。

测试例2包封率的测定方法2

本测试例说明使用透析法测定实施例1-13的步骤1所获得的紫杉醇醇质体的包封率以及对比例1-2得到的醇质体。

首先，分别精密移取实施例1-13步骤1所获得的紫杉醇醇质体和对比例1-2的紫杉醇醇质体3.0mL置于预处理好的透析袋(型号：MD25，上海欧伟达仪器科技有限公司)内；其次，将透析袋置于300mL的透析介质中进行透析，透析介质为乙醇/水为3∶7的混合溶液，透析12h(小时)后更新透析介质，再透析12h；最后，移取2.0ml透析袋内的紫杉醇醇质体，破乳(2.0mL甲醇破乳)后，用HPLC测定醇质体中紫杉醇的量，记为W；另取制备的紫杉醇醇质体样品2.0ml，直接破乳(2.0mL甲醇破乳)后，用HPLC测定总的紫杉醇的量，记为W_总，按下式计算紫杉醇醇质体的包封率2(EE％)：

EE％＝W/W_总×100％。测试结果见表4。

表4

	药脂比(Drug/PC)	包封率1	包封率2
				实施例1	1∶20	85.5	85.7
实施例2	1∶20	86.4	86.1
				实施例3	1∶20	82.7	82.6
实施例4	1∶20	88.7	88.5
				实施例5	1∶16	79.0	78.5
实施例6	1∶20	83.6	83.8
				实施例7	1∶20	84.1	84.5
实施例8	1∶20	86.7	86.5
				实施例9	1∶20	85.0	85.2
实施例10	1∶20	82.1	82.3
				实施例11	1∶20	80.1	80.4
实施例12	1∶20	85.5	85.9
				实施例13	1∶30	80.6	80.1
对比例1	1∶5	46.3	46.0
				对比例2	1∶10	65.4	65.5

从表4可以看出，药脂比(所述药脂比是指紫杉醇同磷脂的质量比)对紫杉醇醇质体的包封率有显著影响。药脂比过高、过低均不利于药物的高效包载，优选的药脂比是1∶20～1∶30，优选为1∶18～1∶25，最优选的药脂比为1∶20。

实施例14

本实施例用于说明低分子量醇浓度对于粒度的影响。

采用与实施例1相同的方法制备紫杉醇醇质体凝胶剂，不同之处在于在本实施例制备醇质体的步骤1中，以所述醇质体的重量为基准，其中乙醇的含量为20％，除水之外的其它组分含量不变，最后用水补足量即可。

实施例15

本实施例用于说明低分子量醇浓度对于粒度的影响。

采用与实施例1相同的方法制备紫杉醇醇质体凝胶剂，不同之处在于在本实施例制备醇质体的步骤1中，以所述醇质体的重量为基准，其中乙醇的含量为50％，除水之外的其它组分含量不变，最后用水补足量即可。

测试例3粒径的测定方法

本测试例说明使用Malvern nano ZS90激光粒度分析仪测定实施例1-12和14-15的步骤1所获得的紫杉醇醇质体的平均粒径、粒径分布PDI及粒径在80～160nm所占百分比，结果见表5。

表5

由上表可知，乙醇浓度对紫杉醇醇质体的平均粒径、粒径分布均有显著影响，结果表明，优选的乙醇浓度范围为25％～45％，并且，以乙醇浓度为30％～35％时所得紫杉醇醇质体最为理想。

对比例3

本对比例制备了紫杉醇的凝胶剂。具体的制备方法为：

1)称取卡波姆0.40g，分散于乙醇/水等体积比的混合溶液中，充分溶胀；

2)称取保湿剂1.00g、促渗透剂1.20g、防腐剂50.0mg加于充分溶胀后的卡波姆中，搅拌条件下缓慢加入三乙醇胺调节pH至中性，得无色透明空白凝胶；

3)取紫杉醇10.0mg，溶于适量乙醇/水等体积比的混合溶液中，再与空白凝胶混合，加等体积比的乙醇/水混合溶液至20.0g，充分研制均匀即得。

测试例4

本测试例测定对比例3紫杉醇凝胶剂以及实施例1-12和14-15的紫杉醇醇质体凝胶剂对皮肤的刺激性。

选取家兔为受试动物，每组4只，雌雄各半，每个实施例/对比例平行试验3组，分别将受试动物进行脱毛处理，脱毛范围为3cm(厘米)×3cm，并确保脱毛处理未造成皮肤损伤；将均含有紫杉醇0.5mg的实施例1-14和对比例3(即以有效成分紫杉醇的量计算)的受试样品分别均匀涂布于已去毛的家兔皮肤上，然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定，贴敷4小时；贴敷结束后，除去受试样品并用温水清洁给药部位，以皮肤出现红斑、水肿的程度为评价指标，按表6对实验结果进行评分，按表7进行刺激强度评价，结果见表8。

表6皮肤刺激反应评分标准

刺激反应	分值
		红斑
无红斑	0
		轻度红斑(勉强可见)	1
中度红斑(明显可见)	2
		重度红斑	3
***红斑到轻度焦痂形成	4
		水肿
无水肿	0
		轻度水肿(勉强可见)	1
中度水肿(明显***)	2
		重度水肿(皮肤***1mm，轮廓清楚)	3
严重水肿(皮肤***1mm以上并有扩大)	4
		最高总分值	8

表7皮肤刺激强度评价标准

分值	评价
		0.00-0.49	无刺激性
0.50-2.99	轻度刺激性
		3.00-5.99	中度刺激性
6.00-8.00	强刺激性

表8皮肤刺激性实验结果

由上表8可知：本发明的实施例1-12和14-15的紫杉醇醇质体凝胶剂对家兔皮肤均无刺激性；而对比例3的所制备的紫杉醇凝胶剂第一、二、三组，对家兔皮肤有轻度刺激性。从上表说明将紫杉醇包封于醇质体后，再制备成凝胶剂，降低了其直接接触皮肤所引起的刺激性。

测试例5

本测试例测定对比例3紫杉醇凝胶剂以及实施例1-12和14-15的紫杉醇醇质体凝胶剂的离体经皮渗透特性。具体方法如下：

取合适大小(4cm²)的去除皮下组织的人体皮肤，用生理盐水洗净，将皮肤固定在TK-12D型(上海锴凯科技贸易有限公司)透皮扩散仪的扩散池上，在供给室内分别加入等量(以有效成分紫杉醇计算为0.58mg)的制备好的各样品，接受介质为乙醇/PEG400/生理盐水的混合溶液；设定透皮扩散仪各参数，分别于特定时间点取样，并补充等量的空白接受介质。HPLC测定(高效液相色谱测定)各取样点接受介质中紫杉醇的含量，计算其24小时内各取样点累计经皮透过量。研究结果表明：紫杉醇醇质体的经皮渗透效果明显优于紫杉醇凝胶，结果见图1(仅显示实施例4和对比例3)以及表9。

表9

实施例16

本实施例用于说明步骤1所得紫杉醇醇质体粒径分布对紫杉醇醇质体凝胶剂离体经皮渗透特性的影响。

采用与实施例4相同的组分和方法制备D50在80～160nm的紫杉醇醇质体凝胶剂，其中制备方法的不同之处在于超声时间为1min。

实施例17

本实施例用于说明步骤1所得紫杉醇醇质粒径分布对紫杉醇醇质体凝胶剂离体经皮渗透特性的影响。

采用与实施例4相同的组分和方法制备D60在80～160nm的紫杉醇醇质体凝胶剂，其中制备方法的不同之处在于超声时间为3min。

测试例6

本测试例说明紫杉醇醇质体粒径分布对紫杉醇醇质体凝胶剂离体经皮渗透特性的影响，具体方法按测试例5所述，研究结果表明包含紫杉醇醇质体D70在80～160nm的凝胶剂经皮渗透效果最好，结果见图2(仅显示实施例4和实施例16-17)以及表10。

表10

实施例18

按与实施例4相同组分和方法制备紫杉醇醇质体凝胶剂，在本实施例的步骤1中所得紫杉醇醇质体的包封率为50％，其中制备方法的不同之处在于在本实施例制备醇质体的步骤1中，蒸馏水注入速度为1.0mL/min。

实施例19

按与实施例4相同组分和方法制备紫杉醇醇质体凝胶剂，在本实施例的步骤1中所得紫杉醇醇质体的包封率为70％，其中制备方法的不同之处在于在本实施例制备醇质体的步骤1中，蒸馏水注入速度为0.7mL/min。

测试例7

本测试例说明实施例1-12和实施例14-19步骤1所得紫杉醇醇质体包封率对紫杉醇醇质体凝胶剂体外经皮渗透效果的影响，具体方法如测试例5所述，研究结果表明紫杉醇醇质体的包封率对紫杉醇醇质体凝胶剂的经皮渗透量有显著影响，结果见图3(仅显示实施例4和实施例18-19)以及表11。

表11

测试例8

本测试例说明实施例1-12和14-19的紫杉醇醇质体凝胶剂的经皮渗透效率，按照测试例5进行经皮渗透实验，计算累计经皮渗透量，并按下式计算经皮渗透效率：

经皮渗透效率％＝累计经皮渗透量/给药量×100％

研究结果表明，紫杉醇醇质体凝胶剂的经皮渗透效率较高，在30％以上，结果见图4(仅显示实施例4)以及表12。

表12

测试例9

本测试例说明实施例1-19的紫杉醇醇质体凝胶剂的靶向分布特征。随机取小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g之间，去除腹部毛发，并用生理盐水洗净皮肤表面，24h后以实施例4紫杉醇醇质体凝胶剂给药，给药量0.4g，给药面积3.14cm²，维持非封闭状态，分别在1h，2h，3h，4h，6h，8h，12h和24h取下皮肤。取给药后的小鼠，颈部脱臼处死，立即剥离给药部位皮肤，乙醇擦拭干净后再用生理盐水擦拭干净，随后热板法分离表皮与真皮层。分别将分离得到的表皮层和真皮层剪碎，以5.0ml的乙醇超声提取1h，6000rpm离心10min，取上清液过0.45μm微孔滤膜后进行HPLC测定，计算药物在表皮和真皮层中的分布情况，研究结果表明，24h内紫杉醇在表皮层中的累积量为57μg/cm²，明显高于真皮层的20μg/cm²，具有一定意义上的被动靶向分布特性。

按照以上方法重复实施例1-3和5-19得到相同的结果，即24h内紫杉醇在表皮层中的累积量为48-57μg/cm²，明显高于真皮层的20-25μg/cm²

测试例10

本测试例说明实施例1-12和14-19的紫杉醇醇质体凝胶剂治疗银屑病的效果。银屑病(Psoriasis)是临床上常见的慢性炎症性皮肤疾病，其主要病理特征为角质形成细胞增殖加快，角化不完全，真皮毛细血管扩张，以及炎症细胞浸润等，临床上尚无彻底的根治方法。研究表明，紫杉醇对银屑病的治疗有确切的疗效，本实施例旨在考察紫杉醇醇质体凝胶剂对于银屑病的临床应用效果。

受试者选择：54例确诊银屑病患者，男性31例，女性23例，年龄15～75岁，平均41.6岁，病程3个月至35年，平均8.2年。其中寻常型15例(男9例，女6例)、红皮病型17例(男10例，女7例)、脓疱型14例(男8例，女6例)、关节病型8例(男4例，女4例)。

治疗方案：本发明实施例4紫杉醇醇质体凝胶剂外用给药，给药部位为银屑病发病皮肤表面，给药量以紫杉醇计60μg/cm²，给药频率2次/日，持续给药2个月。

疗效评定标准：治疗前与治疗后详细记录患者红斑、鳞屑、皮肤浸润(厚度)的变化情况，按国际通用的PASI评分法进行计算和统计，并记录患者的不良反应情况。(1)临床痊愈：皮损全部消退，留色素沉着或色素减退斑，临床症状基本消失，PASI较治疗前下降95％以上；(2)显效：临床症状明显改善，皮损大部分消退，PASI下降60％～95％；(3)有效：皮损部分消退，临床症状有所改善，PASI下降30％～59％；(4)无效：皮损消退不明显，临床症状未见改善，PASI下降30％以下。其中，临床痊愈、显效、有效均计入有效率的统计。

实验结果：计算PASI评分结果，统计出各类型银屑病临床痊愈、显效、有效、无效的人数，计算有效率，紫杉醇醇质体凝胶剂对寻常型、红皮型、脓疱型、关节病型的有效率分别为73％、65％、57％、75％。

实验结果表明，按照本发明实施例4制备得到的紫杉醇醇质体凝胶剂对各类型银屑病应用效果明显，患者顺应性良好，无明显不良反应，临床有效率较高，均在55％以上。其中，对寻常型和关节病型银屑病疗效更为明显，有效率分别为73％和75％；对红皮型和脓疱型银屑病疗效稍差，有效率分别为65％和57％。

按照以上方法重复实施例1-3和5-12以及14-19得到相同的结果，即紫杉醇醇质体凝胶剂对各类型银屑病应用效果明显，患者顺应性良好，无明显不良反应，临床有效率较高，均在50％以上。其中，对寻常型和关节病型银屑病疗效更为明显，有效率分别为60％以上和63％以上；对红皮型和脓疱型银屑病疗效稍差，有效率分别为53％以上和50％以上。具体结果如表13所示。

表13

测试例11

本测试例说明实施例1-12和14-19的紫杉醇醇质体凝胶剂治疗皮肤癌的效果。皮肤癌(Skin Cancer)是人类最常见的恶性肿瘤之一，近年来，随着工业污染的加剧，环境的恶化，皮肤癌的发病率呈上升趋势。皮肤癌不仅严重危害患者的身体健康，同时也给患者心理上带来极大的危害。国内外研究发现，紫杉醇对皮肤癌的治疗有确切的疗效，本发明制备了紫杉醇醇质体凝胶剂，并通过本实施例研究其对皮肤癌的临床应用效果。

受试者选择：选择确诊皮肤癌患者36例，其中男性20例，女性16例，病理类型为基层细胞癌者19例，鳞状细胞癌17例，年龄在35～75岁，平均年龄60.3岁，发病部位在头面部者24例，其他部位12例。根据国际抗癌联盟(UICC)分期法，其中T₁期12例，T₂期13例，T₃期7例，T₄期4例。

治疗方案：本发明实施例4紫杉醇醇质体凝胶剂外用给药，给药部位为患癌皮肤表面，给药量以紫杉醇计100μg/cm²，给药频率2次/日，持续给药6个月。

实验结果：临床实验结果表明，按照本发明实施例4制备得到的紫杉醇醇质体凝胶剂对于皮肤癌的治疗总有效率为80.6％(29/36)，其中对基层细胞癌患者有效率为78.9％(15/19)，对鳞状细胞癌患者的有效率为82.4％(14/17)。

按照以上方法重复实施例1-3、5-12和14-19得到相同的结果，即紫杉醇醇质体凝胶剂对皮肤癌应用效果明显，对于皮肤癌的治疗总有效率为69.4-80.6％，其中对基层细胞癌患者有效率为68.4-78.9％，对鳞状细胞癌患者的有效率为为70.6-82.4％。具体结果如表14所示。

表14

以上结果表明，紫杉醇醇质体凝胶剂对皮肤癌疗效确切，有效率高，且无明显不良反应，临床顺应性好，为治疗皮肤癌提供了一种有效的方法。

实施例20

本实施例用于说明不加促渗透剂的紫杉醇醇质体凝胶剂的制备。

采用与实施例4相同的方法制备紫杉醇醇质体凝胶剂，不同之处在于未加促渗透剂。

测试例12

本测试例考察促渗透剂对紫杉醇醇质体凝胶剂的离体经皮渗透特性的影响。本测试例采用测试例5的方法测试了实施例20的紫杉醇醇质体凝胶剂。结果表明：促渗透剂的应用进一步提高了紫杉醇醇质体凝胶剂的经皮渗透效果，结果见图5(仅显示实施例4的紫杉醇醇质体凝胶剂和实施例20)。

Claims

1.一种紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，其包括醇质体和凝胶体；

所述醇质体和所述凝胶体以均匀混合的状态存在；

以所述醇质体的总重量为100%计，所述醇质体的组成为：

以所述凝胶体的总重量为100%计，所述凝胶体的组成为：

其中，所述醇质体和所述凝胶体的混合比例为重量比1:2至2:1；

所述低分子量醇为碳原子数为5以下的醇。

2.根据权利要求1所述的紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、神经鞘磷脂、PEG化磷脂、磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱中的至少一种；所述稳定剂选自二棕榈磷脂酰甘油、十八胺、磷酸二鲸蜡脂、磷脂酰甘油、磷脂酸和磷脂酰丝氨酸中的至少一种；所述凝胶基质选自羟丙甲基纤维素、卡波姆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、吐温和泊洛沙姆中的至少一种；所述保湿剂选自丙三醇、丁二醇、己二醇、山梨醇、聚乙二醇、透明质酸和透明质酸钠中的至少一种；所述抗氧化剂选自维生素E、维生素C、没食子酸丙酯、苹果酸、二叔丁基对甲酚、叔丁基对羟基茴香醚和β-胡萝卜素中的至少一种；所述促渗透剂选自月桂氮卓酮类、甲基亚砜类、有机醇类、醋酸乙酯以及萜烯类中的至少一种；所述防腐剂选自山梨酸、山梨酸钾、苯甲醇、三氯叔丁醇、苯甲酸钠、尼泊金甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和苯扎溴铵中的至少一种；和/或所述pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾和三乙醇胺中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，所述促渗透剂选自氮酮、冰片、薄荷醇、二甲基亚砜、丙二醇、樟脑油、枫香油、桉树脑、茴香酮、杜香萜烯、柠檬烯、尿素、癸基甲基亚砜和醋酸乙酯中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，以所述凝胶体的总重量为100%计，所述促渗透剂的含量为2.00～8.00%；和/或以所述凝胶体的总重量为100%计，所述凝胶体中水的含量为71.7～91.7%。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，在所述醇质体中，紫杉醇的包封率为50%以上。

6.根据权利要求5所述的紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，在所述醇质体中，紫杉醇的包封率为70%～90%。

7.根据权利要求1-4任意一项所述的紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，所述醇质体的粒径范围为30～450nm。

8.根据权利要求7所述的紫杉醇醇质体凝胶剂，其特征在于，所述醇质体的D70粒径为80～160nm。

9.一种紫杉醇醇质体凝胶剂的制备方法，其包括如下步骤：

首先，以权利要求1-4任意一项所述的醇质体的组成为原料，制备紫杉醇醇质体；

其次，利用机械方法对所得到的紫杉醇醇质体进行整粒；

10.根据权利要求9所述的紫杉醇醇质体凝胶剂的制备方法，其特征在于，使用注入法或薄膜分散法制备所述紫杉醇醇质体。

11.根据权利要求10的所述紫杉醇醇质体凝胶剂的制备方法，其特征在于，使用注入法制备所述紫杉醇醇质体，其中，以所述醇质体的组成中的水的总重量为100%计，蒸馏水的注入速度为2～10%/分钟。

12.根据权利要求9-11中任意一项所述的紫杉醇醇质体凝胶剂的制备方法，其特征在于，机械整粒方法选自探头超声仪法、挤出仪法、高速分散匀质机法，以及它们的合用方法。