CN104688721A - 一种含紫杉醇脂质体的抗类风湿性关节炎药物凝胶剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含紫杉醇脂质体的抗类风湿性关节炎药物凝胶剂及其制备方法。包括主药与空白凝胶制备得到；所述的主药包括紫杉醇脂质体与盐酸利多卡因，其中紫杉醇脂质体和空白凝胶的质量体积比为5∶100～20∶100、盐酸利多卡和空白凝胶的质量体积比为1∶100～5∶100。本发明根据循证医学要求，将治疗RA药物紫杉醇与利多卡因配伍，利用脂质体技术包裹紫杉醇提高生物利用度，并采用制成适合于患处定向使用凝胶剂。既针对RA的发病机理起治疗作用，又能迅速缓解RA患者的疼痛。为广大RA患者提供新的治疗途径。

Description

一种含紫杉醇脂质体的抗类风湿性关节炎药物凝胶剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，尤其涉及一种含紫杉醇脂质体的抗类风湿性关节炎药物凝胶剂及其制备方法。

背景技术

类风湿性关节炎(RA)是一种发病机制并不明确的自身免疫性疾病，以慢性进行性关节破坏为特征，主要表现为滑膜衬里细胞高度增值、间质大量炎性细胞浸润，以及微血管的新生和血管翳的形成。其特征是手足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，并可累及内脏。

对于类风湿性关节炎，目前尚未有特效药物，现有的治疗手段只能是对症治疗，以改善病情为主，如减轻关节的炎症反应，抑制病情的发展及最大程度的保护关节和肌肉的功能。治疗药物有糖皮质激素、非甾体抗炎药、抗风湿药(DMARDs)和植物药。DMARDs的联合治疗是目前治疗RA的主要手段，该类药物主要有甲氨蝶呤、环孢素、来氟米特、白芍总苷等，其中甲氨蝶呤、环磷酰胺等最早用于抗肿瘤药，长期使用毒副作用较大，可导致消化性溃疡、骨髓抑制及肺、肝、肾等损伤，而影响RA的治疗，甚至药物的毒副作用成了患者的直接死因。因此，研发一种高效、低毒、给药方便的治疗RA药品，将是今后类风湿性关节炎的研发方向。凝胶剂作为一种新型外用给药方式，广泛应用于缓释、控释及脉冲给药***，局部给药后具有生物相容性好，易吸收。这对于像RA之类需长期用药的疾病较口服制剂具有明的优势；同时药物直接与患处接触，迅速透过皮肤和软组织，在局部迅速形成高血药浓度，发挥药效。

紫杉醇是从植物红豆杉树皮中提取的化合物，是一种细胞有丝***的抑制剂，目前主要用于治疗各种癌症。1994年brahn、kurose等人在CIA大鼠模型中证实，紫杉醇可以选择性导增值期的滑膜细胞凋亡，对正常滑膜细胞和软骨细胞无影响，可以显著改善CIA的发病程度。因此，将紫杉醇用于CA的治疗是可行的。国外已有紫杉醇预防、治疗类风湿关节炎的动物模型的报道。紫杉醇在水中溶解度很小(1μg/mL)，临床上采用乙醇和聚氧乙烯蓖麻油作为助溶剂增加紫杉醇的水溶性，但后者会产生诸多不良反应，如心血管毒性，过敏反应、肾毒性及神经***毒性等，使得紫杉醇的临床应用受到了很大限制。

脂质体是一种将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型囊泡，以磷脂双分子层为主要成分，以胆固醇，卵磷脂为主要附加剂。作为一种新型制剂技术，脂质体既可以够将水溶性药物包封于亲水基团夹层中，又能够将脂溶性药物分散于疏水基团夹层中。以脂质体作为紫杉醇药物载体，可以大幅提高紫杉醇的溶剂度，在增加药物疗效的同时，大幅度降低药物的不良反应。但脂质体性质的稳定性较差，在储存过程中易发生凝聚，融合并导致包封药物的泄露，长期保存比较困难。将药物做成脂质体凝胶剂，一方面脂质体凝胶剂作为脂质体，可以透过角质层达到真皮层，增加药物在皮肤的蓄积量，有利于药物在局部达到较高的药物浓度，提高了生物利用度，同时由于凝胶剂主要为局部吸收，进入血液循环比较少，可以大幅度减少药物的不良反应。将药物做成凝胶剂还可以降低磷脂双分子层的流动性，对脂质体有助悬作用并增加药物的稳定性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定性高、溶解性好、局部吸收好、生物利用度高的抗类风湿性关节炎药物凝胶剂。

本发明的另一目的是提供一种抗类风湿性关节炎药物凝胶剂的制备方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种含紫杉醇脂质体的抗类风湿性关节炎药物凝胶剂，包括主药与空白凝胶制备得到；所述的主药包括紫杉醇脂质体与盐酸利多卡因，其中紫杉醇脂质体和空白凝胶的质量体积比为5∶100～20∶100，(W/V)、盐酸利多卡和空白凝胶的质量体积比为1∶100～5∶100(W/V)；

以所述紫杉醇脂质体总重量为100.00％计，所述脂质体组成：紫杉醇0.50％～1.50％、磷脂15.00％～58.00％、胆固醇1.00％～8.00％、抗氧剂0.00％～2.50％、支持剂30.00％～70.00％；

以所述空白凝胶总重量为100％计，所述空白凝胶组成：基质材料0.50％～5.00％、保湿剂5.00％～25.00％、透皮促进剂0.00％～4.00％、防腐剂0.01％～1.00％、中和剂0.50％～5.00％，剩余为水。

所述的紫杉醇脂质体其制备方法包括如下步骤：首先将磷脂、紫杉醇、胆固醇和抗氧剂溶解到氯仿中，置于梨形瓶中，于旋转蒸发仪上45℃缓慢旋转减压蒸发，通入氮气除去机溶剂，使脂质薄膜状均匀分布于烧瓶上；将冻干支持剂溶液与膜充分混合水化30分钟，超声振荡，得到白色混悬液，用高压微射流纳米分散仪进行循环剪切处理，得紫杉醇纳米脂质体溶液。预冻，冷冻干燥得紫杉醇纳米脂质体干粉；

所述的磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵灵脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG花磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、神经鞘磷脂、二油酰磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、二肉豆蔻磷脂酰胆碱中的一种或多种混合物；

所述的抗氧剂为维生素E、维生素C、没食子酸丙酯、苹果酸、二叔丁基对甲酚、叔丁基对羟基茴香醚和β-胡萝卜素中的一种或多种混合物；

所述的支持剂为甘露醇、蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇中的一种或多种混合物；

所述进行紫杉醇脂质体分散的高压微射流纳米分散仪的功率为6-12Kpsi，压力为15K，循环次数3次。

本发明还公开了抗类风湿关节炎药物凝胶剂的制备方法，包括如下步骤：

称取处方量的凝胶基质，加入保湿剂和促透剂，乳钵中研磨细腻，加入少量蒸馏水，溶胀过夜；称取紫杉醇脂质体和盐酸利多卡因，用蒸馏水溶解稀释，摇匀，混合基质中，加入防腐剂，滴加中和剂调整pH为6.0-6.5，研磨均匀，即得凝胶。

其中所述的凝胶基质为卡波姆941、卡波姆940、卡波姆934、卡波姆U21、卡波姆U20、泊洛沙姆F127、泊洛沙姆F68中的一种或多种混合。

所述的透皮促进剂为月桂氮卓酮、二甲基亚砜、癸基甲基亚砜、十四烷基硫酸钠、丙二醇、甘油、聚乙二醇、薄荷油、薄荷脑、桉叶油、松节油、油酸、亚油酸、月桂醇、尿素、水杨酸、吡咯酮、樟脑、柠檬酸中的一种或多种混合。

所述的中和剂为三乙醇胺、碳酸钠、碳酸氢钠或氢氧化钠。

所述的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或硫代硫酸钠。

所述的防腐剂为山梨酸、羟丙丁酯、羟苯乙酯、苯甲酸、苯扎溴铵。

本发明根据循证医学要求，将治疗RA药物紫杉醇与利多卡因配伍，利用脂质体技术包裹紫杉醇提高生物利用度，并采用制成适合于患处定向使用凝胶剂。既针对RA的发病机理起治疗作用，又能迅速缓解RA患者的疼痛。为广大RA患者提供新的治疗途径。

附图说明

图1：凝胶剂透皮释药曲线；

图2：两种凝胶剂释放曲线对比图。

具体实施方式

实施例1：紫杉醇脂质体的制备：

处方：

工艺：将紫杉醇0.15g，大豆卵磷脂1.8g，胆固醇0.8g，维生素E适量按照一定比例溶解到氯仿中，置于梨形瓶中，于旋转蒸发仪上45℃缓慢旋转减压蒸发，通入氮气除去机溶剂，使脂质薄膜状均匀分布于烧瓶上。将蔗糖溶液20mL与膜充分混合水化30分钟，超声振荡，得到白色混悬液，用功率为9Kpsi的高压微射流纳米分散仪进行剪切4次处理得紫杉醇纳米脂质体溶液。预冻5h，冷冻干燥。

实施例2：紫杉醇脂质体的制备：

处方：

工艺：将紫杉醇0.1g，大豆卵磷脂5.7g，胆固醇0.5g，维生素E适量按照一定比例溶解到氯仿中，置于梨形瓶中，于旋转蒸发仪上45℃缓慢旋转减压蒸发，通入氮气除去机溶剂，使脂质薄膜状均匀分布于烧瓶上。将蔗糖溶液20mL与膜充分混合水化30分钟，超声振荡，得到白色混悬液，用功率为9Kpsi的高压微射流纳米分散仪进行剪切4次处理得紫杉醇纳米脂质体溶液。预冻5h，冷冻干燥。

实施例3：紫杉醇脂质体的制备：

处方：

工艺：将紫杉醇0.06g，大豆卵磷脂4.5g，胆固醇0.5g，维生素E适量按照一定比例溶解到氯仿中，置于梨形瓶中，于旋转蒸发仪上45℃缓慢旋转减压蒸发，通入氮气除去机溶剂，使脂质薄膜状均匀分布于烧瓶上。将蔗糖溶液20mL与膜充分混合水化30分钟，超声振荡，得到白色混悬液，用功率为9Kpsi的高压微射流纳米分散仪进行剪切4次处理得紫杉醇纳米脂质体溶液。预冻5h，冷冻干燥。

实施例4：低剂量紫杉醇脂质体组合物凝胶剂制备

处方：

加适量纯化水至10mL

工艺：称取一定量的卡波姆0.30g，加入甘油0.5g和月桂氮酮0.3g，乳钵中研磨细腻，加入少量蒸馏水，溶胀过夜。称取紫杉醇脂质体0.05g和盐酸利多卡因各0.2g，用蒸馏水溶解稀释，摇匀，混合基质中，加入山梨酸0.03g，滴加三乙醇胺调整pH为6.0-6.5，研磨均匀，即得乳白色凝胶。

实施例5：中剂量紫杉醇脂质体组合物凝胶剂制备

处方：

加适量纯化水至10mL

工艺：称取一定量的泊洛沙姆F680.25g，加入吡咯烷酮0.80g和氮酮0.30g，乳钵中研磨细腻，加入少量蒸馏水，溶胀过夜。称取紫杉醇脂质体5.00g和盐酸利多卡因0.20g，用蒸馏水溶解稀释，摇匀，混合基质中，加入苯甲酸0.10g，滴加碳酸钠调整pH为6.0-6.5，研磨均匀，即得乳白色凝胶。

实施例6：高剂量紫杉醇脂质体组合物凝胶剂制备

处方：

加适量纯化水至10mL

工艺：称取一定量的羟丙基甲基纤维素0.50g，加入聚乙二醇2.50g和二甲基亚砜0.40g，乳钵中研磨细腻，加入少量蒸馏水，溶胀过夜。称取紫杉醇脂质体8.00g和盐酸利多卡因0.20g，用蒸馏水溶解稀释，摇匀，混合基质中，加入羟苯乙酯0.05g，滴加碳酸氢钠调整pH为6.0-6.5，研磨均匀，即得乳白色凝胶。

实施例：7：不同高压微射流纳米分散仪功率对紫杉醇脂质体质量的影响

1、脂质体质量的检测

1)脂质体包封率的测定

精密移取脂质体混悬液0.1ml，置于1ml容量瓶中。加入2％的曲拉酮乙醇溶液0.2ml进行充分破乳，以无水乙醇定容至刻度，HPLC测定，得到脂质体溶液中药物的总含量。另精密移取0.1mL的脂质体溶液于锥形离心管中，用pH7.4的磷酸盐缓冲液稀释至1.1mL，混均后在1000r/min的转速下离心10min，尽可能沉淀未被包封的紫杉醇结晶聚集体。然后，取1.0mL的脂质体上清液经磷酸盐缓冲液稀释后在50000r/min下离心30min。移走上清液，用pH7.4的磷酸盐缓冲液洗两次。在最后离心所得脂质体沉淀中加入2％的曲拉酮乙醇溶液，震荡，使紫杉醇脂质体充分破乳，无水乙醇稀释至刻度，HPLC测定，确定脂质体包封的紫杉醇的量，按下列公式计算包封率。

2)形态与粒径及其分布测定

取少量紫杉醇脂室质体混悬液，室温条件下蒸馏水稀释20倍，，以激光纳米粒度仪测定紫杉醇脂质体混悬液的粒径(体积经)大小及粒径分布(自带软件分析)，以判别紫杉醇脂质体的质量。

2、不同高压微射流纳米分散仪功率对紫杉醇脂质体质量的影响

称取紫杉醇40mg，卵磷脂1.20g，胆固醇150mg，V_E7.5mg，制备紫杉醇脂质体40mL，在0Kpsi，6Kpsi，9Kpsi，12Kpsi，15K压力下循环3次，考察微射流纳米分散仪功率对包封率、粒径及分布的影响，确定最佳功率。

表1 高压微射流功率单因素考察

由表1得知，随着高压微射流纳米分散仪功率的增加，粒径由203nm逐渐减小到76nm，粒径分布逐渐降低，由0.449减小到0.239，但HPLC测得包封率逐渐降低。综合考虑，选取高压微射流纳米分散仪功率为9Kpsi。

实施例8：不同高压微射流纳米分散仪循环次数对紫杉醇脂质体质量的影响

根据前期制备经验及实施例7实验结果，固定高压微射流纳米分散仪功率为9Ksi，紫杉醇60mg，卵磷脂1.80g，胆固醇225mg，V_E11.25mg，制备紫杉醇脂质体60mL，设定高压微射流纳米分散仪分别循环0、1、2、3、4、5次，考察不同循环次数对包封率、粒径及分布的影响，确定最佳循环次数。

表2 高压微射流循环次数单因素考察

由表2得知，随着高压微射流纳米分散仪循环次数的增加，紫杉醇脂质体粒径逐渐变小，由234nm逐渐减小到90.3nm，粒径分布逐渐降低，由0.374减小到0.277，包封率也随着循环次数的升高逐渐降低。综合考虑，选取高压微射流纳米分散仪的循环次数为4次。

实施例9：不同磷脂浓度对紫杉醇脂质体质量的影响

考察不同浓度磷脂用量对紫杉醇脂质体的影响。根据前期制备经验及实验结果，固定高压微射流纳米分散仪功率为9Ksi，高压微射流纳米分散仪的循环次数为4次，设定磷脂浓度分别为1％，2％，3％，4％，5％，紫杉醇和磷脂比为1∶30，胆固醇和磷脂比为1∶8，VE用量是卵磷脂用量的0.6％，Vc为0.125％。根据不同浓度磷脂对脂质体包封率、粒径及粒径分布的影响，确定最佳磷脂用量。

表3 磷脂用量的单因素考察

由表3得知，随着磷脂浓度增加，紫杉醇脂质体粒径逐渐变大，由89.4nm逐渐增加到135nm，粒径分布也呈逐渐趋势，由0.358减小到0.248，包封率也随着磷脂浓度的升高变大，由58.1％增加到62.8％。综合考虑，磷脂浓度为3％为最好。

实施例10：不同药脂比对紫杉醇脂质体质量的影响

考察药物浓度与磷脂的质量比对紫杉醇脂质体制备的影响。根据前期实验结果，固定高压微射流纳米分散仪功率为9Ksi，高压微射流纳米分散仪的循环次数为4次，卵磷脂浓度为3％，胆固醇和磷脂比为1∶8，V_E用量是卵磷脂用量的0.6％，Vc为0.125％。设定紫杉醇和磷脂分别为比为1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50，根据不同浓度紫杉醇对脂质体包封率、粒径及粒径分布的影响，确定最佳药物浓度。

表4 药脂比的单因素考察

由表4得知，随着磷脂与紫杉醇药物与之比逐渐增加，紫杉醇脂质体粒径先降低后增加，磷脂与紫杉醇药物之比为20∶1时，粒径最小，磷脂与紫杉醇药物之比为30∶1时，包封率最大，为70.9％，除10∶1组包封率较低，其他组比较接近，在67％到69％之间。综合分析，磷脂与紫杉醇药物与之比为30∶1为最优。

实施例11：不同胆固醇用量对紫杉醇脂质体质量的影响

考察药物浓度与磷脂用量对紫杉醇脂质体制备的影响。根据前期实验结果，固定高压微射流纳米分散仪功率为9Ksi，高压微射流纳米分散仪的循环次数为4次，卵磷脂浓度为3％，V_E用量是卵磷脂用量的0.6％，Vc为0.125％。设定卵磷脂与胆固醇之比分别为16∶1、10∶1、8∶1、6∶1、每批次制备35毫升，根据不同比例的胆固醇对脂质体包封率、粒径及粒径分布的影响，确定最佳磷脂与胆固醇之比。

表5 胆固醇用量的单因素考察

由表5得知，随着磷脂与胆固醇比例的降低，紫杉醇脂质体粒径先降低后增加，卵磷脂与胆固醇之比为8∶1时，粒径最小，为89.2nm，随着磷脂与胆固醇比例的降低，药物紫杉醇的包封率逐渐降低，磷脂与胆固醇之比为16∶1时，包封率最大，为80.8％，综合分析，卵磷脂与胆固醇与之比为10∶1为最优。

实施例12：不同维生素E用量对紫杉醇脂质体质量的影响

考察不同浓度维生素E用量对紫杉醇脂质体的影响。根据前部分实验结果，固定高压微射流纳米分散仪功率为9Ksi，高压微射流纳米分散仪的循环次数为4次，卵磷脂浓度为3％，紫杉醇和磷脂比为1∶30，胆固醇和磷脂比为1∶10，Vc为0.125％，磷酸盐缓冲液PH值为6.5。设定V_E用量分别为是卵磷脂用量的0％，0.3％，0.6％，1.2％，2.4％。根据不同浓度的维生素E用量对脂质体包封率、粒径及粒径分布的影响，确定最佳维生素E用量。

表6 维生素E用量的单因素考察

由表6得知，随着维生素E浓度的升高，紫杉醇脂质体粒径，粒径分布还有包封率并无明显规律。考虑到维生素E在脂质体混悬液中主要起抗氧化作用，可能与脂质体的稳定性有关，因此维生素E的含量对紫杉醇脂质体粒径和包封率无明显影响。根据实验结果，维生素E与卵磷脂质量比为0.6％时，包封率最高。综合分析，V_E用量是卵磷脂用量的0.6％为最佳。

实施例13：不同冻干支持剂对紫杉醇脂质体包封率的影响

考察不同冻干支持剂配比对紫杉醇脂质体的影响。根据前部分实验结果，固定高压微射流纳米分散仪功率为9Ksi，高压微射流纳米分散仪的循环次数为4次，卵磷脂浓度为2％，紫杉醇和磷脂比为1∶30，胆固醇和磷脂比为1∶10，V_E用量是卵磷脂用量的0.6％。设定三组冻干支持剂分别为甘露醇(糖酯比为1.5)、蔗糖(糖酯比为2.5)、甘露醇海藻糖组合(糖酯比为1.5和1.0)。制备脂质体混悬液后预冻及干燥工艺相同，复溶后，根据不同冻干支持剂种类对脂质体包封率、粒径及粒径分布的影响，确定最佳冻干支持剂种类。

表7 冻干支持剂种类的单因素考察

由表7得知，脂质体混悬液冻干复溶后其包封率普遍下降到60％左右，几种冻干剂并无显著性差异。但其粒径及粒径分布在冻干前后变化较大，测定粒径时明显出现两组宽峰，一组平均粒径在100nm以下，一组在1000～2000之间，100nm粒径以下所占比例有显著性差别，这可能与不同冻干制剂的冻干保护机制有关，实验结果均不非常理想，综合分析，选取蔗糖为最佳冻干保护剂。

实施例14：不同凝胶基质的选择

1、卡波姆为基质

称取0.1g卡波姆洒到0.5g甘油表面，充分湿润后加入蒸馏水5mL溶解，溶胀过夜，滴加蒸馏水至10g，搅匀，滴加三乙胺调整pH为6.0～6.5，观察凝胶的形态，制备的凝胶均匀细腻、透明、气泡少、黏度适中，涂展性良好。

2、明胶为基质

称取0.1g明胶加入蒸馏水5mL充分溶胀，缓慢搅拌，加入0.5g甘油和适量蒸馏水至10g，搅匀，滴加三乙胺调整pH为6.0～6.5，搅拌均匀后形成的凝胶为透明、微黄色。流动性较小、不易涂抹均匀。

3、聚乙烯醇为基质

称取羧甲基纤维素钠0.1g，分散于蒸馏水10mL表面，充分溶胀后，浴加热至80℃使其完全溶解，加入加入0.5g甘油和适量蒸馏水至10g。室温下放冷，缓慢搅拌并滴加三乙胺调整pH为6.0～6.5即得，观察凝胶的形态。形成的凝胶黏度适中，但流动性较大，不适宜关节涂抹。

4、羟丙基甲基纤维素为基质

称取羟丙基甲基纤维素0.1g，分散于80℃10mL蒸馏水中，逐渐冷却至室温，加入0.5g甘油缓慢搅拌均匀，静置过夜。得到的凝胶无色无味、均匀、透明、细腻，但凝胶凝胶的黏度不高，不适宜关节涂抹。

根据以上实验结果确定最佳基质确定为卡波姆。

实施例15：紫杉醇脂质体组合物凝胶体外透皮实验考察最优处方

根据实施例9确定脂质体凝胶基质为卡波姆。在此基础上采用正交试验对凝胶处方进行优化，卡波姆划分为1％、3％、5％三个水平，甘油划分为5％、15％、25％三个水平，透皮渗透剂分别为3％薄荷油、3％氮酮、桉叶油。制成凝胶后，以48h累积透过量Q(μg·cm^-2)为考察指标，确定最佳处方工艺，各因素水平见表8。

表8 正交实验因素水平表

1、离体皮肤的制备

取昆明种小鼠(SPF)，用Veet脱毛膏除去背部毛，用水洗净，24小时后断颈处死，立即剥离背部皮肤，去除脂肪及皮下组织，用生理盐水洗净，-20℃冰箱保存。

2、体外透皮实验

从冰箱中取出将处理好的小鼠颈背皮，放到37℃生理盐水中解冻。将鼠皮剪成适当大小(半径1cm的圆形)。将剪好的鼠皮固定在Franz扩散池处，角质层面向供给池。供给池内加入凝胶，接收池都充满接收液(生理盐水)，并保证接收液与处理好的大鼠皮充分接触，无气泡。设置水浴温度为37℃，磁力搅拌为300r/min，于1、2、4、6、8、10、24、48h取出接收室中全部接收液，同时补加等体积的空白吸收液。HPLC测定紫杉醇的峰面积，计算累计透过量Q(μg·cm^-2)。

表9 正交实验结果

正交实验结果表明5号结果最好，这种实验条件下，累积透过量Q可以达到490.51μg·cm^-2。从极差角度分析，保湿剂影响因素最大，其次为透促进剂，最小为基质，极差角度分析最优组合为A₂B₁C₃，即卡波姆3％，甘油5％，透皮渗透剂3％氮酮。在此条件下进行验证，重复三次，累积透过量Q分别为445.26μg·cm^-2、451.18μg·cm^-2、455.12μg·cm^-2。采样各时间点t取平均值(如表10)，以Origin软件进行拟合，得到凝胶剂透皮释药曲线如图1，渗透动力学符合一级动力学方程，即紫杉醇脂质体凝胶剂：

ln(1-Q/484.31819)＝0.06114t R²＝0.9925

表10 最佳工艺组合物凝胶剂透皮释放度

实施例16：紫杉醇脂质体组合物凝胶剂与紫杉醇凝胶剂透皮释药对比

1、紫杉醇凝胶剂的制备

称取一定量的卡波姆3.0g，加入甘油5.0g和月桂氮酮3.0g，乳钵中研磨细腻，加入少量蒸馏水，溶胀过夜。称取紫杉醇10g和盐酸利多卡因2.0g，用蒸馏水溶解稀释100mL，摇匀，混合基质中，加入山梨酸0.3g，滴加三乙胺调整pH为6.0-6.5，研磨均匀，即得乳白色凝胶。

2、体外透皮实验参照实施例15方法进行两种凝胶剂的透皮释药试验，并以取样时间t所测的累计透过量平均值作透皮释放曲线进行对比。紫杉醇凝胶剂经10h后累积透过量基本达到稳态，而组合物凝胶剂经10h后紫杉醇依旧持续释放，渗透动力学符合一级动力学方程。表明组合物凝胶剂紫杉醇透皮释放度明显优于紫杉醇凝胶剂。如表11、图2。

表11 两种凝胶剂透皮释放度

实施例17：紫杉醇脂质体组合物凝胶剂对关节炎的实验治疗作用

3.1凝胶对角叉菜胶致大鼠足爪肿胀的影响

取SD大鼠30只，♂，体重180～220g，随机分为3组，每组10只。第1组为模型动物对照组，第2组为组合物脂质体凝胶组(2.5mg/kg)，第3组为紫杉醇脂质体凝胶组(2.5mg/kg)。采取涂布给药的的方法，每天给药一次，连续给药三天。给药后1h将大鼠后肢拉直，局部消毒，足趾腱膜皮下注入1％角叉菜胶0.1ml致炎，分别于致炎前和致炎后1h、2h、3h、4h、5h用游标卡尺测模型大鼠足爪肿胀厚度。表12中显示，给药组均能显著性抑制模型大鼠足爪肿胀，其中3h时，组合物组与对照组相比，均具有显著性差异(P＜0.05)；4h时紫杉醇脂质体与对照组相比，具有显著性差异(P＜0.05)。紫杉醇脂质体凝胶组对模型大鼠足爪肿胀也呈现了一定的抑制作用，但5h后作用不显著。所以组合物凝胶比紫杉醇脂质体凝胶作用时间快，且作用时效性更长，抑制足爪肿胀效果更为强烈。

表12 角叉菜胶致大鼠足爪肿胀实验结果

注：与对照组比较，^☆P＜0.05

3.2组合物凝胶对小鼠甲醛测痛试验的抑制作用

取ICR小鼠30只，♂，随机分为3组，每组10只。第1组为模型动物对照组，第2组为组合物凝胶组(2.5mg/kg)，第3组为紫杉醇凝胶组(2.5mg/kg)。每天给药一次，连续给药三天，给药后1h在小鼠标记爪足底侧皮下注射5％甲醛溶液50μL，立即将小鼠放到玻璃箱中，分别用秒表记录小鼠10-30min，30-60min内两个时相舔足次数。表13实验结果显示，给药组与对照组比较，均具有显著性镇痛效果(P＜0.05)，组合物组较紫杉醇组舔足次数更少，具有显著性差异(P＜0.05)。

表13 小鼠甲醛测痛试验结果

注：与对照组比较，^☆P＜0.05。与紫杉醇脂质体对比，^◆P＜0.05。

Claims (7)

1.一种含紫杉醇脂质体的抗类风湿性关节炎药物凝胶剂，其特征在于包括主药与空白凝胶制备得到；所述的主药包括紫杉醇脂质体与盐酸利多卡因，其中紫杉醇脂质体和空白凝胶的质量体积比为5∶100～20∶100，(W/V)、盐酸利多卡和空白凝胶的质量体积比为1∶100～5∶100(W/V)；

以所述紫杉醇脂质体总重量为100.00％计，所述脂质体组成：紫杉醇0.50％～1.50％、磷脂15.00％～58.00％、胆固醇1.00％～8.00％、抗氧剂0.00％～2.50％、支持剂30.00％～70.00％；

以所述空白凝胶总重量为100％计，所述空白凝胶组成：基质材料0.50％～5.00％、保湿剂5.00％～25.00％、透皮促进剂0.00％～4.00％、防腐剂0.01％～1.00％、中和剂0.50％～5.00％，剩余为水。

2.根据权利要求1所述的抗类风湿关节炎药物凝胶剂，其特征在于所述的紫杉醇脂质体其制备方法包括如下步骤：首先将磷脂、紫杉醇、胆固醇和抗氧剂溶解到氯仿中，置于梨形瓶中，于旋转蒸发仪上45℃缓慢旋转减压蒸发，通入氮气除去机溶剂，使脂质薄膜状均匀分布于烧瓶上；将冻干支持剂溶液与膜充分混合水化30分钟，超声振荡，得到白色混悬液，用高压微射流纳米分散仪进行循环剪切处理，得紫杉醇纳米脂质体溶液。预冻，冷冻干燥得紫杉醇纳米脂质体干粉；

所述的磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵灵脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG花磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、神经鞘磷脂、二油酰磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、二肉豆蔻磷脂酰胆碱中的一种或多种混合物；

所述的抗氧剂为维生素E、维生素C、没食子酸丙酯、苹果酸、二叔丁基对甲酚、叔丁基对羟基茴香醚和β-胡萝卜素中的一种或多种混合物；

所述的支持剂为甘露醇、蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇中的一种或多种混合物；

所述进行紫杉醇脂质体分散的高压微射流纳米分散仪的功率为6-12Kpsi，压力为15K，循环次数3次。

3.权利要求1所述的抗类风湿关节炎药物凝胶剂，其特征在于所述的基质材料为卡波姆941、卡波姆940、卡波姆934、卡波姆U21、卡波姆U20、泊洛沙姆F127、泊洛沙姆F68中的一种或多种混合。

4.根据权利要求1所述的抗类风湿关节炎药物凝胶剂，其特征在于所述的透皮促进剂为月桂氮卓酮、二甲基亚砜、癸基甲基亚砜、十四烷基硫酸钠、丙二醇、甘油、聚乙二醇、薄荷油、薄荷脑、桉叶油、松节油、油酸、亚油酸、月桂醇、尿素、水杨酸、吡咯酮、樟脑、柠檬酸中的一种或多种混合。

5.根据权利要求1所述的抗类风湿关节炎药物凝胶剂，其特征在于所述的中和剂为三乙醇胺、碳酸钠、碳酸氢钠或氢氧化钠。

6.根据权利要求1所述的抗类风湿关节炎药物凝胶剂，其特征在于所述的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或硫代硫酸钠。

7.根据权利要求1～6所述的抗类风湿关节炎药物凝胶剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

称取处方量的凝胶基质，加入保湿剂和促透剂，乳钵中研磨细腻，加入少量蒸馏水，溶胀过夜；称取紫杉醇脂质体和盐酸利多卡因，用蒸馏水溶解稀释，摇匀，混合基质中，加入防腐剂，滴加中和剂调整pH为6.0-6.5，研磨均匀，即得凝胶。