CN101903025A - 利用苯并吡喃酮-型parp抑制剂治疗癌症的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于治疗癌症的物质的组合物、试剂盒和方法。具体地，本发明提供通过抑制聚-ADP-核糖聚合酶治疗患者的癌症的组合物和方法，以及提供给药此类组合物的制剂和方式。

Description

利用苯并吡喃酮-型PARP抑制剂治疗癌症的方法和组合物
交叉参考
本申请要求2007年10月19日申请的标题为“利用苯并吡喃酮-型PARP抑制剂治疗癌症”的美国临时申请60/981,436(律师卷号28825-745.101)以及2008年9月11日申请的标题为“利用苯并吡喃酮PARP抑制剂治疗癌症的方法和组合物”的美国临时申请61/096,282(律师卷号28825-745.102)的权利，上述两份申请将其全部在此引入作为参考。
发明背景
癌症对现代社会是一个严重威胁。由于其独特的特征，恶性肿瘤的生长对现代医学构成了严重的挑战。他们的特征包括造成恶性组织不受约束生长的失控细胞增殖，侵犯局部和远距离组织的能力，缺乏分化，缺乏可检测的症状，并且最重要的是，缺乏有效的治疗和预防方法。
癌症可形成于任何年龄人群的任何器官的任何组织中。癌症的病因学尚未清晰定义，但是，如遗传易感性、染色体破损紊乱、病毒、环境因素以及免疫紊乱都与恶性细胞生长和转化有联系。癌症包括一大类医学病症类别，影响全球千百万人。癌细胞可在身体的任何器官和/或任何组织中形成。当身体某一部分的细胞开始失控生长或分化时，则形成癌症。所有类型的癌症都始于异常细胞的失控生长。
有许多类型的癌症，包括乳腺癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、***癌、胰腺癌、子***和白血病。当前，一些可用的主要治疗方法有手术、放射治疗和化学疗法。手术通常是一种极端的措施，可能会有严重的后果。例如，所有卵巢癌的治疗都可能造成不育。有些子***和膀胱癌的治疗可能造成不育和/或性功能障碍。治疗胰腺癌的手术过程可能导致胰腺的部分或完全切除，对患者可能带来相当大的风险。乳腺癌手术不可避免地涉及部分或完全***切除。有些***癌的手术过程有可能带来小便失禁或阳萎的风险。肺癌患者的手术过程通常会有严重的手术后疼痛，因为必须切开肋骨进入胸腔并切除癌变的肺组织。此外，同时患有肺癌和另一种肺病(如肺气肿或慢性支气管炎)的患者在手术后通常会感到气短程度增加。
放射治疗的优点是能够杀死癌细胞，但同时它也能够损害非癌变组织。化学疗法涉及对患者给药各种抗癌药物，但常常伴随有害的副作用。
全球范围内，每年有超过一千多万人被诊断患有癌症，据估计，到2020年，这一数字将增加到每年一千五百万新病例。癌症每年造成六百万人死亡，或全世界死亡人数的12％。仍然需要有能够治疗癌症的方法。这些方法能够为可用于预防和治疗人和其他哺乳动物癌症的组合物提供一个基础。
目前已经识别出一系列抗肿瘤药物。这些药物包括硝基和亚硝基化合物及其代谢物，它们是以下美国专利的主题内容：1995年11月7日颁发的标题为“可用作抗病毒和抗肿瘤剂的芳香族硝基和亚硝基化合物及其代谢物”的美国第5,464,871号专利、1997年9月23日颁发的标题为“可用作抗病毒和抗肿瘤剂的芳香族硝基和亚硝基化合物及其代谢物”的美国第5,670,518号专利以及1999年12月21日颁发的标题为“利用芳香族硝基和亚硝基化合物及其代谢物治疗癌症的方法”的美国第6,004,978号专利。上述专利公开的内容在此通过引用而纳入本文。
PARP(聚-ADP核糖聚合酶)参与各种DNA相关的功能，包括细胞增殖、分化、凋亡、DNA修复，而且还影响端粒长度和染色体稳定性(d′Adda diFagagna等人，1999，Nature Gen.，23(1)：76-80)。氧化应激诱导的PARP过度活化消耗了NAD+，因而消耗ATP，最终造成细胞机能障碍或坏死。这种细胞***机制与癌症、中风、心肌缺血、糖尿病、糖尿病相关的心血管功能障碍、休克、创伤性中枢神经***损伤、关节炎、结肠炎、变应性脑脊髓炎以及各种其他形式的炎症的病理机制有牵连。PARP还被证明与几种转录因子有关并调控其功能。PARP的多重功能使其成为各种严重病症(包括各种类型的癌症和神经变性疾病)的靶标。
发明概述
在一个方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600031
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；
其中所述癌症包括肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血(aplasticanemia)、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移(bone metastasis)、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病(Castleman’s disease)、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤(gastrointestinal carcinoid tumors)、胃肠基质肿瘤(gastrointestinal stromal tumor)、妊娠滋养层病(gestational trophoblasticdisease)、毛细胞性白血病(hairy cell leukemia)、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌(laryngeal and hypopharyngeal cancer)、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病(acute myeloid leukemia)、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌(nasal cavity andparanasal cancer)、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌(oral cavity andoropharyngeal cancer)、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom’smacroglobulinemia)。
本发明的一些实施方案提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600041
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；
其中所述癌症为由选自下列癌症的细胞迁移而形成于身体不同部位的癌症：肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基，和羟基；羟基氨基，且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
在一些实施方案中，X为选自下列的卤素：F、Cl、Br和I。在一些实施方案中，X为碘(I)且R5为硝基、亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基。在一些实施方案中，n为0。在一些实施方案中，所述任选取代的烷基被选自下列的取代基所取代：烷基胺、吡咯、二氢吡咯(dihydropyrrole)和吡咯烷(pyrrolidene)。
在一些实施方案中，该化合物为IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的可药用盐或前药之一：
Figure BPA00001161560600052
Figure BPA00001161560600061
在一些实施方案中，该化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
在一些实施方案中，该任选取代的(C3-C7)杂环为五元杂环或六元杂环。在一些实施方案中，该任选取代的(C3-C7)杂环含有至少一个氮原子。在一些实施方案中，该任选取代的(C3-C7)杂环选自氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、二氢吡咯、吡咯烷、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、咪唑、苯并咪唑、***、四唑、噁唑、异噁唑、苯并噁唑、噁二唑、噁唑啉、噁唑烷、噻唑、异噻唑、吡啶、二氢吡啶、四氢吡啶、喹唑啉、吡嗪、嘧啶、哒嗪、喹啉、异喹啉、三嗪、四嗪和哌嗪。在一些实施方案中，所述任选取代的(C3-C7)杂环被选自下列的取代基所取代：任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环，和任选取代的芳基。
在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因疗法、RNA疗法、纳米疗法、免疫疗法，或它们的组合。在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括给药有效量的抗肿瘤剂。在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括给药有效量的有机铂化合物。在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括给药有效量的抗代谢物。在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括给药有效量的奥沙利铂(OX)。在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括给药有效量的吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括给药有效量的有机铂和抗代谢物。在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括给药有效量的OX和GEM。在一些实施方案中，给药为静脉给药。在一些实施方案中，给药为腹膜内给药。在一些实施方案中，给药为口服给药。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。在一些实施方案中，受试者表达可检测水平的PARP蛋白。在一些实施方案中，受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600071
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少有一个始终是取代的环烷基、取代的杂环或取代的苯基；
其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
在一些实施方案中，X为选自下列的卤素：F、Cl、Br和I。在一些实施方案中，X为碘(I)且R5为硝基、亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基。在一些实施方案中，n为0。在一些实施方案中，所述任选取代的烷基被选自下列的取代基所取代：烷基胺、吡咯、二氢吡咯和吡咯烷。在一些实施方案中，该化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe或IIIf，或是它们的可药用盐或前药之一：
Figure BPA00001161560600091
在一些实施方案中，所述任选取代的(C3-C7)杂环为五元杂环或六元杂环。在一些实施方案中，所述任选取代的(C3-C7)杂环含有至少一个氮原子。在一些实施方案中，所述任选取代的(C3-C7)杂环选自氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、二氢吡咯、吡咯烷、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、咪唑、苯并咪唑、***、四唑、噁唑、异噁唑、苯并噁唑、噁二唑、噁唑啉、噁唑烷、噻唑、异噻唑、吡啶、二氢吡啶、四氢吡啶、喹唑啉、吡嗪、嘧啶、哒嗪、喹啉、异喹啉、三嗪、四嗪和哌嗪。在一些实施方案中，所述任选取代的(C3-C7)杂环被选自下列的取代基所取代：任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环，和任选取代的芳基。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因疗法、RNA疗法、免疫疗法、纳米疗法，或它们的组合。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的抗肿瘤剂。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的有机铂化合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的抗代谢化合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的奥沙利铂(OX)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的OX和GEM。在一些实施方案中，给药为静脉内或腹膜内给药。在一些实施方案中，给药为口服给药。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。在一些实施方案中，受试者表达可检测水平的PARP蛋白。在一些实施方案中，受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，该组合物包含一种抗肿瘤剂和一种式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药。
Figure BPA00001161560600101
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
在一些实施方案中，化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600111
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基和羟基；羟基氨基，且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
在一些实施方案中，该化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的可药用盐或前药之一：
Figure BPA00001161560600112
Figure BPA00001161560600121
在一些实施方案中，该化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
在一些实施方案中，可通过抗肿瘤剂和式(I)化合物的组合所治疗的癌症包括肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂包括抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂(plant-derived antitumor agent)、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂(biological response modifier)，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
在一些实施方案中，抗肿瘤烷化剂包括氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀；抗肿瘤抗代谢物包括甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶(tegafur)、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(cytarabine ocfosfate)、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠；抗肿瘤抗生素包括放线菌素D、阿霉素(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星；植物来源的抗肿瘤剂包括长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨；抗肿瘤铂络合化合物包括顺铂、卡铂、奈达铂和奥沙利铂；抗肿瘤喜树碱衍生物包括伊立替康、托泊替康(topotecan)和喜树碱；抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂包括吉非替尼(gefitinib)、伊马替尼(imatinib)和埃罗替尼(erlotinib)；单克隆抗体包括阿昔单抗、阿达木单抗、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗(daclizumab)、艾库珠单抗(eculizumab)、依法利珠单抗(efalizumab)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、英利昔单抗(infliximab)、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奥马佐单抗(omalizumab)、帕利珠单抗、帕尼单抗(panitumumab)、兰尼单抗(ranibizumab)、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)、利妥昔单抗(rituximab)、托西莫单抗和曲妥珠单抗；干扰素包括α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素；生物应答修饰剂包括云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、溶链菌或乌苯美司，其他抗肿瘤剂包括米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基脲、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特(alefacept)、阿尔法达贝泊丁(darbepoetin alfa)、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠(pegaptaniboctasodium)、地尼白介素-蓖麻毒素融合蛋白(denileukin diftitox)、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米(bortezomib)、卡培他滨和戈舍瑞林。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂化合物。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)、顺铂或卡铂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为抗代谢物药剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括一种以上抗肿瘤剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂化合物和抗代谢物药剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为OX和GEM。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、RNA疗法、免疫疗法、纳米疗法，或它们的组合。在一些实施方案中，给药为静脉给药。在一些实施方案中，给药为腹膜内给药。在一些实施方案中，给药为口服给药。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。在一些实施方案中，肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，受试者表达可检测水平的PARP蛋白。在一些实施方案中，受试者具有可检测水平的单-或聚-ADP核糖基化。
在一些实施方案中，本发明公开了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，所述组合物包含有机铂化合物和式(I)化合物，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，本发明公开了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，所述组合物包含奥沙利铂(OX)和式(I)化合物，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的OX和5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)。在一些实施方案中，该化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的OX和5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮(IIIk)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的抗代谢物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、RNA疗法、免疫疗法、纳米疗法，或它们的组合。在一些实施方案中，给药为静脉给药。在一些实施方案中，给药为腹膜内给药。在一些实施方案中，给药为口服给药。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。在一些实施方案中，受试者表达可检测水平的PARP蛋白。在一些实施方案中，受试者具有可检测水平的单-或聚-ADP核糖基化。
在一些实施方案中，本发明公开了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，所述组合物包含抗代谢物和式(I)化合物，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，本发明公开了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，所述组合物包含吉西他滨(GEM)和式(I)化合物，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的GEM和5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的GEM和5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮(IIIk)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的有机铂化合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的奥沙利铂(OX)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、RNA疗法、免疫疗法、纳米疗法，或它们的组合。在一些实施方案中，给药为静脉给药。在一些实施方案中，给药为腹膜内给药。在一些实施方案中，给药为口服给药。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。在一些实施方案中，受试者表达可检测水平的PARP蛋白。在一些实施方案中，受试者具有可检测水平的单-或聚-ADP核糖基化。
在一些实施方案中，本发明公开了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，所述组合物包含有机铂化合物、抗代谢物和式(I)化合物，或其代谢物和可药用盐或前药。在一些实施方案中，本发明公开了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，所述组合物包含奥沙利铂(OX)、吉西他滨(GEM)和式(I)化合物，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，该化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其可药用盐或前药之一。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的OX、GEM和5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给药有效量的OX、GEM和5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮(IIIk)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、RNA疗法、纳米疗法、免疫疗法，或它们的组合。在一些实施方案中，给药为静脉给药。在一些实施方案中，给药为腹膜内给药。在一些实施方案中，给药为口服给药。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。在一些实施方案中，受试者表达可检测水平的PARP蛋白。在一些实施方案中，受试者具有可检测水平的单-或聚-ADP核糖基化。
在另一方面，本发明提供用于治疗癌症的组合物，该组合物包含式I化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600171
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；且
其中所述化合物不是以下化合物之一：
Figure BPA00001161560600172
在一些实施方案中，该化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIh、IIIm或IIIn，或是它们的代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600173
Figure BPA00001161560600181
在一些实施方案中，所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在所述组合物的一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
在一些实施方案中，该组合物还进一步包含抗肿瘤剂。在一些实施方案中，所述抗肿瘤剂选自抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。在一些实施方案中，抗肿瘤烷化剂包括氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀；抗肿瘤抗代谢物包括甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠；抗肿瘤抗生素包括放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星；植物来源的抗肿瘤剂包括长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨；抗肿瘤铂络合化合物包括顺铂、卡铂、奈达铂和奥沙利铂；抗肿瘤喜树碱衍生物包括伊立替康、托泊替康和喜树碱；抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂包括吉非替尼、伊马替尼和埃罗替尼；单克隆抗体包括西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、贝伐单抗、阿仑单抗和曲妥珠单抗；干扰素包括α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素；生物应答修饰剂包括云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、溶链菌或乌苯美司，其他抗肿瘤剂包括米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基脲、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特、阿尔法达贝泊丁、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠、地尼白介素-蓖麻毒素融合蛋白、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米、卡培他滨和戈舍瑞林。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂化合物。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)、顺铂或卡铂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为抗代谢物药剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，所述组合物进一步包括一种以上抗肿瘤剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂化合物和抗代谢物药剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为OX和GEM。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)被式(I)化合物所抑制。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，癌细胞表达可检测水平的PARP蛋白。在一些实施方案中，受试者具有可检测水平的单-或聚-ADP核糖基化。
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗癌症的试剂盒。该试剂盒包含有效量的式(I)化合物，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，该试剂盒可用来治疗癌症，所述癌症包括肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗癌症的组合物，该组合物包含下面物质的组合：抗肿瘤剂和式I化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600211
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
在一些实施方案中，化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600212
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基，和羟基；羟基氨基，且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
在一些实施方案中，该化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600221
在此处公开的组合物的一些实施方案中，该化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在此处公开的组合物的一些实施方案中，该化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。在一些实施方案中，该化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
在该组合物的一些实施方案中，所述癌症包括肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在所述组合物的一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。在一些实施方案中，所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
在此处公开的组合物的一些实施方案中，抗肿瘤剂包括抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。在一些实施方案中，抗肿瘤烷化剂包括氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀；抗肿瘤抗代谢物包括甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠；抗肿瘤抗生素包括放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星；植物来源的抗肿瘤剂包括长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨；抗肿瘤铂络合化合物包括顺铂、卡铂、奈达铂和奥沙利铂；抗肿瘤喜树碱衍生物包括伊立替康、托泊替康和喜树碱；抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂包括吉非替尼、伊马替尼和埃罗替尼；单克隆抗体包括西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、贝伐单抗、阿仑单抗和曲妥珠单抗；干扰素包括α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素；生物应答修饰剂包括云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、溶链菌或乌苯美司，其他抗肿瘤剂包括米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基脲、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特、阿尔法达贝泊丁、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠、地尼白介素-蓖麻毒素融合蛋白、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米、卡培他滨和戈舍瑞林。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂化合物。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)、顺铂或卡铂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为抗代谢物药剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，所述组合物进一步包括一种以上抗肿瘤剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂化合物和抗代谢物药剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为OX和GEM。在一些实施方案中，聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)被式(I)化合物所抑制。在一些实施方案中，单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。在一些实施方案中，癌细胞表达可检测水平的PARP蛋白。
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗癌症的试剂盒，该试剂盒包含有效量的式(I)化合物和此处公开的抗肿瘤剂，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，可通过此处公开的试剂盒治疗的癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
通过引用纳入本文
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请此处在此处引入作为参考，即如同特地单独指明每份出版物或专利申请各自通过引用而纳入本文一样。
附图说明
本发明的新特征通过所附的权利要求书中具体阐明。
通过参阅下面利用本发明原理给出的示范性实施方案的详细说明和所附的附图，将能对本发明的特点和优点获得更好的理解，其中附图的简要说明如下：
图1显示PARP-1蛋白在胰腺癌细胞系中的表达。
图2显示IIIg及其类似物对COLO357FG和MiaPaCa2胰腺癌细胞体外增殖的影响。
图3显示在裸鼠中荧光素酶表达的胰腺原位癌模型中，IIIg对Colo357FG或L3.6pl胰腺癌生长的影响。
图4显示IIIg对患有原位COLO357FG和L3.6pl胰腺癌的裸鼠中肿瘤生长的影响。
图5显示IIIg对患有原位COLO357FG和L3.6pl胰腺瘤的无胸腺小鼠存活的影响。
图6显示不同的IIIg给药方案对患有原位COLO357FG胰腺瘤的裸鼠的肿瘤生长和存活的影响。
图7显示IIIg治疗96小时后，子宫癌Hela细胞的增殖。
图8显示IIIg治疗96小时后，肺癌A549细胞的增殖。
图9显示5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)对PARP-1+(A16)和PARP-1-/-成纤维细胞(A12)增殖的影响。
图10显示IIIg作为单一药物对胰腺癌细胞系增殖的影响。
图11显示胰腺癌细胞系和PARP-1+(A16)和PARP-1-/-成纤维细胞(A12)中PARP1表达和PARP活性。
图12显示在荧光素酶表达的胰腺原位癌模型中，IIIg给药剂量和方案对裸鼠COLO357FG胰腺癌生长和存活的影响。
图13显示在荧光素酶表达的裸鼠胰腺原位癌模型中，IIIg给药剂量和方案对裸鼠COLO357FG胰腺癌生长的影响。
图14显示IIIg及其与奥沙利铂的联用对胰腺瘤细胞COLO357FG和MiaPaCa-2增殖的影响。
图15显示COLO357FG细胞瘤对奥沙利铂与IIIg的联用治疗更敏感。
图16显示IIIg对裸鼠中人MX-1乳腺癌异种移植物的抗肿瘤活性。
图17显示IIIg对裸鼠中人SW620结肠癌异种移植物的抗肿瘤活性。
图18显示IIIg与γ辐射对胰腺癌细胞MIAPACA 2和Colo 3.6增殖的影响。
图19显示100μM IIIg的50％甲醇溶液的质谱(MS)分析。
图20显示在60分钟人全血样品中208离子的质谱(MS)分析。
图21显示在60分钟人全血样品中497离子的质谱(MS)分析。
发明详述
在一些实施方案中，本发明提供利用上述苯并吡喃酮化合物治疗癌症的方法。在一些实施方案中，本发明还提供了利用上述苯并吡喃酮化合物治疗因原发性癌细胞的转移或迁移而引起的癌症。可利用本文公开的本发明方法和组合物治疗的癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在其他实施方案中，本发明提供利用上述苯并吡喃酮化合物与一种或多种抗肿瘤剂联用治疗包括但不限于以下癌症的方法：肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。可用于本发明的抗肿瘤剂包括但不限于抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤铂络合化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他显示抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
在其他优选的实施方案中，本发明的苯并吡喃酮化合物用于治疗源自干细胞的癌症。在此处所述的许多恶性肿瘤中，一部分肿瘤细胞-“癌干细胞”-能够造成肿瘤的广泛增殖和转移。干细胞的死亡和生长的变化可能在肿瘤发生方面起作用。表皮干细胞的寿命至少和表皮的寿命一样长，因此，它们被认为易于受到多重遗传攻击，积累效应可能造成肿瘤的形成。许多癌症，如皮肤癌和结肠癌都是在其寿命中不断补充细胞的组织中产生的。但是，导致疾病的关键突变可能发生在组织的形成期间，此时细胞成指数***。
干细胞区室可被定义为组织的稀有细胞子集，现已发现实际上存在于每一个组织中，它被赋予独有的自我更新能力并存活于有机体的整个寿命期间。相比之下，分化的细胞形成组织的主体，但是通常有一个有丝***期后行为，且寿命短。细胞需要几次突变才能变成癌细胞这一事实可能表明，在很多组织中，突变可能是在干细胞中积累的。由于癌细胞可以自我更新，由此可以推断，它们可能源自自我更新的正常干细胞，或源自获得了干细胞特殊性质的分化程度较高的细胞。与此一致的是，肿瘤可被认为是一个组织，包括“分化的”细胞和“癌症干细胞”子集，它维持肿瘤实体，很可能是继发性肿瘤形成的原因。因此，本发明的苯并吡喃酮化合物可用来治疗源自干细胞的癌症。
本发明公开了5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)在人肿瘤和正常原代细胞以及在小鼠中的非临床药理学。在体外，IIIg抑制各种人肿瘤细胞，包括胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、肺癌、***癌和卵巢癌细胞的增殖。在体内，通过几个动物癌症发生模型对IIIg的效力进行了评估。IIIg腹膜内注射或口服给药，无论是单独使用还是和奥沙利铂联用，均可抑制人转移性胰腺癌细胞在体内的生长。在裸鼠的人源乳腺癌异种移植物模型和人源结肠癌异种移植物模型中，每天一次或每周两次给药IIIg可抑制肿瘤细胞的生长，并可对每天或每周两次接受该药物的动物的存活率产生积极的影响。IIIg每周两次、持续54天的剂量是基于IIIg临床前药效和安全性评估确定的。
据报道，苯并吡喃酮化合物，更具体说，5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮对恶性癌细胞具有选择性细胞毒性，但是对非恶性细胞没有选择性毒性(Kirsten E，Kun E，Int J Mol Med，2000，5(3)：279-81)。在一个实施方案中，本发明方法中采用的苯并吡喃酮对肿瘤细胞比对非肿瘤细胞可能显示更大的选择性毒性。
抗肿瘤剂
可用于本发明的抗肿瘤剂包括但不限于抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤铂络合化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他显示抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为烷化剂。本文所用的术语“烷化剂”指烷基化反应中提供烷基基团的试剂，在烷基化反应中，有机化合物的一个氢原子为一个烷基基团所取代。抗肿瘤烷化剂的实例包括但不限于氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为抗代谢物。本文所用的术语“抗代谢物”广义地包括，由于其结构或功能上与对有生命的生物体很重要的代谢物的类似性(如维生素、辅酶、氨基酸和糖类)，可打乱正常代谢的物质以及抑制电子转移***以防止富含能量的中间体形成的物质。具有抗肿瘤活性的抗代谢物的实例包括甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠，且优选的为5-氟尿嘧啶、S-1、吉西他滨等。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为抗肿瘤抗生素。抗肿瘤抗生素的实例包括但不限于放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为植物来源的抗肿瘤剂。植物来源的抗肿瘤剂的实例包括但不限于长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨，优选的为多西紫杉醇和紫杉醇。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为显示抗肿瘤活性的喜树碱衍生物。抗肿瘤喜树碱衍生物的实例包括但不限于喜树碱、10-羟基喜树碱、托泊替康、伊立替康或9-氨基喜树碱，优选的为喜树碱、托泊替康和伊立替康。此外，伊立替康在体内代谢并作为SN-38显示抗肿瘤活性。喜树碱衍生物的作用机理和活性被认为实际上与喜树碱的作用机理或活性相同(例如Nitta，et al.，Gan to Kagaku Ryoho，14，850-857(1987))。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为一种具有抗肿瘤活性的有机铂化合物或铂配位化合物。本文所用的有机铂化合物指能够提供铂离子的含铂化合物。优选的有机铂化合物包括但不限于顺铂、顺二胺二水合铂(II)-离子、氯(二亚乙基三胺)-铂(II)氯化物、二氯(乙二胺)-铂(II)、二胺(1，1-环丁羧酸)铂(II)(卡铂)、螺铂、异丙铂、二胺(2-乙基丙二酸)铂(II)、乙二胺丙二酸铂(II)、水合(1，2-二氨基二环己基)硫酸根合铂(II)、水合(1，2-二氨基二环己基)硫酸根合铂(II)、(1，2-二氨基二环己基)硫酸根合铂(II)、(4-羧基苯二甲酸)(1，2-二氨基环己基)合铂(II)、(1，2-二氨基环己基)-(柠檬酸)合铂(II)、(1，2-二氨基环己基)草酸铂(II)、奥马铂、四铂、卡铂、奈达铂、以及奥沙利铂，且优选的为卡铂和奥沙利铂。此外，本说明书中提到的其他抗肿瘤有机铂化合物为已知且可通过商业途径获得，或可由具有本领域普通技能的人员通过常规技术制得。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂。本文所用的术语“酪氨酸激酶抑制剂”指一种抑制“酪氨酸激酶”的化学物质，酪氨酸激酶将ATP的λ磷酸根转换成蛋白质中特定酪氨酸羟基基团。抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂的实例包括但不限于吉非替尼、伊马替尼或埃罗替尼。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为显示抗肿瘤活性的抗体或抗体的结合部分。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为单克隆抗体。单克隆抗体的实例包括但不限于阿昔单抗、阿达木单抗、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、艾库珠单抗、依法利珠单抗、替伊莫单抗、英利昔单抗、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、兰尼单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、利妥昔单抗、托西莫单抗和曲妥珠单抗，或任何对抗原特异的抗体片段。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为干扰素。这类干扰素具有抗肿瘤活性，且为一种当遇到病毒感染时动物细胞产生和分泌的糖蛋白。它不仅具有抑制病毒生长的作用，还具有各种免疫效应子的机制，包括抑制细胞生长(尤其是肿瘤细胞)和增强自然杀伤细胞活性，因此被指定为一种类型的细胞因子。抗肿瘤干扰素的实例包括但不限于α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为生物应答修饰剂。这是一个通用的物质或药物的术语，此类物质或药物用于改变生物有机体的自卫机制或生物反应，如组织细胞的存活、生长或分化，以便使它们可用于治疗患者的肿瘤、感染或其他疾病。生物应答修饰剂的实例包括但不限于云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、溶链菌或乌苯美司。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂包括但不限于米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基脲、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特、达贝泊丁阿尔法、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠、地尼白介素-蓖麻毒素融合蛋白、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米、卡培他滨和戈舍瑞林。
上面说明的术语“抗肿瘤烷化剂”、“抗肿瘤抗代谢物”、“抗肿瘤抗生素”、“植物来源的抗肿瘤剂”、“抗肿瘤铂配位化合物”、“抗肿瘤喜树碱衍生物”、“抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂”、“单克隆抗体”、“干扰素”、“生物应答修饰剂”以及“其他抗肿瘤剂”均为已知，或有市售或可由熟悉本领域的技术人员利用自身已知的方法或通过众所周知或常规方法制备。吉非替尼的制备过程如美国第5,770,599号专利所描述；西妥昔单抗的制备过程如WO96/40210专利所描述；贝伐单抗的制备过程如WO 94/10202专利所描述；奥沙利铂的制备过程如美国第5,420,319号和第5,959,133号专利所描述；吉西他滨的制备过程如美国第5,434,254号和第5,223,608号专利所描述；喜树碱的制备过程如美国第5,162,532号、5,247,089号、5,191,082号、5,200,524号、5,243,050号和5,321,140号专利所描述；伊立替康的制备过程如美国第4,604,463号专利所描述；托泊替康的制备过程如美国第5,734,056号专利所描述；替莫唑胺的制备过程如JP-B No.4-5029号专利所描述；且利妥昔单抗的制备过程如JP-W No.2-503143号专利所描述。
上面提到的抗肿瘤烷化剂可通过商业途径获得，如下所示：氮芥N-氧化物Mitsubishi Pharma Corp.有售，商品名Nitrorin；环磷酰胺Shionogi & Co.，Ltd.有售，商品名Endoxan；异环磷酰胺Shionogi & Co.，Ltd.有售，商品名Ifomide；美法仑GlaxoSmithKline Corp.有售，商品名Alkeran；白消安TakedaPharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Mablin；二溴甘露醇KyorinPharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Myebrol；卡波醌Sankyo Co.，Ltd.有售，商品名Esquinon；噻替派Sumitomo Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Tespamin；雷莫司汀Mitsubishi Pharma Corp.有售，商品名Cymerin；尼莫司汀Sankyo Co.，Ltd.有售，商品名Nidran；替莫唑胺Schering Corp.有售，商品名Temodar，卡氯芥Guilford Pharmaceuticals Inc.有售，商品名GliadelWafer。
上面提到的抗肿瘤抗代谢物可通过商业途径获得，如下所示：甲氨蝶呤Takeda Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Methotrexate；6-巯基嘌呤核苷Aventis Corp.有售，商品名Thioinosine；巯基嘌呤Takeda Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Leukerin；5-氟尿嘧啶Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd.有售，商品名5-FU；喃氟啶Taiho Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Futraful；去氧氟尿苷Nippon Roche Co.，Ltd.有售，商品名Furutulon；卡莫氟Yamanouchi Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Yamafur；阿糖胞苷NipponShinyaku Co.，Ltd.有售，商品名Cylocide；阿糖胞苷十八烷基磷酸钠NipponKayaku Co.，Ltd.有售，商品名Strasid；依诺他滨Asahi Kasei Corp.有售，商品名Sanrabin；S-1 Taiho Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名TS-1；吉西他滨Eli Lilly & Co.有售，商品名Gemzar；氟达拉滨Nippon Schering Co.，Ltd.有售，商品名Fludara，以及培美曲塞二钠Eli Lilly & Co.有售，商品名Alimta。
上面提到的抗肿瘤抗生素可通过商业途径获得，如下所示：放线菌素DBanyu Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Cosmegen；阿霉素Kyowa HakkoKogyo Co.，Ltd.有售，商品名adriacin；柔红霉素Meiji Seika Kaisha Ltd.有售，商品名Daunomycin；新制癌菌素Yamanouchi Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Neocarzinostatin；博来霉素Nippon Kayaku Co.，Ltd.有售，商品名Bleo；培洛霉素Nippon Kayaku Co，Ltd.有售，商品名Pepro；丝裂霉素C KyowaHakko Kogyo Co.，Ltd.有售，商品名Mitomycin；阿柔比星YamanouchiPharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Aclacinon；吡柔比星Nippon Kayaku Co.，Ltd.有售，商品名Pinorubicin；表柔比星Pharmacia Corp.有售，商品名Pharmorubicin；净司他丁斯酯Yamanouchi Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Smancs；伊达比星Pharmacia Corp.有售，商品名Idamycin；西罗莫司Wyeth Corp.有售，商品名Rapamune；以及戊柔比星Anthra Pharmaceuticals Inc.有售，商品名Valstar。
上面提到的植物来源的抗肿瘤剂可通过商业途径获得，如下所示：长春新碱Shionogi & Co.，Ltd.有售，商品名Oncovin；长春碱Kyorin PharmaceuticalCo.，Ltd.有售，商品名Vinblastine；长春地辛Shionogi & Co.，Ltd.有售，商品名Fildesin；依托泊苷Nippon Kayaku Co.，Ltd.有售，商品名Lastet；索布佐生Zenyaku Kogyo Co.，Ltd.有售，商品名Perazolin；多西紫杉醇Aventis Corp.有售，商品名Taxsotere；紫杉醇Bristol-Myers Squibb Co.有售，商品名Taxol；以及长春瑞滨Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd.有售，商品名Navelbine。
上面提到的抗肿瘤铂配位化合物可通过商业途径获得，如下所示：顺铂Nippon Kayaku Co.，Ltd.有售，商品名Randa；卡铂Bristol-Myers Squibb Co.有售，商品名Paraplatin；奈达铂Shionogi & Co.，Ltd.有售，商品名Aqupla；奥沙利铂Sanofi-Synthelabo Co.有售，商品名Eloxatin。
上面提到的抗肿瘤抗喜树碱衍生物可通过商业途径获得，如下所示：伊立替康Yakult Honsha Co.，Ltd.有售，商品名Campto；托泊替康GlaxoSmithKline Corp.有售，商品名Hycamtin；喜树碱Aldrich Chemical Co.，Inc.，U.S.A.有售。
上面提到的抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂可通过商业途径获得，如下所示：吉非替尼AstraZeneca Corp.有售，商品名Iressa；伊马替尼Novartis AG有售，商品名Gleevec；埃罗替尼OSI Pharmaceuticals Inc.有售，商品名Tarceva。
上面提到的单克隆抗体可通过商业途径获得，如下所示：西妥昔单抗Bristol-Myers Squibb Co.有售，商品名Erbitux；贝伐单抗Genentech，Inc.有售，商品名Avastin；利妥昔单抗Biogen Idec Inc.有售，商品名Rituxan；阿仑单抗Berlex Inc.有售，商品名Campath；曲妥珠单抗Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Herceptin。
上面提到的干扰素可通过商业途径获得，如下所示：α干扰素SumitomoPharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Sumiferon；α-2a干扰素TakedaPharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Canferon-A；α-2b干扰素Schering-PloughCorp.有售，商品名Intron A；β干扰素Mochida Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名IFN.beta；γ-1a干扰素Shionogi & Co.，Ltd.有售，商品名Imunomax-γ；and γ-n1干扰素Otsuka Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Ogamma。
上面提到的生物应答修饰剂可通过商业途径获得，如下所示：云芝多糖Sankyo Co.，Ltd.有售，商品名krestin；蘑菇多糖Aventis Corp.有售，商品名Lentinan；西佐喃Kaken Seiyaku Co.，Ltd.有售，商品名Sonifiran；溶链菌Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Picibanil；乌苯美司NipponKayaku Co.，Ltd.有售，商品名Bestatin。
上面提到的其他抗肿瘤剂可通过商业途径获得，如下所示：米托蒽醌Wyeth Lederle Japan，Ltd.有售，商品名Novantrone；L-天冬酰胺酶KyowaHakko Kogyo Co.，Ltd.有售，商品名Leunase；丙卡巴肼Nippon Roche Co.，Ltd.有售，商品名Natulan；达卡巴嗪Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd.有售，商品名Dacarbazine；羟基脲Bristol-Myers Squibb Co.有售，商品名Hydrea；喷司他丁Kagaku Oyobi Kessei Ryoho Kenkyusho有售，商品名Coforin；维甲酸Nippon Roche Co.，Ltd.有售，商品名Vesanoid；阿法赛特Biogen Idec Inc.有售，商品名Amevive；阿尔法达贝泊丁Amgen Inc.有售，商品名Aranesp；阿那曲唑AstraZeneca Corp.有售，商品名Arimidex；依西美坦Pfizer Inc.有售，商品名Aromasin；比卡鲁胺AstraZeneca Corp.有售，商品名Casodex；亮丙瑞林Takeda Pharmaceutical Co.，Ltd.有售，商品名Leuplin；氟他胺Schering-Plough Corp.有售，商品名Eulexin；氟维司群AstraZeneca Corp.有售，商品名Faslodex；哌加他尼辛钠Gilead Sciences，Inc.有售，商品名Macugen；地尼白介素Ligand Pharmaceuticals Inc.有售，商品名Ontak；阿地白介素Chiron Corp.有售，商品名Proleukin；α促甲状腺素Genzyme Corp.有售，商品名Thyrogen；三氧化二砷Cell Therapeutics，Inc.有售，商品名Trisenox；硼替佐米Millennium Pharmaceuticals，Inc.有售，商品名Velcade；卡培他滨Hoffmann-La Roche，Ltd.有售，商品名Xeloda和戈舍瑞林AstraZeneca Corp.有售，商品名Zoladex。本说明书中所用的术语“抗肿瘤剂”包括哦上述抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤铂配位化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂和其他抗肿瘤剂。
癌症治疗中最有希望的抗肿瘤剂之一为奥沙利铂(OX)。OX是有机铂家族药物，即基于铂的化学治疗药物的一个成员。其他有机铂药物的实例包括但不限于顺铂和卡铂。OX包括DNA单链断开。它通常与氟尿嘧啶和亚叶酸一起以一种称为FOLFOX的联合疗法治疗结直肠癌。OX的两个胺基团为环己胺取代以获得改善的抗肿瘤活性，且氯配体为衍生于草酸的草酸根二齿配体所取代以改善水溶性。OX的细胞毒性被认为由DNA合成的抑制而引起。
吉西他滨(GEM)是一个核苷类似物，其中脱氧胞苷的2′碳位上的氢为氟所取代。正如氟尿嘧啶和其他嘧啶类似物一样，该药剂在DNA复制过程中取代核酸的一个基础单元，在此场合，则为胞苷。这一过程阻止肿瘤生长，造成细胞凋亡。本发明还提供一个方法，用于治疗癌症，该方法包括苯并吡喃酮与一个或多个抗肿瘤剂联用，包括但不限于OX和GEM。
除了OX和GEM外，其他抗肿瘤剂或抗赘生物药剂也可与苯并吡喃酮化合物联用。这类适当的抗肿瘤剂包括但不限于：13-顺式-视黄酸、2-CdA、2-氯脱氧腺苷、5-阿扎腺苷、5-氟尿嘧啶、5-FU、6-巯基嘌呤、6-MP、6-TG、6-硫鸟嘌呤、紫杉烷、异维甲酸、放线菌素-D、阿霉素、Adrucil(氟脲嘧啶)、安归宁、氢化可的松、阿地白介素、阿伦单抗、ALIMTA(培美曲塞)、阿维A酸、长春花碱-AQ、爱克兰、维A酸、α干扰素、六甲蜜胺、甲氨喋呤、阿弥斯汀、氨鲁米特、阿那格雷、尼鲁米特、阿那曲唑、阿糖胞嘧啶、阿糖胞苷、阿法达贝泊汀、阿可达、瑞宁得、阿诺新、奈拉滨、三氧化二砷、天冬酰胺酶、ATRA、阿瓦斯丁、阿扎胞苷、BCG、BCNU、苯达莫司汀、贝伐单抗、贝沙罗汀、BEXXAR、比卡鲁胺、BiCNU、硫酸博来霉素、博来霉素、硼替佐米、白消安、白舒非、C225、甲酰四氯叶酸钙、坎帕斯、Camptosar(盐酸伊立替康)、喜树碱-11、卡培他滨、氟尿嘧啶乳膏、卡铂、卡氯芥、卡莫司汀植入片、卡索地司、CC-5013、CCI-779、CCNU、CDDP、CeeNU、柔红霉素盐酸盐、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、顺铂、柠胶因子、克拉屈滨、可的松、Cosmegen(更生霉素)、CPT-11、环磷酰胺、氨鲁米特、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、赛德萨-U、Cytoxan(环磷酰胺)、氮烯唑胺、地西他滨、更生霉素、阿法达贝泊汀、达沙替尼、柔红霉素、柔红霉素、盐酸柔红霉素、柔红霉素脂质体、DaunoXome(紫杉醇)、地卡特隆、地西台滨、Delta-Cortef(强的松龙)、Deltasone(强的松)、地尼白介素-蓖麻毒素融合蛋白、DepoCytTM(阿糖胞苷脂质体注射液)、***、醋酸***、***磷酸钠、氟美松、右雷佐生、DHAD、DIC、Diodex(***)、多西紫杉醇、Doxil(盐酸阿霉素)、阿霉素、阿佐霉素脂质体、DroxiaTM、DTIC、DTIC-Dome、甲基强的松龙、Efudex(氟尿嘧啶)、Eligard(亮脯利特)、Ellence(盐酸表柔比星)、Eloxatin(奥沙利铂)、爱施巴、Emcyt(雌氮芥磷酸钠)、表柔比星、阿法依泊艾汀、埃比特斯、埃罗替尼、欧文尼雅L-门冬酰胺酶、雌氮芥、Ethyol(阿米斯汀)、凡毕复、依托泊苷、依托泊苷膦酸盐、氟硝丁酰胺、雷洛昔芬、依西美坦、法乐通、氟维司群、弗隆、非拉司汀、氟尿嘧啶、福达华、氟达拉滨、Fluoroplex(氟脲嘧啶)、氟尿嘧啶、氟尿嘧啶(乳膏)、氟***、氟他胺、亚叶酸、FUDR、氟维司群、G-CSF、吉非替尼、吉西他滨、吉妥单抗、健择和健择副作用-化疗药物、格列卫、Gliadel Wafer(卡莫司汀)、GM-CSF、戈舍瑞林、粒细胞-集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、氟***、赫赛汀、Hexadrol(口服***)、科瘤灵、六甲三聚氰胺、HMM、癌康定、羟基脲、醋酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠、磷酸二氢可待因酮、羟基脲、替伊莫单抗、替伊莫单抗(泽瓦林)、Idamycin(伊达比星)、伊达比星、Ifex(异环磷酰胺)、IFN-alpha(α干扰素)、异环磷酰胺、IL-11、IL-2、甲磺酸伊马替尼、咪唑羧酰胺、α干扰素、α-2b干扰素(PEG偶联物)、白介素-2、白介素-11、Intron A(α-2b干扰素)、Iressa(吉非替尼)、伊立替康、异维甲酸、伊沙匹隆、埃坡霉素、门冬酰胺酶(t)、Lanacort(氢化可的松)、拉帕替尼、L-天冬酰胺酶、LCR、来那度胺、来曲唑、亚叶酸、苯丁酸氮芥、沙格司亭、亮脯利特、长春新碱、亮司他汀、阿糖胞苷脂质体、液体***、洛莫司汀、L-PAM、L-苯基丙氨酸氮芥、利普安、利普安储库剂、甲苯肼、Maxidex(***)、氮芥、盐酸氮芥、Medralone(甲基***龙)、Medrol(甲基***龙)、妇宁片、甲地孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、美司钠注射液、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤钠、甲基强的松龙、Meticorten(***)、丝裂霉素、丝裂霉素-C、米托蒽醌、M-Prednisol(甲基***龙)、MTC、MTX、盐酸氮芥、氮芥、突变霉素、马勒兰、Mylocel(羟基脲)、麦罗塔、诺维本、奈拉滨、环磷酰胺注射液、Neulasta(聚二乙醇化粒细胞-细胞集落刺激因子)、Neumega(奥普瑞白介素)、犹保津、多吉美、尼鲁他胺、尼鲁米特、Nipent(喷司他丁)、氮芥、Novaldex(枸橼酸他莫昔芬)、诺肖林、奥曲肽、醋酸奥曲肽、Oncospar(培门冬酶)、Oncovin(长春新碱)、Ontak(地尼白介素-蓖麻毒素融合蛋白)、Onxal(紫杉醇)、Oprevelkin(白介素-11)、口服速崩片、Orasone(***)、奥沙利铂、紫杉醇、注射用白蛋白结合型紫杉醇、帕米膦酸、帕尼单抗、Panretin(阿利维甲酸)、铂尔定、Pediapred(***龙)、PEG干扰素、培门冬酶、聚乙二醇化非格司亭、佩乐能、PEG-天冬酰胺酶、培美曲塞、喷司他丁、苯丙氨酸氮芥氯氨铂、氯氨铂-AQ、强的松龙、***、Prelone、丙卡巴肼、PROCRIT、重组人源化IL-2、Prolifeprospan 20(亚硝基脲氮芥植入物)、巯基嘌呤、雷洛昔芬、来那度胺、甲氨蝶呤、美罗华、利妥昔单抗、Roferon-A(α-2a干扰素)、Rubex(阿霉素)、盐酸红比霉素、善宁、善宁LAR、沙格司亭、琥钠氢可松、甲强龙、索拉非尼、扑瑞赛、STI-571、链佐星、SU11248、舒尼替尼-索坦、它莫西芬、特罗凯、Targretin(蓓萨罗丁)、他克唑、紫杉特尔、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、Temsirolimus(驮瑞塞尔)、替尼泊苷、TESPA(塞替派)、反应停、Thalomid(萨立多胺)、泰斯、硫鸟嘌呤、硫鸟嘌呤片、硫代磷酰胺、Thioplex(塞替派)、塞替派、TICE、拓扑萨、托泊替康、托瑞米芬、驮瑞赛尔、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维甲酸、TrexallTM(甲氨蝶呤)、Trisenox(三氧化二砷)、TSPA(塞替派)、TYKERB(拉帕替尼)、VCR(长春新碱)、维克替比、维克替比、长春花碱、硼替佐米、依托泊甙、维A酸胶囊、Viadur(利普安)、维达扎、长春花碱、硫酸长春花碱、Vincasar Pfs(长春新碱)、长春新碱、长春瑞滨、酒石酸长春瑞滨、VLB、VM-26、伏立诺他、VP-16、威猛、西罗达、链脲霉素、泽瓦林、右旋丙亚胺、诺雷德、唑来膦酸、卓林泽、择泰。
苯并吡喃酮化合物
在一些实施方案中，用于治疗癌症的化合物是式I的苯并吡喃酮化合物，或其可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560600371
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物为式II化合物或其可药用盐或前药：
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基、羟基氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。在一些实施方案中，X为选自下列的卤素：F、Cl、Br和I。在一些实施方案中，X为碘(I)。
在一些实施方案中，该方法包括向有此需要的受试者，优选的为人类受试者给药疗效量的式I或II的化合物。在一些实施方案中，X为I且R5为硝基、亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基。在一些实施方案中，n为0且R5为硝基。在一些实施方案中，n为0且R5为氨基。在一些实施方案中，n为0，X为I，且R5为硝基。在还有一些实施方案中，n为0，X为I，且R5为氨基。在一些实施方案中，所述任选取代的烷基被选自下列的取代基所取代：烷基胺、吡咯、二氢吡咯和吡咯烷。在一些实施方案中，该化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的可药用盐或前药之一：
Figure BPA00001161560600382
Figure BPA00001161560600391
在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIa的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIb的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIc的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIId的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIe的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIf的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIg的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIh的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIk的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIl的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIm的化合物或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物是式IIIn的化合物或其可药用盐或前药。
在一些实施方案中，任选取代的(C3-C7)杂环为五元杂环或六元杂环。在一些实施方案中，任选取代的(C3-C7)杂环含有至少一个氮原子。在一些实施方案中，任选取代的(C3-C7)杂环选自氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、二氢吡咯、吡咯烷、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、咪唑、苯并咪唑、***、四唑、噁唑、异噁唑、苯并噁唑、噁二唑、噁唑啉、噁唑烷、噻唑、异噻唑、吡啶、二氢吡啶、四氢吡啶、喹唑啉、吡嗪、嘧啶、哒嗪、喹啉、异喹啉、三嗪、四嗪和哌嗪。在一些实施方案中，任选取代的(C3-C7)杂环被选自下列的取代基所取代：任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环，和任选取代的芳基。
在一个优选的实施方案中，此处公开的化合物涉及5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)：
Figure BPA00001161560600401
在另一个优选的实施方案中，此处公开的化合物涉及5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮(IIIk)：
Figure BPA00001161560600402
典型的盐为无机离子盐，如钠、钾、钙和镁离子盐等。这些盐包括有机和无机酸盐，如盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、醋酸、富马酸、琥珀酸、乳酸、苦杏仁酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸或马来酸。此外，如果该化合物包含羧基或其它酸性基团，则可以用无机碱或有机碱将其转换为一种药学上可接受的加成盐。适当的碱的实例包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、铵、环己胺、二环己胺、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺等。
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)或(II)的化合物，或其可药用盐或其前药。在一些实施方案中，治疗的癌症癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在其他实施方案中，所述癌症包括由下列癌症的癌细胞迁移的结果而形成于身体不同部位的癌症，该癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，本发明的范围还包括式(I)的苯并吡喃酮化合物的代谢物。代谢物是式(I)的苯并吡喃酮化合物代谢的中间体和产物。例如，5-碘-6-亚硝基-1，2-苯并吡喃酮就是5-碘-6-氨基-1，2-苯并吡喃酮的代谢物。实施例15描述了识别全血样品中IIIg代谢物的方法。式(I)的苯并吡喃酮化合物的任何形式代谢物，都包括在本发明的范围内。
苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂联用
在一些实施方案中，本发明提供组合物，其包含式(I)或(II)的苯并吡喃酮化合物和抗肿瘤剂，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，抗肿瘤剂包括但不限于抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂抗癌化合物。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为顺铂、卡铂或奥沙利铂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，本发明提供一种以上抗肿瘤剂。在一些实施方案中，与苯并吡喃酮化合物联用的抗肿瘤剂为OX和GEM。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物的式IIIg，即5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物的式IIIk，即5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮。在一些实施方案中，该组合物包含IIIg和OX。在一些实施方案中，该组合物包含IIIg和GEM。在一些实施方案中，该组合物包含IIIg、GEM和OX。在一些实施方案中，该组合物包含IIIk和OX。在一些实施方案中，该组合物包含IIIk和GEM。在一些实施方案中，该组合物包含IIIk、GEM和OX。在一些实施方案中，抗肿瘤剂和苯并吡喃酮化合物联用具有协同作用。在一些实施方案中，OX或GEM与IIIg(5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮)联用具有协同作用。在一些实施方案中，OX或GEM与IIIk(5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮)联用具有协同作用。
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗癌症的方法，包括对受试者给药有效量的组合物，该组合物包含抗肿瘤剂和式(I)化合物，或其可药用盐或前药。在一些实施方案中，可为本发明的方法治疗的癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
苯并吡喃酮化合物的机理
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)和PARP抑制剂
并非意在为一种作用机理所限制，此处描述的化合物被认为因通过一种酶，即聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的调控而具有抗癌性质。该药物的作用机理与其可作为核酶聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP-1)配体的能力有关。参见Mendeleyev等人，同上(1995)。PARP-1在细胞核中表达并催化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)向烟酰胺和聚-ADP-核糖(PAR)的转化。PARP-1在体内平衡条件方面的作用似乎仅限于DNA转录和修复。但是，当细胞应力引起DNA损害时，PARP-1活性大幅度增加，这对于维持基因组的完整性似乎是必要的。Shall et at.，Mutat Res.Jun 30；460(1)：1-15(2000)。
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)亦称聚(ADP-核糖)合成酶和聚ADP-核糖基转移酶。PARP催化聚(ADP-核糖)聚合物的形成，该聚合物可连接到核蛋白质(以及其自身)，因此改变了这些蛋白质的活性。酶在增强DNA修复方面起作用，但是更基本的是，有指示表明，它在调控细胞核中的染色质方面起着重要的作用(有关这方面的评论，请参见D.D’Amours等人“Poly(ADP-ribosylation reactions in the regulation of nuclear functions，”Biochem.J.342：249-268(1999))。
在哺乳动物的基因组中，有超过15个PARP家族基因成员。能够将聚(ADP-核糖)降解为ADP-核糖的PARP家族蛋白和聚(ADP-核糖)乙二醇水解酶(PARG)可能涉及各种细胞调控功能，包括DNA损害应答和转录调控，且可能在很多方面与致癌作用和癌症生物学有关。
现已识别出几个PARP家族蛋白质。现已发现，端锚聚合酶为端粒调控因子1(TRF-1)的相互作用蛋白，并涉及端粒的调控。穹窿PARP(VPARP)是穹窿复合物的一个组成部分，起着转运核细胞质的作用。PARP-2、PARP-3和2，3，7，8-四氯二苯并-p-二噁英可诱导的PARP(TiPARP)也已被识别。因此，聚(ADP-核糖)代谢可能与各种细胞调控功能有关。
这一基因家族研究最多的成员是PARP-1。PARP-1基因产品在细胞核中以高水平表达，其活化依赖于DNA损害。不受任何理论的约束，据认为，PARP-1通过一个氨基酸终端DNA结合域连接到DNA单链或双链断裂处。这一结合活化羧基终端催化域并导致在目标分子上形成ADP-核糖。通过一个中心位置的自身修饰域，PARP-1本身也是聚ADP-核糖的目标。PARP-1的核糖化造成PARP-1分子从DNA解离。整个结合、核糖化和解离的过程发生很迅速。有人指出，PARP-1瞬间结合到DNA损伤位点导致DNA修复机制的补充，且可以抑制重组足够长时间进行修复补充。
用于PARP反应的ADP-核糖的来源为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)。NAD是在细胞中从细胞ATP储存中合成的，因此，高水平PARP活性的活化可导致迅速耗尽细胞能储存。现已证明，PARP活性的诱发可导致与细胞NAD和ATP储存耗尽相关的细胞死亡。在很多情况下，PARP活性是因为氧化剂应激或在炎症过程中诱发的。例如，在缺血性组织的再灌注过程中，产生反应性一氧化氮，一氧化氮又造成另外的反应性含氧物质，包括过氧化氢、过氧亚硝酸盐和羟基基团。这后面一个基团可直接损害DNA，形成的损害诱发PARP活性的活化。通常的情况似乎是，出现了足够的PARP活性活化，结果细胞能储存被消耗，细胞死亡。炎症过程中据认为有同样的机理，当内皮细胞和炎症细胞合成一氧化氮时，则在周围细胞中造成氧化性DNA损害，并在其后产生PARP活性活化。因PARP活化而造成的细胞死亡被认为是因缺血性再灌注损伤或炎症过程所造成的组织损害程度的主要贡献因素。
PARP-1的功能之一就是合成生物聚合物，聚(ADP-核糖)。聚(ADP-核糖)和PARP-1都被认为与DNA修复、细胞凋亡以及保持基因组的稳定和癌症发生有关。参见Masutani等人，Genes，Chromosomes，and Cancer 38：339-348(2003)。PARP-1在DNA修复，特别是碱基切除修复(BER)中起作用。BER是哺乳动物单一碱基DNA断裂的保护机制。PARP-1通过其锌指结构域以高亲和力结合到DNA片段的末端，因此可作为DNA损害感测器。Gradwohl等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2990-2994(1990)；Murcia等人，TrendsBiochem Sci 19：172-176(1994)。DNA的断裂触发PARP-1结合到断裂位点的响应。PARP-1然后增加其催化活性几百倍(参见Simonin等人，J Biol Chem278：13454-13461(1993))并开始转换其自身聚ADP-核糖化(Desmarais等人，Biochim Biophys Acta 1078：179-186(1991))和BER蛋白，如DNA-PKc和分子支架蛋白XRCC-1。参见Ruscetti等人，J.Biol.Chem.Jun 5；273(23)：14461-14467(1998)和Masson等人，Mol Cell Biol.Jun；18(6)：3563-71(1998)。BER蛋白被迅速地调到DNA损害位点。El-Kaminsy等人，Nucleic Acid Res.31(19)：5526-5533(2003)；Okano等人，Mol Cell Biol.23(11)：3974-3981(2003)。PARP-1从DNA断裂处解离但仍然保留在DNA修复事件的附近。
PARP活性的抑制对于治疗癌症可能是有用的。由PARP-1抑制而造成的脱氧核糖核酸酶去抑制可启动对癌细胞特异的DNA断裂过程，且仅诱发癌细胞的凋亡。小PARP分子抑制剂可使被治疗的肿瘤细胞系敏化而为电离辐射和一些伤害DNA的化疗药物杀死。PARP抑制剂的单一治疗或与抗肿瘤剂或辐射联用治疗可为一种有效的治疗方法。与化疗药物的联用治疗可在化疗药物单独使用无效的低浓度时诱发肿瘤退化。
抑制PARP分子的活性包括降低这些分子的活性。术语“抑制”及其语法上的变化形式，如“抑制的”，并非意在要求完全降低PARP活性。在不存在抑制效应，即不存在抑制剂，如本发明的苯并吡喃酮化合物的情况下，这样的活性降低优选的是降低分子活性至少大约50％、至少大约75％、至少大约90％，更优选的是至少大约95％。最优选的是，该术语指的是可观察到和可测量的活性降低。在治疗场合，优选的是，抑制足以对被治疗的病症产生治疗和/或预防效益。术语“不抑制”及其语法变化形式不要求对活性完全没有效应。例如，它可指在抑制剂，如本发明苯并吡喃酮化合物存在的情况下，PARP活性降低至少大约20％、至少大约10％，以及至少大约5％的场合。
此处说明的PARP抑制剂可包含一个或多个不对称中心，因此以外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、单一非对映异构体和非对映异构混合物的形式出现。这些化合物的所有此类异构体形式均明确地包括在本发明的范围之内。此处说明的PARP抑制剂还可能以互变异构体形式出现，所有此类互变异构体均包括在本发明中。PARP抑制剂还可以顺式-或反式-或E-或Z-双键异构体形式出现。这些抑制剂的所有此类异构体形式均明确地包括在本发明的范围之内。此处所说明的PARP抑制剂的所有此类晶体形式均明确地包括在本发明的范围之内。PARP抑制剂还可以其可药用盐、衍生物或前药的形式出现。
本领域已知的其他PARP抑制剂也可按本发明公开的方式，当作已知PARP抑制剂或候选PARP抑制剂使用。PARP抑制剂已被指定为苯甲酰胺的类似物，它在PARP的催化位点与天然底物NAD形成结合竞争。PARP抑制剂包括但不限于苯胺、奎诺酮和异奎诺酮、甲基3，5-二碘-4-(4′-甲氧基苯氧基)苯甲酸和3，5-二碘-4-(4′-甲氧基苯氧基)乙酰苯(US5,464,871，US5,670,518，US6,004,978，US6,169,104，US5,922,775，US6,017,958，US5,736,576和US5,484,951，所有专利此处均以其整体纳入本文)。PARP抑制剂包括各种环状苯胺类似物(即内酰胺)，它们在NAD位点是强有力的抑制剂。其他PARP抑制剂包括但不限于苯并咪唑和吲哚(EP841924，EP1127052，US6,100,283，US6,310,082，US2002/156050，US2005/054631，WO05/012305，WO99/11628和US2002/028815)。本领域已知的其他PARP抑制剂也可按本发明公开的方法用作已知PARP抑制剂或候选PARP抑制剂(2006年6月12日提交的美国专利申请第60/804,563号，此处通过引用以其整体纳入本文)。
PARP抑制剂的合成
此处公开的候选PARP抑制剂可通过本领域已知的标准合成技术来制备，且这些技术属于本发明的范围。在不限制本发明的范围的情况下，下面提供一些候选PARP抑制剂的反应方程式。
5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(INBP或5-碘-6-硝基香豆素)可按美国第5,484,951号专利获得，将其整个在此引入作为参考。另外，INBP也可按下面的反应方程式获得：
Figure BPA00001161560600471
下面提供了式IIIa化合物的候选PARP抑制剂反应方程式的实例。在步骤(i)中用三氟甲磺酸酐处理(二甲基氨基甲基)苯酚(CAS # 25338-55-0)(参见D.Frantz等人，Org.Lett.，2002，4，p.4717-4718)。步骤(ii)形成硼酸酯(H.Nakamura等人J.Org.Chem.1998，63，p.7529-7530)，该硼酸酯与碘硝基香豆素反应生成式IIIa化合物(W.Liu等人Synthesis，2006，p.860-864)。
Figure BPA00001161560600481
制备式IIIaPARP抑制剂的另一个方法为Suzuki偶联反应，如下面的反应方程式所示：
Figure BPA00001161560600482
下面提供了一个式IIIb化合物的候选PARP抑制剂反应方程式的实例(S.Huo，Org.Lett.，2003，5，423-425；T Baughman等人Tetrahedron，2004，60，10943-10948)。步骤(i)用锌粉处理乙酸溴乙基酯(CAS # 927-68-4)以生成对应的ZnBr，其然后在步骤(ii)用1(4-碘苯甲基)吡咯烷(CAS # 858676-60-5)处理。在步骤(v)中，用步骤(iv)的产物处理5-碘-6-硝基香豆素生成式IIIb化合物。
Figure BPA00001161560600491
下面的反应方程式给出了另外的生产IIIb的合成方法：
Figure BPA00001161560600492
下面提供了式IIIc化合物的候选PARP抑制剂反应方程式的实例(S.Huo，Org.Lett.，2003，5，423-425)。在步骤(i)中，用1，4-二溴丁烷(CAS # 110-52-1)处理4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(CAS # 43064-12-6)。在步骤(iii)中，用步骤(ii)的产物处理5-碘-6-硝基香豆素生成式IIIc化合物。
Figure BPA00001161560600501
下面的反应方程式给出了另外的合成IIIc的合成方法：
下面提供了式IIId化合物的候选PARP抑制剂反应方程式的实例(S.Huo，Org.Lett.，2003，5，423-425)。在步骤(i)中，用1，4-二溴丁烷(CAS # 110-52-1)处理1-苯基哌嗪(CAS # 92-54-6)。在步骤(iii)中，用步骤(ii)的产物处理5-碘-6-硝基香豆素生成式IIId化合物。
Figure BPA00001161560600511
下面给出了制备IIId的另外的方法：
下面给出了制备式IIIe的合成方法的实例：
Figure BPA00001161560600513
据猜测，但尚未确认，IIIe可能发生互变异构而变成如下所示的烯胺形式。这可能会生成E/Z异构体。
下面提供了式IIIf化合物的候选PARP抑制剂反应方程式的实例(S.Huo，Org.Lett.，2003，5，423-425；T Baughman等人Tetrahedron，2004，60，10943-10948)。
Figure BPA00001161560600522
下面给出了合成IIIf的另外的方法：
Figure BPA00001161560600531
式IIIh的化合物可通过式IIIg化合物的羟基部分亲电取代苯环上的碘而获得。在另一个替代方法中，通过对动物或人给药式IIIg化合物并收集样品，从而从样品中获得作为代谢物的式IIIh化合物。式IIIh化合物可利用HPLC从生物样品(如血液)中分离出来。
分析PARP的技术
PARP的分析可包括PARP基因表达分析，包括DNA、RNA分析、PARP含量分析和/或PARP活性分析，包括单-和聚-ADP核糖化水平。在不限制本发明的范围的前提下，本领域已知的任何数目的技术均可用来分析PARP，它们全部属于本发明的范围。下面给出一些检测技术的实例，但是，这些实例并非以任何方式限制可用于本发明的各种检测技术。
基因表达谱：基因表达谱方法包括基于多核苷酸杂交分析的方法、基于多核苷酸测序的聚核糖核苷酸方法以及基于聚核糖核苷酸和蛋白基因组方法。本领域已知用于样品中mRNA表达定量分析的最常用方法包括RNA印迹分析和原位杂交(Parker & Barnes，Methods in Molecular Biology106：247-283(1999))；核糖核酸酶保护分析(Hod，Biotechniques 13：852-854(1992))；和基于PCR的方法，如反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)(Weis et al.，Trends in Genetics 8：263-264(1992)))。另外，能够识别双链体的抗体也可用于分析，包括DNA双链体、RNA双链体和DNA-RNA杂交双链体或DNA蛋白双链体。基于基因测序的基因表达分析的代表性实例包括基因表达系列分析(SAGE)、大量平行定序基因表达分析(MPSS)、比较基因组杂交方法(CGH)、染色质免疫沉淀法(ChIP)、单核苷酸多态性(SNP)和SNP点阵、荧光原位杂交(FISH)、蛋白质结合点阵和DNA微点阵(亦常称为基因或基因组芯片、DNA芯片或基因点阵)，RNA微点阵。
反转录PCR(RT-PCR)：基于PCR的基因表达谱方法中最灵敏、最灵活的方法之一为RT-PCR，该方法可在进行治疗和不进行治疗的情况下，用来比较正常和肿瘤组织不同样品群中的mRNA水平，以便确定基因表达的模式特征、区分密切相关的mRNA，并分析RNA结构。
第一步是从目标样品中分离mRNA。例如，初始材料典型情况下可能为分别从人肿瘤或肿瘤细胞系和相应的正常组织或细胞系中分离出来的总RNA。因此，可从各种正常和患病细胞和组织如肿瘤中分离出RNA，包括***、肺。结肠直肠、***、脑、肝、胰腺、脾、胸腺、睾丸、卵巢、子宫等，或肿瘤细胞系。如果mRNA的来源为原发性肿瘤，则mRNA可从如冷冻或存档的固定组织，如石蜡包埋和固定(如***固定)的组织样品中提取出来。mRNA提取的一般方法在本领域内是众所周知的并在分子生物学的标准教科书中都有披露，包括Ausubel et al.，Current Protocols of MolecularBiology(当今分子生物学教程)，John Wiley and Sons(1997)。
尤其是，RNA的分离可利用市售的纯化试剂盒、缓冲液组和蛋白酶并按照制造商的说明进行。从肿瘤制备的RNA可用例如氯化铯密度梯度离心分离法分离。由于RNA不能用作PCR的模板，RT-PCR基因表达谱的第一步就是将RNA模板反转录成cDNA，接着在PCR反应中指数扩增。两个最常用的反转录酶为Avilo髓细胞病毒反转录酶(AMV-RT)和鼠白血病病毒反转录酶(MMLV-RT)。取决于当时的场合以及基因表达谱的目标，反转录步骤通常用特定的引物、随机六聚物或oligo-dT引物作为引子。获得的cDNA然后在后续的PCR反应中用作模板。
为了最大限度减少错误和样品之间的变化效应，RT-PCR通常采用一个内标。理想的内标是对不同的组织表达为恒定的水平，而不受实验处理的影响。最常用于基因表达模式归一化的RNA为管家基因甘油醛-3-磷酸-脱氢酶(GAPDH)和β-肌动蛋白的mRNA。
RT-PCR技术的一个最新的变化形式为实时定量PCR，该方法通过一个双标记产生荧光的探针测量PCR产物的积聚。实时PCR与定量竞争PCR和定量比较PCR兼容，定量竞争PCR将每个目标序列的内部竞争基因用于归一化，定量比较PCR则使用包含在样品中的基因作为归一化基因，或用于RT-PCR的管家基因。
荧光显微镜法：本发明的一些实施方案包括用荧光显微镜法分析PARP。使用荧光显微镜可通过高化学特异性荧光标记探针，如抗体来识别正在观察结构的分子组成。该方法中，可将一个荧光团直接偶联到一个蛋白上，并将该蛋白引回到细胞中。荧光类似物的行为像天然蛋白一样，因此可用来揭示细胞中该蛋白质的分布和行为。和NMR、红外光谱、圆二色性和其他技术一样，蛋白质内在的荧光衰减及其相关的荧光各向异性观察、碰撞猝灭和共振能转移都是蛋白质检测技术。天然荧光蛋白质可用作荧光探针。维多利亚发光水母产生一种称为绿荧光蛋白(GFP)的天然荧光蛋白质。将荧光探针融合到靶标蛋白中可使荧光显微镜可视化并通过流式细胞仪进行定量测定。
此处仅作为实例，列出一些探针标记物，例如荧光素及其衍生物、羧基荧光素、若丹明及其衍生物、atto标记、荧光红和荧光橙：cy3/cy5替代物、长寿命镧系复合物、长波长标记-达800nm、DY花青标记和藻胆蛋白。此处仅作为实例，一些探针为偶联物，如异硫氰酸酯偶联物、抗生物素蛋白偶联物和生物素偶联物。此处仅作为实例，一些探针为酶底物，如和荧光底物和显色底物。此处仅作为实例，有些探针为荧光染料，如FITC(绿荧光，激发/发射＝506/529nm)、若丹明B(橙色荧光，激发/发射＝560/584nm)和尼罗蓝A(红色荧光，激发/发射＝636/686nm)。荧光纳米颗粒可用于各种类型的免疫分析。荧光纳米颗粒基于不同的材料，如聚丙烯腈和聚苯乙稀等。荧光分子转子为微环境限制感测器，当转动受到限制时，则发荧光。几个分子受限的实例包括染料(积聚)增加、结合到抗体或被捕获在肌动蛋白的聚合物化过程中。IEF(等电聚焦)是两性电解质、主要是蛋白质的分析工具。使用荧光IEF标记物的IEF凝胶电泳的一个优势是有可能直接观察梯度形成。荧光IEF标记物也可在280nm(20℃)条件下用UV吸收检测。
可在固态支持物上合成肽库，通过使用显色受体，后续染色固态支持物可一一选择。如果受体不能指示任何颜色，可对其结合抗体进行染色。该方法不仅可用于蛋白质受体，也可用于筛选合成人工受体的结合配体以及筛选新金属结合配体。还可使用自动化HTS和FACS(荧光激活细胞分选器)方法。FACS机最初操作是让细胞通过毛细管并按其荧光强度分离细胞。
免疫分析：本发明的一些实施方案包括用免疫分析法来分析PARP。在如采用电泳法分离蛋白质的蛋白质印迹免疫印迹法中，单个蛋白质可通过其抗体来识别。免疫分析可为竞争性免疫分析，其中分析物与一个标记的抗原竞争有限的抗体分子(如放射免疫分析法，EMIT)。免疫分析也可能是非竞争性的，其中抗体以过量存在并被标记。随着分析物抗原复合物的增加，标记的抗体-抗原复合物也可能增加(如ELISA)。抗体如果是通过对实验动物注射抗原产生的，则可能是多克隆的，如果是通过细胞融合或细胞培养技术产生的，则可能是单克隆。免疫分析中，抗体可作为被分析的抗原的特异试剂。
在不限制本发明的范围和内容的前提下，且仅作为示例，下面列出一些类型的免疫分析法：RIA(放射免疫分析)、酶免疫分析如ELISA(酶联免疫分析)、EMIT(酶扩增免疫分析技术)、微粒酶免疫分析(MEIA)、LIA(发光免疫分析)和FIA(荧光免疫分析)。这些技术可用来检测鼻腔样品中的生物物质。抗体-可用作第一抗体或第二抗体-均可用放射性同位素(如125I)、荧光染料(如FITC)或酶(如HRP或AP)标记，这些标记物可催化荧光或发光反应。
生物素或维生素H是一个继承了对抗生物素蛋白和链霉抗生物素蛋白特异亲和力的辅酶。这一相互作用使生物素化的肽在各种定性和定量生物技术分析中成为一个很有用的工具。为了通过最大限度降低位阻以改善生物素/链霉抗生物素蛋白的识别，可能有必要增加生物素和肽之间的距离。这可以通过在生物素和肽之间偶联一个间隔分子(如6-硝基己酸)来实现。
生物素化蛋白质的生物素定量分析提供一个灵敏的荧光分析法，用来测定蛋白质上生物素标记的数目。生物素化肽广泛地用于需要至少一种相互作用伙伴固定到链霉抗生蛋白涂层的珠、膜、玻璃载片或微滴定板上的各种生物医学筛选***。该分析基于猝灭染料标记的配体从一个试剂的生物素结合位点的位移。为了将空间受限无法接近的多标记蛋白中的生物素基团暴露给该试剂，可用蛋白酶处理蛋白质以消化该蛋白质。
EMIT是一种可避免常用分离步骤的竞争性结合免疫分析方法。一种蛋白质用酶标记的免疫分析，且酶-蛋白质-抗体复合物没有酶活性，因此允许对未标记的蛋白质进行定量。本发明的一些实施方案包括用ELISA来分析PARP。ELISA基于连接到固态支持物的选择性抗体与酶反应结合来产生能够检测低含量蛋白质的***。该方法亦称为酶免疫分析法或EIA。蛋白质是由制备成针对其的抗体检测的，即该蛋白质就是抗体的抗原。经常使用单克隆抗体。
检验可能需要抗体被固定到一个固体表面，如试管的内表面，以及制备偶连到一个酶的相同抗体。酶可为一个从无色底物产生显色产物的酶(如β-半乳糖苷酶))。例如，该检验可通过用待分析的抗原溶液(如蛋白质)充填试管来进行。存在的任何抗原分子均可能结合到固定的抗体分子。可将抗体-酶偶联物加到反应混合物中。偶联物的抗体部分结合到任何先前结合的抗原分子，产生一个抗体-抗原-抗体夹层。洗掉任何未结合的偶联物后，可加入底物溶液。经过一段预定的时间间隔后，反应被停止(如通过加入1 N NaOH)，形成的显色产物的浓度用分光光度计测量。颜色的强度与结合的抗原浓度成正比。
也可对ELISA加以改变来测量抗体的浓度，在这种情况下，分析板的孔用适当的抗原涂布。可加入含有抗体的溶液(如血清)。当它有时间结合到固定的抗原后，可加入酶-偶联物抗免疫球蛋白，其中包含针对正在测试的抗体的抗体。洗掉任何未反应的试剂后，可加入底物。产生的颜色强度与结合的酶标记抗体的量(因此与正分析的抗体的浓度)成正比。
本发明的一些实施方案包括用放射免疫分析法来分析PARP。放射性同位素可用来研究少量化合物的体内代谢、分布和结合。使用了体内放射性同位素1H、12C、31P、32S和127I，如3H、14C、32P、35S和125I。在96孔板的受体固定方法中，受体可利用抗体或化学方法固定在每个孔中，并向每个孔中加入放射性标记的配体来诱发结合。未结合的配体可洗去，然后可通过结合的配体或洗掉的配体的放射性定量分析来对标准进行测定。接着，加入筛选目标化合物可能诱发与受体的竞争性结合反应。如果化合物对受体比对标准放射性配体显示更高的亲和力，大多数放射性配体将不会结合到受体上，可能留在溶液中。因此，通过分析结合的放射性配体(或洗掉的配体)的量，可得到测试化合物对受体的亲和力。
当受体不能被固定到96孔板或当配体结合需要在溶液相中进行的时候，可能需要采用过滤膜方法。换句话说，当配体-受体在溶液中的结合反应之后，如果将反应溶液用硝化纤维素滤纸过滤，包括配体的小分子可能会穿过滤纸，只有蛋白质受体可能会留在滤纸上。只有牢固地结合到受体上的配体才会留在滤纸上，且加入的化合物的相对亲和力可用标准放射性配体的定量分析来鉴定。
本发明的一些实施方案包括用荧光免疫分析法来分析PARP。荧光免疫方法基于标记的配体对未标记的配体在高特异性位点上的竞争结合。根据变化的分析物浓度的荧光寿命的变化，荧光技术可用来进行免疫分析。这一技术适用于短寿命染料，如异硫氰酸荧光素(FITC)(供体)，其荧光可为能量转移到曙红(受体)而猝灭。可采用一些光致发光化合物，如花青、噁嗪、噻嗪、卟啉、酞菁染料、荧光红外发射多核芳烃、藻胆蛋白、方酸染料、以及有机金属复合物、烃类和偶氮染料。
基于荧光的免疫方法可能为异源或同源。异源免疫分析包括结合形式的游离标记分析物的物理分离。分析物或抗体可结合到一个固态表面。该技术可为竞争性的(以获得更高的选择性)，或非竞争性的(以获得更高的灵敏度)。检测方法可为直接检测(仅使用一种类型的抗体)，或间接检测(使用了第二种类型的抗体)。同源免疫分析不包括物理分离。双抗体荧光团标记的抗原参与一个与抗体的平衡反应，这些抗体针对该抗原和荧光团。标记的和未标记的抗原可能竞争有限数目的抗抗原抗体。
有些荧光免疫分析法包括简单的荧光标记方法、荧光共振能量转移(FRET)、时间分辨荧光分析(TRF)、以及扫描探针显微镜分析(SPM)。简单荧光标记法可用于受体-配体结合分析、通过使用适当的荧光而用于酶活性分析，以及用作各种体内生理变化的荧光指示计，如pH、离子浓度和电压。TRF是一个在其他荧光分子的荧光发射完成后选择性测量镧系元素的荧光方法。TRF可与FRET一起使用，镧系元素可能变成供体或受体。在扫描探针显微镜分析中，例如在捕获相中，至少一种单克隆抗体粘附到一固相，利用一个扫描探针显微镜来检测可能存在于该固相表面的抗原/抗体复合物。使用扫描隧道显微镜消除了对标记的需求，标记通常用于很多免疫分析***以检测抗体/抗原复合物。
蛋白质识别方法：此处仅作为实例，列出以下蛋白质识别方法，包括通过埃德曼降解低通量测序、质谱技术、肽质量指纹谱、肽序列从头测序、以及基于抗体的分析。蛋白质定量分析包括荧光染料凝胶染色、标记或化学变更方法(即同位素编码的亲和力标记(ICATS))和组合分离对角线色谱(COFRADIC)。纯化的蛋白质也可用来测定可用于对分子间相互作用建模的三维晶体结构。测定三维晶体结构的常用方法包括x-射线结晶学和NMR波谱学方法。可用质谱法来探索指示蛋白质三维结构的特征。通过使用化学交联以偶联蛋白质空间上相近、序列上远隔的部分，可推断有关蛋白质总体结构方面的信息。通过跟踪酰胺质子与溶液中氘的交换，有可能探索蛋白质各部分接触溶剂的特征。
在一个实施方案中，荧光剂激活细胞分选法(FACS)被用来识别PARP表达细胞。FACS是一个特殊的流式细胞仪。它根据每个细胞特定的光散射和荧光特征，提供一个将异源生物细胞混合物每次一个细胞分选到两个或更多个容器中的方法。它提供单个细胞荧光信号的定量记录以及所研究的特定细胞的物理分离。在还有一个实施方案中，使用基于微流的装置来评估PARP表达。
质谱法也可用来研究患者样品中的PARP特征。全蛋白质电离的两个方法为电喷雾电离(ESI)和基质辅助激光解吸/电离(MALDI)。事实上，完整的蛋白质通过上面所述的两个技术中任意一个电离，然后引入质量分析器。在第二种方法中，利用一个试剂如胰蛋白酶或胃蛋白酶将蛋白质用酶学方法消化成较小的肽。也可使用其他蛋白水解消化剂。收集的肽产物然后被引入质量分析器。这通常被称为蛋白质分析的“从底部向上”的方法。
全蛋白质量分析是利用飞行时间(TOF)质谱或傅立叶离子回旋加速器共振(FT-ICR)分析进行的。用于肽质量分析的仪器为四极离子阱。多级四极飞行时间和MALDI飞行时间仪器也可用于这一应用场合。
利用两种方法分离蛋白质或从其酶消化物中分离肽产物。第一种方法分离全蛋白，被称为二维凝胶电泳。第二种方法高效液相色谱用来在酶消化后分离肽。在有些场合，可能有必要结合使用两种方法。
使用质谱仪识别蛋白质有两种方式。肽质量法使用消化已知蛋白质将会出现的蛋白水解肽的质量作为搜索预测质量数据库的输入。如果参考列表中的一个蛋白质序列出现相当数目与试验值匹配的预测质量，则有一定的证据表明，该蛋白质存在于原始样品中。
串联质谱也是一种识别蛋白质的方法。碰撞引发的解离用于主流应用场合以便从一个特定的肽离子产生一组片段。碎裂过程主要产生沿肽键断裂的裂解产物。
现已提出了一些不同的算法处理方法利用串联质谱法(MS/MS)、肽序列从头测序和基于肽标记的搜索来识别肽和蛋白质。一个结合了全范围数据分析功能的选项是PEAKS。其他现有的质谱分析软件包括：肽片段指纹分析SEQUEST、Mascot、OMSSA和X！Tandem。
蛋白质还可以用质谱法定量。典型情况下，碳(C13)或氮(N15)的稳定和(如非放射性的)较重同位素包含在一个样品中，另外样品则用相应较轻的同位素(如C12和N14)标记。两个样品分析之前混合在一起。得自不同样品的肽可通过其质量差别而区分。它们的峰强度比值对应于肽(因此也对应于蛋白质)的相对丰度比。同位素标记方法有SILAC(细胞培养物中氨基酸稳定同位素标记)、胰蛋白酶催化的O18标记、ICAT(同位素编码亲和力标记)和ITRAQ(相对和绝对定量同位素标记)。可以不标记样品进行“半定量”质谱分析。通常，这是用MALDI分析(线性模式)进行的。该方法中，单个分子(通常为蛋白质)的峰强度或峰面积与样品中蛋白质的量成相关关系。但是，个别信号取决于蛋白质的主结构、样品的复杂程度以及仪器的设定。
N端定序有助于未知蛋白质的识别，确认重组蛋白质身份和保真度(阅读框、转译起点等)，有助于NMR和结晶学数据的解释，显示蛋白质之间的等同性，或提供用于合成肽以产生抗体的设计等。N端定序利用埃德曼降解化学方法，从蛋白质的N端按顺序去除氨基酸并利用反相HPLC识别它们。灵敏度可达到100毫微微摩尔量级，长序列读出(20-40残基)通常可达到起始材料的几十微微摩尔。纯蛋白质(＞90％)可产生很容易解释的数据，但是，不够纯的蛋白质混合物如果经过严格的数据解释，也可能提供有用的数据。N端修饰的(尤其是乙酰化的)蛋白质不能直接定序，因为缺少游离伯氨基而不能进行埃德曼降解。但是，阻断蛋白质的有限蛋白质水解(如使用溴化氰)可能允许在仪器的每个循环中生成氨基酸混合物，然后对其进行数据库分析，从而解释得到有意义的序列信息。C端定序是一个转译后的修饰，影响蛋白质的结构和活性。各种疾病情况可能与损害的蛋白质处理有关，C端定序提供另外的工具，用于研究蛋白质结构和处理机制。
PARP抑制剂的PARP抑制活性测量技术
在一些实施方案中，对候选PARP抑制剂的PARP抑制活性进行了评估以确定候选PARP抑制剂结合到PARP蛋白上的能力特性，和/或确定候选PARP抑制剂改变PARP蛋白活性的能力特性。本领域有各种已知技术可分析PARP活性。这些技术包括但无任何限制，质谱法、高效液相色谱法等。在一些实施方案中，所用的评估技术为分析检测技术。按照本发明的方法，根据研究的PARP蛋白的特性，体内和体外分析均可使用。根据此处公开的信息，熟练的技术人员可很容易地进行适当的活性测量和功能分析。此处说明的候选PARP抑制剂可用于分析，包括放射性标记分析、抗体检测和荧光测量分析，以便对PARP蛋白质进行分离、识别或确定其结构或功能特征。
该分析可为利用全长或截断的PARP蛋白进行的酶抑制分析。可让PARP蛋白与候选PARP抑制剂接触，并测量候选PARP抑制剂对标准的结合亲和力。这些分析对本领域熟练技术人员来说是熟知的，且属于本发明的范围之内。用来评估候选PARP抑制剂的PARP抑制活性的分析方法可为基于细胞的分析。可让候选PARP抑制剂与细胞接触，然后测量对细胞中产生的标准标记物的抑制。细胞可从动物分离，包括转化的培养细胞，或者也可为活体动物中的细胞。这些分析对本领域熟练技术人员来说也是熟知的，且属于本发明的范围之内。
测量PARP活性的分析方法的实例可按以下方式进行。按先前报道的方法从小牛胸腺纯化PARP-1(Molinet等人(1993)EMBO J.12：2109-2117)。另外，也可从感染了重组昆虫杆状病毒的草地夜蛾(Sf9)细胞中分离出按照Pharmingen的说明构建的表达人PARP-1基因的重组PARP-1。PARP-1的氨基酸交换突变体R34G和R138 il的cDNA是用巨引子方法(mega primermethod)产生的(Kannann等人(1989)Nucl Acids Res 17：5404)。突变的基因被克隆到转移载体pV 1392并通过Pharmigen的Baculogold技术产生重组病毒。突变的蛋白质按报道的方法在Sf9细胞中表达，纯化并分析(Huang等人(2004)Biochemistry 43：217-223；Kirsten等人(2004)Methods in Molecular Biology287，Epigenetics Protocols 137-149)。分析可按Kun等人(2004)Biochemistry，43：210-216描述的方法进行。
本发明的候选PARP抑制剂可利用如酶联免疫吸附分析(ELISA)和放射性免疫分析(RIA)或结合分析如Biacore分析等免疫分析方法来识别。结合分析可采用动力学或热力学方法，利用广泛的技术来进行，包括但不限于微量热法、圆形二色性法、毛细管区带电泳法、核磁共振波谱法、荧光光谱法或其组合。在不限制本发明的范围的前提下，下面提供测量PARP抑制剂生物活性的技术的一些实例。
荧光显微镜法：本发明的一些实施方案包括用荧光显微镜法来测量本发明的PARP抑制剂的PARP抑制活性。使用荧光显微镜可通过高化学特异性荧光标记探针，如抗体，来识别正在观察的结构的分子组成。该方法中，可将一个荧光团直接偶联到一个PARP蛋白上，并将该蛋白引回到细胞中。荧光类似物的行为像天然蛋白一样，因此可用来揭示细胞中该PARP蛋白的分布和行为。和NMR、红外光谱、圆二色性和其他技术一样，蛋白质内在的荧光衰减及其相关的荧光各向异性观察、碰撞猝灭和共振能转移都是PARP蛋白检测技术。天然荧光蛋白质可用作荧光探针。维多利亚发光水母产生一种称为绿荧光蛋白(GFP)的天然荧光蛋白质。将荧光探针融合到靶标蛋白中可使荧光显微镜可视化并通过流式细胞仪进行定量测定。
此处仅作为实例，列出一些探针标记物，例如荧光素及其衍生物、羧基荧光素、若丹明及其衍生物、atto标记、荧光红和荧光橙：cy3/cy5替代物、长寿命镧系复合物、长波长标记-达800nm、DY花青标记和藻胆蛋白。此处仅作为实例，一些探针为偶联物，如异硫氰酸酯偶联物、抗生物素蛋白偶联物和生物素偶联物。此处仅作为实例，一些探针为酶底物，如和荧光底物和显色底物。此处仅作为实例，有些探针为荧光染料，如FITC(绿荧光，激发/发射＝506/529nm)、若丹明B(橙色荧光，激发/发射＝560/584nm)和尼罗蓝A(红色荧光，激发/发射＝636/686nm)。荧光纳米颗粒可用于各种类型的免疫分析。荧光纳米颗粒基于不同的材料，如聚丙烯腈和聚苯乙稀等。荧光分子转子为微环境限制感测器，当转动受到限制时，则发荧光。几个分子受限的实例包括染料(积聚)增加、结合到抗体或被捕获在肌动蛋白的聚合物化过程中。IEF(等电聚焦)是两性电解质，主要是蛋白质的分析工具。使用荧光IEF标记物的IEF-凝胶电泳一个优势是直接观察梯度形成的可能性。荧光IEF标记物也可在280nm(20℃)条件下用UV吸收检测。
可在固态支持物上合成肽库，通过使用显色受体，后续染色固态支持物可一一选择。如果受体不能指示任何颜色，可对其结合抗体进行染色。该方法不仅可用于蛋白质受体，也可用于筛选合成人工受体的结合配体以及筛选新金属结合配体。还可使用自动化HTS和FACS(荧光激活细胞分选器)方法。
免疫分析：本发明的一些实施方案包括用免疫分析来测量本发明的PARP抑制剂的PARP抑制活性。在如采用电泳法分离蛋白质的蛋白质印迹的免疫印迹法中，单个蛋白质可通过其抗体来识别。免疫分析可为竞争性免疫分析，其中分析物与一个标记的抗原竞争有限的抗体分子(如放射免疫分析法，EMIT)。免疫分析也可能是非竞争性的，其中抗体以过量存在并被标记。随着分析物抗原复合物的增加，标记的抗体-抗原复合物也可能增加(如ELISA)。抗体如果是通过对实验动物注射抗原产生的，则可能是多克隆的，如果是通过细胞融合或细胞培养技术产生的，则可能是单克隆。免疫分析中，抗体可作为被分析的抗原的特异试剂。
在不限制本发明的范围和内容的前提下，下面列出一些类型的免疫分析法，但并不限于这些方法：RIA(放射免疫分析)、酶免疫分析如ELISA(酶联免疫分析)、EMIT(酶扩大免疫分析技术)、微粒酶免疫分析(MEIA)、LIA(发光免疫分析)和FIA(荧光免疫分析)。抗体-可用作第一抗体或第二抗体-均可用放射性同位素(如125I)、荧光染料(如FITC)或酶(如HRP或AP)标记，这些标记物可催化荧光或发光反应。
生物素或维生素H是一个继承了对抗生物素蛋白和链霉抗生物素蛋白特异亲和力的辅酶。这一相互作用使生物素化的肽在各种定性和定量生物技术分析中成为一个很有用的工具。为了通过最大限度降低位阻以改善生物素/链霉抗生物素蛋白的识别，可能有必要增加生物素和肽之间的距离。这可以通过在生物素和肽之间偶联一个间隔分子(如6-氨基己酸)来实现。
生物素化蛋白质的生物素定量分析提供一个灵敏的荧光分析法，用来测定蛋白质上生物素标记的数目。生物素化肽广泛地用于需要至少一种相互作用伙伴固定到链霉抗生蛋白涂层的珠、膜、玻璃载片或微滴定板上的各种生物医学筛选***。该分析基于猝灭染料标记的配体从一个试剂的生物素结合位点的位移。为了将空间受限无法接近的多标记蛋白中的生物素基团暴露给该试剂，可用蛋白酶处理蛋白质以消化该蛋白质。
EMIT是一种可避免常用分离步骤的竞争性结合免疫分析方法。一种蛋白质用酶标记的免疫分析，且酶-蛋白质-抗体复合物没有酶活性，因此允许对未标记的蛋白质进行定量。本发明的一些实施方案包括用ELISA来分析PARP。ELISA基于连接到固态支持物的选择性抗体与酶反应结合来产生能够检测低含量蛋白质的***。该方法亦称为酶免疫分析法或EIA。蛋白质是由制备成针对其的抗体检测的，即该蛋白质就是抗体的抗原。经常使用单克隆抗体。
检验可能需要抗体被固定到一个固体表面，如试管的内表面，以及制备偶连到一个酶的相同抗体。酶可为一个从无色底物产生显色产物的酶(如β-半乳糖苷酶))。例如，该检验可通过用待分析的抗原溶液(如蛋白质)充填试管来进行。存在的任何抗原分子可能结合到固定的抗体分子。可将抗体-酶偶联物加到反应混合物中。偶联物的抗体部分结合到任何先前结合的抗原分子，产生一个抗体-抗原-抗体夹层。洗掉任何未结合的偶联物后，可加入底物溶液。经过一段预定的时间间隔后，反应被停止(如通过加入1N NaOH)，形成的显色产物的浓度用分光光度计测量。颜色的强度与结合的抗原浓度成正比。
也可对ELISA加以改变来测量抗体的浓度，在这种情况下，分析板的孔用适当的抗原涂布。可加入含有抗体的溶液(如血清)。当它有时间结合到固定的抗原后，可加入酶-偶联物抗免疫球蛋白，其中包含针对正在测试的抗体的抗体。洗掉任何未反应的试剂后，可加入底物。产生的颜色强度与结合的酶标记抗体的量(因此与正分析的抗体的浓度)成正比。
本发明的一些实施方案包括用放射免疫分析来测量本发明的PARP抑制剂的PARP抑制活性。放射性同位素可用来研究少量化合物的体内代谢、分布和结合。使用了体内放射性同位素1H、12C、31P、32S和127I，如3H、14C、32P、35S和125I。在96孔板的受体固定方法中，受体可利用抗体或化学方法固定在每个孔中，并向每个孔中加入放射性标记的配体来诱发结合。未结合的配体可洗去，然后可通过结合的配体或洗掉的配体的放射性定量分析来对标准进行测定。接着，加入筛选目标化合物可诱发与受体的竞争性结合反应。如果化合物对受体比对标准放射性配体显示更高的亲和力，大多数放射性配体将不会结合到受体上，可留在溶液中。因此，通过分析结合的放射性配体(或洗掉的配体)的量，可得到测试化合物对受体的亲和力。
当受体不能被固定到96孔板或当配体结合需要在溶液相中进行的时候，可能需要采用过滤膜方法。换句话说，当配体-受体在溶液中的结合反应之后，如果将反应溶液用硝化纤维素滤纸过滤，包括配体的小分子可能会穿过滤纸，只有蛋白质受体可留在滤纸上。只有牢固地结合到受体上的配体才会留在滤纸上，且加入的化合物的相对亲和力可用标准放射性配体的定量分析来鉴定。
本发明的一些实施方案包括用荧光免疫分析来测量本发明的PARP抑制剂的PARP抑制活性。荧光免疫方法基于标记的配体对未标记的配体在高特异性位点上的竞争结合。根据变化的分析物浓度的荧光寿命的变化，荧光技术可用来进行免疫分析。这一技术适用于短寿命染料，如异硫氰酸荧光素(FITC)(供体)，其荧光可为能量转移到曙红(受体)而猝灭。可采用一些光致发光化合物，如花青、噁嗪、噻嗪、卟啉、酞菁染料、荧光红外发射多核芳烃、藻胆蛋白、方酸染料、以及有机金属复合物、烃类和偶氮染料。
基于荧光的免疫方法可能为异源或同源的。异源免疫分析包括结合形式的游离标记分析物的物理分离。分析物或抗体可结合到一个固态表面。同源免疫分析不包括物理分离。双抗体荧光团标记的抗原参与一个与抗体的平衡反应，这些抗体针对该抗原和荧光团。标记的和未标记的抗原可能竞争有限数目的抗抗原抗体。
有些荧光免疫分析法包括简单的荧光标记方法、荧光共振能量转移(FRET)、时间分辨荧光分析(TRF)、以及扫描探针显微镜分析(SPM)。简单荧光标记法可用于受体-配体结合分析、通过使用适当的荧光而用于酶活性分析，以及用作各种体内生理变化的荧光指示计，如pH、离子浓度和电压。
利用苯并吡喃酮化合物的治疗方法
在一个方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药疗效量的PARP抑制剂如苯并吡喃酮化合物。候选PARP抑制剂包括式I-III的化合物，用于治疗癌症，其中式III包括IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm和IIIn。
在一些实施方案中，本发明通过对受试者单独给药疗效量的一种或多种苯并吡喃酮化合物而提供一种治疗癌症的方法。可治疗的癌症的实例包括但不限于急性淋巴细胞性白血病、成人急性淋巴细胞性白血病、儿童急性髓细胞样白血病、成人急性髓细胞样白血病、肾上腺皮质癌、儿童肾上腺皮质癌、艾滋相关的癌症、艾滋相关的淋巴癌、肛癌、阑尾癌、儿童小脑星形细胞瘤、儿童大脑星形细胞瘤、基细胞癌、肝外膀胱癌、儿童膀胱癌、骨肉瘤即骨癌、恶性纤维组织细胞瘤、儿童脑干神经胶质瘤、脑瘤-小脑星形细胞瘤、脑瘤-大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤-儿童、脑瘤-室管膜瘤、脑瘤-成神经管细胞瘤、脑瘤-幕上原始神经外胚瘤、脑瘤-视通路和下丘脑神经胶质瘤、脑瘤-其他、乳腺癌、支气管腺瘤、类癌瘤、伯基特淋巴癌、类癌瘤-儿童、类癌瘤-胃肠、原发性不知名癌、中枢神经***淋巴癌-原发性、子***、儿童癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病、慢性骨髓增殖性疾病、结肠癌、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴癌、促***增殖小圆细胞瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤因肉瘤(尤因家族肿瘤)、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠类癌瘤、胃肠基质细胞瘤(GIST)、生殖细胞瘤-颅外、生殖细胞瘤性腺外、生殖细胞瘤-卵巢、妊娠期滋养层瘤、成人神经胶质瘤、儿童脑干神经胶质瘤、儿童大脑星形细胞瘤神经胶质瘤、儿童视通路和下丘脑神经胶质瘤、胃类癌、毛细胞性白血病、头颈癌、成人原发性肝细胞(肝)癌、儿童原发性肝细胞(肝)癌、成人和儿童霍奇金淋巴癌、妊娠期霍奇金淋巴癌、咽下癌、儿童下丘脑和视通路神经胶质瘤、眼内黑素瘤、胰岛细胞癌(内分泌胰腺)、卡波西肉瘤、肾(肾细胞)癌、儿童肾癌、喉癌、成人急性淋巴性白血病、儿童急性淋巴性白血病、成人急性髓细胞样白血病、儿童急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞样白血病、毛细胞性白血病、***和口腔癌、成人原发性肝癌、儿童原发性肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、艾滋相关淋巴癌、伯基特淋巴癌、皮肤T细胞淋巴癌、成人霍奇金淋巴癌、儿童霍奇金淋巴癌、成人非霍奇金淋巴癌、儿童非霍奇金淋巴癌、妊娠期非霍奇金淋巴癌、原发性中枢神经***淋巴癌、巨球蛋白血症-瓦尔登斯特伦氏症、骨恶性纤维组织细胞瘤/骨肉瘤、儿童髓母细胞瘤、黑素瘤、眼内黑素瘤(眼睛)、梅克尔细胞癌、成人恶性间皮瘤、儿童间皮瘤、不明原发灶颈部鳞状细胞转移癌、口腔癌、多发性内分泌腺瘤形成综合征、多发性骨髓瘤/浆细胞瘤、蕈样肉芽肿病、骨髓发育不良综合征、骨髓增殖异常/骨髓增殖病、慢性髓细胞样白血病、成人急性髓细胞样白血病、儿童急性髓细胞样白血病、多发性骨髓瘤(骨髓癌)、慢性骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、儿童鼻咽癌、神经母细胞瘤、成人非霍奇金淋巴癌、儿童非霍奇金淋巴癌、妊娠期非霍奇金淋巴癌、非小细胞肺癌、儿童口腔癌、***口腔癌和口咽癌、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、儿童卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、卵巢低恶度潜能肿瘤、胰腺癌、儿童胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、周围神经***(PNS)癌、鼻旁窦和鼻腔癌、副甲状腺癌、***癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤、垂体瘤、浆细胞瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺胚细胞瘤、妊娠合并乳腺癌、妊娠合并霍奇金淋巴癌、妊娠合并非霍奇金淋巴癌、原发性中枢神经***淋巴癌、***癌、直肠癌、肾细胞(肾)癌、儿童肾细胞(肾)癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、儿童横纹肌肉瘤、唾腺癌、儿童唾腺癌、肉瘤-尤文家族肿瘤、卡波西肉瘤、成人软组织肉瘤、儿童软组织肉瘤、子宫肉瘤、塞泽里综合征、皮肤癌(非黑素瘤)、儿童皮肤癌、皮肤癌(黑素瘤)、梅克尔细胞皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、鳞状上皮细胞癌(非黑素瘤)、不明原发灶颈部鳞状细胞转移癌、胃癌、儿童胃癌、儿童幕上原始神经外胚瘤、皮肤T细胞淋巴癌、睾丸癌、咽喉癌、儿童胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、儿童甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、妊娠期滋养层瘤、成人不明原发灶癌、儿童不明原发灶癌、尿道癌、子宫内膜子宫癌、子宫肉瘤、***癌、儿童视通路和下丘脑神经胶质瘤、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、肾母细胞瘤。
在一些优选的实施方案中，所述癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，本发明的方法包括与式I-III的化合物中的一种(如式IIIa-IIIh的化合物之一，尤其是IIIg或IIIh或IIIk，最佳为IIIg)联合给药抗癌药物。在一些实施方案中，本发明的方法包括联合给药一种式I、II或III的化合物(如式IIIa-IIIh的化合物之一，尤其是IIIg或IIIh或IIIk，最佳为IIIg)以及抗肿瘤剂。在一些实施方案中，化学治疗药物为顺铂、卡铂或奥沙利铂或它们中两个或更多个的组合。在一些实施方案中，化学治疗药物为奥沙利铂。在一些实施方案中，化学治疗药物为吉西他滨。在一些实施方案中，化学治疗药物为奥沙利铂和吉西他滨。
在一些实施方案中，本发明通过联合给药苯并吡喃酮化合物和一种或多种抗肿瘤剂，如OX和/或GEM，从而提供一种治疗癌症的方法。这样的组合可用来治疗癌症，包括但不限于急性淋巴细胞性白血病、成人急性淋巴细胞性白血病、儿童急性髓细胞样白血病、成人急性髓细胞样白血病、肾上腺皮质癌、儿童肾上腺皮质癌、艾滋相关的癌症、艾滋相关的淋巴癌、肛癌、阑尾癌、儿童小脑星形细胞瘤、儿童大脑星形细胞瘤、基细胞癌、肝外膀胱癌、儿童膀胱癌、骨肉瘤即骨癌、恶性纤维组织细胞瘤、儿童脑干神经胶质瘤、脑瘤-小脑星形细胞瘤、脑瘤-大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤-儿童、脑瘤-室管膜瘤、脑瘤-成神经管细胞瘤、脑瘤-幕上原始神经外胚瘤、脑瘤-视通路和下丘脑神经胶质瘤、脑瘤-其他、乳腺癌、支气管腺瘤、类癌瘤、伯基特淋巴癌、类癌瘤-儿童、类癌瘤-胃肠、原发性不知名癌、中枢神经***淋巴癌-原发性、子***、儿童癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病、慢性骨髓增殖性疾病、结肠癌、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴癌、促***增殖小圆细胞瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤因肉瘤(尤因家族肿瘤)、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠类癌瘤、胃肠基质细胞瘤(GIST)、生殖细胞瘤-颅外、生殖细胞瘤-性腺外、生殖细胞瘤-卵巢、妊娠期滋养层瘤、成人神经胶质瘤、儿童脑干神经胶质瘤、儿童大脑星形细胞瘤神经胶质瘤、儿童视通路和下丘脑神经胶质瘤、胃类癌、毛细胞性白血病、头颈癌、成人原发性肝细胞(肝)癌、儿童原发性肝细胞(肝)癌、成人和儿童霍奇金淋巴癌、妊娠期霍奇金淋巴癌、咽下癌、儿童下丘脑和视通路神经胶质瘤、眼内黑素瘤、胰岛细胞癌(内分泌胰腺)、卡波西肉瘤、肾(肾细胞)癌、儿童肾癌、喉癌、成人急性淋巴性白血病、儿童急性淋巴性白血病、成人急性髓细胞样白血病、儿童急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞样白血病、毛细胞性白血病、***和口腔癌、成人原发性肝癌、儿童原发性肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、艾滋相关淋巴癌、伯基特淋巴癌、皮肤T细胞淋巴癌、成人霍奇金淋巴癌、儿童霍奇金淋巴癌、成人非霍奇金淋巴癌、儿童非霍奇金淋巴癌、妊娠期非霍奇金淋巴癌、原发性中枢神经***淋巴癌、巨球蛋白血症-瓦尔登斯特伦氏症、骨恶性纤维组织细胞瘤/骨肉瘤、儿童髓母细胞瘤、黑素瘤、眼内黑素瘤(眼睛)、梅克尔细胞癌、成人恶性间皮瘤、儿童间皮瘤、不明原发灶颈部鳞状细胞转移癌、口腔癌、多发性内分泌腺瘤形成综合征、多发性骨髓瘤/浆细胞瘤、蕈样肉芽肿病、骨髓發育不良综合征、骨髓增殖异常/骨髓增殖病、慢性髓细胞样白血病、成人急性髓细胞样白血病、儿童急性髓细胞样白血病、多发性骨髓瘤(骨髓癌)、慢性骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、儿童鼻咽癌、神经母细胞瘤、成人非霍奇金淋巴癌、儿童非霍奇金淋巴癌、妊娠期非霍奇金淋巴癌、非小细胞肺癌、儿童口腔癌、***口腔癌和口咽癌、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、儿童卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、卵巢低恶度潜能肿瘤、胰腺癌、儿童胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、副甲状腺癌、***癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、成松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层瘤、垂体瘤、浆细胞瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺胚细胞瘤、妊娠合并乳腺癌、妊娠合并霍奇金淋巴癌、妊娠合并非霍奇金淋巴癌、原发性中枢神经***淋巴癌、***癌、直肠癌、肾细胞(肾)癌、儿童肾细胞(肾)癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、儿童横纹肌肉瘤、唾腺癌、儿童唾腺癌、肉瘤-尤文家族肿瘤、卡波西肉瘤、成人软组织肉瘤、儿童软组织肉瘤、子宫肉瘤、塞泽里综合征、皮肤癌(非黑素瘤)、儿童皮肤癌、皮肤癌(黑素瘤)、梅克尔细胞皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、鳞状上皮细胞癌(非黑素瘤)、不明原发灶颈部鳞状细胞转移癌、胃癌、儿童胃癌、儿童幕上原始神经外胚瘤、皮肤T细胞淋巴癌、睾丸癌、咽喉癌、儿童胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、儿童甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、妊娠期滋养层瘤、成人不明原发灶癌、儿童不明原发灶癌、尿道癌、子宫内膜子宫癌、子宫肉瘤、***癌、儿童视通路和下丘脑神经胶质瘤、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、肾母细胞瘤。
在一些实施方案中，本发明的方法还包括与其他治疗联合给药候选PARP抑制剂，如式(I)-(III)的苯并吡喃酮化合物。可与本发明化合物联合给药的疗法的选择取决于治疗的病症。例如为了治疗癌症，本发明有些实施方案的化合物可与放射疗法、单克隆抗体疗法、化学疗法、骨髓移植或其组合联合使用。
在其他实施方案中，本发明的候选PARP抑制剂可用来治疗癌症，以便对癌细胞进行放射致敏或化学致敏。本发明的候选PARP抑制剂可为“抗癌药剂”，该术语还包括“抗肿瘤细胞生长药剂”和“抗赘生物药剂”的含义。放射致敏剂已知可增加癌细胞对电磁辐射毒性效应的敏感性。许多癌症治疗方案目前使用由x射线的电磁辐射激活的放射致敏剂。X射线激活的放射致敏剂的实例包括但不限于下面列出的物质：甲硝哒唑、米索硝唑、去甲米索硝唑、哌莫硝唑、依他硝唑、尼莫拉唑、丝裂霉素C、RSU 1069、SR 4233、EO9、RB 6145、烟酰胺、5-溴脱氧尿苷(BUdR)、5-碘代脱氧尿苷(IUdR)、溴脱氧胞苷、氟脱氧尿苷(FudR)、羟基脲、顺铂及其治疗上有效量的类似物和衍生物。
癌症治疗的光动力学疗法(PDT)采用可见光作为致敏剂的辐射激活剂。光动力学放射致敏剂的实例包括但不限于以下物质：血卟啉衍生物、光卟啉、苯并卟啉衍生物、NPe6、初卟啉锡SnET2、pheoborbide-α、细菌叶绿素-α、萘酞菁、酞菁、酞菁锌及其治疗上有效量的类似物和衍生物。
化学致敏剂已知可增加癌细胞对化疗化合物毒性效应的敏感性。可与PARP抑制剂结合使用的示范性抗肿瘤剂包括但不限于亚德里亚霉素、喜树碱、达卡巴嗪、卡铂、顺铂、柔红霉素、多西紫杉醇、阿霉素、干扰素(α、β、γ)、白介素2、伊立替康、紫杉醇、链脲霉素、替莫唑胺、托泊替康及其治疗上有效量的类似物或衍生物。此外，可与PARP抑制剂结合使用的示范性抗肿瘤剂包括但不限于5-氟尿嘧啶、亚叶酸、5′-氨基-5’-脱氧胸苷、氧、卡波金、红细胞输血、全氟烃(如Fluosol-DA)、2，3-DPG、BW12C、钙通道阻滞药、己酮可可碱、抗血管增殖化合物、肼苯哒嗪和L-BSO。
此处公开的治疗方法可通过口服、经粘膜、经口腔、经鼻、吸入、肠胃外、静脉、皮下、肌肉、舌下、透皮和直肠给药。
癌症的实例
Her-2相关的癌症
Her-2病是一种乳腺癌。特点是侵袭性生长，预后不良，该病可因肿瘤细胞中存在过量的称为HER2(人表皮生长因子受体-2)基因引起。可与此处公开的PARP抑制剂结合使用的治疗方法包括但不限于Her-2抗体，如赫赛汀、抗激素(如选择性***受体调节剂(SERM))、化学治疗和放射治疗、芳香酶抑制剂(如阿那曲唑、来曲唑和依西美坦)以及抗***(如氟维司群(Faslodex))。
乳腺癌
在一些实施方案中，本发明提供了一个治疗乳腺癌的方法，包括联合给药有效量的苯并吡喃酮化合物和一种或多种抗肿瘤剂。
有几种类型的乳腺癌可通过本发明提供的方法治疗。原位小叶癌和原位乳腺管癌分别为在乳小叶和乳腺管中形成的乳腺癌，但是没有扩散到***周围的脂肪组织或身体的其他部位。浸润性(侵入性)小叶癌和乳腺管癌是在乳小叶和乳腺管中形成的癌症，且已经扩散到***周围的脂肪组织或身体的其他部位。其他能够获益于本发明提供的疗法的乳腺癌有髓质癌、胶质癌、小管癌，以及炎症性乳腺癌。
在一些实施方案中，本发明提供所谓“三阴”乳腺癌的治疗方法。经典生物标记物识别的乳腺癌有几种类型，如***受体(ER)和/或孕酮(PR)受体阳性肿瘤、HER2-扩增肿瘤和ER/PR/HER2-阴性肿瘤。这三种亚型据报道是由基因表达谱从多发性乳腺癌识别的，显示基底细胞样亚型表达谱且预后不良。三阴乳腺癌的特征是ER/PR/HER2-阴性肿瘤。
乳腺癌患者可用的治疗方法有，手术、免疫疗法、放射疗法、化学疗法、内分泌疗法，或这些疗法之组合。***肿瘤切除术和***切除术是乳腺癌患者可采用的两个可能的手术程序。
乳腺癌一般采用手术切除癌性损伤加辅助治疗的组合疗法，辅助治疗为放射治疗和化疗或两者兼用，以攻击手术后可能留下来的癌细胞。乳腺癌可宽泛地根据是否存在激素受体(HR)来分类。激素受体阳性(HR+)乳腺癌的特征是女性激素受体-***受体(ER)或孕激素受体(PR)的表达，或两种受体的同时表达。ER+阳性乳腺癌的辅助治疗通常包括化疗，即采用选择性***受体调节剂(SERM)，如他莫昔芬或雷洛昔芬进行治疗。不幸的是，尽管有70％的乳腺癌为ER阳性，SERM治疗对剩下的30％HR阴性乳腺癌却是无效的。相应地，对ER阴性乳腺癌尝试了其他辅助化疗，如采用蒽环类抗生素(单独使用或与紫杉烷合用)进行治疗。尤其是所谓的三阴转移性乳腺癌(即ER阴性、PR阴性和人表皮生长因子受体2(HER2)阴性乳腺癌)用标准治疗方法是很难治的，SERM化疗则完全无效。
化学治疗采用抗肿瘤剂来防止癌症细胞增殖、侵入、转移并导致患者死亡。有几种药物可用来治疗乳腺癌，包括细胞毒性药物如阿霉素、环磷酰胺、甲氨蝶呤、紫杉醇、噻替派、米托蒽醌、长春新碱，或它们之组合。如果剩余的***组织保存了内分泌敏感性，内分泌治疗可能为一种有效的疗法。这种疗法给药的制剂包括它莫西芬、醋酸甲地孕酮、安鲁米特、氟羚甲基***、亮丙瑞林、戈舍瑞林和***。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射疗法、化学疗法或内分泌疗法结合使用，本发明的方法可为乳腺癌患者提供有益的效果。
卵巢癌
在另一方面，本发明提供一种治疗卵巢癌的方法，包括上皮性卵巢肿瘤。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。优选的是，本发明提供了一个治疗选自下面的卵巢癌的方法：卵巢腺癌和已经从卵巢转移到腹腔的腺癌。手术、免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法或它们之组合为卵巢癌患者可用的可能治疗方法。一些可能的手术程序包括压实、单边或双边卵巢切除术和/或单边或双边输卵管切除术。
可用的抗癌药物包括环磷酰胺、依托泊苷、六甲蜜胺和异环磷酰胺。利用它莫西芬激素治疗可用来缩小卵巢瘤。放射治疗可为外部射线放射治疗和/或近距离辐射治疗。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射疗法、化学治疗或内分泌疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为卵巢癌患者提供有益的效果。
子***
在另一方面，本发明提供了一种治疗子***的方法，首选的是子宫颈上皮中的腺癌。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
该癌症有两种类型：鳞状上皮细胞癌和腺癌。前者占所有子***的大约80-90％，形成于外宫颈(接近***的部分)和子宫内膜(接近子宫的部分)的交汇处。后者是在子宫内膜产生黏液的腺细胞中形成的。有些子***具有这两者的特征，并被称为腺鳞癌或混合癌。
子***可用的主要治疗方法为手术、免疫疗法、放射治疗和化学治疗。一些可能的手术选项为冷冻手术、子宫颈切除术和根治性子宫颈切除术。子***患者的放射治疗包括外部射线照射治疗或近距离照射治疗。作为化学治疗之一部分，治疗子***的抗癌药物包括顺铂、卡铂、羟基脲、依立替康、博来霉素、新长春碱、丝裂霉素、异环磷酰胺、氟尿嘧啶、依托泊苷、甲氨蝶呤或它们之组合。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射治疗或化学治疗结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为子***患者提供有益的效果。
***癌
在一个其他方面，本发明提供了治疗***癌的方法，优选的是选自下面的***癌：腺癌或已经转移到骨的腺癌。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
***癌在男性包围尿道前部的***器官中形成。***有几个细胞类型，但是99％的***癌为形成于负责产生***的腺细胞中的腺癌。
手术、免疫疗法、放射疗法、冷冻疗法和化学治疗是治疗***患者的一些可用的治疗方法。可能的治疗***癌的手术程序包括根治性耻骨后间隙***切除术，根治性******切除术和腹腔镜根治性***切除术。一些放射治疗选项为外部射线照射，包括三维适形放射治疗、放射性强度调制适形放射治疗和适形质子束放射治疗。近距离放射疗法(放射源植入或间隙放射疗法)也是一种可用的治疗***癌的方法。冷冻手术是另一个可用来治疗局灶性***癌细胞的可能方法。
激素治疗，亦称为雄性激素贫化疗法或雄性激素抑制疗法，也可用于治疗***癌。这一疗法有几个方法可用，包括睾丸切除术，在这一手术中，产生90％的雄性激素的睾丸被切除。另一个方法是给药释放黄体化激素的激素(LHRH)类似物以减低雄性激素水平。可用的LHRH类似物包括醋酸亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲谱瑞林和组氨瑞林。也可给药一种LHRH拮抗剂，如阿巴瑞克。
另一个可用的治疗为抗雄性激素制剂治疗，该制剂可阻断体内雄性激素的活性。此类制剂包括氟他米特、比卡鲁胺和尼鲁米特。这一治疗典型情况下与LHRH类似物或睾丸切除术结合使用，被称为组合型雄性激素阻断(CAB)。
当***瘤已经扩散到***以外且激素治疗不再有效时，化学治疗可能是合适的。可给药抗癌药物，如阿霉素、雌氮芥、依托泊苷、米托蒽醌、长春碱、紫杉醇、多西他赛、卡铂和***来降低***癌的生长速度，减轻症状并改善生活品质。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射疗法、化学治疗或激素疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为***癌患者提供有益的效果。
胰腺癌
在另一方面，本发明提供了治疗胰腺癌的方法，优选的是选自下面的胰腺癌：胰腺管组织上皮样瘤和胰腺管腺癌。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
在美国，胰腺癌是成人癌症死亡的第四大死因。胰腺癌治疗中最有前景的药物之一是奥沙利铂，这是一种有机铂分子，可形成链间和链内DNA加合物/交叉链接并引发高比例的DNA单链断裂。但是，与吉西他滨单独使用相比，吉西他滨和奥沙利铂联用未能显示统计上显著的优势。因而急需开发新颖的药剂和药物组合。PARP-1可对单链和双链DNA断裂起着DNA损害感测器的作用，并在许多细胞过程，包括DNA修复的调控中起着关键的作用。PARP-1还起着启动子特异的NF-κB转录共活化剂的作用，NF-κB为一个在胰腺癌组织和人胰腺癌细胞系中组构激活的转录因子。本发明的一些实施方案说明了PARP-1抑制剂IIIg单独使用和与奥沙利铂联用时在胰腺癌细胞系中的抗肿瘤活性及其在胰腺癌原位裸鼠模型中的治疗功效。
胰腺癌最常见的类型是发生在胰腺管内衬层的腺癌。现有的可能治疗胰腺癌的方法为手术、免疫疗法、放射治疗和化学治疗。可能的手术治疗选项包括末梢或整体胰腺切除术以及胰十二指肠切除术(惠普尔手术)。
放射治疗可能是胰腺癌患者的一个选项，首选的外部射线照射，用体外的一台机器将射线聚焦在肿瘤上。另一个选项是手术过程中进行电子束照射。
化学治疗也可以用来治疗胰腺癌患者。适当的抗癌药物包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、丝裂霉素、异环磷酰胺、阿霉素、链佐星、氯尿霉素或它们的组合。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射治疗或化学治疗结合使用，本发明的方法可为胰腺癌患者提供有益的效果。
膀胱癌
在另一方面，本发明提供治疗膀胱癌的方法，首选的是膀胱移行细胞癌。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
膀胱癌是尿路上皮癌(移行细胞癌)或膀胱内衬层上皮细胞的肿瘤。膀胱癌的其余病例为鳞片细胞癌、腺癌和小细胞癌。取决于是否是非浸润性或浸润性，以及是否是乳突状或平坦的，尿路上皮癌可有几个亚型。非浸润性肿瘤位于尿路上皮中，即膀胱的最里层，而浸润性肿瘤已经从尿路上皮扩散到膀胱主肌壁的更深层。浸润性乳突上尿路上皮癌像个较细的手指样的凸出物，分叉进入膀胱的中空中心，同时也向外长入膀胱壁。非浸润性乳突尿路上皮瘤向膀胱的中心生长。尽管非浸润性平坦的尿路上皮瘤(亦称为平坦原位癌)限于最靠近膀胱中空部分的细胞层，浸润性平坦尿路上皮癌则侵入到膀胱更深的部分，尤其是肌肉层。
为了治疗膀胱癌，可应用手术、放射治疗、免疫疗法、化学治疗，或它们的组合治疗。一些可能的手术选项为经尿道切除，膀胱切除术或根治性膀胱切除术。膀胱癌的放射疗法可能包括外部光束照射和近距离放射治疗。
免疫疗法是另一个可用来治疗膀胱癌患者的方法。典型情况下，这是在膀胱内进行的，即通过导管将治疗剂直接送入膀胱。一个方法是卡介菌法(BCG)，有时候将结核疫苗中的一个细菌通过导管直接送入膀胱中。身体开始对该细菌进行免疫响应，因此攻击并杀死癌细胞。
另一个免疫方法是给药能够调节免疫应答的干扰素和糖蛋白。α干扰素通常被用来治疗膀胱癌。
抗癌药物可用于化学疗法来治疗膀胱癌，包括噻替派、甲氨蝶呤、长春碱、阿霉素、环磷酰胺、紫杉醇、卡铂、顺铂、异环磷酰胺、吉西他滨，或它们的组合。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射治疗、免疫疗法、化学治疗，或它们的组合治疗，本发明的方法可为膀胱癌患者提供有益的效果。
B-细胞淋巴瘤
由恶性(癌性)B细胞淋巴细胞造成的非霍奇金淋巴瘤是淋巴瘤已知类型的一个大的亚组(在美国约占85％)(其他两个亚组为T细胞淋巴瘤和细胞类型为自然杀伤细胞或未知细胞的淋巴瘤)。取决于细胞之间复杂的信号发送过程和与体内的异物相互作用，细胞在其生命周期中经历许多变化。在B细胞的生命周期中，可发生各种类型的淋巴瘤或白血病。
急性髓细胞样白血病
在另一方面，本发明提供治疗急性髓细胞样白血病(AML)的方法，首选的是外周血液中的急性早幼粒细胞白血病。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
AML起源于骨髓，但是可以扩散到身体的其他部分，包括***、肝、脾、中枢神经***以及睾丸。它是急性的，意思是它可以快速形成，如果在几个月内不治疗，则可能是致命的。AML的特征是免疫骨细胞，通常为粒细胞或单核细胞的持续增殖和积累。
AML可用免疫疗法、放射疗法、化学治疗、骨髓或外周血干细胞移植，或它们的组合疗法治疗。放射疗法包括外部光束照射，可能会有副作用。可用于化学疗法治疗AML的抗癌药物包括阿糖胞苷、蒽环类抗生素、蒽二酮、伊达比星、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、硫鸟嘌呤、长春新碱、***、依托泊苷，或它们的组合治疗。
单克隆抗体治疗可用于治疗AML患者。在对患者给药之前，可将小细胞或放射性化学品连接到这些抗体上，以便提供一个杀死身体里的白血病细胞的方法。结合到AML细胞CD33上的单克隆抗体吉妥单抗可用来治疗不能耐受先前的化学治疗的AML患者。骨髓或外周血干细胞移植可用来治疗AML患者。一些可能的移植手术有同种异体移植或自体移植。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射治疗、化学治疗或移植治疗结合使用，本发明的方法可为白血病患者提供有益的效果。
还有其他类型的白血病也可通过本发明提供的方法来治疗，包括但不限于急性淋巴性白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、毛细胞性白血病、脊髓发育不良，以及骨髓组织增殖疾病。
肺癌
在另一方面，本发明提供治疗肺癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
肺癌最常见的类型是非小细胞肺癌(NSCLC)，大约占肺癌的80-85％，非小细胞肺癌分为鳞状上皮细胞癌、腺癌和大细胞未分化癌症。小细胞肺癌占肺癌的15-20％。
肺癌治疗的选项有，手术、免疫疗法、放射治疗、化学治疗、光动力学疗法，或这些疗法之组合。治疗肺癌的一些可能的手术选项为分段或楔形切除术、肺叶切除术或肺切除术。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。
用于化疗治疗肺癌的一些抗癌药物包括顺铂、卡铂、紫杉醇、多西紫杉醇、吉西他滨、长春瑞滨、伊立替康、依托泊苷、长春碱、吉非替尼、异环磷酰胺、甲氨蝶呤或它们的组合。光动力学治疗(PDT)可用于治疗肺癌患者。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射疗法、化学治疗或光动力学疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为肺癌患者提供有益的效果。
皮肤癌
在另一方面，本发明提供治疗皮肤癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
有几种类型的癌症始于皮肤。最常见的类型是基底细胞癌症和鳞状上皮细胞癌症，它们为非黑素瘤皮肤癌。光线性角化病是一种有时候形成鳞状上皮细胞癌的皮肤病症。非黑素瘤皮肤癌很少扩散到身体的其他部分。黑素瘤，皮肤癌的最稀少的形式，更可能侵入周围组织并扩散到身体的其他部分。有不同类型的治疗方法可治疗患有非黑素瘤和黑素瘤皮肤癌和光线性角化病患者，包括放射疗法、化学治疗和光动力学治疗。皮肤癌治疗的一些手术选项为莫氏显微外科手术、单纯切除术、电干燥刮除术、冷冻手术和激光手术。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。其他类型正在进行临床试验测试的治疗有生物疗法或免疫疗法、化学免疫疗法、氟尿嘧啶局部化疗法，以及光动力学治疗。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射疗法、化学治疗或光动力学疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为皮肤癌患者提供有益的效果。
眼癌、视网膜母细胞瘤
在另一方面，本发明提供治疗眼睛视网膜母细胞瘤的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
视网膜母细胞瘤是一种视网膜恶性肿瘤。尽管视网膜母细胞瘤可发生在任何年龄，但是最常见于年幼的儿童，通常在5岁之前。这种肿瘤可发生在一只眼睛或两只眼睛。视网膜母细胞瘤通常仅限于眼睛，不会扩散到周围组织或身体的其他部分。试图治疗患者并保存视力的治疗选项包括眼球摘除术(除去眼睛的手术)、放射治疗、冷冻治疗、光凝固术、免疫疗法、热疗和化学治疗。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射治疗、冷冻治疗、光凝固术、热疗和化学治疗结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为眼睛视网膜母细胞瘤患者提供有益的效果。
眼癌，眼内黑素瘤
在另一方面，本发明提供治疗眼内(眼睛)黑素瘤的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
眼内黑素瘤为一种少见的癌症，是在眼睛中称为黑色素层的部位发现癌细胞的一种疾病。黑色素层包括虹膜、睫状体和脉络膜。眼内黑素瘤最常见于中年人群。眼内黑素瘤的治疗包括手术、免疫疗法、放射治疗和激光治疗。手术是治疗眼内黑素瘤最常见的方法。一些可能的手术选项为虹膜切除术、虹膜小梁切除术、虹膜睫状体切除术、脉络膜切除术、眼摘除术以及眼眶摘除术。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。激光治疗可为一束很强的光束来破坏肿瘤、热疗或光凝固术。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、辐射疗法和激光治疗结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为眼内黑素瘤患者提供有益的效果。
子宫内膜癌
在另一方面，本发明提供治疗子宫内膜癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
子宫内膜癌是一种始于子宫内膜，即子宫内衬层的癌症。子宫和子宫内膜癌的一些实例包括但不限于腺癌、腺棘皮瘤、腺鳞癌、***状浆液性腺癌、明细胞腺癌、子宫肉瘤、子宫间质肉瘤、恶性混合型中胚叶肿瘤和平滑肌肉瘤。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、放射治疗、化学疗法、基因治疗、RNA治疗、光动力学治疗、抗血管增殖治疗和免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为子宫内膜癌患者提供有益的效果。
肝癌
在另一方面。本发明提供了治疗原发性肝癌(开始于肝脏的癌症)的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
成人和儿童都可能发生原发性肝癌。对原发性肝癌患者，有不同类型的治疗方法可用。这些包括手术、免疫疗法、放射治疗、化学治疗和经皮无水乙醇注射。可用的手术类型为冷冻治疗、部分肝切除、完全肝切除和射频烧蚀。辐射治疗可为外部射线辐射治疗、近距离辐射治疗、射线增敏剂或放射标记抗体治疗。其他类型的治疗包括温热疗法和免疫疗法。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、辐射疗法、化学疗法、经皮无水乙醇注射、温热疗法和免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为肝癌患者提供有益的效果。
肾癌
在另一方面，本发明提供治疗肾癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
肾癌(亦称为肾细胞癌或肾腺癌)是一种在肾小管内衬层中发现癌细胞的疾病。肾癌可通过手术、放射治疗、化学治疗和免疫疗法来治疗。治疗肾癌的一些可能的手术选项为部分肾切除、单纯肾切除和根治性肾切除。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。干细胞移植也可用来治疗肾癌。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、辐射疗法、化学治疗、免疫疗法和干细胞移植，或它们的组合治疗，本发明的方法可为肾癌患者提供有益的效果。
甲状腺癌
在另一方面，本发明提供治疗甲状腺癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
甲状腺癌是在甲状腺中发现(恶性)癌细胞的一种疾病。甲状腺癌的四种主要形式为乳突状甲状腺癌、小囊甲状腺癌、髓质甲状腺癌、恶性甲状腺癌。甲状腺癌可通过手术、免疫疗法、放射治疗、激素治疗和化学疗法来治疗。手术是治疗甲状腺癌最常见的方法。甲状腺癌的一些可能的手术选项为甲状腺叶切除术、接近完全甲状腺切除术、完全甲状腺切除术和***剥离。放射治疗可能为外部放射治疗，或可能要求摄入含有放射性碘的液体。激素治疗是用激素来制止癌细胞生长。治疗甲状腺癌时，激素可用来使身体停止产生可能造成癌细胞生长的其他激素。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、手术、辐射疗法、激素治疗和化学疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为甲状腺癌患者提供有益的效果。
艾滋相关的癌症
艾滋相关的淋巴瘤
在另一方面，本发明提供治疗爱滋相关的淋巴瘤的方法。该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
艾滋相关的淋巴瘤是在患有获得性免疫缺陷综合征的患者的淋巴***中发现恶性肿瘤细胞的一种疾病。艾滋是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的，该病毒攻击并弱化身体的免疫***。免疫***然后不能对抗侵入身体的感染和疾病。患有HIV疾病的人具有更大的形成感染、淋巴瘤和其他类型癌症的风险。淋巴瘤是影响到淋巴***白细胞的癌症。淋巴瘤分为两个大类：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤都可能发生在艾滋患者中，但是非霍奇金淋巴瘤更为常见。当一个患有艾滋的人得了非霍奇金淋巴瘤时，该淋巴瘤则被称为艾滋相关的淋巴瘤。非霍奇金淋巴瘤可能是不活跃(缓慢生长)的，也可能是攻击性(快速生长)的。艾滋相关的淋巴瘤通常是攻击性的。艾滋相关的淋巴瘤的三种主要类型为弥漫性大B细胞淋巴瘤、B细胞免疫母细胞淋巴瘤和小无裂细胞淋巴瘤。
艾滋相关的淋巴瘤的治疗结合了淋巴瘤治疗和艾滋病治疗。患有艾滋的患者具有较弱的免疫***，治疗可能造成进一步损害。由于这一原因，治疗中，患有艾滋相关的淋巴瘤的患者用药剂量通常比没有艾滋病的淋巴瘤患者用药剂量小一些。高效抗逆转录病毒疗法(HAART)被用来减慢艾滋病毒的发展。另外也使用预防和治疗感染(有时可能很严重)的药物。艾滋相关的淋巴瘤可用化学疗法、免疫疗法、放射治疗和高剂量化学疗法加细胞移植来治疗。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。艾滋相关的淋巴瘤可用单克隆抗体疗法治疗。
通过联合给药苯并吡喃酮化合物和一种或多种抗肿瘤剂或将一种苯并吡喃酮化合物与辐射疗法结合使用，或采用两种治疗方法的组合治疗，本发明的方法可为艾滋相关的淋巴瘤患者提供有益的效果
卡波西肉瘤
在另一方面，本发明提供治疗卡波西肉瘤的方法。该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
卡波西肉瘤是一种在口、鼻和***皮肤和衬里粘膜下发现癌细胞的疾病。经典的卡波西肉瘤通常发生在犹太人、意大利人或地中海地区的老年人群中。这种类型的卡波西肉瘤病情发展缓慢，有时候达10到15年。卡波西肉瘤可发生于正在服用免疫抑制剂的患者。患有获得性免疫缺陷综合征患者的卡波西肉瘤称为流行性卡波西肉瘤。艾滋患者中的卡波西肉瘤通常比其他种类的卡波西肉瘤扩散更快，常常出现在身体的许多部位。卡波西肉瘤可通过手术、化学疗法、放射疗法和免疫疗法来治疗。外部放射治疗是常用的治疗卡波西肉瘤的治疗方法。治疗卡波西肉瘤的一些可能的手术选项为局部切除、电干燥刮除和冷冻疗法。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、化学疗法，辐射疗法和免疫疗法、或它们的组合治疗，本发明的方法可为卡波西肉瘤患者提供有益的效果。
病毒诱发的癌症
在另一方面，本发明提供治疗病毒诱发的癌症的方法。几种常见的病毒明显可能是特定恶性肿瘤的病因学上的致病因素。这些病毒或者正常情况下保持潜伏，或者有些可能变成久治不愈的感染。癌症发生的原因可能与受感染的宿主中病毒活化程度的增高有关，反映了病毒剂量高或免疫控制受损。主要的病毒-恶性肿瘤***包括乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和肝细胞癌；1型人淋巴病毒(HTLV-1)和成人T细胞白血病/淋巴瘤；以及人***状瘤病毒(HPV)和子***。一般来说，这些恶性肿瘤在人的一生中出现较早，通常在中年或更早达到高峰。
病毒诱发的肝细胞癌
乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒与肝细胞癌或肝癌的因果关系是通过流行病学统计结果确立的。两者的作用似乎都是都通过在肝脏里慢性复制造成细胞死亡然后再生。对肝癌患者，有不同类型的治疗方法可用。这些包括手术、免疫疗法、放射治疗、化学治疗和经皮无水乙醇注射。可用的手术类型为冷冻治疗、部分肝切除、完全肝切除和射频烧蚀。辐射治疗可为外部射线辐射治疗、近距离辐射治疗、射线增敏剂或放射标记抗体治疗。其他类型的治疗包括温热疗法和免疫疗法。
通过联合给药苯并吡喃酮化合物和一种或多种抗肿瘤剂或将一种苯并吡喃酮化合物与辐射疗法结合使用，或采用两种治疗方法的组合治疗，本发明的方法可为病毒诱发的肝细胞癌患者提供有益的效果
病毒诱发的成人T细胞白血病/淋巴瘤
HTLV-1和成人T细胞白血病(ATL)之间的关系已经明确确立。与在世界各地发现的其他致癌病毒不同，HTLV-1具有高度的地理局限性，主要发现于日本南部、加勒比海地区、西非和中非，以及南太平洋岛屿地区。因果关系的证据包括在几乎所有ATL病例的病毒携带者中都包含有单克隆的病毒基因组。HTLV-1-相关的恶性癌症的风险因素似乎为围产期感染、高病毒携带量以及男性。
成人T细胞白血病是血液和骨髓的癌症。成人T细胞白血病/淋巴瘤的标准治疗方法为放射疗法、免疫疗法和化学疗法。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。其他治疗成人T细胞白血病/淋巴瘤的方法包括免疫疗法和高剂量化学治疗加干细胞移植。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与辐射疗法、化学疗法、免疫疗法和高剂量化学疗法加干细胞移植结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为成人T细胞白血病患者提供有益的效果。
病毒诱发的子***
子宫颈人类***瘤病毒(HPV)感染是子***的最常见的原因。但是，并非所有有HPV感染的妇女都会形成子***。子***通常是长时间慢慢形成的。在子宫颈出现癌症之前，子宫颈细胞经历被称为发育不良的变化，变化过程中，开始在子宫颈组织中出现不正常的细胞。后来，癌细胞开始生长并更深入地扩散到子宫颈和周围部位中。子***的标准治疗方法为手术、免疫疗法、放射治疗和化学治疗。治疗可用的手术类型为锥形切除术、子宫全切除术、两侧卵巢输卵管切除术、根治性子宫切除术、盆腔廓清术、冷冻手术、激光手术和环形电切除手术。辐射治疗可为外部射线辐射治疗或近距离辐射治疗。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、辐射疗法或化学疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为成人子***患者提供有益的效果。
中枢神经***(CNS)癌症
在另一方面，本发明提供治疗中枢神经***癌症的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
大脑和脊髓肿瘤是在作为中枢神经***(CNS)主要部分的头颅或脊髓内发现的组织异常生长。良性肿瘤不是癌性的，恶性肿瘤是癌症。CNS坐落在刚性的骨架内(即头颅和脊柱)，因此，任何异常生长，无论良性还是恶性，都会给敏感的组织带来压力并影响其功能。起源于大脑和脊髓的肿瘤称为原发性肿瘤。大多数原发性肿瘤都是因为神经元周围支持神经元的细胞的失控生长造成的。在少数人中，原发性肿瘤可能源自特定的基因疾病(如神经纤维瘤、结节性硬化症)或因接触辐射或致癌化学物质造成的。大多数原发性肿瘤的病因仍然是个谜。
诊断大脑和脊髓瘤的最初测试是一次神经科检查。可采用特殊的成像技术(计算机控制断层扫描术、磁共振成像、正电子发射断层扫描术)。实验室检测包括EEG和脊椎抽液。从疑似肿瘤中提取样本的手术活检有助于医师诊断肿瘤的类型。
肿瘤是按照肿瘤起源的细胞种类分类的。成人中最常见的原发性脑瘤来自脑中的星形细胞，星形细胞构成血脑屏障并向中枢神经***提供营养。这些肿瘤称为神经胶质瘤(星形细胞瘤、或多形性成胶质细胞瘤)，占所有中央神经细胞瘤的65％。有些肿瘤如下(但不限于)：少突神经胶质瘤、室管膜细胞瘤、脑(脊)膜瘤、淋巴瘤、神经鞘瘤和成神经管细胞瘤。
中枢神经***(CNS)的神经上皮瘤
星形细胞瘤；多形性(恶性)星形细胞瘤，如半球形、间脑性、视觉性、脑干、小脑；多形性成胶质细胞瘤；毛细管性星形细胞瘤，如半球形、间脑性、视觉性、脑干、小脑；室管膜下巨细胞星形细胞瘤；和多形性黄色星形细胞瘤。少突神经胶质瘤，如少突神经胶质细胞瘤；和恶性少突神经胶质细胞瘤。室管膜细胞瘤，如室管膜瘤；恶性室管膜瘤；黏液***型室管膜瘤；和亚室管膜瘤。混合型神经胶质瘤，如混合型少突星形细胞瘤；恶性少突星形细胞瘤；和其他(如室管膜星形细胞瘤)。病因不确定的神经上皮瘤：如极性成胶质细胞瘤；星形母细胞瘤；和神经胶质瘤。脉络丛瘤，如脉络丛乳突状瘤；和脉络丛癌(恶性脉络丛乳突状瘤)。神经元和混合型神经元-神经胶质瘤，如神经节细胞瘤；小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos病)；神经节神经胶质瘤；恶性神经节神经胶质瘤；婴儿促纤维增殖性神经节神经胶质瘤，如婴儿促纤维增殖性星形细胞瘤；中央神经细胞瘤；胚胎发育不良性神经上皮瘤；嗅神经母细胞瘤(鼻腔神经胶质瘤)。松果体实质细胞瘤，如松果体瘤、松果体母细胞瘤；和混合型松果体瘤/松果体母细胞瘤。带有神经母细胞或成胶质细胞元素(胚胎肿瘤)的肿瘤：如室管膜瘤；带有多能干细胞分化的原始神经外胚叶瘤，如成神经管母细胞瘤；大脑原始神经外胚层瘤；神经母细胞瘤；视网膜母细胞瘤；和室管膜母细胞瘤。
其他中枢神经***(CNS)肿瘤
鞍区瘤，如垂体腺瘤；垂体癌；和颅咽管瘤。造血组织肿瘤，如原发性恶性淋巴瘤；浆细胞瘤；和粒细胞肉瘤。生殖细胞瘤，如生殖细胞瘤；胚胎癌；卵黄囊瘤(内胚窦瘤)；绒膜癌；畸胎瘤；和混合生殖细胞瘤。脑膜肿瘤，如脑脊膜瘤；非典型性脑膜瘤；和恶性脑膜瘤。脑膜的非脑膜上皮瘤，如良性建业细胞瘤；恶性间叶细胞瘤；原发性黑素细胞损害；造血细胞瘤；来源未确定肿瘤，如成血管细胞瘤(毛细管细胞瘤)。颅神经和脊椎神经瘤，如神经鞘瘤(神经鞘瘤，周围神经鞘瘤)；神经纤维瘤；恶性周围神经鞘瘤(恶性schwannoma)，如上皮样神经鞘瘤，发散性间叶细胞或上皮分化，和黑色素生经鞘瘤。区域性肿瘤的局部扩展，如副神经节瘤(化学感受器瘤)；脊索瘤；脊索瘤；软骨肉瘤；和癌。转移性肿瘤，未分类肿瘤和囊肿以及瘤样损害，如Rathke囊肿；皮样囊肿；第三脑室胶质囊肿；肠源性囊肿；神经胶质囊肿；粒状细胞瘤(迷芽瘤，垂体细胞瘤)；下丘脑神经元错构瘤；鼻神经胶质异位症；和浆细胞肉芽肿。
可用的化学治疗药物有(但不限于)以下多种：烷基化制剂，如环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、瘤可宁、BCNU、CCNU、氨烯咪胺、甲苄肼、白消安和噻替派；抗代谢药，如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨(Gemzar
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)、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、氟达拉滨和克拉屈滨；蒽环类如柔红霉素。阿霉素、伊达比星、表柔比星和米托蒽醌；抗生素，如博来霉素；喜树碱，如伊立替康和托泊替康；紫杉烷类，如紫杉醇、多西紫杉醇；和铂类，如顺铂、卡铂和奥沙利铂。
治疗方法有手术、放射治疗、免疫疗法、温热疗法、基因疗法、RNA疗法、化学疗法和放射治疗和化学疗法的组合治疗。医师可能还会开出类固醇类药物以便减轻CNS内的肿胀。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、辐射疗法或化学疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为中枢神经***癌症提供有益的效果。
结肠癌和直肠癌
在另一方面，本发明提供治疗结直肠癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
结直肠癌包括结肠、直肠和盲肠中癌性组织生长。许多结直肠癌被认为起源于结肠中的腺瘤性息肉。结直肠癌起源于胃肠道衬层中的上皮细胞。特定DNA序列的遗传或自身突变，其中包括DNA复制或DNA修复基因，以及APC、K-Ras、NOD2和p53基因导致不受限的细胞***。治疗通常为手术，很多情况下接着进行化疗。卡介苗(BCG)正被研究用作免疫疗法中与自身肿瘤细胞混合的佐药，用于结直肠癌的治疗。
20％以上的患者诊断时具有转移(IV期)结直肠癌，这部分患者中25％有孤立的有可能切除的肝转移癌。根据患者是否适合长时间手术、结肠或肝切除手术的复杂性以及进行可能复杂的肝手术的手术舒适程度，具有结肠癌和肝转移疾病的患者可采用一次性手术或阶段性手术治疗。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗或免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为结直肠癌患者提供有益的效果。
胃癌
在另一方面，本发明提供治疗胃癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
胃癌可在胃的任何部位形成，并可能扩散到整个胃和其他器官，尤其是食道和小肠。胃癌可分为三种主要类型：淋巴腺瘤、胃间质瘤和类癌瘤。淋巴性胃癌为免疫***组织癌症，有时见于胃壁中。胃间质瘤是由胃壁组织形成的。类癌肿瘤是胃产生激素的细胞的肿瘤。幽门螺杆菌感染是80％或更多胃癌的主要风险因素。胃癌更常见于男人。胃癌的病因至今仍在继续争论。遗传和环境(饮食、吸烟等)的结合都被认为起了作用。
治疗的常用方法包括手术、免疫疗法、化学疗法、放射治疗、化学疗法和放射治疗结合以及生物治疗。除非在早期(在扩散之前)发现，否则，胃癌很难治愈。目前，临床试验正在研究新疗法，如生物疗法以及当前治疗方法的改进。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗或免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为胃癌患者提供有益的效果。
胆囊癌
在另一方面，本发明提供治疗胆囊癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
胆囊癌是在胆囊组织中发现恶性癌细胞的一种稀有癌症。胆囊储存胆汁，胆汁由肝脏分泌，用来消化脂肪。胆囊的壁有3层主要组织：粘膜(最内)层、肌层(中间层，肌肉)以及浆膜(外层)层。各层之间有支持性***。原发性胆囊癌从最里层开始，并随着癌的生长而扩散到外层。胆囊癌如果在扩散之前发现可以治愈，此时可将胆囊手术切除。如果胆囊癌扩散了，缓解治疗可通过控制疾病的症状和并发症而改善患者的生活质量。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗或免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为胆囊癌患者提供有益的效果。
食道癌
在另一方面，本发明提供治疗食道癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
食道癌是食道的恶性肿瘤。有各种亚型。食道的多数肿瘤都是恶性的。有一小部分(少于10％)为平滑肌瘤或胃间质瘤(GIST)。恶性癌症通常为腺癌、鳞状上皮细胞癌，偶尔为小细胞癌。后者与小细胞肺癌有很多共同特性，与其它类型相比，对化疗相对敏感。
小的和局部肿瘤可手术治疗，并可治愈。大的肿瘤通常不能手术，因此不能治愈；但可利用化疗、放射治疗或两者的组合来延缓其生长。在有些情况下，化疗和放射治疗可使得这些较大的肿瘤能够手术。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗或免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为食道癌患者提供有益的效果。
PNS癌症
在另一方面，本发明提供治疗周围神经***(PNS)癌症的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
周围神经***由从大脑和脊髓分支出去的神经组成。这些神经形成了CNS与身体各部分之间的通信网络。周围神经***进一步细分为躯体神经***和自主神经***。躯体神经***由达到皮肤和肌肉并涉及有意识活动的神经组成。自主神经***由连接CNS和内脏器官，如心脏、胃和肠的神经组成。它调节无意识的活动。
听觉神经瘤是从平衡神经长出的良性纤维状瘤，亦称为第八颅神经或前庭蜗神经。这些肿瘤不是恶性的，意思是，它们不会扩散或转移到身体的其他部分。这些肿瘤的位置在头颅的深处，邻近脑干的重要脑中心。随着这些肿瘤的增大，它们牵涉到与重要功能有关的周围结构。在大多数情况下，这些肿瘤多年缓慢生长。
恶性周围神经鞘瘤(MPNST)是与良性软组织瘤，如神经纤维瘤和神经鞘瘤相对应的恶性肿瘤。这在深部软组织中是最常见的，通常接近一个神经干。最常见的位置包括坐骨神经、臂丛和骶丛。最常见的症状是疼痛，通常会提示医师进行活检。通常起源于成人三叉神经感觉分支的眼眶肿瘤是一种稀少、攻击性和可致命的肿瘤。恶性PNS肿瘤沿神经扩散，涉及大脑，大多数患者在临床诊断后5年内死亡。MPNST可分成三大类，具有上皮样、间质或腺状特征。一些恶性的周围神经鞘瘤(MPNST)包括但不限于带有软骨分化的皮下恶性上皮样神经鞘瘤、腺状恶性神经鞘瘤、恶性周围神经鞘瘤伴神经束膜分化、皮肤上皮样恶性神经鞘瘤、表皮上皮样恶性周围神经鞘瘤伴杆状特征、蝾螈瘤(恶性周围神经鞘瘤伴横纹肌母细胞分化)、神经鞘瘤伴横纹肌母细胞分化。稀少的MPNST病例包含多种肉瘤组织类型，尤其是骨肉瘤、软骨肉瘤和血管肉瘤。这些有时候与软组织的恶性间质瘤不可区分。
其他类型的PNS癌症包括但不限于恶性纤维细胞瘤、恶性纤维组织细胞瘤、恶性脑脊膜瘤、以及恶性苗勒管混合瘤。
治疗方法有手术、放射治疗、免疫疗法、化学疗法，以及放射治疗和化学疗法的组合治疗。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗或免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为PNS癌患者提供有益的效果。
头颈、口腔和口咽癌
在另一方面，本发明提供治疗头颈癌，包括***、口腔、鼻腔、鼻旁窦、咽和喉的癌症。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
如下颌骨癌、喉癌、鼻咽癌、口咽癌等癌症已采用手术、免疫疗法、化学疗法以及化学疗法和放射疗法结合进行治疗。两个常用的抑制拓扑异构酶II的抗癌制剂，依托泊苷和放射霉素D，都未能以有用量穿过血脑屏障。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗或免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为口腔和口咽癌患者提供有益的效果。
睾丸癌
在另一方面，本发明提供治疗睾丸癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
睾丸癌是在年轻男性一只或两只睾丸中形成的癌症。睾丸癌形成于被称为生殖细胞的特定细胞中。两种主要的男性生殖细胞瘤(GCT)为***瘤(60％)和非***瘤(40％)。睾丸中产生激素的支持性组织基质中也可能出现肿瘤。这样的肿瘤称为性腺基质细胞瘤。睾丸癌的两种主要类型为***细胞瘤和睾丸支持细胞瘤。继发性睾丸肿瘤为起源于别的器官并扩散到睾丸的肿瘤。淋巴瘤是最常见的继发性睾丸癌。
治疗的常用方法包括手术、免疫疗法、化学疗法、放射治疗、化学疗法和放射治疗结合以及生物治疗。通常有集中药物用于治疗睾丸癌。顺铂(Platinol)、依托泊苷(Vepesid或VP-16)以及硫酸博来霉素(Blenoxane)。此外，也可使用异环磷酰胺(Ifex)、硫酸长春碱(Velban)等。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、辐射疗法或化学疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为胃癌提供有益的效果。
胸腺癌
在另一方面，本发明提供治疗胸腺癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
胸腺是位于胸前上部的一个小器官，从喉咙的底部延伸到心脏的前面。胸腺包含两种主要的细胞类型，胸腺上皮细胞和淋巴细胞。胸腺上皮细胞可产生胸腺瘤和胸腺癌。胸腺瘤为胸腺的上皮瘤，可能被也可能未被非赘生性淋巴细胞广泛浸润。胸腺瘤这一术语习惯上用来描述未显示明显的上皮部分不规则的赘生物。显示出清晰的细胞不规则和并带有不再是胸腺特异组织特征的胸腺上皮瘤现在被称为胸腺癌(亦称为C型胸腺瘤)。淋巴细胞，无论在胸腺中或在***中，都可以变成恶性的，并形成称作霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤的癌症。胸腺还包含一种很不常见的细胞类型，称作库奇斯基(Kulchitsky)细胞，或称为神经内分泌细胞，这种细胞通常释放激素。这些细胞可能会引起癌症，称作类癌或类癌瘤，这类细胞与身体中其他部位的神经内分泌细胞类似，并释放相同类型的激素。
治疗的常用方法包括手术、免疫疗法、化学疗法、放射治疗、化学疗法和放射治疗结合以及生物治疗。用于治疗胸腺瘤和胸腺癌的抗癌药物有阿霉素、顺铂、异环磷酰胺和皮质类固醇(***)。通常，这些药物结合使用以增强药效。用于治疗胸腺癌的药物组合包括顺铂、依托泊苷和环磷酰胺组合以及顺铂、阿霉素、环磷酰胺和长春新碱组合。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与手术、辐射疗法或化学疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为胃癌提供有益的效果。
尿道癌
在另一方面，本发明提供治疗尿道癌的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
尿道癌是一种稀有的癌症，女性发病率高于男性。有不同类型起源于尿道衬层细胞的尿道癌。这些癌症是根据恶性细胞的类型来命名的。鳞状细胞癌是最常见的尿道癌。它形成于女性靠近膀胱的尿道部分，对男性来说，则形成于***中尿道的衬层里。移行细胞癌形成于靠近女性尿道开口部位，对男性来说，则形成于尿道中穿过***的部分。男性和女性都可有腺癌形成于腺状组织中。
尿道癌的治疗取决于癌症的发展阶段以及癌症在尿道中的部位、患者的性别和整体健康情况、以及癌症是刚刚诊断出来还是复发的。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将一种苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗或免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为尿道癌患者提供有益的效果。
卡波西肉瘤以外的肉瘤
在另一方面，本发明提供治疗卡波西肉瘤以外肉瘤的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者单独给药苯并吡喃酮化合物。在其他一些实施方案中，该方法包括向受试者联合给药苯并吡喃酮和一种或多种本文所列的抗肿瘤剂。
根据其发生的组织类型，有几种肉瘤亚型。例如，骨肉瘤起源于骨，软骨肉瘤起源于软骨，平滑肌肉瘤起源于平滑肌。软组织肉瘤如平滑肌肉瘤、软骨肉瘤和胃肠***瘤(GIST)在成人中比在儿童中更常见。骨头中的肉瘤，如骨肉瘤和尤文肉瘤在儿童中比在成人中更常见。这些肉瘤常见于12岁到25岁之间的青少年和年轻成年人。除了根据起源的组织命名之外，对肉瘤还指定了恶性度级别，如低恶性度和高恶性度。低恶性度肉瘤通常用手术治疗，尽管有时候也采用放射治疗和化疗。高恶性度肉瘤更常用化疗来治疗。由于这些肿瘤更可能出现转移，所以对这些肿瘤的治疗也更加积极。儿童肉瘤总是用手术和化疗结合治疗，放射治疗也经常采用。认识到儿童肉瘤对化疗很敏感已经大大地改善了患者的存活率。
***癌
***癌为恶性细胞形成于***的疾病。***癌包括鳞状上皮细胞癌、腺癌、黑素瘤和肉瘤。鳞状细胞***癌扩散缓慢，通常停留在***附近，但也可能扩散到肺和肝脏。腺瘤起源于腺(分泌)细胞。腺瘤比鳞状细胞癌更可能扩散到肺和***。
癌干细胞
本发明的方法和组合物可用来治疗源自癌干细胞的癌症。癌干细胞(CSC)是从具有通常与干细胞相关的特征的肿瘤或血癌中发现的癌细胞的一个亚组。与大多数被认为是不致癌的癌细胞相反，CSC被认为是致癌的。CSC具有干细胞的性质，如自我更新能力以及分化成多种细胞类型的能力。在有免疫缺陷的小鼠中，CSC还能够形成异质性肿瘤，而且频度很高。有人指出，CSC始终在肿瘤中作为一个独特的群体存在，并通过产生新的肿瘤而造成肿瘤的复发和转移。大多数人肿瘤已被证明包含一种显示癌干细胞特征的细胞亚群。癌症的类型包括但不限于白血病、乳腺癌、黑素瘤、肺癌、脑癌、结肠癌。胰腺癌和卵巢癌。
癌干细胞的存在对癌症的治疗和治疗方法有几个影响。正常干细胞对化疗药物具有天然抗药性，因为它们有各种泵(如MDR)，可泵出药物。干细胞还有DNA修复蛋白质，且其细胞更新率缓慢。癌干细胞为正常细胞的对应突变细胞，可能具有类似的功能，使它们能够在各种治疗中存活下来。通过选择性地攻击癌干细胞，有可能治疗患有高侵袭性肿瘤的患者并防止肿瘤转移。癌干细胞和癌干细胞的靶标药剂的参考文献包括Trumpp A，Wiestler OD.Mechanisms of Disease：cancer stem cells--targeting the evil twin.Nat Clin PractOncol.2008 Jun；5(6)：337-47.Epub 2008 Apr 22。Chumsri S，Burger AM.Cancer stem cell targeted agents：therapeutic approaches and consequences.CurrOpin Mol Ther.2008 Aug；10(4)：323-33，两份文献此处在此处引入作为参考。
通过给药苯并吡喃酮化合物或将苯并吡喃酮化合物与抗肿瘤剂、放射治疗、RNA治疗、纳米治疗、基因治疗和免疫疗法结合使用，或它们的组合治疗，本发明的方法可为癌症患者提供有益的效果。
联合治疗
本发明的一个方面利用不同的治疗组合提供治疗癌症的方法。例如，这样的组合可包括但不限于将一种或多种苯并吡喃酮化合物与一种或多种各类抗肿瘤剂、化学预防药剂和/或限制副作用的药剂结合使用。
抗肿瘤化学治疗药剂
可用于本发明的适当的抗肿瘤剂包括但不限于烷化剂、抗代谢物、天然抗肿瘤剂、激素类抗肿瘤剂、血管再生抑制剂、分化剂、RNA抑制剂、抗体或免疫治疗剂、基因治疗剂、小分子酶抑制剂、生物应答修饰剂以及抗癌转移药剂。
烷化剂
烷化剂已知通过大分子如癌细胞DNA的烷基化起作用，它们通常为强亲电体。这一活性可打乱DNA合成和细胞***。适合用于本发明的烷基化试剂的实例包括氮芥及其类似物和衍生物，包括环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丁酸氮芥、雌氮芥、盐酸氮芥、美法仑和尿嘧啶氮芥。其他烷基化实例包括烷基磺酸盐(如白消安)、亚硝基脲(如亚硝基氮芥、环己亚硝脲和链佐星)、三氮烯(如达卡巴嗪和替莫唑胺)、乙烯亚胺/甲基三聚氰胺(如六甲蜜胺和塞替派)以及甲基肼衍生物(如丙卡巴肼)。烷化剂还包括烷基化样的含铂药物，包括卡铂、顺铂和奥沙利铂。
抗代谢物
抗代谢物抗肿瘤剂结构上类似于天然代谢物，并涉及癌细胞的正常代谢过程，如核酸和蛋白质合成。它们与天然代谢物又有足够大的差别，从而能够干扰癌细胞的代谢过程。可用于本发明的适当的抗代谢物药剂可按照它们所影响的代谢过程来分类，包括但不限于叶酸、嘧啶、嘌呤和胞啶的类似物和衍生物。适合用于本发明的叶酸组药剂成员包括但不限于甲氨蝶呤(amethopterin)、培美曲塞及其类似物和衍生物。适合用于本发明的嘧啶类药剂包括但不限于阿糖胞苷、氟尿苷、氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶)、卡培他滨、吉西他滨及其类似物和衍生物。适合用于本发明的嘌呤类药剂包括但不限于巯基嘌呤(6-巯基嘌呤)、喷司他丁、硫鸟嘌呤、克拉屈滨及其类似物和衍生物。适合用于本发明的胞啶类药剂包括但不限于阿糖胞苷(胞嘧啶阿糖苷)、阿扎胞苷(5-阿扎胞苷)及其类似物和衍生物。
天然抗肿瘤剂
天然抗肿瘤剂包括抗有丝***剂、抗生素抗肿瘤剂、喜树碱类似物和酶。适合用于本发明的抗有丝***药剂包括但不限于长春花生物碱样长春碱、长春新碱、长春瑞滨及其类似物和衍生物。它们源自马达加斯加的长春花植物，通常对有丝***期具有细胞周期特异性，结合到癌细胞微管的微管蛋白上。其他适合用于本发明的抗有丝***剂为足叶草霉素类，包括但不限于依托泊苷、替尼泊苷及其类似物和衍生物。这些药剂主要针对细胞周期的G2期和晚S期。
天然抗肿瘤剂还包括抗生素抗肿瘤剂。抗生素抗肿瘤剂为通过与癌细胞DNA相互作用而具有抗肿瘤性质的抗微生物药物。适合用于本发明的抗生素抗肿瘤剂包括但不限于博来霉素、更生霉素、阿霉素、伊达比星、表柔比星、丝裂霉素、米托蒽醌、喷司他丁、普卡霉素及其类似物和衍生物。
天然抗肿瘤剂类别还包括适合用于本发明的喜树碱类似物和衍生物，包括喜树碱、托泊替康和伊立替康。这些药剂主要以核酶拓扑异构酶I为靶标而起作用。天然抗肿瘤剂的另一个亚类为酶、L-天冬酰胺酶及其变种。L-天冬酰胺酶通过催化循环的天门冬素为天冬氨酸和氨，夺去癌细胞的L-天冬酰胺酶而起作用。
激素抗肿瘤剂
激素抗肿瘤剂主要作用于与***组织、***组织、子宫内膜组织、卵巢组织淋巴瘤和白血病有关的依赖激素的癌细胞。这些组织可能对如糖皮质激素、孕酮、***和雄激素一类的药剂有反应且依赖这些药剂。作为激动剂和拮抗剂类似物和衍生物也适合用于本发明以***。适合用于本发明的糖皮质激素激动剂/拮抗剂的实例有***、皮质醇、皮质酮、***、米非司酮(RU486)及其类似物和衍生物。适合用于本发明的孕酮激动剂/拮抗剂包括但不限于己酸孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、米非司酮(RU486)、ZK98299及其类似物和衍生物。适合用于本发明的***激动剂/拮抗剂包括但不限于***、他莫昔芬、托瑞米芬、RU58668、SR16234、ZD164384、ZK191703、氟维司群及其类似物和衍生物。适合用于本发明的可抑制***分泌的芳香酶抑制剂的实例包括但不限于雄烯二酮、福美坦、依西美坦、氨鲁米特、阿纳托唑、来曲唑及其类似物和衍生物。适合用于本发明的雄激素激动剂/拮抗剂亚类包括但不限于***、二氢***、氟羟甲基***、睾内酯、***、庚酸睾酮、丙酸睾酮、释放促性腺素的激素激动剂/拮抗剂(如亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、布舍瑞林)、己烯雌酚、阿巴瑞克、环丙孕酮、氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺及其类似物和衍生物。
血管再生抑制剂
血管再生抑制剂通过抑制肿瘤的血管生成起作用。血管再生抑制剂包含各种药剂，包括小分子药剂、抗体药剂和以RNA功能为靶标的药剂。适合用于本发明的血管再生抑制剂的实例包括但不限于兰尼单抗、贝伐单抗。SU11248、PTK787、ZK222584、CEP-7055、抗血管生成核酶(angiozyme)，达肝素、沙利度胺、苏拉明、CC-5013、康布瑞汀A4磷酸酯、LY317615、大豆异黄酮、AE-941、α干扰素、PTK787/ZK 222584、ZD6474、EMD 121974、ZD6474、BAY 543-9006、塞来昔布、氢溴酸常山酮、贝伐单抗及其类似物和衍生物。
分化剂
分化剂通过诱发癌细胞分化抑制肿瘤的生长。适合用于本发明的这类药剂的一个亚类包括但不限于维生素A类似物和类视黄醇以及过氧物酶体增殖子激活的激动剂(PPAR)。适合用于本发明的类视黄醇包括但不限于维生素A、视黄醛(retinal)、视黄酸、维甲酰酚胺、9-顺式-视黄酸、13-顺式-视黄酸、全反式视黄酸、异维甲酸、维甲酸、棕榈酸视黄酯及其类似物和衍生物。适合用于本发明的PPAR激动剂包括但不限于曲格列酮、环格列酮、替格列卡(tesaglitazar)及其类似物和衍生物。
抗体/免疫治疗剂
抗体治疗剂结合癌细胞中选择性表达的靶标并可利用偶联物来杀死与靶标相关的细胞，或引导身体的免疫反应来破坏癌细胞。免疫治疗剂可包括多克隆或单克隆抗体。抗体可包括非人动物(如小鼠)和人组分，也可包含完全人组分(“人源化抗体”)。适合用于本发明的单克隆免疫治疗剂的实例包括但不限于针对CD-20蛋白的利妥昔单抗、托西莫单抗、替伊莫单抗。其他适合用于本发明的实例包括曲妥珠单抗、依决洛单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、癌胚抗原抗体、吉妥珠单抗、阿伦单抗、mapatumumab(一种可特异结合TRAIL-受体1蛋白的人单克隆抗体)、帕尼单抗、EMD 72000、TheraCIMhR3、2C4、HGS-TR2J和HGS-ETR2。
基因治疗剂
基因治疗剂在患者特定细胞组中***基因副本，可以癌细胞或非癌细胞为靶标。基因治疗的目标可用功能性基因置换改变了的基因，刺激患者对癌症作出免疫反应，使癌细胞对化疗更加敏感，将“***”基因置入癌细胞，或抑制血管生成。基因可利用病毒、脂质体或其他载体递送到靶标细胞。这可以通过将基因载体组合物直接注射到患者身上，或在体外进行，然后将感染的细胞重新引回患者体内而实现。这样的组合物适合用于本发明。
纳米治疗
纳米大小的颗粒具有单个分子或固体散料所不具有的新颖光学、电子学和结构性质。当连接到以肿瘤为靶标的部分时，这些肿瘤特异的配体或单克隆抗体纳米颗粒可用来以高亲和力和高精度靶向癌特异受体，肿瘤抗原(生物标记物)以及肿瘤脉管***。癌症纳米治疗的理论基础和制造工艺已公开于以下专利和文献：美国专利US7179484和M.N.Khalid，P.Simard，D.Hoarau，A.Dragomir，J.Leroux，Long Circulating Poly(EthyleneGlycol)Decorated Lipid Nanocapsules Deliver Docetaxel to Solid Tumors，Pharmaceutical Research，23(4)，2006，所有专利和文献在此处引入作为参考。
RNA治疗
包括但不限于siRNA、shRNA、microRNA的RNA可用来调节基因表达和治疗癌症。双链低聚核苷酸通过两个独特的低聚核苷酸序列的组合而形成，其中单链低聚核苷酸第二链低聚核苷酸序列具有互补关系；这样的双链低聚核苷酸一般是通过两个分立的低聚核苷酸(如siRNA)，或通过一个单一分子自我折叠形成一个双链结构(如shRNA或短发夹RNA)组合形成的。本领域已知的这些双链低聚核苷酸具有一个共同的特征，即一个双链的每个单链都有一个独特的核酸序列，其中只有一个核酸序列区(引导序列或反义序列)对靶标核酸序列具有互补性，另一个链(正义序列)包含与靶标核酸序列同源的核酸序列。
MicroRNAs(miRNA)为长度大约为21-23核苷酸的调控基因表达的单链RNA分子。miRNA是由从DNA转录但未转译成蛋白质(未编码RNA)的基因编码的；它们是从称为pri-miRNA的初级转录物加工成称为pre-miRNA的短茎环结构，最后成为功能性miRNA。成熟的miRNA分子对一个或多个信使RNA(mRNA)分子具有部分互补关系，它们的主要功能是下调基因表达。
有些抑制RNA的药剂可用来抑制与癌症表型相关的信使RNA(“mRNA”)的表达或转译。适合用于本发明的此类药剂的实例包括但不限于短干扰RNA(“siRNA”)、核酶和反义低聚核苷酸。适合用于本发明的RNA抑制药剂的具体实例包括但不限于Cand5、Sirna-027、福米韦生和angiozyme(抗VEGFR1核酶)。
小分子酶抑制剂
有些小分子治疗剂能够靶向酪氨酸激酶酶活性或某些细胞受体，如表皮生长因子受体(“EGFR”)或脉管内皮生长因子受体(“VEGFR”)的下游信号转导信号。这种小分子治疗剂的靶向作用可产生抗癌效应。适合用于本发明的此类药剂的实例包括但不限于伊马替尼、吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、卡奈替尼、ZD6474、索拉非尼(BAY 43-9006)、ERB-569及其类似物和衍生物。
生物应答修饰剂
有些蛋白质和小分子药剂可通过其直接的抗肿瘤效应或通过间接效应用于抗癌治疗。适合用于本发明的直接作用药剂的实例包括但不限于分化剂如类视黄醇和类视黄醇衍生物。适合用于本发明的间接作用药剂包括但不限于修饰或增强免疫或其他***的药剂，如干扰素、白介素、生血细胞生长因子(如红细胞生长素)和抗体(单克隆或多克隆)。
抗转移药剂
癌细胞从肿瘤原灶扩散到身体其他部位的过程称为癌转移。有些药剂具有抗转移性质，设计用于抑制癌细胞的扩散。适合用于本发明的此类药剂的实例包括但不限于马立马司他、贝伐单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗、埃罗替尼、MMI-166、GRN163L、hunter-killer肽、金属蛋白酶(TIMP)组织抑制剂及其类似物和衍生物。
化学预防剂
有些药物制剂可用来预防癌症的发病，或用来预防癌症的复发或转移。此类化学预防剂与一种或多种其他抗肿瘤剂，包括苯并吡喃酮化合物联用可用来治疗癌症或预防癌症的复发。适合用于本发明的化学预防剂包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、替勃龙、二磷酸盐、伊班膦酸盐、***受体调节剂、芳香酶抑制剂(来曲唑、阿那曲唑)、释放激素的促黄体分离激素激动剂、戈舍瑞林、维生素A、视黄醛、视黄酸、维甲酰酚胺、9-顺式-视黄酸、13-顺式-视黄酸、全反式视黄酸、异维甲酸、维甲酸、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、环氧酶抑制剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、阿司匹林、布洛芬、塞来考昔、多酚、多酚E、绿茶提取物、叶酸、葡糖二酸、α干扰素、茴香脑二硫杂环戊二烯硫酮、锌、吡哆醇、非那雄胺、多沙唑嗪、硒、吲哚-3-甲醇、α二氟甲基鸟氨酸、类胡萝卜素、β-胡萝卜素、番茄红素、抗氧化剂、辅酶Q10、类黄酮、槲皮黄铜、姜黄色素、儿茶酚、表没食子儿茶素、N-乙酰半胱氨酸、吲哚-3-甲醇、肌醇六磷酸、异黄酮、葡萄糖酸、迷迭香、大豆、锯叶棕和钙。另外适合用于本发明的化学预防剂为癌症疫苗。它们可通过对患者用所有或部分接种过程针对的癌症细胞类型进行免疫而产生。
副作用限制剂
单独使用苯并吡喃酮化合物或与其他抗肿瘤化合物联用治疗癌症可伴随给药可减轻抗肿瘤剂副作用的药剂。适合用于本发明的此类药剂包括但不限于抗催吐剂、抗粘膜炎药剂、疼痛管理药剂、感染控制药剂以及抗贫血/抗血小板减少药剂。适合用于本发明的抗催吐剂包括但不限于5-羟色胺3受体拮抗剂、甲氧氯普胺、类固醇、氯羟去甲安定、昂丹司琼、***素类及其类似物和衍生物。适合用于本发明的抗粘膜炎药剂包括但不限于帕利夫明(palifermin)、胰高血糖素样肽-2、替度鲁肽(teduglutide)、L-谷氨酰胺、氨磷汀和成纤维细胞生长素20。适合用于本发明的疼痛管理药剂包括但不限于类阿片、***和非类固醇抗炎化合物。适合用于本发明的感染控制药剂包括但不限于抗菌素，如氨基糖苷类、青霉素、头孢菌素、四环素、氯林可霉素、林肯霉素、大环内酯类、万古霉素、碳青霉烯、单环β-内酰胺、氟喹诺酮、磺胺类、呋喃妥因及其类似物和衍生物。适合用于本发明的可治疗与化疗有关的贫血或血小板减少症的药剂包括但不限于***和促血小板生成素。
还有几种其他可与本文所述的苯并吡喃酮化合物和其他化合物联用的适当治疗方法。例如，可参见Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basisof Therapeutics11th ed.Brunton LL，Lazo JS，and Parker KL，ed.McGraw-Hill，New York，2006。
制剂、给药途径和有效剂量
本发明的另一个方面涉及包含苯并吡喃酮化合物的组合物的制剂和给药途径。在一些实施方案中，组合物包含一个或多个苯并吡喃酮化合物。在其他实施方案中，组合物包含一种或多种苯并吡喃酮化合物并联用一种或多种抗肿瘤剂。此类组合物可在上面详细说明的治疗方法中用来治疗癌症。
例如，式II化合物，6-硝基-5-碘-苯并吡喃酮可用于体内给药。可用苯并吡喃酮形式或可药用盐来形成一个制剂，用于本发明。此外，在一些实施方案中，该化合物可与一种或多种其他化合物结合使用，或以一种或多种其它形式使用。例如，一个制剂可能既包含苯并吡喃酮化合物，又包含酸性形式，其特定比例取决于每种形式的相对药效和预期的适应症。两种形式可一起制剂在同一剂型单元中，如一种乳剂、栓剂、片剂、胶囊或小包粉末供溶于饮料中服用；或者每种形式也可以单独形成剂型，如两种乳剂、两种栓剂、两种片剂、两种胶囊、一种片剂和一种用于溶解片剂的液体、一小袋粉剂和溶解该粉剂的液体，等。
包含苯并吡喃酮化合物和另一活性药剂，如一抗肿瘤剂组合的组合物可能是有效的。两种化合物和/或一种化合物的两种形式可一起制剂在同一剂型单元中，如一种乳剂、栓剂、片剂、胶囊或小包粉末供溶于饮料中服用；或者每种形式也可以单独形成剂型，如两种乳剂、栓剂、片剂、两种胶囊、一种片剂和一种用于溶解片剂的液体、一小袋粉剂和溶解该粉剂的液体，等。
术语“可药用盐”指的是那些保存了用于本发明的化合物的生物有效性和性质，且在生物学上或其他方面不是有害的。例如，一种可药用盐不会干扰本发明的化合物在治疗癌症方面的有益效应。
典型的盐为无机离子盐，如钠、钾、钙和镁离子盐。这些盐包括有机和无机酸盐，如盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、醋酸、富马酸、琥珀酸、乳酸、苦杏仁酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸或马来酸。此外，如果本发明的化合物含有羧基或其它酸性基团，则可以用无机碱或有机碱将其转换为一种药学上可接受的加成盐。适当的碱的实例包括氢氧化钠、氢氧化钾、铵、环己胺、二环己胺、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。
口腔给药时，该化合物可以很方便地通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体结合而形成制剂。这些载体使得本发明的组合物可配制成片剂、包括可嚼的片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、锭剂、硬糖、液体、凝胶、糖浆、浆剂、粉剂、悬浮液、酏剂、薄饼等，供需要治疗的患者口服摄入。这样的制剂可能包含药学上可接受的载体，包括固体稀释剂和填充剂、无菌水溶液介质和各种无毒性的有机溶剂。一般来说，本发明的化合物制成药剂时的含量范围从口服剂型总重量的大约0.5％、大约5％、大约10％、大约20％或大约30％到大约40％、大约50％、大约60％、大约70％、大约80％或大约90％，数量上足以达到需要的剂量单位。
悬浮液可包含苯并吡喃酮化合物以及药学上可接受的赋形剂，如悬浮剂(如甲基纤维素)、湿润剂(如卵磷脂、溶血卵磷脂和/或长链脂肪醇)，以及着色剂、防腐剂、调味剂等。
在一些实施方案中，例如，由于存在大量的亲脂部分，可能需要油或非水溶性溶剂以便使化合物变成溶液。另外，也可使用乳胶、悬浮液或其他制剂，如脂质体制剂。对于脂质体制剂的制备，任何已知的制备脂质体用于治疗某一病症的方法均可使用。参见例如Bangham等人，J.Mol.Biol，23：238-252(1965)和Szoka等人，Proc.Natl Acad.Sci 75：4194-4198(1978)，在此处将其引入作为参考。也可将配位体连接到脂质体上，以便将这些组合物引导至特定的作用点。本发明的化合物也可结合到食物中，如奶油干酪、黄油、色拉调味汁，或冰淇淋中以促进溶解、给药和/或在某些患者人群中达到合规要求。
口腔给药的药物制剂可制成固体赋形剂，任选地研磨得到的混合物并处理颗粒混合物，加入适当的辅剂后，制成片剂或糖衣丸内核。适当的赋形剂有，特别是填充剂如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；增味剂成分、纤维素制剂如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、凝胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟基丙基甲基-纤维素、羧甲基纤维素钠、和/或聚乙烯基吡喃烷酮(PVP)。如果需要的话，可加入崩散剂，如交联的聚乙烯基吡喃烷酮、琼脂或藻酸或其盐，如藻酸钠。该化合物还可配制成缓释剂型。
糖衣丸内核可包被适当的包衣。为此目的，可使用浓糖溶液，其中任选地可包含***树胶、滑石、聚乙烯基吡喃烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇，和/或二氧化钛、清漆、以及适当的有机溶剂或溶剂混合物。可在片剂或糖衣丸剂的涂层上添加染色剂或色素用于识别目的，或赋予不同的活性化合物剂量组合以不同的颜色特征。
可口服的药物制剂包括凝胶制成的推合胶囊、凝胶和增塑剂，如甘油山梨糖醇制成的密封软胶囊。推合胶囊可将活性成分包含在掺和剂中，并加入填充剂如乳糖，结合剂如淀粉，和/或润滑剂如滑石或硬酯酸镁，还任选地加入稳定剂。软胶囊中，活性化合物可溶解或悬浮在适当的液体中，如脂油、液体石蜡，或液体聚乙二醇中。此外，还可加入稳定剂。口腔给药的所有制剂应该以适宜给药的方式提供。
对注射液来说，本发明的抑制剂可配制成水溶液，最好用生理盐水适应的缓冲溶液如汉克斯溶液、格林氏溶液或生理盐水缓冲液配制。这样的组合物还可包括一种或多种赋形剂，如防腐剂、增溶剂、填充剂、润滑剂、稳定剂、白蛋白等。制剂方法为本领域所熟知，如Remington’s PharmaceuticalSciences，latest edition，Mack Publishing Co.，Easton，P中所述。这些化合物还可制剂成经粘膜给药、口腔给药、吸入给药、腹膜内给药、经皮给药、以及经直肠给药。
除了上述制剂之外，该化合物还可制剂为长效储库制剂。这一长效制剂可通过植入或经皮给药(如皮下或肌内给药)、肌肉注射或使用经皮贴膏给药。因此，例如该化合物可用聚合物或疏水材料(如一种可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂，或小量可溶的衍生物，如一种少量可溶的盐来配制。
适合用于本发明的组合物包括含有有效量(即对此处所述的癌症能够达到治疗和/或预防益处的量)活性组分的组合物。一个特定应用的实际有效量将取决于需要治疗的某个病症或多种病症、受试者的病情、制剂、给药途径，以及本领域熟练的技术人员所熟知的其他因素。确定苯并吡喃酮化合物的有效剂量完全在本领域熟练的技术人员的能力以内，因此，将根据此处披露的内容按常规的优化技术来确定。
临床效能
临床效能可采用本领域任何已知的方法来量度。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物和抗肿瘤剂(如吉西他滨和奥沙利铂)联用的效力可通过测量临床获益率(CBR)来确定。在其他实施方案中，苯并吡喃酮化合物的临床效能可通过测量临床获益率(CBR)来确定。
临床获益率可在治疗结束至少6个月后的一个时间点上通过确定完全缓解(CR)患者的百分数、部分缓解(PR)患者的人数以及病情稳定(SD)患者人数的总和来量度。这一公式的简化形式为CBR＝CR+PR+SD≥6个月。吉西他滨和奥沙利铂联合治疗的CBR为55％(Demols A，et.al.，British J.ofCancer，vol.94，2006)。因此，苯并吡喃酮的三重联合治疗(如吉西他滨、奥沙利铂和6-硝基-5-碘-苯并吡喃酮)可与吉西他滨和奥沙利铂的双重联合治疗进行比较。在一些实施方案中，三重联合治疗的CBR至少为约60％。
在此处公开的一些实施方案中，方法包括预先确定癌症可以用PARP调节剂来治疗。某些此类的方法包括在患者的胰腺癌样品中识别PARP的水平，确定样品中PARP表达的水平是否大于预定值，如果PARP表达大于预定值，则对患者采用苯并吡喃酮化合物联用或不联用一种或多种抗肿瘤剂(如OX和/或GEM))治疗。
癌症抑制基因乳腺癌抗原基因中的种系变异(BRCA)1和BRCA2已证明对患有乳腺癌和卵巢癌的患者的寿命风险大大增加。一些研究证明，与这些突变相关的第三种常见癌症是胰腺癌。遗传了BRCA1和BRCA2基因缺陷的人之所以会出现胰腺癌是因为癌细胞失去了修复损伤的DNA的特殊机制。BRCA1和BRCA2对通过同源重组修复DNA双链断裂很重要，这些基因的突变倾向于形成子宫癌和其他癌症。PARP涉及碱基切除修复，即DNA单链断裂修复的一个通道。BRCA1或BRCA2障碍使得细胞对PARP酶活性的抑制敏感，造成染色体不稳定性、细胞周期停滞并导致其后的细胞凋亡。体内研究表明，接种了人胰腺癌细胞后，与单独使用PBS、吉西他滨或3-氨基苯甲酰胺(3-ABA)单独治疗相比，PARP抑制剂3-ABA联用治疗大大减轻了肿瘤重量并延长了存活时间达40天(Dietmar A等人，Journal ofgastroenterology and hepatology，2007，vol.2)。
在缺少这种DNA修复的场合，PARP抑制剂可杀死细胞，因此能够有效地杀死有BRCA缺陷的肿瘤细胞和其他类似的肿瘤细胞。正常细胞可能不受这一药物的影响，因为它们可能仍然具有这种DNA修复机制。这一治疗可能还适用于和BRCA缺陷癌症类似的其他形式的子宫癌。通常，治疗子宫癌的药物能杀死肿瘤细胞，但是也损害正常细胞。正是正常细胞受到损害造成了令人苦恼的副作用，如恶心和脱发。在一些实施方案中，PARP抑制剂治疗的一个优势是它是一种靶向疗法：在杀死肿瘤细胞的同时，正常细胞不受影响。这是因为PARP抑制剂利用了一些肿瘤细胞的特殊遗传构造。
BRCA基因有缺陷的患者具有上调的PARP水平。PARP上调可能表明有其他有缺陷的DNA修复通道和尚未辨认出来的BRCA样遗传缺陷。PARP-1基因表达的评估是肿瘤对PARP抑制剂敏感度的一个指标。因此，在一些实施方案中，不仅通过确定子宫癌的HR和/或HER2状况，而且还通过测量PARP水平识别有BRCA缺陷患者的癌症早期发病，从而使子宫癌的治疗得到了加强。可通过上调的PARP水平识别可用PARP抑制剂治疗的BRCA缺陷患者。对这样的BRCA缺陷患者可进一步采用PARP抑制剂来治疗。
在一些实施方案中，从怀疑有癌性胰腺损伤的患者收集了样品。尽管这样的样品可为任何可用的生物组织，但是，多数情况下，该样品为疑似癌性的胰脏损伤之一部分，无论样品是通过腹腔镜检查还是通过开放手术(如子宫切除术)获取的。然后即可对PARP表达进行分析，如果PARP表达高于预定的水平(即与正常组织相比上调了)，则可单独使用PARP-1抑制剂或联用一种或多种抗肿瘤剂治疗患者。因此，应该理解，尽管此处所述的实施方案针对阴性胰腺癌的治疗，在一些实施方案中，只要满足PARP上调的阈值，胰腺癌不需要为阴性。
在一些实施方案中，通过评估PARP表达水平而识别出了同源重组缺陷性肿瘤。如果观察到了PARP上调，则可用PARP抑制剂来***。另一个实施方案为一个治疗同源重组缺陷癌症的方法，包括评估PARP表达水平，如果观察到过表达，则癌症可用PARP抑制剂来治疗。
遗传了BRCA1和BRCA2基因缺陷的妇女之所以会出现卵巢癌是因为癌细胞失去了特定的修复损伤的DNA的机制。BRCA1和BRCA2对通过同源重组修复DNA双链断裂很重要，这些基因的突变倾向于形成子宫癌和其他癌症。PARP涉及碱基切除修复，即DNA单链断裂修复的一个通道。BRCA1或BRCA2障碍使得细胞对PARP酶活性的抑制敏感，造成染色体不稳定性、细胞周期停滞并导致其后的细胞凋亡。
在缺少这种DNA修复的场合，PARP抑制剂可杀死细胞，因此能够有效地杀死有BRCA缺陷的肿瘤细胞和其他类似的肿瘤细胞。正常细胞可能不受这一药物的影响，因为它们可能仍然具有这种DNA修复机制。这一治疗可能还适用于和BRCA缺陷癌症类似的其他形式的子宫癌。通常，治疗子宫癌的药物能杀死肿瘤细胞，但是也损害正常细胞。正是正常细胞受到损害造成了令人苦恼的副作用，如恶心和脱发。在一些实施方案中，PARP抑制剂治疗的一个优势是它是一种靶向疗法：在杀死肿瘤细胞的同时，正常细胞不受影响。这是因为PARP抑制剂利用了一些肿瘤细胞的特殊遗传构造。
BRCA基因有缺陷的患者具有上调的PARP水平。PARP上调可能表明有其他有缺陷的DNA修复通道和尚未辨认出来的BRCA样遗传缺陷。PARP-1基因表达的评估是肿瘤对PARP抑制剂敏感度的一个指标。因此，在一些实施方案中，不仅通过确定子宫癌的HR和/或HER2状况，而且还通过测量PARP水平识别有BRCA缺陷患者的癌症早期发病，从而使卵巢癌的治疗得到了加强。可通过上调的PARP水平识别可用PARP抑制剂治疗的BRCA缺陷患者。对这样的BRCA缺陷患者可进一步采用PARP抑制剂来治疗。
在一些实施方案中，从一位疑似有癌性卵巢损伤的患者收集了样品。尽管这样的样品可为任何可用的生物组织，但是，多数情况下，该样品为疑似癌性的卵巢损伤之一部分，无论样品是通过腹腔镜检查还是通过开放手术(如子宫切除术)获取的。然后即可对PARP表达进行分析，如果PARP表达高于预定的水平(即与正常组织相比上调了)，则可单独使用PARP-1抑制剂或联用一种或多种抗肿瘤剂如OX和GEM治疗患者。因此，应该理解，尽管此处所述的实施方案针对阴性卵巢癌的治疗，在一些实施方案中，只要满足PARP上调的阈值，卵巢癌不需要为阴性。
在一些实施方案中，通过评估PARP表达水平而识别出了同源重组缺陷性肿瘤。如果观察到了PARP上调，则可用PARP抑制剂来***。另一个实施方案为一个治疗同源重组缺陷癌症的方法，包括评估PARP表达水平，如果观察到过表达，则癌症可用PARP抑制剂来治疗。
遗传了BRCA1和BRCA2基因缺陷的妇女之所以会出现子宫癌是因为癌细胞失去了修复损伤的DNA的特殊机制。BRCA1和BRCA2对通过同源重组修复DNA双链断裂很重要，这些基因的突变倾向于形成子宫癌和其他癌症。PARP涉及碱基切除修复，即DNA单链断裂修复的一个通道。BRCA1或BRCA2障碍使得细胞对PARP酶活性的抑制敏感，造成染色体不稳定性、细胞周期停滞并导致其后的细胞凋亡。
在缺少这种DNA修复的场合，PARP抑制剂可杀死细胞，因此能够有效地杀死有BRCA缺陷的肿瘤细胞和其他类似的肿瘤细胞。正常细胞可能不受这一药物的影响，因为它们可能仍然具有这种DNA修复机制。这一治疗可能还适用于和BRCA缺陷癌症类似的其他形式的子宫癌。通常，治疗子宫癌的药物能杀死肿瘤细胞，但是也损害正常细胞。正是正常细胞受到损害造成了令人苦恼的副作用，如恶心和脱发。在一些实施方案中，PARP抑制剂治疗的一个优势是它是一种靶向疗法：在杀死肿瘤细胞的同时，正常细胞不受影响。这是因为PARP抑制剂利用了一些肿瘤细胞的特殊遗传构造。
BRCA基因有缺陷的患者具有上调的PARP水平。PARP上调可能表明有其他有缺陷的DNA修复通道和尚未辨认出来的BRCA样遗传缺陷。PARP-1基因表达的评估是肿瘤对PARP抑制剂敏感度的一个指标。因此，在一些实施方案中，不仅通过确定子宫癌的HR和/或HER2状况，而且还通过测量PARP水平识别有BRCA缺陷患者的癌症早期发病，从而使子宫癌的治疗得到了加强。可通过上调的PARP水平识别可用PARP抑制剂治疗的BRCA缺陷患者。对这样的BRCA缺陷患者可进一步采用PARP抑制剂来治疗。
在一些实施方案中，从一位疑似有癌性子宫损伤的患者收集了样品。尽管这样的样品可为任何可用的生物组织，但是，多数情况下，该样品为疑似癌性的子宫损伤之一部分，无论样品是通过腹腔镜检查还是通过开放手术(如子宫切除术)获取的。然后即可对PARP表达进行分析，如果PARP表达高于预定的水平(即与正常组织相比上调了)，则可单独使用PARP-1抑制剂或联用一种或多种抗肿瘤剂如OX和GEM治疗患者。因此，应该理解，尽管此处所述的实施方案针对所谓的三阴转移性子宫癌的治疗，在一些实施方案中，只要满足PARP上调的阈值，子宫癌不需要为三阴。
在一些实施方案中，通过评估PARP表达水平而识别出了同源重组缺陷性肿瘤。如果观察到了PARP上调，则可用PARP抑制剂来***。另一个实施方案为一个治疗同源重组缺陷癌症的方法，包括评估PARP表达水平，如果观察到过表达，则癌症可用PARP抑制剂来治疗。
遗传了BRCA1和BRCA2基因缺陷的妇女之所以会出现乳腺癌是因为癌细胞失去了修复损伤的DNA的特殊机制。BRCA1和BRCA2对通过同源重组修复DNA双链断裂很重要，这些基因的突变倾向于形成乳腺癌和其他癌症。PARP涉及碱基切除修复，即DNA单链断裂修复的一个通道。BRCA1或BRCA2障碍使得细胞对PARP酶活性的抑制敏感，造成染色体不稳定性、细胞周期停滞并导致其后的细胞凋亡。
在缺少这种DNA修复的场合，PARP抑制剂可杀死细胞，因此能够有效地杀死有BRCA缺陷的肿瘤细胞和其他类似的肿瘤细胞。正常细胞可能不受这一药物的影响，因为它们可能仍然具有这种DNA修复机制。这一治疗可能还适用于和BRCA缺陷癌症类似的其他形式的乳腺癌。通常，治疗乳腺癌的药物能杀死肿瘤细胞，但是也损害正常细胞。正是正常细胞受到损害造成了令人苦恼的副作用，如恶心和脱发。在一些实施方案中，PARP抑制剂治疗的一个优势是它是一种靶向疗法：在杀死肿瘤细胞的同时，正常细胞不受影响。这是因为PARP抑制剂利用了一些肿瘤细胞的特殊遗传构造。
BRCA基因有缺陷的患者具有上调的PARP水平。PARP上调可能表明有其他有缺陷的DNA修复通道和尚未辨认出来的BRCA样遗传缺陷。PARP-1基因表达的评估是肿瘤对PARP抑制剂敏感度的一个指标。因此，在一些实施方案中，不仅通过确定乳腺癌的HR和/或HER2状况，而且还通过测量PARP水平识别有BRCA缺陷患者的癌症早期发病，从而使转移性乳腺癌的治疗得到了加强。可通过上调的PARP水平识别可用PARP抑制剂治疗的BRCA缺陷患者。对这样的BRCA缺陷患者可进一步采用PARP抑制剂来治疗。
在一些实施方案中，从一位疑似有癌性乳腺损伤的患者收集了样品。尽管这样的样品可为任何可用的生物组织，但是，多数情况下，该样品为疑似癌性的乳腺损伤之一部分，无论样品是通过最低限度侵入性活体检查还是通过治疗手术(如***肿瘤切除术、***切除术、部分或修饰性***切除术或根治性***切除术)获取的。这样的样本还可能包括***切除术中取出的一个或多个***的全部或一部分。然后即可对PARP表达进行分析，如果PARP表达高于预定的水平(即与正常组织相比上调了)，则可使用PARP-1抑制剂，如苯并吡喃酮联用一种或多种抗肿瘤剂如OX和GEM治疗患者。因此，应该理解，尽管此处所述的实施方案针对所谓的三阴转移性乳腺癌的治疗，在一些实施方案中，只要满足PARP上调的阈值，乳腺癌不需要为三阴。
在一些实施方案中，通过评估PARP表达水平而识别出了同源重组缺陷性肿瘤。如果观察到了PARP上调，则可用PARP抑制剂来***。另一个实施方案为一个治疗同源重组缺陷癌症的方法，包括评估PARP表达水平，如果观察到过表达，则癌症可用PARP抑制剂来治疗。
样品收集、制备和分离
生物样品可从患者的各种来源收集，包括体液样品或组织样品。收集的样品可为人正常或肿瘤样品，***抽吸液。样品可在一定的时期(如大约一天一次、一周一次或一个月一次、半年一次或一年一次)从个人重复收集。在一段时间内从个人获得许多样品可用来验证早期检测结果和/或识别作为如疾病发展或治疗的结果而发生的生物模式的变化。
取决于收集的样品的类型和/或PARP分析，样品制备和分离可能涉及任何程序。这样的程序包括，此处仅作为实例，浓缩、稀释、调节pH、除去高丰度多肽(如白蛋白、丙种球蛋白和转铁蛋白等)、加入防腐剂和校正剂、加入酶抑制剂、加入变性剂、样品脱盐、样品蛋白质浓缩、脂类的提取和纯化。
样品制备还可能分离非共价键络合物中连接到其他蛋白质(如载体蛋白)上的分子。这一过程可能分离那些连接到特定载体蛋白(如白蛋白)上的分子，或使用更一般的方法，如通过蛋白质变性，如用酸释放所有载体蛋白上结合的分子，然后除去载体蛋白。
从样品中除去不需要的蛋白质(如高丰度、缺少信息价值或检测不到的蛋白质)可通过使用高亲和力试剂、高分子量过滤器、超速离心和/或电渗析来实现。高亲和力试剂包括抗体或其他选择性结合到高丰度蛋白质的试剂(如适体)。样品制备还可能包括离子交换色谱、金属离子亲和力色谱、凝胶过滤、疏水色谱、色谱聚焦、吸附色谱、等电点聚焦和相关的技术。分子量过滤器包括根据分子大小和分子量分离分子的过滤膜。这样的过滤膜可进一步采用反渗透、纳米过滤、超滤和微滤。
超速离心是一个从样品中除去不需要的多肽的方法。超速离心法将样品以15,000-60,000rpm进行离心分离，同时用一个光学***监测颗粒沉积(或缺少沉积)。电渗析是一个使用电渗膜或半透膜的过程，其中离子在电位差的影响下通过半透膜从一个溶液被搬运到另一个溶液中。由于电渗析法中使用的渗透膜具有选择性搬运正离子或负离子和剔除相反电荷离子的能力，并允许物质根据分子大小和电荷透过半透膜迁移，这使得电渗析法成为一个很有用的电解质浓缩、除去或分离的方法。
本发明中的分离和纯化可包括本领域已知的任何程序，如毛细管电泳(如毛细管或芯片上)或色谱(如毛细管、柱或芯片上)。电泳是一个可用来在电场的影响下分离离子分子的方法。电泳可在凝胶、毛细管或芯片上的微通道中进行。可用于电泳的凝胶的实例包括淀粉、丙烯酰胺、聚氧乙烯、琼脂糖或其组合。可通过交联、添加清洁剂或变性剂、酶或抗体固定(亲和力电泳)或底物(酶谱电泳)，以及加入pH梯度对凝胶加以改变。用于电泳的毛细管的实例包括与电喷雾相接的毛细管。
毛细管电泳(CE)是分离复杂亲水分子和高电荷溶质的优选方法。CE技术也可在微流控芯片上实施。取决于毛细管和缓冲溶液的类型，CE可以进一步分为如毛细管区带电泳(CZE)、毛细管等电点聚焦(CIEF)、毛细管等速电泳(cITP)和毛细管电色谱法(CEC)等分离技术。一个将CE技术和电喷雾离子化结合起来的实施方案涉及使用挥发性溶液，如包含一个挥发性酸和/或碱以及一个有机物，如乙醇或乙腈的水溶液混合物。
毛细管等速电泳(cITP)中，分析物以恒定速度移过毛细管，但是通过各自的移动性而被分离。毛细管区带电泳法(CZE)，亦称为自由溶液CE(FSCE)的分离原理基于由分子电荷决定的分析物电泳移动性以及分子在迁移过程中所遇到的通常与分子大小成正比的摩擦阻力的差别。毛细管等电点聚焦(CIEF)允许弱电离两性分子在pH梯度下通过电泳分离。CEC是传统的高效液相色谱(HPLC)和CE的一种杂交技术。
本发明所用的分离和纯化技术包括本领域已知的任何色谱程序。色谱可能基于某些分析物不同的吸附和洗提特性或分析物在移动相和固定相之间的分配。色谱法的不同实例包括但不限于液相色谱(LC)、气相色谱(GC)、高效液相色谱等(HPLC)。
鉴定PARP水平
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)亦称聚(ADP-核糖)合成酶和聚ADP-核糖基转移酶。PARP催化聚(ADP-核糖)聚合物的形成，该聚合物可连接到核蛋白质(及其自身)，因此改变了这些蛋白质的活性。酶在增强DNA修复方面起作用，它在调控细胞核中的染色质方面也有作用(有关这方面的评论，请参见D.D’Amours et al.“Poly (ADP-ribosylation reactions in the regulation ofnuclear functions，”(Biochem.J.342：249-268(1999))。
PARP-1包含一个N端DNA结合域、一个自身修饰域和一个C端催化域，且有各种细胞蛋白与PARP-1相互作用。N端DNA结合域包含两个锌指结合基元。转录增强因子1(TEF-1)、维甲酸α受体、DNA聚合酶α、X-射线修复交叉互补因子1(XRCC1)以及PARP-1本身都在该域中与PARP-1相互作用。自身修饰域包含一个BRCT结构基元、一个蛋白质-蛋白质相互作用模块。这一结构基元最初发现于BRCA1的C端(子宫癌易感蛋白质1)且存在于与DNA修复、重组和细胞周期检查点控制相关的各种蛋白质中。含有POU-同源域的八聚物转录因子1(Oct-1)、阴阳(YY)因子1和人泛素结合酶9(ubc9)可与PARP-1中的这一BRCT结构基元相互作用。
在哺乳动物的基因组中，有超过15个PARP家族基因成员。能够将聚(ADP-核糖)降解为ADP-核糖的PARP家族蛋白和聚(ADP-核糖)乙二醇水解酶(PARG)可能涉及到各种细胞调控功能，包括DNA损害应答和转录调控，且可能在很多方面与致癌作用和癌症生物学有关。
现已识别出了几个PARP家族蛋白质。现已发现，端锚聚合酶为端粒调控因子1(TRF-1)的相互作用蛋白，并涉及端粒的调控。穹窿PARP(VPARP)是穹窿复合物的一个组成部分，起着转运核细胞质的作用。PARP-2、PARP-3和2，3，7，8-四氯二苯并-p-二噁英可诱导的PARP(TiPARP)也已被识别。因此，聚(ADP-核糖)代谢可能与各种细胞调控功能有关。
这一基因家族的一个成员是PARP-1。PARP-1基因产品在细胞核中以高水平表达，其活化依赖于DNA损害。不受任何理论的约束，据认为，PARP-1通过一个氨基酸终端DNA结合域连接到DNA单链或双链断裂。这一结合活化羧基终端催化域并导致在目标分子上形成ADP-核糖。通过一个中心位置的自身修饰域，PARP-1本身也是聚ADP-核糖的目标。PARP-1的核糖化造成PARP-1分子从DNA分离。整个结合、核糖化和解离的过程发生很迅速。有人指出，PARP-1瞬间结合到DNA损伤位点导致DNA修复机制的补充，且可以抑制重组足够长时间进行修复补充。
用于PARP反应的ADP-核糖的来源为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)。NAD是在细胞中从细胞ATP储存中合成的，因此，高水平PARP活性的活化可导致迅速耗尽细胞能储存。现已证明，PARP活性的诱导可导致与细胞NAD和ATP储存耗尽相关的细胞死亡。在很多情况下，PARP活性是因为氧化剂应激或在炎症过程中诱发的。例如，在缺血性组织的再灌注过程中，产生反应性一氧化氮，一氧化氮又造成另外的反应性含氧性物质，包括过氧化氢、过氧亚硝酸盐和羟基基团。这后面一个基团可直接损害DNA，形成的损害诱发PARP活性的活化。通常的情况似乎是，出现了足够的PARP活性活化，结果细胞能储存被消耗，细胞死亡。据认为，炎症过程有同样的机理，当内皮细胞和炎症细胞合成一氧化氮时，则在周围细胞中造成氧化性DNA损害，并在其后产生PARP活性活化。因PARP活化而造成的细胞死亡被认为是因缺血性再灌注损伤或炎症过程所造成的组织损害程度的主要贡献因素。
在一些实施方案中，将患者样品的PARP水平与预定的标准样品比较。患者样品通常取自患者的患病组织，如癌细胞或组织。标准样品可来自同一患者，或来自不同的受试者。标准样品通常为正常、非患病组织样品。但是，在一些实施方案中，如为了疾病的标记或为了评估治疗的效力，标准样品为来自患病组织。标准样品可能为取自几个不同的受试者的组合。在一些实施方案中，将患者的PARP水平与一个预定的水平相比较。这一预定的水平通常得自正常的样品。如此处所说明的，“预定的PARP水平”可能用来，仅作为例子，评估被选择参与治疗的患者，评估PARP抑制剂治疗的反应，评估PARP抑制剂与第二个治疗剂联用的反应，和/或诊断患者的癌症、炎症、疼痛和/或相关的病症。预定的PARP水平可能是在患有癌症或未患癌症的患者群中测定的。预定的PARP水平可为一个简单的数值，同等地适用于每一位患者，或预定PARP水平根据患者的特定亚群可有变化。例如，男子可能有与妇女不同的预定PARP水平；不吸烟者的预定PARP水平可能与吸烟者不同。患者的年龄、体重和身高可能影响个人的预定PARP水平。此外，预定PARP水平可能为每位患者单独确定。预定PARP水平可为任何适当的标准。例如，预定PARP水平可得自正在对其进行患者选择评估的同一人。在一个实施方案中，预定PARP水平可能得自同一患者以前的评估。按这种方式，可随时间的过去监测患者选择的进展。另外，标准可能得自另一个人或多人，如一群选定的人的评估。按这样的方式，可将正在进行选择评估的人的选择程度与适当的其他人，如其他与正进行选择评估者处于类似情况的人，如那些患有类似或相同病症的人。
在本发明的一些实施方案中，PARP预定水平的变化为约0.5倍、大约1.0倍、大约1.5倍、大约2.0倍、大约2.5倍、大约3.0倍、大约3.5倍、大约4.0倍、大约4.5倍，或大约5.0倍。在一些实施方案中，倍数变化为小于大约1、小于大约5、小于大约10、小于大约20、小于大约30、小于大约40，或小于大约50。在其他实施方案中，与预定的水平相比，PARP水平的变化为大于大约1、大于大约5、大于大约10、大于大约20、大于大约30、大于大约40，或大于大约50。优选的与预定的水平的倍数变化为约0.5、大约1.0、大约1.5、大约2.0、大约2.5和大约3.0。
患者的PARP分析特别有价值并富含信息，因为它让医师能更有效地选择最佳治疗，并根据上调或下调的PARP水平采用更积极的治疗和养生疗法。更积极的治疗或联用治疗和养生疗法可拮抗患者的预后不良并延长整体存活时间。有了这些信息后，医疗从业者可选择提供某些类型的PARP抑制剂治疗和/或更积极的治疗。
在一段时间，如数天、数周、数月以及在有些情况下，可为数年或其各种时间间隔监测患者的PARP水平过程中，可在从业者如医师或临床医生确定的时间间隔，收集患者的体液样品，如血清和血浆以测定PARP水平，并在疗程、治疗或疾病期间与正常个人的水平作比较。例如，可按照本发明每个月、每两个月或按一个月、二个月或三个月间隔的组合收集患者样品并进行监测。此外，在一段时间获得的患者PARP水平可以互相比较，并可在监测期间与正常对照的PARP值比较，从而提供患者自身的PARP值作为内部对照或个人对照值，用于长期PARP监测。
组合物
在一些实施方案中，提供用于治疗癌症的组合物，该组合物包含式I化合物，或其可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560601121
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；且
其中所述化合物不是以下化合物之一：
在一些实施方案中，该化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIh、IIIm或IIIn，或是它们的可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560601131
在一些实施方案中，可用该组合物治疗的癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，该组合物还进一步包含抗肿瘤剂。抗肿瘤剂包括但不限于抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
在一些实施方案中，抗肿瘤烷化剂为氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀；抗肿瘤抗代谢物为甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠；抗肿瘤抗生素为放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星；植物来源的抗肿瘤剂为长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨；抗肿瘤铂络合化合物为顺铂、卡铂、奈达铂和奥沙利铂；抗肿瘤喜树碱衍生物为伊立替康、托泊替康和喜树碱；抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂为吉非替尼、伊马替尼和埃罗替尼；单克隆抗体为西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、贝伐单抗、阿仑单抗和曲妥珠单抗；干扰素为α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素；生物应答修饰剂为云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、容链菌或乌苯美司，其他抗肿瘤剂为米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基尿素、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特、阿尔法达贝泊丁、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠、地尼白介素、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米、卡培他滨和戈舍瑞林。
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂化合物，包括但不限于奥沙利铂(OX)、顺铂或卡铂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为抗代谢物药剂，包括但不限于吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，该组合物进一步包含一种以上抗肿瘤剂，如有机铂化合物和抗代谢物药剂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为OX和GEM。
其他实施方案提供用于治疗癌症的组合物，该组合物包含式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560601151
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、羧基、酯、亚硝基、硝基、氨基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；
在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物为式II化合物或其可药用盐或前药：
Figure BPA00001161560601152
其中R5选自氢、羧基、亚硝基、硝基、氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。在一些实施方案中，该化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的可药用盐或前药之一：
Figure BPA00001161560601161
在一些实施方案中，抗肿瘤剂为有机铂抗癌化合物。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为顺铂、卡铂或奥沙利铂。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)。在一些实施方案中，抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。在一些实施方案中，本发明提供一种以上抗肿瘤剂。在一些实施方案中，与苯并吡喃酮化合物联用的抗肿瘤剂为OX和GEM。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物的式IIIg，即5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮。在一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物的式IIIk，即5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮。在一些实施方案中，该组合物包含IIIg和OX。在一些实施方案中，该组合物包含IIIg和GEM。在一些实施方案中，该组合物包含IIIg、GEM和OX。在一些实施方案中，该组合物包含IIIk和OX。在一些实施方案中，该组合物包含IIIk和GEM。在一些实施方案中，该组合物包含IIIk、GEM和OX。在一些实施方案中，抗肿瘤剂和苯并吡喃酮化合物的合并效应具有协同作用。在一些实施方案中，OX或GEM与IIIg(5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮)联用具有协同作用。在一些实施方案中，OX或GEM与IIIk(5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮)联用具有协同作用。
一些实施方案使用此处给出的组合物制备药物，用于治疗包括但不限于以下癌症：肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、CNS癌症、周围CNS癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。在一些优选的实施方案中，所述癌症为胰腺癌。
根据本发明的组合物可包括结构式I-III的一个化合物的盐或游离碱形式(如式IIIa-IIIh，尤其是IIIg或IIIh或IIIk，特别是IIIg的化合物之一)以及抗肿瘤剂的盐或游离碱形式，如有机铂药物，包括但不限于顺铂、卡铂或奥沙利铂或吉西他滨。组合物可为口服、静脉、腹膜内形式或其他药学上可接受的剂量形式。在一些实施方案中，该组合物通过口服给药，剂量形式为片剂、胶囊剂、扁囊片或其他可用的口服剂量形式。在一些实施方案中，该组合物为肠胃外给药，如静脉给药，并通过包含结构式I-III的一个化合物的盐或游离碱形式(如式IIIa-IIIh，尤其是IIIg或IIIh或IIIk，特别是IIIg的化合物之一)以及抗肿瘤剂的盐或游离碱形式，如有机铂药物，包括但不限于顺铂、卡铂或奥沙利铂或吉西他滨的溶液给药。
本发明的候选PARP抑制剂的组合物包括含有有效量的治疗或预防活性成分的组合物，即能够有效地达到治疗或预防效益的剂量。一个特殊应用的实际有效量取决于，除了其他因素之外，治疗的病症以及给药途径。确定有效剂量是熟悉本领域的技术人员所熟知的。组合物包含候选PARP抑制剂，一个或多个药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，以及任选地包含另外的治疗剂。组合物可制剂成持续释放或延时释放。
本发明优选的治疗组合还包括赋形剂、助剂和/或载体。适当的赋形剂包括待治疗的受试者可以耐受的化合物。这些赋形剂的实例包括水、盐水、林格溶液、葡萄糖溶液、Hank溶液和其他生理平衡盐水溶液。也可使用非水溶液载体，如不挥发油、芝麻油、油酸乙酯或甘油三酸酯。其他有用的制剂包括含有粘度增强剂，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖的悬浮液。赋形剂也可以包含少量的添加剂，如可增强等渗性和化学稳定性的物质。缓冲液的实例包括磷酸盐缓冲液、重碳酸盐缓冲液和Tris缓冲液，防腐剂的实例包括硫汞撒、邻甲酚、***和苯甲醇。标准制剂可为液体注射剂或可由适当的液体配制成用于注射的悬浮液或溶液的固体。因此，在一个非液体制剂中，赋形剂可包含葡聚糖、人血清、人血清白蛋白、防腐剂等，在给药之前再加入无菌水或盐水。在本发明的一个实施方案中，治疗组合物可包括一个载体。载体包括能够延长治疗组合物在治疗的受试者体内半衰期的化合物。适当的载体包括但不限于聚合物控制释放载体、生物降解植入物、脂质体、细菌、病毒、其他细胞、油类、脂类和二醇类。
治疗药剂的口服给药形式可包括粉剂、片剂、胶囊剂、溶液或乳液。有效量可以单剂量给药或以一系列剂量隔开一定的时间间隔，如几小时给药。组合物可按常规方式利用一种或多种药学上可接受的载体来配制，载体包含促进将活性化合物加工成药学上可用制剂的赋形剂和辅助物。适当的制剂取决于所选择的给药途径。制备本发明治疗药剂的组合物的适当技术在本领域是周所周知的。
不难理解，活性化合物的适当剂量以及包含活性化合物的组合物可随不同的患者而有变化。确定最佳剂量一般会涉及本发明的治疗效益水平与治疗的任何风险或有害副作用的平衡。选择的剂量水平将却决于各种因素，包括但不限于特定的候选PARP的活性、给药途径、给药的时间、化合物***的速率、治疗的持续时间、用于药物组合的其他药物、化合物和/或材料，以及患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康情况以及既往医疗史。化合物的量和给药途径最终由医师酌情决定，尽管一般来说，剂量是为了在作用部位达到需要的效果而又不会造成实质性有害副作用的局部浓度。
体内给药可为单剂量，在整个治疗过程中的连续剂量或间断性剂量(如按适当的时间间隔分开用的剂量)。确定最有效的给药方式或剂量的方法对熟悉本领域的技术人员来说是熟知的，且会根据治疗所用的制剂、治疗的目的、治疗的靶标细胞以及被治疗的患者而有变化。在一些实施方案中，剂量范围为从1到大约100mg/m2或1到大约250mg/kg人类受试者体重。可按治疗医师选择的剂量和给药模式单次或多次给药。
试剂盒
在一些实施方案中，本发明还提供一个用于治疗癌症的试剂盒。该试剂盒包含有效量的式(I)化合物，或其可药用盐或前药。该试剂盒可用来治疗包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
其他实施方案提供一个试剂盒用于治疗癌症，该试剂盒包括组合物，该组合物包含抗肿瘤剂和式(I)化合物的组合，且任选地包含利用该组合物治疗癌症的说明，治疗的癌症包括但不限于肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、CNS癌症、PNS癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
还有其他实施方案使用此处公开的组合物来制备治疗癌症的试剂盒。这样的试剂盒可能还包含表明或确立苯并吡喃酮化合物的活性和/或优势的如科学参考文献、包装***材料、临床试验结果和/或上述内容摘要的信息。此处所述的试剂盒可向健康提供商提供、销售和/或促销，包括医师、护士、药剂师、药典官员等。
尽管此处给出并说明了本发明的一些首选的实施方案，对熟悉本领域的技术人员来说将会显而易见，这些实施方案仅仅是作为示例提供的。现在，熟悉本领域的技术人员将会想到无数的变动、改变和替代而不会偏离本发明。应该理解，在实际使用本发明过程中，此处所说明的本发明的实施方案的各种改变均可以采用。本文意在以下面的权利要求书定义本发明的范围，且这些权利要求范围内的方法和结构及其等同方法和结构均属于本发明的范围。
实施例
实施例1
式IIIg化合物(5-碘-6-硝基香豆素)的体外功效
材料和方法
测试药物-细胞以载体或浓度为0.1μM、0.3μM、1μM、3μM、10μM、30μM和100μM的测试药物涂板后处理24小时(第1天)。
肿瘤细胞系-肿瘤细胞系(表1)得自American Type Cell Collection(ATCC，Rockville，MD)或NCI-DCTD Tumor Repository(Bethesda，MD)且保存在补充有10％胎牛血清(FBS，NovaTech)的合适生长介质中，将其保存在特定生长介质中。细胞于37℃在含有5％二氧化碳的加湿大气中增殖。
细胞增殖分析-细胞增殖采用BrdU化学发光分析测定，该方法测量5-溴-2’-脱氧尿苷(BrdU)掺入到正在增殖的细胞的基因组DNA中。简单来说，加入细胞和BrdU 4小时，在此期间，它取代胸苷掺入到正在***的细胞的DNA中。标记之后，通过加入FixDenat
Figure BPA00001161560601211
变性溶液一步固定细胞并使DNA变性。除去FixDenat后，加入抗-BrdU-过氧化酶偶联抗体，该抗体结合至已掺入到新合成的细胞DNA的BrdU。抗体培养后，用PBS洗涤细胞三次并进行发光分析。利用扫描多孔发光计(发光ELISA读数仪)通过测量光发射对反应产物进行定量。
实验设计-肿瘤细胞(表1)生长到70％融合，胰蛋白酶化、计数并以最终浓度7.5×103-3×104细胞/孔(第0天)接种到96孔平底板上；从第1天开始用IIIg处理并持续68小时(表2)。两个化合物的剂量范围均在0.1μM到100μM之间。在68小时时间点，通过上述BrdU分析测量存活的细胞数。实验至少以相同剂量重复两次以测定细胞增殖抑制。这些研究的结果用于计算IIIg对每个细胞系的IC50值(产生半数最大响应的药物浓度)。
胰腺癌细胞系和培养条件
人胰腺癌细胞系(表1)保存在补充有10％胎牛血清(FBS)的最低必须培养液、丙酮酸钠、非必需氨基酸、l-谷氨酰胺、两倍维生素溶液(LifeTechnologies，Grand Island，NY)和青霉素-链霉素混合液(Flow Laboratories，Rockville，MD)中。培养物中无支原体和以下致病鼠病毒：3型呼肠病毒、肺炎病毒、K病毒、Theiler脑炎病毒、仙台病毒、细小病毒、小鼠腺病毒、小鼠肝炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、痘病毒和乳酸脱氢酶病毒(由Science Applications International Corp.，Frederick，MD分析)。
                     表1：肿瘤细胞系
Figure BPA00001161560601221
                     表2：治疗计划
  第0天   第1天(0小时)  第2天(24小时)  第3天(38小时)  第4天(72小时)
  细胞涂板   治疗开始  →  →  BrdU分析
数据收集和统计分析
对单项研究，收集每项实验的数据并采用以下公式将数据表示为细胞增殖％抑制(％ICP)：
％ICP＝100％×[(1-(RLU测试/RLU载体)]
其中RLU测试为测试样品的相对光单位，RLU载体为溶解药物的载体的相对光单位。IC50值利用下面的公式从％ICP(PRISM
Figure BPA00001161560601222
GraphPad软件)计算：
y＝最小值+(最大值-最小值)/(1+10(Log(IC50)-x)x斜率)
其中(x)为激动剂浓度的对数，(y)为响应，(最小值)和(最大值)分别为该变量的下坪区和上坪区。变量斜率定义为曲线中点的斜率。IC50为y在最小值和最大值中间时的药物浓度。
结果
式IIIg化合物的单一药物活性在经过一组人肿瘤细胞系，包括人乳腺(MX-1，MDA-MB0231)、胰腺(PANC-1)、卵巢(NIH：OVCAR-3)或***(PC-3)肿瘤细胞系处理72小时后评估。这些实验的IC50值总结于下表3中。
       表3：化合物IIIg(5-碘-6-硝基香豆素)的平均IC50值
Figure BPA00001161560601231
                表4：IIIg的平均最大％响应
Figure BPA00001161560601232
实施例2：裸鼠中IIIg对人癌异种植入物的评估。
方法和材料
小鼠
雌性无胸腺裸鼠(nu/nu，Harlan)为9-10周龄，研究第1天体重(BW)范围为18.1-27.0g。让动物自由饮水(反渗透水，1ppm Cl)进食(NIH 31 Modifiedand Irradiated Lab Diet
Figure BPA00001161560601241
含18.0％粗蛋白、5.0％粗脂肪和5.0％粗纤维)。小鼠在静态微隔离室中辐射过的ALPHA-dri
Figure BPA00001161560601242
bed-o-cobs
Figure BPA00001161560601243
实验动物床铺上饲养，开灯循环12小时，温度21-22℃(70-72℉)，湿度40-60％。PRC明确遵循“Guide for Care and Use of Laboratory Animals”关于限制、饲养、手术程序、饮食调节以及兽医护理方面的建议。PRC的动物计划经过AAALACInternational的认证，保证合乎实验动物护理和使用的普遍接受的标准。
肿瘤植入
对SW620实验来说，在该研究中使用的人SW620结肠腺癌通过一系列移植保持在裸鼠中。
对MX-1实验来说，在该研究中使用的人MX-1乳腺癌通过一系列移植保持在裸鼠。
对PANC-1实验来说，在该研究中使用的人PANC-1胰腺癌通过一系列移植保持在裸鼠中。
将肿瘤片段(1mm3)皮下植入每只试验小鼠的右侧腹。每周两次监测肿瘤，随着肿瘤体积接近80-120mm3，每天进行监测。在研究的第1天，将动物按治疗组进行分组，肿瘤大小为63-144mm3，动物组平均肿瘤大小为约98mm3。肿瘤大小按下面的公式计算，单位为mm3：
肿瘤体积＝(w2×l)/2
其中w＝肿瘤的宽度，l＝肿瘤的长度，单位为mm。肿瘤重量可按照1mm3肿瘤体积相当于1mg的假定来估算。
测试物品
IIIg给药溶液每周通过将IIIg溶于100％二甲亚砜(DMSO)现配。化合物和给药溶液储存于4℃。5-FU(阳性对照)(Adrucil
Figure BPA00001161560601244
Roche Diagnostics，50mg/mL，Lot # 200826)用pH～4.8的5％葡萄糖水溶液稀释。每次给药时配制新鲜的5-FU给药溶液。
治疗
小鼠分成6组(n＝10)，并按照表1中的治疗方法治疗。对照组1小鼠在研究期间每天一次接受DMSO、LK4载体腹膜内注射(每天一次，至结束)。第2组小鼠每周一次接受100mg/kg 5-FU腹膜内注射(每周一次x3)。第2组中，对每只动物按0.2mL/20g小鼠体重的给药体积给药。第3组和第4组接受LK4腹膜内注射，分别为1.5和1mg/小鼠，每天一次，至结束。第5组和第6组接受LK4腹膜内注射，分别为2和1mg/小鼠，在研究期间每周两次(每周两次，至结束)。第1组和第3-6组，给药体积为0.05mL/小鼠，未根据体重调整。
终点
研究期间，每周两次测量肿瘤的大小。当肿瘤达到预定的终点大小(1200mm3)时，将每只动物无痛处死。每只小鼠达到终点的时间(TTE)按下面的公式计算：
TTE＝[Log10(终点体积)-b]/m
其中TTE表示为天数，终点体积为mm3，b为截距，m为对数变换肿瘤生长数据集线性回归得到的直线斜率。
该数据集包括超过终点体积的第一次观察以及达到终点体积之前的三次连续观察。计算的TTE通常小于动物达到肿瘤大小而被无痛处死当天的大小。没有达到终点的动物在研究结束时被无痛处死，指定的TTE值等于研究最后一天(54天)的指定值。分类为死于治疗相关(TR)的原因或非治疗相关的转移(NTRm)原因的动物被指定等于死亡当天的TTE值。分类为死于非治疗相关(NTR)原因的动物被排除在TTE计算之外。治疗功效根据肿瘤生长延迟(TGD)计算，TGD定义为与对照组比较，治疗组中值TTE的增加：
TGD＝T-C
单位为天数，或表达为对照组中值TTE的百分数：
％TGD＝％100×[(T-C)/C]
其中：
T＝治疗组的中值TTE，
C＝对照组1的中值TTE。
MTV和消退响应的标准指标
治疗功效还从研究最后一天剩下动物的肿瘤体积和消退响应的数目确定。MTV(n)定义为第54天剩下的肿瘤尚未达到终点体积的n只动物的中值肿瘤体积。治疗可能引起动物中肿瘤的部分消退(PR)或完全消退(CR)。PR表示在治疗过程中，三次连续测量的肿瘤体积为第1天的50％或更小，且三个测量中有一个或一个以上等于或大于13.5mm3。CR表示在治疗过程中，肿瘤体积连续三次测量都小于13.5mm3。研究结束时，CR动物还被分类为无肿瘤存活动物(TFS)。
统计和图形分析
利用Prism 3.03(GraphPad)for Windows进行了统计和图形分析。采用Kruskal-Wallis检验和用Dunn多重比较法进行的事后分析来分别分析所有治疗组之间以及两个治疗组之间的差别。Kruskal-Wallis检验(检验分布函数差别)是Mann-Whitney检验的扩展，是和ANOVAs中所用的F-检验类似的一种检验方法。采用时序检验(logrank test)来分析两组的整体存活体验之间的差别。Kruskal-Wallis检验和时序检验利用组中所有动物的TTE数据，除了NTR死亡之外。该双拖尾统计分析以P＝0.05进行。
卡普兰-梅尔(Kaplan-Meier)图显示研究中随时间存活下来的动物百分数。卡普兰-梅尔图使用与Kruskal-Wallis检验和时序检验同样的TTE数据。肿瘤生长曲线显示，动物组中值肿瘤体积为时间的函数。当动物因为肿瘤大小或TR死亡而退出研究时，记录的该动物的最终肿瘤体积包括在计算后续时间点中值体积的数据中。因此，曲线所示的该最终中值肿瘤体积可能与MTV不同，MTV为研究最后一天时剩余小鼠的中值肿瘤体积(不包括所有达到终点体积的肿瘤)。如果一组中有一个以上的TR死亡，则中值肿瘤生长曲线通常在第二个TR死亡之前的最后测量时间处截短。当一组中50％以上可评估的动物的肿瘤达到了终点体积时，肿瘤生长曲线也被截短。
蛋白质印迹
按照制造商的说明，将细胞裂解于在冰上的、含有蛋白酶抑制剂的150mM NaCl、1％ NP-40、0.5％脱氧胆酸钠、0.1％SDS、以及50mM Tris-HCl，pH 7.4的混合物(Roche Diagnostics，Indianapolis，IN)中。蛋白质浓度利用BCA分析测定(Pierce Chemical，Rockford，IL)。样品用2×Laemmli缓冲液煮沸并在含有0.1％SDS的10％聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，接着转移到Immobilon-P膜(Millipore，Billerica，MA)上，然后用特异性一抗培养。所感兴趣的蛋白质用合适的辣根过氧化物酶偶联的二抗和增强的化学发光底物(Pierce Chemical)检测。
利用蛋白质印迹法在13个胰腺癌细胞系中分析PARP-1蛋白的表达。
利用BrdU-ELISA分析测定了IIIg单用和与奥沙利铂联用对8个胰腺癌细胞增殖的影响。
按照Chou和Talalay描述的方法进行了协同效应评估。
为了确定IIIg的PARP-1活性抑制对NF-κB信号传递是否有任何抑制效应，利用电泳迁移率检测评估NF-κB DNA结合活性。
利用IVIS 100成像***(可以实时定量监测肿瘤生长)，IIIg对肿瘤生长的治疗功效和存活在不同荧光素酶表达的胰腺癌原位裸鼠模型中进行了评估。
每天监测小鼠，看有无中毒迹象，包括体重降低、腹泻、不活动以及整体外观。
结果
在13个人胰腺癌细胞系的8个细胞系中观察到PARP-1过表达(图1)。
在体外，IIIg单用可显著地抑制8个PC细胞系的生长，IC50范围为5到10μM(图2)。
在原位注射表达Colo357FG或L3.6pl PC细胞荧光素酶的裸鼠中，IIIg剂量为100mg/kg/天，2次/周×4周可显著地降低肿瘤负担并延长存活时间，同时没有中毒迹象(图3)。
图4显示带有Colo357FG和L3.6pl人胰腺癌异种移植物的小鼠用0.25和100mg/kg IIIg治疗的结果；图5显示带有Colo357FG和L3.6pl人胰腺癌异种移植物并用0.25和100mg/kg IIIg治疗的小鼠的平均存活数据。
初步结果表明，采用200mg/kg/周的IIIg剂量，每周一次比每周两次或每天给药的体内抗肿瘤效果更好(图6)。
结论
PARP抑制剂5-碘-6-硝基香豆素(IIIg)在不同的胰腺癌细胞模型中显示出了强效的体外和体内抗肿瘤活性并增强了奥沙利铂的细胞毒性。
实施例3：IIIg对胰腺癌细胞系的效力
胰腺癌细胞系和培养条件
将人胰腺癌细胞系保存在补充有10％胎牛血清(FBS)的最低必须培养液、丙酮酸钠、非必需氨基酸、l-谷氨酰胺、两倍维生素溶液(Life Technologies，Grand Island，NY)和青霉素-链霉素混合液(Flow Laboratories，Rockville，MD)中。培养物中无支原体和以下致病鼠病毒：3型呼肠病毒、肺炎病毒、K病毒、Theiler脑炎病毒、仙台病毒、细小病毒、小鼠腺病毒、小鼠肝炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、痘病毒和乳酸脱氢酶病毒(由ScienceApplications International Corp.Frederick，MD分析)。
动物和肿瘤细胞的原位移植
雄性无胸腺裸鼠(NCI-nu)购自Animal Production Area of the NationalCancer Institute Frederick Cancer Research and Development Center(Frederick，MD)。在由American Association for Accrediatation of Laboratory Animal Care批准的无特定病原体条件下，并按照U.S.Department of Agriculture、U.S.Department of Helth and Human Services以及Nati onal Institutes of Health的当前法规和标准饲养小鼠。小鼠到8到12周龄时，按机构准则使用。
为了产生胰腺瘤，通过短暂接触0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA而收获亚融合培养物。用含有10％FBS的培养基停止胰蛋白酶化，细胞用无血清培养基洗涤两次，并重新悬浮到Hanks平衡盐溶液中(HBSS)。仅使用生存力大于90％的单细胞悬浮液用于注射。按照以前所述方法(Baker CH，SolorzanoCC，Fidler IJ.Cancer Res.2002；62：1996-2003；Hwang RF，等人Clin CancerRes.2003；9：6534-6544)，将悬浮于50μl HBSS的一百万细胞注射到裸鼠的胰腺。
形成了原位人胰腺癌的裸鼠的治疗
注射肿瘤细胞至胰腺14天后，所有小鼠被随机分配到下面的四个治疗组之一(n＝5)。
IIIg用100％DMSO稀释并每周注射两次(biw)：
-25mg/kg每周两次
-50mg/kg每周两次
-100mg/kg每周两次
验尸程序和组织学研究
验尸之前，称量小鼠体重，然后切除肿瘤并称量。为了组织学和免疫组织化学(IHC)分析，将一部分肿瘤组织用***固定并包埋在石腊中，另一部分包埋在OCT化合物中(Miles，Inc.，Elkhart，IN)，在液氮中快速冷冻并储存于-70℃。
实施例4
5-碘-6-硝基苯并吡喃酮(IIIg)、奥沙利铂(OxaliPt)，以及IIIg与奥沙利铂联用对Colo375FG转移性胰腺癌细胞的细胞周期分布的影响
将Colo375FG转移性胰腺癌细胞在补充有10％胎牛血清的DulbeccoModified Eagle培养基中培养。在不同浓度的BiPar化合物和其他试剂或DMSO对照存在的情况下，将细胞以105细胞/P100或104细胞/P60点板(用于分析，需要长达3天培养)。处理后，附着的细胞用Coulter计数仪测量，并用1％亚甲蓝染色。将亚甲蓝溶于甲醇和水的50％-50％混合物。将细胞点板于24孔或96孔板上，并用指明的化合物处理，然后抽吸掉培养基，细胞用PBS洗涤，在甲醇中固定5-10分钟，洗涤，然后让培养板完全干燥。向孔中加入亚甲蓝溶液，并将板培养5分钟。除去染色溶液，并用dH2O洗涤板。板完全干燥后，向每孔中加入少量1N HCl以提取亚甲蓝。利用600nm处的OD读数和校正曲线来确定细胞数目。
化合物
对每个单独的试验，将IIIg(6-硝基-5-碘-苯并吡喃酮)直接由干粉溶解到DMSO的10mM储备液中，然后全部体积的储备液用于在细胞培养基中制备工作浓度溶液，以避免沉淀或相应化合物损失的可能性。对照试验利用匹配体积/浓度的载体(DMSO)进行。在这些对照中，细胞在生长或细胞周期分布未显示出任何变化。
PI排除法、细胞周期和TUNEL分析
加入药物并培养后，对细胞进行胰蛋白酶化，并取出样品的等分样用于计数和PI(碘化丙啶)排除分析。将一部分的细胞进行离心，并重新悬浮到含有5μg/ml PI的0.5ml冰冷PBS中。另一部分的细胞固定在冰冷的70％乙醇中并储存在冻箱中过夜。对于细胞周期分析，细胞按标准步骤用碘化丙啶(PI)染色。细胞DNA含量通过流式细胞仪利用BD LSRII FACS测定，G1、S或G2/M中的细胞百分数用ModFit软件确定。
细胞使用“In situ Cell Death Detection Kit，Fluorescein”(RocheDiagnostics Corporation，Roche Applied Science，Indianapolis，IN)标记用于凋亡。简单来说，将固定的细胞进行离心，并在含有1％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液(PBS)中洗涤一次，然后在室温重新悬浮到2ml透化缓冲液(0.1％Triton X-100和0.1％柠檬酸钠的PBS溶液)中25分钟，并在0.2mlPBS/1％BSA溶液中洗涤两次。将细胞重新悬浮到50μl TUNEL反应混合物(TdT酶和标记溶液)中，并在37℃加湿黑暗空气中培养60分钟。标记的细胞在PBS/1％BSA中洗涤两次，然后重新悬浮到含有1μg/ml 4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的0.5ml冰冷PBS中至少30分钟。所有细胞样品采用BDLSR II(BD Biosciences，San Jose，CA)分析。
溴脱氧尿苷(BrdU)标记试验
将50μl BrdU(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)储备液(1mM)加入以获得10μM BrdU最终浓度。细胞在37℃培养30分钟，并固定在冰冷的70％乙醇中，并储存在冷室(4℃)中过夜。将固定的细胞离心，并用2ml PBS溶液洗涤，然后在37℃和黑暗中重新悬浮到0.7ml变性溶液(0.2mg/ml胃蛋白酶的2N HCl溶液)中15分钟，并用1.04ml 1M Tris缓冲液(Trizma base，SigmaChemical Co.)悬浮以终止水解，反应并用2ml PBS洗涤。
按1∶100稀释用TBFP渗透缓冲液(0.5％ Tween-20，1％牛血清白蛋白和1％胎牛血清的PBS溶液)将细胞重新悬浮到100-μl抗-BrdU抗体(DakoCytomation，Carpinteria，CA)中，在室温下黑暗中培养25分钟，并用2mlPBS洗涤。按1∶200稀释用TBFP渗透缓冲液将一抗标记的细胞重新悬浮到100μl的山羊抗小鼠IgG(H+L)(2mg/mL)的Alexa Fluor F(ab′)2片段(Molecular Probes，Eugene，OR)中，在室温下和黑暗中培养25分钟，并用2mlPBS洗涤，然后重新悬浮于含有1μg/ml的4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的0.5ml冰冷PBS中至少30分钟。所有细胞样品采用BD LSR II(BDBiosciences，San Jose，CA)分析。
该使用IIIg、奥沙利铂或IIIg和奥沙利铂联用的细胞周期分析的结果示于表5中。IIIg和奥沙利铂联用显著地降低了活细胞的百分数并抑制Colo375FG胰腺瘤细胞的增殖，正如BrdU阳性细胞的百分数所反映出来的那样。
                           表5
Figure BPA00001161560601321
实施例5
IIIg作为单一活性药物对肿瘤细胞体外增殖的影响
通过BrdU掺入测量多种肿瘤细胞系的增殖，包括子宫癌Hela细胞、肺癌A549细胞、PARP1+/+A16和PARP1-/-A12成纤维细胞，和几个人胰腺癌细胞系，COLO357FG、MiaPaCa-2、AsPC-1、L3.6pl和Panc28。在一些实验中，肿瘤细胞增殖在96小时后测量。对IIIg浓度进行滴定以显示IIIg对肿瘤细胞体外生长的影响。
BrdU分析在本领域是众所周知的。简单来说，将细胞在相应的测试物质存在下在合适的96孔MP板上于37℃培养一段时间(1到5天，取决于个别分析体系)。然后，将BrdU加入到细胞中，再对细胞进行培养(通常为2-24小时)。在该标记期间，嘧啶类似物BrdU被掺入到增殖细胞DNA代替胸苷。除去培养基后，通过加入FixDenat一步固定细胞并使DNA变性(有必要对DNA进行变性以使掺入的BrdU更容易被抗体检测到)。加入抗-BrdU-POD抗体，该抗体结合至新合成的细胞DNA中掺入的BrdU。免疫复合物通过随后的底物反应由化学发光法检测(基于Roche的Cell Proliferation ELISA，BrdU Chemiluminescence Protocol)。
试验和分析按照Shaw G和Prowse DM，“Inhibition ofandrogen-independent prostate cancer cell growth is enhanced by targetingHedgehog and ErbB signaling”Cancer Cell Int.2008 Mar 18；8：3的方法进行。
这些增殖试验的结果示于图7-10。IIIg选择性地抑制野生型但是不抑制PARP-1-/-成纤维细胞的生长。IIIg还显著地抑制几个人胰腺癌细胞系的生长。
实施例6
胰腺癌细胞系和PARP1+(A16)和PARP1-/-成纤维细胞(A12)中PARP1的表达和PARP活性。
利用蛋白质印迹法评估了PARP1在多种胰腺癌细胞系中的表达。简单来说，按照制造商的说明，将细胞溶于在冰上的、含有蛋白酶抑制剂的150mM NaCl、1％ NP-40、0.5％脱氧胆酸钠、0.1％SDS、以及50mM Tris-HCl，pH 7.4的混合物(Roche Diagnostics，Indianapolis，IN)中。蛋白质浓度利用BCA分析(Pierce Chemical，Rockford，IL)测定。样品用2×Laemmli缓冲液煮沸并在含有0.1％ SDS的10％聚丙烯酰胺凝胶上电泳，接着转移到Immobilon-P膜(Millipore，Billerica，MA)上，然后用特异性一抗培养。所研究的蛋白用合适的辣根过氧化物酶偶联的二抗和增强的化学发光底物(Pierce Chemical)检测。
试验的结果示于图11。
实施例7
IIIg作为单一活性药物对体内胰腺癌细胞的影响
本研究的目的是评估IIIg单独使用对体内胰腺癌细胞生长的影响。进行了试验以评估在无胸腺裸鼠胰腺中形成的胰腺癌肿瘤生长的治疗。
材料和方法
原位移植1.0x106COLO357FG肿瘤细胞的50μL HBSS溶液三天后，生物发光成像确认肿瘤形成良好，在一个实验中，小鼠被随机地分配到三个组(每组n＝10只小鼠)以接受以下治疗之一。(a)载体溶液50μL无菌盐水；(b)IIIg(25mg/kg)每周两次腹膜内注射；(c)IIIg(100mg/kg)每周两次腹膜内注射，治疗持续4周。对所有小鼠每周称体重并观察肿瘤生长。肿瘤直径用游标卡尺测量，肿瘤体积(mm3)按d2xD/2计算，其中d和D分别代表最短和最长直径。当小鼠的腹部肿瘤负荷突出(肿瘤体积＞＝2,000mm3)时，则认为存在大块肿瘤。
在另一个实验中，小鼠被随机分配到4个组(每组n＝10只小鼠)以接受以下治疗之一。(a)载体溶液50μL无菌盐水；(b)IIIg(200mg/kg)每周一次腹膜内注射；(c)IIIg(100mg/kg)每周两次腹膜内注射；(d)IIIg(40mg/kg)每天一次腹膜内注射。治疗持续4周。对所有小鼠每周称体重并观察肿瘤生长。肿瘤直径用游标卡尺测量，肿瘤体积(mm3)按d2xD/2计算，其中d和D分别代表最短和最长直径。当小鼠的腹部肿瘤负荷突出(肿瘤体积＞＝2,000mm3)时，则认为存在大块肿瘤。
在另一个试验中，小鼠被随机分配到8个组以通过口服或腹膜内注射接受以下治疗之一。(a)载体溶液50μL无菌盐水(口服)；(b)吉西他滨(25mg/kg)每周两次，共四周(腹膜内注射)；(c)IIIg(200mg/kg)每周一次(口服)；(d)IIIg(200mg/kg)每周两次(口服)；(e)IIIg(200mg/kg)每天一次(口服)；(f)IIIg(400mg/kg)每周一次(口服)；(g)IIIg(400mg/kg)每周两次(口服)；(h)IIIg(400mg/kg)每天一次(口服)。在所有治疗中，IIIg均为口服给药。治疗持续4周。对所有小鼠每周称体重并观察肿瘤生长。肿瘤直径用游标卡尺测量，肿瘤体积(mm3)按d2xD/2计算，其中d和D分别代表最短和最长直径。当小鼠的腹部肿瘤负荷突出(肿瘤体积＞＝2,000mm3)时，则认为存在大块肿瘤。
当在治疗组中10只小鼠中至少6只呈现大块疾病肿瘤时，则认为对于该组已经达到中值存活时间。在对照组的中值存活时间时，利用肿瘤细胞发射的生物发光对所有组小鼠的肿瘤生长进行评估。生物发光成像利用低温冷冻的IVIS 100成像***进行，该***连接到运行实时成像软件(Xenogen)的数据收集计算机。当有大块疾病肿瘤存在证据时，利用二氧化碳吸入处死小鼠。处死日被当作用于存活评估的死亡日期。
实验的结果示于图12和13。腹膜内注射IIIg(200mg/kg QWx4)强效地降低了肿瘤负荷，并延长了带瘤小鼠的存活时间。与没有接受治疗的小鼠和接受标准吉西他滨治疗的小鼠相比，口服给药IIIg(400mg/kg[QD5+R2]x4)也显著地降低了肿瘤负荷，并延长了带瘤小鼠的存活时间。
实施例8
IIIg与奥沙利铂联用对胰腺癌细胞体外增殖的影响
本实施例评估IIIg与抗肿瘤剂奥沙利铂联用对两个人胰腺癌细胞系COLO357FG和MiaPaCa-2体外增殖的影响。细胞增殖通过上面详细说明的BrdU掺入测量。实验按照Chou和Talalay的方法(Chou TC，Talalay P.Quantitative analysis of dose-effect relationships：the combined effects ofmultiple drugs or enzyme inhibitors.Adv Enzyme Regul 1984，22：27-55)进行。
结果示于图14。结果表明，IIIg与奥沙利铂协同抑制人转移性胰腺癌细胞的增殖。
实施例9
IIIg与奥沙利铂联用体内治疗胰腺瘤
本实施例评估IIIg与抗肿瘤剂奥沙利铂联用对人胰腺癌细胞系COLO357FG体内增殖的影响。
原位移植1.0x106COLO357FG肿瘤细胞的50μL HBSS溶液三天后，生物发光成像确认肿瘤形成良好，小鼠被随机地分配到4个组以接受以下治疗之一。(a)载体溶液50μL无菌盐水；(b)IIIg(400mg/kg)每天一次，四周[(QD5+R2)x4]；(c)奥沙利铂(10mg/kg)每周两次，四周(腹膜内)；(d)IIIg(400mg/kg)每天一次，四周[(QD5+R2)x4]，与奥沙利铂(10mg/kg每周两次，腹膜内)联用。治疗持续4周。对所有小鼠每周称体重并观察肿瘤生长。肿瘤直径用游标卡尺测量，肿瘤体积(mm3)按d2xD/2计算，其中d和D分别代表最短和最长直径。当小鼠的腹部肿瘤负荷突出(肿瘤体积＞＝2,000mm3)时，则认为存在大块肿瘤。
当在治疗组中10只小鼠中至少6只呈现大块疾病肿瘤时，则认为对于该组已经达到中值存活时间。在对照组的中值存活时间时，利用肿瘤细胞发射的生物发光对所有组小鼠的肿瘤生长进行评估。生物发光成像利用低温冷冻的IVIS 100成像***进行的，该***连接到运行实时成像软件(Xenogen)的数据收集计算机。当有大块疾病肿瘤存在证据时，利用二氧化碳吸入处死小鼠。处死日被当作用于存活计算的死亡日期。
结果示于图15。结果表明，IIIg与奥沙利铂联用具有强效协同抗肿瘤活性。
实施例10
IIIg对裸鼠中人乳腺癌异种移植物模型的抗肿瘤活性
在本实施例中，评估了IIIg对裸鼠中人MX-1乳腺癌异种移植物模型的抗肿瘤活性。利用IVIS 100成像***对荧光素酶表达的COLO357FG原位裸鼠模型中IIIg单用或与奥沙利铂联用的各种药物治疗方案进行评估。每天监测小鼠，看有无中毒迹象，包括体重降低、腹泻、不活动以及整体外观。
小鼠
雌性无胸腺裸鼠(nu/nu，Harlan)为10周龄，研究第1天体重(BW)范围为18.1-27.0g。让动物自由饮水(反渗透水，1ppm Cl)进食(NIH 31 Modified andIrradiated Lab Diet
Figure BPA00001161560601361
含18.0％粗蛋白、5.0％粗脂肪和5.0％粗纤维)。小鼠在静态微隔离室中辐射过的ALPHA-dri
Figure BPA00001161560601362
bed-o-cobs
Figure BPA00001161560601363
实验动物床铺上饲养，开灯循环12小时，温度21-22℃(70-72℉)，湿度40-60％。PRC明确遵循“Guidefor Care and Use of Laboratory Animals”关于限制、饲养、手术程序、饮食调节以及兽医护理方面的建议。PRC的动物计划经过AAALAC International的认证，保证合乎实验动物护理和使用的普遍接受的标准。
肿瘤植入
在本研究中使用的人MX-1乳腺瘤通过一系列移植保持在裸鼠中。将肿瘤片段(1mm3)皮下植入每只试验小鼠的右侧腹。每周两次监测肿瘤，随着肿瘤体积接近80-120mm3，每天进行监测。研究的第1天，动物按治疗组进行分组，肿瘤大小为63-144mm3，动物组平均肿瘤大小为约98mm3。肿瘤大小是按下面的公式计算的，单位为mm3：
肿瘤体积＝(w2xl)/2
其中w＝肿瘤的宽度，l＝肿瘤的长度，单位为mm。肿瘤重量可按照1mm3肿瘤体积重1mg的假定来估算。
测试物品
IIIg(IIIg的实验代码)给药溶液通过将IIIg溶于100％二甲亚砜(DMSO)每周现制。将化合物和给药溶液储存于4℃。5-FU(阳性对照)(Adrucil
Figure BPA00001161560601371
Roche Diagnostics，50mg/mL，Lot # 200826)用pH～4.8的5％葡萄糖水溶液稀释。每次给药时配制新鲜的5-FU给药溶液。
治疗
将小鼠分成6组(n＝10)，并按照治疗方案治疗。对照组1的小鼠在研究期间每天接受DMSO、IIIg载体腹膜内(i.p.)注射(每天，至结束)。第2组小鼠每周一次接受100mg/kg 5-FU腹膜内注射(每周一次x3)。第2组中，对每只动物按0.2mL/20-g小鼠体重的给药体积给药。第3组小鼠每周两次接受IIIg 100mg/kg(每周两次；biw)。
终点
研究期间，每周两次测量肿瘤的大小。当肿瘤达到预定的终点大小(1200mm3)时，将每只动物无痛处死。每只小鼠达到终点的时间(TTE)按下面的公式计算：
TTE＝[Log10(终点体积)-b]/m
其中TTE表示为天数，终点体积为mm3，b为截距，m为对数变换肿瘤生长数据集的线性回归得到的直线斜率。该数据集包括超过终点体积的第一次观察以及达到终点体积之前的三次连续观察。计算的TTE通常小于动物达到肿瘤大小而被无痛处死当天的大小。没有达到终点的动物在研究结束时被无痛处死，指定的TTE值等于研究最后一天(54天)的指定值。分类为死于治疗相关(TR)的原因或非治疗相关的转移(NTRm)原因的动物被指定一个等于死亡当天的TTE值。分类为死于非治疗相关(NTR)的原因的动物被排除在TTE计算之外。治疗功效根据肿瘤生长延迟(TGD)计算，TGD定义为与对照组比较，治疗组中值TTE的增加：
TGD＝T-C
单位为天数，或表达为对照组的中值TTE的百分数：
% TGD = T - C C × 100
其中：
T＝治疗组的中值TTE，
C＝对照组1的中值TTE。
MTV和消退响应的标准指标
治疗功效还从研究最后一天剩下动物的肿瘤体积和消退响应的数目确定。MTV(n)定义为第54天剩下的肿瘤尚未达到终点体积的n只动物的中值肿瘤体积。治疗可能引起动物肿瘤的部分消退(PR)或完全消退(PR)。PR表示在治疗过程中，三次连续测量的肿瘤体积为第1天的50％或更小，且三个测量中有一个或一个以上等于或大于13.5mm3。CR表示在治疗过程中，肿瘤体积连续三次测量都小于13.5mm3。研究结束时，CR动物还被分类为无肿瘤存活动物(TFS)。
统计和图形分析
利用Prism 3.03(GraphPad)for Windows进行了统计和图形分析。采用Kruskal-Wallis检验和用Dunn多重比较法进行的事后分析来分别分析所有治疗组之间以及两个治疗组之间的差别。Kruskal-Wallis检验(检验分布函数差别)是Mann-Whitney检验的扩展，是和ANOVAs中所用的F-检验类似的一种检验方法。采用时序检验(logrank test)来分析两组的整体存活体验之间的差别。Kruskal-Wallis检验和时序检验利用组中所有动物的TTE数据，除了NTR死亡之外。该双拖尾统计分析以P＝0.05进行。
卡普兰-梅尔图显示研究中随时间存活下来的动物百分数。卡普兰-梅尔图使用与Kruskal-Wallis检验和时序检验同样的TTE数据。肿瘤生长曲线显示，动物组中值肿瘤体积为时间的函数。当动物因为肿瘤大小或TR死亡而退出研究时，记录的该动物的最终肿瘤体积包括在计算后续时间点中值体积的数据中。因此，曲线所示的该最终中值肿瘤体积可能与MTV不同，MTV为研究最后一天时剩余小鼠的中值肿瘤体积(不包括所有达到终点体积的肿瘤)。如果一组中有一个以上的TR死亡，则中值肿瘤生长曲线通常在第二个TR死亡之前的最后测量时间处截短。当一组中50％以上可评估的动物的肿瘤达到了终点体积时，肿瘤生长曲线也被截短。
结果示于图16。每周两次腹膜内注射IIIg(100mg/kg)延长了带瘤动物的存活时间。
实施例11
IIIg对裸鼠中人结肠癌异种移植物模型的抗肿瘤活性
在本实施例中，评估了IIIg对裸鼠中人SW620结肠癌异种移植物模型的抗肿瘤活性。利用IVIS 100成像***对荧光素酶表达的COLO357FG原位裸鼠模型中IIIg单用或与奥沙利铂联用的各种药物治疗方案进行评估。每天监测小鼠，看有无中毒迹象，包括体重降低、腹泻、不活动以及整体外观。
小鼠
雌性无胸腺裸鼠(nu/nu，Harlan)为10周龄，研究第1天体重(BW)范围为18.1-27.0g。让动物自由饮水(反渗透水，1ppm Cl)进食(NIH 31 Modified andIrradiated Lab Diet
Figure BPA00001161560601391
含18.0％粗蛋白、5.0％粗脂肪和5.0％粗纤维)。小鼠在静态微隔离室中辐射过的ALPHA-dri
Figure BPA00001161560601392
bed-o-cobs实验动物床铺上饲养，开灯循环12小时，温度21-22℃(70-72℉)，湿度40-60％。PRC明确遵循“Guidefor Care and Use of Laboratory Animals”关于限制、饲养、手术程序、饮食调节以及兽医护理方面的建议。PRC的动物计划经过AAALAC International的认证，保证合乎实验动物护理和使用的普遍接受的标准。
肿瘤植入
在本研究中使用的人SW620结肠瘤通过一系列移植保持在裸鼠中。将肿瘤片段(1mm3)皮下植入每只试验小鼠的右侧腹。每周两次监测肿瘤，随着肿瘤体积接近80-120mm3，每天进行监测。研究的第1天，动物按治疗组进行分组，肿瘤大小为63-144mm3，动物组平均肿瘤大小为约98mm3。肿瘤大小按下面的公式计算，单位为mm3：
肿瘤体积＝(w2xl)/2
其中w＝肿瘤的宽度，l＝肿瘤的长度，单位为mm。肿瘤重量可按照1mm3肿瘤体积重1mg的假定来估算。
测试物品
IIIg(IIIg的实验代码)给药溶液通过将IIIg溶于100％二甲亚砜(DMSO)每周现配。化合物和给药溶液储存于4℃。5-FU(阳性对照)(Adrucil
Figure BPA00001161560601401
RocheDiagnostics，50mg/mL，Lot # 200826)用pH～4.8的5％葡萄糖水溶液稀释。每次给药时配制新鲜的5-FU给药溶液。
治疗
将小鼠分成6组(n＝10)，并按照治疗方案治疗。对照组1的小鼠在研究期间每天接受DMSO、IIIg载体腹膜内(i.p.)注射(每天，至结束)。第2组小鼠每周一次接受100mg/kg 5-FU腹膜内注射(每周一次x3)。第2组中，对每只动物按0.2mL/20-g小鼠体重的给药体积给药。第3组小鼠在研究期间每周两次(每周两次至结束)接受IIIg(50mg/kg)。
终点
研究期间，每周两次测量肿瘤的大小。当肿瘤达到预定的终点大小(1200mm3)时，将每只动物无痛处死。每只小鼠达到终点的时间(TTE)按下面的公式计算：
TTE＝[Log10(终点体积)-b]/m
其中TTE表示为天数，终点体积为mm3，b为截距，m为对数变换肿瘤生长数据集的线性回归得到的直线斜率。该数据集包括超过终点体积的第一次观察以及达到终点体积之前的三次连续观察。计算的TTE通常小于动物达到肿瘤大小而被无痛处死当天的大小。没有达到终点的动物在研究结束时被无痛处死，指定的TTE值等于研究最后一天(54天)的指定值。分类为死于治疗相关(TR)的原因或非治疗相关的转移(NTRm)原因的动物被指定一个等于死亡当天的TTE值。分类为死于非治疗相关(NTR)的原因的动物被排除在TTE计算之外。治疗功效根据肿瘤生长延迟(TGD)计算，TGD定义为与对照组比较，治疗组中值TTE的增加：
TGD＝T-C
单位为天数，或表达为对照组的中值TTE的百分数：
% TGD = T - C C × 100
其中：
T＝治疗组的中值TTE，
C＝对照组1的中值TTE。
MTV和消退响应的标准指标
治疗功效还从研究最后一天剩下动物的肿瘤体积和消退响应的数目确定。MTV(n)定义为第54天剩下的肿瘤尚未达到终点体积的n只动物的中值肿瘤体积。治疗可能引起动物肿瘤的部分消退(PR)或完全消退(CR)。PR表示在治疗过程中，三次连续测量的肿瘤体积为第1天的50％或更小，且三个测量中有一个或一个以上等于或大于13.5mm3。CR表示在治疗过程中，肿瘤体积连续三次测量都小于13.5mm3。研究结束时，CR动物还被分类为无肿瘤存活动物(TFS)。
统计和图形分析
利用Prism 3.03(GraphPad)for Windows进行了统计和图形分析。采用Kruskal-Wallis检验和用Dunn多重比较法进行的事后分析来分别分析所有治疗组之间以及两个治疗组之间的差别。Kruskal-Wallis检验(检验分布函数差别)是Mann-Whitney检验的扩展，是和ANOVAs中所用的F-检验类似的一种检验方法。采用时序检验(logrank test)来分析两组的整体存活体验之间的差别。Kruskal-Wallis检验和时序检验利用组中所有动物的TTE数据，除了NTR死亡之外。该双拖尾统计分析以P＝0.05进行。
卡普兰-梅尔图显示研究中随时间存活下来的动物百分数。卡普兰-梅尔图使用与Kruskal-Wallis检验和时序检验同样的TTE数据。肿瘤生长曲线显示，动物组中值肿瘤体积为时间的函数。当动物因为肿瘤大小或TR死亡而退出研究时，记录的该动物的最终肿瘤体积包括在计算后续时间点中值体积的数据中。因此，曲线所示的该最终中值肿瘤体积可能与MTV不同，MTV为研究最后一天时剩余小鼠的中值肿瘤体积(不包括所有达到终点体积的肿瘤)。如果一组中有一个以上的TR死亡，则中值肿瘤生长曲线通常在第二个TR死亡之前的最后测量时间处截短。当一组中50％以上可评估的动物的肿瘤达到了终点体积时，肿瘤生长曲线也被截短。
结果示于图17。每周两次腹膜内注射IIIg(50mg/kg)延长了带瘤动物的存活时间。
实施例12
IIIg与γ-辐射联用对胰腺癌细胞增殖的影响
BrdU分析在本领域是众所周知的。简单来说，将细胞在相应的测试物质存在下在合适的96孔MP板上于37℃培养一段时间(1到5天，取决于个别分析体系)。然后，将BrdU加入到细胞中，再对细胞进行培养(通常为2-24小时)。在该标记期间，嘧啶类似物BrdU被掺入到增殖细胞DNA代替胸苷。除去培养基后，通过加入FixDenat一步固定细胞并使DNA变性(有必要对DNA进行变性以使掺入的BrdU更容易被抗体检测到)。加入抗-BrdU-POD抗体，该抗体结合至新合成的细胞DNA中掺入的BrdU。免疫复合物通过随后的底物反应由化学发光法检测(基于Roche的Cell Proliferation ELISA，BrdU Chemiluminescence Protocol)。
结果示于图18。
实施例13
化合物IIIc与奥沙利铂联用对转移性胰腺癌细胞的细胞周期分布的影响
Colo375FG转移性胰腺癌细胞得自ATCC，并在补充有10％胎牛血清的Dulbecco Modified Eagle Medium中培养。在不同浓度的化合物或DMSO对照存在的情况下，在每P100细胞培养皿涂布105个细胞或在每P60细胞培养皿涂布104个细胞。处理后，附着的细胞用Coulter测量，并用1％亚甲蓝染色。亚甲蓝溶于甲醇和水的50％-50％混合物。细胞涂布在24孔或96孔板上，并按计划进行处理，然后抽吸掉培养基，用PBS洗涤细胞，在甲醇中固定5-10分钟，抽吸掉甲醇，然后让板完全干燥。向孔中加入亚甲蓝溶液并将板培养5分钟。除去染色溶液，并用dH2O洗涤培养板，直到洗涤液不再为蓝色为止。板完全干燥后，向每孔中加入少量1N HCl以提取亚甲蓝。利用600nm处的OD读数和校正曲线确定细胞数目。
对每个单独的实验，直接将本发明的化合物由干粉溶于10mM DMSO储备液。对照试验利用匹配体积/浓度的载体(DMSO)进行。在这些对照样品中，细胞在生长或细胞周期分布中未显示任何变化。
PI排除法、细胞周期和TUNEL分析
加入药物并培养后，对细胞进行胰蛋白酶化，并取出样品的等分样用于计数和PI(碘化丙啶)排除分析。将一部分的细胞进行离心，并重新悬浮到含有5μg/ml PI的0.5ml冰冷PBS中。另一部分的细胞固定在冰冷的70％乙醇中并储存在冻箱中过夜。对于细胞周期分析，细胞按标准步骤用碘化丙啶(PI)染色。细胞DNA含量通过流式细胞仪利用BD LSRII FACS测定，G1、S或G2/M中的细胞百分数用ModFit软件确定。
细胞使用“In situ Cell Death Detection Kit，Fluorescein”(RocheDiagnostics Corporation，Roche Applied Science，Indianapolis，IN)标记用于凋亡。简单来说，将固定的细胞进行离心，并在含有1％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液(PBS)中洗涤一次，然后在室温重新悬浮到2ml透化缓冲液(0.1％Triton X-100和0.1％柠檬酸钠的PBS溶液)中25分钟，并在0.2mlPBS/1％BSA溶液中洗涤两次。将细胞重新悬浮到50μl TUNEL反应混合物(TdT酶和标记溶液)中，并在37℃加湿黑暗空气中培养60分钟。标记的细胞在PBS/1％BSA中洗涤两次，然后重新悬浮到含有1μg/ml 4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的0.5ml冰冷PBS中至少30分钟。所有细胞样品采用BDLSR II(BD Biosciences，San Jose，CA)分析。
溴脱氧尿苷(BrdU)标记试验
加入50μl BrdU(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)储备液(1mM)以获得10μM BrdU最终浓度。细胞在37℃培养30分钟，固定在冰冷的70％乙醇中并储存在冷室(4℃)中过夜。对固定的细胞进行离心，并用2ml PBS溶液洗涤，然后在37℃和黑暗中重新悬浮到0.7ml变性溶液(0.2mg/ml胃蛋白酶的2N HCl溶液)中15分钟，并悬浮于1.04ml 1M Tris缓冲液(Trizma base，Sigma Chemical Co.)，并用2ml PBS洗涤。然后按1∶100稀释用TBFP渗透缓冲液(0.5％ Tween-20，1％牛血清白蛋白和1％胎牛血清的PBS溶液)将细胞重新悬浮到100-μl抗-BrdU抗体(DakoCytomation，Carpinteria，CA)中，在室温下黑暗中培养25分钟，并用2ml PBS洗涤。按1∶200稀释用TBFP渗透缓冲液将一抗标记的细胞重新悬浮到100μl的山羊抗小鼠IgG(H+L)(2mg/mL)的Alexa Fluor F(ab′)2片段(Molecular Probes，Eugene，OR)中，在室温下和黑暗中培养25分钟，并用2ml PBS洗涤，然后重新悬浮在含有1μg/ml4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的0.5ml冰冷PBS中至少30分钟。所有细胞样品均采用BD LSR II(BD Biosciences，San Jose，CA)分析。
结果总结在表6中。
                         表6
Figure BPA00001161560601441
实施例14
人临床试验
标题：首次在人类受试者中进行的评估苯并吡喃酮化合物(更具体为5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg))对患有晚期实体瘤患者的安全性和药代动力学的1期开放标签剂量逐步提高研究
研究期别：1
适应症：晚期实体瘤的治疗
主要目的：在对患有标准治疗方法难治或没有标准治疗方法且有组织学记录的晚期实体瘤的成人受试者进行静脉注射后，评估IIIg的安全性、建立最大耐受剂量(MTD)和药代动力学特征。
次要目的：评估具有可量度疾病的研究受试者(按RECIST的标准)对药物的反应。评估安全性特征：未被定义为剂量限制性毒性(DLT)的重要化验结果变化和不良事件(AE)。
探索性目的：评估对肿瘤状态生物标记物的治疗效果。
研究设计：设计用来确定IIIg的安全性、最大耐受剂量和药代动力学特征的、首次在人类受试者中进行的1期开放标签剂量逐步提高研究。IIIg将通过静脉注射每周两次给药(每周的第1天和第4天)，用药3周，随后为一周不用药时间，每28天为一个周期。第1周期(第1天到第28天)定义为本项研究的安全性期，在此期间，将确定MTD。研究的剩余部分称为维持期。受试者可参与本项研究，直至受试者出现药物不耐受或疾病进展。
安全性评估将遵循2003年12月出版的Cancer Therapy EvaluationProgram Common Terminology Criteria for Adverse Events(CTCAE)第三版中给出的准则。对可量度疾病，肿瘤反应的第一次评估将在研究的第8周进行，其后大约每8周进行一次。修订的Respone Evaluation Criteria in Solid Tumors(RECIST)中的标准被用来建立疾病进展。对不可量度的疾病，最佳的医疗实践将被用来确定疾病进展的时间。
主要终点和次要终点：主要终点为安全性/耐受性以建立DLT和PK特征：BA半衰期(t1/2)、观察到的最大浓度(Cmax)、血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)，以及清除率(CL)。次要终点为根据RECIST标准得出的肿瘤反应；安全性特征：显著化验变化和其他不良事件(未定义为DLT)。探索性终点为循环肿瘤细胞(CTC)水平的降低。
样本大小：预期多达36位受试者将参与此项研究。研究受试者将按顺序被指定到不同剂量水平、由1、3、6位患者组成的剂量组。可能需要多达10个剂量组以确定MTD。
受试者资格标准概要：
准入标准包括：(a)≥18岁且有病理学记录的、标准治疗方法难治或没有标准治疗方法的晚期实体瘤，(b)Eastern Oncology Cooperative Group(ECOG)评分≤2，以及(c)绝对嗜中性细胞计数(ANC)≥1.5x109/L(研究第1天之前两周内没有GCF支持)；血小板计数≥100.0x109/L(研究第1天之前两周内没有血小板输注)；且血红素≥9.0g/dL(允许使用红细胞生成药物)。
排除标准包括：受试者参与另一项研究性装置或药物试验，或正在接受其他研究药物；恶性血液病；有症状或未治疗的、需要同时治疗的脑转移肿瘤，包括但不限于手术、辐射和皮质类固醇类；癫痫病史；研究第1天之前6个月有过MI；不稳定心绞痛、New York Heart Association(NYHA)心功能分级＞2级的充血性心脏衰竭(CHF)、不受控制的高血压、同时进行或之前(或研究第1天之前7天内进行过)抗凝血治疗；指定的伴随治疗药物(参见第4.2.3节)；血清肌酐＞1.5xULN；肝酶升高(AST/ALT)＞2.5xULN，或＞5.0如果对肝转移肿瘤为次级、碱性磷酸酶＞2.5xULN或＞5.0如果对肝转移肿瘤或骨转移肿瘤为次级；总胆红素＞1.5xULN；研究第1天之前28天内有过全身性化疗(BCNU或丝裂霉素C清除期为42天)；研究第1天之前28天内有过放射性治疗；研究第1天之前1个月内用过抗体治疗潜在恶性肿瘤；同时采用BA以外的其他药剂化疗或放射性治疗在整个研究过程中都是不允许的。
研究产品剂量和给药途径：IIIg将以10mL小玻璃瓶提供，浓度为10mg/mL。据估计，可能需要10组受试者才能确定MTD。
初始剂量(A组)：A组中，单一受试者将每周接受IIIg两次，剂量水平根据筛选时测量的体重为0.5mg/kg。如果该受试者经历2级或更高的中毒状况，然后将招收另外3位受试者加入该组。如果该组没有另外的受试者经历DLT，将按照下面的方式提高剂量。如果初始受试者没有出现DLT，则按照下面的方式提高剂量。
2级中毒之前的剂量提高方案(可能为B-J组)：直到受试者经历2级中毒或更高，后面的所有其他组将开始招收一位受试者，其剂量按计划剂量提高100％，并可能按A组的说明扩大研究组。安全性数据将在给药6次IIIg后进行审查，如果没有受试者经历2级或更高毒性，将决定将剂量提高到下一组。如果在该组中1位受试者经历2级或更高的毒性，则将招收另外3位受试者加入该组。如果该组中这3位接受剂量的受试者都没有经历DLT，将进一步提高剂量。如果3位受试者中有1位经历DLT，将另外招收3位受试者加入该组并接受同样的剂量。如果3位受试者中无人出现DLT，则提高剂量。如果一个组中另外加入的受试者中有一位或多位出现DLT，则之前的较低剂量将被定义为MTD。如需要的话，可能在这MTD添加另外的受试者，以便研究中接受BA的受试者达到至少18人。
2级毒性水平之后的剂量提高方案(可能为B-J组)：在与初始2级毒性相关的剂量扩展且准备好提高剂量到下一个水平后，将招收三位受试者从一开始就加入到今后所有的研究组中(B、C、D、E、F、G、H、I或J组)。如果三位初始受试者中无人经历DLT，则将剂量提高到下一个研究组的剂量水平。如果3位受试者中有1位经历DLT，则将另外招收3位受试者加入该组并接受同样的剂量。如果3位受试者中无人经历DLT，则提高剂量。如果一个组中另外加入的受试者中有一位或多位出现DLT，则之前的较低剂量将被定义为MTD。如需要的话，可能在这一MTD添加另外的受试者，以便研究中接受IIIg的受试者达到至少18人。
受试者内部剂量提高：当一个IIIg剂量根据上面定义的标准被宣布为安全且可耐受的，所有当前处于较低剂量的受试者将根据情况被增加到较高的安全剂量(由首席研究员决定)。确定了MTD后，本项研究中所有受试者都可能视情况增加到接受该MTD。
整体剂量提高极限：当观察到2级毒性且该剂量水平后来被清除，研究组之间的单个剂量提高将会更加保守，将限于比前一个剂量水平最多增加大约40％，直至出现3级毒性，其后的剂量提高将限于大约25％。绝对剂量提高将由安全性审查组审查了所有可用的数据后决定。
对照组：无
步骤：
筛选：只有从每一位受试者获得了签署的、经Institutional Review Board(IRB)批准的书面知情同意书之后，才会进行加入前筛选测试和评估。除非另外注明，否则，将在研究第1天之前的两周内执行筛选程序。临床评估包括完整的病史、体检、ECOG状况、身高、体重、生命体征和同时服用药物的记录。实验室化验研究包括血液学(包括白细胞分类计数、网状细胞计数和血小板)、凝血酶原时间(PT)和部分凝血酶原时间(PTT)、综合化学化验值(钠、钾、氯、CO2、肌酐、钙、磷、镁、BUN、尿酸、白蛋白、AST、ALT、碱性磷酸酶、总胆红素和胆固醇、HDL和LDL)、显微镜检查尿样分析、血清肿瘤标记物、育龄妇女血清或尿样妊娠检验。心脏研究包括肌酐激酶(CK)和12导心电图(EKG)。临床阶段划分包括在研究第1天之前4周内利用计算机体层照相术(CT)或磁共振(MRI)计数进行可量度疾病的成像研究。还将记载不可量度疾病的临床阶段划分。
治疗：将招收符合条件的受试者加入研究并在第1天接受研究药物。将按照研究方案进行剂量前和剂量后检验。在28天的周期内，将在第1、4、8、11、15和18天每周两次给予BA，在两个小时时间内输注给药。第29天，受试者将开始第2周期，并在每个周期的第1、4、8、11、15和18天恢复给药。受试者可参与本项研究，直至受试者出现药物不耐受或疾病进展或同意退出。符合修订的RECIST疾病进展标准的受试者可继续参与研究，如果他们表出现临床效益的话。
对可量度疾病，计划的肿瘤反应第一次评估将在研究的第8周(研究日50±5天)进行，其后大约每8周进行一次。将通过CT或MRI(必须使用筛选时所用的同样的技术)利用修订的实体肿瘤反应评估标准(RECIST)的肿瘤反应来确立疾病进展。对不可量度的疾病，将采用最佳医疗实践来确定疾病进展的时间。
研究结束：所有受试者必须在最后一次IIIg剂量后不超过30天内按照研究计划中说明的程序完成研究结束程序。此外，受试者将通过临床成像进行总体肿瘤评估，如果在最后一次IIIg剂量之前30天未进行的话。
统计考虑：将通过说明性统计计算来计算安全性、PK和PD终点。用于确立至疾病进展时间的反应数据将以描述性列表形式报道。肿瘤进展数据将按照修订的RECIST标准分类。
PK参数将利用非房室模型方法来估计。PK参数将以算术平均、标准偏差、变异系数、最大值、最小值、中值和几何平均总结给出。将利用Splus第5.1版(或更新版本)计算统计总结。
如果合适的话，相对于房室模型分析，数据也可能用非线性混合效果模型方式(群体研究法)进行分析。还将根据情况进行其他描述性分析。
在所有受试者接受了至少一个周期(6个剂量)IIIg的MTD剂量(或其在研究中接受的最高剂量)之后，将对结果进行分析。这将与研究的安全性期的完成时间巧合。视需要将持续进行另外的分析，以便为设计今后的试验提供信息。
实施例15：全血样品中IIIg代谢物的鉴定
材料和方法
用三倍体积的乙腈(150μL)沉淀全血样品(50μL)制备HPLC注射样品。离心后，将每个190μL的上清液蒸发至干，在50μl 0.2％甲酸的95％水5％甲醇溶液中重组，并用以下LC/MS/MS条件进行分析：
HPLC：  Shimadzu VP***
移动相：0.2％甲酸的水溶液(A)和0.18％甲酸的甲醇溶液(B)
柱：          1x50mm Thermo BetaBasic C18柱
注入体积：    25μl
梯度：        5-75％B 30分钟
流速：        100μl/分钟
质谱仪：      Applied Biosystems/MDS SCIEX Q-STAR
接口：        TurboIonSpray
母离子扫描：  TOF阳离子从200到1200原子质量单位
产物离子扫描：母离子扫描中最强离子的TOF产物离子从60到
              1200原子质量单位
TOF校正：     利用肾素底物进行的外部校正
结果：
IIIg的UV和MS分析以及潜在的代谢物示于下面的图19-21。在0和60分钟时间点均存在208和497m/z离子。497m/z离子似乎是208m/z离子的谷胱甘肽偶联物。图中包含提取的离子色谱、MS(母体离子)谱和对应分析物的MS/MS谱图。
上面的实施例绝非意在以任何方式限制本发明的范围。此外，本领域技术人员应当理解，在不背离所附权利要求的精神和范围的前提下，可对这些实施例进行很多变化和改良，这些变化和改良被认为属于本发明的范围。
对本领域技术人员来说很明显的是，在不背离所附权利要求的精神和范围的前提下，可对这些实施例进行很多变化和改良。

Claims (248)

1.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500011
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；
其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
2.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500021
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；
其中所述癌症为由选自下列癌症的细胞迁移而形成于身体不同部位的癌症：肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、Castleman氏病、子***、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
3.权利要求1或2的方法，其中所述化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500031
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基、羟基氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
4.权利要求3的方法，其中X为选自下列的卤素：F、Cl、Br和I。
5.权利要求3的方法，其中X为碘(I)，且R5为硝基、亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基。
6.权利要求3的方法，其中n为0。
7.权利要求3的方法，其中所述任选取代的烷基被选自下列的取代基所取代：烷基胺、吡咯、二氢吡咯和吡咯烷。
8.权利要求3的方法，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的可药用盐或前药之一：
Figure FPA00001161560500032
Figure FPA00001161560500041
9.权利要求8的方法，其中所述化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
10.权利要求8的方法，其中所述化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
11.权利要求8的方法，其中所述化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
12.权利要求8的方法，其中所述化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
13.权利要求3的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环为五元杂环或六元杂环。
14.权利要求13的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环含有至少一个氮原子。
15.权利要求13的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环选自氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、二氢吡咯、吡咯烷、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、咪唑、苯并咪唑、***、四唑、噁唑、异噁唑、苯并噁唑、噁二唑、噁唑啉、噁唑烷、噻唑、异噻唑、吡啶、二氢吡啶、四氢吡啶、喹唑啉、吡嗪、嘧啶、哒嗪、喹啉、异喹啉、三嗪、四嗪和哌嗪。
16.权利要求13的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环被选自下列的取代基所取代：任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环，和任选取代的芳基。
17.权利要求1或2的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因疗法、RNA疗法、免疫疗法、纳米疗法，或它们的组合。
18.权利要求1或2的方法，该方法进一步包括给药有效量的抗肿瘤剂。
19.权利要求1或2的方法，该方法进一步包括给药有效量的有机铂化合物。
20.权利要求1或2的方法，该方法进一步包括给药有效量的抗代谢物化合物。
21.权利要求1或2的方法，该方法进一步包括给药有效量的奥沙利铂(OX)。
22.权利要求1或2的方法，该方法进一步包括给药有效量的吉西他滨(GEM)。
23.权利要求1或2的方法，该方法进一步包括给药有效量的OX和GEM。
24.权利要求1或2的方法，其中给药为静脉内给药或腹膜内给药。
25.权利要求1或2的方法，其中给药为口服给药。
26.权利要求1或2的方法，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
27.权利要求1或2的方法，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
28.权利要求1或2的方法，其中肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。
29.权利要求1或2的方法，其中受试者表现出可检测的PARP蛋白水平。
30.权利要求1或2的方法，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
31.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少有一个始终是取代的环烷基、取代的杂环或取代的苯基；
其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
32.权利要求31的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。
33.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。
34.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。
35.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。
36.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。
37.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。
38.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。
39.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。
40.权利要求31的方法，其中所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
41.权利要求31的方法，其中X为选自下列的卤素：F、Cl、Br和I。
42.权利要求31的方法，其中X为碘(I)且R5为硝基、亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基。
43.权利要求31的方法，其中n为0。
44.权利要求31的方法，其中所述任选取代的烷基被选自下列的取代基所取代：烷基胺、吡咯、二氢吡咯和吡咯烷。
45.权利要求31的方法，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe或IIIf，或是它们的可药用盐或前药之一：
Figure FPA00001161560500071
Figure FPA00001161560500081
46.权利要求31的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环为五元杂环或六元杂环。
47.权利要求31的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环含有至少一个氮原子。
48.权利要求31的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环选自氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、二氢吡咯、吡咯烷、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、咪唑、苯并咪唑、***、四唑、噁唑、异噁唑、苯并噁唑、噁二唑、噁唑啉、噁唑烷、噻唑、异噻唑、吡啶、二氢吡啶、四氢吡啶、喹唑啉、吡嗪、嘧啶、哒嗪、喹啉、异喹啉、三嗪、四嗪和哌嗪。
49.权利要求31的方法，其中所述任选取代的(C3-C7)杂环被选自下列的取代基所取代：任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环，和任选取代的芳基。
50.权利要求31的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因疗法、RNA疗法、免疫疗法、纳米疗法，或它们的组合。
51.权利要求31的方法，该方法进一步包括给药有效量的抗肿瘤剂。
52.权利要求31的方法，该方法进一步包括给药有效量的有机铂化合物。
53.权利要求31的方法，该方法进一步包括给药有效量的抗代谢物化合物。
54.权利要求31的方法，该方法进一步包括给药有效量的奥沙利铂(OX)。
55.权利要求31的方法，该方法进一步包括给药有效量的吉西他滨(GEM)。
56.权利要求31的方法，该方法进一步包括给药有效量的OX和GEM。
57.权利要求31的方法，其中给药为静脉内给药或腹膜内给药。
58.权利要求31的方法，其中给药为口服给药。
59.权利要求31的方法，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
60.权利要求31的方法，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
61.权利要求31的方法，其中肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。
62.权利要求31的方法，其中受试者表现出可检测的PARP蛋白水平。
63.权利要求31的方法，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
64.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，该组合物包含抗肿瘤剂和式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500091
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
65.权利要求64的方法，其中所述化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500101
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基、羟基氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
66.权利要求65的方法，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或它们的代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500111
67.权利要求66的方法，其中所述化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
68.权利要求66的方法，其中所述化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
69.权利要求66的方法，其中所述化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
70.权利要求66的方法，其中所述化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
71.权利要求64的方法，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
72.权利要求64的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。
73.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。
74.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。
75.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。
76.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。
77.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。
78.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。
79.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。
80.权利要求64的方法，其中所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
81.权利要求64的方法，其中所述抗肿瘤剂选自抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
82.权利要求81的方法，其中所述抗肿瘤烷化剂为氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀；抗肿瘤抗代谢物为甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠；抗肿瘤抗生素为放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星；植物来源的抗肿瘤剂为长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨；抗肿瘤铂络合化合物为顺铂、卡铂、奈达铂和奥沙利铂；抗肿瘤喜树碱衍生物为伊立替康、托泊替康和喜树碱；抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂为吉非替尼、伊马替尼和埃罗替尼；单克隆抗体为阿昔单抗、阿达木单抗、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、艾库珠单抗、依法利珠单抗、替伊莫单抗、英利昔单抗、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、兰尼单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、利妥昔单抗、托西莫单抗和曲妥珠单抗；干扰素为α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素；生物应答修饰剂为云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、容链菌或乌苯美司，以及其他抗肿瘤剂为米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基尿素、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特、阿尔法达贝泊丁、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠、地尼白介素、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米、卡培他滨和戈舍瑞林。
83.权利要求64的方法，其中所述抗肿瘤剂为有机铂化合物。
84.权利要求83的方法，其中所述抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)、顺铂或卡铂。
85.权利要求84的方法，其中所述抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)。
86.权利要求64的方法，其中所述抗肿瘤剂为抗代谢物药剂。
87.权利要求86的方法，其中所述抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。
88.权利要求64的方法，该方法进一步包括一种以上抗肿瘤剂。
89.权利要求88的方法，其中所述抗肿瘤剂为有机铂化合物和抗代谢物药剂。
90.权利要求88的方法，其中所述抗肿瘤剂为OX和GEM。
91.权利要求64的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、免疫疗法、RNA疗法、纳米疗法，或它们的组合。
92.权利要求64的方法，其中给药为静脉内给药或腹膜内给药。
93.权利要求64的方法，其中给药为口服给药。
94.权利要求64的方法，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
95.权利要求64的方法，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
96.权利要求64的方法，其中肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。
97.权利要求64的方法，其中受试者表现出可检测的PARP蛋白水平。
98.权利要求64的方法，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
99.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，该组合物包含有机铂化合物和式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
100.权利要求99的方法，其中化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500142
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基、羟基氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
101.权利要求100的方法，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的代谢物、可药用盐或前药：
102.权利要求101的方法，其中所述化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
103.权利要求101的方法，其中所述化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
104.权利要求101的方法，其中所述化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
105.权利要求101的方法，其中所述化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
106.权利要求99的方法，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
107.权利要求99的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。
108.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。
109.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。
110.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。
111.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。
112.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。
113.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。
114.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。
115.权利要求99的方法，其中所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
116.权利要求99的方法，其中所述抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)。
117.权利要求99的方法，该方法进一步包括给药有效量的OX和5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)。
118.权利要求99的方法，该方法进一步包括给药有效量的OX和5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮(IIIk)。
119.权利要求99的方法，该方法进一步包括给药有效量的抗代谢物。
120.权利要求99的方法，该方法进一步包括给药有效量的吉西他滨(GEM)。
121.权利要求99的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、免疫疗法、RNA疗法、纳米疗法，或它们的组合。
122.权利要求99的方法，其中给药为静脉内给药或腹膜内给药。
123.权利要求99的方法，其中给药为口服给药。
124.权利要求99的方法，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
125.权利要求99的方法，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
126.权利要求99的方法，其中肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。
127.权利要求99的方法，其中受试者表现出可检测的PARP蛋白水平。
128.权利要求99的方法，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
129.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，该组合物包含抗代谢物药剂和式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500181
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
130.权利要求129的方法，其中化合物为式II化合物或其可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500182
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基、羟基氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
131.权利要求130的方法，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的代谢物、可药用盐或前药：
132.权利要求131的方法，其中所述化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
133.权利要求131的方法，其中所述化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
134.权利要求131的方法，其中所述化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
135.权利要求131的方法，其中所述化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
136.权利要求129的方法，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
137.权利要求129的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。
138.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。
139.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。
140.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。
141.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。
142.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。
143.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。
144.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。
145.权利要求129的方法，其中所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
146.权利要求129的方法，其中的抗代谢物药剂为吉西他滨(GEM)。
147.权利要求129的方法，该方法进一步包括给药有效量的GEM和5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)。
148.权利要求129的方法，该方法进一步包括给药有效量的GEM和5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮(IIIk)。
149.权利要求129的方法，该方法进一步包括给药有效量的有机铂化合物。
150.权利要求129的方法，该方法进一步包括给药有效量的奥沙利铂(OX)。
151.权利要求129的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、免疫疗法、RNA疗法、纳米疗法，或它们的组合。
152.权利要求129的方法，其中给药为静脉内给药或腹膜内给药。
153.权利要求129的方法，其中给药为口服给药。
154.权利要求129的方法，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
155.权利要求129的方法，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
156.权利要求129的方法，其中肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。
157.权利要求129的方法，其中受试者表现出可检测的PARP蛋白水平。
158.权利要求129的方法，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
159.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的组合物，该组合物包含有机铂化合物和抗代谢物药剂，以及式(I)化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500211
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
160.权利要求159的方法，其中化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500221
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基、羟基氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
161.权利要求160的方法，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500222
162.权利要求161的方法，其中所述化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
163.权利要求161的方法，其中所述化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
164.权利要求161的方法，其中所述化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
165.权利要求161的方法，其中所述化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
166.权利要求159的方法，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
167.权利要求159的方法，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。
168.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。
169.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。
170.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。
171.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。
172.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。
173.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。
174.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。
175.权利要求159的方法，其中所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
176.权利要求159的方法，其中所述有机铂化合物为OX。
177.权利要求159的方法，其中所述抗代谢物药剂为GEM。
178.权利要求159的方法，该方法进一步包括给药有效量的OX、GEM和5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮(IIIg)。
179.权利要求159的方法，该方法进一步包括给药有效量的OX、GEM和5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮(IIIk)。
180.权利要求159的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、基因疗法、免疫疗法、RNA疗法、纳米疗法，或它们的组合。
181.权利要求159的方法，其中给药为静脉内给药或腹膜内给药。
182.权利要求159的方法，其中给药为口服给药。
183.权利要求159的方法，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
184.权利要求159的方法，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
185.权利要求159的方法，其中肿瘤细胞在受试者中经历凋亡、细胞周期停滞和/或坏死。
186.权利要求159的方法，其中受试者表现出可检测的PARP蛋白水平。
187.权利要求159的方法，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
188.用于治疗癌症的组合物，该组合物包含式I化合物，或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500251
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢；且
其中所述化合物不是以下化合物之一：
Figure FPA00001161560500261
189.权利要求188的组合物，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIh、IIIm或IIIn，或是它们的代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500262
190.权利要求188的组合物，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
191.权利要求188的组合物，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。
192.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。
193.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。
194.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。
195.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。
196.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。
197.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。
198.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。
199.权利要求188的组合物，其中所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
200.权利要求188的组合物，其中还进一步包含抗肿瘤剂。
201.权利要求200的组合物，其中所述抗肿瘤剂选自抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
202.权利要求201的组合物，其中所述抗肿瘤烷化剂为氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀；抗肿瘤抗代谢物为甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠；抗肿瘤抗生素为放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星；植物来源的抗肿瘤剂为长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨；抗肿瘤铂络合化合物为顺铂、卡铂、奈达铂和奥沙利铂；抗肿瘤喜树碱衍生物为伊立替康、托泊替康和喜树碱；抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂为吉非替尼、伊马替尼和埃罗替尼；单克隆抗体为阿昔单抗、阿达木单抗、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、艾库珠单抗、依法利珠单抗、替伊莫单抗、英利昔单抗、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、兰尼单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、利妥昔单抗、托西莫单抗和曲妥珠单抗；干扰素为α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素；生物应答修饰剂为云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、容链菌或乌苯美司，其他抗肿瘤剂为米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基尿素、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特、阿尔法达贝泊丁、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠、地尼白介素、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米、卡培他滨和戈舍瑞林。
203.权利要求200的组合物，其中所述抗肿瘤剂为有机铂化合物。
204.权利要求203的组合物，其中所述抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)、顺铂或卡铂。
205.权利要求200的组合物，其中所述抗肿瘤剂为抗代谢物药剂。
206.权利要求205的组合物，其中所述抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。
207.权利要求188的组合物，其中进一步包括一种以上抗肿瘤剂。
208.权利要求188的组合物，其中所述抗肿瘤剂为有机铂化合物和抗代谢物药剂。
209.权利要求188的组合物，其中所述抗肿瘤剂为OX和GEM。
210.权利要求188的组合物可与手术、放射治疗、基因疗法、免疫疗法、RNA疗法、纳米疗法，或它们的组合联用。
211.权利要求188的组合物，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
212.权利要求188的组合物，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
213.权利要求188的组合物，其中癌细胞表现出可检测的PARP蛋白水平。
214.权利要求188的组合物，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
215.用于治疗癌症的试剂盒，该试剂盒包含有效量的权利要求188的组合物，或其可药用盐或前药。
216.权利要求215的试剂盒，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
217.用于治疗癌症的组合物，该组合物包含抗肿瘤剂和式I化合物，或其代谢物、可药用盐或前药的组合：
Figure FPA00001161560500301
其中，n＝0-10；R1、R2、R3、R4、R5和X独立地选自氢、羟基、任选取代的胺、氨基、羧基、酯、亚硝基、硝基、卤素、任选取代的(C1-C6)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基和任选取代的芳基；且其中R1、R2、R3、R4和R5取代基中至少两个始终是氢。
218.权利要求217的组合物，其中化合物为式II化合物或其代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500302
其中R5选自氢、羧基、氨基、亚硝基、硝基、羟基氨基，和羟基；且X选自卤素、羟基、任选取代的(C1-C7)烷基、任选取代的(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C7)环烷基、任选取代的(C3-C7)杂环、苯基，和任选取代的芳基。
219.权利要求218的组合物，其中所述化合物为式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIk、IIIl、IIIm或IIIn，或是它们的代谢物、可药用盐或前药：
Figure FPA00001161560500311
220.权利要求219的组合物，其中式(I)化合物是式IIIg的5-碘-6-硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
221.权利要求219的组合物，其中式(I)化合物是式IIIk的5-碘-6-氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
222.权利要求219的组合物，其中所述化合物是式IIIl的5-碘-6-亚硝基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
223.权利要求219的组合物，其中所述化合物是式IIIm的5-碘-6-羟基氨基-苯并吡喃酮，或其代谢物、可药用盐或前药。
224.权利要求217的组合物，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
225.权利要求217的组合物，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、结肠癌，或源自癌症干细胞的癌症。
226.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性。
227.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阴性；且其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中至少一种为阳性。
228.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌对ER、PR或HER2中的两种为阴性。
229.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌为ER阴性和PR阴性。
230.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌为ER阴性和HER2阴性。
231.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌为PR阴性和HER2阴性。
232.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌为ER阴性乳腺癌。
233.权利要求217的组合物，其中所述乳腺癌为HER2阴性乳腺癌。
234.权利要求217的组合物，其中所述抗肿瘤剂选自抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤有机铂化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物应答修饰剂，以及其他具有抗肿瘤活性的药剂，或其可药用盐。
235.权利要求234的组合物，其中所述抗肿瘤烷化剂为氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀；抗肿瘤抗代谢物为甲氨喋呤、6-巯基嘌呤核苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠；抗肿瘤抗生素为放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星；植物来源的抗肿瘤剂为长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇和长春瑞滨；抗肿瘤铂络合化合物为顺铂、卡铂、奈达铂和奥沙利铂；抗肿瘤喜树碱衍生物为伊立替康、托泊替康和喜树碱；抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂为吉非替尼、伊马替尼和埃罗替尼；单克隆抗体为阿昔单抗、阿达木单抗、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、艾库珠单抗、依法利珠单抗、替伊莫单抗、英利昔单抗、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、兰尼单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、利妥昔单抗、托西莫单抗和曲妥珠单抗；干扰素为α干扰素、α-2a干扰素、α-2b干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素和γ-n1干扰素；生物应答修饰剂为云芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、容链菌或乌苯美司，其他抗肿瘤剂为米托蒽醌、L-天冬酰胺酶、丙卡巴肼、达卡巴嗪、羟基尿素、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特、阿尔法达贝泊丁、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼辛钠、地尼白介素、阿地白介素、α促甲状腺素、三氧化二砷、硼替佐米、卡培他滨和戈舍瑞林。
236.权利要求217的组合物，其中所述抗肿瘤剂为有机铂化合物。
237.权利要求236的组合物，其中所述抗肿瘤剂为奥沙利铂(OX)、顺铂或卡铂。
238.权利要求217的组合物，其中所述抗肿瘤剂为抗代谢物药剂。
239.权利要求238的组合物，其中所述抗肿瘤剂为吉西他滨(GEM)。
240.权利要求217的组合物，其中进一步包括一种以上抗肿瘤剂。
241.权利要求217的组合物，其中所述抗肿瘤剂为有机铂化合物和抗代谢物药剂。
242.权利要求217的组合物，其中所述抗肿瘤剂为OX和GEM。
243.权利要求217的组合物，其中聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)在受试者中被所述化合物所抑制。
244.权利要求217的组合物，其中单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化被抑制。
245.权利要求217的组合物，其中癌细胞表现出可检测的PARP蛋白水平。
246.权利要求217的组合物，其中受试者具有可检测水平的单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。
247.用于治疗癌症的试剂盒，该试剂盒包含有效量的权利要求217的组合物，或其可药用盐或前药。
248.权利要求247的试剂盒，其中所述癌症选自肾上腺皮质癌、***癌、再生障碍性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经***(CNS)癌症、周围神经***(PNS)癌症、乳腺癌、Castleman氏病、子***、儿童非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、尤因家族肿瘤(如尤因氏肉瘤)、眼癌、胆囊癌、胃肠类癌性肿瘤、胃肠基质肿瘤、妊娠滋养层病、毛细胞性白血病、霍奇金病、卡波西肉瘤、肾癌、喉和咽下癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞样白血病、肝癌、肺癌、肺类癌性肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增殖异常综合征、骨髓增殖性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、垂体瘤、***癌、视网膜母细胞癌、横纹肌肉瘤、唾腺癌、肉瘤(成人软组织癌)、黑素瘤皮肤癌、非黑素瘤皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌(如子宫肉瘤)、***癌、外阴癌，以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
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