CN101410121B - 含益生菌的膳食补充剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供包含至少一种益生菌和至少下述之一的膳食补充剂：动物消化物、干啤酒酵母、维生素C；维生素E、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和***钠。益生菌和其它成分以下述量存在于补充剂中，所述量足够增强益生菌和含益生菌的组合物的可口性、增强免疫***以增进益生菌的有益效应，或延长益生菌的寿命。

Description

含益生菌的膳食补充剂
发明背景 
技术领域
本发明一般涉及膳食补充剂，并尤其涉及含益生菌的膳食补充剂。 
相关领域描述 
肠道在动物健康和康健(wellness)中起关键作用。为了实现该作用，肠道含有多种微生物，正常条件下所述多种微生物包括健康的胃肠微生物区系。该微生物区系赋予动物许多益处，例如产生脂肪酸、合成维生素，和合成酶，所述脂肪酸给胃肠道腔的内衬细胞提供能量，所述酶帮助分解和消化食物。另外，该微生物区系帮助免疫***保护宿主免遭疾病。例如，已知微生物区系可以抑制胃肠道中潜在病原体的附着和潜在病原体的建群(colonization)，并刺激细胞因子和免疫球蛋白的生产。 
不幸的是，破坏微生物区系正常平衡能够导致胃肠道的机会性感染，并能够促进另外的并发症，如腹泻和脱水。正常的微生物区系平衡可以因多种方式例如压力、老年化、旅行、食用受污染的食物或水、抗生素治疗等等而被破坏。预防或治疗这类不期望的破坏的一种方法涉及对动物预防性地施用益生菌以预防破坏，或对动物治疗性地施用益生菌以重建正常的微生物区系平衡，并促进从所述破坏引起的不期望的并发症中恢复。 
益生菌和它们对动物健康的益处是本领域技术人员公知的。益生菌是被摄食后对于预防和治疗特定的医学状况具有有益效应的活的微生物。据信益生菌通过称作建群抗性(colonization resistance)的现象发挥生物效应。对于消化道中土著厌氧菌群限制消化道中潜在有害(主要是需氧的)细菌的浓度的过程，益生菌具有促进作用。其它的作用模式如提供酶或影响消 化道中的酶活性也可以说明归因于益生菌的一些其它功能。已知益生菌增强肠功能、刺激免疫***、减少炎症，并减小胃肠道中有害微生物的群体。 
尽管益生菌一般可用于促进动物的健康，但是它们通常难以储存、处理和施用给动物。益生菌在正常的环境条件下可能是不稳定的，并且需要特定的处理(例如冷冻、冷冻干燥或其它手段)以延长益生菌的寿命。类似地，对于食用益生菌的动物而言，益生菌通常是不可口的。通常必须使用其它化合物或组合物改变或增强可口性。另外，下述做法可能是有益的：使用与益生菌组合的成分来补充免疫***，尤其是胃肠道中的免疫***，以自益生菌施用获得最大益处。因此，存在对含益生菌的新的组合物、尤其是膳食补充剂形式的组合物的需要，所述组合物具有与单独的益生菌相比增强的可口性、含有增强免疫***以增进益生菌作用的成分，和/或与不在组合物中的益生菌相比具有延长的寿命。 
发明概述 
因此，提供含益生菌的膳食补充剂是本发明的一个目的。 
提供含微囊化的益生菌的膳食补充剂是本发明的另一个目的。 
提供含益生菌的下述膳食补充剂是本发明的又一个目的，在所述膳食补充剂中的益生益与单独的益生菌相比具有增强的可口性。 
提供下述食物或其它组合物是本发明的另一个目的，所述食物或其它组合物当补充了本发明的膳食补充剂之后具有增强的可口性。 
提供含益生菌和其它成分的膳食补充剂是本发明的另一个目的，所述其它成分增强免疫***，以增进益生菌的作用。 
提供含下述益生菌的膳食补充剂是本发明的另一个目的，所述益生菌与不在膳食补充剂中的益生菌相比具有延长的寿命。 
提供试剂盒形式的产品是本发明的又一个目的，所述产品含有本发明的膳食补充剂、食物组合物、化合物和设备的组合，尤其是可用于促进胃肠健康和动物健康或康健的组合。 
使用新颖的膳食补充剂可以达成一个或多个这些和其它目的，所述膳 食补充剂含有益生菌和成分，所述成分提高含补充剂的组合物的补充剂中益生菌的可口性、增强其免疫性，和/或延长其寿命。一般而言，补充剂包含至少一种益生菌和至少下述之一：动物消化物(animal digest)、干啤酒酵母(dried brewers yeast)、维生素C；维生素E、β胡萝卜素、蛋白锌(zincproteinate)、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和***钠。补充剂以下述用量包含益生菌和其它成分，所述用量足够对动物施用有益量的益生菌并增强可口性、增强免疫***和/或延长益生菌的寿命。 
本发明的其它目的和进一步的目的、特征和优点是本领域技术人员显而易见的。 
发明详述 
定义 
术语“动物”表示能够从益生菌的施用中获益的人或其它动物，包括禽、牛、犬、马、猫、hicrine、鼠、羊和猪类动物。 
术语“膳食补充剂”表示旨在除正常的动物膳食之外被摄食的产品。 
术语“益生菌”表示对宿主动物发挥有益效应的任何微生物，所述有益效应如提高的健康或对疾病的抗性。益生菌可展示一种或多种以下的非限制性的特性：对宿主无致病性或无毒性；作为活细胞存在，优选大量存在；能够在消化道环境中存活、代谢和留存(例如抗低pH和胃肠道酸性物质和分泌物)；附着在上皮细胞上，尤其是胃肠道的上皮细胞；对致病细菌有杀微生物或抑微生物活性或作用；抗癌活性；免疫调谐活性，尤其是免疫增强作用；针对内源菌群的调谐活性；增强的生殖泌尿道健康；伤口中或伤口周围的防腐活性，和增强的伤口愈合作用；减少腹泻；减少变应性反应；减少新生儿坏死性小肠结肠炎；减少炎性肠病；和减少肠通透性。 
术语“活的”表示生活的并且能够生殖或建群。 
术语“室温”表示约20℃到约25℃。 
术语“提高的温度”表示在炎热季节储存和分配时发生的温度，典型 地30℃到60℃。 
术语“联合”表示膳食补充剂、食物组合物、抗腹泻剂或本发明的其它化合物或组合物(1)在食物组合物中一起施用给动物，或(2)使用相同或不同的施用途径、在大约相同的时间或定时地以相同或不同的频率分开地施用给动物。“定时地”表示按照特定试剂可接受的用量时间表施用试剂、并按照适于具体动物的方式常规地将食物喂给动物。“大约相同的时间”一般表示食物和试剂被同时施用或在彼此间隔约72小时之内被施
  成分   单位   量
  胡萝卜素   IU A/lb   446000
  粗纤维   ％   0.415
  脂肪   ％   17.7
  钙   ppm   3059
  铜   ppm   58.12
  铁   ppm   870.5
  镁   ppm   967.5
  锰   ppm   284.8
  磷   ppm   17690
  钾   ppm   7476
  钠   ppm   14760
  锌   ppm   1144
  水分   ％   3.39
  蛋白质   ％   46.8
  硒   ppm   2.16
  维生素E   mg/100g   1110
  维生素C   ppm   8670
  牛磺酸   ppm   6730
  屎肠球菌   CFU/g   109
下述施用方案，其中抗腹泻剂施用处方指定的期限，而膳食补充剂无限期施用。 
术语“抗腹泻剂”表示可用于预防或治疗腹泻的任何化合物、组合物或药物。 
术语“单包装”指试剂盒的组分在一个或多个容器中或者通过一个或多个容器在物理上关联在一起，并被视为是生产、分配、销售或使用的单位。容器包括但不限于袋、盒、瓶、收缩包装(shrink wrap packages)、主要组分或附带组分，或其组合。单包装可以为物理上关联在一起的各单个食物组合物的容器，这种物理上的关联使得这些容器被视为生产、分配、销售或使用的单位。 
术语“虚拟包装”指通过有关一种或多种物理的或虚拟的试剂盒组分的说明书而关联在一起的试剂盒组分，其中所述说明书指导用户如何获得其它组分，例如，在含有一个组分和说明书的袋中，其中所述说明书指导用户去网站、点击录制信息、观看可视化信息或联系护理人员或指导者来获得有关如何使用该试剂盒的说明。 
术语“动物的健康和康健”表示动物整个的身体、心理和社交状况良好，而不仅仅是没有患病或虚弱。 
除非另有说明，本文表述的所有百分比是以干物质为基础按组合物的重量计。术语“以干物质为基础”表示在去除组合物中的任何水分后测量成分在组合物中的浓度。本发明组合物的所有重量和浓度均是以所有组分和成分被混合后组合物的干重为基础。
如通篇所使用的，范围被用于描述范围内的各个和每个值。范围内的任何合适的值可以被选作范围的上限或下限。 
本发明不仅限于本文所述的具体方法、方案和试剂，因为它们可以变化。另外，本文使用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，并不旨在限制本发明的范围。除非文中另外清楚表明，否则在本文和所附权利要求书中单数形式“一”(＂a，＂＂an，＂和＂the＂)包括复数形式。相似地，词“包含”应作涵盖性而非排他性解释。 
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语和任何缩写词具有与本发明领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。尽管在本发明的实践中能够使用与本文所述相似或等同的任何组合物、方法、产品或其它手段或材料，但是优选的组合物、方法、产品或其它手段或材料在本文中描述。 
本文引用或涉及的所有专利、专利申请、出版物和其它参考文献以法律允许的程度通过参考并入本文。这些参考文献的讨论仅旨在概括其中进行的论断。不承认任何这类专利、专利申请、出版物或参考文献或其任何部分对于本发明而言是相关的现有技术，并明确地保留挑战这类专利、专利申请、出版物和其它参考文献的准确度和适当性的权利。 
本发明 
本发明一方面提供了膳食补充剂，其包含至少一种益生菌和至少下述之一：动物消化物、干啤酒酵母、维生素C；维生素E、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和***钠。在多种实施方案中，膳食补充剂含有至少一种益生菌和以下中的多种：动物消化物、干啤酒酵母、维生素C；维生素E、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和***钠。在一个实施方案中，膳食补充剂包含至少一种益生菌和动物消化物、干啤酒酵母、维生素C；维生素E、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和***钠。本发明以下述发现为基础：益生菌和上述成分的多种组合增强了益生菌和含益生菌的组合物的可口性、增强免疫***以增进益生菌的有益效应，和/或延长益生菌的寿命。 
益生菌可以作为成分或添加剂存在于膳食补充剂中。益生菌可以是原核生物、真核生物或古细菌。合适的益生菌的实例包括：酵母如酵母属(Saccharomyces)、德巴利酵母属(Debaromyces)、假丝酵母属(Candida)、毕赤酵母属(Pichia)和球拟酵母属(Torulopsis)，霉菌如曲霉属(Aspergillus)、根霉属(Rhizopus)、毛霉属(Mucor)和青霉属(Penicillium)和球拟酵母属，和细菌如双歧杆菌属(Bifidobacterium)、拟杆菌属(Bacteroides)、梭菌属(Clostridium)、梭杆菌属(Fusobacterum)、蜜蜂球菌属(Melissococcus)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、链球菌属(Streptococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳球菌(Lactococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、消化链球菌属(Peptostrepococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、片球菌属(Pediococcus)、微球菌属(Micrococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、魏斯氏菌属(Weissella)、气球菌属(Aerococcus)、酒球菌属(Oenococcus)和乳杆菌属(Lactobacillus)。在优选的实施方案中，益生菌包括至少一种属于下述属的任何合适菌株或亚种：肠球菌属、链球菌属、乳杆菌属、乳球菌属、双歧杆菌属或酵母属。肠球菌属(Enterococcus)物种包括但不仅限于屎肠球菌(Enterococcus facecium)，特别是屎肠球菌菌株SF68(NCIMB 10415)，以及其它肠球菌。链球菌属物种包括但不仅限于粪链球菌(Streptococcus faecium)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)和唾液链球菌(Streptococcus salivarus)。乳杆菌属物种包括但不仅限于嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、嗜酸乳杆菌NCC2628(CNCMI-2453)、嗜酸乳杆菌NCC2766、嗜酸乳杆菌NCC2775、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、Lactobacillus casei Imunitas、Lactobacillus casei Shirota、纤维二糖乳杆菌(Lactobacillus cellobiosus)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermenti)、格氏 乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)、约氏乳杆菌NCC2774、约氏乳杆菌NCC2767、约氏乳杆菌NCC2822、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus renteri)、约氏乳杆菌LAI、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌NCC2823、罗伊氏乳杆菌NCC2581(CNCM I-2448)、罗伊氏乳杆菌NCC2592(CNCM I-2450)、罗伊氏乳杆菌NCC2603(CNCM I-2451)、罗伊氏乳杆菌NCC2613(CNCM I-2452)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、鼠李糖乳杆菌NCC2583(CNCM I-2449)、鼠李糖乳杆菌GG(ATCC 53103；鼠李糖乳杆菌或干酪乳杆菌鼠李糖亚种)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、唾液乳杆菌NCC2586、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)ST11。乳球菌属物种包括但不仅限于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和植物乳球菌(Lactococcus plantarum)。双歧杆菌属物种包括但不仅限于青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、嗜热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、乳双歧杆菌Bb-12。酵母属物种包括但不仅限于Saccharomyces boulardii(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))。在优选的实施方案中，膳食补充剂包含屎肠球菌(SF68)。 
膳食补充剂包含下述量的益生菌，所述量适用于增强益生菌和含益生菌的组合物的可口性、增强免疫***以增进益生菌的有益作用，和/或延长益生菌的寿命。一般地，膳食补充剂包含从约1％到约90％的益生菌，优选地从约1％到约70％的益生菌，最优选地从约1％到约50％的益生菌。 
适用于本发明中的动物消化物可以是本领域技术人员已知的任何动物消化物，例如从化学和/或酶水解干净并且未分解的动物组织得到的任何材料。适用于本发明的干啤酒酵母可以是本领域技术人员已知的任何干啤酒酵母，例如作为酿造工业副产品的干燥的、无活性的试剂。已经发现动物消化物和干啤酒酵母可以增强膳食补充剂或含有膳食补充剂的食物或其它组合物的可口性。存在于补充剂中时，动物消化物占膳食补充剂的约10％到约90％，干啤酒酵母占膳食补充剂的约1％到约30％。 
维生素C、维生素E、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和***钠是技术人员已知的化合物。已经发现这些化合物增强免疫并增进益生菌在本发明的膳食补充剂中的作用。已经发现与不在组合物中的益生菌相比，所有这些化合物、动物消化物和干啤酒酵母的组合可以延长益生菌的寿命。存在于补充剂中时，膳食补充剂包含从约0.1％到约10％的维生素C、从约0.1％到约10％的维生素E、从约0.01％到约3％的β胡萝卜素、从约0.1％到约5％的蛋白锌、从约0.01％到约3％的蛋白锰、从约0.01％到约3％的硫酸亚铁、从约0.01％到约1％的蛋白铜、从约0.01％到约1％的碘酸钙，和从约0.001％到约0.1％的***钠。在另一实施方案中，膳食补充剂还含有从约0.1％到约2％的牛磺酸。 
膳食补充剂可以被配制为多种制剂，如粉末、颗粒、丸(pellet)，或任何其它合适的递送形式。在优选的实施方案中，膳食补充剂制剂是含有在生物聚合物基质中被微囊化的益生菌的粉末。粉末膳食补充剂可以被洒在食物或其它组合物上或以其它方式应用于食物或其它组合物并与之混合，所述食物或其它组合物尤其是宠物食物如犬食或猫食。粉末膳食补充剂可以被特别地配制为用于特定动物如陪伴动物的食用。在一个实施方案中，粉末膳食补充剂包含高浓度的益生菌，使得补充剂可以被小量施用给动物，或者可以在施用给动物之前稀释。本领域技术人员可以设计其它施用途径，如单独提供膳食补充剂，或者在宠物零食(pet treat)之中、之上或与宠物零食一起喂食。 
膳食补充剂可以经配制以在室温下长期储存，或者可以被冷藏、冻干或冷冻。优选地，膳食补充剂储存于室温，且在室温下储存时膳食补充剂中的益生菌至少22天保持基本上是活的。预测性模拟显示即使在储存温度中有周期性的短期温度尖峰(spike)，益生菌仍基本上是活的，所述尖峰可 超过室温高达60℃。 
一般而言，以下述用量对动物施用益生菌，用于肠内微生物区系的健康维持：每天从约10亿到约200亿个菌落形成单位(CFU)，优选每天从约1000万到约100亿个活的细菌。尽管可以应用更高浓度的益生菌，但是膳食补充剂可以被配制为每克补充剂含有从约105到约1010个菌落形成单位(CFU)。 
本发明的膳食补充剂可以包含另外的物质，如矿物质、维生素、盐、蛋白质、氨基酸、纤维、调味剂、着色剂和防腐剂。矿物质的非限制性实例包括钙、磷、钾、钠、铁、氯、硼、铜、锌、镁、锰、碘、硒等等，及其多种盐。维生素的非限制性实例包括维生素A、多种维生素B(例如烟酸、泛酸、叶酸)、生物素、维生素D和维生素K。膳食补充剂还可包含类胡萝卜素，如α-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、玉米黄素和β-隐黄素。也可以添加另外的成分，如胰岛素、氨基酸等等。一种尤其优选的氨基酸是牛磺酸。 
本发明的膳食补充剂可还含有益生元(prebiotics)。益生元包括通过提供微生物生长的底物来改变胃肠道微生物区系组成的任何物质。益生元包括但不仅限于天然和合成的寡糖、可溶纤维、抗性淀粉和树胶。寡糖可以是线性的或分支的。可以针对益生元增强储存容器中或动物胃肠道中益生菌存活的能力，对其进行特异选择。也可以针对益生元增强动物中益生菌的功能性或补充益生菌的益处的能力，对其进行特异选择。一般以下述用量施用益生元，所述用量足够正面地刺激消化道中的健康微生物区系，并引起这些“好”的细菌繁殖。代表性的用量为每份食物约1到约10克，或占推荐的动物每日膳食纤维的约5％到约40％。 
在多个实施方案中，本发明的膳食补充剂还可包含从约15％到约60％的粗蛋白质。优选地，组合物包含约40％到约55％的粗蛋白质。粗蛋白质材料可包含植物性蛋白质如大豆、玉米、水稻、棉籽和花生，或动物性蛋白质如酪蛋白、白蛋白和肉蛋白质。适用于本文的肉蛋白质的非限制性实例包括猪肉、羔羊肉、马肉、家禽、鱼及其混合物。
膳食补充剂还可包含从约5％到约40％的脂肪。优选地，膳食补充剂包含约15％到约22％的脂肪。膳食补充剂还可包含碳水化合物来源。膳食补充剂可包含从约15％到约60％的碳水化合物。这类碳水化合物的非限制性实例包括谷粒或谷物，如水稻、玉米、高粱、苜蓿、大麦、大豆、canola、燕麦、小麦及其混合物。膳食补充剂也可任选地含有其它材料如干乳清和其它乳品业副产品。 
膳食补充剂还可含有至少一种纤维来源。膳食补充剂可包含从约0.5％到约5％的纤维。如本领域普通技术人员知道的，可以利用多种可溶或不溶的纤维。纤维来源可以是甜菜浆(来自甜菜)、***胶、gum talha、欧车前(psyllium)、米糠、角豆胶、柑桔浆、果胶、低聚果糖(fructooligosaccharide)、mannanoligofructose、大豆纤维、来自羽扇豆的纤维、***半乳聚糖(arabinogalactan)、低聚半乳糖(galactooligosaccharide)、***木聚糖或其混合物。纤维来源可以是可发酵的纤维，如上文所列中的许多。先前已经描述过可发酵的纤维可以对陪伴动物的免疫***提供益处。也可以向组合物中掺入本领域技术人员已知的如下可发酵纤维或其它组合物，以帮助增强本发明对免疫***、胃肠***和动物总体健康的益处，所述可发酵纤维或其它组合物提供能够增强肠内益生菌生长的益生元组合物。 
为了增加膳食补充剂可以被储存的时间长度，膳食补充剂优选地具有按补充剂重量计在约2％和约10％之间的总水分含量。优选地，总水分含量按补充剂的重量计少于5％。类似地，膳食补充剂优选具有0.20到0.6范围内的水活度。优选地，水活度为少于0.55。 
膳食补充剂可以针对具体的动物如犬或猫特别地配制。类似地，膳食补充剂可以针对年轻的、成年的或年老的动物特别地配制。一般而言，专用的制剂包含满足下述能量和营养需要的成分，所述能量和营养需要适合于具体的动物，或处于不同发育阶段或年龄的具体动物，或具有疾病状态相关的特殊营养需要的具体动物。 
在一个实施方案中，膳食补充剂针对犬配制。该配方包含从约1％到 约90％的动物消化物、从约1％到约30％的干啤酒酵母、从约0.1％到约10％的维生素C、从约0.1％到约10％的维生素E、从约0.01％到约3％的β胡萝卜素、从约0.1％到约5％的蛋白锌、从约0.01％到约3％的蛋白锰、从约0.01％到约3％的硫酸亚铁、从约0.01％到约1％的蛋白铜、从约0.01％到约1％的碘酸钙，和从约0.001％到约0.1％的***钠。在又一实施方案中，膳食补充剂还包含从约0.1％到约2％的牛磺酸，和从约1％到约50％的益生菌。膳食补充剂还可以包含从约0.01％到约2％的氯化钠。 
在另一实施方案中，膳食补充剂针对猫配制。该配方包含从约0％到约80％的动物消化物、从约0％到约30％的干啤酒酵母、从约0％到约10％的维生素C、从约0％到约10％的维生素E、从约0％到约3％的β胡萝卜素、从约0％到约5％的蛋白锌、从约0％到约2％的牛磺酸、从约0％到约3％的蛋白锰、从约0％到约3％的硫酸亚铁、从约0％到约1％的蛋白铜、从约0％到约0.1％的碘酸钙、从约0％到约0.01％的***钠，和从约1％到约50％的益生菌。膳食补充剂还可以包含从约0.01％到约2％的氯化钠。 
在一个实施方案中，益生菌被微囊化。益生菌可以被微囊化以包在生物相容的微囊中，从而增强或维持益生菌的生活力，尤其是在储存期间。微囊作为保护益生菌免受有害环境条件作用的屏障，所述有害环境条件如温度波动、氧、潮湿和光。微囊包含活性剂，例如被生物相容壳或包衣包围的益生菌核心。用于制备生物相容微囊的合适材料和用于微囊化的方法是本领域已知的，参阅例如Yan的U.S.专利号6,974,592、Curtis等的6,969,530、Shefer等的6,887,493和Opara的6,303,355，和Ubbink等的U.S.专利申请号10/507,359，和Simmons等的10/656,386，各参考文献的内容通过参考并入本文。可以制备微囊用于在施用给动物后益生菌的受控释放。在优选的实施方案中，本发明的微囊直径从约0.1mm到约1.0mm。在一个实施方案中，益生菌被以紫胶包被的生物聚合物基质微囊化。 
本领域技术人员可以确定要添加至给定的膳食补充剂制剂中的益生菌的合适量。可以考虑的因素包括：不同动物对特定类型组合物的平均消耗， 旨在摄食膳食补充剂的动物是否具有任何特殊的健康、康健或营养需要或患有特定的疾病或病症，动物的年龄、性别、尺寸或品种，和制备膳食补充剂组合物的制造条件。可以根据动物的能量和营养需要计算要添加进补充剂中的益生菌浓度。 
当膳食补充剂在高达50℃的温度下储存11天、高达60℃的温度下储存2天，或高达65℃的温度下储存20小时时，膳食补充剂中的益生菌，尤其是微囊化的益生菌，保持基本上是活的。 
本发明另一方面提供了适用于对动物施用包含益生菌的膳食补充剂的试剂盒。试剂盒在单包装的分开容器中或在虚拟包装的分开容器中(视试剂盒组分而定)包含至少一种益生菌和至少下述之一：(1)一种或多种适于动物食用的成分，(2)一种或多种益生元，(3)一种或多种抗腹泻剂，(4)如何将膳食补充剂和其它试剂盒组分组合，尤其是产生可用于对动物施用益生菌的食物组合物的说明书，和(5)如何使用本发明的膳食补充剂和其它组分(尤其是为了动物的益处)维持或改善胃肠健康，和将补充剂与食物成分组合用于动物食用的说明书。 
当试剂盒包含虚拟包装时，试剂盒受限于与一种或多种实体试剂盒组分组合的虚拟环境中的说明书。试剂盒含有下述量的膳食补充剂和其它组分，所述量足够对动物提供有益量的益生菌，通常以维持或改善胃肠健康和促进动物的健康和康健。典型地，临在被动物食用之前将膳食补充剂和其它合适的试剂盒组分(例如食物组合物)混合。试剂盒可以以各种任意的组合和/或混合物的形式含有试剂盒组分。在一个实施方案中，试剂盒包含含有一种或多种膳食补充剂的包装和用于动物食用的食物的容器。试剂盒可包含另外的物品，如用于混合膳食补充剂和成分的设备，和用于容纳混合物的设备，例如食钵。在另一实施方案中，膳食补充剂与促进动物良好健康的另外的营养补充剂如维生素和矿物质混合。 
说明书能够指导和/或告知使用者、宠物主人、兽医、宠物食品供应商等等如下信息：膳食补充剂的使用能够提供提及的益处，例如治疗或预防腹泻、改善肠内健康，或改善或维持动物胃肠道内健康的微生物区系平衡。 说明书还可以指导使用者如何在动物的食物或水中应用或混合膳食补充剂。 
用于本发明的益生菌和其它成分的合适容器包括例如：罐(can)、坛子(jar)、瓶、带有振荡用的盖子的瓶、碾磨器(mill)、管形瓶(vial)、注射器、管、药袋(pouch)、药囊(sachet)、袋子或夹子(folder)。容器可由多种材料制成，包括但不仅限于玻璃、塑料、聚合物、金属、合金、金属或合金箔、橡胶、纸板或纸。容器也可以包含密封剂(sealant)，其可以由本领域适用的任何材料如树脂或聚合物形成。在优选的实施方案中，容器是金属或合金箔的药袋，如下述药囊，所述药囊包含水分屏障和/或氧屏障层，从而进一步增强益生菌在储存于室温下和万一地面对高于室温的短期温度尖峰时的生活力。 
容器可包含水分屏障和/或氧屏障，以进一步增强益生菌长期储存的生活力。水分屏障和氧屏障是制药和食品工业中已知的。适用于本发明中的屏障描述于Vadhar的U.S.Pat.Nos.6,716,499，Shah的6,524,720，Bonneret al.的5,792,530，Bianchini et al.的5,512,338，和Bettle et al.的4,977,004。除这些屏障外或代替这些屏障，容器可含有除氧剂和/或干燥剂/水分吸收化合物。合适的除氧剂和干燥剂是本领域已知的，例如Yan et al.的U.S.Pat.No.6,746,622，Ebner et al.的6,387,461，和Ebner et al.的6,228,284(除氧剂)和Hekal的U.S.Pat.No.6,130,263(干燥剂)。 
容器上或与容器相连的标签可以指出膳食补充剂的可用适应症。试剂盒也可任选地包含另外的容器，所述容器具有本文所述的另一补充成分或试剂。产品或试剂盒可包含使用膳食补充剂在陪伴动物如犬或猫中治疗多种病症或支持总体健康和/或康健的说明书。在一些实施方案中，多个容器被包装在一起成为纸板箱。例如，但不仅限于，纸板箱可包含等同于一周膳食补充剂供应的7个容器，或等同于一个月膳食补充剂供应的30个容器，等等。容器可装有单剂的补充剂(即单次使用)，或多剂补充剂。容器还可以与宠物食品容器包装在一起，例如与犬食或猫食罐头、或干燥的犬食或猫食、或其它膳食补充剂如零食包装在一起。
本发明另一方面提供了下述食物组合物，所述食物组合物包含一种或多种适合被动物食用的成分和本发明的膳食补充剂。膳食补充剂可与所述成分混合产生食物组合物，或可以被施加于所述成分上以产生食物组合物。在一个实施方案中，通常通过喷洒或喷雾将膳食补充剂施加于食物组合物上。在一个优选的实施方案中，所述成分形成营养全面的陪伴动物食物，如犬或猫食，并优选地将膳食补充剂施加于食物上。通常将犬或猫食物置于合适的容器中，并将膳食补充剂施加于所述食物上，例如喷洒在食物上。 
本发明另一方面提供了用于对动物施用益生菌的方法，所述方法包括对动物施用下述食物组合物，所述组合物包含一种或多种适于被动物食用的成分和本发明的膳食补充剂。 
本发明另一方面提供了用于制造含益生菌的食物组合物的方法，所述方法包括将一种或多种适于动物食用的成分与本发明的膳食补充剂混合，或将本发明的膳食补充剂施加于食物组合物上。本发明再一方面提供了使用该方法制造的食物组合物。 
本发明另一方面提供了用于促进动物的健康或康健的方法，所述方法包括对动物施用促进健康或康健的量的本发明膳食补充剂。在一个实施方案中，膳食补充剂与抗腹泻剂联合施用。 
本发明另一方面提供了用于促进动物胃肠健康的方法，所述方法包括对动物施用促进胃肠健康的量的本发明膳食补充剂。在一个实施方案中，膳食补充剂与抗腹泻剂联合施用。 
对这些方法而言，可以使用任何合适的方法施用补充剂，但是优选通过将补充剂与食物组合物混合或将补充剂施加于食物组合物上来施用，所述食物组合物优选全营养食物组合物。 
为了促进健康和康健或促进胃肠健康，通过本发明的膳食补充剂以下述用量向动物施用益生菌，所述用量为每天从约10亿到约200亿个菌落形成单位(CFU)，优选每天从约1000万到约100亿个活的细菌。 
本发明另一方面提供了用于交流关于下述一个或多个内容的信息或说明的工具：(1)使用膳食补充剂对动物施用益生菌，尤其是为了维持或改善 胃肠健康，(2)将膳食补充剂与本发明的其它组分(食物组合物)混合，(3)对动物施用膳食补充剂，单独地或与本发明的其它成分组合地施用，和(4)使用本发明的试剂盒对动物施用益生菌，尤其是为了维持胃肠健康或促进动物的健康或康健，例如预防和治疗腹泻或用于改善粪便质量。该工具包括含有所述信息或说明的文件、数码存储介质、光学存储介质、音频显示(audio presentation)或视频显示。在某些实施方案中，交流工具是含有这类信息或说明的展示网站、可视化展示信息站(visual display kiosk)、宣传册、产品标签、包装说明书(package insert)、广告、传单、公告、录音带、录像带。DVD、CD-ROM、计算机可读芯片、计算机可读卡片、计算机可读盘片、计算机存储器或其组合。有用的信息包括下述之一种或多种：(1)用于组合和施用膳食补充剂和/或其它组分的方法和技术，和(2)供动物或它们的看护者对本发明及其用途有疑问时使用的联系信息。有用的说明包括用于混合的量和施用的量和频率。交流工具可用于说明使用本发明的益处和交流经批准的对动物施用本发明的方法。 
实施例 
本发明可以通过以下的实施例进一步阐述，尽管应当理解除非另有明确说明，这些实施例仅用于阐述的目的，而非旨在限制本发明的范围。 
实施例1 
益生菌粉末混合过程 
使用标准的干混装置制造用于犬和猫的益生菌粉末制剂，包括螺带混合机、v-混合机或双搅拌叶片混合机。混合时间是可变的，取决于使用的混合机。最大混合时间为10分钟。向混合机中添加益生菌组合物成分的顺序不是关键性的。混合后的粉末立即包装进用PVC套保护的大袋中或具有PVC衬里的袋子中。针对猫制备的制剂在表1中公开，针对犬的制剂在表2中公开。
表1 
猫用益生菌粉末制剂 
  
成分 单位 量
胡萝卜素 IU A/lb 446000
粗纤维 ％ 0.415
脂肪 ％ 17.7
钙 ppm 3059
铜 ppm 58.12
铁 ppm 870.5
镁 ppm 967.5
锰 ppm 284.8
磷 ppm 17690
钾 ppm 7476
钠 ppm 14760
锌 ppm 1144
水分 ％ 3.39
蛋白质 ％ 46.8
硒 ppm 2.16
维生素E mg/100g 1110
维生素C ppm 8670
牛磺酸 ppm 6730
粪肠球菌 CFU/g 109
[0079] 表2 
犬用益生菌粉末制剂 
  成分   单位   量
  胡萝卜素   IU A/lb   787000
  粗纤维   ％   0.560
  脂肪   ％   17.6
  钙   ppm   3721
  铜   ppm   123.5
  铁   ppm   1577
  镁   ppm   1001
  锰   ppm   685.1
  磷   ppm   18120
  钾   ppm   7506
  钠   ppm   17930
  锌   ppm   1993
  水分   ％   3.39
  蛋白质   ％   44.7
  硒   ppm   2.81
  维生素E   mg/100g   1410
  维生素C   ppm   10700
  屎肠球菌   CFU/g   109
实施例2 
益生菌粉末包装 
使用Cloud Packaging Solutions，Des Plains，II制造的专用包装设备将约1.15±0.1克的经混合的益生菌粉末包装进独立单次使用的容器中。如表3所列构建容器。容器尺寸为3″X 2″。容器由纸、低密度聚乙烯、箔和 Dupont 
Figure DEST_PATH_GSB00000316519000051
组成。WVTR和OTR在表3中给出。 
表3 
包装规格 
Figure DEST_PATH_GSB00000316519000052
实施例3 
粉末组合物中的益生菌稳定性 
膳食补充剂包括使用屎肠球菌(SF68)作为代表性益生菌微生物的益生菌粉末组合物，所述微生物被微囊化于生物聚合物基质中。经包囊的组合物在五种不同的温度下储存多达96小时。所述温度为25℃、33℃、45℃、55℃和65℃。在从0时间开始于如表4所示的不同时间点采取来自各储存组合物的样品，并分析屎肠球菌的生活力。生活力测量的结果在表4中概括。 
在粉末膳食补充剂中针对SF68观察到的结果和拟合的Arrhenius模型。该数据显示在四种温度(25℃、33℃、45℃、55℃和65℃)下短期储存期间观察和预测的屎肠球菌平均对数(计数)。使用的Arrhenius模型为Y＝a+(b＊小时)＊(e(-k/temp))，其中系数a＝9.3348；b＝-73214.6和k＝-914.7。 
表4 
短期储存期间储存时间和温度对屎肠球菌生活力的影响 
短期储存期间储存时间和温度对屎肠球菌生活力的影响 
  
时间 温度(℃)
(hr) 25℃   33℃     45℃   55℃    65℃
0 8 10121416182024262830324048566472808896 9.18 9.18 9.18 9.18 9.30 9.08 9.23 8.70 9.15 8.95 9.48 9.30 9.20 8.97 8.63 9.20 9.46 7.83 7.26 7.11 6.54 9.40 9.38 8.11 8.89 8.83 7.30 9.30 9.48 9.45 9.23 5.57 8.80 8.92 5.54 9.32 9.43 9.70 8.94 5.00 9.15 9.11 4.61 9.40 9.45
还在持续高温的条件下评价包囊化的组合物中益生菌生物的生活力。将使用屎肠球菌SF68的微囊化的益生菌组合物包装在如实施例2所述的容器中，并在45℃、50℃、55℃和60℃储存11天。一式四份进行实验。以对数菌落形成单位测量的结果展示于表5中。经七天的储存期未在50℃或以下的温度观察到显著的生活力丧失 。 
表5 
长期储存期间储存时间和温度对屎肠球菌生活力的影响 
Figure DEST_PATH_GSB00000316519000071
表4和表5中所示结果单位是log cfu/克膳食补充剂。 
在粉末膳食补充剂中针对SF68观察到的结果和拟合的Arrhenius模型。该数据显示在四种温度(45℃、50℃、55℃和60℃)下长期储存期间观察和预测的屎肠球菌平均对数(计数)。使用的Arrhenius模型为Y＝a+(b＊小时)＊(e(-k/temp))，其中系数a＝9.2249；b＝-3.0488和k＝-1187.4。 
实施例4 
犬和猫中益生菌粉末组合物的接受度 
针对犬和猫特别地配制益生菌粉末组合物。如下施用组合物：在动物的干燥挤压成形的膳食上局部喷洒1.0克组合物或将1.0克组合物与干燥的挤压成形的膳食均匀混合。 
连续数天评价三组犬，每组二十只。第一天第1组测量相对于对照而言对局部施加的益生菌组合物的偏好，第2组测量相对于对照而言对均匀混合的益生菌组合物的偏好，第3组测量相对于均匀混合的组合物而言对 局部施加的益生菌组合物的偏好。第二天颠倒膳食的放置。在各组中，在喂养时间给犬提供两种可能的食物选择，各含有700克无补充剂的膳食(对照)。如喂养方案中所述，在喂养犬之前添加补充剂。在食用期前对各碗食物称重。给予动物二十分钟进食。20分钟进食期后通过称重各碗食物(对照和有补充剂的)确定偏好。 
连续数天评价三组猫，每组二十只。第一天第1组测量相对于对照而言对局部施加的益生菌组合物的偏好，第2组测量相对于对照而言对均匀混合的益生菌组合物的偏好，第3组测量相对于均匀混合的益生菌组合物而言对局部施加的益生菌组合物的偏好。第二天颠倒膳食的放置。在各组中，在喂养时间给猫提供两种可能的食物选择，各含有约100克无补充剂的膳食(对照)。如喂养方案中所述，在喂养猫之前添加补充剂。在进食期前对各碗食物称重。给予动物十八分钟进食。通过在自动秤上记录每份膳食重量的减少，确定偏好。 
总起来说，含有益生菌制剂(喷洒或与膳食混合)的膳食显著地被猫偏好，或同等地或显著地被犬偏好。 
在说明书中，公开了本发明一般的优选实施方案，并且虽然采用了特定术语，但其仅以一般性和描述性意义使用，而不用于限制目的，本发明的范围由权利要求说明。明显地，根据上述教导，本发明可以有许多修改和变化。因此，应当理解，在所附权利要的范围内，本发明可以以除具体描述之外的方式实施。

Claims (24)

1.膳食补充剂，其包含至少一种益生菌和动物消化物、维生素C；维生素E、β胡萝卜素、蛋白锌、蛋白锰、硫酸亚铁、蛋白铜、碘酸钙和***钠，其中益生菌包括屎肠球菌。
2.权利要求1的补充剂，其中益生菌包括原核生物、真核生物或古细菌益生菌。
3.权利要求1的补充剂，其中益生菌包含至少一种任何适宜的肠球菌属、链球菌属、乳杆菌属、乳球菌属、双歧杆菌属或酵母属的菌株或亚种。
4.权利要求1的补充剂，其中屎肠球菌为保藏为NCIMB 10415的SF68。
5.权利要求1的补充剂，其还包含牛磺酸。
6.权利要求1的补充剂，其还包含益生元。
7.权利要求1的补充剂，其还包含抗腹泻剂。
8.权利要求1的补充剂，其中益生菌被微囊化。
9.权利要求8的膳食补充剂，其中微囊包含用紫胶包衣的生物聚合物基质。
10.权利要求1的膳食补充剂，其中膳食补充剂针对陪伴动物配制。
11.权利要求10的膳食补充剂，其中陪伴动物是猫或犬。
12.适用于对动物施用益生菌的试剂盒，所述试剂盒视试剂盒组分而定在单包装的分开容器中或在虚拟包装的分开容器中包含根据权利要求1-11之任一项的膳食补充剂和至少下述之一：(1)一种或多种适于动物食用的成分，(2)一种或多种益生元，(3)一种或多种抗腹泻剂，(4)如何将该膳食补充剂和其它试剂盒组分组合的说明书，和(5)如何使用该膳食补充剂和其它试剂盒组分的说明书。
13.食物组合物，其包含一种或多种适于动物食用的成分和权利要求1-11之任一项的膳食补充剂。
14.权利要求13的食物组合物，其中所述成分形成全营养陪伴动物食品。
15.权利要求13的食物组合物，其中膳食补充剂与所述成分混合。
16.权利要求13的食物组合物，其中膳食补充剂被施加于所述成分上。
17.权利要求1-11之任一项的膳食补充剂在制备对动物施用益生菌的食物组合物中的用途，其中所述食物组合物包含一种或多种适于动物食用的成分和所述膳食补充剂。
18.用于制造含益生菌的食物组合物的方法，所述方法包括将一种或多种适于动物食用的成分和权利要求1-11之任一项的膳食补充剂混合，或将权利要求1-11之任一项的膳食补充剂施加于食物组合物上。
19.权利要求1-11之任一项的膳食补充剂在制备用于促进动物健康或康健的试剂盒中的用途。
20.权利要求19的用途，其中通过将补充剂与下述食物组合物混合或将补充剂施加于所述食物组合物上施用膳食补充剂，所述食物组合物包含一种或多种适于动物食用的成分。
21.权利要求19的用途，其中膳食补充剂与一种或多种抗腹泻剂联合施用。
22.权利要求1-11之任一项的膳食补充剂在制备用于促进动物胃肠健康的试剂盒中的用途。
23.权利要求22的用途，其中通过将补充剂与下述食物组合物混合或将补充剂施加于所述食物组合物上施用膳食补充剂，所述食物组合物包含一种或多种适于动物食用的成分。
24.权利要求22的用途，其中膳食补充剂与一种或多种抗腹泻剂联合施用。
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