CN102112602A - 包含脂肪酶的洗涤剂组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供包含脂解酶变体的洗涤剂组合物，所述变体具有改善的洗涤剂内稳定性。具有改善的洗涤剂内稳定性的脂解酶变体通过在亲本脂解酶中取代某些指定的氨基酸残基来获得。

Description

包含脂肪酶的洗涤剂组合物
发明领域
本发明涉及具有改善的洗涤剂内稳定性的脂解酶变体以及它们的制备方法。它尤其涉及疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)脂肪酶的脂解酶变体。
发明背景
已知使用真菌脂解酶例如来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)(别名：嗜热羊毛状腐质霉(Humicola lanuginosa))的脂肪酶用于多种工业目的，例如改善洗涤剂的效率。因此，将来源于疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)(别名：嗜热羊毛状腐质霉(Humicola lanuginosa)，EP 258 068和EP 305 216)的脂肪酶以商品名Lipolase
Figure BPA00001211592700011
(Novozymes A/S的产品)销售用于去污剂。WO 0060063描述了疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)脂肪酶的变体，它在洗涤剂溶液中具有特别好的一次洗净性能。除了使用脂肪酶作为洗涤剂酶以除去衣服和其他纺织物上的脂质或脂肪污渍外，它们还可用作生面团的添加剂来用于面包和其他焙烤产品，以及用于消除纸浆和纸生产中的树脂问题。在一些应用中，具有改善的热稳定性的脂解酶是所期望的(EP 374700、WO 9213130)，然而在其他应用中洗涤剂内稳定性是所期望的。WO 92/05249、WO 92/19726和WO 97/07202公开了疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(嗜热羊毛状腐质霉(H.lanuginosa))脂肪酶的变体。
发明概述
在第一方面，本发明涉及包含亲本脂解酶的洗涤剂组合物，其中所述变体：(a)具有与亲本脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列，所述氨基酸残基取代对应于SEQ ID NO：2的任何以下氨基酸：27、216、227、231、233和256；以及(b)任选地比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
在另一方面，本发明涉及将组合物用于水解羧酸酯或酯的水解、合成或酯交换。
在另一方面，本发明涉及将脂解酶变体用于制造在洗涤剂内稳定的制剂。
附图简述
图1显示脂肪酶的比对。
序列表
SEQ ID NO：1显示编码来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)的脂肪酶的DNA序列。
SEQ ID NO：2显示来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：3显示来自犁头霉属(Absidia reflexa)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：4显示来自伞状犁头霉(Absidia corymbifera)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：5显示来自米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：6显示来自米根霉(Rhizopus oryzae)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：7显示来自曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：8显示来自塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：9显示来自尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporrum)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：10显示来自异孢镰孢菌(Fusarium heterosporum)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：11显示来自米曲霉(Aspergillus oryzae)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：12显示来自沙门柏干酪青霉(Penicillium camemberti)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：13显示来自臭曲霉(Aspergillus foetidus)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：14显示来自曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：15显示来自米曲霉(Aspergillus oryzae)的脂肪酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：16显示来自Landerina penisapora的脂肪酶的氨基酸序列。
发明详述
氨基酸修改形式的命名
根据本发明描述脂肪酶变体时，使用以下命名法以便于参考：
初始氨基酸：位置：取代氨基酸
根据该命名法，例如在位点195上将谷氨酸取代成甘氨酸以G195E表示。在相同位点上去除甘氨酸以G195*表示，***附加氨基酸残基如赖氨酸以G195GK表示。其中特异性脂肪酶与其他脂肪酶相比包含“缺失”并且在同样位点***一个氨基酸用*36D表示，指在位点36***一个天冬氨酸。
多个突变用加号分开，即：R170Y+G195E，代表在位点170和195上分别用精氨酸和甘氨酸取代酪氨酸和谷氨酸的突变。
当施加所述的比对方法时，X231指示在亲本脂解酶中对应于位点231的氨基酸。X231R指示氨基酸被R取代。就SEQ ID NO：2而言，X是T，因此X231R指示R在位点231取代T。其中在一个位点(例如231)的氨基酸可被另一个选自一组氨基酸的氨基酸取代，例如所述组由R和P和Y组成，这将用X231R/P/Y表示。
在所有情况下，使用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
同一性：如本文所用，术语“同一性”指两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性，这种相关性用参数“同一性”描述。
就本发明的目的而言，两个氨基酸序列的比对通过来自EMBOSS软件包(http://emboss.org)，版本2.8.0的Needle程序进行测定。Needle程序执行全序列比对算法，如Needleman，S.B.和Wunsch，C.D.(1970)J.Mol.Biol.48，443-453所述。使用的取代矩阵是BLOSUM62，空位开放罚分是10，空位延伸罚分是0.5。
本发明的一个氨基酸序列(“发明序列”；例如SEQ ID NO：2的氨基酸1至269)和一个不同氨基酸序列(“外源序列”)之间的同一性程度以两个序列的比对中的精确匹配数除以“发明序列”的长度或“外源序列”的长度来计算，无论其中哪一个序列是最短的。结果表示为同一性百分比。
当“发明序列”和“外源序列”在重叠的相同位点具有相同氨基酸残基时发生精确匹配。序列长度是该序列的氨基酸数目(例如SEQ ID NO：2的长度是269)。
可使用上述方法计算同一性以及同源性并用于比对。在本发明的上下文中已经如下所述计算同源性和比对。
同源性和比对
就本发明的目的而言，同源性程度可通过本领域已知的计算机程序进行合适的测定，例如GCG程序软件包提供的GAP(Program Manual for the Wisconsin Package，第8版，1994年8月，Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711)(Needleman，S.B.和Wunsch，C.D.，(1970)，Journal of Molecular Biology，48，443-45)，使用GAP以及以下设置进行多肽序列比对：GAP产生罚分为3.0，并且GAP延伸罚分为0.1。
在本发明中，在犁头霉属(Absidia reflexa)、伞状犁头霉(Absidia corymbefera)、米黑根毛霉(Rhizmucor miehei)、德氏根霉(rhizopus delemar)、曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)、塔宾曲霉(Aspergillus tubigensis)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、异孢镰孢菌(Fusarium heterosporum)、米曲霉(Aspergillus oryzea)、沙门柏干酪青霉(Penicilium camembertii)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)、疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)(别名：Humicola lanuginose)和Landerina penisapora的脂肪酶序列中的相应(或同源)位点通过图1所示的比对进行限定。
为了发现比对中不显示的脂肪酶序列中的同源位点，受关注的序列与图1中显示的序列进行比对。使用对GAP程序中存在的大多数同源序列进行的GAP比对将新序列与图1中的本比对进行比对。在GCG程序软件包中提供了GAP(Program Manual for the Wisconsin Package，第8版，1994年8月，Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711)(Needleman，S.B.和Wunsch，C.D.，(1970)，Journal of Molecular Biology，48，443-45)。多肽序列比对使用以下设置：GAP产生罚分为3.0，并且GAP延伸罚分为0.1。
亲本脂肪酶
可将任何适用的脂解酶用作亲本脂解酶，也称为亲本脂肪酶。在一些实施方案中脂解酶可为真菌脂解酶。
脂解酶可为酵母脂解酶，它来源于以下菌属：例如假丝酵母属(Candida)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、糖酵母属(Saccharomyces)、粟酒裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、或耶氏酵母属(Yarrowia)；或者更优选地为丝状真菌脂解酶，它来源于以下菌属：如顶孢霉菌属(Acremonium)、曲霉属(Aspergillus)、出芽短梗霉属(Aureobasidium)、隐球酵母属(Cryptococcus)、线黑粉酵母属(Filobasidium)、镰孢菌属(Fusarium)、特异腐质霉属(Humicola)、稻瘟病菌属(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、瘤胃真菌属(Neocallimastix)、脉孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、厌气性瘤胃真菌属(Piromyces)、裂褶菌属(Schizophyllum)、踝节菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、草根霉属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、嗜热真菌属(Thermomyces)或木霉属(Trichoderma)。
此外脂解酶可为卡尔斯伯酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁维酵母(Saccharomyces kluyveri)、奇异酵母(Saccharomyces norbensis)、或卵形酵母(Saccharomyces oviformis)脂解酶。
作为另外一种选择，所述脂解酶是棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、塔宾曲霉(Aspergillus turbigensis)、拟杆镰孢菌(Fusarium bactridioides)、蜀黍专化型镰孢菌(Fusarium cerealis)、克地镰孢菌(Fusarium crookwellense)、黄色镰孢菌(Fusarium culmorum)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminum)、异孢镰孢菌(Fusarium heterosporum)、Fusarium negundi、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、多枝镰孢菌(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢菌(Fusarium roseum)、接骨木镰孢菌(Fusarium sambucinum)、Fusarium sarcochroum、茄病镰孢菌(Fusarium sporotrichioides)、硫色镰孢菌(Fusarium sulphureum)、簇囊镰孢菌(Fusarium torulosum)、类丝孢镰孢菌(Fusarium trichothecioides)、镰孢霉(Fusarium venenatum)、特异腐质霉(Humicola insolens)、疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)(别名：Humicola lanuginose)、米黑毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝菌(Myceliophthora thermophila)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、绿色木霉(Trichoderma viride)脂解酶。
在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体，它是嗜热真菌属(Thermomyces)脂肪酶或疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)脂肪酶。
在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体，其中所述变体与SEQ ID NO：2具有至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。
脂解酶变体中的改变具有改善的洗涤剂内稳定性。
下文涉及的位点是SEQ ID NO：2。使段落“同源性和比对”中描述了如何寻找在不同脂肪酶中的氨基酸残基的对应或同源位点的方法。
根据本发明，已经令人惊讶地发现，脂解酶变体、脂解变体、或短的变体比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。将洗涤剂内的稳定性定义为在存在的洗涤剂内保留脂解酶/脂肪酶活性的质量。可全部或部分保留脂肪酶活性。因此，本发明的变体与它们从其中衍生出的亲本脂肪酶相比，显示在存在的洗涤剂中改善的全部或部分保留它们的脂肪酶活性的能力。
如本文所用，术语“脂肪酶活性”指羧酸酯水解酶活性，该酶催化三酰基甘油的水解，形成二酰基甘油和羧酸酯。就本发明目的而言，脂肪酶活性按照以下方法测定：使用***树胶作为乳化剂，通过乳化甘油三丁酸酯(glycerin tributyrate)制备脂肪酶的底物。在30℃，pH 7或9条件下水解甘油三丁酸酯，随后在pH自动恒定器中进行滴定实验。将一单位脂肪酶活性(1LU)定义为在30℃，pH7条件下能够每分钟释放1微摩尔丁酸的酶量。
在一些实施方案中如本发明所述的变体已经与基准酶进行了比较。如本文所用，术语“基准酶”或“基准脂肪酶”指具有取代的SEQ ID NO：2，除非另外指明，所述取代为T231R+N233R。
在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体，其中所述变体：(a)具有与亲本脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列，所述氨基酸残基取代对应于SEQ ID NO：2的任何以下氨基酸：27、216、227、231、233和256；以及(b)比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶变体，其中所述变体：(a)包含氨基酸残基231和233，并且具有与亲本脂解酶相比包含有至少一个氨基酸残基取代的氨基酸序列，所述氨基酸残基取代对应于SEQ ID NO：2的任何以下氨基酸：27、216、227和256；以及(b)比亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
在一些实施方案中本发明涉及亲本脂解酶的变体，其中所述变体在位点231+233以及其中一个以下位点具有氨基酸改变：(a)27；(b)216；或者(c)256；任选地所述变体还包含227；该位点对应于SEQ ID NO：2。
在一些实施方案中本发明涉及变体，其中所述氨基酸残基的取代是SEQ ID NO：2的27R、216P、227G、231R、233R或256K中的一个。
在一些实施方案中本发明涉及变体，其中所述氨基酸残基的取代是SEQ ID NO：2的D27R、S216P、L227G、T231R、N233R或P256K的一个。
在一些实施方案中本发明涉及变体，其中变体包含的取代选自由下列组成的组：(a)T231R+N233R+P256K；(b)L227G+T231R+N233R；(c)L227G+T231R+N233R+P256K；(d)D27R+T231R+N233R；(e)D27R+L227G+T231R+N233R；和(f)S216P+T231R+N233R。
在一些实施方案中本发明涉及脂解酶变体，其中所述亲本脂解酶与SEQ ID NO：2至少50％，至少60％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％的同一性。
在一些实施方案中本发明涉及变体，其中所述亲本脂解酶是由疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)DSM 4109制备的脂肪酶，并且具有SEQ ID.NO：2的氨基酸序列。
在一些实施方案中本发明涉及变体，其中所述洗涤剂是液体洗涤剂。
表1：可在脂解酶变体中包含的改变
Figure BPA00001211592700091
在一些实施方案中本发明涉及包含脂解酶变体的制剂。
在一些实施方案中本发明涉及制剂，其中所述制剂可为液体制剂。
多核苷酸、表达载体、宿主细胞、脂解酶变体的制备。
在一些实施方案中，本发明涉及编码脂解酶变体的分离的多核苷酸。多核苷酸可在非常低的严格条件下，优选低严格条件下，更优选中严格条件下，更优选中-高严格条件下，甚至更优选高严格条件下，最优选非常高的严格条件下与以下序列杂交：(i)SEQ ID NO：1的核苷酸178至660，(ii)SEQ ID NO：1的核苷酸178至660包含的cDNA序列，(iii)(i)或(ii)的亚序列，或者(iv)(i)、(ii)、或(iii)的互补链(J.Sambrook、E.F.Fritsch、和T.Maniatis，1989，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor，New York)。SEQ ID NO：1的亚序列包含至少100个邻接核苷酸或者优选地至少200个邻接核苷酸。此外该亚序列可编码具有脂肪酶活性的多肽片段。
就长度为至少100个核苷酸的长探针而言，将非常低至非常高的严格条件规定为在标准Southern印迹程序后最优12至24小时，在42℃下，在5X SSPE，0.3％SDS，200ug/mL剪切的和变性的鲑精DNA，以及25％的甲酰胺(用于非常低和低严格条件)、35％的甲酰胺(用于中和中-高严格条件)、或者50％的甲酰胺(用于高和非常高的严格条件)中预杂交和杂交。
就长度为至少100个核苷酸的长探针而言，载体材料最终洗涤三次，每次15分钟，使用2X SSC，0.2％SDS，优选至少在45℃(非常低的严格条件)，更优选至少在50℃(低严格条件)，更优选至少在55℃(中严格条件)，更优选至少在60℃(中-高严格条件)，甚至更优选至少在65℃(高严格条件)，最优选至少在70℃(非常高的严格条件)。
可通过本领域已知的方法获取编码脂解酶变体的分离的多核苷酸、包含所述多核苷酸的核酸构建体、包含所述核酸构建体的重组表达载体、和包含所述核酸构建体或所述重组表达载体的转化宿主细胞。
获取洗涤剂内稳定脂解酶变体的程序
脂解酶变体可用本领域已知的方法获取，例如定点诱变、随机诱变或局部诱变，例如如WO 9522615或WO 0032758所述的方法。给定亲本脂解酶在洗涤剂内稳定的变体可用下述标准程序获取：
诱变(易错的、掺入的oligo，加标的oligo)
初级筛选
鉴定在洗涤剂内较稳定的突变体
保存(甘油培养，LB-Amp平板，小量制备)
划线接种到另一个分析平板上-次级筛选(比初级筛选高1度)
DNA测序
转化到宿主细胞中，例如曲霉属
以100mL的规模培养，纯化，DSC
在一些实施方案中，本发明涉及制备脂解酶变体的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在诱导产生脂解酶变体的条件下培养包含所述核酸构建体或包含所述核酸构建体的重组表达载体的转化宿主细胞；以及(b)回收脂解酶变体。该方法可根据本领域已知的原则实施。
在一些实施方案中本发明涉及生产所述变体的方法，所述方法包括以下步骤：(a)选择亲本脂解酶；(b)在亲本脂解酶中取代至少一个氨基酸残基，所述氨基酸残基对应于SEQ ID NO：2的任何以下氨基酸：27、216、227、231、233和256；(c)任选地改变除(b)中提到的氨基酸之外的一个或多个氨基酸；(d)制备由步骤(a)-(c)产生的变体；(e)测试所述变体在洗涤剂内的稳定性；(f)选择具有提高的洗涤剂内稳定性的变体；以及(g)生产所述选择变体。
使用
如本发明所述的变体可类似于亲本脂解酶使用，并且就一些目的而言该变体可由于它们改善的洗涤剂内稳定性而是优选的。因此在一些实施方案中，本发明涉及将所述变体用于水解羧酸酯或酯的水解、合成或酯交换。
在一些实施方案中，本发明涉及使用所述变体制造洗涤剂内的稳定制剂。
组合物
所述组合物优选地富含本发明权利要求中定义的多肽。术语“富含”指示组合物的脂肪酶活性已经被提高了，例如浓缩因子为1.1。
所述组合物可包含本发明的多肽作为主要酶组分，例如单组分组合物。作为另外一种选择，所述组合物可包含多种酶活性，例如氨基肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精葡萄糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳醣苷酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、卤素过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、或木聚糖酶。可生产附加的酶，例如通过属于以下属的微生物生产酶：曲霉属，优选棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、曲霉菌曲霉(Aspergillus niger)、或米曲霉(Aspergillus oryzae)；镰孢菌属，优选拟杆镰孢菌(Fusarium bactridioides)、蜀黍专化型镰孢菌(Fusarium cerealis)、克地镰孢菌(Fusarium crookwellense)、黄色镰孢菌(Fusarium culmorum)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminum)、异孢镰孢菌(Fusarium heterosporum)、Fusarium negundi、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、多枝镰孢菌(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢菌(Fusarium roseum)、接骨木镰孢菌(Fusarium sambucinum)、Fusarium sarcochroum、硫色镰孢菌(Fusarium sulphureum)、簇囊镰孢菌(Fusarium toruloseum)、类丝孢镰孢菌(Fusarium trichothecioides)、或镰孢霉(Fusarium venenatum)；腐质霉属，优选特异腐质霉(Humicola insolens)或嗜热羊毛状腐质霉(Humicola lanuginosa)；或者木霉属，优选哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、或绿色木霉(Trichoderma viride)。
所述组合物可根据本领域已知的方法制备，并且可为液体形式或干燥组合物形式。例如多肽组合物可为粒状或微粒状形式。所述组合物中将包括的多肽可根据本领域已知的方法稳定。
洗涤剂成分
组合物通常包含一种或多种洗涤剂成分。本文所用洗涤剂组合物包括制品和清洁和处理组合物。除非另外指明，如本文所用，术语“清洁和/或处理组合物”包括片剂、颗粒或粉末形式的多用途或“重垢型”洗涤剂，尤其是衣物洗涤剂；液体、凝胶或糊剂状的多功能洗涤剂，尤其是所谓的重垢型液体类型；液体精细织物洗涤剂；手洗餐具洗涤剂或轻垢型餐具洗涤剂，尤其是高起泡类型的那些；机洗餐具洗涤剂，包括各种用于家庭和公共机构用途的片剂、颗粒、液体和辅助漂洗型。组合物也可为单位剂量的包装，包括本领域已知的那些包装和水溶性的、水不溶性的和/或水可渗透的那些包装。
本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种本发明的脂肪酶变体。除了脂肪酶变体外，所述洗涤剂组合物还将进一步包含一种洗涤剂成分。下文所举例说明的洗涤剂成分的非限制性列表适用于即用的组合物，并且可期望将其结合到本发明的某些实施方案中，以例如有助于或提高处理待清洁基底的清洁性能，或在含香料、着色剂、染料等的情况下调节清洁组合物的美观性。这些附加组分的明确性质及它们的掺入量将取决于组合物的物理形式以及其应用的清洁操作的性质。合适的洗涤剂成分包括但不限于：表面活性剂、助洗剂、螯合剂、染料转移抑制剂、分散剂、酶和酶稳定剂、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预成形过酸、聚合分散剂、增白剂、抑泡剂、染料、抗腐蚀剂、晦暗抑制剂、香料、香料微胶囊、软化剂、载体、水溶助长剂、加工助剂、溶剂和/或颜料。
一般的洗涤剂将按重量计包含以下成分的任何组合：5-30％的表面活性剂，优选阴离子表面活性剂如直链烷基苯磺酸盐和脂肪醇乙氧基硫酸盐；0.005-0.1％的蛋白酶活性蛋白，其中蛋白酶优选地选自CoronaseTM、FNA、FN4或SavinaseTM，0.001-0.1％的淀粉酶活性蛋白，其中淀粉酶优选地选自TermamylTM NatalaseTM、StainzymeTM和PurastarTM以及0.1-3％的螯合剂，优选二亚乙基三胺五醋酸。就颗粒状和片剂产品而言，此类一般的洗涤剂还将按重量计包含：5-20％的漂白剂，优选过碳酸钠；1-4％的漂白活化剂，优选TAED和/或0-30％，优选5-30％，更优选小于10％的助洗剂，如硅铝酸盐沸石A和/或三聚磷酸盐。
漂白剂-本发明洗涤剂组合物可包括一种或多种漂白剂。
通常，当使用漂白剂时，本发明的组合物可包括按本主题清洁组合物的重量计约0.1％至约50％或甚至约0.1％至约25％的漂白剂。合适漂白剂的示例包括：
(1)过氧化氢源，例如无机过氢化合物盐，包括以下碱金属盐如钠盐：过硼酸盐(通常为一水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐以及它们的混合物。在本发明的一个方面，无机过氧化氢合物盐选自由下列物质组成的组：过硼酸钠盐、过碳酸钠盐以及它们的混合物。
(2)具有R-(C＝O)-L的漂白活化剂，其中R为烷基，任选支链烷基；当漂白活化剂是疏水的时，其具有6至14个碳原子或者8至12个碳原子，而当漂白活化剂是亲水的时，其具有小于6个碳原子或甚至小于4个碳原子；并且L为离去基团。合适的离去基团的实例为苯甲酸及其衍生物，尤其是苯磺酸盐。合适的漂白活化剂包括十二烷酰基羟基苯磺酸盐、癸酰基羟基苯磺酸盐、癸酰基羟苯甲酸及其盐、3，5，5-三甲基己酰基羟基苯磺酸盐、四乙酰基乙二胺(TAED)和壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)。合适的漂白活化剂还公开于WO 98/17767中。尽管可采用任何合适的漂白活化剂，但在本发明的一个方面，本主题清洁组合物可包含NOBS、TAED或它们的混合物。
(3)预成形的过酸。
如果存在的话，过酸和/或漂白活化剂通常以按所述组合物计约0.1％至约60重量％，约0.5％至约40重量％，或甚至约0.6％至约10重量％的含量存在于所述组合物中。一种或多种疏水前体可与一种或多种亲水过酸或其前体联合使用。
可选择过氧化氢源与过酸或漂白活化剂的量，使得可用氧(来自过氧化物源)与过酸的摩尔比为1∶1至35∶1，或甚至2∶1至10∶1。
表面活性剂-如本发明所述的洗涤剂组合物可包括表面活性剂或表面活性剂体系，其中所述表面活性剂可选自非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、两性离子表面活性剂、半极性非离子表面活性剂以及它们的混合物。如果存在的话，表面活性剂的通常含量按所述受试组合物的重量计为约0.1％至约60％，约0.1％至约40％，约0.1％至约12％，约1％至约50％或甚至约5％至约40％。
当被包括在洗涤剂中时，所述洗涤剂将通常包含约1％至约40％的阴离子表面活性剂如直链烷基苯磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)、脂肪醇乙氧基硫酸酯、仲烷基磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或烯基丁二酸或皂。
洗涤剂可任选地包含约0.2％至约40％的非离子表面活性剂如醇乙氧基化物、壬基苯酚乙氧基化物、烷基多苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸一乙醇酰胺、脂肪酸一乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的正酰基正烷基衍生物(“烷基葡糖酰胺”)。
助洗剂-本发明的洗涤剂组合物可包含一种或多种洗涤剂助剂或助洗剂体系。当使用助洗剂时，本主题组合物将通常包含按本主题组合物的重量计至少约1％，约5％至约60％或甚至约10％至约40％的助洗剂。
所述洗涤剂组合物可包含：(a)0重量％至10重量％，优选0重量％至5重量％的沸石助洗剂；(b)0重量％至10重量％，优选0重量％至5重量％的磷酸盐助洗剂；和(c)任选地0重量％至5重量％的硅酸盐。
助洗剂包括但不限于碱金属、多磷酸的铵盐和链烷醇铵盐、碱金属硅酸盐或层状硅酸盐、碱土和碱金属碳酸盐、硅铝酸盐助洗剂和多种碱金属、多元乙酸(如乙二胺四乙酸和氨三乙酸)的铵盐和取代铵盐，以及聚羧酸酯(如苯六甲酸、琥珀酸、柠檬酸、氧联二琥珀酸、多元马来酸、苯-1，3，5-三羧酸、羧甲基氧代琥珀酸)和它们的可溶性盐。
螯合剂-本文的洗涤剂组合物可包含螯合剂。合适的螯合剂包括铜、铁和/或锰螯合剂以及它们的混合物。当使用螯合剂时，本主题组合物可包含按本主题组合物的重量计约0.005％至约15％或甚至约3.0％至约10％的螯合剂。
胺化合物-该组合物优选地包含具有以下通式结构的化合物：二((C2H5O)(C2H4O)n)(CH3)-N+-CxH2x-N+-(CH3)-二((C2H5O)(C2H4O)n)，其中n＝20至30，并且x＝3至8，或其硫酸化或磺化的变体。
增白剂-本发明的洗涤剂组合物也可包含可改变要清洁的制品的外观的附加组分，如荧光增白剂。这些增白剂吸收紫外光并发射可见光。合适的荧光增白剂含量包括从约0.01重量％，从约0.05重量％，从约0.1重量％，或甚至从约0.2重量％的较低含量至0.5重量％或甚至0.75重量％的较高含量。
分散剂-本发明的组合物还可包含分散剂。合适的水溶性有机物包括均聚或共聚酸或它们的盐，其中多元羧酸包含至少两个相隔不超过两个碳原子的羧基。
酶-除了本发明的脂肪酶变体外，所述洗涤剂组合物还可包含一种或多种酶，所述酶提供清洁性能和/或织物护理有益效果，例如蛋白酶、另一种脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、***聚糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶如漆酶、和/或过氧化物酶。
所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容，(即最适合的pH，与其他酶或非酶成分相容等)，并且所述酶将是有效量的。
适用的蛋白酶包括动物、植物或微生物起源的那些蛋白酶。优选微生物起源。包括化学改性的或蛋白工程化的突变体。蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，优选碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶，尤其是那些来源于芽孢杆菌属的蛋白酶，例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草菌溶素(subtilisin Carlsberg)、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(描述于WO 89/06279)、WO 05/103244中的SEQ ID no 4和SEQ ID no 7。其他合适的丝氨酸蛋白酶包括那些来自微球菌亚目某些种(Micrococcineae)尤其是纤维单胞菌属某些种(Cellulonas spp)及其变异体的蛋白酶，它们公开在WO2005052146中。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛起源的胰蛋白酶)和镰孢菌属蛋白酶，它们描述于WO 89/06270和WO 94/25583中。
有用的蛋白酶的实例是在WO 92/19729、WO 98/20115、WO 98/20116、和WO 98/34946中描述的变体，尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体：27、36、57、68、76、87、97、101、104、106、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235、245、252和274，以及在具有以下突变的其他变体中：(K27R、V104Y、N123S、T124A)、(N76D、S103A、V104I)、或(S101G、S103A、V104I、G159D、A232V、Q236H、Q245R、N248D、N252K)。其他有用的蛋白酶的实例是在WO 05/052146中描述的变体，尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体：14、16、35、65、75、76、79、123、127、159和179。
优选的可商购获得的蛋白酶包括AlcalaseTM、SavinaseTM、PrimaseTM、DuralaseTM、EsperaseTM、CoronaseTM、PolarzymeTM和KannaseTM(Novozymes A/S)、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、ProperaseTM、PurafectTM、Purafect PrimeTM、Purafect OxPTM、FNA、FN2、FN3和FN4(Genencor International Inc.)。
脂肪酶包括那些细菌或真菌起源的脂肪酶。包括化学改性的或蛋白工程化的突变体。有用的脂肪酶的实例包括来自腐质霉菌(Humicola)(别名嗜热真菌，Thermomyces)的脂肪酶，例如来自嗜热羊毛状腐质霉(H.lanuginosa)(别名疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus))，如EP 258 068和EP 305 216所述，或者来自特异腐质霉(H.insolens)的脂肪酶，描述于WO 96/13580中，假单胞菌属脂肪酶例如来自产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331 376)、施氏假单胞菌(P.stutzeri)(GB 1,372,034)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属菌株SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)的脂肪酶、芽孢杆菌属脂肪酶例如来自枯草芽孢杆菌(Dartois等人(1993)，Biochemica et Biophysica Acta，1131，253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(B.pumilus)(WO 91/16422)的脂肪酶。
其他实例是诸如那些在WO 92/05249、WO 94/01541、EP 407 225、EP 260 105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079和WO 97/07202中描述的脂肪酶变体。
其他可商购获得的脂肪酶包括LipolaseTM、Lipolase UltraTM和LipexTM(Novozymes A/S)。
适用的淀粉酶(α和/或β)包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性的或蛋白工程化的突变体。淀粉酶包括例如获取自芽孢杆菌属的α-淀粉酶，例如详述于GB 1,296,839中的地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的特殊菌株。
有用的淀粉酶的实例是在WO 94/02597、WO 94/18314、WO 96/23873、和WO 97/43424中描述的变体，尤其是在一个或多个以下位点上具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408、和444。
可商购获得的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、StainzymeTM、Stainzyme UltraTM、Stainzyme PlusTM、FungamylTM和BANTM(Novozymes A/S)、RapidaseTM和PurastarTM(购自Genencor International Inc.)。
适用的纤维素酶包括那些细菌或真菌起源的淀粉酶。包括化学改性的或蛋白工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉菌属、镰孢菌属、草根霉属、支顶孢属的纤维素酶，例如由特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝菌(Myceliophthora thermophila)和尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶，它们公开在US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757和WO 89/09259中。
尤其适用的纤维素酶是具有颜色护理有益效果的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体如那些描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307和PCT/DK98/00299的纤维素酶。
可商购获得的纤维素酶包括RenozymeTM、CellucleanTM、EndolaseTM、CelluzymeTM、和CarezymeTM(Novozymes A/S)、ClazinaseTM、和PuradaxHATM(Genencor International Inc.)、以及KAC-500(B)TM(Kao Corporation)。
过氧化物酶/氧化酶：
适用的过氧化物酶/氧化酶包括那些植物、细菌或真菌起源的酶。包括化学改性的或蛋白工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞(Coprinus)的过氧化物酶，例如来自灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶，及其变体如那些描述于WO 93/24618、WO 95/10602、和WO 98/15257的过氧化物酶。
可商购获得的过氧化物酶包括GuardzymeTM(Novozymes A/S)。
当存在于清洁组合物中时，上述酶可以按所述组合物的重量计约0.00001％至约2％，约0.0001％至约1％，或甚至约0.001％至约0.5％酶蛋白的含量存在。
酶稳定剂-可使用多种技术来稳定用于洗涤剂的酶。本发明使用的酶可由最终组合物中存在的钙和/或镁离子水溶性源来稳定，最终组合物将这种离子提供给酶。此外也可使用常规的稳定剂例如多元醇(如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生物如芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸，并且所述组合物可如例如WO 92/19709和WO 92/19708所述进行配制。
溶剂-合适的溶剂包括水与其它溶剂如亲脂性流体。合适的亲脂性流体的实例包括硅氧烷、其它硅酮、烃、二元醇醚、甘油衍生物如甘油醚、全氟胺、全氟化和氢氟醚溶剂、低挥发性无氟有机溶剂、二醇溶剂、其它对环境友好的溶剂以及它们的混合物。
光漂白剂-所述组合物可包含光漂白剂。光漂白剂优选地选自氧杂蒽染料光漂白剂、光引发剂以及它们的混合物。
适用的光漂白剂包括催化光漂白剂和光引发剂。适用的催化光漂白剂选自由具有下列式的水溶性酞菁组成的组：
其中：
PC是酞菁环系；
Me是Zn；Fe(II)；Ca；Mg；Na；K；Al-Z1；Si(IV)；P(V)；Ti(IV)；Ge(IV)；Cr(VI)；Ga(III)；Zr(IV)；In(III)；Sn(IV)或Hf(VI)；
Z1是卤化物；硫酸盐；硝酸盐；羧化物；链烷醇；或氢氧离子；
q为0；1或2；
r是1至4；
Q1是磺基或羧基；或者式的基团
-SO2X2-R1-X3 +；-O-R1-X3 +；或者-(CH2)，-Y1 +；
其中
R1是支化的或非支化的C1-C8亚烷基；或1，3-或1，4-亚苯基；
X2是-NH-；或-N-C1-C5烷基；
X3 +是下式的基团
Figure BPA00001211592700201
或，在R1＝C1-C8亚烷基的情况下，也是下式的基团
Figure BPA00001211592700202
Y1 +是下式的基团
Figure BPA00001211592700203
t为0或1
其中在以上式中
R2和R3彼此独立地为C1-C6烷基
R4为C1-C5烷基；C5-C7环烷基或NR7R8；
R5和R6彼此独立地为C1-C5烷基；
R7和R8彼此独立地为氢或C1-C5烷基；
R9和R10彼此独立地为未取代C1-C6烷基或被羟基、氰基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基、苯基、萘基或吡啶基取代的C1-C6烷基；
u为1至6；
A1是构成芳族5-至7-元氮杂环的单位，在合适的情况下也可以再包含一个或两个氮原子作为环成员，和
B1是构成饱和5-至7-元氮杂环的单位，在合适的情况下位也可以包含1至2个氮、氧和/或硫原子作为环成员；
Q2是羟基；C1-C22烷基；支链C3-C22烷基；C2-C22烯基；支链C3-C22烯基以及它们的混合物；C1-C22烷氧基；磺基或羧基；式基团
Figure BPA00001211592700211
下式的支链烷氧基团
Figure BPA00001211592700221
下式的烷基乙烯氧基单元
            -(T1)d-(CH2)b(OCH2CH2)a-B3
或下式的酯基团
COOR18
其中
B2是氢；羟基；C1-C30烷基；C1-C30烷氧基；-CO2H；-CH2COOH；-SO3-M1；-OSO3-M1；-PO3 2-M1；-OPO3 2-M1；以及它们的混合物；
B3是氢；羟基；-COOH；-SO3-M1；-OSO3M1或C1-C6烷氧基；
M1是水溶性阳离子；
T1是-O-；或-NH-；
X1和X4彼此独立地为-O-；-NH-或-N-C1-C5烷基；
R11和R12彼此独立地为氢；磺基及其盐；羧基及其盐或羟基；R11和R12基中的至少一个是磺基或羧基或它们的盐，
Y2是-O-；-S-；-NH-或-N-C1-C5烷基；
R13和R14彼此独立地为氢；C1-C6烷基；羟基-C1-C6烷基；氰基-C1-C6烷基；磺基-C1-C6烷基；羧基或卤素-C1-C6烷基；未取代的苯基或卤素取代的苯基，C1-C4烷基或C1-C4烷氧基；磺基或羧基或R13和R14以及和它们结合的氮原子一起形成饱和的5-或6-元杂环，所述杂环也可另外包含氮原子或氧原子以作为环成员；
R15和R16彼此独立地为C1-C6烷基或芳基-C1-C6烷基；
R17是氢；未取代的C1-C6烷基或被卤素、羟基、氰基、苯基、羧基、C1-C6烷氧基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基；
R18是C1-C22烷基；支链C3-C22烷基；C1-C22烯基或支链C3-C22烯基；C3-C22乙二醇；C1-C22烷氧基；支链C3-C22烷氧基；以及它们的混合物；
M是氢；或碱金属离子或铵离子，
Z2 -是氯；溴；烷基硫酸根或芳基硫酸根离子；
a为0或1；
b为0至6；
c为0至100；
d为0；或1；
e为0至22；
v为2至12的整数；
w为0或1；和
A-是有机的或无机的离子，和
s在单价阴离子A-的情况下等于r，在多价阴离子的情况下小于或等于r，As -对于补偿正电荷来说是必需的；其中如果r不等于1，Q1基可以是相同的或不同的，并且其中酞菁环系也可另外包含增溶基团；
其它合适的催化光漂白剂包括氧杂蒽染料以及它们的混合物。在另一方面，合适的催化光漂白剂选自由下列组成的组：磺化酞菁锌、磺化酞菁铝、Eosin Y、Phoxine B、Rose Bengal、C.I.Food Red 14以及它们的混合物。在另一方面适用的光漂白剂可为磺化酞菁锌和磺化酞菁铝的混合物，所述混合物的磺化酞菁锌对磺化酞菁铝的重量比大于1，大于1但是小于约100，或甚至约1至约4。
合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂：芳族1，4-醌例如蒽醌和萘醌；α-氨基酮，尤其是那些包含苯甲酰部分的氨基酮，另外称为α-氨基苯乙酮；α羟基酮，尤其是α-羟基苯乙酮；含磷的光引发剂，包括单酰基、双酰基和三酰基氧化膦和硫化物；二烷氧基苯乙酮；α-卤代苯乙酮；三酰基氧化膦；苯偶姻和苯偶姻基光引发剂、以及它们的混合物。在另一方面，合适的光引发剂包括选自由下列组成的组的光引发剂：2-乙基蒽醌；维生素K3；2-硫酸蒽醌；2-甲基1-[4-苯基]-2-吗啉基丙基-1-酮(Irgacure
Figure BPA00001211592700241
 907)；(2-苄基-2-二甲基氨基-1-(4-吗啉基苯基)-丁基-1-酮(Irgacure
Figure BPA00001211592700242
 369)；(1-[4-(2-羟乙氧基)-苯基]-2羟基-2-甲基-1-丙基-1-酮)(Irgacure 2959)；1-羟基环己基苯基酮(Irgacure
Figure BPA00001211592700244
184)；低聚[2-羟基2-甲基-1-[4(1-甲基)-苯基]丙酮(Esacure
Figure BPA00001211592700245
 KIP150)；2-4-6-(三甲基苯甲酰)二苯基-氧化膦，双(2，4，6-三甲基苯甲酰)-苯基-氧化膦(Irgacure
Figure BPA00001211592700246
 819)；(2，4，6三甲基苯甲酰)苯基磷酸乙基酯(Lucirin
Figure BPA00001211592700247
 TPO-L)；以及它们的混合物。
可以组合使用上述光漂白剂(可以使用任何光漂白剂的混合物)。合适的光漂白剂可得自Aldrich，Milwaukee，Wisconsin，USA；Frontier Scientific，Logan，Utah，USA；Ciba Specialty Chemicals，Basel，Switzerland；BASF，Ludwigshafen，Germany；Lamberti S.p.A，Gallarate，Italy；Dayglo Color Corporation，Mumbai，India；Organic Dyestuffs Corp.，East Providence，Rhode Island，USA；和/或根据本文包含的实例制造的光漂白剂。
织物调色剂-所述组合物包含织物调色剂。织物调色剂能改变表面颜色是因为它们吸收至少一部分可见光谱。适用的织物调色剂包括染料、染料-粘土缀合物、和颜料，它们满足详述于WO2007/087257的第15和16页的测试方法1的需要，并且以引用方式并入本文。适用的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由下列组成的组：属于颜色索引(C.I.)分类的直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或它们的混合物，例如：
(1)三-偶氮直接蓝染料的式
Figure BPA00001211592700248
其中A、B和C萘基环中的至少两个被磺酸根基团取代，C环可在位点5被NH2或NHPh基团取代，X是由最多2个磺酸根基团取代的苄基或萘基环，可在位点2被OH基团取代，也可被NH2或NHPh基团取代。
(2)双-偶氮直接紫染料的式：
Figure BPA00001211592700251
其中Z是H或苯基，A环优选地被甲基和甲氧基基团在箭头所示位点取代，A环也可以是萘基环，Y基团是苯基或萘基环，它被硫酸根基团取代，也可被甲基基团一取代或二取代。
(3)蓝色或红色酸性染料的式
Figure BPA00001211592700252
其中X和Y中的至少一个必须是芳族基团。在一个方面，两个芳族基团都可以是取代的苄基或萘基，它可以被非水增溶的基团取代，例如烷基或烷氧基或芳氧基，X和Y不能被水增溶的基团取代，例如磺酸盐或羧酸盐。在另一方面，X是硝基取代的苄基基团，Y是苄基基团
(4)红色酸性染料的结构
Figure BPA00001211592700261
其中B是萘基或苄基基团，它可以被非水增溶的基团取代，例如烷基或烷氧基或芳氧基，B不能被水增溶的基团取代，例如磺酸盐或羧酸盐。
(5)重氮基染料的结构
Figure BPA00001211592700262
其中彼此独立的X和Y是氢、C1至C4烷基或C1至C4烷氧基，Rα是氢或芳基，Z是C1至C4烷基；C1至C4烷氧基；卤素；羟基或羧基，n是1或2而m是0、1或2、以及它们的相应的盐、以及它们的混合物
(6)下列结构的三苯甲烷染料
Figure BPA00001211592700271
Figure BPA00001211592700281
以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料选自由下列组成的组：颜色索引(Society of Dyers and Colourists，Bradford，UK)号直接紫9、直接紫35、直接紫48、直接紫51、直接紫66、直接蓝1、直接蓝71、直接蓝80、直接蓝279、酸性红17、酸性红73、酸性红88、酸性红150、酸性紫15、酸性紫17、酸性紫24、酸性紫43、酸性红52、酸性紫49、酸性蓝15、酸性蓝17、酸性蓝25、酸性蓝29、酸性蓝40、酸性蓝45、酸性蓝75、酸性蓝80、酸性蓝83、酸性蓝90和酸性蓝113、酸性黑1、碱性紫1、碱性紫3、碱性紫4、碱性紫10、碱性紫35、碱性蓝3、碱性蓝16、碱性蓝22、碱性蓝47、碱性蓝66、碱性蓝75、碱性蓝159以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料选自由下列组成的组：颜色索引(Society of Dyers and Colourists，Bradford，UK)号酸性紫17、酸性紫43、酸性红52、酸性红73、酸性红88、酸性红150、酸性蓝25、酸性蓝29、酸性蓝45、酸性蓝113、酸性黑1、直接蓝1、直接蓝71、直接紫51以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料包括选自由下列组成的组的小分子染料：颜色索引(Society of Dyers and Colourists，Bradford，UK)号酸性紫17、直接蓝71、直接紫51、直接蓝1、酸性红88、酸性红150、酸性蓝29、酸性蓝113或它们的混合物。
合适的聚合物染料选自由下列组成的组：包含共轭色原体(染料-聚合物共轭物)的聚合物、色原体共聚合进入聚合物主链的聚合物、以及它们的混合物。
在另一方面，合适的聚合物染料选自由下列组成的组：以商品名Liquitint
Figure BPA00001211592700291
(Milliken，Spartanburg，South Carolina，USA)销售的织物-实体着色剂、由至少一种活性染料形成的染料-聚合物共轭物、以及选自由包含以下部分的聚合物形成的组的聚合物：羟基部分、伯胺部分、仲胺部分、硫醇部分、以及它们的混合物。在另一方面，合适的聚合物染料包括选自由下列组成的组的聚合物染料：Liquitint
Figure BPA00001211592700292
(Milliken，Spartanburg，South Carolina，USA)Violet CT、与活性蓝共轭的羟甲基纤维素(CMC)、活性紫或活性红染料如与C.I.活性蓝19共轭的CMC，由Megazyme，Wicklow，Ireland以产品名AZO-CM-CELLULOSE，产品代码S-ACMC出售、烷氧基化的三苯甲烷聚合着色剂、烷氧基化的噻吩聚合着色剂以及它们的混合物。
合适的染料粘***轭物选自由下列组成的组：包含至少一种阳离子/碱性染料和绿土粘土、以及它们的混合物。在另一方面，合适的染料粘***轭物选自由下列组成的组：阳离子/碱性染料，它选自由C.I.碱性黄1至108、C.I.碱性橙1至69、C.I.碱性红1至118、C.I.碱性紫1至51、C.I.碱性蓝1至164、C.I.碱性绿1至14、C.I.碱性褐1至23、CI碱性黑1至11组成的组，以及一种粘土，它选自由下列蒙脱石粘土、锂蒙脱石粘土、滑石粉粘土、以及它们的混合物组成的组。在另一方面，合适的染料粘***轭物选自由下列组成的组：蒙脱石碱性蓝B7 C.I.42595共轭物、蒙脱石碱性蓝B9 C.I.52015共轭物、蒙脱石碱性紫V3 C.I.42555共轭物、蒙脱石碱性绿G1 C.I.42040共轭物、蒙脱石碱性红R1 C.I.45160共轭物、蒙脱石碱性蓝C.I.碱性黑2共轭物、锂蒙脱石碱性蓝B7 C.I.42595共轭物、锂蒙脱石碱性蓝B9 C.I.52015共轭物、锂蒙脱石碱性紫V3 C.I.42555共轭物、锂蒙脱石碱性绿G1 C.I.42040共轭物、锂蒙脱石碱性红R1 C.I.45160共轭物、锂蒙脱石C.I.碱性黑2共轭物、皂碱性蓝B7 C.I.42595共轭物、皂碱性蓝B9 C.I.52015共轭物、皂碱性紫V3 C.I.42555共轭物、皂碱性绿G1 C.I.42040共轭物、皂碱性红R1 C.I.45160共轭物、皂C.I.碱性黑2共轭物、以及它们的混合物。
合适的颜料选自由下列组成的组：黄烷士酮、靛蒽醌、包含1至4个氯原子的氯化靛蒽醌、皮蒽酮、二氯皮蒽酮、单溴二氯皮蒽酮、二溴二氯皮蒽酮、四溴皮蒽酮、二萘嵌苯-3，4，9，10-四羧酸二酰亚胺酯，其中所述酰亚胺基团可被也可不被C1-C3的烷基或苯基或杂环基取代，并且其中苯基和杂环基可另外带有不提供水中溶解度的取代基、吡唑嘧啶羧酸酰胺、蒽酮紫、异蒽酮紫、二嗪颜料、每个分子可包含最多2个氯原子的铜酞菁、多氯铜酞菁或每个分子包含最多14个溴原子的多溴铜酞菁、以及它们的混合物。
在另一方面，合适的颜料包括选自下列组的颜料：群青蓝(C.I.颜料蓝29)、群青紫(C.I.颜料紫15)、以及它们的混合物。
可以组合使用上述织物调色剂(可使用织物调色剂的任何混合物)。合适的织物调色剂可得自Aldrich，Milwaukee，Wisconsin，USA；Ciba Specialty Chemicals，Basel，Switzerland；BASF，Ludwigshafen，Germany；Dayglo Color Corporation，Mumbai，India；Organic Dyestuffs Corp.，East Providence，Rhode Island，USA；Dystar，Frankfurt，Germany；Lanxess，Leverkusen，Germany；Megazyme，Wicklow，Ireland；Clariant，Muttenz，Switzerland；Avecia，Manchester，UK和/或根据本文包含的实例制成。
适宜的调色剂更详细地描述于US 7,208,459 B2中。
优选的织物调色剂选自直接紫9、直接紫99、酸性红52、酸性蓝80以及它们的混合物。
漂白催化剂-漂白催化剂通常能够从过氧酸和/或其盐接受氧原子并将所述氧原子转移到氧化底物。适用的漂白催化剂包括但不限于：亚胺阳离子和聚离子、亚胺两性离子、改性的胺、改性的氧化胺、N-磺酰亚胺、N-膦酰亚胺、N-酰基亚胺、噻二唑二氧化物、全氟亚胺；环状糖酮；以及它们的混合物。
适宜的亚胺阳离子和聚离子包括但不限于N-甲基-3，4-二氢异喹啉
Figure BPA00001211592700311
四氟硼酸盐，按描述于Tetrahedron(1992)，49(2)，423-38中的方法制备(参见例如，化合物4，p.433)；N-甲基-3，4-二氢异喹啉
Figure BPA00001211592700312
对甲苯磺酸盐，按描述于美国专利5,360,569中的方法制备(参见例如第11列，实施例1)；和N-辛基-3，4-二氢异喹啉
Figure BPA00001211592700313
对甲苯磺酸盐，按描述于美国专利5,360,568中的方法制备(参见例如，第10列，实施例3)。
适用的亚胺两性离子的包括但不限于N-(3-磺基丙基)-3，4-二氢异喹啉
Figure BPA00001211592700314
内盐，按描述于美国专利5,576,282中的方法制备(参见例如，第31列，实施例II)；N-[2-(磺氧基)十二烷基]-3，4-二氢异喹啉
Figure BPA00001211592700315
内盐，按描述于美国专利5,817,614中的方法制备(参见例如，列32，实施例V)；2-[3-[(2-乙基己基)氧代]-2-(磺氧基)]-3，4-二氢异喹啉
Figure BPA00001211592700316
内盐，按描述于WO05/047264中的方法制备(参见例如，第18页，实施例8)和2-[3-[(2-丁基辛基)氧代]-2-(磺氧基)丙基(酯)]-3，4-二氢异喹啉内盐。
适宜的改性的胺氧转移催化剂包括但不限于1，2，3，4-四氢-2-甲基-1-羟基异喹啉，其可依照描述于Tetrahedron Letters(1987年)，28(48)，6061-6064中的方法制备。适宜的改性的氧化胺氧转移催化剂包括但不限于1-羟基-N-氧代-N-[2-(磺氧基)癸基]-1，2，3，4-四氢异喹啉钠。
适宜的N-磺酰基亚胺氧气转移催化剂包括但不限于3-甲基-1，2-苯并异噻唑-1，1-二氧化物，依照描述于Journal of Organic Chemistry(1990)，55(4)，1254-61中的方法制备。
适宜的N-膦酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于[R-(E)]-N-[(2-氯-5-硝基苯基)亚甲基]-对苯基-对-(2，4，6-三甲基苯基)次膦酸酰胺，其可依照描述于Journal of the Chemical Society，Chemical Communications(1994)，(22)，2569-70中的方法制备。
适宜的N-酰基亚胺氧转移催化剂包括但不限于[N(E)]-N-(苯基亚甲基)乙酰胺，其可依照描述于Polish Journal of Chemistry(2003年)，77(5)，577-590中的方法制备。
适宜的噻二唑二氧化物氧转移催化剂包括但不限于3-甲基-4-苯基-1，2，5-噻二唑1，1-二氧化物，其可依照描述于美国专利5,753,599(第9列，实施例2)中的方法制备。
适宜的全氟亚胺氧转移催化剂包括但不限于(Z)-2，2，3，3，4，4，4-七氟-N-(壬氟丁基)丁酰亚胺氟化物，其可根据Tetrahedron Letters(1994)，35(34)，6329-30中所述的方法制备。
适宜的环状糖酮氧转移催化剂包括但不限于如按美国专利6,649,085(第12列，实施例1)中的方法制备的1，2：4，5-二-O-异亚丙基-D-赤型-2，3-hexodiuro-2，6-吡喃糖。
所述漂白催化剂优选包含亚胺和/或羰基官能团，并且所述漂白活性剂通常能够在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子和/或双环氧乙烷官能团，尤其是从过氧酸和/或其盐接受氧原子。所述漂白催化剂优选包含过氧亚胺正离子官能团和/或所述漂白催化剂能够在接受氧原子之后形成过氧亚胺正离子官能团，尤其是从过氧酸和/或其盐接受氧原子。所述漂白催化剂优选包含环状亚胺官能团，优选其中环状部分具有五个至八个原子(包括氮原子)，优选六个原子。漂白催化剂优选包含芳香亚胺
Figure BPA00001211592700321
官能团，优选二环芳香亚胺
Figure BPA00001211592700322
官能团，优选3，4-二氢异喹啉官能团。所述亚胺官能团通常是季亚胺官能团，并且通常能够形成接受氧原子的季过氧亚胺正离子官能团，尤其是从过氧酸和/或其盐接受氧原子。
所述漂白催化剂优选具有与以下式相符的化学结构：
Figure BPA00001211592700323
其中：n和m独立地为0至4，优选n和m均为0；每个R1独立地选自取代或未取代的基团，所述基团选自由下列组成的组：氢、烷基、环烷基、芳基、稠合的芳基、杂环、稠合的杂环、硝基、卤素、氰基、磺酸根、烷氧基、酮基、羧基，和烷氧羰基；并且任何两个邻近的R1取代基可结合形成稠合的芳基、稠合的碳环或稠合的杂环；每个R2独立地选自取代或未取代的基团，所述基团独立地选自由下列组成的组：氢、羟基、烷基、环烷基、烷芳基、芳基、芳烷基、亚烃基、杂环、烷氧基、芳羰基、羧甲基和氨基；任何R2可以与任何其它R2相连接以形成公共环部分；任何偕R2可结合以形成羰基；并且其中任何两种R2可结合以形成取代或未取代的稠合不饱和部分；R3为C1至C20取代或未取代的烷基；R4为氢或所述Qt-A部分，其中：Q为支化或未支化的亚烷基，t＝0或1，并且A为阴离子基团，所述阴离子基团选自由下列组成的组：OSO3 -、SO3 -、CO2 -、OCO2 -、OPO3 2-、OPO3H-和OPO2 -；R5为氢或-CR11R12-Y-Gb-Yc-[(CR9R10)y-O]k-R8部分，其中：每个Y独立地选自由下列组成的组：O、S、N-H或N-R8；并且每个R8独立地选自由下列组成的组：烷基、芳基和杂芳基，所述部分是取代或未取代的，并且无论取代或未取代，所述部分具有的碳原子均小于21；每个G独立地选自由下列组成的组：CO、SO2、SO、PO和PO2；R9和R10独立地选自由下列组成的组：H和C1-C4烷基；R11和R12独立地选自由下列组成的组：H和烷基，或者当结合在一起时，它们可形成羰基；b＝0或1；c可以＝0或1，但是如果b＝0，则c必须＝0；y为1至6的整数；k为0至20的整数；R6为H或烷基、芳基或杂芳基部分；所述部分是取代或未取代的；并且如果X存在的话，它是一种合适的电荷平衡抗衡离子，当R4为氢时X优选存在，合适的X，包括但不限于：氯离子、溴离子、硫酸根、甲酯硫酸根、磺酸根、对甲苯磺酸根、四氟化硼和磷酸根。
在本发明的一个实施例中，所述漂白催化剂具有符合下文通式的结构：
其中R13是包含3个至24个碳原子(包括所述支链碳原子)的支链烷基或包含一个至24个碳原子的直链烷基；R13优选是包含8个至18个碳原子的支链烷基或包含8个至18个碳原子的直链烷基；R13优选地选自由下列组成的组：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正十二烷基、正十四烷基、正己基癸基、正十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基和异十五烷基；R13优选地选自由下列组成的组：2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、异十三烷基和异十五烷基。
糖基水解酶-糖基水解酶通常具有对木葡聚糖和无定形纤维素底物的酶活性。糖基水解酶优选地选自GH家族5、12、44或74。
对木葡聚糖底物的酶活性更详细地描述于下文中。对非晶形纤维素底物的酶活性更详细地描述于下文中。
所述糖基水解酶优选属于糖基水解酶第44家族。糖基水解酶(GH)家族的定义更详细地描述于1991年“Biochem J.”第280卷第309-316页中。
所述糖基水解酶优选具有与序列标识号1至少70％，或至少75％，或至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少95％同一性的序列。
就本发明目的而言，在两个氨基酸序列之间同一性程度使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970年J.Mol.Biol.48：443-453)如EMBOSS软件包在Needle程序中执行的(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite，Rice等人，2000，Trends in Genetics 16：276-277)，优选3.0.0或更高的版本。所用的任选参数是，10的空位罚分，0.5的空位延伸罚分，和EBLOSUM62(EMBOSS版的BLOSUM62)取代矩阵。使用标记为“最长同一性”的Needle输出(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性，并且如下计算：(相同残基×100)/(序列长度-序列中的总空位数)。
适宜的糖基水解酶选自由下列组成的组：得自类芽胞杆菌polyxyma(野生型)的GH第44家族糖基水解酶如XYG1006，描述于WO 01/062903或为其变体；得自地衣芽孢杆菌(野生型)的GH第12家族糖基水解酶，如序列No.ID：1，描述于WO 99/02663或为其变体；得自芽孢杆菌属agaradhaerens(野生型)的GH第5家族糖基水解酶或其变体；得自类芽胞杆菌(野生型)的GH第5家族糖基水解酶，如XYG1034和XYG 1022，描述于WO 01/064853或其变体；得自Jonesia sp.(野生型)的GH第74家族糖基水解酶，如XYG1020，描述于WO 2002/077242或其变体；和得自里氏木霉(野生型)的GH第74家族糖基水解酶，如在WO03/089598的序列ID no.2中更详细描述的酶，或其变体。
优选的糖基水解酶选自由下列组成的组：得自类芽孢杆菌(野生型)的GH第44家族糖基水解酶，如XYG1006或其变体。
糖基水解酶对木葡聚糖底物的活性
如果根据下列检测分析法，纯酶在pH 7.5下具有大于50000XyloU/g的比活度，则认为酶对木葡聚糖具有活性。
使用得自Megazyme(Ireland)的AZCL-木葡聚糖作为底物(蓝色底物)，测定木葡聚糖酶活性。
在20℃和搅拌下，在1.5mL Eppendorf管中，将0.2％蓝色底物的溶液悬浮于pH为7.5的0.1M磷酸盐缓冲液中(各0.75mL)，加入50微升酶溶液，并且在1200rpm速率搅拌下，使它们在40℃的Eppendorf混匀仪中培养20分钟。培养后，通过在14,000rpm速率下离心4分钟，使有色溶液与固体分离，并且使用分光光度计，在1cm比色皿中测定上清液在600nm处的吸光度。将一个XyloU单位定义为1cm比色皿中在600nm处获得0.24吸光度的酶量。
仅使用介于0.1至0.8的吸光度值来计算XyloU活性。如果测得的吸光度值在此范围之外，则应相应地进行初始酶浓度的最优化。
糖基水解酶对无定形纤维素底物的活性
如果根据下列检测分析法，纯酶在pH7.5下具有大于20000EBG/g的比活度，则认为酶对非晶形纤维素具有活性。用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
内葡聚糖酶活性检测分析材料：
pH为7.5的0.1M磷酸盐缓冲液
Cellazyme C片剂，由Megazyme International(Ireland)提供。
玻璃微纤维过滤器，GF/C，9cm直径，由Whatman提供。
方法：
在测试管中，使1mL pH 7.5的缓冲液与5mL去离子水混合。
加入100微升酶样本(或具有已知重量：重量稀释因子的酶样本稀释液)。将1片Cellazyme C片剂加入到每个管中，将管封盖，并且在涡旋搅拌器上混合10秒。将管放置于温度为40℃的恒温水浴中。15分钟、30分钟和45分钟后，通过将管倒转来混合管中内容物，然后将管再放置于水浴中。60分钟后，通过倒转来混合管中内容物，然后通过GF/C过滤器过滤。将滤液收集于干净的管中。
用分光光度计测定590nm处的吸光度(A酶)。通过加入100μL水而不是100微升酶稀释液，测定空白值A水。
计算的δA＝A酶-A水。
δA必须＜0.5。如果获得更高的结果，则用不同的酶稀释因子进行重复。
确定DF0.1，其中DF0.1为需要达到δA＝0.1的稀释因子。
单位定义：1个内型-β-葡聚糖酶活度单位(1EBG)是在上文指定的检测分析条件下达到δA＝0.10的酶量。因此，如果例如在用为100的稀释因子稀释后，指定的酶样本达到δA＝0.10，则所述酶样本具有100EBG/g的活度。
两亲烷氧基化油脂清洁聚合物-本发明的两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物是指任何具有平衡的亲水性和疏水性的烷氧基化的聚合物，使得它们从织物和表面移除油脂颗粒。本发明两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案包括核结构和多个连接到那个核结构的烷氧基化物基团。
所述核结构可包括聚亚烷基亚胺结构，其以密集的形式包含式(I)、(II)、(III)和(IV)的重复单元：
Figure BPA00001211592700361
其中在每个实例中，#代表在氮原子和式(I)、(II)、(III)或(IV)的两个邻近重复单元的基团A1游离的结合位之间的键的二分之一；在每个实例中，*代表连接到烷氧基化物基团中的一个键的二分之一；并且A1独立地选自直链或支链的C2-C6-亚烷基；其中所述聚亚烷基亚胺结构由式(I)1重复单元、式(II)x重复单元、式(III)y重复单元和式(IV)y+1重复单元组成，其中在每个实例中，x和y具有0至约150范围内的值，其中聚亚烷基亚胺核结构的平均重均分子量Mw，为约60至约10,000g/mol范围内的值。
所述核结构可或者包含至少一种选自式(I.a)和/或(I.b)N-(羟烷基)胺的缩合产物的化合物的聚链烷醇胺结构，
Figure BPA00001211592700371
其中A独立地选自C1-C6-亚烷基；R1、R1*、R2、R2*、R3、R3*、R4、R4*、R5并且R5*独立地选自氢、烷基、环烷基或芳基，其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的；并且R6选自氢、烷基、环烷基或芳基。其中至少三种提及的基团可以为任选地取代的。
连接到所述核结构多个烯氧基基团独立地选自式(V)的烯氧基单元
Figure BPA00001211592700372
其中在每个实例中，*代表连接到式(I)、(II)、(III)或(IV)的氮原子键的二分之一；在每个实例中A2独立地选自1，2-丙烯、1，2-丁烯和1，2-异丁烯；A3为1，2-丙烯；在每个实例中，R独立地选自氢和C1-C4-烷基；m具有0至约2范围内的平均值；n具有20至约50范围内的平均值；且p具有10至约50范围内的平均值；
两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案可选自具有内聚环氧乙烷嵌段和外聚丙烯氧基嵌段烷氧基化的聚亚烷基亚胺，乙氧基化度和丙氧基化度不会超过低于具体的限定值。根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺的具体实施方案具有约0.6的最小聚乙烯嵌段对聚丙烯嵌段(n/p)的比率和约1.5(x+2y+1)1/2的最大比率。已发现，具有约0.8至约1.2(x+2y+1)1/2的n/p比率的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有特别有益的特性。
根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有一条主链，所述主链由伯胺、仲胺和叔胺氮原子组成，其通过亚烷基A互相连接并且是无规排列的。伯氨基部分，其是聚亚烷基亚胺主链的主要链和侧链的起始点或终结点并且其剩余的氢原子随后被亚烷氧基单元取代，分别被称为分子式(I)或(IV)的重复单元。仲氨基部分，其剩余的氢原子随后被亚烷氧基单元取代，被称为分子式(II)的重复单元。叔氨基部分，其使主要链和侧链分叉，被称为分子式(III)的重复单元。
由于在聚亚烷基亚胺主链的形成中会发生环化，在主链中还可能存在少量的环状氨基部分。当然，包含环状氨基部分的此类聚亚烷基亚胺以与由非环状伯氨基和仲氨基部分组成的那些相同的方式烷氧基化。
由氮原子和基团A1组成的聚亚烷基亚胺主链具有约60至约10,000g/mol，优选约100至约8,000g/mol，并且更优选约500至约6,000g/mol的平均分子量Mw。
(x+2y+1)的和对应于存在于一条单独的聚亚烷基亚胺主链中的亚烷基亚胺单元的总数，并因此直接与所述聚亚烷基亚胺主链的分子量相关。然而，在本说明书中给出的值涉及所述混合物中存在的所有聚亚烷基亚胺的平均数。(x+2y+2)的和对应于存在于一条单独的聚亚烷基亚胺主链中的氨基的总数。
连接氨基氮原子的基团A1可以是相同或不同的、直链或支链的C2-C6-亚烷基，如1，2-乙烯、1，2-丙烯、1，2-丁烯、1，2-异丁烯、1，2-亚戊基、1，2-亚己基或六亚甲基。优选的支链亚烷基是1，2-丙烯。优选的直链亚烷基是乙烯和六亚甲基。更优选的亚烷基是1，2-乙烯。
聚亚烷基亚胺主链中伯胺基和仲胺基的氢原子可被分子式(V)的亚烷氧基单元取代。
Figure BPA00001211592700391
在该分子式中，所述变量优选具有以下所给出的一种含义：
在各种情况下，A2选自1，2-亚丙基、1，2-亚丁基和1，2-异亚丁基；A2优选为1，2-亚丙基。A3为1，2-亚丙基；在各种情况下，R选自氢和C1-C4烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基；R优选为氢。在各种情况下，系数m具有0至约2的值；m优选为0或大约1；更优选m为0。系数n具有在约20至约50范围内，优选在约22至约40范围内，并且更优选在约24至约30范围内的平均值。系数p具有在约10至约50范围内，优选在约11至约40范围内，并且更优选在约12至约30范围内的平均值。
分子式(V)的亚烷氧基单元优选是非随机序列的烷氧基化物嵌段。通过非随机序列是指首先添加[-A2-O-]m(即最接近分子式(I)、(II)或(III)的重复单元的氮原子的键)，其次添加[-CH2-CH2-O-]n，而第三个添加[-A3-O-]p。该目标提供具有内层聚环氧乙烷嵌段和外层聚环氧丙烷嵌段的烷氧基化聚亚烷基亚胺。
这些分子式(V)的亚烷氧基单元的基本部分由亚乙氧基单元-[CH2-CH2-O)]n-和亚丙氧基单元-[CH2-CH2(CH3)-O]p-形成。所述亚烷氧基单元还可具有小部分的亚丙氧基或亚丁氧基单元-[A2-O]m-，即用氢原子饱和的聚亚烷基亚胺主链，可最初使每摩尔存在的NH-部分与少量的至多约2mol，尤其是约0.5至约1.5mol，特别是约0.8至约1.2mol的环氧丙烷或环氧丁烷反应，即初期烷氧基化。
如果需要的话，所述聚亚烷基亚胺主链的这种初始改性可使烷氧基化过程中反应混合物的粘度降低。然而，所述改性通常不会影响烷氧基化聚亚烷基亚胺的性能特性，因此不构成优选的标准。
所述两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物按所述组合物的重量计以约0.05％至10％范围内的含量存在于本发明的去污和清洁组合物中。所述组合物的实施方案按重量计可包含约0.1％至约5％。更具体地讲，所述实施方案可包含约0.25至约2.5％的油脂清洁聚合物。
无规接枝共聚物-无规接枝共聚物包含：(i)包含选自由下列组成的组的单体的亲水性主链：不饱和的C1-C6羧酸、醚、醇、醛、酮、酯、糖单元、烷氧基单元、马来酸酐、诸如甘油的饱和的多元醇、以及它们的混合物；和(ii)选自由下列组成的组的疏水性侧链：C4-C25烷基、聚丙烯、聚丁烯、饱和的C1-C6一元羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯、以及它们的混合物；
所述聚合物优选具有通式：
Figure BPA00001211592700401
其中X、Y和Z为封端单元，独立地选自H或C1-6烷基；每个R1独立地选自甲基和乙基；每个R2独立地选自H和甲基；每个R3独立地为C1-4烷基；且每个R4独立地选自吡咯烷酮和苯基基团。所述聚环氧乙烷主链的重均分子量通常为约1,000g/mol至约18,000g/mol，或约3,000g/mol至约13,500g/mol，或约4,000g/mol至约9,000g/mol。选择m、n、o、p和q的值，以使得侧基的含量按所述聚合物的重量计为至少50％，或约50％至约98％，或约55％至约95％，或约60％至约90％。可用于本文的聚合物通常具有约1,000至约100,000g/mol，或优选约2,500g/mol至约45,000g/mol，或约7,500g/mol至约33,800g/mol，或约10,000g/mol至约22,500g/mol的重均分子量。
适宜的接枝共聚物更详细地描述于WO07/138054、WO06/108856和WO06/113314中。
储备碱度-所述组合物可具有大于4.0，优选地大于7.5的储备碱度。本文所用术语“储备碱度”是洗涤剂组合物缓冲能力的量度(g/NaOH/100g洗涤剂组合物)，其通过用盐酸将1％(w/v)的洗涤剂组合物溶液滴定至pH7.5来测定，即为了计算如本文所定义的储备碱度：
储备碱度(至pH7.5)以碱g NaOH/100g产品百分比＝(T×M×40×Vol)/(10×Wt×等分试样)
T＝至pH 7.5时的滴度(mL)
M＝HCl摩尔浓度，为0.2
40＝NaOH的分子量
Vol＝总体积(即1000mL)
W＝产品重量(10g)
等分试样＝(100mL)
获得10g精确称量至小数点后两位的全配方洗涤剂组合物样本。应在除尘橱中，使用Pascall采样器取得样本。向塑料烧杯中加入10g样本，并加入200mL不含二氧化碳的去离子水。在搅拌台上，使用磁子以150rpm的速度搅拌，直至完全溶解，并且搅拌至少15分钟。将烧杯中的内容物转移至1升容量瓶中，并用去离子水补足至1升。混合均匀，并且立即使用100mL吸液管，取100mL±1mL的等分试样。使用能够读至±0.01pH单位的pH计，测定并记录样本的pH和温度，并且搅拌，以确保温度为21℃±2℃。用0.2M的盐酸，在搅拌的同时滴定，直至pH准确测定为7.5。记录所用的盐酸毫升数。取三次相同重复试验的平均滴度。进行所述计算，算得至pH7.5时的RA。
本发明的洗涤剂组合物的RA将大于7.5并且优选地大于8。RA可为大于9或甚至大于9.5或10或更高。所述RA可最多为20或更高。
可由例如一种或多种碱金属硅酸盐(结晶层状硅酸盐除外)、碱金属碳酸盐来提供适当的储备碱度，所述碱金属硅酸盐典型为非晶形硅酸盐，通常为1.2至2.2比率的钠盐，所述碱金属碳酸盐典型为碳酸钠、碳酸氢钠和/或倍半碳酸钠。STPP和过酸盐如过硼酸盐和过碳酸盐也对碱度有贡献。需要缓冲作用，以在洗涤过程期间维持碱性pH，中和污垢的酸性，尤其是由脂肪酶所释放的脂肪酸。
香料-所述组合物可包含香料。香料可进行胶囊包封，例如通过淀粉包封。香料可通过尿素-甲醛或三聚氰胺-甲醛材料进行胶囊包封。此类香料胶囊包封物可为香料微胶囊的形式。
组合物可包含胶囊包封的香料和非胶囊包封的香料，其中香料原料的重量比具有以下通式结构：R1R2R3CC(O)OR4，其中R1 R2 R3各自独立地选自H、烷基、芳基、烷基芳基、环状烷基，并且其中至少一个，优选地至少两个R1 R2 R3是H，以胶囊包封的香料形式存在的香料原料与那些以非胶囊包封的香料形式存在的香料原料(也具有上述通式结构)的重量比大于3∶1，优选地大于4∶1，或甚至大于5∶1，或者10∶1，或者15∶1或甚至20∶1。
具有上述通式结构的一般香料原料包括：乙酸苄酯、己基乙酸酯、烯丙基己酸酯、香叶基丁酸酯、香叶基乙酸酯、乙基丁酸酯、丁酸橙花酯、香茅醇乙酸酯、乙基-2-甲基戊酸酯、异丙基2-丁酸甲酯和烯丙基戊基乙醇酸酯。具有上述通式结构的其他香料原料包括：manzanateTM supplied by Quest(Ashford，Kent，UK)；and vertenexTM，verdoxTM，violiffTM supplied by International Flavors and Fragrances(New Jersey，USA)。
所述组合物可包含香料，其中所述香料包含至少10重量％的一种或多种香料原料，它们具有大于0但是小于或等于350道尔顿的分子量，至少80重量％的所述一种或多种香料原料具有至少2.4的cLogP，所述香料组合物包含至少5重量％的具有至少2.4的cLogP的一种或多种香料组分。
本文所公开的香料组合物对遮蔽气味是尤其有用的，尤其是脂肪酸气味，更具体地讲短链脂肪酸气味如丁酸的气味，此类香料组合物在洗涤剂粉末中是尤其有用的。
在本发明的一个方面所述香料包含至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或甚至90％的一种或多种香料原料，该香料原料具有大于0但小于或等于350道尔顿，约100道尔顿至约350道尔顿，约130道尔顿至约270道尔顿，或甚至约140道尔顿至约230道尔顿的分子量；至少80重量％、85重量％、90重量％或甚至95重量％的所述一种或多种香料原料具有至少2.4，约2.75至约8.0或甚至越2.9至约6.0的cLogP，所述香料包含至少5重量％，15重量％，25重量％，35重量％，45重量％，55重量％，65重量％，75重量％，85重量％，或甚至95重量％的所述一种或多种香料组分，该香料组分具有的cLogP在至少2.4，约2.75至约8.0或甚至约2.9至约6.0的范围内。在本发明的所述方面，所述一种或多种香料组分可选自席夫碱、醚、酚、酮、醇、酯、内酯、醛、腈、天然油，或它们的混合物。
洗涤方法
本发明包括一种清洁和/或处理某个区域、特别是表面或织物的方法。上述方法包括以下步骤：将申请人的清洁组合物实施例(以纯物质形式或稀释在洗涤液体中)与至少部分表面或织物接触，然后任选地漂洗上述表面或织物。可在上述漂洗步骤之前对所述表面或织物进行洗涤步骤。对本发明而言，洗涤包括但不限于擦洗和机械搅拌。正如本领域的技术人员所认可的那样，本发明的清洁组合物理想地适用于洗衣用途。因此，本发明包括一种用于洗涤织物的方法，所述方法包括以下步骤：将待洗涤的织物与所述清洁洗涤溶液接触，所述清洁洗涤溶液包含申请人的清洁组合物、清洁助剂或它们的混合物的至少一个实施方案。织物可包括任何能够在正常消费者使用条件下洗涤的大部分任何织物。所述溶液优选具有约8至约10.5的pH。可使用组合物在溶液中的浓度为约100ppm，优选为500ppm至约15,000ppm。水温通常为约5℃至约90℃。本发明在低的水温如低于30℃或低于25℃或20℃时会尤其有益。水与织物的比率通常为约1∶1至约30∶1。
实施例
以下实施例进一步描述了本发明，所述实施例不应理解为限制本发明的范围。
用作缓冲液和底物的化学物质是至少试剂级的商业产品。
实施例1-脂肪酶变体的表达
构建包含编码脂肪酶变体的基因的质粒并使用本领域的标准方法将其转化到合适的宿主细胞中。
实施例2-生产脂肪酶变体
以分批补料发酵方式进行发酵，培养基恒定温度为34℃，并且起始体积为1.2升。将培养基的初始pH设为6.5。一旦pH提高到7.0，通过加入10％H3PO4维持该值。通过改变搅拌速率控制培养基中溶解氧的含量，并且使用1.0升空气每升培养基每分钟的固定透气速率。在整个分批补料阶段期间，将给料速率维持在恒定水平。
批培养基包含麦芽糖糖浆作为碳源，尿素和酵母提取物作为氮源，并且包含痕量金属和盐的混合物。在分批补料阶段期间连续加入的补料包含麦芽糖糖浆作为碳源，而加入酵母提取物和尿素是为了确保氮的足够供应。
脂解酶变体的纯化可使用本领域已知的标准方法进行，例如通过过滤发酵上清液并随后进行疏水性层析和离子交换层析，例如EP 0 851 913 EP，实施例3所述。
实施例3-脂解酶变体的洗涤剂内稳定性
测试以下脂解酶变体在洗涤剂内的稳定性并且与基准脂解酶SEQ ID NO：2比较。
表2：测试的脂解酶变体。
脂解酶变体和基准取剂量为0.065mg酶蛋白/g商业洗涤剂的浓度。
表3：洗涤剂组合物。
成分                起源                                        重量％
烷基醚硫酸钠        Steol 25-2S.70，Stepan Deutschland          12.0
LAS                 Surfac SDBS80，Surfachem                    7.0
牛油皂/椰子80/20    Linds Fabrikker                             3.2
23-9醇乙氧基化物    Neodol 23-9，Shell Chemical                 2.4
烷基二甲基胺氧化物  Empigen OB，Huntsman                        2.0
柠檬酸(钠)          Merck                                       2.8
氢氧化钠10N         Bie & Berntsen                              1.6
甘油                Optim Glycerine 99.7％USP/EP，Dow Chemical  2.3
单乙醇胺            Huntsman                                    2.7
MPG                 Proylene Glycol Industrial，Dow Chemical    4.7
水                                                              59.3
将包含洗涤剂和脂解酶变体或基准酶的样本溶解在pH＝7.7的tris(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)缓冲液中并分别贮存在-18℃2周和35℃4周。如下计算残余的酶活性：在35℃孵育后的脂肪酶活性除以贮存在-18℃的样本的脂肪酶活性。稳定性数据如下表4所示。与基准脂肪酶相比，所有六个脂解酶变体显示改善的洗涤剂内稳定性。
通过监控底物p-硝基苯基-戊酸盐(pNp-Val)水解生成戊酸盐和pNp产物来测量脂肪酶活性。检测波长＝405nm；pH＝7.7；温度＝37℃。在该pH具有酯酶活性的所有脂肪酶能用该方法进行分析。
表4：贮藏后的残余脂肪分解活性。显示的数据为三个数据的平均值。
洗涤剂实施例
用于实施例的缩写组分的识别如下所示：
Figure BPA00001211592700471
Figure BPA00001211592700481
实施例A
由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。
  A   B   C   D   E   F
  LAS   12   15   13   15   10   14
  QAS   0.7   1   1   0.6   0.0   0.7
  C25E3S   0.9   0.0   0.9   0.0   0.0   0.9
  C25E7   0.0   0.5   0.0   1   3   1
  STPP   5   3   1   10   0   8
  沸石A   0.0   0.0   0.0   0.0   10   0.0
  硅酸盐   2   3   3   7   0   4
Figure BPA00001211592700491
实施例A中的任何组合物以水中600ppm至10000ppm的浓度、典型中间条件为2500ppm以及25℃和25∶1的水与织物比率下用来洗涤织物。
实施例B
由下列制剂举例说明具有颗粒状衣物洗涤剂形式的漂白洗涤剂组合物。
  A   B   C   D
  LAS   8   7.1   7   6.5
  C25E3S   0   4.8   0   5.2
  C68S   1   0   1   0
  C25E7   2.2   0   3.2   0
  QAS   0.75   0.94   0.98   0.98
  (Na-)SKS-6   4.1   0   4.8   0
  沸石A   20   0   17   0
  柠檬酸   3   5   3   4
  碳酸盐   15   20   14   20
  硅酸盐   0.08   0   0.11   0
  洗涤剂   0.75   0.72   0.71   0.72
Figure BPA00001211592700501
实施例B中的在20-90℃下，以10,000ppm的水溶液浓度，以及5∶1的水与织物的比率，使用任何上述组合物来洗涤织物。
实施例C
  乙醇   1.54   1.77   1.15   0.89   1.54   1.15
  TEPAE1   0.3   0.33   0.23   0.17   0.0   0.0
  乙氧基化的六亚甲基二胺2   0.8   0.81   0.6   0.4   0.0   0.0
  1，2-丙二醇   0.0   6.6   0.0   3.3   0.0   0.0
  蛋白酶*   36.4   36.4   27.3   18.2   36.4   27.3
  甘露聚糖酶*   1.1   1.1   0.8   0.6   1.1   0.8
  淀粉酶*   7.3   7.3   5.5   3.7   7.3   5.5
  脂肪酶*   10   3.2   0.5   3.2   2.4   3.2
  两亲烷氧基化油脂清洁聚合物   0.3   0.5   0.7   0.5   0.3   0
  无规接枝共聚物   0.5   0.3   0.5   0.7   0.5   0
  调色剂   0.001   0.003   0.005   0.01   0   0
  未胶囊包封的香料   0.5   0.5   0.5   0.5   0.5   0.5
  香料微胶囊   0.2   0.1   0.3   0.2   0.1   0
  三羟基硬脂酸甘油酯   0.2   0.1   0.3   0.2   0.1   0
  水、染料和其他   余量   余量   余量   余量   余量   余量
*以mg酶/100g计的数值
1如US 4,597,898中所述。
2以商品名LUTENSIT
Figure BPA00001211592700511
得自BASF，以及如WO 01/05874中所述的那些
不应将本文所公开的量纲和值理解为对所引用精确值的严格限制。相反，除非另外指明，每个这样的量纲旨在表示所引用的值和围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
Figure IPA00001211592200011
Figure IPA00001211592200021
Figure IPA00001211592200031
Figure IPA00001211592200041
Figure IPA00001211592200051
Figure IPA00001211592200061
Figure IPA00001211592200071
Figure IPA00001211592200081
Figure IPA00001211592200091
Figure IPA00001211592200101
Figure IPA00001211592200111
Figure IPA00001211592200131
Figure IPA00001211592200141
Figure IPA00001211592200151
Figure IPA00001211592200161
Figure IPA00001211592200171
Figure IPA00001211592200181
Figure IPA00001211592200191

Claims (24)

1.一种包含亲本脂解酶的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体：
(a)具有与所述亲本脂解酶相比包含氨基酸残基取代的氨基酸序列，所述氨基酸残基取代对应于SEQ ID NO：2的任何以下氨基酸：27、216、227、231、233和256；并且
(b)任选地，比所述亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
2.如权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中亲本脂解酶的所述变体：
(a)包含所述氨基酸残基231和233，并且具有与所述亲本脂解酶相比包含至少一个氨基酸残基取代的氨基酸序列，所述氨基酸残基取代对应于SEQ ID NO：2的任何以下氨基酸：27、216、227和256；并且
(b)任选地，比所述亲本脂解酶在洗涤剂内更稳定。
3.如前述任一项权利要求所述的洗涤剂组合物，其中亲本脂解酶的所述变体在所述位点231+233以及以下位点之一具有氨基酸改变：
(a)27；
(b)216；或
(c)256；
并且其中任选地，所述变体还包含227；所述位点对应于SEQ ID NO：2。
4.如前述任一项权利要求所述的洗涤剂组合物，其中所述变体在SEQ ID NO：2的27R、216P、227G、231R、233R或256K中的一个上具有所述氨基酸残基取代。
5.如前述任一项权利要求所述的洗涤剂组合物，其中所述变体在SEQ ID NO：2的D27R、S216P、L227G、T231R、N233R或P256K中的一个上具有所述氨基酸残基取代。
6.如前述任一项权利要求所述的洗涤剂组合物，其中所述变体包含取代，所述取代选自由下列组成的组：
T231R+N233R+P256K；
L227G+T231R+N233R；
L227G+T231R+N233R+P256K；
D27R+T231R+N233R；
D27R+L227G+T231R+N233R；和
S216P+T231R+N233R。
7.如前述任一项权利要求所述的洗涤剂组合物，其中所述亲本脂解酶与SEQ ID NO：2具有至少50％，或至少60％，或至少70％，或至少75％，或至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少95％，或至少96％，或至少97％，或至少98％，或至少99％，或甚至100％的同一性。
8.如前述任一项权利要求所述的洗涤剂组合物，其中所述亲本脂解酶是由疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanoginosus)DSM 4109制备的脂肪酶并且具有SEQ ID.NO：2的氨基酸序列。
9.如前述任一项权利要求所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物为液体形式。
10.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含：
(a)0重量％至10重量％的沸石助洗剂；
(b)0重量％至10重量％的磷酸盐助洗剂；和
(c)任选地，0重量％至5重量％的硅酸盐；并且
其中所述组合物任选地具有大于7.5的储备碱度。
11.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含光漂白剂，所述光漂白剂选自氧杂蒽染料光漂白剂、光引发剂以及它们的混合物。
12.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含织物调色剂。
13.如权利要求12所述的组合物，其中所述织物调色剂选自直接紫9、直接紫99、酸性红52、酸性蓝80以及它们的混合物。
14.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含漂白催化剂。
15.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含酶，所述酶选自糖基水解酶、蛋白酶、淀粉酶、氧化酶以及它们的混合物。
16.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含化合物，所述化合物选自：
(a)两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物；
(b)无规接枝共聚物，所述无规接枝共聚物包含：
(i)包含单体的亲水性主链，所述单体选自由下列组成的组：不饱和的C1-C6酸、醚、醇、醛、酮、酯、糖单元、烷氧基单元、马来酸酐、甘油之类的饱和多元醇、以及它们的混合物；和
(ii)疏水性侧链，所述疏水性侧链选自由下列组成的组：C4-C25烷基、聚丙烯、聚丁烯、饱和的C1-C6一元羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯、以及它们的混合物；
(c)化合物，所述化合物具有以下通式结构：二((C2H5O)(C2H4O)n)(CH3)-N+-CxH2x-N+-(CH3)-二((C2H5O)(C2H4O)n)，其中n＝20至30，并且x＝3至8，或其硫酸化或磺化的变体；以及
(d)它们的任何混合物。
17.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含香料微胶囊。
18.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含胶囊包封的香料和未用胶囊包封的香料，其中具有通式结构R1R2R3CC(O)OR4的以胶囊包封的香料形式存在的香料原料与那些也具有上述通式结构的以非胶囊包封的香料形式存在的香料原料的重量比大于3∶1，在上述通式结构R1R2R3CC(O)OR4中，R1 R2 R3各自独立地选自H、烷基、芳基、烷基芳基、环状烷基，并且R1 R2 R3中的至少一个为H。
19.如权利要求18所述的组合物，其中所述胶囊包封的香料用三聚氰胺-甲醛和/或尿素-甲醛进行胶囊包封。
20.如前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含香料，其中所述香料包含至少10重量％的一种或多种香料原料，所述香料原料具有大于0但小于或等于350道尔顿的分子量，至少80重量％的所述一种或多种香料原料具有至少2.4的cLogP，所述香料组合物包含至少5重量％的所述一种或多种具有至少2.4的cLogP的香料组分。
21.一种处理和/或清洁表面或织物的方法，所述方法包括以下步骤：任选地洗涤和/或漂洗所述表面或织物，使所述表面或织物与如权利要求1-20中任一项所述的组合物接触，然后任选地洗涤和/或漂洗所述表面或织物。
22.如权利要求1-20中任一项所述的组合物水解羧酸酯的用途。
23.如权利要求1-20中任一项所述的组合物将酯水解、合成或酯交换的用途。
24.如权利要求1-20所述的脂解酶变体制造在洗涤剂内稳定的制剂的用途。
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