CN101358224A - 一种猴头菇多糖的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种产品收率高、纯度好的猴头菇多糖提取方法。所述方法包括：猴头菇干燥粉末加入水，50～80℃下用8～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，滤液依次用足量纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶水解，最后加入双氧水，于30～50℃保温搅拌0.5h～1h，超滤膜超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。本发明的有益效果主要体现在：1.所制得产品纯度高，其中β－葡聚糖含量可高达40％以上，生物活性高，猴头菇粗多糖得率可达12.2％；2.采用双氧水脱色，条件温和，不易损坏多糖结构，且副产物为水，绿色环保，符合保健食品的生产要求。

Description

一种猴头菇多糖的提取方法

(一)技术领域

本发明涉及一种猴头菇多糖的提取方法。

(二)背景技术

猴头菇(Hericium erinaceus)又名猴头、猴头蘑、猴头菌、刺猬菌等，是一种大型真菌，属担子菌纲、多孔菌目、齿菌科、猴头属，因其子实体形状像猴子头部而得名。从猴头菇子实体中提取到的多糖是主链由β-1，3糖苷键，支链为β-1，6糖苷键连接的葡聚糖混合物，分子量在8000～40000之间。大量的医学和药理学研究表明，该猴头菇多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂等生理功能，对消化***的癌变、溃疡、胃窦炎、慢性胃炎等病均有疗效，并且能提高人体的免疫能力。因此，猴头多糖制成的药物和保健品深受人们喜爱，开发前景广阔。

目前常用的猴头菇多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热水浸提法。稀酸、稀碱法，试剂用量少，仪器均为常规仪器，因此操作简单易行。但稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，而且杂质含量也比较多，有一定的适用范围。刘桢鋆发明专利“真菌多糖精化提纯工艺”指出了提纯真菌多糖方法(200610012682.3)，但针对猴头菇多糖而言，其本身存在使颜色较深的酚型化合物与糖链连接，较难除去，且还存在纤维素、果胶等生物大分子的干扰，超滤膜孔易阻塞等问题。因此，由此法获得的猴头菇多糖还存在产品色泽、效率、纯度等需要进一步提高的缺陷。

(三)发明内容

本发明目的是优化和完善猴头菇多糖的提取工艺，提供一种产品收率高、纯度好的猴头菇多糖提取方法。

本发明采用的技术方案是：

一种猴头菇多糖的提取方法，所述方法包括：

(1)取干燥猴头菇(可由新鲜猴头菇经自然风干得到)，粉碎，过50～120目筛，得猴头菇干燥粉末；

(2)猴头菇干燥粉末加入5～35倍质量的蒸馏水，50～80℃下用8～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1；滤渣可重复进行超声波萃取操作，滤液合并后进行下一步提取；

(3)调节滤液1pH为3～6，加入足量纤维素酶，30～60℃水解1.0h～4.0h，离心取滤液2调pH为3～6，加入足量果胶酶，30～60℃水解0.5h～1.5h，离心取滤液3调pH为3～6，加入足量木瓜蛋白酶，30～60℃水解1.0h～2.0h，离心，取滤液4；

(4)调节滤液4pH为8～9，加入体积为滤液4体积0.5～1.0倍的20～40％双氧水，于30～50℃保温搅拌0.5h～1h，超滤膜超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。

所述纤维素酶可采用市购商品酶，用量以足量为宜，优选的，酶活性为10000～20000u/g的纤维素酶质量用量为滤液1质量的0.5～1.0倍。

所述果胶酶可采用市购商品酶，用量以足量为宜，优选的，酶活性为15000～25000u/g的果胶酶质量用量为滤液2质量的1.0～1.5倍。

所述木瓜蛋白酶可采用市购商品酶，用量以足量为宜，酶活性为800000～1000000u/g的木瓜蛋白酶质量用量为滤液3质量的0.5～1.5倍。

具体的，所述方法如下：

(1)取干燥猴头菇，充分粉碎，过50～120目筛，得猴头菇干燥粉末；

(2)猴头菇干燥粉末加入10～25倍质量的蒸馏水，50～60℃下用10～15KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1-1，滤渣加入10～25倍质量的蒸馏水，50～60℃下用10～15KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1-2，合并滤液1-1和滤液1-2，得滤液1；

(3)调节滤液1的pH为3.5～4.0，加入质量为滤液1质量0.6～0.9倍的15000u/g的纤维素酶，40～45℃水解1.0h～2.0h，离心取滤液2调pH为4.0～4.5，加入质量为滤液2质量1.0～1.2倍的20000u/g的果胶酶，45～50℃水解1.0h～1.5h，离心取滤液3调pH为4.0～4.5，加入质量为滤液3质量0.8～1.2倍的800000u/g的木瓜蛋白酶，45～50℃水解1.2h～1.5h，离心，取滤液4；

(4)调节滤液4pH为8～9，加入体积为滤液4体积0.5～1.0倍的30％双氧水，于40～45℃保温搅拌0.5h～1h，以5k的聚砜膜超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。

本发明的有益效果主要体现在：1、所制得产品纯度高，其中β-葡聚糖含量可高达40％以上，生物活性高；2、针对猴头菇子实体本身含有纤维素、果胶、蛋白质等杂质的干扰，筛选适用于此的纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶反应体系，使杂质充分脱除，猴头菇粗多糖得率可达12.2％，比传统的热水浸提法粗多糖提取得率提高了近67.4％；3、采用双氧水脱色，条件温和，不易损坏多糖结构，且副产物为水，绿色环保，符合保健食品的生产要求；4、采用聚砜膜，将切向流过滤技术应用到猴头菇多糖的制备中，在过滤的同时也对聚砜膜表面冲刷，使膜表面不会形成杂质大分子凝胶层，从而确保稳定、快速的超滤速度，大大缩短工艺时间，便于工业化生产。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

a.对猴头菇子实体预处理，取新鲜的猴头菇，将其自然风干，充分粉碎后，过60目筛。

b.将过筛后的原料加10倍质量的蒸馏水，搅拌均匀并逐渐升温，在60℃范围内用10KHz的超声波对其进行1.5h的超声波萃取，过滤，滤渣重复上述步骤，再萃取一次，合并滤液。

c.调节滤液pH4.0，先加入0.8倍质量的纤维素酶(酶活15000U/g，无锡市雪梅酶制剂科技有限公司，下同)，控制温度在40℃，水解1.5h，冷冻离心，弃去残渣；再调节滤液pH4.0，往滤液中继续加入1.0倍质量的果胶酶(酶活20000U/g，天津市利华酶制剂厂，下同)，控制温度在45℃，水解1.0h，冷冻离心，弃去残渣；最后再调节滤液pH4.0，加入0.8倍质量的木瓜蛋白酶(酶活800000U/g，无锡市雪梅酶制剂科技有限公司，下同)，控制温度在50℃，水解1.5h，冷冻离心，收集滤液。

d.调节pH为8，然后逐渐加入0.6倍体积的30％双氧水，搅拌，控制滤液温度在40℃，保温30min至颜色变浅。

e.采用切向流超滤技术，使用超滤膜进行超滤，使用5k的聚砜膜(北京特里高膜技术有限公司，下同)，压力不超过0.4MPa，滤液被分为两部分，收集10000道尔顿以上的部分。

f.对操作步骤e获得的滤液进行冷冻干燥，即获得所需的猴头菇多糖，经自动称量后进行密封防潮包装(软包装、瓶装)，最后装箱入库。

多糖含量的检测：

精确称取猴头菇多糖10mg置于100ml烧杯中，加80ml重蒸水煮沸1小时后冷却至室温，再加重蒸水定容量至100ml。量取1.0ml移入比色皿中，加5.0％重蒸苯酚2.0ml，再加浓硫酸5.0ml，摇匀后室温放置20min，在波长490nm处测定吸光度。

制备的猴头菇多糖为淡黄色粉末，易吸湿，易溶于水，含量为43％，且符合下述指标：

1.重金属指标：Pb＜1.5ppm As＜1.0ppm Hg＜0.3ppm。

2.卫生指标：细菌数＜1000个/g大肠杆菌、活螨不得检出，霉菌数＜35个/g。

实施例2：

a.对猴头菇子实体预处理，取新鲜的猴头菇，将其自然风干，充分粉碎后，过100目筛。

b.将过筛后的原料加20倍质量的蒸馏水，搅拌均匀并逐渐升温，在50℃范围内用15KHz的超声波对其进行0.8h的超声波萃取，过滤，滤渣重复上述步骤，再萃取一次，合并滤液。

c.调节滤液pH4.0，先加入0.6倍质量的纤维素酶，控制温度在45℃，水解1.0h，冷冻离心，弃去残渣；再调节滤液pH4.5，往滤液中继续加入1.0倍质量的果胶酶，控制温度在50℃，水解1.0h，冷冻离心，弃去残渣；最后再调节滤液pH4.5，加入1.2倍质量的木瓜蛋白酶，控制温度在45℃，水解1.2h，冷冻离心，收集滤液。

d.调节pH为8，然后逐渐加入1.0倍体积的30％双氧水，搅拌，控制滤液温度在45℃，保温30min至颜色变浅。

e.采用切向流超滤技术，使用超滤膜进行超滤，尤其使用5k的聚砜膜，压力不超过0.4MPa，滤液被分为两部分，收集10000道尔顿以上的部分。

f.对操作步骤e获得的滤液进行冷冻干燥，即获得所需的猴头菇多糖，经自动称量后进行密封防潮包装(软包装、瓶装)，最后装箱入库。

多糖含量的检测：

精确称取猴头菇多糖10mg置于100ml烧杯中，加80ml重蒸水煮沸1小时后冷却至室温，再加重蒸水定容量至100ml。量取1.0ml移入比色皿中，加5.0％重蒸苯酚2.0ml，再加浓硫酸5.0ml，摇匀后室温放置20min，在波长490nm处测定吸光度。

制备的猴头菇多糖为淡黄色粉末，易吸湿，易溶于水，含量为45％，且符合下述指标：

1重金属指标：Pb＜1.5ppm As＜1.0ppm Hg＜0.3ppm。

2.卫生指标：细菌数＜1000个/g大肠杆菌、活螨不得检出，霉菌数＜35个/g。

实施例3：

a.对猴头菇子实体预处理，取新鲜的猴头菇，将其自然风干，充分粉碎后，过80目筛。

b.将过筛后的原料加25倍质量的蒸馏水，搅拌均匀并逐渐升温，在60℃范围内用15KHz的超声波对其进行0.8h的超声波萃取，过滤，滤渣重复上述步骤，再萃取一次，合并滤液。

c.调节滤液pH3.5，先加入0.9倍质量的纤维素酶，控制温度在45℃，水解2.0h，冷冻离心，弃去残渣；再调节滤液pH4.5，往滤液中继续加入1.2倍质量的果胶酶，控制温度在45℃，水解1.0h，冷冻离心，弃去残渣；最后再调节滤液pH4.0，加入1.0倍质量的木瓜蛋白酶，控制温度在45℃，水解1.5h，冷冻离心，收集滤液。

d.调节pH为8，然后逐渐加入0.8倍体积的30％双氧水，搅拌，控制滤液温度在45℃，保温30min至颜色变浅。

e.采用切向流超滤技术，使用超滤膜进行超滤，尤其使用5k的聚砜膜，压力不超过0.4MPa，滤液被分为两部分，收集10000道尔顿以上的部分。

f.对操作步骤e获得的滤液进行冷冻干燥，即获得所需的猴头菇多糖，经自动称量后进行密封防潮包装(软包装、瓶装)，最后装箱入库。

多糖含量的检测：

精确称取猴头菇多糖10mg置于100ml烧杯中，加80ml重蒸水煮沸1小时后冷却至室温，再加重蒸水定容量至100ml。量取1.0ml移入比色皿中，加5.0％重蒸苯酚2.0ml，再加浓硫酸5.0ml，摇匀后室温放置20min，在波长490nm处测定吸光度。

制备的猴头菇多糖为淡黄色粉末，易吸湿，易溶于水，含量为47％，且符合下述指标：

1.重金属指标：Pb＜1.5ppm  As＜1.0ppm Hg＜0.3ppm。

2.卫生指标：细菌数＜1000个/g大肠杆菌、活螨不得检出，霉菌数＜30个/g。

Claims (6)

1.一种猴头菇多糖的提取方法，所述方法包括：

(1)取干燥猴头菇，粉碎，过50～120目筛，得猴头菇干燥粉末；

(2)猴头菇干燥粉末加入5～35倍质量的蒸馏水，50～80℃下用8～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1；

(3)调节滤液1pH为3～6，加入足量纤维素酶，30～60℃水解1.0h～4.0h，离心取滤液2调pH为3～6，加入足量果胶酶，30～60℃水解0.5h～1.5h，离心取滤液3调pH为3～6，加入足量木瓜蛋白酶，30～60℃水解1.0h～2.0h，离心，取滤液4；

(4)调节滤液4pH为8～9，加入体积为滤液4体积0.5～1.0倍的20～40％双氧水，于30～50℃保温搅拌0.5h～1h，超滤膜超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素酶酶活性为10000～20000u/g，所述纤维素酶质量用量为滤液1质量的0.5～1.0倍。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述果胶酶酶活性为15000～25000u/g，所述果胶酶质量用量为滤液2质量的1.0～1.5倍。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述木瓜蛋白酶酶活性为800000～1000000u/g，所述果胶酶质量用量为滤液3质量的0.5～1.5倍。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)的提取是为2次重复提取：猴头菇干燥粉末加入5～35倍质量的蒸馏水，50～80℃下用8～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1-1，滤渣继续用5～35倍质量的蒸馏水于50～80℃下用8～20KHz超声波重复提取，过滤，取滤液1-2，合并滤液1-1与滤液1-2为滤液1。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)取干燥猴头菇，粉碎，过50～120目筛，得猴头菇干燥粉末；

(2)猴头菇干燥粉末加入10～25倍质量的蒸馏水，50～60℃下用10～15KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1-1，滤渣加入10～25倍质量的蒸馏水，50～60℃下用10～15KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1-2，合并滤液1-1和滤液1-2，得滤液1；

(3)调节滤液1的pH为3.5～4.0，加入质量为滤液1质量0.6～0.9倍的酶活性为15000u/g的纤维素酶，40～45℃水解1.0h～2.0h，离心取滤液2调pH为4.0～4.5，加入质量为滤液2质量1.0～1.2倍的酶活性为20000u/g的果胶酶，45～50℃水解1.0h～1.5h，离心取滤液3调pH为4.0～4.5，加入质量为滤液3质量0.8～1.2倍的酶活性为800000u/g的木瓜蛋白酶，45～50℃水解1.2h～1.5h，离心，取滤液4；

(4)调节滤液4pH为8～9，加入体积为滤液4体积0.5～1.0倍的30％双氧水，于40～45℃保温搅拌0.5h～1h，以5k的聚砜膜超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，冷冻干燥，得到猴头菇多糖。