CN100422316C - 抗***受体(igfr)的人源中和抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明包括抗人***受体I(IGFR1)的全人源单克隆中和抗体。该抗体可用于预防和治疗受试者体内的癌症。还包括使用和生产本发明抗体的方法。

Description

抗***受体(IGFR)的人源中和抗体
本申请要求受益于2002年5月24日提交的美国临时专利申请号60/383,459、2002年7月2日提交的美国临时专利申请号60/393,214及2002年12月23日提交的美国临时专利申请号60/436,254。在此均被整体引入作为参考。
发明领域
本发明涉及抗***受体-1(IGFR1)的全人源单克隆抗体，以及使用和生产此抗体的方法。
发明背景
***，又称促生长因子，包括***I(IGF-I)和***II(IGF-II)(Klapper，et al，(1983)Endocrinol.112：2215 and Rinderknecht，et al.，(1978)Febs.Lett.89：283)。这些生长因子通过结合于称为***受体I(IGFR1)的共同受体(Sepp-Lorenzino，(1998)Breast CancerResearch and Treatment 47：235)而对许多细胞类型(包括肿瘤细胞)发挥促有丝***作用(Macaulay，(1992)Br.J.Cancer 65：311)。***与IGFR1的相互作用可通过引发受体上酪氨酸残基的自磷酸化，从而激活受体(Butler，et al.，(1998)Comparative Biochemistry and Physiology 121：19)。
IGFR1一旦被激活，就会反过来磷酸化细胞内靶标，从而激活细胞信号转导通路。这种受体激活作用对于刺激肿瘤细胞的生长和存活是必需的。因而，抑制IGFR1的活性是治疗或预防人类癌症和其他增生性疾病的一种有价值的潜在方法。
几方面的证据表明，IGF-I、IGF-II以及他们的受体IGFR1是恶性表型的重要介体。已发现IGF-I的血浆浓度是***癌风险的最强预测指标(Chan，et al.，(1998)Science 279：563)。类似的流行病学研究把IGF-I的血浆浓度与患乳腺癌、结肠癌和肺癌的风险紧密地联系起来。
还已证明***受体-1的过度表达存在于几个癌细胞系和肿瘤组织中。在40％的乳腺癌细胞系(Pandini，et al.，(1999)Cancer Res.5：1935)和15％的肺癌细胞系中IGFR1均被过度表达。与正常组织相比，乳腺癌肿瘤组织中IGFR1被过度表达6-14倍，并且IGFR1表现出激酶活性增加2-4倍(Webster，et al.，(1996)CancerRes.56：2781 and Pekonen，et al，(1998)Cancer Res.48：1343)。90％的结肠直肠癌组织活检样品表现出IGFR1水平升高，其中IGFR1的表达程度与疾病的严重程度相关。对原代***培养细胞和***细胞系的分析揭示，与正常的外宫颈细胞相比，其IGFR1分别有3倍和5倍的过度表达(Steller，et al，(1996)Cancer Res.56：1762)。IGFR1在滑膜肉瘤细胞中的表达也与侵袭性表型(即转移和快速增殖，Xie，et al.，(1999)Cancer Res.59：3588)相关。
肢端肥大症是由于生长素和IGF-I的过度分泌而产生的一种缓慢的发育性疾病(Ben-Schlomo，etal，(2001)Endocrin.Metab.Clin.North.Am.30：565-583)。抑制IGFR1的功能可能有助于治疗此病。
已知本领域有一些可以抑制IGFR1活性的抗体。但它们的治疗价值相对较低。例如，α-IR3(Kull，et aL，(1983)J.Biol.Chem.258：6561)、1H7(Liet al.，(1993)Biochem.Biophys.Res.Comm.196.92-98和Xionget al，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.89：5356-5360；Santa Cruz biotechnology，Inc.；Santa Cruz，CA)以及MAB391(R&D Systems；Minneapolis，MN)均是可与IGFR1相互作用并且抑制其活性的鼠单克隆抗体。由于它们是鼠源的抗体，使其在用于人类治疗中受到限制。若免疫功能正常的受治疗人注入一个剂量的鼠源抗体，人体内就会产生对抗鼠免疫球蛋白序列的抗体。这些人抗鼠抗体(HAMA)会中和治疗性抗体，并可能引起急性毒性(即HAMA反应)。
避免HAMA反应的一种方法就是使用不含任何外源(例如鼠源)氨基酸序列的全人源抗体。尽管使用全人源抗体是一种减少或预防人体免疫排斥治疗抗体的有效方法，但也可能发生对全人源抗体的排斥反应。人体排斥人源抗体可被认为是一种人抗人抗体反应(HAHA反应)。HAHA反应可由一些因素介导，例如全人源抗体中存在一些稀少的、不常出现的氨基酸。因此，治疗抗体可通过***无免疫原性或仅有弱免疫原性的人抗体骨架序列而优化。优选地，这些序列也经常出现在其他的人源抗体中。
发明概述
本发明提供了抗人***受体-1的全人源单克隆抗体，当注入人体时本抗体不会诱发HAMA反应或HAHA反应，并且可用于治疗或预防由IGFR1介导的疾病(例如恶性肿瘤)。
本发明提供了一种结合的组合物(例如抗体或其抗原结合片段)，其包括轻链，其中轻链包括由SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：31所定义的轻链CDR(互补决定区)-L1氨基酸序列、由SEQ ID NO：9或SEQ IDNO：32所定义的轻链CDR-L2氨基酸序列以及由SEQ ID NO：10或SEQ IDNO：33所定义的轻链CDR-L3氨基酸序列。还提供了一种结合组合物(例如抗体或其抗原结合片段)，其包括重链，其中重链包括由SEQ ID NO：14号或SEQ ID NO：37号所定义的重链CDR-H1氨基酸序列、由SEQ ID NO：15号或SEQ ID NO：38所定义的重链CDR-H2氨基酸序列以及由SEQ IDNO：16号或SEQ ID NO：39所定义的重链CDR-H3氨基酸序列。
本发明的结合组合物(例如抗体或其抗原结合片段)优选包括轻链可变区，优选地是成熟的轻链可变区，它包含SEQ ID NO：2的第20-128位氨基酸、SEQ ID NO：25的第21-130位氨基酸、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：43的第20-128位氨基酸、SEQ ID NO：41、43、72、74、76或78的第20-128位氨基酸，和/或包括重链可变区，优选地是成熟的重链可变区，它包含SEQ ID NO：4的第20-137位氨基酸，SEQ IDNO：27的20-140位氨基酸、SEQ ID NO：45的第20-137位氨基酸或SEQID NO：112的第20-137位氨基酸。
本发明还提供了几种包含本发明结合组合物及药用载体的药剂组合物。本发明的结合组合物也可以被交联于一种物质如聚乙二醇。
本发明也包括一种可与人IGFR1特异结合的结合组合物(例如人源抗体或其抗原结合片段)，此组合物具有选自如下的特征：
(a)以约86×10-11或更小的Kd值与IGFR1(例如人IGFR1)结合；
(b)具有对IGFR1(例如人IGFR1)的解离速率(Koff)约为6.50×10-5或更小；
(c)具有对IGFR1(例如人IGFR1)的结合速率(Kon)约为0.7×105或更大；
(d)与IGF1竞争结合于IGFR1(例如人IGFR1)；
(e)抑制IGFR1(例如人IGFR1)的自身磷酸化(例如IC50为0.10nM)；以及
(f)抑制表达IGFR1(例如人IGFR1)的细胞的无贴壁依赖性生长。
结合组合物优选地具有所述的全部特征(a-f)。更优选地，该结合组合物(例如人抗体或其抗原结合片段)包含选自如下的一种成分：
(a)轻链氨基酸序列，包括SEQ ID NO：8所定义的CDR-L1，SEQ IDNO：9所定义的CDR-L2以及SEQ ID NO：10所定义的CDR-L3；
(b)轻链氨基酸序列，包括SEQ ID NO：31所定义的CDR-L1，SEQID NO：32所定义的CDR-L2以及SEQ ID NO：33所定义的CDR-L3；
(c)重链氨基酸序列，包括SEQ ID NO：14所定义的CDR-H1，SEQID NO：14所定义的CDR-H2以及SEQ ID NO：16所定义的CDR-H3；以及
(d)重链氨基酸序列，包括SEQ ID NO：37或70所定义的CDR-H1，SEQ ID NO：38所定义的CDR-H2以及SEQ ID NO：39所定义的CDR-H3。
本发明也包括编码选自下列肽链的一种分离的核苷酸：
(a)SEQ ID NO：2的第20-128位氨基酸；
(b)SEQ ID NO：25的第21-130位氨基酸；
(c)SEQ ID NO：72的第20-128位氨基酸；
(d)SEQ ID NO：74的第20-128位氨基酸；
(a)SEQ ID NO：4的第20-137位氨基酸；
(b)SEQ ID NO：27的第20-140位氨基酸；
(c)SEQ ID NO：45的第20-137位氨基酸；
(d)SEQ ID NO：112的第20-137位氨基酸；
(e)SEQ ID NO：76的第20-128位氨基酸；以及
(f)SEQ ID NO：78的第20-128位氨基酸。
该核苷酸优选地选自如下列序列：
(a)SEQ ID NO：1的第58-384位核苷酸；
(b)SEQ ID NO：24的第61-390位核苷酸；
(c)SEQ ID NO：71的第58-384位核苷酸；
(d)SEQ ID NO：73的第58-384位核苷酸；
(e)SEQ ID NO：3的第58-411位核苷酸；
(f)SEQ ID NO：26的第58-420位核苷酸；
(g)SEQ ID NO：44的第58-411位核苷酸；
(h)SEQ ID NO：111的第58-411位氨基酸；
(i)SEQ ID NO：75的第58-384位氨基酸；以及
(j)SEQ ID NO：77的第58-384位核苷酸。
本发明还提供了含有任何一种上述多核苷酸的的重组载体，以及含有该载体的宿主细胞。
本发明也包括选自下列的一种多肽：
(a)SEQ ID NO：2的第20-128位氨基酸；
(b)SEQ ID NO：25的第21-130位氨基酸；
(c)SEQ ID NO：72的第20-128位氨基酸；
(d)SEQ ID NO：74的第20-128位氨基酸；
(e)SEQ ID NO：4的第20-137位氨基酸；
(f)SEQ ID NO：27的第20-140位氨基酸；
(g)SEQ ID NO：45的第20-137位氨基酸；
(h)SEQ ID NO：112的第20-137位氨基酸；
(i)SEQ ID NO：76的第20-128位氨基酸；以及
(j)SEQ ID NO：78的第20-128位氨基酸；
优选地，本发明的结合组合物是人源抗体，它包含至少一个(如1个或2个)选自如下的轻链/重链组合：
a)包含SEQ ID NO：2第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：4第20-137位氨基酸的重链可变区[15H12/19D12成熟LC-15H12/19D12成熟HC]
b)包含SEQ ID NO：25第21-130位氨基酸和轻链可变区和包含SEQID NO：27第20-140位氨基酸的重链可变区。[1 H3成熟LC-1H3成熟HC]
c)包含SEQ ID NO：72第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：45第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCC-成熟HCA]
d)包含SEQ ID NO：74第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：45第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCD-成熟HCA]
e)包含SEQ ID NO：76第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：45第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCE-成熟HCA]
f)包含SEQ ID NO：78第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：45第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCF-成熟HCA]
g)包含SEQ ID NO：72第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：112第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCC-成熟HCB]
h)包含SEQ ID NO：74第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：112第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCD-成熟HCB]
i)包含SEQ ID NO：76第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：112第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCE-成熟HCB]
j)包含SEQ ID NO：78第20-128位氨基酸的轻链可变区和包含SEQID NO：112第20-137位氨基酸的重链可变区。[成熟LCF-成熟HCB]
该人源抗体更优选地是包括两个上述轻链/重链对的四聚体。优选地，该人抗体包括与成熟的HCA或成熟的HCB配对的成熟的LCF。
本发明还提供了一种用于制造包含如下氨基酸序列的多肽的方法：SEQ ID NO：2的第20-128位氨基酸，SEQ ID NO：4的第20-137位氨基酸，SEQ ID NO：25的第21-130位氨基酸，SEQ ID NO：27的第20-140位氨基酸，SEQ ID NO：41，43，72，74，76或78的第20-128位氨基酸，SEQ ID NO：45的第20-137位氨基酸，或者SEQ ID NO：112的第20-137位氨基酸，此方法包括在可产生这种多肽的条件下培养宿主细胞。优选地该多肽也分离自宿主细胞。
本发明还提供了用于对患者治疗或预防医学病症的方法，这种医学病症是由IGFR1提高的表达或活性，或者它的一种或多种配体(例如IGF-I或IGF-II)提高的表达所介导，该方法包括对受试者施用本发明的一种结合组合物(例如本发明的抗体或其抗原结合片段)。
优选地该结合组合物包含选自如下的一种成分：
(a)轻链氨基酸序列，包括由SBQ ID NO：8所定义的CDR-L1，SEQID NO：9所定义的CDR-L2，和SEQ ID NO：10所定义的CDR-L3；
(b)轻链氨基酸序列，包括由SEQ ID NO：31所定义的CDR-L1，SEQ ID NO：32所定义的CDR-L2，和SEQ ID NO：33所定义的CDR-L3；
(c)重链氨基酸序列，包括由SEQ ID NO：14或17所定义的CDR-H1，SEQ ID NO：15所定义的CDR-H2，和SEQ ID NO：16所定义的CDR-H3；以及
(d)重链氨基酸序列，包括由SEQ ID NO：37或70所定义的CDR-H1，SEQ ID NO：38所定义的CDR-H2，和SEQ ID NO：39所定义的CDR-H3。
本发明包括选自如下的任何一种质粒以及上述任何质粒的核酸***片段：
(i)CMV启动子-15H12/19D12HCA(γ4)-；保藏名：″15H12/19D12HCA(γ4)″；ATCC注册号：_______________；
(ii)CMV启动子-15H12/19D12HCB(γ4)-；保藏名：″15H12/19D12HCB(γ4)″；ATCC注册号：_______________；
(iii)CMV启动子-15H12/19D12HCA(γ1)-；保藏名：″15H12/19D12HCA(γ1)″；ATCC注册号：_______________；
(iv)CMV启动子-15H12/19D12LCC(κ)-；保藏名：″15H12/19D12LCC(κ)″；ATCC注册号：____________；
(v)CMV启动子-15H12/19D12LCD(κ)-；保藏名：″15H12/19D12LCD(κ)″；ATCC注册号：_____________；
(vi)CMV启动子-15H12/19D12LCB(κ)-；保藏名：″15H12/19D12LCE(κ)″；ATCC注册号：____________；
(vii)CMV启动子-15H12/19D12LCF(κ)-；保藏名：″15H12/19D12LCF(κ)″；ATCC注册号：_____________；
还包括包含在这些质粒***片段中，编码免疫球蛋白可变区的***片段的核酸部分，这些***片段任选地含有免疫球蛋白恒定区(即除去信号序列)。还包括由任何上述质粒***片段的核酸所编码的任何多肽，以及包含在任何一个***片段中，编码免疫球蛋白可变区的多肽，此***片段任选地含有免疫球蛋白恒定区(即除去信号序列)。
根据布达佩斯条约，上述被鉴定的质粒均保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC，10801 University Boulevard；Manassas，Virginia20110-2209)。本专利批准之后对于获得这些保存在ATCC中质粒的限制将会解除。
本结合组合物优选地与可药用载体组合成药物组合物。本发明所包括考虑的医学病症包括肢端肥大症、卵巢癌、胰腺癌、良性***增生、乳腺癌、***癌、骨癌、肺癌、结肠直肠癌、***、滑膜肉瘤、转移的类癌瘤相关腹泻、分泌血管活性肠肽的肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、平滑肌血管狭窄以及微血管异常增生。
本结合组合物可通过例如非胃肠途径施用于受试者。本发明还提供了联合疗法，包括与抗癌治疗药剂或抗癌治疗方法结合施用本发明的结合组合物。
本发明还提供了用来生产全人源抗IGFR1抗体的方法，包括下述步骤：以IGFR1抗原性多肽(优选地为SEQ ID NO：19的第30-902位氨基酸和/或在其表面表达IGFR1的细胞(例如HEK293))免疫接种含有包括人重链转基因和人轻链转基因基团组的非人动物，致使此动物的B细胞产生抗体；从此动物中分离出B细胞；使此B细胞与骨髓瘤细胞融合形成分泌对IGFR1特异的人源单克隆抗体的永生杂交瘤细胞；分离此对IGFR1特异的人源单克隆抗体。
详细描述
本发明优选的实施方案包括一种可以特异识别并结合于IGFR1的全人源单克隆抗体或其抗原结合片段，优选地为SEQ ID NO：19的第30-902位氨基酸。优选的抗体或其抗原结合片段是1H3、15H12、19D12、15H12/19D 12LCA、15H12/19D12LCB、15H12/19D12LCC、15H12/19D12LCD、15H12/19D12LCE、15H12/19D12LCF、15H12/19D12HCA或15H12/19D12 HCB.
结合组合物或结合药剂是指能以特异性结合于IGFR1的分子，例如以配体-受体型方式或抗体-抗原相互作用方式，例如与IGFR1特异结合的蛋白质(例如以天然生理学相关的蛋白质与蛋白质间共价或非共价相互作用)。术语“结合组合物”优选地是多肽，例如本发明的全分子抗体或其抗原结合片段(例如15H12/19D12 LCA、15H12/19D12LCB、15H 12/19D12 LCC、15H12/19D12 LCD、15H12/19D12 LCE、15H 12/19D12 LCF、15H12/19D12 HCA或15H12/19D12 HCB，或者下面表1所列举的任何一种肽)。
本发明的抗体和抗原结合片段可用于在体内或体外抑制细胞的生长，尤其是抑制恶性细胞的生长。不受单一理论所约束，本发明的抗体和抗原结合片段可通过抑制IGFR1与其配体(如IGF-I或IGF-II)间相互作用而抑制细胞的生长。该抗体和抗原结合片段还可抑制IGFR1的自身磷酸化、抑制表达IGFR1的细胞(例如癌细胞)的无贴壁依赖性生长，以及通过诱导IGFR1的降解而抑制AKT激酶的激活。优选的情况下，该抗体和抗原结合片段可中和IGFR1活性和/或下调IGFR1的表达。该抗体和抗原结合片段可被用于治疗或预防IGFR1介导的疾病。本发明还提供了制造本发明抗体和抗原结合片段的方法。
术语“抗体分子”是指全分子抗体(例如IgG，优选IgG1或IgG4)以及片段，优选地为其抗原结合片段。抗体片段包括Fab抗体片段、F(ab)2抗体片段、Fv抗体片段、单链Fv抗体片段以及dsFv抗体片段。
术语“IGFR1”、“***受体-I”以及“I类***受体”也为本领域所熟知。尽管IGFR1可来自任何生命体，但优选地是来自动物，更优选来自哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔、绵羊或狗)，最优选地是来自人类。一个典型的人IGFR1前体核苷酸和氨基酸序列的Genbank注册号为X04434或NM_000875(SEQ IDNO：19)。将此前体裂解(例如在第710和711位氨基酸之间)可产生一个α亚基和一个β亚基，两者结合而形成一个成熟的受体。在本发明的优选实施方案中，来自全长IGFR1多肽的第30-902位氨基酸被用作产生抗IGFR1抗体的抗原。
术语“IGF-I”、“***-I”以及“I类***”也为本领域所熟知。术语“IGF-II”、“***-II”以及“II类***”也为本领域所熟知。尽管IGF-I或IGF-II可来自任何生命体，但优选地是来自动物，更优选来自哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔、绵羊或狗)，最优选地是来自人类。一个典型的人IGF-I和IGF-II核苷酸和氨基酸序列的Genbank注册号分别为XM052648(SEQ ID NO：20)和NM000612(SEQ ID NO：21)。术语“sIGFR1”或“可溶IGFR1”包括IGFR1(例如人IGFR1)的任何可溶片段，优选的片段已去除了受体跨膜区，更优选的片段是SEQ IDNO：19的第30-902位氨基酸。
本发明优选的全人源单克隆抗IGFR1抗体分子可变区氨基酸序列(例如1H3，15H12和19D12)以及编码这些可变区的核酸的核苷酸序列归纳于表1之中。本发明包括含有下面表1所列的任何一种或多种(例如1、2、3、4、5、6、7或8个)核酸或多肽(包括其成熟片段)的任何核酸或多肽(例如抗体)。表1还包括相当于抗体CDR区的氨基酸和核苷酸序列的总结。与15H12和19D12可变区相对应的氨基酸和核苷酸序列是相同的，因而对于每个可变区或CDR仅显示了一个序列。
表1本发明氨基酸序列和核苷酸序列总结
  序列   序列标识号
  编码包括信号肽的15H12和19D12轻链可变区(15H12/19D12LC)的核苷酸序列 SEQ ID NO：1
  包括信号肽的15H12和19D12轻链可变区的氨基酸序列 SEQ ID NO：2
  编码包括信号肽的15H12和19D12重链可变区(15H12/19D12HC)的核苷酸序列， SEQ ID NO：3
  包括信号肽的15H12和19D12重链可变区的氨基酸序列 SEQ ID N0：4
  编码15H12和19D12 CDR-L1的核苷酸序列   SEQ ID NO：5
  编码15H12和19D12 CDR-L2的核苷酸序列   SEQ ID NO：6
  编码15H12和19D12 CDR-L3的核苷酸序列   SEQ ID NO：7
  15H12和19D12 CDR-L1的氨基酸序列   SEQ ID NO：8
  15H12和19D12 CDR-L2的氨基酸序列   SEQ ID NO：9
  15H12和19D12 CDR-L3的氨基酸序列   SEQ ID NO：10
  编码15H12和19D12 CDR-H1的核苷酸序列   SEQ ID NO：11
  编码15H12和19D12 CDR-H2的核苷酸序列   SEQ ID NO：12
  编码15H12和19D12 CDR-H3的核苷酸序列   SEQ ID NO：13
  15H12和19D12 CDR-H1的氨基酸序列   SEQ ID NO：14
  15H12和19D12 CDR-H2的氨基酸序列   SEQ ID NO：15
  15H12和19D12 CDR-H3的氨基酸序列   SEQ ID NO：16
  另外一种15H12和19D12 CDR-H1的氨基酸序列   SEQ ID NO：17
  编码另外一种15H12和19D12 CDR-H1的核苷酸序列 SEQ ID NO：18
  ***受体-1(IGFR1)的氨基酸序列   SEQ ID NO：19
  ***-I(IGF1)的氨基酸序列   SEQ ID NO：20
  ***-II(IGF2)的氨基酸序列   SEQ ID NO：21
  PCR引物的核苷酸序列   SEQ ID NO：22
  PCR引物的核苷酸序列   SEQ ID NO：23
  编码包括信号肽的1H3轻链可变区的(1H3 LC)的核苷酸序列 SEQ ID NO：24
  包括信号肽的1H3轻链可变区的氨基酸序列   SEQ ID NO：25
  编码包括信号肽的1H3重链可变区(1H3 HC)的核苷酸序列   SEQ ID NO：26
  包括信号肽的1H3重链可变区的氨基酸序列   SEQ ID NO：27
  编码1H3 CDR-L1的核苷酸序列   SEQ ID NO：28
  编码1H3 CDR-L2的核苷酸序列   SEQ ID NO：29
  编码1H 3CDR-L3的核苷酸序列   SEQ ID NO：30
  1H3 CDR-L1的氨基酸序列   SEQ ID NO：31
  1H3 CDR-L2的氨基酸序列   SEQ ID NO：32
  1H3 CDR-L3的氨基酸序列   SEQ ID NO：33
  编码1H3 CDR-H1的核苷酸序列   SEQ ID NO：34
  编码1H3 CDR-H2的核苷酸序列   SEQ ID NO：35
  编码1H3 CDR-H3的核苷酸序列   SEQ ID NO：36
  1H3 CDR-H1的氨基酸序列   SEQ ID NO：37
  1H3 CDR-H2的氨基酸序列   SEQ ID NO：38
  1H3 CDR-H3的氨基酸序列   SEQ ID NO：39
  编码15H12/19D12轻链A(LCA)的核苷酸序列   SEQ ID NO：40
  15H12/19D12轻链A(LCA)的氨基酸序列   SEQ ID NO：41
  编码15H12/19D12轻链B(LCB)的核苷酸序列   SEQ ID NO：42
  15H12/19D12轻链B(LCB)的氨基酸序列   SEQ ID NO：43
  编码15H12/19D12重链A(HCA)的核苷酸序列   SEQ ID NO：44
  15H12/19D12重链A(HCA)的氨基酸序列   SEQ ID NO：45
  编码15H12/19D12轻链A骨架区1的核苷酸序列   SEQ ID NO：46
  15H12/19D12轻链A骨架区1的氨基酸序列   SEQ ID NO：47
  编码15H12/19D12轻链A骨架区2的核苷酸序列   SEQ ID NO：48
  15H12/19D12轻链A骨架区2的氨基酸序列   SEQ ID NO：49
编码15H12/19D12轻链A骨架区3的核苷酸序列 SEQ ID NO：50
  15H12/19D12轻链A骨架区3的氨基酸序列   SEQ ID NO：51
编码15H12/19D12轻链A骨架区4的核苷酸序列 SEQ ID NO：52
  15H12/19D12轻链A骨架区4的氨基酸序列   SEQ ID NO：53
  编码15H12/19D12轻链B骨架区1的核苷酸序列   SEQ ID NO：54
  15H12/19D12轻链B骨架区1的氨基酸序列   SEQ ID NO：55
  编码15H12/19D12轻链B骨架区2的核苷酸序列   SEQ ID NO：56
  15H12/19D12轻链B骨架区2的氨基酸序列   SEQ ID NO：57
  编码15H12/19D12轻链B骨架区3的核苷酸序列   SEQ ID NO：58
  15H12/19D12轻链B骨架区3的氨基酸序列   SEQ ID NO：59
  编码15H12/19D12轻链B骨架区4的核苷酸序列   SEQ ID NO：60
  15H12/19D12轻链B骨架区4的氨基酸序列   SEQ ID NO：61
  编码15H12/19D12重链A骨架区1的核苷酸序列   SEQ ID NO：62
  15H12/19D12重链A骨架区1的氨基酸序列   SEQ ID NO：63
  编码15H12/19D12重链A骨架区2的核苷酸序列   SEQ ID NO：64
  15H12/19D12重链A骨架区2的氨基酸序列   SEQ ID NO：65
  编码15H12/19D12重链A骨架区3的核苷酸序列   SEQ ID NO：66
  15H12/19D12重链A骨架区3的氨基酸序列   SEQ ID NO：67
  编码15H12/19D12重链A骨架区4的核苷酸序列   SEQ ID NO：68
  15H12/19D12重链A骨架区4的氨基酸序列   SEQ ID NO：69
  另外一种1H3 CDR-H1的氨基酸序列   SEQ ID NO：70
  编码15H12/19D12轻链C(LCC)的核苷酸序列   SEQ ID NO：71
  15H12/19D12轻链C的氨基酸序列   SEQ ID NO：72
  编码15H12/19D12轻链D(LCD)的核苷酸序列   SEQ ID NO：73
  15H12/19D12轻链D的氨基酸序列   SEQ ID NO：74
  编码15H12/19D12轻链E(LCE)的核苷酸序列   SEQ ID NO：75
  15H12/19D12轻链E的氨基酸序列   SEQ ID NO：76
  编码15H12/19D12轻链F(LCF)的核苷酸序列   SEQ ID NO：77
  15H12/19D12轻链F的氨基酸序列   SEQ ID NO：78
  编码15H12/19D12轻链C骨架区1的核苷酸序列   SEQ ID NO：79
  15H12/19D12轻链C骨架区1的氨基酸序列   SEQ ID NO：80
  编码15H12/19D12轻链C骨架区2的核苷酸序列   SEQ ID NO：81
  15H12/19D12轻链C骨架区2的氨基酸序列   SEQ ID NO：82
  编码15H12/19D12轻链C骨架区3的核苷酸序列   SEQ ID NO：83
  15H12/19D12轻链C骨架区3的氨基酸序列   SEQ ID NO：84
  编码15H12/19D12轻链C骨架区4的核苷酸序列   SEQ ID NO：85
  15H12/19D12轻链C骨架区4的氨基酸序列   SEQ ID NO：86
  编码15H12/19D12轻链D骨架区1的核苷酸序列   SEQ ID NO：87
  15H12/19D12轻链D骨架区1的氨基酸序列   SEQ ID NO：88
  编码15H12/19D12轻链D骨架区2的核苷酸序列   SEQ ID NO：89
  15H12/19D12轻链D骨架区2的氨基酸序列   SEQ ID NO：90
  编码15H12/19D12轻链D骨架区3的核苷酸序列   SEQ ID NO：91
  15H12/19D12轻链D骨架区3的氨基酸序列   SEQ ID NO：92
  编码15H12/19D12轻链D骨架区4的核苷酸序列   SEQ ID NO：93
  15H12/19D12轻链D骨架区4的氨基酸序列   SEQ ID NO：94
  编码15H12/19D12轻链E骨架区1的核苷酸序列   SEQ ID NO：95
  15H12/19D12轻链E骨架区1的氨基酸序列   SEQ ID NO：96
  编码15H12/19D12轻链E骨架区2的核苷酸序列   SEQ ID NO：97
  15H12/19D12轻链E骨架区2的氨基酸序列   SEQ ID NO：98
  编码15H12/19D12轻链E骨架区3的核苷酸序列   SEQ ID NO：99
  15H12/19D12轻链E骨架区3的氨基酸序列   SEQ IDNO：100
  编码15H12/19D12轻链E骨架区4的核苷酸序列   SEQ IDNO：101
  15H12/19D12轻链E骨架区4的氨基酸序列   SEQ IDNO：102
  编码15H12/19D12轻链F骨架区1的核苷酸序列   SEQ IDNO：103
  15H12/19D12轻链F骨架区1的氨基酸序列   SEQ IDNO：104
  编码15H12/19D12轻链F骨架区2的核苷酸序列   SEQ IDNO：105
  15H12/19D12轻链F骨架区2的氨基酸序列   SEQ IDNO：106
  编码15H12/19D12轻链F骨架区3的核苷酸序列   SEQ ID
NO：107
  15H12/19D12轻链F骨架区3的氨基酸序列   SEQ IDNO：108
  编码15H12/19D12轻链F骨架区4的核苷酸序列   SEQ IDNO：109
  15H12/19D12轻链F骨架区4的氨基酸序列   SEQ IDN0：110
  编码15H12/19D12重链B的核苷酸序列   SEQ IDNO：111
  15H12/19D12重链B的氨基酸序列   SEQ IDNO：112
  编码15H12/19D12重链B骨架区1的核苷酸序列   SEQ IDNO：113
  15H12/19D12重链B骨架区1的氨基酸序列   SEQ IDNO：114
  编码15H12/19D12重链B骨架区2的核苷酸序列   SEQ IDNO：115
  15H12/19D12重链B骨架区2的氨基酸序列   SEQ IDNO：116
  编码15H12/19D12重链B骨架区3的核苷酸序列   SEQ IDNO：117
  15H12/19D12重链B骨架区3的氨基酸序列   SEQ IDNO：118
  编码15H12/19D12重链B骨架区4的核苷酸序列   SEQ IDNO：119
  15H12/19D12重链B骨架区4的氨基酸序列   SEQ IDNO：120
CDR-L1是轻链中第一互补决定区(CDR)，CDR-L2是轻链中第二互补决定区，CDR-L3是轻链中第三互补决定区。
类似地，CDR-H1是重链中第一互补决定区(CDR)，CDR-H2是重链中第二互补决定区，CDR-H3是重链中第三互补决定区。
FR-L1是轻链中的第一骨架区，FR-L2是轻链中的第二骨架区，FR-L3是轻链中的第三骨架区，FR-L4是轻链中的第四骨架区，FR-H1是重链中的第一骨架区，FR-H2是重链中的第二骨架区，FR-H3是重链中的第三骨架区，FR-H4是重链中的第四骨架区。这些术语以及各个CDR和FR在免疫球蛋白链上的位置为本领域所熟知。
本发明缺失信号肽(即前19个或20个残基)的成熟轻链可变区是由SEQ ID NO：1、40、42、71、73、75或77中第58-384位核苷酸所编码的SEQ ID NO：2、41、43、72、74、76或78中的第20-128位氨基酸，或者是由SEQ ID NO：24中的第61-390位核苷酸所编码的SEQ ID NO：25中的21-130位氨基酸。
本发明缺失信号肽(即前19个残基)的重链可变区是由SEQ IDNO：3、44或111中第58-411位核苷酸所编码的SEQ ID NO：4、45或112的第20-137位氨基酸，或者是由SEQ ID NO：26中的第58-420位核苷酸所编码的SEQ ID NO：27中的20-140位氨基酸。
在一些实施方案中，15H12和19D12 CDR-H1是由SEQ ID NO：18的核苷酸所编码的GFTFSSFAMH(SEQ ID NO：17)。在一些实施方案中1H3 CDR-H1是NYAMH(SEQ ID NO：70)。
本发明还包括其中含有抗体和抗原结合片段骨架区的抗体和抗原结合片段。抗体和抗原结合片段FR-L1优选是SEQ ID NO：2的第20-42位氨基酸或SEQ ID NO：25的第21-43位氨基酸；FR-L2优选是SEQ IDNO：2的54-68位氨基酸或SEQ ID NO：25的55-69位氨基；FR-L3优选是SEQ ID NO：2的76-107位氨基酸或SEQ ID NO：25的第77-108位氨基酸；FR-L4优选是SEQ ID NO：2的第117-128位氨基酸或SEQ IDNO：25的第128-130位氨基酸；FR-H1优选是SEQ ID NO：4的第20-44或20-49位氨基酸或SEQ ID NO：27的第20-44或20-49位氨基酸；FR-H2优选是SEQ ID NO：4的第85-116位氨基酸或SEQ ID NO：27的第85-116位氨基酸；以及FR-H4优选是SEQ ID NO：4的第127-137位氨基酸或SEQ ID NO：27的第130-140位氨基酸。
在优选的实施方案中，本发明的抗体分子包括由SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：43的第20-42位氨基酸所限定的FR-L1；由SEQ ID NO：41或43的第54-68位氨基酸所限定的FR-L2；由SEQ ID NO：41或43的第76-107位氨基酸所限定的FR-L3；由SEQ ID NO：41或43的第117-128位氨基酸所限定的FR-L4。而且，优选的实施方案中，其抗体分子包括由SEQ ID NO：45的第20-44位氨基酸所限定的FR-H1；由SEQ ID NO：45的第55-68位氨基酸所限定的FR-H2；由SEQ ID NO：45的第86-116位氨基酸所限定的FR-H3；由SEQ ID NO：45的第127-137位氨基酸所限定的FR-H4。
分子生物学
依照本发明可能会用到本领域所熟知的传统分子生物学、微生物学和重组DNA技术。这些技术在文献中解释得十分完整。例如可参阅：Sambrook、Fritsch和Maniatis编，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第二版(1989)，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约(此处称为″Sambrook，et al.，1989″)；DNA Cloning：A Practical Approach，卷I和卷II(主编：D.N.Glover，1985)；Oligonucleotide Synthesis(主编：M.J.Gait，1984)；Nucleic Acid Hybridization(主编：B.D.Hames和S.J.Higgins，1985)；Transcription And Translation(主编：B.D.Hames和S.J.Higgins，1984)；Animal Cell Culture(主编：R.I.Freshney，1986)；Immobilized Cells And Enzymes(IRL出版社，1986)；B.Perbal，A Practical Guide To Molecular Cloning(1984)；F.M.Ausubel等编著，Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley&Sons出版公司(1994)。
“多核苷酸”、“核酸”或“核酸分子”是指核糖核苷(腺苷、鸟苷、尿苷或胞苷；“RNA分子”)或脱氧核糖核苷(脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷或脱氧胞苷；“DNA分子”)或其磷酸酯类似物(例如磷酸硫酯和硫酯)，以单链、双链或相反形式的磷酸酯多聚物形式。“多核苷酸序列”、“核酸序列”或“核苷酸序列”是指核酸(例如DNA或RNA)中的一连串核苷酸碱基(也称“核苷酸”)，而且表示由两个或多个核苷酸所组成的任何一种链。
“编码序列”，或“编码”如RNA、多肽、蛋白质或酶等表达产物的序列，是指一核苷酸序列，当其表达时可导致产生产物。
术语“基因”是指一段DNA序列，该序列编码或对应于某一特定的核糖核苷酸或氨基酸序列，包括一个或多个RNA分子、蛋白质或酶的部分或全部，并且可能包括或可能不包括例如决定基因表达条件的调节DNA序列，如启动子序列。基因可从DNA转录到RNA，RNA可以，或可以不转录成氨基酸序列。
此处所用的DNA“扩增”指用聚合酶链式反应(PCR)在DNA序列混合物中提高某一特定DNA序列的浓度。对PCR的详细描述请参阅Saiki等，Science(1988)239：487。在特定的实施方案中，本发明包括可通过PCR扩增的核酸，这些核酸可编码抗IGFR1抗体、抗IGFR1抗体的重链或轻链、抗IGFR1抗体的重链或轻链的可变区、抗IGFR1抗体的重链或轻链的恒定区或抗IGFR1抗体的CDR(例如CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3)。
在此所用的术语“寡核苷酸”指一种核酸，其长度一般至少10个(例如10、11、12、13或14个)核苷酸，优选至少15(例如15、16、17、18或19)个核苷酸，更优选至少20(例如20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30)个核苷酸，最优选100个以内(例如40、50、60、70、80或90个)核苷酸。
可以通过掺入诸如32P-核苷酸、3H-核苷酸、14C-核苷酸、35S-核苷酸或共价结合了一种标记物(例如生物素)的核苷酸等对寡核苷酸进行标记。在一个实施方案中，标记的寡核苷酸可用作检测核酸存在的探针。在另一个实施方案中，寡核苷酸(可标记一个，或两个都被标记)可用作PCR引物，用来克隆基因的全长序列或片段，或用来检测核酸的存在。一般地，通过合成法制备寡核苷酸，优选用核酸合成仪制备。
任何核酸(例如编码IGFR1的核酸，或编码抗IGFR1抗体的核酸或该核酸的片段或其一部分)的序列均可用本领域所熟知的方法(例如化学测序法或酶测序法)测知。DNA的“化学测序法”可指如Maxam和Gilbert所提出的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 74：560，1977)，该法应用单个碱基特异性反应使DNA随机断开。DNA的“酶测序法”可指如Sanger所提出的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 74：5463，1977)。
在此核酸的两侧可能有天然调节(表达控制)序列或者结合有异源序列，包括启动子、内部核糖体进入位点(IRES)及其他核糖体结合位点序列、增强子、应答成分、抑制子、信号序列、聚腺苷酸化序列、内含子、5’和3’非编码区等等。
“启动子”或“启动子序列”是细胞中可结合RNA聚合酶，(例如直接结合或通过其他启动子结合蛋白或物质而结合)并启动编码序列转录的一段DNA调节区。启动子一般在其3’端以转录起始位点为界，并向上游(5’端)延伸，包含可启动任何水平转录所需的最小数量的碱基或成分元件。启动子序列内部可能含有转录起始位点(例如通常可通过S1核酸酶谱确定)以及负责RNA聚合酶结合的蛋白质结合域(共有序列)。可使启动子可操作性地与其他表达控制序列结合，包括增强子和抑制子序列，或者与本发明的核酸(例如SEQ ID NO：1、3、5-7、11-13、18、22-24、26、28-30或34-36)结合。可以用来控制基因表达的启动子包括(但不限于)巨细胞病毒(CMV)启动子(美国专利5,385,839和5,168,062)、SV40早期启动子区(Benoist等Nature，1981，290：304-310)、劳氏肉瘤病毒3’长末端重复序列中所含有的启动子(Yamamoto等，Cell，1980，22：787-797)、疱疹病毒胸苷激酶启动子(Wagner等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1981，78：1441-1445)、金属硫蛋白基因调控序列(Brinster等，Nature，1982，296：39-42)；原核表达载体如β内酰胺酶启动子(Villa-Komaroff等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1978，75：3727-3731)或tac启动子(DeBoer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1983，80：21-25)；另参阅“科学美国人，1980，242：74-79”中“重组细菌中的有用蛋白质”；以及酵母或真菌来源的启动子成分，如Gal 4启动子、ADC(醇脱氢酶)启动子、PGK(磷酸甘油激酶)启动子或碱性磷酸酶启动子。
编码序列在细胞内是在转录和翻译控制序列的“控制之下”，“与之功能性结合”，或者“与之可操作性结合”，此时该序列指导RNA聚合酶，此酶介导将编码序列转录成为RNA，优选地为mRNA，然后此RNA可能被反式剪接(如果它含有内含子)，并且可任选地翻译成为由此编码序列编码的蛋白质。
术语“表达”(名词或动词)是指允许或致使基因(RNA或DNA序列)中的信息显现，例如通过激活与对应基因的转录和翻译有关的细胞功能而产生蛋白质。DNA序列在细胞内或通过细胞被表达形时“表达产物”，例如RNA(如mRNA)或蛋白质(如抗体1H3、15H12或19D12或其片段)。也可以说表达产物本身被细胞“表达”了。
术语“载体”、“克隆载体”和“表达载体”是将DNA或RNA序列导入宿主细胞中的运载工具(例如质粒)，用于转化宿主，并任选地启动转入序列的表达和/或复制。
术语“转染”或“转化”是指把核酸导入细胞内。这些术语可以指把编码抗IGFR1抗体或其片段的核酸导入细胞。导入的基因或序列可称为“克隆”。接受了被导入的DNA或RNA的细胞已“被转化了”，是一个“转化体”或“克隆”。被导入宿主细胞的DNA或RNA可为任何来源，包括与宿主细胞同种属的细胞，或者是不同种属的细胞。
术语“宿主细胞”是指被选择、修饰、转染、转化、培养或使用的或者以任何方式***作的任何生物体的任何细胞，用于通过该细胞产生一种物质，例如通过该细胞表达或复制基因，DNA或RNA序列、产生蛋白质或酶。
术语“表达***”是指宿主细胞及其相容载体，它们在适宜条件下能够表达由载体所携带，并被导入宿主细胞内的蛋白质或核酸。常用的表达***包括大肠杆菌宿主细胞和质粒载体、昆虫宿主细胞和杆状病毒载体、以及哺乳动物宿主细胞和载体。在特定的实施方案中，本发明的IGFR1或者抗体和抗原结合片段可在人胚肾细胞(HEK293)中表达。其他适宜的细胞包括CHO(中国仓鼠卵巢)细胞、Hela细胞和NIH 3T3细胞以及NSO细胞(不产生免疫球蛋白的小鼠骨髓瘤细胞系)。编码本发明抗体或抗原结合片段的核酸、sIGFR1或IGFR1可在大肠杆菌/T7表达***中高水平表达，正如美国专利4,952,496、5,693,489和5,869,320，以及DavanlooP等，Proc.Nat1.Acad.Sci.USA1984，81，2035-2039、Studier FW等，J.Mol.Biol.1986，189：113-130、Rosenberg AH等，Gene，198756：125-135以及Dunn JJ等，Gene，1988，68：259所公开的，上述专利和文献在此均被引入作为参考。
本发明慎重考虑对本发明的抗体或抗原结合片段所对应的氨基酸或核苷酸序列进行浅显的或微小的修改。本发明尤其慎重考虑编码本发明的抗体或抗原结合片段的核酸的序列保守变异体。多核苷酸序列的“序列保守突变体”是指其中某一密码子的一个或数个核苷酸的改变并不会引起该位置所编码的氨基酸的改变。本发明也慎重考虑本发明抗体的功能保守变异体。“功能保守变异体”是指蛋白质或酶中一个或多个氨基酸残基发生改变，但不影响此多肽的总体构象和功能，包括(但决不限于)把一个氨基酸残基替换成另外一个具有类似特征的氨基酸。具有特征类似的氨基酸被本领域所熟知。例如可互相替换的极性/亲水氨基酸包括天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、组胺酸、天冬氨酸和谷氨酸；可互相替换的非极性/疏水氨基酸包括甘胺酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸；可互相替换的酸性氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；可互相替换的碱性氨基酸包括组胺酸、赖氨酸和精氨酸。
本发明包括如表1所述的核酸所编码的抗IGFR1抗体及其片段，以及可以与此核酸杂交的核酸。这些核酸优选在低严格条件下杂交、更优选在中等严格条件下杂交、最优选在高严格条件下杂交，并且优选表现出IGFR1结合活性。当单链形式的核酸分子在适宜的温度和离子强度条件下能与其他的核酸分子退火结合，此核酸分子“可杂交”于另一核酸分子如cDNA，基因组DNA，或RNA(见上文Sambrook等)。温度和离子强度条件决定杂交的“严格度”。典型的低严格度杂交条件可以是55℃、5XSSC、0.1％SDS、0.25％牛奶、以及不含甲酰胺；或者30％甲酰胺、5XSSC、0.5％SDS。除了在40％甲酰胺、5X或6XSSC条件下进行外，典型的中等严格度条件与低严格度条件相似。除了在50％甲酰胺、5X或6XSSC条件下进行外，典型的高严格度条件与低严格度条件相似，并且，任选地可以在较高的温度下进行杂交(例如57℃、59℃、60℃、62℃、63℃、65℃或68℃)。SSC一般是指0.15M氯化钠和0.015M柠檬酸钠。杂交需要两个核酸含有互补序列，尽管取决了杂交的严格度，但碱基之间错配对也是可能的。使杂交核酸的合适严格度取决于核酸长度以及互补程度，这些参数为本领域所熟知。两个核苷酸序列之间相似性或同源性程度越大，此核酸可以杂交的严格度就越高。对于长度大于100个核苷酸的杂交体，计算融解温度的方程已经推导出来(见上文Sambrook等，9.50-9.51)。对于与较短的核酸，即寡核苷酸的杂交，错配的位置变得较重要，并且寡核苷酸的长度决定其特异性(见上文Sambrook等，11.7-11.8)。
本发明也包括核酸(包括核酸序列)和多肽(包括氨基酸序列)，当将其通过BLAST算法与表1中的参考核苷酸和氨基酸序列比较时，至少大约70％相同，优选地至少大约80％相同更优选地至少大约90％相同，最优选地至少大约95％相同，(例如95％、96％、97％、98％、99％、100％)，其中该算法选择可在此相应序列与相应的参考序列全长之间给出最大匹配度的参数。本发明还也包括多肽(包括氨基酸序列)，当将其通过BLAST算法与表1中的参考氨基酸序列(例如SEQ ID NO：2(例如第20-138位氨基酸)、4(例如第20-137位氨基酸)、8-10、14-16、17、25(例如第21-130位氨基酸)、27(例如第20-140位氨基酸)、31-33或37-39)比较时，至少大约70％相似，优选地至少大约80％相似，更优选地至少大约是90％相似，最优选地至少大约95％相似(例如95％、96％、97％、98％、99％、100％)，其中算法选择可在此相应序列与相应的参考序列全长之间给出最大匹配度的参数。
序列同一性是指被比较二个序列的核酸或氨基酸之间精确的匹配。序列相似性是指被比较的两个多肽的氨基酸之间二者精确匹配，此外也可以指非同一性的、生化相关的氨基酸间的匹配。上文已经讨论过性质相似并可以互换的生化相关氨基酸。
下面关于BLAST算法文献在被引入作为参考：
BLAST ALGORITHMS：Altschul，S.F.，et al.，(1990)J.Mol.Biol.215：403-410；Gish，W.，et al.，(1993)Nature Genet.3：266-272；Madden，T.L.，et al.，(1996)Meth.Enzymol.266：131-141；Altschul，S.F.，et al.，(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402；Zhang，J.，et a l.，(1997)Genome Res.7：649-656；Wootton，J.C.，et al.，(1993)Comput.Chem.17：149-163；Hancock，J.M.etal.，(1994)Comput.Appl.Biosci.10：67-70；
ALIGNMENT SCORING SYSTEMS：Dayhoff，M.O.，et al.，″A modelof evolutionary change in proteins.″in Atlas of Protein Sequence and Structure，(1978)vol.5，suppl.3.M.O.Dayhoff(ed.)，pp.345-352，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，DC；Schwartz，R.M.，et al.，″Mat-rices for detecting distant relationships.″in Atlas of Protein Sequence and Structure，(1978)vol.5，suppl.3.″M.O.Dayhoff(ed.)，pp.353-358，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，DC；Altschul，S.F.，(1991)J.Mol.Biol.219：555-565；States，D.J.，etal.，(1991)Methods 3：66-70；Henikoff，S.，etal.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：10915-10919；Altschul，S.F.，et al.，(1993)J.Mol.Evol.36：290-300；
ALIGNMENT STATISTICS：Karlin，S.，et al.，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2264-2268；Karlin，S.，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5877；Dembo，A.，et al.，(1994)Ann.Prob.22：2022-2039；and Altschul，S.F.″Evaluating thestatistical significance of multiple distinct localalignments.″in Theoretical and Computational Methods in GenomeResearch(S.Suhai，ed.)，(1997)pp.1-14，Plenum，New York.
抗体结构
已知抗体的基本结构单位一般包括一个四聚体。每个四聚体包括两对相同的肽链，每对肽链具有一条“轻”(约25kDa)链和一条“重”(约50-70kDa)链。每一链的氨基端可能包括一个由大约100-110个或更多个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。每一链的羧基端可定义为恒定区，主要负责效应功能。人轻链典型地分为κ轻链和λ轻链。并且，人重链典型地分为μ链、δ链、γ链、α链或ξ链，并将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链中，可变区和恒定区通过一个由约12个或更多个的氨基酸所组成的J区连接，重链也含有一个由10个或更多个的氨基酸所组成的D区。一般参阅《基础免疫学》第7章(Paul W主编，第2版，Raven出版社，纽约，1989年出版)(为在所有的场合被完全引入作为参考)。
每个轻链/重链对的可变区可形成抗体结合位点。因而一个完整的I gG抗体一般含有两个结合位点。除了在双功能或双特异抗体中，两个结合位点一般是相同的。
正常情况下，这些链均显示出相同总体结构，由三个高可变区(也称互补决定区或CDR)连接而成相对保守的骨架区(FR)。每对链的两个链中的CDR往往被骨架区排列起来，使之与特异的表位结合。轻链和重链从N端到C端一般均包括FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4等结构域。每个结构域中氨基酸的分布一般与下列文献的定义一致：Sequences of Proteins of Immunological Interest，Kabat，et al.；National Institutes of Health，Bethesda，Md.；5th ed.；NIH Publ.No.91-3242(1991)；Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.32：1-75；Kabat，et al.，(1977)J.Biol.Chem.252：6609-6616；Chothia，et al.，(1987)J Mol.Biol.196：901-917or Chothia，et al.，(1989)Nature 342：878-883.如Kabat和Chothia(见上文参考文献)所定义的那样，本发明所提供的抗体或抗原结合片段包括来自1H3、15H12和19D12(例如15H12/19D12LCA、15H12/19D12 LCB、15H12/19D12 HCA、SEQ ID NO：2、4、25、27、41、43和45)的轻链和重链的CDR和FR。
抗体分子
术语“抗体分子”包括(但不限于)抗体和片段，优选为其抗原结合片段。此术语包括单克隆抗体、多克隆抗体、双特异抗体、Fab抗体片段、F(ab)2抗体片段、Fv抗体片段(例如VH或V)、单链Fv抗体片段和dsFv抗体片段。并且，本发明的抗体分子可以是全人源抗体，或者是嵌合抗体。抗体分子优选为全人源单克隆抗体；抗体分子更优选为1H3、15H12或19D12。优选的抗体分子包括，一个或多个可变区和CDR其氨基酸和核酸序列列举在表1中。
本发明包括任何含有选自下面所列CDR的抗体分子：
RASQSIGSSLH(SEQ ID NO：8)；
YASQSLS(SEQ ID NO：9)；
HQSSRLPHT(SEQ ID NO：10)；
SFAMH(SEQ ID NO：14)
GFTFSSFAMH(SEQ ID NO：17)；
VIDTRGATYYADSVKG(SEQ ID NO：15)；
LGNFYYGMDV(SEQ IDNO：16)；
RASQSVSSFLA(SEQ ID NO：31)；
DASNRAP(SEQ ID NO：32)；
QQRSNWPRWT(SEQ ID NO：33)；
GFTFSNYAMH(SEQ ID NO：37)；
AIGAGGDTYYADSVKG(SEQ ID NO：38)；以及
GRHRNWYYYNKDY(SEQ ID NO：39)；
NYAMH(序列70)。
本发明的范围包括连接于任何免疫球蛋白恒定区的本发明的抗体可变区(例如表1所示的任何可变区，无论成熟的还是未加工的)。如果轻链可变区被连接于恒定区，此恒定区优选为κ链。如果重链可变区被连接于恒定区，此恒定区优选γ1、γ2、γ3或γ4，更优选γ1、γ2或γ4，而尤其优选为γ1或γ4。
本发明的抗IGFR1抗体分子优选地识别人IGFR1，优选是sIGFR1；但是本发明还包括能识别来自不同种属的IGFR1的抗体分子，优选是来自哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔、绵羊或狗)的IGFR1。本发明也包括复合于IGFR1或其任何片段(例如SEQ ID NO：19的第30-902位氨基酸)的，或者可复合于在其表面表达IGFR1或其任何部分或片段)的细胞(例如以人IGFR1或MCF7稳定转化的HEK293细胞(例如ATCC细胞系号HTB-22))的抗IGFR1抗体或其片段。可通过将抗体或抗体片段与IGFR1或IGFR1片段接触而制造出这种复合物。
在优选的实施方案中，使用含有部分人免疫***(而不是小鼠免疫***)的转基因小鼠产生抗IGFR1的全人源单克隆抗体。这些转基因小鼠(此处可称为“HuMAb”小鼠)含有一个编码人未重排重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白序列的基因小位点，以及灭活内源μ链和κ链位点的靶定突变(Lonberg，N.，et al.，(1994)Nature 368(6474)：856-859)。因而，小鼠表现出表达较少的小鼠IgM或κ，并且在应答免疫接种时，被导入的重链和轻链转基因发生类型转变和体细胞突变，以便产生出高亲和力的人源IgGκ单克隆抗体(Lonberg，N.，et al.，(1994)，supra；reviewed inLonberg，N.(1994)Handbook of Experimental Pharmacology113：49-101；Lonberg，N.，et al.，(1995)Intern.Rev.Immunol.13：65-93，and Harding，F.，et al.，(1995)Ann.N.Y Acad.Sci 764：536-546)。HuMab小鼠的制备方法为本领域所熟知，例如下列文献均有描述：Taylor，L.，et al.，(1992)Nucleic Acids Research 20：6287-6295；Chen，J.，et al.，(1993)International Immunology5：647-656；Tuaillon，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci USA90：3720-3724；Choi，et al.，(1993)Nature Genetics 4：117-123；Chen，J.，et al.，(1993)EMBO J.12：821-830；Tuaillon，et al.，(1994)J Immunol.152：2912-2920；Lonberg，et al.，(1994)Nature 368(6474)：856-859；Lonberg，N.(1994)Handbookof Experimental Pharmacology 113：49-101；Taylor，L.，et al.，(1994)International Immunology 6：579-591；Lonberg，N.，etal.，(1995)Intern.Rev.Immunol.Vol.13：65-93；Harding，F.，etal.，(1995)Ann.N.Y Acad.Sci 764：536-546；Fishwild，D.，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14：845-851 and Harding，etal.，(1995)Annals NY Acad.Sci.764：536-546；上述文献的所有内容在此被整体引入作为参考。进一步参见美国专利5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,789,650、5,877,397、5,661,016、5,814,318、5,874,299、5,770,429和5,545,807；以及国际专利申请公开号WO 98/24884、WO 94/25585、WO93/12227、WO92/22645和WO92/03918。上述公开内容在此被整体引入作为参考。
为产生全人源抗IGFR1单克隆抗体，可以用IGFR1抗原多肽(优选由SEQ ID NO：19的第30-902位氨基酸)免疫接种HuMab小鼠，正如下列文献所描述的那样：Lonberg，N.，et al.，(1994)Nature 368(6474)：856-859；Fishwild，D.，et al.，(1996)NatureBiotechnology 14：845-851以及WO 98/24884。
第一次免疫接种时小鼠的优选年龄是6-16周。例如，纯化制备的IGFR1或sIGFR1可以用来腹膜内免疫接种HuMab小鼠。小鼠也可以用稳定转化和转染了IGFR1基因的全HEK293细胞体免疫接种。“IGFR1抗原多肽”可以指能诱导抗IGFR1免疫应答(优选在HuMab小鼠中)的IGFR1多肽或其任何片段，优选SEQ ID NO：19的第30-902位氨基酸。
当初始用完全弗氏佐剂中的抗原腹膜内(1P)免疫接种小鼠，而后每隔一周(通常达总共6周)用不完全弗氏佐剂中的抗原腹膜内免疫接种小鼠时，HuMAb转基因小鼠应答一般良好。小鼠也可先用表达IGFR1的细胞(例如稳定转化的HEK293细胞)免疫接种，而后用可溶的IGFR1片段(例如SEQ ID NO：19的第30-902位氨基酸)免疫接种，接着用两种抗原交替免疫接种。可通过眼眶取血监测整个免疫接种过程中的免疫接种应答。可通过例如ELISA方法筛选出含有抗IGFR1抗体的血浆，具有足够免疫球蛋白滴度的小鼠可用来作融合实验。在处死和分离脾脏之前3天，可以通过静脉注射抗原对小鼠进行加强免疫。每种抗原预期需要进行2-3次融合。每种抗原可以免疫接种几只小鼠。例如可以免疫接种总共12只HC07和HC012品系的HuMAb小鼠。
产生全人源抗IGFR1单克隆抗体的杂交瘤细胞可通过本领域所熟知的方法制备。这些方法包括(但不限于)最早由Kohler等于1975年开发的杂交瘤技术(Nature 256：495-497)，以及三元瘤技术(Hering，et al.，(1988)Biomed.Biochim.Acta.47：211-216andHagiwara，et al.，(1993)Hum.Antibod.Hybridomas 4：15)、人源B细胞杂交瘤技术(Kozbor，et al.，(1983)Immunology Today4：72and Cote，et al.，(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A80：2026-2030)、EBV杂交瘤技术(Cole，et al.，in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96，1985)等。
优选通过标准方法分离小鼠脾细胞，并通过PEG与小鼠骨髓瘤细胞融合。所产生的杂交瘤细胞可用来筛选抗原特异性抗体的产生。例如，来自免疫接种小鼠的脾淋巴细胞单细胞悬液可通过50％PEG与1/6细胞数的P3X63-Ag8.653非分泌鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL 1580)融合，以约105个细胞/mL的浓度铺于平底微孔板中，在含有20％胎牛克隆血清、18％“653”条件培养基、5％Origen(IGEN)、4mM L-谷氨酰胺、1mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、5mM HEPES、0.055mM 2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素、50mg/ml庆大霉素和1X HAT(Sigma，融合24小时后加入HAT)的选择培养基中培养两周。两周后，细胞可在把HAT替换为HT的培养基内培养。然后可通过ELISA方法对每个孔筛选人源抗IGFR1单克隆IgG抗体。一旦出现杂交瘤细胞的广泛生长，通常10-14天以后即可观察到培养基中的抗体。可使分泌抗体的杂交瘤细胞重新铺板、再次被筛选，并且若人源抗IGFR1单克隆抗体仍呈阳性，杂交瘤细胞应通过有限稀释法至少亚克隆两次。然后稳定的亚克隆可在组织培养基中体外培养以产生少量的抗体用于表征。
本发明的抗IGFR抗体分子也可通过重组技术(例如在上文所讨论过的大肠杆菌/T7表达***中)生产。在此实施方案中，可将编码本发明抗体分子(发VH或VL)的核酸***到基于pET的质粒中，并在大肠杆菌/T7***中表达。有几种产生重组抗体的方法为本领域所熟知。用于重组生产抗体的一种方法的例子公开于美国专利4,816,567中，此处被引入作为参考。转化可以是通过任何已知的方法把多核苷酸导入宿主细胞。将异源多核苷酸导入哺乳动物细胞的方法为本领域所熟知，包括右旋糖苷介导的转染、磷酸钙沉淀法、polybrene介导的转染、原生质体融合法、电穿孔法、多核苷酸的脂质体包封、生物枪注射(biolistic injection)以及把DNA直接显微注射进细胞核内。此外，还可通过病毒载体将核酸分子导入哺乳动物细胞内。转化细胞的方法为本领域所熟知。参阅例如美国专利4,399,216、4,912,040、4,740,461和4,959,455。
可作为表达宿主的哺乳动物细胞为本领域所熟知，包括许多可从美国菌种典藏中心(ATCC)获得的永生细胞系。这些细胞系主要包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞，幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝癌细胞(例如HepG2)、549A细胞、3T3细胞、以及许多其他细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马以及仓鼠的细胞。通过测定哪株细胞系具有高表达水平而选出特别优选的细胞系。其他可用的细胞系包括昆虫细胞系(例如Sf9)、两栖动物细胞、细菌细胞、植物细胞以及真菌细胞。当把编码重链或其抗原结合部位、轻链和/或其抗原结合部位的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞时，可通过培养此宿主细胞持续足以使抗体能够在宿主细胞中表达的一段时间而产生此抗体，或更优选地，使抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中。
使用标准的蛋白质纯化方法可以从培养基中回收抗体。进一步，可使用许多已知的技术提高本发明的抗体(或其中的其他部分)在生产细胞系中的表达。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达***(GS***)是一种在某些条件下提高表达的常用途径。对GS***部分或全部论述涉及欧洲专利0 216 846、0 256 055和0 323 997，以及欧洲专利申请号89303964.4。
由不同细胞系或在转基因动物所表达的抗体很可能具有彼此不同的糖基化作用。然而，所有由本发明提供的核酸分子所编码的抗体或含有本发明所提供的氨基酸序列的抗体都是本发明的一部分，而不论抗体的糖基化方式。
″Koff″是指抗体从抗原/抗体复合物上解离的速率常数。
″Kon″是指抗体与抗原结合的速率。
″Kd″是指某一特定抗原/抗体相互作用的解离常数。Kd＝Koff/Kon。
术语“单克隆抗体”，正如此处所用的，是指从一群基本上同质的抗体中所得到的抗体，即除了有可能发生的微量的天然突变外包含此群抗体的单一抗体都是相同的。单克隆抗体是高度特异的，仅针对单一的抗原位点。
单克隆抗体的优势是可通过杂交瘤细胞培养来合成，基本上不会污染有其他的免疫球蛋白。修饰语“单克隆”表明了抗体作为一群基本同质的抗体中的一员的性质，而并不意味着需要用某种特定的方法生产抗体。如上所述，本发明所使用的单克隆抗体可用Kohler等(Nature，1975，256：495)首先提出的杂交瘤方法制备。
多克隆抗体是指在其他一种或多种非同一性的抗体存在下而生产的或者在其中共同生产的抗体。一般多克隆抗体是在产生非同一性抗体的几种其它B-淋巴细胞的存在下，从某一B-淋巴细胞中生产的。多克隆抗体通常直接从免疫接种的动物中获得。
双特异性或双功能抗体是一种人工杂交抗体，该抗体有两个不同的重链/轻链对以及两个不同的结合位点。双特异性抗体可通过多种方法制备，包括杂交瘤融合或Fab’片段交联。可参阅例如Songsivilai，et al.，(1990)Clin.Exp.Immunol.79：315-321和Kostelny，et al.，(1992)J Immunol.148：1547-1553。此外，双特异性抗体可形成为″diabodies″(Holliger，et al.，(1993)PNASUSA 90：6444-6448)或″Janusins″(Traunecker，et al.，(1991)EMBO J.10：3655-3659和Traunecker，et al.，(1992)Int.J.CancerSuppl.7：51-52).
术语“全人源抗体”是指抗体中仅含有人免疫球蛋白的蛋白质序列。如果在小鼠中、在小鼠细胞中或在源于小鼠细胞的杂交瘤细胞中生产，全人源抗体有可能含有小鼠的糖链。类似地，“鼠源抗体”是指抗体中仅含有鼠免疫球蛋白的蛋白质序列。
本发明包括“嵌合抗体”，一种包含本发明的可变区融合于或嵌合于另外一种非人源(例如小鼠、马、兔、狗、牛、鸡)抗体区(如恒定区)的抗体。这些抗体可用于在非人物种中调节IGFR1的表达或活性。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段含有抗体的VH和VL结构域，这些结构域存在于单一多肽链中。一般sFv多肽在VH和VL结构域之间进一步含有一个多肽接头，此接头可使sFv形成抗原结合所需要的结构。所描述的用于单链抗体生产的方法(美国专利5,476,786、5,132,405和4,946,778)经过修改可用于生产抗IGFR1特异的单链抗体。对sFv的综述可参阅Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，vol.113，Rosenbur g and Moore eds.Springer-Verlag，N.Y.，pp.269-315(1994).
“二硫键稳定的Fv片段”和“dsFv”是指所含有的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过二硫桥连接的抗体分子。
本发明范围内的抗体片段还包括F(ab)2片段，该片段可通过对IgG进行酶解(例如胃蛋白酶)而产生。Fab片段可通过例如以二硫苏糖醇或巯基乙胺对F(ab)2片段进行还原而产生。Fab片段是通过二硫桥连接于VH-CH1的VL-CL片段。F(ab)2片段是通过两个二硫桥连接起来的两个Fab片段。F(ab)2分子的Fab部分包括Fc区部分，二硫键存在于它们之间。
Fv片段是VL或VH区。
取决于其重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以就分为不同的类。免疫球蛋白至少主要有5类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。其中几类可进一步分为亚类(同种型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3和IgG-4；IgA-1和IgA-2。
本发明的抗IGFR1抗体分子也可连接于化学物部分。这些化学物部分主要可以是例如多聚物、放射性核素或细胞毒性因子。化学物部分优选可提高抗体在体内半衰期的多聚物。适合的多聚物包括(但不限于)聚乙二醇(PEG)(例如分子量为2kDa、5kDa、10kDa、12kDa、20kDa、30kDa或40kDa的PEG)、右旋糖苷和单甲基聚乙二醇(mPEG)。Lee等(Bioconj.Chem.，1999，10：973-981)揭示了PEG交联的单链抗体。Wen等(Bioconj.Chem.，2001，12：545-553)揭示了将抗体交联于附有放射性金属鳌合剂(二乙烯三胺五乙酸(DTPA))的PEG上。
本发明的抗体和抗体片段还可交联标记物，例如99Tc、90Y、11In、32P、14C、125I、3H、131I、11C、15O、13N、18F、35S、51Cr、57To、226Ra、60Co、59Fe、57Se、152Eu、67Cu、217Ci、211At、212Pb、47Sc、109Pd、234Th和40K、157Gd、55Mn、52Tr和56Fe。
本发明的抗体和抗体片段还可连接于荧光或化学发光标记物上，包括荧光团如稀土鳌合物、荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、异硫氰酸酯、藻红蛋白、藻青蛋白、同分异构藻青蛋白、o-苯二甲醛，荧光胺、152Eu，单磺酰，7-羟基香豆素、虫萤光蛋白、鲁米诺标记物、同分异构鲁米诺标记物、芳香族acridinium酯标记物、咪唑标记物、acridimium盐标记物，草酸酯标记物、水母发光蛋白标记物、2，3-dihydrophthalazinediones，生物素/亲和素、旋光标记物和稳定自由基。
抗体分子也可交联于细胞毒性因子，例如白喉毒素、绿脓杆菌外毒素A链、蓖麻毒素A链、莫迪素A链、α-八叠球菌、油桐蛋白及复合物(例如脂肪酸)、dianthin蛋白、Phytoiacca americana蛋白PAPI，PAPII和PAPS、苦瓜抑制物、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制物、丝林霉素、局限曲菌素、酚霉素和依诺霉素。
可以使用本领域所知的任何方法将本发明的抗体分子与各种结构部分交联，包括下列文献所描述的方法：Hunter，et al.，(1962)Nature 144：945；David，et al.，(1974)Biochemistry 13：1014；Pain，et al.，(1981)J.Immunol.Meth.40：219；以及Nygren，J.，(1982)Histochem.and Cytochem.30：407。交联抗体的方法是常规的，本领域对此十分熟悉。
修饰的抗体分子
本发明包括抗体和抗原结合片段(例如全人源抗体、sFv、dsFv、Fv、嵌合抗体)，它们包括SEQ ID NO：41、43、72、74、76或78的轻链(15H12/19D12LCA，LCB，LCC，LCD，LCE or LCF)；优选SEQ IDNO：41、43、72、74、76或78的第20-128位氨基酸(成熟的15H12/19D12LCA、LCB、LCC、LCD、LCE或LCF)。本发明也包括一种抗体分子，它包含SEQ ID NO：45或112的重链(15H12/19D12HCA，HCB)；优选SEQID NO：45或112的第20-137位氨基酸(成熟的15H12/19D12HCA、HCB)。
15H12/19D12LCA、LCB、LCC、LCD、LCE和LCF可以与任何其他的免疫球蛋白重链二聚化、优选为本发明的免疫球蛋白重链。同样地，15H12/19D12HCA或HCB可与任何轻链二聚化，优选为本发明的轻链。例如，15H12/19D12HCA或HCB可与15H12/19D12LCC、LCD、LCE或LCF二聚化。
抗体和抗原结合片段包括15H12/19D12LCA、15H12/19D12LCB、15H12/19D12LCC、15H12/19D12LCD、15H12/19D12LCE、15H12/19D12LCF、15H12/19D12HCA或15H12/19D12HCB，或其任何片段，在人体内表现出最小限度的免疫原性；因而当注入人体时，HAHA反应发生率很小。
优选的抗体链如下面所示。下划点状线的类型编码信号肽。下划实线的类型编码CDR。无线类型编码框架区。最优选的抗体链是缺乏信号肽的成熟片段。
修饰的19D12115H12轻链-C(SEQ ID NO：71)
Figure C0381768600411
Figure C0381768600412
GAA ATT GTG CTG ACT CAG AGC CCA GAC TCT CTG TCT GTG ACT CCA
GGC GAG AGA GTC ACC ATC ACC TGC CGG GCC AGT CAG AGC ATT GGT AGT AGC
TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGT CAG TCT CCA AAG CTT CTC ATC AAG
TAT GCA TCC CAG TCC CTC TCA GGG GTC CCC TCG AGG TTC AGT GGC AGT GGA
TCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGT AGC CTC GAG GCT GAA GAT GCT
GCA GCG TAT TAC TGT CAT CAG AGT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CAA
GGG  ACC AAG GTG GAG ATC AAA CGT ACG
(SEQ ID NO：72)
Figure C0381768600413
Figure C0381768600414
E  I  V  L  T  Q  S  P  D  S  L  S  V  T  P
G  E  R  V  T  I  T  C  R  A  S  Q  S  I  G  S  S
L  H  W  Y  Q  Q  K  P  G  Q  S  P  K  L  L  I  K
Y  A  S  Q  S  L  S  G  V  P  S  R  F  S  G  S  G
S  G  T  D  F  T  L  T  I  S  S  L  E  A  E  D  A
A  A  Y  Y  C  H  Q  S  S  R  L  P  H  T  F  G  Q
G  T  K  V  E  I  K  R  T
修饰的19D12/15H12轻链-D(SEQ ID NO：73)
Figure C0381768600421
GAA ATT GTG CTG ACT CAG AGC CCA GAC TCT CTG TCT GTG ACT CCA
GGC GAG AGA GTC ACC ATC ACC TGC CGG GCC AGT CAG AGC ATT GGT AGT AGC
TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGT CAG TCT CCA AAG CTT CTC ATC AAG
TAT GCA TCC CAG TCC CTC TCA GGG GTC CCC TCG AGG TTC AGT GGC AGT GGA
TCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGT AGC CTC GAG GCT GAA GAT TTC
GCA GTG TAT TAC TGT CAT CAG AGT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CAA
GGG ACC AAG GTG GAG ATC AAA CGT ACG
(SEQ ID NO：74)
Figure C0381768600423
Figure C0381768600424
E  I  V  L  T  Q  S  P  D  S  L  S  V  T  P
G  E  R  V  T  I  T  C  R  A  S  Q  S  I  G  S  S
L  H  W  Y  Q  Q  K  P  G  Q  S  P  K  L  L  I  K
Y  A  S  Q  S  L  S  G  V  P  S  R  F  S  G  S  G
S  G  T  D  F  T  L  T  I  S  S  L  E  A  E  D  F
A  V  Y  Y  C  H  Q  S  S  R  L  P  H  T  F  G  Q
G  T  K  V  E  I  K  R  T
修饰的19D12/15H12轻链-E(SEQ ID NO：75)
Figure C0381768600425
Figure C0381768600426
GAA ATT GTG CTG ACT CAG AGC CCA GGT ACC CTG TCT GTG TCT CCA
GGC GAG AGA GCC ACC CTC TCC TGC CGG GCC AGT CAG AGC ATT GGT AGT AGC
TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGT CAG GCT CCA AGG CTT CTC ATC AAG
TAT GCA TCC CAG TCC CTC TCA GGG ATC CCC GAT AGG TTC AGT GGC AGT GGA
TCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGT AGA CTG GAG CCT GAA GAT GCT
GCA GCG TAT TAC TGT CAT CAG AGT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CAA
GGG ACC AAG GTG GAG ATC AAA CGT ACA
(SEQ ID NO：76)
Figure C0381768600431
Figure C0381768600432
E  I  V  L  T  Q  S  P  G  T  L  S  V  S  P
G  E  R  A  T  L  S  C  R  A  S  Q  S  I  G  S  S
L  H  W  Y  Q  Q  K  P  G  Q  A  P  R  L  L  I  K
Y  A  S  Q  S  L  S  G  I  P  D  R  F  S  G  S  G
S  G  T  D  F  T  L  T  I  S  R  L  E  P  E  D  A
A  A  Y  Y  C  H  Q  S  S  R  L  P  H  T  F  G  Q
G  T  K  V  E  I  K  R  T
修饰的19D12/15H12轻链-F(SEQ ID NO：77)
Figure C0381768600433
Figure C0381768600434
GAA ATT GTG CTG ACT CAG AGC CCA GGT ACC CTG TCT GTG TCT CCA
GGC GAG AGA GCC ACC CTC TCC TGC CGG GCC AGT CAG AGC ATT GGT AGT AGC
TTA CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGT CAG GCT CCA AGG CTT CTC ATC AAG
TAT GCA TCC CAG TCC CTC TCA GGG ATC CCC GAT AGG TTC AGT GGC AGT GGA
TCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGT AGA CTG GAG CCT GAA GAT TTC
GCA GTG TAT TAC TGT CAT CAG AGT AGT CGT TTA CCT CAC ACT TTC GGC CAA
GGG ACC AAG GTG GAG ATC AAA CGT ACA
(SEQ ID NO：78)
Figure C0381768600435
Figure C0381768600436
E  I  V  L  T  Q  S  P  G  T  L  S  V  S  P
G  E  R  A  T  L  S  C  R  A  S  Q  S  I  G  S  S
L  H  W  Y  Q  Q  K  P  G  Q  A  P  R  L  L  I  K
Y  A  S  Q  S  L  S  G  I  P  D  R  F  S  G  S  G
S  G  T  D  F  T  L  T  I  S  R  L  E  P  E  D  F
A  V  Y  Y  C  H  Q  S  S  R  L  P  H  T  F  G  Q
G  T  K  V  E  I  K  R  T
修饰的19D12/15H12重链-A(SEQ ID NO：44)
Figure C0381768600441
Figure C0381768600442
GAG GTT CAG CTG GTG CAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA AAG CCT GGG
GGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TTT
GCT ATG CAC TGG GTT CGC CAG GCT CCA GGA AAA GGT CTG GAG TGG ATA TCA
GTT ATT GAT ACT CGT GGT GCC ACA TAC TAT GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGA
TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC TCC TTG TAT CTT CAA ATG AAC
AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACT GCT GTG TAT TAC TGT GCA AGA CTG GGG AAC
TTC TAC TAC GGT ATG GAC GTC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC
TCA
(SEQ ID NO：45)
Figure C0381768600443
Figure C0381768600444
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu VaI Lys Pro Gly
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser
Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn
Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
Ser
修饰的19D12/15H12重链-B(SEQ ID NO：111)
Figure C0381768600451
Figure C0381768600452
GAG GTT CAG CTG GTG CAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG CCC GGG
GGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TTT
GCT ATG CAC TGG GTT CGC CAG GCT CCA GGA AAA GGT CTG GAG TGG ATA TCA
GTT ATT GAT ACT CGT GGT GCC ACA TAC TAT GCA GAC TCC GTG AAG GGC CGA
TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC TCC TTG TAT CTT CAA ATG AAC
AGC CTG AGA GCC GAG GAC ACT GCT GTG TAT TAC TGT GCA AGA CTG GGG AAC
TTC TAC TAC GGT ATG GAC GTC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC
TCA
(SEQ ID NO：112)
Figure C0381768600453
Figure C0381768600454
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser
Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn
Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
Ser
基因治疗
本发明的抗I GFR1抗体也可通过基因治疗的方法施用于受试者。在基因治疗的方法中，用编码本发明抗体的核酸转化受试者的细胞。然后含有此核酸的受试者将内源性产生此抗体分子。以前Alvarez等(Clinical Cancer Research，2000，6：3081-3087)曾通过基因治疗方法将抗ErbB2的单链抗体导入受试者体内。Alvarez等所公开的方法很容易经过修改用于把编码本发明的抗IGFR1抗体的核酸导入受试者体内。
尽管编码本发明任何多肽或抗体分子的核酸均可被导入受试者，在优选的实施方案中，该抗体分子是全人源单链抗体。
该核酸可以通过任何本领域所熟知的方法被导入受试者的细胞中。在优选的实施方案中，该核酸作为病毒载体的一部分而被导入。载体来源的优选病毒的例子包括慢病毒、疱疹病毒、腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、杆状病毒、甲病毒、流感病毒和其他具有所需细胞向性的重组病毒。
许多公司商业化生产病毒载体，包括(但不限于)Avigen，Inc.(Alameda，CA；腺相关病毒载体)、Cell Genesys(Foster City，CA；反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒和慢病毒载体)、Clontech(反转录病毒和杆状病毒载体)、Genovo，Inc.(Sharon Hill，PA；腺病毒和腺相关病毒载体)、Genvec(腺病毒载体)、IntroGene(Leiden，Netherlands；腺病毒)、Molecular Medicine(反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒和疱疹病毒载体)、Norgen(腺病毒载体)、OxfordBioMedica(Oxford，United Kingdom；慢病毒载体)和Transgene(Strasbourg，France；病毒、痘苗病毒、反转录病毒和慢病毒载体)。
构建和使用病毒载体的方法为本领域所熟知(参阅例如Miller，et al.，(1992)BioTechniques 7：980-990)。优选的病毒载体是复制缺陷的，即它们不能在目标细胞中自主复制，因而不具有传染性。优选的复制缺陷病毒是最小的病毒，即病毒仅保留包装基因组产生病毒颗粒所必需的基因组序列。优选完全或几乎完全缺失病毒基因的缺陷病毒。使用缺陷病毒载体可以将其施用于细胞里特定的局部区域，而不用考虑此载体会感染其他细胞。因而特定的组织可以被特定地作为靶标。
含有减毒的或缺陷的DNA病毒序列的载体的例子包括(但不限于)缺陷疱疹病毒载体(Kanno，et al.，(1999)Cancer Gen.Ther.6：147-154；Kaplitt，et al.，(1997)J.Neurosci.Meth.71：125-132和Kaplitt，et al.，(1994)J.Neuro Onc.19：137-147)。
腺病毒是真核DNA病毒，是经过改造可将本发明的核酸导入许多细胞类型中的病毒载体。在某些情况下，减毒腺病毒载体(例如Stratford-Perricaudet等所描述的(J.Clin.Invest.，1992，90：626-630))是十分适合的。多种复制缺陷的腺病毒和最小腺病毒载体已被描述(PCT公布号WO94/26914、WO94/28938、WO94/28152、WO94/12649、WO95/02697和WO96/22378)。根据本发明的复制缺陷的重组腺病毒可以通过本领域人员所熟知的任何技术制备(Levrero等，(1991)Gene 101：195、EP 185573、Graham，(1984)EMBO J.3：2917、Graham，et al.，(1977)J.Gen.Virol.36：59)。
腺相关病毒(AAV)是一种相对较小的DNA病毒，该病毒可以通过稳定的和位点特异性方式整合进入它们所感染的细胞基因组中。它们可以感染广范类型的细胞，而不会对细胞的生长、形态或分化有任何影响，也没有迹象表明与人类的疾病有关。对将来自AAV的载体用于在体内或体外转移基因已有描述(参阅Daly，et al.，(2001)GeneTher.8：1343-1346，1245-1315；Larson，et al.，(2001)Adv.Exp.Med.Bio.489：45-57；PCT公布号WO91/18088和WO93/09239；美国专利4,797,368和5,139,941以及EP488528B1)
在另外一个实施方案中，基因可以在反转录病毒载体中被导入，例如下列文献中所描述的：美国专利5,399,346、4,650,764、4,980,289和5,124,263；Mann，et al.，(1983)Cell 33：153；Markowitz，et al.，(1988)J.Virol.，62：1120；EP 453242以及EP178220。反转录病毒是整合中的病毒，感染正在***的细胞。
慢病毒载体可用于在几种组织类型(包括脑、视网膜、肌肉、肝脏和血液)中直接递送和持续表达编码本发明抗体分子的核酸。此载体可以有效转导这些组织中***的和非***的细胞，并可保持抗体分子的长期表达。对于相关综述，可参阅Zufferey，et al.，(1998)J.Virol.72：9873-80和Kafri，et al.，(2001)Curr.Opin.Mol.Ther.3：316-326。
可获得包含慢病毒的细胞系，此细胞系为本领域普通熟知。所以很容易生产用于基因治疗的高滴度慢病毒载体。一个例子是四环素诱导的VSV-G包含假型慢病毒的细胞系，在至少3到4天内可产生滴度大于106IU/ml的病毒颗粒；参阅Kafri，et al.，(1999)(J.Virol.73：576-584)。当需要在体内或体外有效转导非***细胞，可对此由可诱导的细胞系所产生的载体进行浓缩。
辛德毕斯病毒是α-病毒属中的一员，自从最初于1953年在世界各地发现以来已对其进行了广泛的研究。基于α-病毒，尤其是辛德毕斯病毒的基因转导已在体外进行了很多研究(参阅Straus，et al.，(1994)Microbiol.Rev.，58：491-562；Bredenbeek，et al.，(1993)J.Virol.，67；6439-6446 lijima，et al.，(1999)Int.J.Cancer80：110-118以及Sawai，et al.，(1998)Biochim.Biophyr.Res.Comm.248：315-323)。对比其他正在开发的病毒来源的载体***，α-病毒载体的许多特点使它们成为一个理想的选择。这些特点包括表达构建体的快速工程构建、产生高滴度的感染颗粒储备、可感染非***细胞、以及高表达水平(Strauss，et al.，(1994)Microbiol.Rev.58：491-562)。对使用辛德毕斯病毒作基因治疗已有描述(Wahifors，et al.，(2000)Gene.Ther.7：472-480和Lundstrom(1999)J.Recep.Sig.Transduct.Res.19(1-4)：673-686)。
在另外一个实施方案中，可通过脂质体或其他转染辅助试剂(肽、多聚物等)将载体导入细胞。合成阳离子脂质可用于制备脂质体，用于在体内或体外转染编码标记物的基因(Felgner，et al.，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7413-7417和Wang，et al.，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7851-7855)。在转移核酸有用的脂质化合物和组合物在PCT公布号WO95/18863和WO96/17823以及美国专利5,459,127中有描述。
也有可能将载体作为裸DNA质粒导入体内。用于基因治疗的DNA载体可通过本领域所熟知的方法导入所需的宿主细胞中，例如电穿孔法，显微注射法、细胞融合法、DEAE右旋糖苷法、磷酸钙沉淀法、使用基因枪或使用DNA载体转移器(参阅例如Wilson，et al.，(1992)J.Biol.Chem.267：963-967；Williams，et al.，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA88：2726-2730)。也可使用受体介导的DNA递送方法(Wu，et al.，(1988)J.Biol.Chem.263：14621-14624)。美国专利5,580,859和5,589,466公开了将外源DNA序列导入哺乳动物中的方法，该方法不用转染辅助试剂。最近描述了一种相对低电压的高效体内DNA转移方法，称为电转移器(Vilquin，et al.，(2001)GeneTher.8：1097；Payen，et al.，(2001)Exp.Hema to.29：295-300；Mir(2001)Bioelectrochemistry 53：1-10；PCT公布号WO99/01157、WO99/01158和WO99/01175)。
药剂组合物
本发明的抗体或抗原结合片段与可药用的载体一起，可被掺合成为适于对患者体内施用的药剂组合物。尽管本发明的范围包括了可通过任何途径(例如通过口、眼、局部或肺(吸入))施用于受试者的药剂组合物，但优选通过肠胃外的施用途径，例如瘤内注射、静脉注射、皮下注射或肌内注射。在优选的实施方案中，本发明的药剂组合物包括1H3、15H12、19D12、15H12/19D12LCA、15H12/19D12LCB、15H12/19D12LCC、15H12/19D12LCD、15H12/19D12LCE、15H12/19D12LCF、15H12/19D12HCA或15H12/19D12HCB与可药用载体。
关于制剂配方的一般信息，参阅例如Gilman，et al.，(eds.)(1990)，The Pharmacological Bases of Therapeutics，8th Ed.，Pergamon Press；A.Gennaro(ed.)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Edition，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania.；Avis，etal.，(eds.)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medications Dekker，New York；Lieberman，et al.，(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms： Tablets Dekker，New York；and Lieberman，et al.，(eds.)(1990)，Pharmaceutical Dosage Forms：Disperse Systems Dekker，New York，Kenneth A.Walters(ed.)(2002)Dermatological andTransdermal Formulations(Drugs and the Pharmaceutical Sciences)，Vol 119，Marcel Dekker。
可药用载体是常规的，为本领域所熟知。例子包括生理相容的水性和非水性载体、稳定剂、抗氧化剂、溶剂、分散介质、外衣层、抗微生物剂、缓冲液、血清蛋白、等渗和吸收减缓剂等类似物。优选的载体要适于注射进入受试者的体内。
可用于本发明药物组合物的合适的水性和非水性载体的例子包括水、乙醇、多羟基化合物(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等等)及它们的适当组合、植物油，例如橄榄油、以及可注射的有机酯，例如油酸乙酯。通过使用例如外衣材料(如卵磷脂)、通过在分散状态保持所需的颗粒大小，以及通过使用表面活性剂，可保持合适的流动性
可加入稳定剂(例如α，α-海藻糖)使本发明的抗体免于在干燥或冻干时的降解效应。
可药用的抗氧化剂的例子包括：水溶的抗氧化剂如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸钠、亚硫酸钠等等；油溶的抗氧化剂如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、棓酸丙酯，α-维生素E等等；以及金属鳌合剂如柠檬酸、EDTA、山梨醇、酒石酸、磷酸等等。
通过灭菌程序和加入各种抗菌剂如EDTA、EGTA、paraben、氯代丁醇、山梨酸酚等可确保没有微生物的存在。
适于在本发明的药剂组合物中加入的缓冲液包括基于L-组氨酸的缓冲液、基于磷酸盐的缓冲液(例如pH≈7的磷酸盐缓冲盐水，即PBS)、基于山梨酸酯的缓冲液或基于甘氨酸的缓冲液。
适于在本发明的药物组合物中加入的血清蛋白包括人血清白蛋白。
也可在本发明的药物组合物中加入等渗剂，例如糖、醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液态聚乙二醇、甘露醇或山梨醇)、柠檬酸钠或氯化钠(例如缓冲盐水)。
可通过加入吸收延缓剂如单硬脂酸铝和/或明胶导致注射药物剂型的延缓吸收。
还可在甘油、液态聚乙二醇以及它们的混合物和油脂中制备分散剂型。
可药用载体包括无菌的水性溶液或分散剂以及无菌粉末，用于临用时制备无菌注射溶液或分散物。
通过在合适的溶剂中(任选地也可加入上述所列成分的一种或它们的组合)掺入所需量的本发明的抗体或抗原结合片段，而后需要时通过微孔过滤除菌可制备无菌的注射液。一般将抗体分子加入到含有基础分散介质和上述所需的其他成分的无菌容器中，而制备分散组合物。
当需要制备无菌注射液所需的无菌粉末时，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，可从之前无菌过滤的溶液中产生含有活性成分和任何其他所需成分的粉末。
本发明的抗体或抗原结合片段也可口服给药。口服的药物组合物可以除结合组合物之外还包括添加剂，如淀粉(例如土豆、玉米或小麦淀粉或纤维素)、淀粉衍生物(例如微晶纤维素或硅土)、糖(如乳糖)、滑石粉、硬脂酸盐、碳酸镁或磷酸钙。为确保病人的消化***可以很好地耐受含有本发明的抗体或抗原结合片段的口服组合物，也可以加入粘膜形成剂或树脂。也可将抗体或抗原结合片段配制在胃液不溶性胶囊中而提高耐受。本发明药物组合物胶囊剂型的一个例子是通过在标准的两节式硬明胶胶囊中填充粉末形式的本发明抗体或抗原结合片段、乳糖、滑石粉和硬脂酸镁而制备。对口服的免疫球蛋白已有描述(Foster，et al.，(2001)Cochrane Database System rev.3：CD001816)。
本发明的抗体或抗原结合片段也可包含在局部施用的药物组合物中。适于局部施用的剂型包括能够穿透皮肤而到达治疗部位的液体或半液体的制备物，例如擦剂、洗液、霜剂、膏剂或糊剂，以及适于眼部、耳部或鼻部使用的滴液。
依照本发明的滴液可包括无菌水性或油性溶液或悬浮液，可通过将抗体或抗原结合片段溶于含有合适的杀细菌和/或杀真菌和/或任何其他适宜的保护剂的水溶液中来制备，并且优选含有表面活性剂。然后所产生的溶液可通过过滤而澄清。
依照本发明的洗液包括适于皮肤或眼部使用的剂型。眼部洗液可含有无菌的水溶液，也可含有杀菌剂，可通过与滴液类似的方法制备。用于皮肤的洗液或擦剂也可包括加快干燥和清凉皮肤的药剂，例如乙醇或丙酮，和/或湿润剂如甘油或油脂如蓖麻油或花生油。
依照本发明的霜剂、膏剂或糊剂是外用的活性成分半液体剂型。其制备可通过在合适机器的帮助下，将本发明的抗体或抗原结合片段以精细分散的形式或粉末形式，单独地，或溶于或悬于水性或非水性流体中而与油脂或非油脂基质混合。基质可含有碳氢化合物，例如硬的、软的或液体的石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂；粘胶；天然油如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄榄油；羊毛脂或其衍生物、或脂肪酸如硬脂酸或油酸以及醇如丙二醇或大粒凝胶。剂型中可掺入任何适宜的表面活性剂如阴离子、阳离子或非离子表面活性剂如山梨聚糖酯或其聚氧乙烯衍生物。也可加入悬浮剂如天然橡胶、纤维素衍生物或无机物如silicaceous silicas，以及其他成分如羊毛脂。
本发明的抗体和抗原结合片段也可通过吸入的方式施用。对吸入适宜的药物组合物可以是气溶胶。本发明的抗体和抗原结合片段的吸入式药物组合物的一个例子可包括：一个约15-20ml的气溶胶容器，含有本发明的抗体或抗原结合片段和分散于推进剂(如氟利昂，优选与1，2-二氯四氟乙烷和二氟氯甲烷联用)中的润滑剂，如聚山梨醇酯85或油酸。优选地是该组合物包含在适于鼻内或口腔吸入给药的适合的气溶胶容器之中。
本发明另外一个实施方案中，药物组合物可通过联合治疗的方式施用。例如，联合治疗可包括本发明的药物组合物与一种或多种抗癌治疗剂(例如烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝***抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管形成剂、抗***物质、抗雄激素物质、抗体治疗剂或免疫调节剂)相结合。“抗癌治疗剂“是一种物质，当施用于受试者时，可治疗或阻止受试者体内的癌症发展。
本发明的组合物可与一种或多种抗癌治疗方法(例如放射治疗或外科肿瘤切除术)结合施用。“抗癌治疗方法”是指施用于受试者的方法，可以治疗或减少受试者癌症的发生。当使用联合治疗时，本发明的抗体或抗原结合片段，或其药物组合物可以配方成可同时施用的单一组合物，或者分别配方成两个或多个组合物(例如一个试剂盒)。并且，该抗体或抗原结合物可在与使用其他治疗剂或治疗程序，不同的时间施用于受试者；例如可在一个给定的时间段内以几次间隔非同时地进行每种给药。
“烷化剂”是指可在细胞内交联或烷化任何分子(优选是核酸分子，如DNA)的物质。烷化剂的例子包括氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、melphalen、chlorambucol、尿嘧啶氮芥、雌莫司汀、噻替哌、白消安、罗氮芥、亚硝脲氮芥、链脲霉素、达卡巴嗪、顺铂、卡铂和六甲密胺。
“抗代谢物”是指可通过干扰某些活性，通常是DNA的合成，而抑制细胞生长和/或代谢的物质。抗代谢物的例子包括，氨甲蝶呤、5-氟脲嘧啶、氟尿苷、5-氟脱氧尿苷、卡培他滨、氟达拉滨、胞嘧啶***糖苷、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、吉西他滨、克拉屈滨、脱氧助间型霉素和喷司他丁。
“抗肿瘤抗生素”是指能阻止或抑制DNA、RNA和/或蛋白质合成的化合物。抗肿瘤抗生素的例子包括阿霉素、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、戊柔比星、米托蒽醌、放线菌素D、光辉霉素、普卡霉素、丝裂霉素C、博来霉素和甲苄肼。
“有丝***抑制剂”阻止细胞周期和有丝***的正常进行。一般地，微管抑制剂(如紫杉醇和多西他赛)可抑制有丝***。长春碱类物质如长春碱、长春新碱和长春烯碱也可抑制有丝***。
“染色质功能抑制剂”是指可抑制染色质塑型蛋白如拓扑异构酶I和拓扑异构酶II正常功能的物质。染色质功能抑制剂的例子包括拓扑替康、伊立替康、依托泊苷和替尼泊苷。
“抗血管生成剂”是指可抑制血管生长的任何药物、化合物、物质或药剂。抗血管生成剂的例子包括(但不限于)丙亚胺、马马司他、COL-3、neovastat、BMS-275291、沙立度胺、squalamine、内皮抑制素、SU5416、SU6668、干扰素-α、EMD121974、白细胞介素-12、IM862、血管抑制素和vitaxin。
“抗***”或“抗***剂”是指可降低、拮抗或抑制***活性的任何物质。抗***剂的例子是三苯氧胺、托瑞米芬、雷洛昔芬、着洛西芬、iodoxyfene、阿那曲唑、来曲唑和依西美坦。
“抗雄激素”或“抗雄激素剂”是指可降低、拮抗或抑制雄激素活性的任何物质。抗雄激素剂的例子是氟利坦、尼鲁米特、比卡鲁胺、螺内酯、环丙孕酮、非那雄胺和西咪替丁。
可与本发明的抗体或抗原结合片段一同施用的抗体治疗剂包括司徒曼布(例如herceptia)(参阅例如Sliwkowski，et al.，(1999)Semin.Oncol.26(4 Suppl 12)：60-70)、vitaxin和利妥希玛。
“免疫调节剂”是指可刺激免疫***的物质。免疫调节剂的例子包括denileukin diftitox、与5-氟脲嘧啶、干扰素和白细胞介素-2联用的左旋咪唑。
“放射治疗”是指通过施用致电离辐射(优选在肿瘤部位)而治疗疾病如癌症。可施用的致电离辐射的例子包括X射线、γ射线(例如镭、铀或钴60所发射的)以及粒子束射线(例如质子、中子、介子或重离子)。
剂量
本发明的抗体或抗原结合片段优选以“治疗有效的剂量”施用于受试者，优选能在任何程度上抑制由IGFR1介导的疾病或病症(例如肿瘤生长)，与未治疗者相比，优选至少抑制约20％，更优选至少约40％，尤其更优选至少约60％，最优选至少约80％-100％。本发明的抗体或抗原结合片段抑制癌症的能力，可在能预测在人肿瘤中的效率的动物模型中评价。或者，也可通过熟练的操作员所熟知的试验(见下文)测定本发明的抗体或抗原结合片段在体外抑制肿瘤细胞生长的能力而评价组合物的这种特点。本领域普通的技术人员根据诸如受试者的体重、症状的严重性以及所选择的特定的组合物或给药途径等因素能够确定这种剂量。
可调节剂量范围而得到所期望的最佳反应(例如治疗性反应)。例如，可以施用单一的大剂量、也可以在一段时间而施用几个分开的剂量、或者根据治疗情况的紧急程度成比例的增加或减少剂量。尤其有益的是将非肠胃给药的组合物配方为单位剂量的形式，以易于施用并使剂量一致。
本领域一般技术水平的医生或兽医可以容易地决定和开出所需药物组合物的有效剂量。例如，医生或兽医可以从低于为达到期望的治疗效果的剂量，给予开出药物组合物中所用的本发明的抗体或抗原结合片段，并且逐步提高剂量，直到达到期望的效果。一般地，本发明的组合物适宜的每日剂量，可以是能够产生治疗效果的化合物的最低用量。这一有效剂量一般取决于上述的各种因素。优选的给药途径是注射，优选的部位是接近靶标(例如肿瘤)。根据需要，药物组合物的有效每日剂量可以在全天以适当间隔内分2、3、4、5、6或更多次亚剂量分别施用。
治疗方法和给药
受试者中任何由IGFR1提高的表达或提高的活性，或者由其配体(例如IGF-I或IGF-II)的提高的表达所介导的，并且可通过调节IGFR1的配体结合、活性或表达而治疗或预防的疾病或病症，均可用本发明的抗体或抗原结合片段，以及含有本发明的抗体或抗原结合片段的药物组合物治疗或预防。优选地，这种疾病或病症是由提高水平的IGFR1、IGF-I或IGF-II所介导，并可通过降低IGFR1的配体结合、活性(例如自磷酸化活性)或表达而治疗或预防。优选地，这种疾病或病症是恶性肿瘤，更优选地是以表达IGFR1的肿瘤为特征的恶性肿瘤，例如(但不限于)膀胱癌、Wilm癌、骨癌、***癌、肺癌、结直肠癌、乳腺癌、***、滑膜肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性***增生(BPH)、合并转移性良性癌的腹泻以及血管活性肠肽分泌肿瘤(例如VIPoma或Verner-Morrison综合征)。本发明的抗体分子也可用于治疗肢端肥大症。有报道通过拮抗IGF-I而治疗肢端肥大症(Drake，etal.，(2001)Trends Endocrin.Metab.12：408-413)。
通过施用本发明的抗IGFR1抗体还可治疗的其他非恶性医学病症包括巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管平滑肌再狭窄或微血管异常增生，例如所发现的糖尿病并发症，尤其在眼部。
术语“受试者”可指任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)，最优选人。
在优选的实施方案中，本发明的抗体和抗原结合片段以及其药物组合物是通过侵入性途径(例如注射，参见上文)施用。通过非侵入性途径(参见上文)给药法也在本发明的范围之内。
可通过本领城所熟知的医用器械施用组合物。例如，在优选的实施方案中，本发明的药物组合物可通过以皮下针头注射的方式施用。
本发明的药物组合物也可通过无针头的皮下注射器械施用，此器械公布于美国专利5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824或4,596,556中。
对本发明有用的为大家所熟知的植入器或组件的例子包括：美国专利4,487,603，公布了一种能以可控速率分配药物的可植入的微灌输泵；美国专利4,447,233，公布了一种能以精确灌输速率递送药物的药物灌输泵；美国专利4,447,224，公布了一种用于持续递送药物的流速可变的可植入灌输装置；美国专利4,439,196，公布了一种有多舱间隔室的等渗药物递送***。许多其他的植入器、递送***、以及组件等为本领域的人员所熟知。
测定法
抗IGFR1抗体可用于在体内或体外检测生物样本中的IGFR1(参阅例如Zola，Monoclonal Antibodies：A Manual of Techniques，pp.147-158(CRC Press，Inc.，1987))。抗IGFR1抗体可用于常规的免疫试验中，包括(但不限于)ELISA、RIA、FACS、组织免疫组化、蛋白质印迹试验(Western blot)或免疫沉淀。本发明的抗IGFR1抗体可用于检测来自人体的IGFR1。
本发明提供了一种检测生物样品中IGFR1的方法，包括将生物样品与本发明的抗IGFR1抗体接触，检测结合于IGFR1的抗IGFR1抗体，从而可以显示出生物样品中IGFR1的存在.在一个实施方案中，用可检测标记物直接标记抗IGFR1抗体，此抗体可被直接检测。在另一实施方案中，抗LGFR1抗体(第一抗体)不被标记，而对第二抗体或其他可结合于IGFR1的分子进行标记。正如本领域人员所熟知的，应选择能特异性结合特定的种属和类型第一抗体的第二抗体。例如，如果抗IGFR1抗体是人源IgG，那么第二抗应是抗人IgG。可通过检测标记的第二抗体的存在而检测出生物样品中抗IGFR1/IGFR1复合物的存在。其他能结合于抗体(如抗IGFR1抗体)的分子包括(但不限于)蛋白A和蛋白G，两者均可从市场获得，例如从Pierce Chemical Co.(Rockford，IL)。
前文已经公布了对抗IGFR1抗体或第二抗体的合适标记物，包括多种酶、辅基基团、荧光材料、化学发光材料、磁性试剂以及放射活性材料。合适的酶的例子包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的例子包括链亲合素/生物素和亲合素/生物素；合适的荧光材料的例子包括7-羟基香豆素、荧光素、异硫氰酸酯荧光素、罗丹明、dichlorotriazinylamine荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；化学发光材料的例子包括鲁米诺；磁性试剂的一个例子是钆；合适的放射活性材料的例子包括125I、131I、35S或3H。
在另外一个实施方案中，可使用标记了可检测物质的IGFR1标准品和未标记的抗IGFR1抗体，通过竞争免疫试验测定生物样品中的IGFR1。在此试验中，生物样品、标记的IGFR1标准品以及抗IGFR1抗体被混合在一起，测定出结合于未标记抗体的被标记IGFR1的量。生物样品中IGFR1的量与结合于抗IGFR1抗体的被标记IGFR1标准品的量成反比。可将上面公开的免疫测定方法用于许多目的。在一个实施方案中，抗IGFR1抗体可用于检测培养细胞中IGFR1的量。在优选的实施方案中，抗IGFR1抗体可用于确定用多种化合物处理细胞后，在细胞表面酪氨酸磷酸化的水平、IGFR1的酪氨酸自磷酸化和/或IGFR1的量。这一方法可用来检测能够激活或抑制IGFR1的化合物。在此方法中，一份细胞样品用待测化合物处理一段时间，而另一样品不作处理。如果要检测酪氨酸自磷酸化，可使细胞裂解，用免疫测定法(例如上文所描述的)测定IGFR1的酪氨酸磷酸化。若要测量IGFR1的总体水平，可把细胞裂解，用上文描述的一种免疫测定法测定IGFR1的总体水平。
确定IGFR1酪氨酸磷酸化或测量IGFR1水平的优选免疫测定法是ELISA或Western印迹试验。若仅检测细胞表面的IGFR1水平，细胞无需裂解，可使用上文描述的一种免疫测定法检测。确定细胞表面IGFR1水平的优选免疫测定法包括以下步骤：用可检测的标记物标记细胞表面蛋白，例如用生物素或125I，用抗IGFR1抗体免疫沉淀IGFR1、以及然后检测标记的IGFR1。用于确定IGFR1定位(例如细胞表面水平)的另外一个优选免疫测定法是通过使用免疫组织化方法。ELISA、RIA、Western blot、免疫组化、整合膜蛋白的细胞表面标记以及免疫沉淀等方法为本领域所熟知。此外，免疫测定法可放大至高产量筛选，以使检测大量化合物对IGFR1的激活或抑制。
本发明的抗IGFR1抗体也可用于确定组织中或源于组织的细胞中IGFR1的水平。在优选的实施方案中，该组织是疾病组织。在更为优选的实施方案中，该组织是肿瘤或其活检标本。在此方法的优选实施方案中，组织或其活检样品取自病人。此组织或活检样品然后被用于免疫测定，通过上文讨论过的方法检测例如IGFR1的水平、IGFR1的细胞表面水平、IGFR1酪氨酸自磷酸化的水平或IGFR1的定位。此方法可用于确定肿瘤是否水平高表达IGFR1。
上文描述的诊断法可用于确定肿瘤是否高表达IGFR1，这可指示出肿瘤是否会对抗IGFR1抗体治疗反应良好。该诊断方法也可以用来确定肿瘤是潜在的癌性的(若表达高水平的IGFR1)还是良性的(表达低水平的IGFR1)。进一步，此诊断方法可用于确定用抗IGFR1抗体治疗是否会使肿瘤表达较低水平的IGFR1和/或表现出较低水平的酪氨酸自磷酸化，因而可用于确定治疗是否成功。一般地，确定抗IGFR1抗体是否会降低酪氨酸磷酸化的方法包括以下步骤：测定待检细胞或组织中酪氨酸磷酸化的水平，将细胞或组织与抗IGFR1抗体或其抗原结合片段共孵育，然后再次测定细胞或组织中酪氨酸磷酸化的水平。可检测IGFR1或其他蛋白质的酪氨酸磷酸化。该诊断方法也可用于确定组织或细胞是否不表达足够高水平的IGFR1或足够高水平被激活的性IGFR1，这可以是侏儒症、骨质疏松症或糖尿病人的情况。诊断出IGFR1或活性IGFR1水平太低，可激活抗IGFR1抗体、IGF-1、IGF-2或其他治疗剂，提高IGFR1的水平或活性而进行治疗。
本发明的抗体可用于在体内定位表达IGFR1的组织和器官。在优选的实施方案中，抗IGFR1抗体可用于定位表达IGFR1的肿瘤。本发明的抗IGFR1抗体的优点是它们在给药后不会产生免疫反应。此方法包括下列步骤：将抗IGFR1抗体或其药物组合物施用于需要此诊断试验的病人，并且对病人进行影像分析以确定表达IGFR1组织的位置。影像分析为医学领域所熟知，包括(但不限于)X射线分析、核磁共振(MRI)或CT。在此方法的另外一个实施方案中，是从病人获得活检样品以确定待检组织是否表达IGFR1，而不对病人进行影像分析。在优选的实施方案中，抗IGFR1抗体可用能在病人体内造影的可检测试剂标记。例如，抗体可用造影剂如钡标记，能用于X射线分析，或用磁性造影剂如钆鳌合物标记，能用于MRI或CE。其他标记试剂包括(但不限于)放射性同位素，如99Tc。在另一个实施方案中，抗IGFR1抗体不被标记，而通过施用能结合于抗IGFR1抗体且能被检测的第二抗体或其他分子而被显影。
实施例
下列实施例用于进一步描述本发明，而不应被解释成以任何方式限制本发明的范围。
实施例1：全人源抗IGFR1抗体的构建
1.0.前言
对人IGFR1特异的全人源单克隆抗体是从Hco7基因型(见下文)的HuMab小鼠中生产，该小鼠免疫接种了重组sIGFR1和IGFR1转染的细胞。美国专利5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,874,299和5,877,397以及文献Harding，et al.，(1995)Ann.NY Acad.Sci.764：536-546中提供了对Hco7小鼠的详细描述。抗体1H3、15H12和19D12分离自HuMab小鼠(此处称作#23716)，此小鼠根据对免疫接种抗原存在抗原特异性血清IgG滴度达到25600而被选择用于融合。此1H3、15H12和19D 12抗体均被发现结合于IGFR1。
2.0材料和方法以及结果
2.1.抗原
2.1.1.小鼠用两种形式的抗原免疫接种：(1)活细胞(IGFR1转染的HEK293细胞)和(2)纯化的蛋白质(sIGFR1；NSO细胞表达的重组蛋白，包括IGFR1的α-亚基和β-亚基的胞外功能区)。此蛋白质的生物活性形式是以糖基化的形式。
2.1.2.以可溶性IGFR1抗原非免疫接种三次，并且用纯化的IGFR1以2.67mg/ml的浓度在小鼠的尾部静脉进行最后一次加强免疫。使可溶性IGFR1与完全的或不完全的弗氏佐剂混合，并将0.2cc备好的抗原注射到小鼠的腹腔。最后的尾部免疫用溶于无菌PBS中的可溶性IGFR1。
2.1.3.还以IGFR1DNA转染的HEK293细胞进行免疫接种。具体地说，每只小鼠通过腹腔注射免疫接种0.2cc的无菌生理盐水，此盐水中含有1.0-2.0×107个表达IGFR1的HEX293细胞。
2.2.转基因小鼠
2.2.1.小鼠在过滤笼中饲养，在免疫接种、取血时，以及产生融合的当天，应该评测出小鼠处于良好的生理状况。
2.2.2.产生所选择杂交瘤的小鼠是雄性的(小鼠识别号：#23716)，基因型为(CMD)++；(Hco7)11952+；(JKD)++；(KCo5)9272+。单一转基因标识在括号中，紧接着是随机整合的转基因的谱系号。符号++和+表示纯合的或是杂合的，然而由于小鼠通常用基于PCR的试验方法筛选，使得我们对随机整合的人Ig转基因不能区分是纯合的还是杂合的，对于这些元件事实上是纯合的小鼠可给予+标记。
2.3.免疫接种程序和进度
2.3.1.免疫接种进度列于下表。
表2.小鼠免疫进度表
  天   免疫接种：佐剂，抗原   取血和滴度测量<sup>1</sup>
第1天 含1.0×10<sup>7</sup>个IGFR1转染的HEK293活细胞的盐水
  第15天   完全弗氏佐剂，sIGFR1(20μg)
  第29天   含1.0×10<sup>7</sup>个IGFR1转染的HEK293活细胞的盐水
  第37天   测定抗体滴度
  第43天   不完全弗氏佐剂，sIGFR1(约40μg)
  第54天   测定抗体滴度
  第57天   含1.0×10<sup>7</sup>个IGFR1转染的HEK293活细胞的盐水
  第96天   含1.0×10<sup>7</sup>个IGFR1转染的HEK293活细胞的盐水
  第103天   测定抗体滴度
  第112天   完全弗氏佐剂，sIGFR1(25μg)
  第126天   测定抗体滴度
  第128和129天   用sIGFR1在尾部静脉作最后加强<sup>2</sup>
1滴度信息显示如下。
2第131天进行融合
表3.表2所描述(见上表)的23716小鼠在免疫接种期间IGFR1特异性抗体的滴度
  天   滴度
  37   100
  54   800
  103   6400
  126   25600
2.4.杂交瘤的制备和检测
2.4.1.将SP2/0-AG14骨髓瘤细胞系(ATCC CRL 1581)用于融合。把原有的ATCC冻存管溶化并培养增殖。从此增殖物制备储存种子的冻存管。细胞保持培养6-8周，每周传代两次。
2.4.2.将含有10％FBS、抗生素抗真菌剂(100X)和0.1％L-谷氨酰胺的高葡萄糖DMEM培养基用于培养骨髓瘤细胞。杂交瘤生长培养基中补加的补充成分包括：5％Origen-杂交瘤克隆因子(FischerScientific；Suwanee，GA)、4.5×10-4M丙酮酸钠、HAT(1.0×10-4M次黄嘌呤，4.0×10-7M氨基喋呤，1.6×10-5M胸苷)或HT(1.0×10-4M次黄嘌呤，1.6×10-5M胸苷)以及优质胎牛血清。
2.4.3.来自#23716小鼠的脾脏大小正常，得到5.73×108个活细胞。
2.4.4.按照下列步骤对脾细胞进行融合：
1.将约10ml DMEM+10％FBS加入50mL管中。
2.处死静脉加强免疫的小鼠。
3.将小鼠转到通风厨中的纸巾上。
4.用乙醇浸泡小鼠，将其左侧朝上，右侧朝下放置。
5.在脾脏区城的上部皮肤上切开一小口。
6.用双手将皮肤撕开。
7.再次浸泡乙醇。
8.用无菌器具打开腹膜。
9.将剪刀的尖端***脾脏下方，张开剪刀，以致给用镊子夹取脾脏留出空间。
10.取出脾脏，置于含有DMEM+10％FBS的管中。转移到无菌组织培养室中。
11.在无菌通风橱中，在2个60mm培养皿中各加入大约7mL无血清的DMEM。
12.将脾脏转移到第一个培养皿中。
13.用无菌器具从脾脏上除去任何附着物。
14.将无菌匀浆器的底座放入试管架中(用于支撑)。
15.将干净的脾脏放入匀浆器。
16.加入5mL DMEM，并匀浆4次。而后倒入一50mL的离心管中。
17.再于匀浆器中加入5-6mL的DMEM，再次匀浆3-4次。
18.倒入上述的同一个离心管中。
19.用离心机以1000rpm离心细胞10分钟。
20.去掉上清，倒出沉淀，并重悬于DMEM。
21.计数脾细胞。
22.将合适体积的SP2/0细胞(每1SP2/0细胞6个脾细胞)转到一个50mL的离心管中，记录其体积。
23.用DMEM调节脾细胞的体积，使离心平衡更为容易。
24.用离心机以1000rpm离心细胞10分钟。
25.去除上清，倒出沉淀，并以30-40mL DMEM洗涤培养基(无血清)重悬浮。把所有细胞合并到一个管中。
26.同上离心。
27.去除上清，重悬沉淀。
28.在含有37℃水的烧杯中缓慢摇动试管的同时，在约1分钟之内加入约1.2mL的PEG(聚乙二醇)。
29.让试管静置90秒钟，而后在3分钟内加入15mL DMEM洗涤培养基。
30.同上离心。
31.去除上清，轻轻地重悬沉淀。
32.在管中加入约10mL HAT培养基。
33.将细胞被吸到全体积的HAT培养基中。在平板接种以前使细胞在培养箱中静置30-60分钟。
34.将细胞平板接种于96孔培养板中，200μL/孔(每个96孔板中约含1×107个细胞)。
35.在第7天用HT培养基喂养细胞，250μL/孔。(HT培养基与HAT培养基相同，只是除去了氨基喋呤)。
2.4.5.按照下列程序，在融合后7-10天用ELISA初步筛选人IgGκ抗体。
1.用1μg/mL溶于PBS中的抗人κ链抗体或抗人γ链抗体包被酶联板过夜，每孔包被50μL。储存于冰箱中。
2.排空甩干酶联板，用1X PBST(含Tween的PBS)+5％鸡血清于室温封闭1小时(100μL/孔)。
3.排空甩干酶联板，用PBS通过洗瓶手工洗涤3遍或通过洗板机洗涤3遍。若使用了洗瓶，在纸巾上吸干酶联板。
4.用标准品检测克隆的产出水平。对待测样品进行稀释(第1孔1∶10稀释，而后整板都2倍稀释)。人IgG标准品从1000ng/mL开始，整板2倍稀释。留下一些空白孔：加入用于稀释的1×PBST+5％鸡血清，100μL/孔。室温孵育1小时。一般将融合筛选物和亚克隆1∶2稀释于封闭缓冲液中进行检测。
5.重复洗涤步骤3。
6.用1×PBST+5％鸡血清1∶5000稀释第二抗体HRP-抗人IgG-Fc试剂或HRP-抗人κ链抗体，加入100μL于每孔中。室温孵育1小时。
7.重复洗涤步骤3两遍。
8.每板使用10mL pH4.0的柠檬酸缓冲液、80μL ABTS、8μL H2O2进行显色。
9.室温孵育30分钟至1小时。在OD415nm-490nm处读板。
溶液：
1×PBST＝1×PBS+0.05％吐温-20。
柠檬酸缓冲液＝21gm/L柠檬酸，14.2gm/L无水磷酸氢二钠，pH4.0
ABTS＝溶于柠檬酸缓冲液中的27.8mg/mL 2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)二铵盐，分成1mL小份冻存。
酶联板＝96孔试验板。
与杂交瘤1H3、15H12和19D12相应的孔中检测出阳性的ELISA信号，表明这些杂交瘤产生人IgG抗体。
2.4.6.而后根据如下步骤，在可溶性IGFR1包被的ELISA酶联板上，筛选与人IgGκ阳性孔相应的杂交瘤培养上清：
1.以溶于1×PBS中的IGFR1(1.0μg/mL)包被酶联板过夜，50μL/孔。储存于冰箱中。包被板需要5mL。
2.排空甩干酶联板，用1X PBST(含Tween的PBS)+5％鸡血清于室温封闭1小时(100μL/孔)。
3. 排空甩干酶联板，用PBS通过洗瓶手工洗涤3遍或通过洗板机洗涤3遍。若使用了洗瓶，在纸巾上吸干酶联板。
4. 用封闭缓冲液作为稀释剂。待测血清，在酶联板的最上一排开始1∶50稀释，并向板下顺次进行每排2倍的稀释(稀释7次)。室温孵育1小时。对于亚克隆筛选，将1∶1稀释于封闭缓冲液中的细胞培养上清作为起始材料。
5. 重复洗涤步骤3。
6. 在1×PBST+5％鸡血清中1∶2500-5000倍稀释的第二抗体HRP-抗人IgG-Fc特异性试剂和/或HRP-抗人κ链抗体试剂，加入100μL于每孔中。室温孵育1小时。
7.重复洗涤步骤3两次。
8.每板使用10mL pH4.0的柠檬酸缓冲液、80μL ABTS、8μL H2O2进行显色。
9.室温孵育30分钟至1小时。在OD415nm-490nm处读板。把2倍看作是高于背景的滴度界限。
在这些试验中，杂交瘤15H12和19D12产生了阳性的ELISA信号。这些数据显示这些杂交瘤产生了能结合于可溶性IGFR1的抗体。
而后将抗原阳性的杂交瘤转移到24孔板中，并最后转移到组织培养瓶中。通过有限稀释法对IGFR1特异性杂交瘤进行亚克隆，以保证其单克隆性。在发育过程中的几个阶段，通过在Origen DMSO冷冻培养基(Fischer Scientific；Suwanee，GA)中冷冻细胞而将抗原阳性的杂交瘤保存下来。
2.4.7.按照下列步骤确定抗体同种型：
1.以溶于1×PBS中的IGFR1(1.0μg/mL)包被酶联板在冰箱内过夜。50μl/孔甩干酶联板。
2.加入1X PBST(含Tween的PBS)+5％鸡血清于室温封闭1小时(100μL/孔)。甩干酶联板。
3.用封闭缓冲液作为稀释液，把待测的培养上清或纯化的材料加进被检测的二抗，每1孔中，每孔中加入50μL。室温孵育90分钟。排空甩干酶联板。
4.排空甩干酶联板，用PBS通过洗瓶手工洗涤3遍或通过洗板机洗涤3遍。若使用了洗瓶，则在纸巾上吸干酶联板。
5.用封闭缓冲液作为稀释剂，加入二抗：
HRP-抗人γ链抗体；
HRP-抗人κ链抗体；
HRP-抗人IgG1抗体；或
HRP-抗人IgG3抗体。
二抗被1∶1000倍稀释。室温孵育45分钟，排空甩干酶联板。
6.重复洗涤步骤4三次。
7.每板使用10mL pH4.0的柠檬酸缓冲液、80μL ABTS、8μL的H2O2进行显色。
8.室温孵育30分钟至1小时。在OD415nm-490nm处读板。
这些试验的数据显示于下面的表4中。
表4.同种型的ELISA检测结果。
γ κ γ1 γ3
  1   2   3   4   5   6   7
  克隆15H12   1.903   1.003   0.064   0.813
*每个数据代表对每个二抗所观察到的ELISA信号强度。
这些数据证明抗体15H12是一种IgG3κ抗体。
2.4.8.通过固定细胞ELISA试验，还检测了杂交瘤上清(1H3、15H12和19D12)和MAB391直接结合表达IGFR1的细胞的能力。在此试验中，使用了以IGFR1DNA转染的MCF-7细胞或HEK-293细胞。按照下列步骤进行试验：
1.在96孔板的每孔中加入50μL溶于1×PBS中的20μg/mL多聚L-赖氨酸溶液，室温孵育30分钟或4℃孵育过夜。排空甩去孔中的多聚L-赖氨酸，在室温下干燥待用。
2.通过离心(1000RPM，5分钟)用1×PBS洗涤活细胞三次。用1×PBS将细胞的终浓度调到每孔2×106个细胞。每孔加入50μL此细胞悬液。
3.2000RPM离心细胞5分钟。排空甩去缓冲液。
4.每孔加入冰冷的溶于1×PBS中的0.5％戊二醛。室温静置15分钟。排空甩干酶联板。
5.每孔加入100μL 1×PBST+5％鸡血清，室温孵育1小时。甩干排空酶联板。
6.用1×PBST轻轻洗涤酶联板两次。为防止细胞丢失，此步应在一个容器内手工进行，不要使用洗板机。
7.使用封闭缓冲液作为稀释剂，通过加入100μL 1∶1稀释而测定细胞培养上清，室温孵育1小时。
8.重复步骤6三次。
9.用1×PBST+5％鸡血清1∶2500-5000倍稀释HRP-抗人IgG-Fc特异第二抗体试剂和/或HRP-抗人κ链第二抗体试剂，加入100μL于每孔中。室温孵育1小时。
10.重复步骤6三次。
11.每板使用10mL pH4.0的柠檬酸缓冲液、80μL ABTS、8μL的H2O2进行显色。
12.室温孵育15-20分钟。在OD415nm-490nm处读板。
这些试验的结果证明，杂交瘤1H3、15H12和19D12产生了可结合于表达IGFR1的HEK293细胞的免疫球蛋白，并且杂交瘤1H3、15H12和19D12产生了可结合于表达内源性IGFR1的MCF-7细胞的免疫球蛋白。此外，这些结果还表明，MAB391可结合于表达IGFR1的HEK293细胞并结合于MCF-7细胞。
2.4.9.可通过测量下列参数评测杂交瘤上清液(1H3、15H12和19D12)阻断IGF1与IGFR1结合的能力。这些参数为：1)此上清液在表达IGFR1的HEK293细胞上和MCF7细胞上的染色强度；2)此上清液阻止IGF1-生物素结合于表达IGFR1的细胞的能力。最初测量对表达IGFR1的HEK293细胞表面的生物素化IGF1进行滴定，以便确立合适的浓度，用于评测通过本发明的抗体阻止IGF1结合于其受体的能力。可通过下述步骤进行：
1.通过拍打培养瓶使培养细胞松动，将其吸入到锥形管中而收获表达IGFR1的HEK293细胞。300×g离心5分钟沉淀细胞。吸去培养基。
2.以10-20mL含有0.02％叠氮钠的PBS洗涤细胞，并用相同缓冲液重悬，浓度约为2.5×106个细胞/mL(±106个细胞)。将细胞于4℃以每孔200μL的量分配于96孔板中。沉淀细胞，吸去上清。
3.通过每孔加入50μL连续稀释于同一缓冲液中的IGF1-生物素，对细胞染色，从1∶5稀释开始，随后4倍连续稀释。轻拍或轻摇酶联板，使细胞悬浮均匀。而后于4℃孵育30分钟。
4.第一次洗涤加入150μL缓冲液，并沉淀细胞，洗涤细胞三次。吸去上清并加入200μL缓冲液。再次沉淀细胞并吸走上清。每重复一次此洗涤步骤。加入链亲合素-藻红蛋白，4℃孵育细胞30分钟。
5.细胞用含有2％FBS和0.02％叠氮钠的PBS洗涤一次，并重悬于同一缓冲液，但缓冲液中另含有50μL/mL PI(propidium碘化物)以排除死亡细胞。
6.用FACS分析细胞。
按如下进行阻断测定：
1.拍打培养瓶的侧面使细胞松动，从培养瓶中收获MCF7或HEK293/IGFR1细胞。将细胞吸入到锥形管中。300×g离心5分钟以沉淀细胞。吸去培养基。
2.用10-20mL含有2％FBS和0.02％叠氮钠的PBS(PFA)洗涤细胞，而后用相同缓冲液重悬之，浓度约为2.5×106个细胞/mL(±106个细胞)。将细胞于4℃以每孔200μL的量分配于96孔板中。沉淀细胞，吸走去缓冲液。
3.每孔加入100μL IGFR1杂交瘤上清液染色此细胞，另外包括培养基(阴性)对照和作为阳性对照的MAB391。轻弹酶联板以确保细胞均匀悬浮。4℃孵育30-60分钟。
4.用PFA洗涤细胞三次，第一次洗涤加入100μL缓冲液，沉淀细胞，去除上清；用200μL缓冲液重悬，沉淀细胞，去除上清；再次用200μL缓冲液重悬，将每一样品分配到两个孔中，并沉淀细胞。
5.在第一组孔内对上清液染色的样品和培养基对照加入以1∶100稀释于PFA(多聚甲醛)中的抗人IgG-FITC，并对MAB391染色的样品加入1∶200稀释的抗鼠IgG-FITC。再次轻弹确保细胞的均匀分布(染色试验)。4℃孵育30分钟。
6.在第二组孔中，加入稀释于含有0.02％叠氮钠的PBS中的IGF1-生物素，并在4℃孵育30分钟。如步骤4所洗涤细胞3次(但不分开样品)。加入稀释于PFA中的链亲合素-PE(链亲合素-藻红蛋白)染色这些细胞(阻断测定)。4℃孵育30分钟。
7.用PFA洗涤所有样品一次，并重悬于同一缓冲液中，除了在缓冲液中还含有50μg/mL的PI用于排除死亡细胞。
8.用FACS分析之。
这些阻断测定的结果表明杂交瘤1H3、15H12和19D12的上清液可阻断生物素化的IGF1结合于IGFR1、可染色表达内源IGFR1的MCF7细胞和表达IGFR1的HEK293细胞。
2.4.10.按照下列步骤也评测了在ELISA试验中，纯化的抗体1H3和15H12阻断生物素化IGF1与IGFR1结合的能力，以及抗体1H3、15H12和19D12阻断生物素化MAB391与IGFR1结合的能力。
1.每孔加入50μL溶于1×PBS中的可溶I GFR1(1μg/mL)，在冰箱中包被酶联板过夜。
2.每孔加入100μL1 1×PBS+5％鸡血清，室温1小时。排空甩干酶联板。
3.用洗涤缓冲液(1×PBS+0.05％Tween-20)洗涤酶联板三次。甩干酶联板。
4.用封闭缓冲液在整块板上，对2μg/mL的1H3、15H12或19D12，或阳性对照或阴性对照进行稀释。室温孵育酶联板1小时。
5.洗涤缓冲液洗板三次。
6.每孔加入50μL生物素-IGF1或生物素-MAB391，室温孵育30分钟。
7.洗板三次。
8.每孔加入100μL标记有链亲合素的碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶，室温孵育30分钟。
9.洗板三次。根据所使用的标记物，用合适的试剂显色。
10.10-15分钟之后读板。
按照下列步骤对MAB391进行生物素标记。
1.在PBS缓冲液中制备MAB391(用透析或脱盐柱除去不需要的缓冲剂例如Tris或甘胺酸)。
2.使用前临时配制Sulfo-NHS-LC-生物素溶液的新鲜贮备液。在200μL蒸馏水中加入2mg的Sulfo-NHS-LC-生物素。如果使用10mg/mL的MAB391溶液，将Sulfo-NHS-LC-生物素溶液以超过12倍摩尔数的量加入到MAB391中。当使用MAB391的稀释制备液(2mg/ml)将Sulfo-NHS-LC-生物素溶液以超过20倍摩尔数的量加入到MAB391中。
3.计算方法：
MAB391的mmol数＝mg蛋白/150,000
Mmol数×12或20＝加入的生物素试剂的mmol数
加入生物素的mmo l数X 556＝加入生物素试剂的mg
对于1mg/mL：
1/150000＝6.6×10-6
20×6.6×10-6mmol＝1/32×10-4NHS-LC-生物素
1.32×10-4×556＝0.073mg Sulfo-NHS-LC-生物素
对于1mg或2mg的IgG，每mg的IgG使用10μL(100μg)NHS-LC-生物素储备液。
4.冰上孵育2小时或室温孵育30分钟。对PBS透析或使用脱盐柱去除未反应的生物素试剂。4℃储存于含有0.1％叠氮钠的PBS中。
一般地每个被标记的IgG分子能加入3-5个生物素。
这些阻断测定的结果表明，抗体1H3和15H12可阻断生物素化的IGF1与sIGFR1的结合，以及抗体1H3、15H12和19D12能阻断生物素化的MAB 391与sIGFR1的结合。
2.4.11.按照下列步骤，通过BIAcore/表面胞质团共振(BIAcore/surface plasmon resonance)试验评测IGFR1与1H3、15H12和19D12抗体之间的结合。
1.IGFR1通过氨基交联被固定化在CM-5芯片上，对流动室达到350.4个反应单位的水平。用于固定化的IGFR1的浓度是2.5μg/ml，配于乙酸钠缓冲液中，此蛋白质在pH3.5下被固定化。
2.通过蛋白A或蛋白G柱从杂交瘤上清液中纯化出抗体1H3、15H12和19D12，并通过SDS-PAGE分析测定其纯度(4％-12％的Tris-甘胺酸)。
3.使抗体流过上面制备的IGFR1表面。
4.所用的抗体浓度范围是4、2、1、0.5和0.25μg/mL。也使用空白作为背景替换。样品在HBS缓冲液中配制。
5.注入时间(结合期)是10分钟，流速为20μL/分钟。解离时间(解离期)是1小时，流速相同。
6.在25℃和37℃均进行了试验。所有的实验都做了两次。
7.使用Bia-Evaluation软件v.3.0.2(Biacore，Inc；Piscataway，NJ)进行数据分析。
8.使用Biacore 3000表面胞质团共振仪(Biacore，Inc；Piscataway，NJ)进行所有的实验。
这些试验的结果证明，在25℃和37℃时，抗体15H12和19D12与IGFR1结合；在25℃时，抗体1H3与IGFR1结合。这些实验的数据也用来计算1H3、15H12及19D12与IGFR1结合的亲和性和速率常数(见下文的表5)。
表5.抗体1H3、15H12及19D12与IGFR1结合的亲和性和速率常数
  温度   抗体   样品数   结合时间(分)   解离时间(分)   k<sub>on</sub>(1/Ms)   K<sub>off</sub>(1/s)   K<sub>D</sub>(M)   半衰期(分)<sup>#</sup>
  25℃   15H12   2   10   60   5.0×10<sup>5</sup>   2.24×10<sup>-5</sup>   4.48×10<sup>-11</sup>   515.73
25℃ 19D12 2 10 60 4.0×10<sup>5</sup> 2.65×10<sup>-5</sup> 5.92×10<sup>-11</sup> 435.94
  25℃   1H3   2   10   60   0.7×10<sup>5</sup>   6.50×10<sup>-5</sup>   86×10<sup>-11</sup>   177.73
  37℃   15H12   2   10   60   7.2×10<sup>5</sup>   4.01×10<sup>-5</sup>   5.57×10<sup>-11</sup>   288.09
  37℃   19D12   2   10   60   6.8×10<sup>5</sup>   4.93×10<sup>-5</sup>   7.22×10<sup>-11</sup>   234.33
#按半衰期＝1n(2/koff)计算
实施例2：基于细胞的受体结合试验
一种基于细胞的受体结合试验被用于确定是否抗体1H3、15H12和19D12与IGF1竞争结合于IGFR1。
在此试验中，用0.5％牛血清白蛋白(BSA)/PBS在4℃预湿润96孔滤纸板(1.2μm孔径)2小时。用多管真空仪除去缓冲液。将不同浓度的6个对照或试验抗体(1H3、15H12或19K12)加入孔中(25μL)。然后将溶于BSA/PBS中的终浓度为0.375mM的[125I]-IGF-1配体加入孔中。用细胞解离液收集细胞，用台盼蓝法计数细胞，并以1-3×105个细胞/ml的细胞数重悬于0.5％BSA/PBS中。每孔加入100μL(10000-30000个)细胞。4℃摇荡滤纸板1小时。然后使用多管真空仪，吸去板中液体，并用冰冷的PBS洗板三次。取下滤纸，并用γ计数器计数。分析竞争结合的数据。
这些实验的结果表明抗体1H3、15H12和19D12能够与IGF1竞争结合于IGFR1。
实施例3：IGFR1自磷酸化试验
还测定了1H3、15H12和19D12抑制IGFR1自磷酸化的能力。
将抗体(1H3、15H12或19D12)加入带有IGFR1的细胞中，温育不同的时间。而后用10ng/mL的IGF-I在37℃刺激细胞5分钟。细胞用冷的含有0.1mM钒酸钠的PBS洗涤两遍，并用裂解缓冲液(50mMHEPES，pH7.4、150mM NaCI、10％甘油、1％Triton X-100、1.5mMMgCl2，蛋白酶抑制剂和2mM钒酸钠)裂解。裂解物于冰上孵育30分钟，而后在4℃13000RPM离心10分钟。通过考马斯染色试验测量裂解物中的蛋白质浓度，并进行免疫沉淀和Western印迹分析。
这些试验的结果表明，抗体1H3、15H12和19D12抑制IGFR1自磷酸化，其IC50为0.10nM。
实施例4：无贴壁依赖性生长(软琼脂)试验
对抗IGFR1抗体1H3、15H12、19D12和MAB391抑制不同细胞的无贴壁依赖性生长的能力进行了评测，这些细胞包括人乳腺瘤细胞系MCF7、人结直肠癌细胞HT29和人***癌细胞DU145.
在这些实验中，对6孔组织培养板的每个孔加入3mL配于完全MEM培养基中的0.6％琼脂糖，并使之固化(底层)。在培养管中加入100μL不同浓度的抗体1H3、15H12、19D12或MAB391(上述的)。收集细胞。将细胞的等分量小份(15000个细胞)加入含有抗体的培养管中，室温孵育10-15分钟。对抗体/细胞混合物加入3mL 0.35％琼脂糖/完全最低必需培养基(MEM)层(顶层)，而后在固化的底层上铺平板。使顶层固化。而后培养平板三周。在孔中加入MTT(3-(4，5-Dimethyl-2-Thiazolyl)-2，5-Diphenyl-2H-Tetrazolium Bromide)，孵育1-2小时。扫描此培养板，并用常规的克隆计数应用程序计数和分析克隆。
这些实验的结果表明，抗IGFR1抗体可以抑制所试验的所有三株恶性细胞系的无贴壁依赖性生长。
实施例5：从杂交瘤中克隆抗体的可变区
按照下列程序从杂交瘤细胞中获得了编码1H3、15H12和19D12可变区的核酸。
通过使用Micro-Fast Track试剂盒(Invitrogen；Carlsbad，CA)从2×106个杂交瘤细胞中制备了信使RNA(mRNA)。按照“cDNA Cycle”试剂盒(Invitrogen；Carlsbad，CA)中所述的步骤，制备了编码可变区的细胞DNA(cDNA)。
应用5’RACE(Clotech；Palo Alto，CA)技术，以此cDNA作为模板通过PCR扩增这些抗体的可变区。如下的3’端引物序列被用于扩增重链：5′-TGCCAGGGGG从GACCGATGG-3′(SEQ ID NO：22)，而下面的3’端引物序列被用于扩增轻链：5′-CGGGAAGATGAAGACAGATG-3′(SEQID NO：23)。另外，5’-RACE PCR引物(C1otech；Palo Alto，CA)被用于每次扩增中。
PCR反应混合物包括含于合适缓冲液中的2.5单位Pfu I聚合酶(Stratagene；La Joola，CA)、每种dNTP各0.2mM、5’和3’引物各750nM，以及cDNA模板。反应的总体积是50μL。使用热循环仪进行下面的PCR循环程序：
1×94℃，2分钟
10×94℃，45秒钟
65℃，45秒钟，每个循环减1℃
72℃，1分钟
25×94℃，45秒钟
55℃，45秒钟
72℃，1分钟
1×72℃，15分钟
生成的PCR扩增产物被***Zero Blunt TOPO PCR克隆载体(Invitrogen；Carlsbad，CA)中。通过限制酶分析证实***片段的同一性，而后通过序列测定得到***片段的核苷酸序列。
实施例6：抗体链的重组表达
本实施例中，编码本发明不同抗IGFR1抗体链的核酸被用于转染dhfr-哺乳动物细胞系(CHO-DXB11)，在其中此抗体链被表达。通过以选自下面列的质粒1-11的一个重链(γ1或γ4)质粒和一个轻链(κ)质粒的不同组合共转染此细胞系，而进行，瞬时转染。通过用下面所列的单一质粒12或13转染细胞，构建稳定细胞系，方法如下：此核酸位于单一的质粒冲，并可操纵地连接于巨细胞病毒(CMV)启动子上。该质粒还含有可操纵地连接于小鼠乳腺癌病毒长末端重复序列(MMTV-LTR)的DHFR cDNA，用于质粒扩增。此质粒另含有可操纵地连接于TK启动子上的潮霉素B基因，用于在哺乳动物细胞中进行筛选。
下面是对所构建的13个质粒中启动子-表达框的描述。被标明的质粒(2-4和8-11)根据布达佩斯条约，以所指出的名称和收录号储存于美国菌种典藏中心(ATCC；10801 University Boulevard；Manassas，Virginia 20110-2209)：
(1)CMV启动子-15H12/19D12 HC(γ4)
***序列：SEQ ID NO：3；
(2)CMV启动子-15H12/19D12 HCA(γ4)-
保藏名称：″15H12/19D12 HCA(γ4)″
ATCC收录号：
***序列：SEQ ID NO：44；
(3)CMV启动子-15H12/19D12 HCB(γ4)-
保藏名称：″15H12/19D12HCB(γ4)″
ATCC收录号：
***序列：SEQ ID NO：111；
(4)CMV启动子-15H12/19D12 HCA(γ1)-
保藏名称：″15H12/19D12 HCA(γ1)″；
ATCC收录号：
***序列：SEQ ID N0：44；
(5)CMV启动子-15H12/19D12 LC(κ)
***序列：SEQ ID NO：1；
(6)CMV启动子-15H12/19D12 LCA(κ)
***序列：SEQ ID NO：40；
(7)CMV启动子-15H12/19D12 LCB(κ)
***序列：SEQ ID NO：42；
(8)CMV启动子-15H12/19D12 LCC(κ)-
保藏名称：″15H12/19D12LCC(κ)″；
ATCC收录号：
***序列：SEQ ID NO：71；
(9)CMV启动子-15H12/19D12 LCD(κ)-
保藏名称：″15H12/19D12 LCD(κ)″；
ATCC收录号：
***序列：SEQ ID NO：73；
(10)CMV启动子-15H12/19D12 LCE(κ)-
保藏名称：″15H12/19D12 LCE(κ)″；
ATCC收录号：
***序列：SEQ ID NO：75；
(11)CMV启动子-15H12/19D12 LCF(κ)-
保藏名称：″15H12/19D12 LCF
ATCC收录号：
***序列：SEQ ID NO：77；
(12)CMV启动子-15H12/19D12 HC(γ4)和CMV启动子-15H12/19D12 LC(κ)；
(13)CMV启动子-15H12/19D12 HCA(γ1)和CMV启动子-15H12/19D12 LC(κ)
本专利一旦被批准，将取消对获得保藏于ATCC中质粒的所有限制。
每个表达框的3’端均连接一个beta-球蛋白poly A信号。所表达的可变区链与括号中所示的恒定区(例如γ1、γ4或κ)相连。对含有每一种质粒的被转染细胞进行分析表明，相应的抗体链多肽得到表达(没有确认表达产物的氨基酸序列)。
上面所引用的每种质粒构成本发明的一部分。进一步地，下面的序列也是本发明的一部分：位于每一表达框中的核酸、使同其中的免疫球蛋白可变区、以及其加工过的成熟形式(即缺少信号序列)，尤其是序列44、成熟的HCA(SEQ ID NO：44的第58-411位核苷酸)、SEQID NO：111，成熟的HCB(SEQ ID NO：111的第58-411位核苷酸)SEQ IDNO：71、成熟的LCC(SEQ ID NO：71的第58-384位核苷酸)、SEQ IDNO：73、成熟的LCD(SEQ ID NO：73的第58-384位核苷酸)、SEQ IDNO：75、成熟的LCE(SEQ ID NO：75的第58-384位核苷酸)、SEQ ID NO：77或成熟的LCF(SEQ ID NO：77的第58-384位核苷酸)，任选地包括免疫球蛋白恒定区，以及任何由前述核酸所编码的多肽，包括成熟的或未处理的链，也任选择地包括免疫球蛋白的恒定区。
此外，含有所编码的多肽之一的任何抗体或其抗原结合片段也都是本发明的一部分。
************************
本发明的范围不为此处所描述的特定实施方案所限制。实际上，除了此处的描述外，还可根据上述描述和附图对本发明进行各种修改，这对于本领域熟悉的人员是很明显的。打算将这些修改形式归入所附权利要求的范围之内。
贯穿本申请引用了多个专利、专利申请、Genbank收录号及发表的文章，它们的公开内容在此被整个引入作为参考。
序列表
<110>Wang，Yan
Pachter，Jonathan A
Hailey，Judith
Greenberg，Robert
Leonard，Presta
Brams，Peter
Feingersh，Diane
Williams，Denise
Srinivasan，Mohan
<120>抗IGFR人源中和抗体
<130>OC01533K US
<140>10/443,466
<141>2003-05-22
<150>60/383,459
<151>2002年5月24日
<150>60/393,214
<151>2002年7月2日
<150>60/436,254
<151>2002年12月23日
<160>120
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>384
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>1..384
<223>
<220>
<221>信号肽
<222>1..57
<223>
<400>1
atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc    48
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag gtt cca gac ttt cag tct gtg    96
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Val Pro Asp Phe Gln Ser Val
            20                  25                  30
act cca aag gag aaa gtc acc atc acc tgc cgg gcc agt cag agc att    144
Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca gat cag tct cca aag    192
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys
    50                  55                  60
ctc ctc atc aag tat gct tcc cag tcc ctc tca ggg gtc ccc tcg agg    240
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc aat agc    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser
                85                  90                  95
ctg gaa gct gaa gat gct gca gcg tat tac tgt cat cag agt agt cgt    336
Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
tta cct cac act ttc ggc gga ggg acc aag gtg gag atc aaa cga act    384
Leu Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>2
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Val Pro Asp Phe Gln Ser Val
            20                  25                  30
Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
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Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
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Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser
                85                  90                  95
Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
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<213>人
<220>
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<223>
<220>
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<222>1..57
<223>
<400>3
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Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
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        35                  40                  45
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Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
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Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
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Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
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Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr
            100                 105                 110
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Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
        115                 120                 125
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Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
    130                 135
<210>4
<211>137
<212>PRT
<213>人
<400>4
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            20                  25                  30
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        35                  40                  45
Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
                85                  90                  95
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Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
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1               5                   10
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<400>9
Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser
1               5
<210>10
<211>9
<212>PRT
<213>人
<400>10
His Gln Ser Ser Arg Leu  Pro His Thr
1               5
<210>11
<211>15
<212>DNA
<213>人
<400>11
agctttgcta tgcac                                       15
<210>12
<211>48
<212>DNA
<213>人
<400>12
gttattgata ctcgtggtgc cacatactat gcagactccgtgaagggc    48
<210>13
<211>30
<212>DNA
<213>人
<400>13
ctggggaact tctactacgg tatggacgtc                        30
<210>14
<211>5
<212>PRT
<213>人
<400>14
Ser Phe Ala Met His
1               5
<210>15
<211>16
<212>PRT
<213>人
<400>15
Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1               5                   10                  15
<210>16
<211>10
<212>PRT
<213>人
<400>16
Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1               5                   10
<210>17
<211>10
<212>PRT
<213>人
<400>17
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala Met His
1               5                   10
<210>18
<211>30
<212>DNA
<213>人
<400>18
ggattcacct tcagtagctt tgctatgcac         30
<210>19
<211>1367
<212>PRT
<213>人
<400>19
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu Ile
            20                  25                  30
Cys Gly Pro Gly Ile Asp Ile Arg Asn Asp Tyr Gln Gln Leu Lys Arg
        35                  40                  45
Leu Glu Asn Cys Thr Val Ile Glu Gly Tyr Leu His Ile Leu Leu Ile
    50                  55                  60
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val
65                  70                  75                  80
Ile Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu
                85                  90                  95
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val Ile Arg Gly Trp Lys Leu Phe
            100                 105                 110
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val Ile Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp Ile
        115                 120                 125
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn Ile Thr Arg Gly Ala Ile Arg Ile Glu
    130                 135                 140
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu Ile
145                 150                 155                 160
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr Ile Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys
                165                 170                 175
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys
            180                 185                 190
Glu Lys Thr Thr Ile Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr
        195                 200                 205
Asn Arg Cys Gln Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys
    210                 215                 220
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser
225                 230                 235                 240
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr
                245                 250                 255
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu
            260                 265                 270
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn Ile Leu Ser Ala
        275                 280                 285
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met
    290                 295                 300
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile Arg Asn Gly Ser Gln Ser Met Tyr
305                 310                 315                 320
Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys
                325                 330                 335
Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly
            340                 345                 350
Cys Thr Ile Phe Lys Gly Asn Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn
        355                 360                 365
Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val
    370                 375                 380
Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser
385                 390                 395                 400
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly
                405                 410                 415
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp
            420                 425                 430
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr Ile Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe
        435                 440                 445
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu
    450                 455                 460
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg
465                 470                 475                 480
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr
                485                 490                 495
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr
            500                 505                 510
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys
        515                 520                 525
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys
    530                 535                 540
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys
545                 550                 555                 560
Asp Val Glu Pro Gly Ile Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln
                565                 570                 575
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp
            580                 585                 590
His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala
        595                 600                 605
Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser
    610                 615                 620
Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn
625                 630                 635                 640
Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr
                645                 650                 655
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys
            660                 665                 670
Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Ile Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys
        675                 680                 685
Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys
    690                 695                 700
Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys
705                 710                 715                 720
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu
                725                 730                 735
Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser
            740                 745                 750
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro
        755                 760                 765
Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn
    770                 775                 780
Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg
785                 790                 795                 800
Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser
                805                 810                 815
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp
            820                 825                 830
Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile
        835                 840                 845
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met
    850                 855                 860
Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val
865                 870                 875                 880
Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu
                885                 890                 895
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly
            900                 905                 910
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys Thr
        915                 920                 925
Gly Tyr Glu Asn Phe Ile His Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Val
    930                 935                 940
Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg
945                 950                 955                 960
Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val
                965                 970                 975
Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp
            980                 985                 990
Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile Thr Met Ser Arg Glu Leu Gly Gln Gly
        995                 1000                1005
Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu Gly Val Ala Lys Gly Val Val Lys
    1010                1015                1020
Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala Ile Lys Thr Val Asn Glu Ala
    1025                1030                1035
Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val
    1040                1045                1050
Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val
    1055                1060                1065
Val Ser Gln Gly Gln Pro Thr Leu Val Ile Met Glu Leu Met Thr
    1070                1075                1080
Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Met
    1085                1090                1095
Glu Asn Asn Pro Val Leu Ala Pro Pro Ser Leu Ser Lys Met I1e
    1100                1105                1110
Gln Met Ala Gly Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala
    1115                1120                1125
Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val
    1130                1135                1140
Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg
    1145                1150                1155
Asp Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu
    1160                1165                1170
Leu Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val
    1175                1180                1185
Phe Thr Thr Tyr Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp
    1190                1195                1200
Glu Ile Ala Thr Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn
    1205                1210                1215
Glu Gln Val Leu Arg Phe Val Met Glu Gly Gly Leu Leu Asp Lys
    1220                1225                1230
Pro Asp Asn Cys Pro Asp Met Leu Phe Glu Leu Met Arg Met Cys
    1235                1240                1245
Trp Gln Tyr Asn Pro Lys Met Arg Pro Ser Phe Leu Glu Ile Ile
    1250                1255                1260
Ser Ser Ile Lys Glu Glu Met Glu Pro Gly Phe Arg Glu Val Ser
    1265                1270                1275
Phe Tyr Tyr Ser Glu Glu Asn Lys Leu Pro Glu Pro Glu Glu Leu
    1280                1285                1290
Asp Leu Glu Pro Glu Asn Met Glu Ser Val Pro Leu Asp Pro Ser
    1295                1300                1305
Ala Ser Ser Ser Ser Leu Pro Leu Pro Asp Arg His Ser Gly His
    1310                1315                1320
Lys Ala Glu Asn Gly Pro Gly Pro Gly Val Leu Val Leu Arg Ala
    1325                1330                1335
Ser Phe Asp Glu Arg Gln Pro Tyr Ala His Met Asn Gly Gly Arg
    1340                1345                1350
Lys Asn Glu Arg Ala Leu Pro Leu Pro Gln Ser Ser Thr Cys
    1355                1360                1365
<210>20
<211>195
<212>PRT
<213>人
<400>20
Met Gly Lys Ile Ser Ser Leu Pro Thr Gln Leu Phe Lys Cys Cys Phe
1               5                   10                  15
Cys Asp Phe Leu Lys Val Lys Met His Thr Met Ser Ser Ser His Leu
            20                  25                  30
Phe Tyr Leu Ala Leu Cys Leu Leu Thr Phe Thr Ser Ser Ala Thr Ala
        35                  40                  45
Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe
    50                  55                  60
Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys
                85                  90                  95
Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu
            100                 105                 110
Lys Pro Ala Lys Ser Ala Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp
        115                 120                 125
Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr
    130                 135                 140
Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu
145                 150                 155                 160
Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys
                165                 170                 175
Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys
            180                 185                 190
Lys Gly Lys
        195
<210>21
<211>180
<212>PRT
<213>人
<400>21
Met Gly Ile Pro Met Gly Lys Ser Met Leu Val Leu Leu Thr Phe Leu
1               5                   10                  15
Ala Phe Ala Ser Cys Cys Ile Ala Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu
            20                  25                  30
Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg
        35                  40                  45
Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg
    50                  55                  60
Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu
65                  70                  75                  80
Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr
                85                  90                  95
Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys
            100                 105                 110
Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Thr Gln Arg Leu Arg Arg
        115                 120                 125
Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly His Val Leu Ala Lys
    130                 135                 140
Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala
145                 150                 155                 160
Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His Gly Gly Ala Pro Pro Glu Met Ala
                165                 170                 175
Ser Asn Arg Lys
            180
<210>22
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>22
tgccaggggg aagaccgatg g                                        21
<210>23
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PCR引物
<400>23
cgggaagatg  aagacagatg                                         20
<210>24
<211>390
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(390)
<223>
<220>
<221>信号肽
<222>(1)..(60)
<223>
<400>24
atg gaa gcc cca gct cag ctt ctc ttc ctc ctg cta ctc tgg ctc cca    48
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1               5                   10                  15
gat acc acc gga gaa att gtg ttg aca cag tct cca gcc acc ctg tct    96
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
            20                  25                  30
ttg tct cca ggg gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt    144
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
        35                  40                  45
gtt agc agt ttc tta gcc tgg tac caa cag aaa cct ggc cag gct ccc    192
Val Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
    50                  55                  60
agg ctc ctc atc tat gat gca tcc aac agg gcc cct ggc atc cca gcc    240
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala
65                  70                  75                  80
agg ttc agt ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc    288
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
                85                  90                  95
agc cta gag cct gaa gat ttt gca gtt tat tac tgt cag cag cgt agc    336
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
            100                 105                 110
aac tgg cct cgg tgg acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa    384
Asn Trp Pro Arg Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
        115                 120                 125
cga act                                                            390
Arg Thr
    130
<210>25
<211>130
<212>PRT
<213>人
<400>25
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1               5                   10                  15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
        35                  40                  45
Val Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
    50                  55                  60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala
65                  70                  75                  80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
                85                  90                  95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
            100                 105                 110
Asn Trp Pro Arg Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
        115                 120                 125
Arg Thr
    130
<210>26
<211>420
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(420)
<223>
<220>
<221>信号肽
<222>(1)..(57)
<223>
<400>26
atg gag ttt ggg ctg agc tgg gtt ttc ctt gtg gct ata tta aaa ggt    48
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
gtc cag tgt gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta ctt    96
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Leu
            20                  25                  30
cct ggg ggg tcc ctg aga ctc tcc tgt gca ggc tct gga ttc acc ttc    144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
agt aac tat gct atg cac tgg att cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg    192
Ser Asn Tyr Ala Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
gag tgg gtg tca gct att ggt gct ggt ggt gac acg tac tat gca gac    240
Glu Trp Val Ser Ala Ile Gly Ala Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp
65                  70                  75                  80
tcc gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aac gcc aag gac tcc    288
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Ser
                85                  90                  95
ttg tat ctt caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac atg gct gtt tat    336
Leu Tyr Leu Gln Met Ash Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr
            100                 105                 110
tac tgt gca aga ggc cgg cat agg aac tgg tac tac tac aat aag gac    384
Tyr Cys Ala Arg Gly Arg His Arg Asn Trp Tyr Tyr Tyr Asn Lys Asp
        115                 120                 125
tac tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc gtc tcc tca                    420
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    130                 135                 140
<210>27
<211>140
<212>PRT
<213>人
<400>27
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Leu
            20                  25                  30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
Ser Asn Tyr Ala Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Val Ser Ala Ile Gly Ala Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Ser
                85                  90                  95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr
            100                 105                 110
Tyr Cys Ala Arg Gly Arg His Arg Asn Trp Tyr Tyr Tyr Asn Lys Asp
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
    130                 135                 140
<210>28
<211>33
<212>DNA
<213>人
<400>28
agggccagtc agagtgttag cagtttctta  gcc                     33
<210>29
<211>21
<212>DNA
<213>人
<400>29
gatgcatcca acagggcccc t              21
<210>30
<211>30
<212>DNA
<213>人
<400>30
cagcagcgta gcaactggcc tcggtggacg     30
<210>31
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>31
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Phe Leu Ala
1               5                   10
<210>32
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>32
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro
1               5
<210>33
<211>10
<212>PRT
<213>人
<400>33
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Arg Trp Thr
1               5                   10
<210>34
<211>30
<212>DNA
<213>人
<400>34
ggattcacct tcagtaacta tgctatgcac                        30
<210>35
<211>48
<212>DNA
<213>人
<400>35
gctattggtg ctggtggtga cacgtactat gcagactccg tgaagggc    48
<210>36
<211>39
<212>DNA
<213>人
<400>36
ggccggcata ggaactggta ctactacaat aaggactac              39
<210>37
<211>10
<212>PRT
<213>人
<400>37
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met His
1               5                   10
<210>38
<211>16
<212>PRT
<213>人
<400>38
Ala Ile Gly Ala Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1               5                   10                  15
<210>39
<211>13
<212>PRT
<213>人
<400>39
Gly Arg His Arg Asn Trp Tyr Tyr Tyr Asn Lys Asp Tyr
1               5                   10
<210>40
<211>384
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(384)
<223>
<400>40
atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc    48
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca gac tct ctg tct gtg    96
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val
            20                  25                  30
act cca ggc gag aga gtc acc atc acc tgc cgg gcc agt cag agc att    144
Thr Pro Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag tct cca aag    192
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
    50                  55                  60
ctt ctc atc tac tat gct tcc cag tcc ctc tca ggg gtc ccc tcg agg    240
Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc agt agc    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
            85                  90                  95
ctc gag gct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt cat cag agt agt cgt    336
Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
        100                 105                 110
tta cct cac act ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt acg    384
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
    115                 120                 125
<210>41
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>41
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val
            20                  25                  30
Thr Pro Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
        50                  55                  60
Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser G1y Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
100                  105                  110
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
                115                 120                 125
<210>42
<211>384
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(384)
<223>
<400>42
atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc    48
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg    96
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val
            20                  25                  30
tct cca ggc gag aga gcc acc ctc tcc tgc cgg gcc agt cag agc att    144
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg    192
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
    50                  55                  60
ctt ctc atc tac tat gct tcc cag tcc ctc tca ggg atc ccc gat agg    240
Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg
65                  70                  75                  80
ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc agt aga    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
                85                  90                  95
ctg gag cct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt cat cag agt agt cgt    336
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
tta cct cac act ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt aca    384
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>43
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>43
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val
            20                  25                  30
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
                85                  90                  95
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>44
<211>411
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(411)
<223>
<400>44
atg gag ttt ggg ctg agc tgg gtt ttc ctt gtt gct ata tta aaa ggt    48
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
gtc cag tgt gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta aag    96
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
            20                  25                  30
cct ggg ggg tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc    144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
agt agc ttt gct atg cac tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg    192
Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
gag tgg ata tca gtt att gat act cgt ggt gcc aca tac tat gca gac    240
Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
65                  70                  75                  80
tcc gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc    288
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
                85                  90                  95
ttg tat ctt caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gct gtg tat    336
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
            100                 105                 110
tac tgt gca aga ctg ggg aac ttc tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc    384
Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
        115                 120                 125
caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca                                 411
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
    130                 135
<210>45
<211>137
<212>PRT
<213>人
<400>45
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
Val Gln Cys Glu Val Gln Lau Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
            20                  25                  30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
                85                  90                  95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
            100                 105                 110
Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
        115                 120                 125
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
    130                 135
<210>46
<211>69
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(69)
<223>
<400>46
gaa att gtg ctg act cag agc cca gac tct ctg tct gtg act cca ggc    48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
gag aga gtc acc atc acc tgc                                        69
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210>47
<211>23
<212>PRT
<213>人
<400>47
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1                5                  10                  15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210>48
<211>45
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(45)
<223>
<400>48
tgg tac cag cag aaa cca ggt cag tct cca aag ctt ctc atc tac    45
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210>49
<211>15
<212>PRT
<213>人
<400>49
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210>50
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>50
ggg gtc ccc tcg agg ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc    48
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
ctc acc atc agt agc ctc gag gct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt    96
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>51
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>51
Gly Val Pro Ser Arg Phe  Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                    10                  15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>52
<211>36
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(36)
<223>
<400>52
ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt acg    36
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>53
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>53
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1                5                  10
<210>54
<211>69
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(69)
<223>
<400>54
gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg tct cca ggc    48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
gag aga gcc acc ctc tcc tgc                                        69
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
    20
<210>55
<211>23
<212>PRT
<213>人
<400>55
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
            20
<210>56
<211>45
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(45)
<223>
<400>56
tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg ctt ctc atc tac    45
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210>57
<211>15
<212>PRT
<213>人
<400>57
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1               5                   10                  15
<210>58
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>58
ggg atc ccc gat agg ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc    48
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
ctc acc atc agt aga ctg gag cct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt    96
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>59
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>59
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>60
<211>36
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(36)
<223>
<400>60
ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt aca    36
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>61
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>61
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>62
<211>90
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(90)
<223>
<400>62
gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta aag cct ggg ggg    48
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc agt            90
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                  25                  30
<210>63
<211>30
<212>PRT
<213>人
<400>63
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
            20                   25                 30
<210>64
<211>42
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(42)
<223>
<400>64
tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg ata tca    42
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser
1               5                   10
<210>65
<211>14
<212>PRT
<213>人
<400>65
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser
1               5                   10
<210>66
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>66
cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt caa    48
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gct gtg tat tac tgt gca aga    96
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210>67
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>67
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210>68
<211>33
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(33)
<223>
<400>68
tgg ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca    33
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210>69
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>69
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210>70
<211>5
<212>PRT
<213>人
<400>70
Asn Tyr Ala Met His
1               5
<210>71
<211>384
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(384)
<223>
<400>71
atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc    48
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca gac tct ctg tct gtg    96
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val
            20                  25                  30
act cca ggc gag aga gtc acc atc acc tgc cgg gcc agt cag agc att    144
Thr Pro Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag tct cca aag    192
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
    50                  55                  60
ctt ctc atc aag tat gca tcc cag tcc ctc tca ggg gtc ccc tcg agg    240
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc agt agc    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
ctc gag gct gaa gat gct gca gcg tat tac tgt cat cag agt agt cgt    336
Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                  105                  110
tta cct cac act ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt acg    384
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                  120                  125
<210>72
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>72
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val
            20                  25                  30
Thr Pro Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>73
<211>384
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(384)
<223>
<400>73
atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc    48
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca gac tct ctg tct gtg    96
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val
            20                  25                  30
act cca ggc gag aga gtc acc atc acc tgc cgg gcc agt cag agc att    144
Thr Pro Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag tct cca aag    192
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
    50                  55                  60
ctt ctc atc aag tat gca tcc cag tcc ctc tca ggg gtc ccc tcg agg    240
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc agt agc    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
ctc gag gct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt cat cag agt agt cgt    336
Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
tta cct cac act ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt acg    384
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>74
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>74
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val
            20                  25                  30
Thr Pro Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>75
<211>384
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(384)
<223>
<400>75
atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc    48
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg    96
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val
            20                  25                  30
tct cca ggc gag aga gcc acc ctc tcc tgc cgg gcc agt cag agc att    144
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg    192
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
    50                  55                  60
ctt ctc atc aag tat gca tcc cag tcc ctc tca ggg atc ccc gat agg    240
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg
65                  70                  75                  80
ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc agt aga    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
                85                  90                  95
ctg gag cct gaa gat gct gca gcg tat tac tgt cat cag agt agt cgt    336
Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
tta cct cac act ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt aca    384
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                  120                  125
<210>76
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>76
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val
            20                  25                  30
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
                85                  90                  95
Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                  120                  125
<210>77
<211>384
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(384)
<223>
<400>77
atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc    48
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg    96
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val
            20                  25                  30
tct cca ggc gag aga gcc acc ctc tcc tgc cgg gcc agt cag agc att    144
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg    192
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
    50                  55                  60
ctt ctc atc aag tat gca tcc cag tcc ctc tca ggg atc ccc gat agg    240
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg
65                  70                  75                  80
ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc ctc acc atc agt aga    288
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
                85                  90                  95
ctg gag cct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt cat cag agt agt cgt    336
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
tta cct cac act ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt aca    384
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>78
<211>128
<212>PRT
<213>人
<400>78
Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1               5                   10                  15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val
            20                  25                  30
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
    50                  55                  60
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Ile Pro Asp Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
                85                  90                  95
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg
            100                 105                 110
Leu Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
        115                 120                 125
<210>79
<211>69
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(69)
<223>
<400>79
gaa att gtg ctg act cag agc cca gac tct ctg tct gtg act cca ggc    48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
gag aga gtc acc atc acc tgc    69
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210>80
<211>23
<212>PRT
<213>人
<400>80
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210>81
<211>45
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(45)
<223>
<400>81
tgg tac cag cag aaa cca ggt cag tct cca aag ctt ctc atc aag    45
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1               5                   10                  15
<210>82
<211>15
<212>PRT
<213>人
<400>82
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1               5                   10                 15
<210>83
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>83
ggg gtc ccc tcg agg ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc    48
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
ctc acc atc agt agc ctc gag gct gaa gat gct gca gcg tat tac tgt    96
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>84
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>84
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>85
<211>36
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(36)
<223>
<400>85
ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt acg    36
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>86
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>86
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>87
<211>69
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(69)
<223>
<400>87
gaa att gtg ctg act cag agc cca gac tct ctg tct gtg act cca ggc    48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
gag aga gtc acc atc acc tgc                                        69
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210>88
<211>23
<212>PRT
<213>人
<400>88
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1                5                   10                  15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
            20
<210>89
<211>45
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(45)
<223>
<400>89
tgg tac cag cag aaa cca ggt cag tct cca aag ctt ctc atc aag    45
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1               5                   10                  15
<210>90
<211>15
<212>PRT
<213>人
<400>90
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1               5                   10                  15
<210>91
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>91
ggg gtc ccc tcg agg ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc    48
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
ctc acc atc agt agc ctc gag gct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt    96
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>92
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>92
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>93
<211>36
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(36)
<223>
<400>93
ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt acg    36
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>94
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>94
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>95
<211>69
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(69)
<223>
<400>95
gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg tct cca ggc    48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1                5                  10                  15
gag aga  gcc acc ctc tcc tgc    69
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210>96
<211>23
<212>PRT
<213>人
<400>96
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
             20
<210>97
<211>45
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(45)
<223>
<400>97
tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg ctt ctc atc aag    45
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Lys
1               5                   10                  15
<210>98
<211>15
<212>PRT
<213>人
<400>98
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Lys
1               5                   10                  15
<210>99
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>99
ggg atc ccc gat agg ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc    48
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
ctc acc atc agt aga ctg gag cct gaa gat gct gca gcg tat tac tgt    96
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>100
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>100
Gly Ile ProAsp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1              5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys
            20                   25                  30
<210>101
<211>36
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(36)
<223>
<400>101
ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt aca    36
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>102
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>102
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>103
<211>69
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(69)
<223>
<400>103
gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg tct cca ggc    48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
gag aga gcc acc ctc tcc tgc    69
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
            20
<210>104
<211>23
<212>PRT
<213>人
<400>104
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
             20
<210>105
<211>45
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(45)
<223>
<400>105
tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg ctt ctc atc aag    45
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Lys
1               5                   10                  15
<210>106
<211>15
<212>PRT
<213>人
<400>106
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu LeuIle Lys
1               5                  10                  15
<210>107
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>107
ggg atc ccc gat agg ttc agt ggc agt gga tct ggg aca gat ttc acc    48
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
ctc acc atc agt aga ctg gag cct gaa gat ttc gca gtg tat tac tgt    96
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>108
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>108
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1               5                   10                  15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
            20                  25                  30
<210>109
<211>36
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(36)
<223>
<400>109
ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa cgt aca    36
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>110
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>110
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
1               5                   10
<210>111
<211>411
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(411)
<223>
<400>111
atg gag ttt ggg ctg agc tgg gtt ttc ctt gtt gct ata tta aaa ggt    48
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
gtc cag tgt gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta cag    96
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
            20                  25                  30
ccc ggg ggg tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc    144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
agt agc ttt gct atg cac tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg    192
Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
gag tgg ata tca gtt att gat act cgt ggt gcc aca tac tat gca gac    240
Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
65                  70                  75                  80
tcc gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc    288
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
                85                  90                  95
ttg tat ctt caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gct gtg tat    336
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
            100                 105                 110
tac tgt gca aga ctg ggg aac ttc tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc    384
Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
        115                 120                 125
caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca                                411
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
    130                 135
<210>112
<211>137
<212>PRT
<213>人
<400>112
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
            20                  25                  30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45
Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
                85                  90                  95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
            100                 105                 110
Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
        115                 120                 125
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
    130                 135
<210>113
<211>75
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(75)
<223>
<400>l13
gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg    48
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct                                75
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
            20                  25
<210>114
<211>25
<212>PRT
<213>人
<400>114
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
            20                  25
<210>115
<211>42
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(42)
<223>
<400>115
tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg ata tca    42
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser
1               5                   10
<210>116
<211>14
<212>PRT
<213>人
<400>116
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser
1               5                   10
<210>117
<211>96
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(96)
<223>
<400>117
cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt caa    48
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                  15
atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gct gtg tat tac tgt gca aga    96
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210>118
<211>32
<212>PRT
<213>人
<400>118
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn  Ser Leu Tyr Leu Gln
1               5                   10                   15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
            20                  25                  30
<210>119
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<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(33)
<223>
<400>119
tgg ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca    33
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210>120
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>120
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10

Claims (95)

1. 分离的抗体，其包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包括由SEQ ID NO：8所定义的CDR-L1、SEQ ID NO：9所定义的CDR-L2和SEQ ID NO：10所定义的CDR-L3；和重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包括SEQ ID NO：14或17所定义的CDR-H1、SEQ ID NO：15所定义的CDR-H2和SEQ ID NO：16所定义的CDR-H3。
2. 权利要求1的分离的抗体，其包含由质拉15H12/19D12 HCA(γ4)中的多核苷酸编码的重链，所述质粒在美国典型培养物保藏中心(ATCC)以保藏号PTA-5214保藏；和/或由质粒15H12/19D12 LCF(κ)中的多核苷酸编码的轻链，所述质粒在美国其型培养物保藏中心(ATCC)以保藏号PTA-5220保藏。
3. 包含权利要求2的抗体和可药用载体的药物组合物。
4. 权利要求1的分离的抗体，其包含由质粒15H12/19D12 HCA(γ1)中的多核苷酸编码的重链，所述质粒在美国典型培养物保藏中心(ATCC)以保藏号PTA-5216保藏；和/或由质粒15H12/19D12 LCF(κ)中的多核苷酸编码的轻链，所述质粒在美国典型培养物保藏中心(ATCC)以保藏号PTA-5220保藏。
5. 包含权利要求4的抗体和可药用载体的药物组合物。
6. 权利要求1的分离的抗体，其可以特异地结合于IGFR1，所述抗体包含选自下列的特征：
(a)以约8.6×10-10或更小的Kd值与IGFR1结合；
(b)具有对IGFR1的解离速率(Koff)约为6.50×10-5或更小；
(c)具有对IGFR1的结合速率(Kon)约为0.7×105或更大；
(d)与IGF1竞争结合于IGFR1；
(e)抑制IGFR1的自身磷酸化；以及
(f)抑制表达IGFR1的细胞的无贴壁依赖性生长。
7. 权利要求6的分离的抗体，其包含全部所述特征。
8. 权利要求1的抗体，其可以特异地结合于IGFR1，所述抗体包括包含SEQ ID NO：45的第20-137位氨基酸的多肽；及包含SEQ IDNO：78的第20-128位氨基酸的多肽。
9. 包括权利要求1的抗体和可药用载体的药物组合物。
10. 权利要求1的抗体在制备治疗或预防受试者医学病症的药物中的用途，其中所述的医学病症由***受体I的提高的表达或提高的活性所介导。
11. 权利要求10的用途，其中所述医学病症选自：肢端肥大症、膀胱癌、Wilm氏癌、卵巢癌、胰腺癌、良性***增生、乳腺癌、***癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、***、滑膜肉瘤、转移的类癌瘤相关的腹泻、血管活性肠肽分泌肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管平滑肌再狭窄和微血管异常增生。
12. 权利要求10的用途，其中所述药物是肠胃外制剂。
13. 权利要求10的用途，其中所述药物是与其他的抗癌治疗剂或抗癌治疗方法的治疗组合。
14. 权利要求11的用途，其中所述医学病症选自：Wilm氏癌、乳腺癌和结直肠癌。
15. 分离的抗体，其可以特异地结合于IGFR1，所述抗体包含轻链氨基酸序列和重链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包括连接于κ轻链免疫球蛋白恒定区的由SEQ ID NO：8所定义的CDR-L1、SEQ ID NO：9所定义的CDR-L2和SEQ ID NO：10所定义的CDR-L3，所述重链氨基酸序列包括连接于γ1重链免疫球蛋白恒定区的SEQ ID NO：14或17所定义的CDR-H1、SEQ ID NO：15所定义的CDR-H2和SEQ ID NO：16所定义的CDR-H3。
16. 分离的抗体，所述抗体包括选自如下的成员：
(a)包括SEQ ID NO：2第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：4第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；
(b)包括SEQ ID NO：72第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：45第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；
(c)包括SEQ ID NO：74第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：45第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；
(d)包括SEQ ID NO：76第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：45第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；
(e)包括SEQ ID NO：78第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：45第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；
(f)包括SEQ ID NO：72第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：112第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；
(g)包括SEQ ID NO：74第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：112第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；
(h)包括SEQ ID NO：76第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：112第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区；及
(i)包括SEQ ID NO：78第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：112第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区。
17. 权利要求16的抗体，其是单克隆的。
18. 权利要求16的抗体，其是多克隆的。
19. 权利要求16的抗体，其是重组的。
20. 包括权利要求16的抗体和可药用载体的药物组合物。
21. 包括权利要求16的分离的抗体和抗癌治疗剂的组合物。
22. 权利要求21的组合物，其中所述抗癌治疗剂是选自下列的一个或多个成员：氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、melphalen、chlorambucol、尿嘧啶氮芥、雌莫司汀、噻替哌、白消安、罗氮芥、亚硝脲氮芥、链脲霉素、达卡巴嗪、顺铂、卡铂、六甲密胺、氨甲蝶呤、5-氟脲嘧啶、氟尿苷、5-氟脱氧尿苷、卡培他滨、氟达拉滨、胞嘧啶***糖苷、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、吉西他滨、克拉屈滨、脱氧助间型霉素、喷司他丁、阿霉素、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、戊柔比星、米托蒽醌、放线菌素D、光辉霉素、普卡霉素、丝裂霉素C、博来霉素、甲苄肼、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春烯碱、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、替尼泊苷、丙亚胺、马马司他、COL-3、neovastat、BMS-275291、沙立度胺、squalamine、内皮抑制素、SU5416、SU6668、干扰素-α、EMD121974、白细胞介素-12、IM862、血管抑制素、vitaxin、三苯氧胺、托瑞米芬、雷洛昔芬、着洛西芬、iodoxyfene、阿那曲唑、来曲唑、依西美坦、氟利坦、尼鲁米特、比卡鲁胺、螺内酯、环丙孕酮、非那雄胺、西咪替丁、司徒曼布、利妥希玛、denileukin diftitox、与5-氟脲嘧啶、干扰素和白细胞介素-2联用的左旋咪唑。
23. 权利要求22的组合物，其中所述抗癌治疗剂是紫杉醇。
24. 权利要求22的组合物，其中所述抗癌治疗剂是多西他赛。
25. 权利要求22的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春新碱。
26. 权利要求22的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春碱。
27. 权利要求22的组合物，其中所述抗癌治疗剂是阿霉素。
28. 权利要求22的组合物，其中所述抗癌治疗剂是柔红霉素。
29. 权利要求22的组合物，其中所述抗癌治疗剂是三苯氧胺。
30. 包含权利要求21的组合物和可药用载体的药物组合物。
31. 权利要求16的抗体在制备用于治疗受试者医学病症的药物中的用途，其中所述的医学病症由***受体I的提高的表达或提高的活性所介导。
32. 权利要求31的用途，其中所述受试者是人。
33. 权利要求31的用途，其中所述医学病症选自：肢端肥大症、膀胱癌、Wilm氏癌、卵巢癌、胰腺癌、良性***增生、乳腺癌、***癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、***、滑膜肉瘤、转移的类癌瘤相关的腹泻、血管活性肠肽分泌肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管平滑肌再狭窄和微血管异常增生。
34. 权利要求33的用途，其中所述病症为结直肠癌。
35. 权利要求33的用途，其中所述病症为乳腺癌。
36. 权利要求33的用途，其中所述病症为Wilm氏癌。
37. 权利要求31的用途，其中所述药物是肠胃外制剂。
38. 权利要求31的用途，其中所述药物是与其他的抗癌治疗剂或抗癌治疗方法的治疗组合。
39. 权利要求38的用途，其中所述抗癌治疗方法为放射治疗或外科肿瘤切除术。
40. 单克隆抗体，其可以特异地结合于IGFR1，所述抗体包括：
包括SEQ ID NO：78第20-128位氨基酸的轻链免疫球蛋白可变区和包括SEQ ID NO：45第20-137位氨基酸的重链免疫球蛋白可变区。
41. 权利要求40的抗体，其是单克隆的。
42. 权利要求40的抗体，其是多克隆的。
43. 权利要求40的抗体，其是重组的。
44. 包括权利要求40的分离的抗体和可药用载体的药物组合物。
45. 包含权利要求40的分离的抗体和抗癌治疗剂的组合物。
46. 权利要求45的组合物，其中所述抗癌治疗剂是选自下列的一个或多个成员：氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、melphalen、chlorambucol、尿嘧啶氮芥、雌莫司汀、噻替哌、白消安、罗氮芥、亚硝脲氮芥、链脲霉素、达卡巴嗪、顺铂、卡铂、六甲密胺、氨甲蝶呤、5-氟脲嘧啶、氟尿苷、5-氟脱氧尿苷、卡培他滨、氟达拉滨、胞嘧啶***糖苷、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、吉西他滨、克拉屈滨、脱氧助间型霉素、喷司他丁、阿霉素、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、戊柔比星、米托蒽醌、放线菌素D、光辉霉素、普卡霉素、丝裂霉素C、博来霉素、甲苄肼、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春烯碱、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、替尼泊苷、丙亚胺、马马司他、COL-3、neovastat、BMS-275291、沙立度胺、squalamine、内皮抑制素、SU5416、SU6668、干扰素-α、EMD121974、白细胞介素-12、IM862、血管抑制素、vitaxin、三苯氧胺、托瑞米芬、雷洛昔芬、着洛西芬、iodoxyfene、阿那曲唑、来曲唑、依西美坦、氟利坦、尼鲁米特、比卡鲁胺、螺内酯、环丙孕酮、非那雄胺、西咪替丁、司徒曼布、利妥希玛、denileukin diftitox、与5-氟脲嘧啶、干扰素和白细胞介素-2联用的左旋咪唑。
47. 权利要求46的组合物，其中所述抗癌治疗剂是紫杉醇。
48. 权利要求46的组合物，其中所述抗癌治疗剂是多西他赛。
49. 权利要求46的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春新碱。
50. 权利要求46的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春碱。
51. 权利要求46的组合物，其中所述抗癌治疗剂是阿霉素。
52. 权利要求46的组合物，其中所述抗瘤治疗剂是柔红霉素。
53. 权利要求46的组合物，其中所述抗癌治疗剂是三苯氧胺。
54. 包含权利要求45的组合物和可药用载体的药物组合物。
55. 权利要求40的抗体在制备用于治疗受试者医学病症的药物中的用途，其中所述的医学病症由***受体I的提高的表达或提高的活性所介导。
56. 权利要求55的用途，其中所述受试者是人。
57. 权利要求55的用途，其中所述医学病症选自：肢端肥大症、膀胱癌、Wilm氏癌、卵巢癌、胰腺癌、良性***增生、乳腺癌、***癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、***、滑膜肉瘤、转移的类癌瘤相关的腹泻、血管活性肠肽分泌肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管平滑肌再狭窄和微血管异常增生。
58. 权利要求57的用途，其中所述病症为结直肠癌。
59. 权利要求57的用途，其中所述病症为乳腺癌。
60. 权利要求57的用途，其中所述病症为Wilm氏癌。
61. 权利要求55的用途，其中所述药物是肠胃外制剂。
62. 权利要求55的用途，其中所述药物是与其他的抗癌治疗剂或抗癌治疗方法的治疗组合。
63. 权利要求62的用途，其中所述抗癌治疗方法为放射治疗或外科肿瘤切除术。
64. 单克隆抗体，其包含轻链免疫球蛋白可变区和重链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括与κ轻链恒定区连接的SEQ ID NO：78的氨基酸20-128，所述重链免疫球蛋白可变区包括与γ1重链恒定区连接的SEQ ID NO：45的氨基酸20-137。
65. 权利要求64的抗体在制备用于治疗受试者医学病症的药物中的用途，其中所述的医学病症由***受体I的提高的表达或提高的活性所介导。
66. 权利要求65的用途，其中所述受试者是人。
67. 权利要求65的用途，其中所述医学病症选自：肢端肥大症、膀胱癌、Wilm氏癌、卵巢癌、胰腺癌、良性***增生、乳腺癌、***癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、***、滑膜肉瘤、转移的类癌瘤相关的腹泻、血管活性肠肽分泌肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管平滑肌再狭窄和微血管异常增生。
68. 权利要求67的用途，其中所述病症为结直肠癌。
69. 权利要求67的用途，其中所述病症为乳腺癌。
70. 权利要求67的用途，其中所述病症为Wilm氏癌。
71. 权利要求65的用途，其中所述药物是肠胃外制剂。
72. 权利要求65的用途，其中所述药物是与其他的抗癌治疗剂或抗癌治疗方法的治疗组合。
73. 权利要求72的用途，其中所述抗癌治疗方法为放射治疗或外科肿瘤切除术。
74. 包括权利要求64的分离的抗体和可药用载体的药物组合物。
75. 包含权利要求64的分离的抗体和抗癌治疗剂的组合物。
76. 权利要求75的组合物，其中所述抗癌治疗剂是选自下列的一个或多个成员：氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、melphalen、chlorambucol、尿嘧啶氮芥、雌莫司汀、噻替哌、白消安、罗氮芥、亚硝脲氮芥、键脲霉素、达卡巴嗪、顺铂、卡铂、六甲密胺、氨甲蝶呤、5-氟脲嘧啶、氟尿苷、5-氟脱氧尿苷、卡培他滨、氟达拉滨、胞嘧啶***糖苷、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、吉西他滨、克拉屈滨、脱氧助间型霉素、喷司他丁、阿霉素、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、戊柔比星、米托蒽醌、放线菌素D、光辉霉素、普卡霉素、丝裂霉素C、博来霉素、甲苄肼、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春烯碱、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、替尼泊苷、丙亚胺、马马司他、COL-3、neovastat、BMS-275291、沙立度胺、squalamine、内皮抑制素、SU5416、SU6668、干扰素-α、EMD121974、白细胞介素-12、IM862、血管抑制素、vitaxin、三苯氧胺、托瑞米芬、雷洛昔芬、着洛西芬、iodoxyfene、阿那曲唑、来曲唑、依西美坦、氟利坦、尼鲁米特、比卡鲁胺、螺内酯、环丙孕酮、非那雄胺、西咪替丁、司徒曼布、利妥希玛、denileukin diftitox、与5-氟脲嘧啶、干扰素和白细胞介素-2联用的左旋咪唑。
77. 权利要求76的组合物，其中所述抗癌治疗剂是紫杉醇。
78. 权利要求76的组合物，其中所述抗癌治疗剂是多西他赛。
79. 权利要求76的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春新碱。
80. 权利要求76的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春碱。
81. 权利要求76的组合物，其中所述抗癌治疗剂是阿霉素。
82. 权利要求76的组合物，其中所述抗癌治疗剂是柔红霉素。
83. 权利要求76的组合物，其中所述抗癌治疗剂是三苯氧胺。
84. 包含权利要求75的组合物和可药用载体的药物组合物。
85. 单克隆抗体，其包含
(a)与κ轻链恒定区连接的轻链氨基酸序列，其包括SEQ ID NO：8所定义的CDR-L1、SEQ ID NO：9所定义的CDR-L2和SEQ ID NO：10所定义的CDR-L3；和
(b)与γ1重链恒定区连接的重链氨基酸序列，其包括SEQ ID NO：14或17所定义的CDR-H1、SEQ ID NO：15所定义的CDR-H2和SEQ IDNO：16所定义的CDR-H3。
86. 包含分离的抗体和抗癌治疗剂的组合物，所述分离的抗体包含轻链氨基酸序列，其包括由SEQ ID NO：8所定义的CDR-L1、SEQ IDNO：9所定义的CDR-L2和SEQ ID NO：10所定义的CDR-L3；和重链氨基酸序列，其包括SEQ ID NO：14或17所定义的CDR-H1、SEQ ID NO：15所定义的CDR-H2和SEQ ID NO：16所定义的CDR-H3。
87. 权利要求86的组合物，其中所述抗癌治疗剂是选自下列的一个或多个成员：氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、melphalen、chlorambucol、尿嘧啶氮芥、雌莫司汀、噻替哌、白消安、罗氮芥、亚硝脲氮芥、链脲霉素、达卡巴嗪、顺铂、卡铂、六甲密胺、氨甲蝶呤、5-氟脲嘧啶、氟尿苷、5-氟脱氧尿苷、卡培他滨、氟达拉滨、胞嘧啶***糖苷、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、吉西他滨、克拉屈滨、脱氧助间型霉素、喷司他丁、阿霉素、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、戊柔比星、米托蒽醌、放线菌素D、光辉霉素、普卡霉素、丝裂霉素C、博来霉素、甲苄肼、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春烯碱、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、替尼泊苷、丙亚胺、马马司他、COL-3、neovastat、BMS-275291、沙立度胺、squalamine、内皮抑制素、SU5416、SU6668、干扰素-α、EMD121974、白细胞介素-12、IM862、血管抑制素、vitaxin、三苯氧胺、托瑞米芬、雷洛昔芬、着洛西芬、iodoxyfene、阿那曲唑、来曲唑、依西美坦、氟利坦、尼鲁米特、比卡鲁胺、螺内酯、环丙孕酮、非那雄胺、西咪替丁、司徒曼布、利妥希玛、denileukin diftitox、与5-氟脲嘧啶、干扰素和白细胞介素-2联用的左旋咪唑。
88. 权利要求87的组合物，其中所述抗癌治疗剂是紫杉醇。
89. 权利要求87的组合物，其中所述抗癌治疗剂是多西他赛。
90. 权利要求87的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春新碱。
91. 权利要求87的组合物，其中所述抗癌治疗剂是长春碱。
92. 权利要求87的组合物，其中所述抗癌治疗剂是阿霉素。
93. 权利要求87的组合物，其中所述抗癌治疗剂是柔红霉素。
94. 权利要求87的组合物，其中所述抗癌治疗剂是三苯氧胺。
95. 包含权利要求86的组合物和可药用载体的药物组合物。
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