CN101233129A

CN101233129A - 取代的联芳杂环衍生物作为蛋白激酶抑制剂治疗癌症及其他疾病

Info

Publication number: CN101233129A
Application number: CNA2006800281850A
Authority: CN
Inventors: 扬·扬; 普兰尼·扬; 马丁·米兰达; 麦克拉·普法尔; 布鲁斯·卡特; 穆巴拉克·鲁沙利夫; 马格努斯·普法尔
Original assignee: Pfahl Family Corp (199679)
Current assignee: Pfahl Family Corp (199679)
Priority date: 2005-05-31
Filing date: 2006-05-30
Publication date: 2008-07-30
Also published as: JP2008542382A; WO2006130613A2; AU2006252629A1; EP1896462A2; CA2650999A1; WO2006130613A3

Abstract

本发明是针对特定具可获专利的、表现出蛋白激酶(PK)抑制活性或者调节能力的、取代的苯并噁唑衍生物。还描述了包含这些化合物的药物组合物，以及制备和应用它们的方法。例如，这些杂环化合物有助于治疗蛋白激酶活性异常所致的障碍，包括涉及细胞异常增生的疾病和障碍，例如，急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、胃肠间质性癌症、甲状腺癌、其他癌症和白血病，以及其他疾病，诸如炎症和动脉粥样硬化。

Description

取代的联芳杂环衍生物作为蛋白激酶抑制剂治疗癌症及其他疾病

发明背景

c-Abl酪氨酸激酶抑制剂，ST1571(Gleevec or Imanitib，Novartis Pharma)用于治疗慢性粒细胞白血病(CML)的临床成功促进了以蛋白激酶抑制剂(PKIs)作为对于其他类型白血病以及实体肿瘤的靶向疗法的发展。CML是一种罕见的、恶性的骨髓增生障碍，其特点是造血干细胞中发生了(9∶22)(q34；ql 1)染色体(Ph染色体)易位，以及蛋白酪氨酸激酶Bcr-Abl组成上的激活(Heisterkamp N，Stam K，Groffen J，de Klein A and Grosveld G 1985 Structuralorganization of the bcr gene and its role in the Ph’translocation.Nature 315：758-61；Barila D and Superti-FurgaG 1998.这种染色体缺陷在所有慢性粒细胞白血病患者中出现频率为95％，在成年急性淋巴细胞白血病患者中出现频率为30％-50％。Anintramolecular SH3-domain interaction regulatesc-Abl activity.Nature Genetics 18：280-2)。CML占所有恶性肿瘤的0.4％，流行病学为每10,000人中有3-5例(Baker DE 2002 Imatinib Mesylate.NewDrug Review.Reviews in Gastroenterological disorders.2：75-86)。

用Gleevec来抑制Abl酪氨酸激酶对于治疗慢性粒细胞白血病虽然是有效的，但却没有用于治疗更为普遍的急性粒细胞白血病(AML)的靶向疗法。另外，Gleevec对于治疗恶化以及白血病急性发作虽然是有效的，但出现的耐药性是一个问题。作为一种更加普遍的疾病，AML占所有成人白血病病例的很大比例，在美国每年有大约7200名受害者，并且全世界范围内的数目更大(Seppa N 2002 Smart drugs：Leukemia treatments nearing prime time.Science 161：2-4)。

在美国，每年有大约10,000名新增AML病例，全世界则有200,000例。百分之四十的AML患者具有一种突变的Flt-3酶，这样该酶具有构成性的活性，导致酪氨酸激酶的活化和不可控制的骨髓干细胞增生(Abu-Duhier FM，Goodeve AC，Wilson GA et al.2000)。在成人AML患者中的Flt-3内部串联重复突变形成了一种高危度人群组(Br.J Haematol 111：190-195)。这种致命的血液癌症预后非常差，患者五年存活率只有14％。因此，需要对AML的早期和晚期阶段均能治疗的有效药剂。Flt-3激酶是疾病发展所必需的，因此也就成了发展新疗法的一个理想靶向。

Flt-3(FMS样酪氨酸激酶3)是一种受体酪氨酸激酶，它催化蛋白质酪氨酸残基的羟基基团的磷酸化。受体酪氨酸激酶包括一大族的具有不同生物学功能的跨膜受体。目前，至少有19种不同的亚族的受体酪氨酸激酶已被鉴定出来。Flt-3是血小板衍生的生长因子(PDGFR)受体酪氨酸激酶亚族的成员之一，并且与KIT、FMS、以及PDGFR具有相同的结构特征。在结构上，Flt-3在胞外区具有五个免疫球蛋白样结构域，一个单次跨膜序列，以及细胞内的一个短的近膜蛋白，其下紧接着一个胞内激酶结构域(Levis M，Allebach J，Tse K-F，ZhengR，Baldwin BR，Douglas Smith B，Jones-Bolin S，Ruggeri B，DionneC and Small D(2002))。

Flt-3靶向的酪氨酸激酶抑制剂对白血病细胞在体内和体外均具有细胞毒性(Blood 99(11)：3885-3891)。其活性信号通过自身磷酸化和胞内生物化学信号转导通路中的蛋白磷酸化来转导，这促进了不可控制的细胞增殖并抑制凋亡。当与Flt-3配体结合以后，野生型受体发生二聚化，通过所产生的磷酸化来激活其酪氨酸激酶结构域。RAS-GAP、PLC、PI3-激酶、STAT5、以及ERK1/2是与Flt-3的活化相关联的重要信号蛋白。

其他受体酪氨酸激酶家族的亚家族成员，包括EGF受体酪氨酸激酶，胰岛素受体酪氨酸激酶和FGF受体酪氨酸。例如，EGF受体酪氨酸激酶在许多癌症如肺癌和乳腺癌中都是过表达的。Astrazeneca公司生产的Iressa、Genentech公司生产的Herceptin(对HER2-阳性转移的乳腺癌)和OSI-Genentech公司生产的Tarceva(对于非小细胞肺癌)等都是针对EGFR受体的特异性靶向药。另外几种正在临床研发的小分子受体酪氨酸激酶抑制剂包括：SU5416，SU6668和SUl 1248(Sugen-Pfizer公司)，ZD-6474(Astrazeneca公司)和PTK787/ZK222584(Novartis公司)，并且能抑制VEGFR、FGFR、PDGFR和c-kit等多种激酶。另外，也进行了一些鉴定小分子作为蛋白激酶抑制剂的其他尝试。例如，双单环，双环和杂环芳香族化合物(PCT WO92/20642)，乙烯基氮杂吲哚衍生物(PCT WO 94/14808)和1-环丙基-4-砒啶基-喹啉酮(美国专利号No.5,330,992和苯乙烯基化合物I(美国专利号No.5,217,999)，苯乙烯基取代的砒啶化合物(美国专利号No.5,302,606)，喹唑啉衍生物(西班牙专利号No.0566 266 A1)，硒化吲哚及硒化物(PCT WO 94/03427)，三环多聚水化羟甲唑啉化合物(PCT WO 92/21660)，苯甲基膦酸化合物(PCT WO 91/15495)都已报道作为蛋白酪氨酸激酶抑制剂潜在地用于癌症的治疗。另外，苯唑，苯并唑和苯并咪唑衍生物(PCT WO 02/072543 A2)也已经报道有助于癌症及其他疾病的治疗，但是却不适合于作为特定激酶的靶抑制剂，这也是许多其他杂环化合物在专利中说明的情况。

本发明是关于一类可获专利的带有特定取代苯唑衍生物的激酶抑制剂，对Flt-3具有高效的抑制作用，能在体内和体外特异性地杀伤携带Flt-3突变的白血病细胞。另外，这些化合物在体外实验中也能有效地抑制c-Kit(包括Gleevec耐受的突变型)，和/或RET，和/或PDGFRβ(血小板衍生生长因子受体β)，因为这些激酶在一些癌症中对其增殖发挥着重要作用，所以此类抑制剂可预期用于对这些癌症的治疗。这些化合物在结构上不同于PCT WO 02/072543 A2所指的广泛的苯唑衍生物。那些化合物被报道因具有显著的细胞毒性而具有广泛的抗癌活性。在此所述化合物具有很好的选择性抗癌活性，因此在实验中它们能杀伤携带有Flt-3突变型的白血病细胞系而不杀伤其他的细胞系。因此，在此所述化合物在结构上，以及因为具有选择性抗癌的活性，不同于WO 02/072543 A2所报告的化合物。只有靶向抗癌活性而不是广泛的抗癌活性是其一个主要优点，因为这种化合物有希望具有最小的副作用和毒性。特别说明的是，这种体外抑制Flt-3的化合物，在体内则是携带Flt-3突变体的人类AML肿瘤生长和恶化的抑制剂。此外，这些杂环化合物中的一些还显示出具有其他类型激酶抑制剂的作用，这些激酶包括c-Abl，PDGFR，c-Kit和/或RET，它们都是已知参与了CML、胃肠间质性肿瘤，和/或甲状腺癌的发生。已发现的其他在体外被高亲和力抑制的激酶有AURKA、FGFR3、JAK2、PDGFRβ、RET和VEGFR。这样，本申请中一般的结构和特异的例子涵盖了一种新类型的激酶抑制剂各项细节，可做为“靶向抗癌”药剂，并通过限定的机制起作用，抑制特定的激酶，并因此显著的区别于现有的用于治疗粒细胞白血病和其他癌症的药物。因此，在此所述杂环化合物有助于治疗一些因不可控制的增殖引起的疾病，包括AML、CML、胃肠间质性癌、甲状腺癌和其他癌症以及其他如炎症、动脉粥样硬化等疾病。此外，因为在此所分析的化合物是具有良好的口服生物利用率的选择性的激酶抑制剂，因此可期望这些化合物具有有限的副作用，适用于治疗多种癌症，单独或者与其他的药物联合用于其他癌症的治疗。因此，本发明也涉及该化合物用于治疗实体瘤及其他疾病的用法。还描述了包含这些化合物的药物组合物，治疗疾病的方法以及它们的制备方法。

发明内容

本发明是针对特定的可获专利的取代的苯并唑衍生物，这些衍生物具有蛋白激酶(PK)抑制活性或者调节能力，因此有助于治疗PK活性异常所导致的障碍。

本发明的一方面涉及以下化学式的化合物、或者其同分异构体、代谢产物、多型变体、药物前体、或它们的盐：

其中：

“----”存在或不存在；

W为(a)或(b)

A为-CR₂₁R₂₂-、-NR₂₃-、-O-或-S-；

B为-OR₂₄、-SR₂₅、-NR₂₈R₂₉；

D和E共同或独立地为-CR₃₀-或-N-；

Ar为(c)或(d)

并且

R₁，R₂，R₃，R₁₁，R₁₂，R₂₁，R₂₂，R₂₃，R₂₄，R₂₅，R₂₈，R₂₉和R₃₀独立地或共同为：氢、烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤基、氰基、硝基、羟基、酰基、取代的酰基、酰氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基脲、芳基脲、氨基甲酸烷基酯、氨基甲酸芳基酯、杂芳基、烷氧基、取代的烷氧基、卤代烷氧基、硫代烷基、硫代卤代烷基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、或者取代的二烷基羧酰胺。

本发明的另一方面提供这些化合物的合成方法。

另一方面，本发明涉及用在此所述化合物来抑制不可控制的细胞增殖，例如各种类型的癌症和白血病，也包括对炎性疾病或动脉粥样硬化的治疗。本发明还涉及抑制不可控制的细胞增殖的一些方法，例如，一种癌症或白血病，经诊断需要此类抑制剂，对一个哺乳动物，优选一个人服用药物。本发明还提出了治疗不可控制的细胞增殖的一些方法，例如癌症和白血病，包括对确诊患有此类疾病的一个哺乳动物服用本发明的一种化合物的一种有效剂量进行治疗，也包括治疗炎性疾病的一些方法，以及对确诊患有某种炎性疾病的一种哺乳动物使用本发明的一种化合物的一种有效剂量进行治疗。

另一方面，本发明涉及药物组合物，包括用一种或多种制药上允许的载体、辅料等与在此所述的一种化合物构成的混合物。一个相关的方面涉及药盒，这包括，例如，一种关于本发明的药物组合物的一个单位剂量包装到一种适当的容器中(例如玻璃瓶)，这种包装可能任选包装成盒或其他类似的包装，用于使用前的货运或者储存。在本发明的优选实施方案中，这些药盒通常还包括一份包装插页，提供该特定化合物、它的用法以及用途的细节。

附图简要说明

图1示出化合物1的激酶抑制特性轮廓。

图-2示出化合物2、3、4和5对MV4；11人AML细胞系的杀伤。

图3示出选择性细胞杀伤。化合物1特异地杀伤AML细胞(MV4；11)而不是***(PC-3)和胰腺细胞(Bx-PC-3)。

图4示出化合物2、5和8的激酶抑制特性轮廓。

图5示出化合物2在大鼠体内口服生物利用度和药物代谢动力学。

图6示出化合物2在摘除胸腺的裸小鼠模型中抑制AML肿瘤进展情况。

图7示出化合物2在裸鼠模型中抑制已建立的的巨大AML肿瘤情况。

图8示出化合物5的选择性细胞杀伤。

图9示出化合物5在大鼠体内的口服生物药效率和药物代谢动力学。

图10示出化合物5在裸鼠模型中的有效性研究。

图11示出化合物2和化合物5在裸鼠模型中减少肿瘤生长的比较。

图12示出化合物5在裸鼠模型中对已建立的巨大肿瘤的抑制作用。

图13示出在此披露的具有化学式1(其中m是0，n是1)的一些化合物的合成途径的一种代表性方案。

具体实施方式

本发明提供了一种有助于预防、减轻或在其他方面治疗癌症的化合物，尤其是对人类和其他哺乳动物的急性粒细胞白血病、胃肠癌症(包括对Gleevec耐受的突变型)、特定的甲状腺癌。另外，已经证明本发明中的这些化合物有口服生物利用度，因为无论是单独或者与一种赋形剂一起口服服药后，在血浆中都具有很高的水平。口服生物利用度使其能口服治疗慢性疾病，因为口服具有可自我服药和减少其他方式给药产生的费用的优点。

定义

在在此描述的说明书和化学式中，对下列术语定义如下。除了这些术语之外，如有必要，将在说明书的其他地方定义了其他术语。除非在此另有特别说明，本说明书中出现的行业术语仍然具有它们公认的在本行业中的意义。

“药剂”是指一种用来达到预期治疗目的而给予的一种活性成份。

术语“烷基”是指一种包含1到12个碳的直链或支链基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基、正戊基等。术语“烯基”表示一种包含1到12个碳和碳-碳双键的直链或支链碳氢化合物基团，例如乙烯基、烯丙基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、5-庚烯基、6-庚烯基等。术语“烯基”包括直链和支链的二烯基和三烯基。术语“炔基”表示一种包含1到12个碳和一个碳-碳叁键的直链或支链碳水化合物基团，例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基等。术语“炔基”包括二炔或者三炔。

术语“取代的烷基”表示一种上述定义的包含1到12个碳的基团被一个或多个基团，但是优选一个、两个或者三个选自以下的基团所取代，包括：羟基、卤基、环烷基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、酰氧基、硝基、氰基、羧基、环氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、取代的二烷基羧酰胺、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、硫代烷基、硫代卤烷基、烷氧基、取代的烷氧基、或者卤烷氧基。当出现多于一个基团时它们可以相同或不同。

术语“取代的烯基”表示一种上述定义的包含1到12个碳的基团被一个或多个，但是优选一个、两个或者三个选自以下的基团所取代，包括：卤基、羟基、环烷基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、酰氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、取代的二烷基羧酰胺、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、硫代烷基、硫代卤烷基、烷氧基、取代的烷氧基或者卤代烷氧基。当出现多于一个基团被取代的时候，它们可以相同或不同。

术语“取代的炔基”表示一种包含1到8个上述定义的基团被一个或者多个，但是优选一个或者两个选自以下的基团所取代：卤基、羟基、环烷基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、酰氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、取代的二烷基羧酰胺、烷基磺酰、烷基亚磺酰、硫代烷基、硫代卤烷基、烷氧基、取代的烷氧基或者卤代烷氧基。

术语“环烷基”表示一个含有3到8个碳的环状烷基的部份(moiety)，在此的烷基是上述定义的，包括环丙基、环丁基、环戊基、cyclopenyl、环己基、环庚基等基团。术语“取代的环烷基”表示一种上述定义的环烷基进一步被一个或者多个下述基团取代，选自：卤基、烷基、羟基、烷氧基、取代的烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、取代的二烷基羧酰胺、氨基、单取代氨基、或者二取代氨基。当环烷基被多于一个基团取代时，它们可以相同或不同。

术语“联合治疗”是指使用至少两种不同的治疗方法来达到既定治疗效果的一种治疗方案。例如，一种联合治疗方案可以包括服用两种或以上不同化学性质的药物，如使用本发明中的一种化合物和另一种化疗药物。作为替代，一种联合治疗方案可以包括服用一种或多种本发明的药物，单独或者联合其他药物以及治疗方法，如手术、放射等。在服用两种或以上不同化学药物的情况下，众所周知其活性成分可以作为同一种或不同种化合物的部分来服用。当作为不同的化合物服用时，化合物中包括的不同活性成分可以同时或者不同时、经过相同或不同的途径、使用相同或者不同的给药方案服用，这些都取决于不同的情况和主管医师决定。同样，当一种或多种药物和诸如精神分析等一起实施时，这种(这些)药物可以在受治疗者治疗期间的之前、之中以及之后服用。相反，“单一疗法”是指一种基于服用一种有确切疗效的化合物的治疗方案，无论是作为单次剂量还是长时间多次剂量服用。

术语“环烯基”表示一个包含3到8个碳的基团，例如环丙烯基、1-环丁烯基、2-环丁烯基、1-环戊烯基、2-环戊烯基、3-环戊烯基、1-环己烯基、2-环己烯基、3-环己烯基等。术语“取代的环烯基”表示一个上述定义的环烯基进一步被一个或多个选自以下的基团所取代：卤基、烷基、羟基、烷氧基、取代的烷氧基、卤代烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷羧酰胺、取代的二烷羧酰胺、氨基、单取代氨基或者二取代氨基。当环烯基被多于一个基团取代时，它们可以相同或不同。

在此所用的术语“烷氧基”表示上述定义的一个烷基基团直接与一个氧结合，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基等。术语“取代的烷氧基”表示一个上述定义的烷氧基团被一个或多个基团，优选一个或两个下列基团取代，选自：羟基、环烷基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、酰氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、取代的二烷基羧酰胺、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、硫代烷基、硫代卤烷基、烷氧基、取代的烷氧基或者卤代烷氧基。当出现多于一个基团被取代时，它们可以相同或不同。术语“单取代氨基”表示一个氨基被选自以下的基团所取代：烷基、取代的烷基或者芳烷基，其中的这些术语和通篇中的术语意义相同。

术语“二取代氨基”表示一个氨基被两个相同或不同的下列基团取代，选自：芳香基、取代的芳香基、烷基、取代的烷基或者芳烷基，其中的这些术语和通篇定义的术语意思相同。一些实例包括二甲氨基、甲基乙基氨基、二乙氨基等。

术语“卤烷基”表示一个上述定义的烷基基团被一个或者多个卤基优选氟取代，例如三氟甲基、五氟乙基等。

术语“卤代烷氧基”表示一个上述定义的烷氧基直接与一个氧结合形成的三氟甲氧基、五氟加氧基等。术语“酰基”表示一个包含1到8个碳的基团，如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基、苯甲酰基等。术语“酰氧基”表示上述定义的一个包含1到8个碳的酰基基团直接和一个氧结合，如乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、异丁酰氧基、苯甲酰氧基。术语“芳香基”表示一个包含6到10个碳的芳香基团，包括苯基和萘基。术语“取代的芳香基”表示一个上述定义的芳香基团被一个或者多个基团取代，选自：羟基、环烷基、芳香基、取代的芳香基、杂芳基、杂环、取代的杂环、氨基、1-单取代氨基、二取代氨基、酰氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、取代的二烷基羧酰胺、烷基磺酰、烷基亚磺酰、硫代烷基、烷氧基、取代的烷氧基或者卤代烷氧基，其中这些术语在这里定义。术语“卤化”或“卤基”是指氟、氯、溴或者碘基团。

术语“硫代烷基”表示一个包含1到8个碳、直链或支链的硫代物基团。实例包括硫代甲基、乙硫醚、硫代异丙基等。术语“硫代卤烷基”表示一个硫代烷基基团被一个或多个卤基取代。实例包括三氟甲硫基、1，1-二氟硫代乙基、2，2，2-三氟硫代乙基等。

术语“烷氧羰基”是指一个羧酸的烷基酯，其中烷基与上文中的定义相同。实例包括甲酯基、乙氧羰基、异丙氧羰基等。术语“烷基氨基酰”表示一个单独的烷基基团直接与酰胺的胺结合，其中烷基与上文中的定义相同。实例包括N-甲基羧酰胺、N-乙基羧酰胺、N-异丙基羧酰胺等。术语“取代的烷基羧酰胺”表示一个单独的“取代的烷基”基团，如上文所定义的，连接到酰胺的胺上。

术语“二烷基羧酰胺”表示两个相同或者不同的烷基或者芳烷基团连接到酰胺的胺上，其中的烷基与上文中的定义相同。实例包括N，N-二甲基羧酰胺，N-甲基-N-乙基羧酰胺等。

术语取代的“二烷基羧酰胺”表示两个烷基基团连接到酰胺的胺上，这里的一个或者两个基团都是以上定义的一个“取代的烷基”。众所周知，这些基团可以相同或不同。实例有N，N-二苄基羧酰胺、N-苄基-N-甲基羧酰胺等。

术语“烷基酰胺”表示一个酰基基团连接到一个胺或者单烷基胺上，其中酰基与上文中的定义相同。“烷基胺”的实例包括一酰胺基、丙酰胺基等。

术语“芳烷基”是指一个烯基，如-CH₂-，被上文中定义的一个有取代或无取代的芳基基团取代，“芳烷基”的实例包括苄基和苯乙烯等。

在说明书和结尾处的权利要求中用到的一种化学物质的一个残基，是指在特定的化学反应中或后继的合成中或者化学产物中的合成产物的部份(moiety)，无论这种部份是否真正的从化学物质中得到。这样，在聚酯中的一个乙二醇残基表示聚酯中的一个或多个-OCH2CH2O-重复单位，无论乙二醇是否参与了聚酯的合成。同样，在一种化学化合物中的-2，4-噻唑烷二酮类残基指一个或多个-2，4-噻唑烷二酮部份(moiety)，无论这个残基是否是从-2，4-噻唑烷二酮类反应生成这种化合物中获得的。

根据本发明的一种“可获专利的”组合物、方法、机器或制造物体是指在进行分析之时，该主题满足对于专利性的所有法定要求。例如，针对新颖性、非显而易见性、等，如果后来的调查发现包含一个或多个实施方案的一个或多个权利要求不支持新颖性、非显而易见性等，该(这些)权利要求受“可获专利的”实施方案定义的限制，明确地排除不可获专利的该(那些)实施方案。而且，在此所附的这些权利要求应解释为既能提供最宽的合理范围，又要确保其有效性。此外，如果有一个或多个专利性所需的法定要求被修改，或者从本申请提交之日或授予专利之日起到所附的这些权利要求的有效性被质疑之时，评估一个具体的法定要求是否满足专利性的标准发生变化，那么该(这些)权利要求必须用以下方式作出解释：(1)保持其有效性和(2)在此情况下能提供最宽的合理范围。

“受试者”或者“患者”是指一个确实需要治疗，能受本发明中的分子影响的一个动物。能据本发明进行治疗的动物包括脊椎动物，比如牛、犬、马、猫、羊、猪，并且灵长类动物(包括人类和非人类的灵长类动物)是特别优选的例子。

这里必须要指出，在说明书和所附权利要求中用到的单数形式的“一”、“一个”和“某个”也包括其复数指示物，除非上下文另有明确的说明。因此，如当提及“一种芳香族化合物”时包括多种芳香族化合物的混合物。

组合物

本发明所披露的一些实施方案涉及方程式(1)：

其中

W是

A为-CR₂₁R₂₂-、-NR₂₃-、-O-、或-S-；

B为-OR₂₄、-SR₂₅、-NR₂₈R₂₉；

D和E共同或独立地为-CR₃₀-，或-N-；

L为-CH₂-；

Ar为化学式(c)或(d)

(c)

m为0到1；

n为1到2；

R₁，R₂，R₃，R₁₁，R₁₂，R₂₁，R₂₂，R₂₃，R₂₄，R₂₅，R₂₈，R₂₉和R₃₀独立地或者共同为氢，烷基、取代的烷基、卤烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤基、氰基、硝基、羟基、酰基、取代的酰基、酰氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基脲、芳基脲、烷基氨基甲酸酯、芳基氨基甲酸酯、杂芳基、烷氧基、取代的烷氧基、卤代烷氧基、硫代烷氧基、硫代卤基烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺或者取代的二烷基羧酰胺，或者其一个同分异构体、代谢产物、多型变体、药物前体，或者盐。本发明还包括发明中化合物的其他形式，包括药物前体形式。在在此，“药物前体”是指包含一个或者多个功能性基团的化合物，在体内能被去除或者被修饰从而在体内形成一种具有治疗作用的分子。“多型变体”是指一种具有化合物与另一种化合物相比，具有相同的化学组成(也就是说，属于同一种化学种类)只是具有不同的晶体结构。

在一些实施方案中，当W为2，4-噻唑烷二酮并且“----”存在时，化合物为一种具有以下结构分子式的亚苄基(benzilidine)化合物：

(E)

在一些实施方案中，当W为2，4-噻唑烷二酮并且“----”不存在时，化合物为一种具有以下结构分子式的苄基类化合物：

(F)

在本发明的另一个实施方案中，当W为(b)时，化合物为一种具有以下结构分子式的烷基乙缩醛：

其中R₁₁和R₁₂独立地或共同为氢，烷基、取代的烷基、卤烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤基、氰基、硝基、羟基、酰基、取代的酰基、酰氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基脲、芳基脲、烷基氨基甲酸酯、芳基氨基甲酸酯、杂芳基、烷氧基、取代的烷氧基、卤代烷氧基、硫代烷氧基、硫代卤基烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺或者取代的二烷基羧酰胺。

在另一实施方案中，A是-CR₂₁R₂₂-，-NR₂₃-，-O-，或者是-S-；B为-OR₂₄，-SR₂₅，-NR₂₈R₂₉，D和E独立地或共同为-CR₃₀-，或-N-。优选的杂二环残基可选自：

本发明的一些实施方案中，在此披露的具有化学式(1)的化合物可能存在(1)和(2)的互变异构体，这也属本发明范围之内。

在本发明的一些实施方案中，在此披露的包含2，4-噻唑烷二酮的化合物可能存在(XI)，((XII)和(XIII)的互变异构体，这也属本发明范围之内。

当“----”存在时，在此所示的包含的2，4-噻唑烷二酮化合物的Z和E构型都属本发明范围之内。Z和E构型化学式都可能分别具有下列结构：

在在此披露的化合物可能包括这些化合物的盐类，例如正离子盐。可能与本发明化合物结合形成药用盐的阳离子包括碱金属，例如钠和钾；碱土金属类，例如钙；三价金属类，例如铝。对于选择阳离子的唯一限制条件是不能增加毒性。因为化合物具有上述互变异构现象，单价、二价或三价盐可能依赖于相应的碱金属。而且，在此所示的一种或多种化合物可能包括在该化合物内与氮以及盐酸、羧酸等酸反应生成的盐，例如胺、苯胺、取代的苯胺、氮苯基等。因此，所有可能的与互变异构体相关的盐类以及与氮和酸反应生成的一种盐类都属于本发明范围之内。

本发明提供了，但不是限于，在各个实例中以及以下提到的这些特定的化合物，以及它们在药学上能允许的一种盐：

这里

“-----”可有可无，m为0，n为1

5-[6-(2-乙胺基-7-异丙氧基-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑-2，4-二酮

5-[6-(2-乙胺基-7-异丙氧基-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-赛唑烷-2，4-二酮

5-[6-(2-氨基-7-异丙氧基-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑烷-2，4-二酮

[5-(5-Diethoxymethyl-pyridin-2-基)-7-异丙氧基-苯并唑-2-基]-乙基-胺

5-[6-(2-二乙胺基-7-异丙氧基-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑烷-2，4-二酮

5-[6-(7-异丙氧基-2-丙胺基-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑烷-2，4-二酮

5-[6-(7-异丙氧基-2-丙胺基-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑-2，4-二酮

5-[6-(2-乙胺基-7-异丙氧基-1氢-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑-2，4-二酮

5-[6-(7-异丙氧基-2-异丙胺基-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑-2，4-二酮

5-[6-(7-异丙氧基-2-异丙胺基-1氢-苯并唑-5-基)-嘧啶-3-基亚甲基]-噻唑-2，4-二酮

制作组合物

图13示出生产在此披露的这些化合物的合成路径的一种代表性方案。在合成中，一种化学式为(XX)的硼酸，R15＝H，可以和包含一个羰基的芳基卤化物耦合产生联芳(XXIV)。诸如上述联芳(XXIV)生成的耦合反应可能用硼酯类诱导，例如R15位与硼结合形成一种2，3-二甲-2，3-定二醇硼酯(硼酯的结构：Ishiyama T.et al.J.Org.Chem.1995，60，7508-7510，Ishiyama T.et al.Tetrahedron Letters1997，38，3447-3450；coupling pinacol esters：Firooznia，F.etal.Tetrahedron Letters 1999，40，213-216，Manickam，G.et al.Synthesis 2000，442-446；在此四篇引文通过引证结合在此)。联芳(XXI)可以再经2，4噻唑烷二酮类凝缩形成苄川(XXII)。

本发明的一些实施方案中提供了一种化学式为(XXII)的化合物的制备过程：

其中

A为-CR₂₁R₂₂-，-NR₂₃-，-O-，或者是-S-；

B为-OR₂₄，-SR₂₅，-NR₂₈R₂₉；

D和E分别或者一起为-CR₃₀-，或者是-N-；

Ar是化学式(c)或者(d)

R₁，R₂，R₃，R₂₁，R₂₃，R₂₄，R₂₅，R₂₈，R₂₉和R₃₀独立地或者共同为氢、烷基、取代的烷基、卤烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤基、氰基、硝基、羟基、酰基、取代的酰基、酰氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基脲、芳基脲、烷基氨基甲酸酯、芳基氨基甲酸酯、杂芳基、烷氧基、取代的烷氧基、卤代烷氧基、硫代烷氧基、硫代卤基烷氧基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺或者取代的二烷基羧酰胺。

包括下列步骤：

1)用一个第二位的芳基残基与一个第一位的芳基残基连接生成一个包含联芳羰基的化合物；其中第一个芳基残基包含取代的或非取代的具有下列结构的残基：

并且其中第二个芳基残基具有一个具有下列结构的羰基基团：

并且其中包含联芳羰基的化合物具有下述(XXIV)结构：

2)基于(XXIV)的硝化作用，缩合产物的结构式为(XXV)：

3)在乙二醇对羰基基团的保护作用下，被保护的产物结构式为(XXVI)：

4)在活性炭上的钯存在的保护作用下，硝基基团被甲酸铵还原成氨基，生成(XXVII)结构：

5)在溴化氰的环化作用下，产物具有(XXVIII)的结构式：

其中的R₁和R₂是氢。如果R₁为一个烷基基团，上述产物(XXVIII)可在NaH存在时被卤代烷进行烷化。

5)水解作用后，产物具有(XXI)的化学式：

6)在2，4-噻唑烷二酮存在时缩合包含化合物(XXI)的联芳，产物具有(XXII)的结构式：

在本发明的另一实施方案中提供了进一步的步骤还原具有化学式(XXII)的苯亚甲基来生成具有化学式(XXIII)的苄基化合物：

一些适用于还原苯亚甲基化合物来生成苄基化合物的方法(包括氢化作用、用金属氢化物反应物或者溶解金属作用)都是本领域普通技术人员所知的，这些方法可以应用于本发明的方法中。

在此所用到的不同有机基团的转换也可能用其他不同于上述的方法来实现。有关其他用于合成在此所示的化合物的合成步骤，其参考文献可以在文章March，J.Advanced Organic Chemistry，4thEdition，Weiley-Interscience(1992)或Larock，R.C，Comprehensive Organic Transformations，A Guide to FunctionalGroup Preparations，VCH Publishers，Inc.(1989)中找到，二者均通过引用结合在此。

本发明的一个实施方案涉及制作具有化学式I的化合物的过程，其中包括耦合两个芳香环生成一个联芳，其中一个芳基上带有一个羰基的部份(moiety)，优选一个乙醛。所生成的联芳产物可以接着在活性亚甲基化合物，如2，4-噻唑烷二酮等作用下被缩合，生成一种存在“----”的化学式(1)的苯亚甲基化合物。在一任选步骤中，苯亚甲基化合物可能被还原生成一种不存在“----”的化学式(1)的苄基化合物。

用一种芳基硼酸或酯以及卤代芳基(例如碘代、溴代或氯代)、三氟甲基黄酸或氟硼酸重氮盐的作用下可以诱导耦合两个芳基环；这些分别在Suzuki，Pure & Applied Chem.66：213-222(1994)，Miyaura and Suzuki，Chem.Rev.95：2457-2483(1995)，Watanabe，Miyaura and Suzuki，Syn-lett.207-210(1992)，Littke and Fu.Angew.Chem.Int.Ed.37：3387-3388(1998)，Indolese，Tetrahedron Letters，38：3513-3516(1997)，Firooznia，et.al.TetrahedronLetters 40：213-216(1999)，and Dorses，et.al.Butt.Soc.Chim.F7：133：1095-1102(1996)有详述，全部通过引用结合在此。

根据此耦合反应，可使用像(X)和(XX)这样的前体：

其中

(X)或者为一个三氟甲基磺酸盐、一个卤化物(如如碘代、溴代、氯代)，或者为一个氟硼酸重氮盐，或者为氢，并且R15为烷基或者氢。作为替代，应理解，这些耦合基团可以互换。上述提到的这些前体也可以很容易地被本领域普通技术人员用其他的方法制备出来。例如，硼酯可以用一种卤化芳基转化成为相应的芳基锂，然后用三烃基硼酸盐处理来制备。优选地，硼酯被水解为硼酸。此耦合反应还可以用一个卤化芳基锌和一个卤化芳基或三氟甲基磺酸来诱导。或者，此耦合反应也可以用三烃基锡衍生物和一个卤化芳基或三氟甲基磺酸来实现。这些耦合方法见Stanforth，Tetrahedron 6554：263-303(1998)一文综述，通过引用结合在此。一般而言，选择使用哪种特异的耦合反应，一般是根据现有的前体物、化学选择性、区域选择性和立体构象考虑。

使用合适的活性亚甲基化合物，例如2，4-噻唑烷二酮进行的联芳羰基包括其衍生物(如，图13，化合物(XXI))的缩合反应，也可以被本领域普通技术人员用其他的方法完成。例如，耦合反应的联芳羰基产物可以在一种活性亚甲基化合物作用下缩合产生一种化学式为(I)的苯亚基化合物(也就是当“----”存在时)，如Tietze and Beifuss，Compre-hensive Organic Synthesis(Pergamon Press)，2：341-394，(1991)一文所述，通过引用结合在此。本领域普通技术人员都知道，具有羟基基团那些范围的中间产物可以在包含衍生物的联芳羰基和一种活性亚甲基化合物的缩合反应中产生，如下所示。

这些中间产物包含的羟基基团在缩合过程中经常被除掉(如水)，生成预期的苯亚甲基化合物。然而，反应的条件可以经修改从而用于分离或进一步处理包含中间产物的羟基，这一类的实施方案也属于本发明范围之内。上述所示反应描述了为化合物(XXI)和一种活性亚甲基化合物反应的中间产物缩合反应的生成。缩合反应所需的有效的催化剂可以选自铵，伯胺、仲胺及叔胺，无论是游离碱还是包含机酸的胺盐，如乙酸。催化剂的实例包括四氢化砒啶，六氢砒啶，砒啶，二乙胺以及相关的乙酸盐。无机催化剂也可以用于该缩合反应。无机的催化剂包括，但是不仅限于，四氯化钛和一种叔碱，如砒啶；在惰性溶剂中的氧化镁和氧化锌。这种类型的缩合反应具有非常强的溶剂依赖性，众所周知需要用特定的催化剂进行例行试验来鉴定最适溶剂，较好的溶剂包括乙醇、四氢呋喃、二唑或甲苯，或其相关的混合物。本发明中使用的为2，4-噻唑烷二酮。所合成的苯亚甲基(如，图13，化合物(XXII))，如希望，可还原为一种不含“----”化学式为(I)的化合物。

化合物的利用

在许多生物试验过程中，包括体内试验和体外试验，已经发现本发明的化合物在人类相关疾病或有代表性的人类疾病试验研究过程中是有效的。例如，能够抑制Flt-3激酶的化合物可以杀伤白血病癌细胞。在被检测的大约180种不同的激酶包括突Flt3和KIT变型激酶中，发现化合物1能够特异性的抑制激酶活性。按照Ambit激酶筛选试验(M.A.Fabian et al.Nature Biotechnology，23 pp.329-336，March 2005)检测发现所有的激酶中仅有六种激酶能够被抑制，其抑制常数(或结合常数Kd)在次微摩尔范围(见图1)。这些试验结果表明在此所述化学结构能够抑制一系列蛋白激酶，而且同时具有选择性。通过检测化合物对MV4；11细胞增殖效率的影响来观察其选择性抑制Flt3的生物学效应。将这些人类AML细胞(表达Flt-3突变体)平分到几个96孔板中，每个具有不同浓度的化合物1，2，3或4。使用3-4，5-二甲基噻唑-2，5-二苯四唑(MTT)实验测定细胞增殖效应，观察化合物对人类白血病癌细胞系MV4；11细胞增殖的抑制效应和细胞杀伤效应。化合物1，2，3和4以剂量依赖的方式能够显著抑制MV4；11细胞的增殖和杀伤MV4；11细胞(见图2)。图3展示的特异性细胞杀伤结果表明化合物1可以特异的杀伤白血病癌细胞，而对于***癌细胞(PC-3)和胰腺癌细胞(Bx-PC-3)没有选择性杀伤效应。综合这些数据考虑，说明化合物1可以特异的抑制Flt-3，从而产生对Flt-3突变的MV4；11细胞的细胞杀伤效应。化合物2在体外能选择性抑制肿瘤细胞的活性，并且和化合物1相比具有更加特异的激酶抑制效应。图4所示结果表明，按照Ambit激酶筛选试验检测了大约180种不同的激酶时，在浓度为微摩尔或接近微摩尔的化合物2仅能抑制三种不同的激酶以及它们的一些突变体。为检测化合物的生物利用度，给予三只大鼠单口服剂量的10mg/kg的化合物2，在不同的时间点取血液标本，检测其血药浓度。单口服剂量给予化合物2后，两个小时内血药浓度超过2μM，并且在十小时内可达到3μM的最大浓度值(C_max)，而且高峰可以持续超过24小时(见图5)。因为高血药水平能够维持几个小时以及很好的口服生物利用度，建议化合物2应该一天一次口服给药。

利用皮下异种移植瘤模型评价化合物2在体内的效应。摘除胸腺的裸鼠皮下注射表达持续激活的Flt-3的MV4；11细胞，是已经被确定的白血病模型(O′Farrell A-M，Abrams TJ，Yuen HA，Ngail TJ，Louie SG，Yee KWH，Wong LM，Hong W，Lee LB，Town A，Smolich BD，Manning WC，Murray LJ，Heinrich MC and Cherrington JM(2003)SUl 1248 is a novel Flt-3 tyrosine kinase inhibitor with potentactivity in vitro and in vivo.Blood 101：3597-3605)。裸鼠皮下注射MV4；11细胞后几周内，这些小鼠肿大的脾脏内充满了白血病癌细胞，小鼠通常生病或死亡。在指数生长期收获MV4；11细胞，即一种表达Flt-3内部串联重复突变序列的人类白血病细胞系，然后用基质胶(BD Biosciences，Bedford，MA)重悬。0天时给摘除胸腺的裸鼠近后肢侧翼处注射5×10⁶个MV4；11细胞。通过两种不同的试验来评价化合物2每天口服给药治疗的效果。

防止裸鼠急性粒白血病肿瘤的发展

裸鼠皮下注射MV4；11细胞。在肿瘤起始两周后而且动物体内已经长出肿瘤时，一组小鼠口服给予30mg/kg化合物2，一天一次，持续8和14天，第二组给予安慰剂处理。在治疗的过程中，每周两次用游标卡尺测量肿瘤的体积，并且体积计算为椭圆体的体积(Tomayko MM5Reynolds CP(1989)Determination of subcutaneous tumor size inathymic nude mice.Cancer Chemother Pharmacol 24(3)：148-54)，椭圆体的体积由异种移植的皮下肿瘤的大小决定。柱状图代表每组五只动物。试验发现一天一次口服给药30mg/kg化合物2可以显著抑制人白血病癌细胞MV4；11移植肿瘤的生长(见图6)。再处理一周后，药物处理组和对照组的差异越来越明显。图6显示将药物处理8和14天的结果绘制成图。总之，化合物2能够显著抑制肿瘤的生长。并且到第24天试验结束时仍有同样的效应。

对已建立的巨大肿瘤的治疗

在另一系列的研究中，裸鼠皮下注射约500万MV4；11细胞。三周后在肿瘤大小约为100mm³后，将小鼠分为两组(每组6只)。一组口服给予50mg/kg化合物2，另一组给予安慰剂，一天一次，持续两周。然后肿瘤可以按照肿瘤的大小分为检测不到/消退，静止或持续增大几组。安慰剂处理的一组小鼠的肿瘤在两周之内长大到1000mm³，而用化合物2(50mg/kg)处理过的小鼠有66％其肿瘤大小有变化。这些小鼠中有50％显示出其肿瘤为静止态，而剩下的50％的小鼠肿瘤完全消除(见图7)。

化合物5可以选择性杀伤MV4；11白血病癌细胞，而对***癌和胰腺癌细胞没有选择性杀伤效应。对于***癌细胞和胰腺癌细胞来说，它们的增殖不需要Flt-3(见图8)。另外，在激酶抑制筛选试验中，化合物5可以选择性的抑制Flt-3，而且可以有效抑制所有检测的Flt-3突变体。化合物5在次微摩尔浓度水平上也可以抑制RET激酶。众所周知，RET可以促进甲状腺癌细胞的增殖(见图4)。在大鼠体内，化合物5具有良好的药物代谢动力学特性：单剂量口服给予12mg/Kg化合物5，两小时内血药浓度超过14μM，并且高峰可以持续达15小时(见图9)。在裸鼠模型中，一天两次口服15mg/Kg化合物5，能够抑制人类白血病移植肿瘤的生长(见图10)。在图11中，通过测量裸鼠模型个体肿瘤体积来比较化合物2和化合物5与安慰剂的治疗效率。每组5-8只动物，给予安慰剂或化合物2(30mg/kg一天一次)或化合物5(15mg/kg一天两次)处理，持续给药10天。两种化合物和安慰剂相比较都能减弱肿瘤的生长。另外，化合物5与化合物2相比能明显减缓肿瘤的生长(见图11)。对已有大型白血病肿瘤的裸鼠给予化合物5，50mg/Kg，处理能显著抑制肿瘤的生长(见图12)。

本发明的另一方面涉及在此所述化合物的使用方法。这些化合物既可以单独使用也可以几种同时使用，药物组合物可以被用来治疗哺乳动物疾病，尤其在人类发生的疾病。可以通过多种途径使用在此所述化合物以及包含它们的混合物，例如，口服、肠道给药、肠外给药、局部给药、鼻吸入、***内给药、舌下或吸入给药，用于治疗白血病和其他癌症包括AML、慢性粒细胞白血病和实性肿瘤。全面的本领域已知的给药途径和剂量可以在，例如medicinal chemistry，volume S，Hanscb，C.Pergamon Press，1990中找到，通过引用将其结合在此。在此所述的这些化合物也可以作为不可控制性增殖的疾病调节剂。下面是一些具有代表性，但不限于此类的肿瘤：淋巴瘤，霍奇金病，粒细胞白血病，膀胱癌，脑肿瘤，头颈部癌，肾脏癌，肺癌，小细胞肺癌及非小细胞肺癌，骨髓瘤，神经胶质母细胞瘤，卵巢癌，胰腺癌，***癌，皮肤癌，肝癌，黑色素瘤，大肠癌，子***，乳癌，及上皮癌。

虽然在此所述化合物可以作为纯化学品给药，但是优选以药用混合物的活性组分给药。因此，本发明的另一方面应涉及本发明的一种或多种化合物与一种或一种以上药学上可允许的相关盐结合，而不再与更多地药学上允许的相关载体结合，以及任选地与其他治疗的和/或预防性的成分的使用。该(这些)载体在一定意义上必须和其他组成物兼容并对相关服用者没有太大危害。

药物混合物包括那些适合口服、肠道给药、肠外给药(包括肌注、皮下和静脉注射)、局部给药、鼻吸入、***内给药、舌下或吸入给药的组成物。该药物组合物在合适的情况下，可能会以更为方便的独立剂量单位形式或者以制药行业内通用的其他方法制备。这些方法包括把有活性的化合物与液体载体、固体基质、半固体载体、微细固体载体或结合体结合到一起，然后如需要，可将产品塑为和药物配送***相匹配的形态。适合口服给药途径的药物组合物可以做成独立的剂量单位，如硬软胶囊，扁胶囊或片剂，每片包含预先定量的活性成分；也可以做成粉末或颗粒；或者做成一种溶液，悬胶液或乳液。活性成分也可以做成丸药、药糖剂或糊剂。口服的片剂和胶囊有常规的赋形剂，如结合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或湿剂。片剂可根据文献报道的方法加上外衣，例如，肠道包衣。

口服液制剂可做成如水性或油性悬浮液、溶液、乳化剂、糖浆或酏剂或者是一种干燥的产品，用时与水或其他合适的载体一起服用。这种液体制剂可包含常规的添加物，如悬浮剂、乳化剂、非液体载体(包括可食用油)，或一种或多种防腐剂。

该化合物也可以配制成用于肠外给药(例如，注射，间断注入或持续滴注)的剂型，也可以制备成单位剂量形式，置于安瓿、预填充注射器、小剂量输液容器或多剂量容器内，并添加防腐剂。组合物可以采用的形式为，如油性或水性载体的悬浮液、溶液或乳剂，也可包括成型剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分也可以粉末形式存在，粉末通过对无菌固体的无菌分离或溶液蒸馏干燥获得，并与合适的载体结合，例如粉末在用之前先溶于无菌无热源的水。如果化合物是经接触皮肤使用的，应该将化合物做成软膏、乳膏或洗剂，或者是做成包含活性成分的贴剂。适合的透皮给药***已经有文献报道，如Fisher等人(U.S.Pat.No.4,788,603，通过引用结合在在此)或Bawas et al.(U.S.Pat.Nos.4,931,279，4,668,504以及4,713,224，通过引用结合在在此)。软膏和乳膏，例如可以与水性或油性基质一起增加或适当增厚和/或胶凝剂成型。洗剂可以与水性或油性基质一起还可包括一种或一种以上的乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂成型。活性成分也可以通过电离子透入法给药，文献有如U.S.Pat.Nos.4,140,122，或4,383,529，4,051,842，通过引用结合在在此。适合口服局部治疗的药物剂型包括单位剂量形式如包含活性成分的锭剂通常与蔗糖和***胶或西黄芪树胶等有香味的基质结合一起成形；包含活性成分的锭剂一般以惰性基质为载体，如明胶和甘油或者是蔗糖和***胶；包含活性成分的粘膜黏着胶和漱口剂类可以用合适的液体载体。如果需要的话，上面所描述的合剂可被制备为对所用活性成分维持释放的形式，例如，通过和具有亲水性聚合物基质结合，又如，与天然凝胶，合成的聚合物凝胶或混合物结合。本发明的药物组合物也可能包含其他佐剂如调味剂，色素，抗微生物剂或防腐剂。

在发明的这个和其他方面的优选实施例中，媒介物是其组成的一部分，至少包括一种载体和一定数量的这种化合物足以达到预期的治疗效果，其中化合物至少要有一个亚群的人试用过并达到预期的治疗效果(如，特定药物或其他活性试剂的“有效剂量”，视情况而定)。在此，“治疗有效剂量”指需要这种药物治疗的一个对象摄入能够达到有效治疗效果时的一定的量。在癌症治疗过程中，“有效治疗剂量”指对于被评估的人而言摄入的剂量能够产生可观的效应。鉴定一种含有本发明的混合物的药物有效剂量，可以由本领域普通技术人员轻易完成。

治疗过程中所需要使用的化合物的剂量、或者活性盐或其衍生物的剂量，不仅和选择的特定的盐有关，而且与药物摄入途径、治疗条件、年龄和病人的状态有关，并且最后由监管医师或临床医生决定。一般而言，本领域普通技术人员可以根据在模式生物如裸鼠上获得的体内试验数据推断出另一种哺乳动物如人的可能数据。这些推断不仅是根据两种生物的体重来推断也考虑到它们的代谢不同、药物吸收和给药途径的不同来做出推断。考虑到诸多此类因素，合适的剂量通常是介于约0.5--100mg/kg/天，1--约75mg/kg/天，3--50mg/Kg/天或6--90mg/kg/天。化合物以单位剂量形式方便地给药，例如，有0.5--5000mg，5--750mg，更方便的是每单位剂量形式活性成分10--500mg。

本领域普通技术人员将认识到这些典型范围外的剂量和剂型可以被检测，在适当的时候，也可以用于本发明的方法。在一些具体的实施方案中，摄入的药物活性成分达到的血药浓度高峰约为从0.5--75μM，从1--50μM，或从2--30μM。可以通过静脉注射0.05--5％的活性成分溶液，也可以用盐水滴注，或者口服含活性成分约0.5--500mg的丸药。可以通过持续注射输注药物0.01--5.0mg/kg/小时或间断性输入约0.4--15mg/kg的活性成分达到预期的血药水平。预期剂量可以通过两种方式达到，第一种是单剂量一次给药，另一种是分为几个剂量以适当的间隔给药，如一天给药两次，三次，四次或更多次。分剂量本身有可能进一步被划分，例如通过不同的途径给药，如从吸入器分多次吸入或者将药水滴入眼睛。

术语“治疗”或“施治”是指针对一种疾病或障碍的任何一种治疗方法，包括预防或防治疾病或障碍(即：使临床症状不再发展)；抑制疾病或障碍(例如抑制临床症状的发展和/或减轻疾病或病症，减轻临床症状)。可以理解，因为最终的诱因或此类因素未知或者是潜伏性的，所以不是总可能很好的区分“预防”和“抑制”一种疾病或障碍。相应地，术语“防护”应被理解为组成一种形式的“治疗”来实现“预防”和“抑制”。“保护”一词因此也包括了“预防”。

实例

以下的制品和实例用于使本领域普通技术人员更加清楚地认识和实践本发明。它们不应被视为限制了本发明的范围，而只是作为它的相关的说明和代表。

实例一：代表性化合物及它们的合成

化合物1

化合物2

化合物3

化合物4

化合物5

化合物6

化合物7

化合物8

化合物2的合成

对6-(2-乙氨基-7-异丙氧基-苯唑-5-基)-嘧啶-3-甲醛(0.385g，1.183mmol)在2ml甲苯中的溶液中加入哌啶(23μl，0.237mmol)和乙酸(23μl，0.237mmol，加入噻唑烷-2，4-二酮(0.139g，1.183mmol)在2ml甲苯中的溶液。反应混合物加热至达到回流四小时。析出的产物经过滤，干燥后产出0.395g 5-[6-(2-乙氨基-7-异丙氧基-苯唑-5-基)-嘧啶-3-亚甲基]-噻唑烷-2，4-二酮黄色固体(78.7％产出率)；HPLC分析检测纯度为99.59％(355nm)；99.40％(225nm)；mp 280℃-281℃。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)：20t，J＝7.26Hz，3H)；1.34(d，J＝6.04Hz，6H)；3.35(m，2H)；4.87(m，1H)；7.54(d，J＝1.24Hz，1H)；7.64(d，J＝1.17Hz，1H)；7.86(s，1H)；7.97(dd，J1＝2.39Hz，J2＝8.52Hz，1H)；8.03(t，J＝5.63Hz，1H)；8.14(d，J＝8.50Hz，1H)；8.88(d，J＝2.30Hz，1H)；12.7(br s，1H)。

该中间产物6-(2-乙氨基-7-异丙氧基-苯唑-5-基)-嘧啶-3-甲醛制备如下：

6-(2-氨基-7-异丙氧基-苯唑-5-基)-嘧啶-3-甲醛(0.860g，2.893mmol)和碳酸钾(0.960g，6.942mmol)在20ml DMF中的混合物在室温下搅拌一个半小时。然后加入碘乙烷(278μl，3.472mmol)。反应在室温下搅拌三天。用20ml醋酸乙酯稀释该溶液，先后用水(2×30ml)和盐水(30ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，然后过滤和蒸发。残留物通过硅凝胶进行色谱分析处理(洗脱液：100％醋酸乙酯)产出0.385g 6-2-乙氨基-7-异丙氧基-苯唑-5-基-嘧啶-3-甲醛黄色固体(41％产出率)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)：1.98(t，J＝7.31Hz，3H)；1.35(d，J＝6.09Hz，6H)；3.36(m，2H)；4.88(m，1H)；7.57(d，J＝1.35Hz，1H)；7.69(d，J＝1.4Hz，1H)；8.01(t，J＝5.6Hz，1H)；8.21(d，J＝8.35Hz，1H)；8.26(dd，J1＝2.2Hz，J2＝8.35Hz，1H)；9.12(d，J＝1.65Hz，1H)；10.12(s，1H)。

该中间产物6-(2-氨基-7-异丙氧基-苯唑-5-基)-嘧啶-3-甲醛制备如下：

5-(5-二乙氧甲基-嘧啶-2-基)-7-异丙氧基-苯唑-2-羟胺(1.00g，2.69mmol)与0.5N盐酸的混合物进行搅拌并升温到80℃维持30分钟。制备的产物用水过滤和洗涤。滤出液用饱和碳酸氢钠调节pH至7，并用醋酸乙酯(3×15ml)提取。有机相依次用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发。残留物和过滤后产物结合在一起，干燥后产出0.860g 6-2-氨基-7-异丙氧基-苯唑-5-基-嘧啶-3-甲醛(定量产量)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)：1.35(d，J＝6.00Hz，6H)；4.90(m，1H)；7.59(d，J＝1.44Hz，1H)；7.66(d，J＝1.5Hz，1H)；7.78(br s，2H)；8.25(m，2H)；9.12(m，1H)；10.12(s，1H)。

中间产物5-(5-二乙氧甲基-嘧啶-2-基)-7-异丙氧基-苯唑-2-羟胺的制备如下：

在2-氨基-4-(5-[1，3]二氧戊烷-2-基-嘧啶-2-基)-6-异丙氧基-酚(1.273g，4.02mmol)于无水乙醇(60ml)中的混合物中逐滴加入5M溴化氰的乙腈溶液(2.41ml，12.07mmol)。搅拌生成的混合物并在氩气中回流1.5小时。完成的反应混合物在减压下浓缩，并用醋酸乙酯(50ml)和水(20ml)稀释。水相可以用醋酸乙酯(2×20ml)分离和提取。用饱和碳酸氢钠调节水相的pH值约为7，并用醋酸乙酯(15ml)提取。有机相依次用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：醋酸乙酯/己烷，4∶1)得到1.118g 5-(5-二乙氧甲基-嘧啶-2-基)-7-异丙氧基-苯唑-2-羟胺(81％产出率)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)：15(t，J＝7.01Hz，6H)；1.31(d，J＝6.03，Hz，6H)；3.50(m，2H)；3.57(m，2H)；4.82(m，1H)；5.58(s，1H)；7.41(m，1H)；7.43(s，2H)；7.76(dd，J1＝2.20Hz，J2＝8.30Hz，1H)；7.93(m，1H)；8.59(d，J＝2.18Hz，1H)。

中间产物2-氨基-4-(5-[1，3]二氧戊烷-2-基-嘧啶-2-基)-6-异丙氧基-酚的制备如下：

对4-(5-[1，3]二氧戊烷-2-基-嘧啶-2-基)-2-异丙氧基-6-硝基-酚(1.596g，4.96mmol)于无水乙醇(80ml)中的混合物中加入甲酸铵(1.45g，23.0mmol)，随后是加入在活性炭(0.23g)上的10％重量的钯。搅拌所生成的混合物并在氩气下使之回流1.25小时。将反应后混和物降温至23℃并滤过硅粒。滤过物在减压作用下浓缩并依次用醋酸乙酯(150ml)和水(50ml)洗涤。水相可以用醋酸乙酯(3×15ml)分离和提取。有机相依次用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：醋酸乙酯/己烷，3∶2)得到1.273g 2-氨基-4-(5-[1，3]二氧戊烷-2-基-嘧啶-2-基)-6-异丙氧基-酚(87％产出率)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)：1.47(d，J＝6.12Hz，6H)；4.80(m，1H)；7.91(d，J＝8.3Hz，1H)；8.09(d，J＝2.0Hz，1H)；8.25(dd，J1＝2.05Hz，J2＝8.3Hz，1H)；8.40(d，J＝2.1Hz，1H)；9.11(d，J＝1.90Hz，1H)；10.08(s，1H)；10.86(s，1H)。

中间产物4-(5-[1，3]二氧戊烷-2-基-嘧啶-2-基)-2-异丙氧基-6-硝基-酚的制备如下：

对6-(4-羟基-3-异丙氧基-5-硝基-苯)-嘧啶-3-甲醛(1.507g，4.99mmol)于无水甲苯(30ml)中的混合物依次加入乙二醇(5.6ml，99.7mmol)和甲苯磺酸一水合物(57mg，0.3mmol)。然后搅拌所生成的混合物并在氩气下用迪安-斯达克分水器使之回流5小时。将完成的反应混合物降温到23℃并用10％碳酸钾溶液调节其pH值约为7，然后依次用醋酸乙酯(30ml)和水(20ml)稀释。水相可以用醋酸乙酯(3×15ml)分离和提取。有机相依次用水(30ml)和盐水(30ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：醋酸乙酯/己烷，3∶7)得到1.596g 4-(5-[1，3]二氧戊烷-2-基-嘧啶-2-基)-2-异丙氧基-6-硝基-酚(92％产出率)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)：1.41(d，J＝6.04Hz，6H)；4.79(m，1H)；6.15(br s，1H)；7.02(d，J＝8.35Hz，1H)；7.55(dd，J1＝2.0Hz，J2＝8.35Hz，1H)；7.79(m，2H)；8.16(dd，J1＝2.10Hz，J2＝8.35Hz，1H)；9.04(d，J＝2.15Hz，1H)；10.08(s，1H)。

中间产物6-(4-羟基-3-异丙氧基-5-硝基-苯基)-嘧啶-3-甲醛的制备如下：

对6-(4-羟基-3-异丙氧基-苯基)-嘧啶-3-甲醛(2.864g，11.13mmol)于三氟乙酸(30ml)中的混合物中在0℃下加入硝酸钾(1.18g，11.69mmol)。然后在氩气环境0℃下将所生成的混合物搅拌45分钟。将完成的反应混合物倒在冰上并搅拌三小时。用醋酸乙酯溶剂(30ml)提取溶液。将水相用固体碳酸氢钠中和至pH值约为7，并再次用醋酸乙酯提取。有机相依次用水(30ml)和盐水(30ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：醋酸乙酯/己烷，2∶3)得到2.621g 6-4-羟基-3-异丙氧基-5-硝基-酚-嘧啶-3-甲醛(78％产出率)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)：1.47(d，J＝6.12Hz，6H)；4.80(m，1H)；7.91(d，J＝8.3Hz，1H)；8.09(d，J＝2.0Hz，1H)；8.25(dd，J1＝2.05Hz，J2＝8.3Hz，1H)；8.40(d，J＝2.1Hz，1H)；9.11(d，J＝1.90Hz，1H)；10.08(s，1H)；10.86(s，1H)。

中间产物6-4-羟基-3-异丙氧基-苯基-嘧啶-3-甲醛的制备如下：

对6-[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-3-异丙氧基-苯基]-嘧啶-3-甲醛(3.0g，8.07mmol)溶解于无水四氢呋喃(60ml)中的混合物逐滴加入氟化四丁铵(1.0M溶于无水四氢呋喃，9.69ml，9.69mmol)。然后在氩气环境23℃下将所生成的混合物搅拌1.5小时，然后依次用醋酸乙酯(30ml)和水(30ml)稀释该溶液。水相可以用醋酸乙酯(2×20ml)分离和提取。合并的有机相依次用水(15ml)，0.1N盐酸(22ml)和盐水(15ml)洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，蒸发。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：醋酸乙酯/己烷，1∶4)得到1.90g 6-4-羟基-3-异丙氧基-苯基-嘧啶-3-甲醛(91％产出率)。¹H NMR(500MHz；DMSO-d₆)：1.41(d，J＝6.04Hz，6H)；4.79(m，1H)；6.15(br s，1H)；7.02(d，J＝8.35Hz，1H)；7.55(dd，J1＝2.0Hz，J2＝8.35Hz，1H)；7.79(m，2H)；8.16(dd，J1＝2.10Hz，J2＝8.35Hz，1H)；9.04(d，J＝2.15Hz，1H)；10.08(s，1H)。

中间产物6-[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-3-异丙氧基-苯基]-嘧啶-3-甲醛的制备如下：

将6-溴基-嘧啶-3-甲醛(4.70g，25.2mmol)、[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-3-异丙氧基-苯基]-硼酸(11.72g，37.80mmol)和碳酸钾(6.97g，50.4mmol)于甲苯(100ml)、乙醇(17ml)和水(15ml)中的混合物在室温下用氩气进行脱气20分钟。加入四(三苯基膦)钯(0)(1.46g，1.26mmol)，然后使混合物在氩气下达到回流并在氩气搅拌16小时。将混合物溶液冷却到室温，用醋酸乙酯(75ml)稀释溶液，然后依次用水(40ml)和盐水(40ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：醋酸乙酯/己烷，1∶4)得到11.403g的6-[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-3-异丙氧基-苯基]-嘧啶-3-甲醛(95％产出率)。

中间产物[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-3-异丙氧基-苯基]-硼酸的制备如下：

将在己烷(0.33mol)中的80ml的2.5M的正丁基锂放入顶部有空气驱动搅拌器的2升三颈圆底瓶中，并将溶液置于干冰丙酮浴冷却至-78℃。在氩气下-78℃的此溶液中逐滴加入包含(4-溴基-2-异丙氧基-苯氧基)-叔丁基-二甲基-甲硅烷(76g，0.22mol)的四氢呋喃溶液(60ml)。在0℃下将反应混合物溶液搅拌1小时，然后逐滴加入硼酸三异丙酯(152ml，0.660mol)。0℃下搅拌反应混合物溶液2小时。反应混合物中缓慢加入饱和水溶液氯化铵(80ml)。用醋酸乙酯溶剂(200ml)提取淬火的混合物溶液。有机层依次用水(150ml)和盐水(150ml)洗涤，然后经无水硫酸镁干燥。过滤掉硫酸镁后，蒸发滤液。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：醋酸乙酯/己烷，5∶95)得到38.5g的[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-3-异丙氧基-苯基]-硼酸(56％产出率)。

中间产物(4-溴基-2-异丙氧基-苯氧基)-叔丁基-二甲基-甲硅烷的制备如下：

将叔丁基-二甲基氯化甲硅烷(21.4g，0.142mol)、4-氮-二甲胺嘧啶(0.461g，0.004mol)和三乙胺(19.8ml，0.142mol)加入到包含4-溴-2-异丙氧基-苯酚(23.5g，0.102mol)的160ml二甲基甲酰胺溶液中。所生产的混合物在室温下搅拌17小时。然后用醋酸乙酯(200ml)稀释反应混合物并依次用水(150ml)和盐水(150ml)洗涤，经无水硫酸镁干燥。过滤掉硫酸镁后，蒸发滤液。残留物通过硅凝胶色谱分析处理(洗脱液：己烷)得到32.3g的(4-溴基-2-异丙氧基-苯氧基)-叔丁基-二甲基-甲硅烷.

中间产物4-溴基-2-异丙氧基-苯酚的制备如下：

在三溴化吡啶(116g，0.362mol)于250ml二氯甲烷的悬浮液中加入在150ml二氯甲烷中的2-异丙氧基酚(50g，0.329mol)。室温下将混合物搅拌6小时。反应混合物中加入盐酸水溶液(1N，200ml)使其淬火。分离后，有机相依次经饱和硫代硫酸钠(150ml)和盐水(150ml)洗涤，并用无水硫酸镁干燥。过滤掉硫酸镁后，蒸发滤液以产出71g的4-溴基-2-异丙氧基-苯酚(94％产率)。

实例二：激酶抑制特性轮廓的分析

作为初步筛选，10μM的化合物针对一组180种激酶进行测试。这些激酶中包括了最常见的Flt-3和cKit突变型。按照Fabian等人(A small molecule-kinase interaction map for clinical kinaseinhibitors.Nature Biotechnology 23：329-36(2005)文章中描述的方法做激酶检测试验和结合常数检测。简言之，人类激酶以T7噬菌体融合蛋白形式表达，并且一小套固定的探针配体与游离试验化合物结合。如果游离的试验化合物结合并封闭三磷酸腺苷位点，那么就没有多少蛋白分子能结合到固定在固体支持物上的配体。结果可以通过计算结合在固相支持物上的融合蛋白量来读出。对于每个激酶来说，在初步筛选过程中化合物被最初记作“击中”或“未击中”。标记为击中的化合物有一个定量的计分，并被称为“控制百分比”。图1归纳的结果表明，化合物1能够抑制几种激酶，而化合物2，5和8具有显著的特异性，只能特异地结合极少数的激酶目标。

对化合物2，3，5和8进行了二次试验，按照Fabian等人(Asmall molecule-kinase interaction map for clinical kinaseinhibitors.Nature Biotechnology 23：329-36(2005)所描述的方法确定化合物对特定激酶的结合常数(Kd)。结果表明化合物1是Flt-3(Kd 100-200nM)的一种强有力的抑制剂，并具有宽的激酶抑制特性轮廓，如在80nM到714nM可以抑制AbI和PDGFRD、FGFR3、CSF1R、RET、Kit、JAK2以及Aurka激酶(图1)。因此，化合物1有可能做为用于一个更大系列的更高选择性的激酶抑制剂的引入结构。改变化合物1结构上特定的一些残基可以生成很高特异性的化合物2，5和8，这些化合物是具有高度特异性的激酶抑制剂，仅仅可以与极少数的激酶目标特异性结合。图4中展示了这些化合物抑制Flt-3、KIT、PDGFRD和RET的能力的比较。化合物5不仅特异的抑制Flt-3和重要的Flt-3突变体(Kd 333-975nM)，而且也抑制RET(结合常数770nM)，而化合物8特异抑制Flt-3、KIT和PDGFRβ(Kd在95和740nM之间)。在此非常重要的是应该注意到化合物8也可以有效地抑制KIT双突变型V559D/T670I。这种突变型对于临床上所用的cKit抑制剂Gleevec是耐受的，因此化合物8可用于治疗Gleevec耐药性的胃肠道间质肿瘤患者。

实例三：细胞增殖抑制试验

在人类AML细胞系MV4；11中检测了Flt-3抑制细胞增殖的生物学反应。此细胞系携带最经常人类Flt-3突变。通过比较化合物对MV4；11细胞系的影响效应和对***癌细胞系(PC-3)和胰腺癌细胞系(Bx-PC3)增殖过程的影响效应，来检测化合物的细胞杀伤的选择性。用3-4，5-二甲基噻唑-2，5-二苯四唑(MTT)测试来确定细胞的增殖。简言之，细胞被平分到96孔板中。用RPMI培养基培养MV4；11细胞，培养基内包含4500mg/L葡萄糖；4mM L-谷氨酰胺；10U/ml青霉素；10mcg/ml链霉素和20％胎牛血清(FBS)。PC-3和Bx-PC3用RPMI培养基1640培养，培养基中包含2mM L-谷氨酰胺；10U/ml青霉素；10mg/ml链霉素和10％胎牛血清(FBS)。细胞接种到96孔组织培养板中，密度约为300-500个细胞/孔，置于6％CO₂和37℃环境中。细胞用激酶抑制剂处理三天。然后用比色分析法检测细胞的存活率。此检测方法基于黄色四唑盐MTT在有活性的线粒体内脱氢酶作用下可以裂解为紫色的甲臢晶体的这一特性。因此，这种物质转变仅发生在具有完整的/有功能的线粒体的活细胞内。形成的甲臢晶体溶解产生有色溶液，这种有色溶液可以用多孔扫描分光光度计在595nm处进行定量。简言之，每孔中加入10μl的5mg/ml MTT染料，孵育4小时，然后加入100μl/孔增溶溶液终止反应，增溶溶液包含10％十二烷基磺酸钠(SDS)和10mM盐酸。

化合物1到5能够强有力的抑制细胞增殖，并且以剂量依赖的方式杀伤MV4；11细胞，而化合物1不能抑制PC-3和Bx-PC3癌细胞系的增殖(图2和3)。

实例四：药物代谢动力学测量

为检测生物利用度，给三只大鼠单一口服剂量的10mg/Kg化合物2。在不同的时间点(1小时，2小时，4小时，7小时，10小时，12小时，和24小时)取血液样品分析药物水平。化合物2显示出很好的生物利用度。单剂量10mg/Kg的化合物2的给药在两小时内产生的血药浓度超过2μM，并在十小时内达到3μM最大浓度值(C_max)而且高峰可以持续超过24小时。可以维持几个小时的高血药水平以及很好的口服生物利用度提示化合物2可以一天口服一次(图5)。

单剂量给予12mg/Kg的化合物5在一小时内产生超过10μM的血药浓度并在三小时内达到14μM最大浓度值(C_max)而且高峰可以持续超过10小时。总之，在生物利用度方面，化合物5表现出比化合物2高约3到4倍(图9)。

实例五：治疗一种动物模型中的AML肿瘤中化合物2和化合物5的口服给药

利用皮下异种移植瘤模型来评估化合物2和化合物5的体内效应。摘除胸腺的裸鼠皮下注射MV4；11细胞，表达持续激活的Flt-3，作为白血病的模型(O′Farrell et al.SUl 1248 is a novel Flt-3 tyrosinekinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo.Blood 101：3597-3605(2003))。在指数生长期收获MV4；11细胞(一种人类白血病细胞系，它表达最常见的Flt-3-ITD突变体)，然后用基质胶(BD Biosciences，Bedford，MA)重悬。摘除胸腺的裸鼠0天时皮下近后肢侧翼注射500万MV4；11细胞。对于化合物2和化合物5每天口服给药的治疗效果，可以通过化合物2和化合物5预防摘除胸腺的裸鼠发生急性粒细胞白血病以及治疗摘除胸腺的裸鼠预先存在的巨大肿瘤的效果来评价。通常情况下，裸鼠皮下注射500万MV4；11细胞。肿瘤细胞注射两周后，一组小鼠每天口服给予30mg/kg的化合物2，持续8和14天(图6)。在治疗的过程中每周两次使用游标卡尺测量肿瘤的体积，并且体积计算为椭圆体的体积(Tomayko MM andReynolds CP 1989 Determination of subcutaneous tumor size inathymic nude mice.Cancer Chemother Pharmacol 124：148-54)。柱代表5只/组。化合物2在浓度为30mg/kg时可以显著抑制Flt-3-ITD突变的异种移植物的生长。

在另一个研究系列中，裸鼠皮下注射500万MV4；11细胞。在肿瘤达到约为100mm³的大小后，小鼠被分为两组(6只每组)。一组给予50mg/kg化合物2，另一组给予安慰剂，一天一次，持续两周。肿瘤可以按照安慰剂处理组中的肿瘤大小分为检测不到/消退，静止或持续增大几组(图7)。安慰剂处理小鼠的肿瘤在两周之内长大到1000mm³，而用MC-2002(50mg/kg)处理过的小鼠中有66％在肿瘤大小上显示出效果。在有反应的这些小鼠中，有50％显示其肿瘤静止，而剩下的50％的小鼠肿瘤完全消除(数据未提供)。

注射MV4；11细胞的裸鼠每天两次口服给予15mg/kg的药化合物5。肿瘤生成开始后第八天，根据肿瘤大小将小鼠分成两组(每组7-9只)，分别给予赋形剂或15mg/kg的化合物5。在治疗的开始，五天和十天后测量肿瘤的大小。给予15mg/kg的化合物5的小鼠展现出很明显的抑制异种移植物急性粒细胞白血病的生长(图10)。

进行了另一个试验来比较化合物2和化合物5的效应。肿瘤生成开始后第十八天，根据肿瘤大小将小鼠分成三组。分别用赋形剂，30mg/kg的化合物2(每天一次)或15mg/kg的化合物5(每天两次)处理，口服给药10天。测量肿瘤的体积，对每组的单个肿瘤体积绘图(n＝5-8只每组)。给予赋形剂处理的组肿瘤长的较快。化合物2和化合物5都能显著抑制肿瘤生长。在减小肿瘤大小方面，化合物5明显强于化合物2(图11)。

另一试验中，注射肿瘤细胞三周后，形成巨大AML肿瘤的小鼠按照肿瘤大小分为两组。然后分别用赋形剂或50mg/kg的化合物5(每天两次)口服给药3和6天。对每一单个肿瘤的体积绘图。化合物5展示出显著的对大肿瘤生长的抑制(图12)。

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Claims

1.以下化学式的化合物、或者其同分异构体、代谢产物、多型变体、药物前体、或它们的盐：

其中：

“----”存在或不存在；

W为(a)或(b)

(a)

A为-CR₂₁R₂₂-、-NR₂₃-、-O-或-S-；

B为-OR₂₄、-SR₂₅、-NR₂₈R₂₉；

D和E共同或独立地为-CR₃₀-或-N-；

Ar为(c)或(d)

并且

2.权利要求1的化合物，其中R₁和R₂独立地或共同为：氢、烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、烷氧基、取代的烷氧基、酰基、单取代氨基、二取代氨基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、取代的二烷基羧酰胺或者卤代烷氧基。

3.权利要求2的化合物，其中R₁和R₂独立地为：氢、烷基、取代的烷基、芳烷基、取代的芳烷基、二取代氨基基团、或者含2到10个碳原子的支链烷基基团。

4.权利要求1的化合物，其中W为：

5.权利要求4的化合物，其中R₃为氢，并且“----”表示存在键

6.权利要求1的化合物，其中W为

7.权利要求6的化合物，其中R₁₁和R₁₂独立地或共同选自以下基团构成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基、和正戊基。

8.权利要求1的化合物，其中R₁和R₂独立地或共同为氢或烷基。

9.权利要求1的化合物，其中Ar为化学式(c)或者(d)：

10.权利要求2的化合物，其中R₂为氢。

11.权利要求2的化合物，其中“----”表示存在键。

12.权利要求2的化合物，其中R₃为氢、甲基、或乙基。

13.化学式(II)的化合物、或者其同分异构体、代谢产物、多型变体、药物前体、或它们的盐：

其中：

R₁为氢；并且

R₂和R₂₄各自独立地或共同是：烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、酰基、取代的酰基、酰氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基脲、芳基脲、氨基甲酸烷基酯、氨基甲酸芳基酯、杂芳基、烷氧基、取代的烷氧基、卤代烷氧基、硫代烷基、硫代卤代烷基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、或者取代的二烷基羧酰胺。

14.化合物，其选自化合物2、5和8构成的组。

15.化学式(III)的化合物、或其同分异构体、代谢产物、多型变体、药物前体、或它们的盐。

其中：

R₁为氢；

R₂和R₂₄各自独立地或共同为：烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、酰基、取代的酰基、酰氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基脲、芳基脲、氨基甲酸烷基酯、氨基甲酸芳基酯、杂芳基、烷氧基、取代的烷氧基、卤代烷氧基、硫代烷基、硫代卤代烷基、羧基、烷氧羰基、烷基羧酰胺、取代的烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺、或者取代的二烷基羧酰胺；并且

R₁₁和R₁₂各自独立地或共同为烷基，选自由以下基团构成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基、和正戊基。

16.药用组合物，包含权利要求1到15中任何一项的化合物以及药学上可接受的载体或赋形剂。

17.用于调节或抑制蛋白激酶的催化活性的方法，包括使所述蛋白激酶与权利要求1到15中的任何一项的化合物或盐相接触。

18.权利要求17的方法，其中所述蛋白激酶选自以下物质构成的组：受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、和丝氨酸-苏氨酸激酶。

19.权利要求17的方法，其中所述蛋白激酶相关的障碍是选自以下障碍构成的组：EGFR相关的障碍、PDGFR相关的障碍、cKit相关的障碍、RET相关的障碍、以及FLT-3相关的障碍。

20.权利要求17的方法，其中所述蛋白激酶相关的障碍是选自以下癌症构成的组：鳞状细胞癌、星形细胞瘤、卡波西肉瘤、恶性胶质瘤、肺癌、膀胱癌、头颈部癌、黑色素瘤、卵巢癌、***癌、乳腺癌、甲状腺癌、肾癌、小细胞肺癌、白血病、神经胶质瘤、结肠直肠癌、泌尿生殖器癌、和胃肠癌。

21.权利要求17的方法，其中所述蛋白激酶相关的障碍是选自以下障碍构成的组：糖尿病、自身免疫性疾病、过度增殖障碍、再狭窄、纤维化、银屑病、von Heppel-Lindau病、骨关节炎、类风湿性关节炎、血管发生、炎性障碍、免疫障碍、和心血管障碍。

22.权利要求17的方法，其中所述调节或者抑制发生在哺乳动物，任选是人。

23.权利要求18的方法，其中所述激酶是在患有AML和/或cKit(KIT)的患者体内的FLT-3突变型，或者是患有胃肠癌症或其他癌症的患者体内的cKit的突变型。

24.权利要求23的方法，所述调节或者抑制发生在患有癌症、任选是AML或胃肠癌症、的哺乳动物体内，任选在人的体内。