BRPI0622030A2 - Derivados de purina 7-substituída, para imunossupressão - Google Patents

Description

"DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA, PARA IMUNOSSUPRESSÃO"

CAMPO DA INVENÇÃO

A invenção relaciona-se a derivados de purinona, úteis como imunossupressores.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A imunossupressão é uma abordagem clinica importante no tratamento de doenças auto-imunes e na prevenção de rejeição de órgãos e tecidos. Os imunossupressores clinicamente disponíveis, incluindo azatioprina, ciclosporina e tacrolimus, embora efetivos, freqüentemente causam efeitos colaterais indesejáveis, incluindo nefrotoxicidade, hipertensão, distúrbios gastro-intestinais e inflamação de gengivas. Os inibidores de quinase de tirosina Jak3 são conhecidos por serem úteis como imunossupressores (vide a patente U.S. 6,313,129).

Os membros da família de quinase de Janus (Jak - Janus kinase) de quinases de tirosina não-receptoras intracelulares são componentes de transdução de sinal de citocina. Quatro membros da família foram identificados até o momento: Jakl, Jak2, Jak3 e Tyk2 (Tyk - Tyrosine kinase) . As Jaks cumprem um papel fundamental na sinalização intracelular mediada por receptores de citocina. Na ligação das citocinas aos seus receptores, as Jaks são ativadas e fosforilam os receptores, criando locais de ancoramento para outras moléculas de sinalização, em particular membros da família de transdutor de s^inal e ativador de transcrição (TSAT) . Ao passo que a expressão de Jakl, Jak2 e Tyk2 é relativamente onipresente, a expressão de Jak3 é regulada temporal e espacialmente. A Jak3 é expressa predominantemente em células de linhagem hematopoiética; ela é constitutivamente expressa em células assassinas naturais (AN) e timócitos e é induzível em células T, células B e células mielóides (revisto em Ortmann, et al. , 1999 e Yamaoka, et al. , 2004) . A Jak3 também é expressa em células-tronco e sua atividade enzimática é aumentada por receptores IgE/ligação cruzada FcsRI (Malaviya e Uckun, 1999) .

Um inibidor de Jak3 oralmente ativo, específico, CP-690.550, demonstrou agir como um imunossupressor efetivo e prolongou a sobrevivência de um animal em um modelo de murídeo de transplante de coração e um modelo de primata de transplante de rim (Changelian, et al., 2003).

Além disso, a atividade de Jak3 anômala tem sido 5 associada a uma forma leucêmica de linfoma cutâneo de células-T (síndrome de Sezary) e leucemia linfoblástica aguda (LLA), a forma mais comum de câncer na infância. A identificação de inibidores de Jak3 tem fornecido a base para novas abordagens clínicas no tratamento de leucemias e linfomas (revisto em Uckun, et al., 10 2005) . Dois derivados de dimetóxiquinazolina, WHI-P131 (JANEX-I) e WHI-P154 (JANEX-2), foram relatados como sendo inibidores seletivos de Jak3 em células leucêmicas (Sudbeck et al., 1999).

A Jak3 também demonstrou desempenhar um papel em reações alérgicas e doenças inflamatórias mediadas por mastócitos, servindo como um alvo em indicações como asma e anafilaxia.

Logo, compostos que inibem Jak3 são úteis para indicações como de leucemias e linfomas, rejeição de transplante de órgãos e de medula óssea, reações alérgicas e doenças inflamatórias e distúrbios mediados por mastócitos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Descobriu-se agora que os compostos da fórmula geral III são potentes inibidores seletivos de Jak3:

Nestes compostos,

Qi e Q2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em CX1, CX2 e nitrogênio, em que Q1 e Q2 não são ambos nitrogênio;

Q3 é N ou CH;

X1 e X2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C6) alquila, ciano, halo, halo (Ci-C6) alquila, hidroxila, (Ci-C6) alcóxi; halo (Ci-C6) alcóxi e nitro;

R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila;

y é zero ou um inteiro selecionado de 1, 2 e 3;

R2 e R3 são selecionados independentemente para cada ocorrência de (CR2R3) , do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila;

R4 é selecionado de um grupo que consiste em alquila, heterociclila, arila, hetero-arila, alquila substituída, heterociclila substituída, arila substituída, hetero-arila substituída; e

R5 é selecionado do grupo que consiste em alquila, heterociclila, heterociclila substituída e C1-C6 alquila, em que

(a) um ou dois CH2 são substituídos por um grupo escolhido de NH e N(alquila);

(b) um ou dois CH2 são substituídos por O;

(c) um ou dois CH2 são substituídos por (C=O) ;

(d) dois CH2 são substituídos por CH=CH ou C=C;

ou

(e) qualquer combinação quimicamente estável de (a) , (b) (c) e (d) ;

e em que de zero até três hidrogênios são substituídos por um substituinte escolhido de:

(a) halogênio, hidróxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino, alcóxi inferior;

(b) heterociclila e heterociclila substituída com

um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila;

(c) fenila e fenila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila, acilamino, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila, halo-alquila e heterociclila; e (d) hetero-arila e hetero-arila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila.

Os membros destes gêneros são úteis para inibir a 5 atividade de Jak3 e como tal são úteis em indicações em que a imunossupressão clínica é desejada e no tratamento de cânceres hematológicos. Os compostos são mais seletivos para Jak3 do que para quinases de Aurora A, que são os compostos correspondentes nos quais R5 é hidrogênio.

Em outro aspecto, a invenção relaciona-se a

composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto da fórmula geral III, ou um sal farmaceuticamente aceitável; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

Em outro aspecto, a invenção relaciona-se a um

método para tratar uma doença, alterando uma resposta mediada por quinase de tirosina Jak3. 0 método compreende colocar em contato com Jak3 pelo menos um composto da fórmula geral III.

Ainda em outro aspecto, a presente invenção relaciona-se a um método para suprimir o sistema imunológico em um indivíduo em carência, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto da fórmula geral III.

Em um aspecto adicional, a presente invenção 25 relaciona-se a um método para tratar uma doença ou distúrbio selecionado de uma doença auto-imune, uma doença inflamatória, uma doença mediada por mastócitos, uma malignidade hematológica e rejeição de transplante de órgãos, em um indivíduo em carência, compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade 30 terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto da fórmula geral III.

A supressão da atividade do sistema imunológico é desejável para prevenir ou tratar rejeição de órgãos ou tecidos após cirurgia de transplante e para prevenir e tratar doenças e 35 distúrbios que surgem da atividade aberrante do sistema imunológico, em particular distúrbios e doenças auto-imunes. Distúrbios auto-imunes exemplificativos incluem doenças do enxerto contra o hospedeiro (DEVH), diabetes dependente de insulina (Tipo I), tireoidite de Hashimoto e doença de Graves, anemia perniciosa, doença de Addison, hepatite ativa crônica, doença de Crohn, colite ulcerativa, artrite reumática, esclerose múltipla, lupus sistêmico eritematoso, psoríase, escleroderma e miastenia grave.

Os compostos da presente invenção são úteis prevenindo e tratando doenças e distúrbios relacionados a reações alérgicas e inflamação mediadas por mastócitos, tal como ceratoconjuntivite sicca.

Outras indicações nas quais os inibidores de Jak3 são úteis incluem leucemias e linfomas.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Ao longo deste relatório serão definidos quando mencionados pela primeira vez e reterão suas definições.

Em um primeiro aspecto a invenção relaciona-se a purinonas e imidazopiridinonas tendo a fórmula geral III:

Os membros do gênero III podem ser convenientemente divididos em subgêneros, baseado nos valores de Q. Quando Qi é nitrogênio e Q2 é carbono, surge um subgênero de purinonas e imidazo[4,5-b]piridinonas tendo uma imidazo[4,5- c]piridina anexada. Quando Qi é carbono e Q2 é nitrogênio, surge um subgênero de purinonas e imidazo[4,5-b]piridinonas tendo uma imidazo[5,4-c]piridina anexada. Quando Qi e Q2 forem ambos carbono, surge um subgênero de purinonas e imidazo[4,5-b]piridinonas tendo uma benzimidazola anexada. O gênero poderia ser semelhantemente dividido com base em Q3. Quando Q3 é nitrogênio, surge um subgênero de purinonas tendo uma imidazo[4,5-c]piridina, imidazo[5,4- c]piridina, ou benzimidazola, anexada. Quando Q3 é carbono, surge um subgênero de imidazo[4,5-b]piridinonas tendo uma imidazo[4,5- c]piridina, imidazo[5,4-c]piridina, ou benzimidazola, anexada. As estruturas destes subgêneros são mostradas abaixo:

10

Em certas formas de incorporação, Xi e X2 são selecionados de hidrogênio, ciano, cloro, flúor, trifluorometila, trifluorometóxi e metila; em outras formas de incorporação Ri é H. Em uma subdivisão, y é zero; em outra y é 1 ou 2 e R2 e R3 são hidrogênio ou metila. Exemplos de R4 incluem: ciclopentila, ciclo- hexila, piperidina, oxepano, benzoxepano, di-

hidrociclopentapiridina, fenila, benzila, tetralina, indano, tetra-hidropirano, tetra-hidrofurano, tetra-hidro-indola,

isoquinolina, tetra-hidro-isoquinolina, quinolina, tetra-

hidroquinolina, cromano, piridina, pirimidina, pirazina, di- hidropirano, di-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzofurano, tetra- hidrobenzotiofeno, furano, di-hidropirano[2,3-b]piridina (vide o exemplo abaixo), tetra-hidroquinoxalina, tetra-hidrotiopirano (tiano), tiocromano (di-hidrobenzotiina), ou quaisquer dos anéis precedentes portando 1 a 3 substituintes adicionais, tais como halogênio, metila, metóxi, trifluorometila, ciano, hidróxi, oxo, 5 óxido e acetila. Exemplos adicionais nos quais R4 é alquila ou alquila substituída incluem subgêneros nos quais R4 é oxa-alquila (alcóxi-alquila).

Em certas formas de incorporação do gênero III, y é 1 ou 2; R2 e R3 são hidrogênio ou metila e R4 é fenila, quinolina, piridina, pirazina ou fenila substituída, quinolina, piridina ou pirazina. Em outras formas de incorporação do gênero III, y é zero e R4 é ciclopentila, ciclo-hexila, fenila, indano, piperidina, oxepano, benzoxepano, di-hidrociclopentapiridina, tetralina, tetra-hidropirano, tetra-hidrofurano, tetra-hidro- indola, isoquinolina, tetra-hidro-isoquinolina, quinolina, tetra- hidroquinolina, cromano, piridina, pirimidina, di-hidropirano, di- hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzotiofeno, furano, di-hidropirano[2,3-b]piridina, tetra-hidroquinoxalina, tetra-hidrotiopirano (tiano), tiocromano (di-hidrobenzotiína), ou um anel substituído da lista precedente. Em formas de incorporação adicionais, (a) y é zero e R4 é selecionado de ciclo-hexila, oxepano, tetralina, indano, di-hidrociclopentapiridina, tetra- hidropirano, tetra-hidroquinolina, cromano, di-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzofurano, di-hidropirano[2,3-b]piridina e tetra- hidroquinoxalina, cada um opcionalmente substituído com hidróxi, oxo, ou halogênio; ou (b) y é 1 ou 2, R2 e R3 são hidrogênio ou metila e R4 é selecionado de fenila, piridina e pirazina, cada um opcionalmente substituído com halogênio. Quando y for zero, R4 pode ser tetra-hidropirano-4-ila, 4-hidróxiciclo-hexila, 4- oxociclo-hexila, oxepano-4-ila, cromano-4-ila; 3,4-di-

hidronaftaleno-1(2H)-ona-4-ila; 2, 3-di-hidro-indeno-l-ona-4-ila e suas contrapartes substituídas de flúor. Parece que, embora ambos os enantiômeros sejam ativos, os compostos nos quais o carbono na posição 4 do cromano é da configuração (R) têm potência mais alta. 35 Certos subgêneros precedentes nos quais y é zero também podem ser descritos por uma representação na qual R4 é: De acordo com esta representação, W é CH2, C=O ou O; p é 1, 2 ou 3; e A é um anel hetero-aromático de seis membros contendo 1 ou 2 nitrogênios, ou um anel de benzeno opcionalmente 5 substituído com uma ou duas fluorinas. A linha ondulada denota o ponto de fixação à purinona. Os compostos, nos quais o carbono marcado com um asterisco

é da configuração (R) , parecem ser mais potentes que seus enantiômeros (S) correspondentes. Outras formas de incorporação incluem compostos nos quais y é I e R4 é selecionado de difluorofenila, fluorofenila, clorofenila, clorofluorofenila, piridina-3-ila e pirazina-3-ila.

Em certas formas de incorporação do gênero III, Xi e X2 são selecionados de hidrogênio, ciano, cloro, flúor, trifluorometila, trifluorometóxi e metila. Em formas de incorporação mais limitadas, Xi ê selecionado de hidrogênio, ciano e flúor; Q1 e Q2 são CXi; Q3 é N e Ri é H. Em algumas formas de incorporação, y é zero e R4 é selecionado de ciclo-hexila, tetralina, indano, oxepano. di-hidrociclopentapiridina, tetra- hidropirano, tetra-hidroquinolina, cromano, di-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzofurano, di-hidropirano[2,3-b]piridina e tetra- hidroquinoxalina, cada um opcionalmente substituído com hidróxi, oxo, ou halogênio. Em outras formas de incorporação y é 1 ou 2, R2 e R3 são hidrogênio ou metila e R4 é selecionado de fenila, piridina e pirazina, cada um opcionalmente substituído com halogênio. Em certas formas de incorporação, R5 é alquila Ci- C6 em que foram feitas certas substituições e substituições. Em uma forma de incorporação, (a) , um ou dois CH2 podem ser substituídos por NH ou N(alquila). Estes resíduos também são

chamados de aza-alquila. Um exemplo de tal R5 é

CH2CH2CH2N(CH3)CH2Cn, que pode ser considerado 5-cianopentano no qual um CH2 foi substituído por N(CH3) . Em uma forma de incorporação, (b) , um ou dois CH2 podem ser substituídos por O. Estes resíduos também são chamados de oxa-alquila. Em uma forma de 10 incorporação, (c) , um ou dois CH2 podem ser substituídos por (C=O). Um exemplo de tal R5 é:

morfolinila) etila na qual CH2 foi substituído por C=O. Em uma forma de incorporação, (d) , dois CH2 são substituídos por CH=CH ou C=C. Um exemplo de tal R5 é 3-metilbut-2-eno-l-ila [-CH2CH=C(CH3)2]. Uma forma de incorporação adicional inclui (e) , qualquer combinação quimicamente estável de (a) , (b) (c) e (d) . Um exemplo de tal R5 é -CH2CH2CH2NHC (=0) CH2CN, que pode ser considerado 6- ciano-hexano no qual CH2 foi substituído por NH e um CH2 foi substituído por C=0. 0 termo "quimicamente estável" é prontamente compreendido por especialistas na área química. Ele engloba compostos que podem ser isolados e purificados e que não se decompõem de forma mensurável em pH fisiológico, em solução aquosa, ou o fazem a uma taxa tal que >99% permaneçam, depois de uma hora à temperatura ambiente. Em todos estes compostos, de zero até três hidrogênios podem ser substituídos por um substituinte escolhido de:

(a) halogênio, hidróxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino, alcóxi inferior; (b) heterociclila e heterociclila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila;

(c) fenila e fenila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila, acilamino, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila, halo-alquila e heterociclila.

Alguns exemplos dos substituintes acima mencionados para alquila Ci-C6 incluem, mas não são limitados a:

-C!

/·

O s.

'cr Il ch3 õ

'N

CH3

CH3

O

OMe Em certas formas de incorporação do gênero III, Q1 é CX1, Q2 é CX2, X1 é hidrogênio, X2 é um substituinte na posição

6 da benzimidazola e X2 é escolhido de hidrogênio, flúor e ciano.

Todos os compostos caindo dentro do gênero matriz precedente e seus subgêneros, são úteis como inibidores de Jak3.

Definições

Para conveniência e clareza, certos termos empregados neste relatório, exemplos e reivindicações são aqui descritos.

Sob o termo alquila pretende-se designar

estruturas de hidrocarbonetos cíclicas, lineares, ou ramificadas e suas combinações. Alquila inferior refere-se a grupos alquila com

1 a 6 átomos de carbono. Exemplos de grupos alquila inferiores incluem metila, etila, propila, isopropila, butila, s- e t-butila 15 e similares. Grupos alquila preferidos são aqueles com C20 ou abaixo de; os mais preferidos são alquila C1-CS. A ciclo-alquila é um subconjunto de alquila e inclui grupos de hidrocarbonetos cíclicos com 3 a 8 átomos de carbono. Exemplos de grupos ciclo- alquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo- 20 hexila, norbornila e similares.

Hidrocarbonetos C1 a C20 incluem alquila, ciclo- alquila, alquenila, alquinila, arila e suas combinações. Exemplos incluem fenetila, ciclo-hexilmetila, camforila e naftiletila.

Alcóxi ou alcoxila refere-se a grupos com 1 a 8 25 átomos de carbono de uma configuração cíclica, reta, ou ramificada e suas combinações, ligadas à estrutura matriz por meio de um oxigênio. Exemplos incluem metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, ciclopropilóxi, ciclo-hexilóxi e similares. Alcóxi inferior refere-se a grupos contendo de um a quatro carbonos. 0 significado 30 do termo oxa-alquila é aquele empregado pelos especialistas da área [vide "Nome e índice de Substâncias Químicas para Resumos Químicos" (Naming and Indexing of Chemical Substances for Chemical Abstracts), publicado pela Sociedade Química Americana (American Chemical Society), §196, mas sem a restrição do §127(a)] , isto é, 5 refere-se a compostos nos quais o oxigênio é ligado, por meio de uma única ligação, a seus átomos adjacentes (formando ligações de éter); ele não se refere a oxigênio duplamente ligado, como seria encontrado em grupos carbonila.

Acila refere-se a grupos com 1 a 8 átomos de 10 carbono de uma configuração cíclica, reta, ou ramificada, saturada, não-saturada e aromática e suas combinações, ligada à estrutura matriz através de uma funcionalidade de carbonila. Um ou mais carbonos no resíduo de acila podem ser substituídos por nitrogênio, oxigênio ou enxofre, contanto que o ponto de ligação à 15 estrutura matriz permaneça na carbonila. Exemplos incluem acetila, benzoíla, propionila, isobutirila, t-butóxicarbonila,

benzilóxicarbonila e similares. Acila inferior refere-se a grupos contendo de um a quatro carbonos.

Arila e hetero-arila significam um anel aromático 20 ou hetero-aromático com 5 ou 6 membros, contendo 0-3 hetero-átomos selecionados de O, N, ou S; um sistema de anel aromático ou hetero-aromático bicíclico com 9 ou 10 membros, contendo 0-3 hetero-átomos selecionados de O, N, ou S; ou um sistema de anel aromático ou hetero-aromático tricíclico com 13 ou 14 membros, 25 contendo 0-3 hetero-átomos selecionados de O, N, ou S. Os anéis carbocíclicos aromáticos com 6 a 14 membros incluem, por exemplo, benzeno e naftaleno e para os propósitos da presente invenção, metades fundidas tais como tetra-hidronaftaleno (tetralina), indano e fluorina, nos quais um ou mais anéis são aromáticos, mas 30 nem todos precisam ser. Os anéis heterocíclicos aromáticos com 5 a 10 membros incluem, por exemplo, imidazola, piridina, indola, tiofeno, benzopiranona, tiazola, furano, benzimidazola, quinolina, isoquinolina, quinoxalina, pirimidina, pirazina, tetrazola e pirazola.

Arilalquila refere-se a um substituinte no qual

um resíduo de arila é ligado à estrutura matriz através de alquila. Exemplos são benzila, fenetila e similares. Hetero- arilalquila refere-se a um substituinte no qual um resíduo de hetero-arila está ligado à estrutura matriz através de alquila. Exemplos incluem, por exemplo, piridinilmetila, pirimidiniletila e similares.

Heterociclo significa uma ciclo-alquila na qual

um a três carbonos são substituídos por um hetero-átomo selecionado do grupo que consiste em N, O e S. Os hetero-átomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados. Em alguns contextos (diferentes do presente) o termo heterociclo pode ser 10 interpretado como incluindo hetero-arila; para os propósitos desta aplicação, heterociclo é um heterociclo saturado e não inclui hetero-arila. Quando a hetero-arila é pretendida, ela é expressamente indicada. Exemplos de heterociclos incluem pirrolidina, morfolina, dioxano, tetra-hidrofurano e similares. 15 Exemplos de resíduos de heterociclila incluem adicionalmente piperazinila, 2-oxopiperazinila, 2-oxopiperidinila, 2-oxo- pirrolidinila, 4-piperidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, tiazolidinila, quinuclidinila, tetra-hidrofurila, tetra-hidropiranila, tiomorfolinila, sulfóxido de tiomorfolinila e 20 sulfona de tiomorfolinila. Um heterociclo nitrogenoso é um heterociclo contendo pelo menos um nitrogênio no anel; ele pode conter nitrogênios adicionais, bem como outros hetero-átomos.

Alquila, arila, ciclo-alquila, heterociclila, hetero-arila substituídas, etc. referem-se a alquila, arila, 25 ciclo-alquila, heterociclila, ou hetero-arila, em que até três átomos de H em cada resíduo são substituídos com halogênio, halo- alquila, hidróxi, alcóxi inferior, hidróxi-alquila inferior, carbóxi, carbo-alcóxi (também chamado de alcoxicarbonila), carboxamido (também chamado de alquilaminocarbonila),

heterociclilcarbonila, ciano, carbonila, nitro, amino, alquilamino, dialquilamino, alcóxi-amino inferior,

arilaminocarbonila, mercapto, alquiltio, sulfóxido, amino sulfóxido, sulfona, acilamino, amidino, alquenila, ciclo-alquila, fenila, fenila substituída, benzila, benzila substituída, hetero- 35 arila, fenóxi, benzenosulfonila, benzilóxi, ou hetero-arilóxi. Quando a matriz for um heterociclo que permite tal substituição, o termo também inclui óxidos, por exemplo, piridina-N-óxido, sulfóxido de tiopirano e tiopirano-S,S-dióxido. Como mencionado acima, dois hidrogênios em um único carbono podem ser substituídos por uma carbonila para formar um derivado de oxo. Resíduos de arila oxo-substituída dignos de nota incluem tetralona (3,4-di- hidronaftaleno-1(2H)-ona) e indanona (2,3-di-hidro-indeno-l-ona).

Os termos "halogênio" e "halo" referem-se a fluorina, cloro, bromo ou iodo.

Alguns dos compostos aqui descritos podem conter um ou mais centros assimétricos e podem assim dar origem a enantiômeros, diastereômeros e outras formas estéreo-isoméricas que podem ser definidas, em termos de estéreo-química absoluta, como (R) ou (S) . A presente invenção visa incluir tais isômeros, todos eles, possíveis, bem como suas formas racêmicas e opticamente puras. Isômeros (R) e (S) opticamente ativos podem ser preparados usando síntons quirais ou reagentes quirais, ou resolvidos usando técnicas convencionais. Quando os compostos aqui descritos contêm ligações duplas olefínicas ou outros centros de assimetria geométrica e, a menos que seja especificado em contrário, pretende-se que os compostos incluam ambos os isômeros geométricos E e Z. Igualmente se pretende que todas as formas tautoméricas estejam incluídas. A configuração de qualquer ligação dupla carbono-carbono que apareça aqui foi eleita somente para conveniência e não se pretende que designe uma configuração particular; assim, uma ligação dupla carbono-carbono aqui descrita arbitrariamente como trans, pode ser Z, E, ou uma mistura das duas em qualquer proporção.

As representações gráficas de compostos racêmicos, ambiscalêmicos e escalêmicos ou enantiomericamente puros aqui usados são tomadas de Maehr J. Chem., Ed. 62, 114-120 30 (1985); as "cunhas" (triângulos) sólidas e tracejadas são usadas para denotar a configuração absoluta de um elemento quiral; as linhas onduladas indicam a negação de qualquer implicação estéreo- química que a ligação que a represente possa gerar; as linhas grossas sólidas e tracejadas são descritores geométricos que 35 indicam a configuração relativa mostrada mas denotando caráter racêmico; e os contornos de "cunha" (triângulos) e as linhas pontilhadas ou tracejadas denotam compostos enantiomericamente puros de configuração absoluta indeterminada.

Será reconhecido que os compostos desta invenção podem existir na forma rádio-rotulada, isto é, os compostos podem conter um ou mais átomos contendo uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza. Os radioisótopos de hidrogênio, carbono, fósforo, fluorina, cloro e iodo incluem 3H, 14C, 35S, 18F, 36Cl e 125I, respectivamente. Os compostos que contêm esses Radioisótopos e/ou outros Radioisótopos de outros átomos estão dentro do escopo desta invenção. Radioisótopos tritiados, isto é, 3H e carbono-14, isto é, 14C, são particularmente preferidos devido à sua facilidade de preparação e detectabilidade. Os compostos rádio-rotulados desta invenção podem ser preparados, de modo geral, por métodos bem conhecidos por especialistas na área. Convenientemente, tais compostos rádio-rotulados podem ser preparados executando-se os procedimentos descritos nos Exemplos, substituindo-se um reagente rádio-rotulado prontamente disponível por um reagente não-rádio- rotulado. Por causa da alta afinidade com o local ativo da enzima de Jak3, os compostos rádio-rotulados da invenção são úteis para ensaios de Jak3.

Em uma forma de incorporação, R4 é um heterociclo. Os heterociclos que aparecem nos exemplos são heterociclos monocíclicos e bicíclicos, ou heterociclos 25 monocíclicos e bicíclicos substituídos com uma ou duas substituições. Quando y não for zero, a hetero-arila é um subconjunto preferido da heterociclila para R4. Heterociclos nitrogenosos exemplificativos incluem piperidina, piridina, pirazina, pirimidina, piridina, quinolina, isoquinolina, tetra- 30 hidroquinolina, tetra-hidro-isoquinolina e seus derivados variadamente substituídos, tais como: NH

Um heterociclo oxigenoso é um heterociclo que contém pelo menos um oxigênio no anel; ele pode conter oxigênios adicionais, bem como outros hetero-átomos. Heterociclos oxigenosos exemplificativos incluem tetra-hidropirano, cromano e seus derivados variadamente substituídos, tais como:

Ti Sintese Quimica

A terminologia relacionada às funcionalidades "proteger", "desproteger" e "protegido" ocorre ao longo deste pedido. Tal terminologia é bem compreendida por especialistas na área e é usada no contexto de processos que envolvem tratamento seqüencial com uma série de reagentes. Naquele contexto, um grupo protetor refere-se a um grupo que é usado para mascarar uma funcionalidade durante uma etapa de processo na qual, caso contrário, reagiria, mas na qual a reação é indesejável. 0 grupo protetor previne a reação naquela etapa, mas pode ser subseqüentemente removido para expor a funcionalidade original. A remoção ou "desproteção" acontece depois da conclusão da reação ou reações nas quais a funcionalidade interferiria. Assim, quando uma seqüência de reagentes é especificada, como ocorre nos processos da invenção, um especialista na áreapode prontamente prever aqueles grupos que seriam adequados como "grupos protetores". Os grupos adequados para este propósito são discutidos em livros de ensino padrão no campo da química, tal como "Grupos Protetores na Sintese Orgânica" (Protective Groups in Organic Synthesis), por T.W. Greene [John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1991], que está aqui incorporado como referência.

Uma lista abrangente de abreviações utilizadas na química orgânicos aparece no primeiro exemplar de cada volume do "Jornal de Química Orgânica" (Journal of Organic Chemistry). A lista, que é apresentada comumente em uma tabela intitulada "Lista Padrão de Abreviações", está aqui incorporada como referência.

Em geral, os compostos da presente invenção podem ser preparados pelos métodos ilustrados nos esquemas de reação gerais como, por exemplo, os descritos abaixo, ou através de suas 30 modificações, usando materiais iniciais e reagentes prontamente disponíveis e procedimentos de síntese convencionais. Nestas reações, também é possível fazer uso de variantes que são, elas mesmas, conhecidas, mas não são mencionadas aqui. Os materiais iniciais, por exemplo, no caso de compostos de anel de 35 benzimidazola adequadamente substituídos, estão comercialmente disponíveis, sintetizados como descrito nos exemplos, ou podem ser obtidos por métodos bem conhecidos por especialistas na área. A presente invenção provê, adicionalmente, composições farmacêuticas compreendendo, como agentes ativos, os compostos aqui descritos.

Conforme usado aqui, uma "composição

farmacêutica" refere-se a uma preparação de um ou mais compostos aqui descritos, ou seus sais ou solventes fisiologicamente aceitáveis, com outros componentes químicos tais como carreadores e excipientes fisiologicamente adequados.

As composições farmacêuticas para uso conforme a 10 presente invenção podem assim ser formuladas de maneira convencional, usando um ou mais carreadores fisiologicamente aceitáveis, compreendendo excipientes e auxiliares que facilitem o processamento dos compostos ativos em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. A formulação apropriada é dependente da 15 via de administração escolhida.

Os compostos que inibem Jak-3 podem ser formulados como composições farmacêuticas e administrados a um indivíduo mamífero, tal como um paciente humano, em uma variedade de formas adaptadas à via de administração escolhida, isto é, oral 20 ou parenteralmente, por vias intravenosas, intramusculares, tópicas, transdérmicas ou subcutâneas.

Para administração oral, os compostos podem ser formulados prontamente pela combinação dos compostos ativos com carreadores farmaceuticamente aceitáveis conhecidos na 25 especialidade. Tais carreadores permitem que os compostos da invenção sejam formulados como tabletes, pílulas, drágeas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, borras, suspensões e similares, para ingestão oral por um paciente. As preparações farmacológicas para uso oral podem ser feitas usando um excipiente sólido, 30 opcionalmente moendo-se a mistura resultante e processando-se a mistura de grânulos, depois da adição de auxiliares adequados, se desejado, para obter tabletes ou núcleos de drágeas. Excipientes satisfatórios são, em particular, preenchedores, tais como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol, ou sorbitol; 35 preparações de celulose tais como, por exemplo, goma de milho, goma de trigo, goma de arroz, goma de batata, gelatina, goma tragacante, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carbometilcelulose de sódio; e/ou polímeros fisiologicamente aceitáveis tal como polivinilpirrolidona (PVP). Se desejado, agentes desintegrantes podem ser adicionados, tais como polivinilpirrolidona, agar ou ácido algínico de ligação cruzada, ou um sal relacionado, tal como alginato de sódio.

Além do mais, a cobertura entérica pode ser útil à medida que pode ser desejável impedir a exposição dos compostos da invenção ao ambiente gástrico.

As composições farmacêuticas que podem ser usadas 10 oralmente incluem cápsulas do tipo "push-fit" feitas de gelatina, bem como cápsulas moles, seladas, feitas de gelatina e um plasticizante, tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas do tipo "push-fit" podem conter os ingredientes ativos misturados com um preenchedor tal como lactose, ligantes tais como gomas, 15 lubrificantes tais como talco ou , estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizadores.

Em cápsulas moles, os compostos ativos podem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos graxos, parafina líquida, ou glicóis de polietileno líquidos. Além 20 disso, podem ser adicionados estabilizadores. Todas as formulações para administração oral devem estar em dosagens adequadas para a via de administração escolhida.

Para injeção, os compostos da invenção podem ser formulados em soluções aquosas, preferivelmente em tamponantes 25 fisiologicamente compatíveis, tais como uma solução de Hank ou de Ringer, ou um tamponante salino fisiológico. Para administração transmucosal e transdermal, penetrantes apropriados para a barreira a ser penetrada podem ser usados na composição. Tais penetrantes, incluindo, por exemplo, DMSO ou glicol de 30 polietileno, são conhecidos no estado da arte.

Para administração por inalação, os compostos para uso de acordo com a presente invenção são convenientemente distribuídos na forma de apresentação de um spray de aerossol, a partir de um tubo pressurizado ou um nebulizador, com o uso de um 35 propelente satisfatório, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoro-etano, ou dióxido de carbono. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada provendo-se uma válvula para distribuir uma quantidade medida. Cápsulas e cartuchos de, por exemplo, gelatina, podem ser formulados para uso em um inalador ou insuflador, contendo uma mistura em pó da combinação e uma base em pó adequada, tal como lactose ou goma.

As composições farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções aquosas dos ingredientes ativos em forma solúvel em água. Além disso, suspensões dos compostos ativos podem ser preparadas como suspensões de injeção oleosas 10 apropriadas. Solventes ou veículos lipofílicos satisfatórios incluem óleos graxos, tais como óleo de sésamo, ou ésteres de ácidos graxos sintéticos, tais como oleato de etila, triglicérides ou liposomos. Suspensões de injeção aquosas podem conter substâncias que aumentem a viscosidade da suspensão, tal como de 15 carboximetil celulose de sódio, sorbitol ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizadores ou agentes satisfatórios que aumentem a solubilidade dos compostos, para permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

Os compostos da presente invenção também podem ser formulados em composições retais, tais como supositórios ou enemas de retenção, usando, por exemplo, bases para supositórios convencionais tais como manteiga de cacau ou outros glicérides.

Dependendo da severidade e sensibilidade da condição patológica a ser tratada, a dosagem também pode ser em uma única administração de uma composição de liberação lenta, com curso de tratamento durando desde vários dias até várias semanas, ou até que a cura seja efetuada, ou a diminuição do estado da doença seja alcançada. A quantidade de uma composição a ser administrada dependerá, é claro, de muitos fatores, incluindo o indivíduo a ser tratado, a severidade da doença, a maneira de administração e o julgamento do médico que prescre o tratamento. Os compostos da invenção podem ser administrados oralmente ou por meio de injeção, a uma dose de 0,001 a 2.500 mg/kg por dia. A faixa de dosagem para adultos humanos geralmente é de 0,005 mg a 10 g/dia. Tabletes ou outras formas de apresentação providas em unidades separadas podem, convenientemente, conter uma quantidade do composto da invenção que seja eficaz em tal dosagem, ou como um múltiplo da mesma, por exemplo, unidades contendo 5 mg a 500 mg, normalmente por volta de 10 mg até 200 mg. A quantidade precisa de composto administrado a um paciente será da responsabilidade do médico atendente. Porém, a dose empregada dependerá de vários 5 fatores, incluindo a idade e sexo do paciente, o distúrbio a ser tratado e sua severidade. Também, a via de administração pode variar, dependendo da doença e da severidade desta.

Conforme usado aqui e como seria entendido por um especialista na área, pretende-se que o termo "um composto" inclua sais, solvatos e complexos de inclusão daquele composto. O termo "solvato" refere-se a um composto da fórmula I ou II no estado sólido, em que as moléculas de um solvente adequado estão incorporadas no gelosia cristalino. Um solvente satisfatório para administração terapêutica é fisiologicamente tolerável na dosagem administrada. Exemplos de solventes adequados para administração terapêutica são etanol e água. Quando o solvente for água, o solvato é chamado de hidrato. Em geral, os solvatos são formados dissolvendo-se o composto no solvente apropriado e isolando-se o solvato por resfriamento, ou usando-se um anti-solvente. O solvato é comumente secado ou azeotropado sob condições ambientes. Os complexos de inclusão são descritos em Remington: "A Ciência e a Prática de Farmácia" (The Science and Practice of Pharmacy), 19° Ed. (1995), volume 1, páginas 176-177, que está aqui incorporada como referência. Os complexos de inclusão mais comumente empregados são aqueles com ciclodextrinas e todos os complexos de ciclodextrina, naturais e sintéticos, estão especificamente englobados nas reivindicações.

O termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere- se a sais preparados a partir de ácidos ou bases não-tóxicos 30 farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos e bases inorgânicos e ácidos e bases orgânicos. Quando os compostos da presente invenção forem básicos, os sais podem ser preparados a partir de ácidos não-tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Sais de adição de ácido farmaceuticamente 35 aceitáveis adequados para os compostos da presente invenção incluem o ácido acético, benzeno-sulfônico (besilato), benzóico, canforsulfônico, cítrico, eteno-sulfônico, fumárico, glucônico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiônico, láctico, maléico, málico, mandélico, metano-sulfônico, múcico, nítrico, pamóico, pantotênico, fosfórico, sucínico, sulfúrico, tartárico, p-tolueno- sulfônico e similares. Quando os compostos contêm uma cadeia 5 lateral ácida, sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis adequados para os compostos da presente invenção incluem sais metálicos feitos de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio e zinco, ou sais orgânicos feitos de lisina, N, N' - dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, di-etanolamina, 10 etilenodiamina, meglumina (N-metilglucamina) e procaína.

O termo "prevenir", como usado aqui, refere-se a administrar um medicamento anteriormente para evitar ou minimizar um ataque. Um especialista na área médica (para a qual as presentes reivindicações de método são dirigidas) deve reconhecer 15 que o termo "prevenir" não é um termo absoluto. Na área médica, o termo refere-se à administração profilática de uma droga para diminuir substancialmente a probabilidade ou gravidade de uma condição patológica e este é o sentido aqui pretendido.

Deve ser entendido que, além dos ingredientes particularmente mencionados acima, as formulações desta invenção podem incluir outros agentes convencionais na área, considerando- se o tipo de formulação em questão, por exemplo, aquelas adequadas para administração oral podem incluir agentes flavorizantes.

As composições podem ser apresentadas em uma 25 embalagem ou dispensador, que podem conter uma ou mais formas de dosagem unitária contendo o ingrediente ativo. Exemplos de uma embalagem incluem lâminas metálicas ou plásticas, tais como "blisters" e nebulizadores para inalação. A embalagem ou dispensador pode ser acompanhada por instruções de administração. 30 As composições compreendendo um composto da presente invenção formuladas em um carreador farmacêutico compatível também podem ser colocadas em um recipiente apropriado, rotulado para o tratamento de uma condição patológica indicada.

Indicações

Os compostos da presente invenção são úteis

inibindo a atividade de Jak3 ou inibindo a atividade mediada por Jak3 e são úteis como agentes imunossupressores para transplantes de tecidos e órgãos, incluindo transplante de medula óssea e no tratamento de doenças inflamatórias e auto-imunes e de complicações que surgem delas.

A rejeição de transplante de órgãos aguda, 5 crônica e hiper-aguda pode ser tratada. A rejeição hiper-aguda ocorre minutos após o transplante. A rejeição aguda geralmente acontece dentro de seis a doze meses depois do transplante. As rejeições hiper-aguda e aguda são comumente reversíveis quando tratadas com agentes imunossupressores. A rejeição crônica, 10 caracterizada por perda gradual da função do órgão, é uma preocupação contínua para os recebedores de transplantes, porque pode ocorrer a qualquer momento depois do transplante.

Há aproximadamente 75 distúrbios auto-imunes diferentes conhecidos, que podem ser classificados em dois tipos, específicos ao órgão (dirigidos principalmente a um órgão) e não- específicos ao órgão (afetando órgãos múltiplos).

Exemplos de distúrbios auto-imunes específicos ao órgão são o diabetes dependente de insulina (Tipo I), que afeta o pâncreas, a tireoidite de Hashimoto e a doença de Graves, que 20 afetam a glândula tiróide, anemia perniciosa, que afeta o estômago, a doença de Cushing e a doença de Addison, que afetam as glândulas supra-renais, a hepatite ativa crônica, que afeta o fígado, a síndrome do ovário policístico (SOP), doença celíaca, psoríase, doença inflamatória do intestino (DII) e espondilite 25 anquilosante.

Exemplos de distúrbios auto-imunes não- específicos ao órgão são artrites reumáticas, esclerose múltipla, lupus sistêmico e miastenia grave.

A diabetes tipo I resulta da agressão seletiva 30 das células T auto-reativas contra as células β que segregam insulina das ilhotas de Langerhans. Quando Jak3 é o alvo nesta doença, isto é baseado na observação de que as citocinas múltiplas que sinalizam através do caminho de Jak são conhecidas por participarem .na destruição auto-imune, mediada por células 'T, de 35 células β. Na verdade, demonstrou-se que JANEX-1, um inibidor de Jak3, impediria o desenvolvimento de diabetes auto-imune espontânea no modelo de rato NOD da diabetes tipo I. A doença do enxerto-contra-hospedeiro (DEVH) é uma condição patológica iniciada por células T do doador que freqüentemente acompanha o transplante alogênico de medula óssea (TMO). Pesquisas clínicas e essencialmente experimentais 5 demonstraram que as células T do - doador são os principais mediadores e promotores da DEVH. A Jak3 desempenha um papel fundamental na indução de DEVH e o tratamento com um inibidor de Jak3, JANEX-I, demonstrou atenuar a severidade da DEVH (revisto em Cetkovic-Cvrlje e Ucken, 2004).

Mastócitos revelam a presença de Jak3 e Jak3 é um

regulador fundamental das respostas de mastócitos mediados por IgE, incluindo a liberação de mediadores inflamatórios. Jak3 demonstrou ser um alvo válido no tratamento de reações alérgicas mediadas por mastócitos.

Distúrbios alérgicos associados com a ativação de

mastócitos incluem reações de hipersensibilidade imediata Tipo I, tais como rinite alérgica (febre do feno), urticária alérgica (urticárias) , angio-edema, asma alérgica e anafilaxia, isto é, "choque anafilático". Estes distúrbios são tratados ou evitados 20 pela inibição da atividade de Jak3, por exemplo, pela administração de um inibidor de Jak3 de acordo com a presente invenção.

De acordo com a presente invenção, os inibidores de Jak3 podem ser administrados profilaticamente, isto é, antes do aparecimento de uma reação alérgica aguda, ou eles podem ser administrados depois do aparecimento da reação, ou em ambos os casos.

A inflamação de tecidos e órgãos acontece em uma extensiva faixa de distúrbios e doenças e em certas variações é o 30 resultado da ativação da família de receptores de citocina. Distúrbios inflamatórios exemplificativos associados com a ativação de Jak3 incluem, de uma maneira não limitativa, inflamação de pele devido a exposição à radiação, asma, inflamação alérgica e inflamação crônica.

Os inibidores de Jak3 da presente invenção também

são úteis tratando certas malignidades, incluindo câncer de pele e malignidades hematológicas tais como linfomas e leucemias. Os exemplos seguintes descreverão adicionalmente a invenção e serão usados somente com a finalidade de ilustrar e não devem ser considerados como limitativos da invenção descrita.

EXEMPLOS

As seguintes abreviações e termos têm o

significado indicado:

Ac = acetila Bu = butila

DCM = diclorometano = cloreto de metileno = CH2Cl2 DEAD = Dietil Azodicarboxilato

DIC = Di-isopropilcarbodiimida DIEA = N,N-Di-isopropiletila Amina DMF = N,N-Dimetilformamida DMSO = Sulfóxido de Dimetila EA(EtOAc) = Acetato de Etila

GC = Cromatografia de Gás h = horas

HOAc = Ácido Acético HOBt = Hidróxibenzotriazola Me = Metila

Pd(dppf)2Cl2 = dicloro [1,1'-

bis(difenilfosfinoferroceno]paládio

Ph = Fenila PhOH = Fenol TA = Temperatura Ambiente

sat = saturado s- = secundário t- = terciário

TBDMS = t-butildimetil-silila TFA = Ácido Trifluoro-acético

THF = Tetra-Hidrofurano TMOF = Ortoformato de Trimetila TMS = Trimetil-silila tosila = p-tolueno-sulfonila Trt = Trifenilmetila

Os Exemplos 1-15 descrevem as sínteses de certos precursores e intermediários da invenção. Exemplo I: Sintese de 3,4-Diaminobenzonitrilo Uma solução de 4-amino-3-nitrobenzonitrilo (1) (3,0 g) em etanol (80 mL) foi aspergida durante 5 minutos com nitrogênio. Paládio em carbono (10%, 300 mg) foi adicionado e a mistura foi saturada com hidrogênio. A mistura foi agitada sob um balão de hidrogênio durante sete horas. A mistura foi aspergida com nitrogênio e filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado em vácuo para prover o composto-título, 3,4- diaminobenzonitrilo (2) .

Exemplo 2: Sintese de 3H-Benzo[d]imidazola-5-

carbonitrilo

Uma mistura de 3,4-diaminobenzonitrilo (2) (1,0 g) e (etóximetileno) malononitrilo (1,4 g) foi refluxada em 50 mL de álcool de isopropila durante 16 h. A mistura foi concentrada em vácuo para prover o composto-título, 3H-benzo[d]imidazola-5- carbonitrilo (3) .

Exemplo 3: Sintese de 6-(Trifluorometóxi)-IH-

benzo[d]imidazola

4

6-(trifluorometóxi)-ΙΗ-benzo[d]imidazola (4) foi preparada em duas etapas a partir de 2-nitro-4- (trifluorometóxi)anilina (5) , usando procedimentos idênticos àqueles usados para fazer 3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo (3) a partir de 4-amino-3-nitrobenzonitrilo ((1), exemplos 1, 2).

Exemplo 4: Sintese de 5,6-DifIuoro-IH-

benzo[d]imidazola Na2S2O4 Ργ^γΝΗ2 EtOCH^C(CN)2 Ρ'γίΓχγ-1\>

F-i^siiIVlO2 NaHCO3 iPrOH

THF/H2O/

6 MeOH 7

Uma solução de 4,5-difluoro-2-nitro-anilina (6) (1,0 g) em 30 mL de THF foi tratada com uma solução compreendendo

6 g de Na2S2O4 e 3 g de NaHCO3 em 30 mL de água. Metanol (10 mL) foi adicionado depois da adição da solução aquosa, de forma que a mistura permaneceu homogênea. A mistura foi agitada durante duas horas e, a seguir, diluida com 100 mL de acetato de etila e 100 mL de água. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraida novamente com 100 mL de cloreto de metileno. As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas para prover o intermediário bruto 4,5- difluorobenzeno-1,2-diamina (7). 0 intermediário foi refluxado com (etóximetileno) malononitrilo (1,1 g) em 25 mL de álcool de isopropila durante 16 h. A mistura foi concentrada em vácuo e o produto bruto resultante foi suspenso em água e filtrado. 0 precipitado foi lavado com água e secado com ar para prover 380 mg de 5,6-difluoro-lH-benzo[d]imidazola (8).

Exemplo 5: Sintese de 5,6-Dimetóxi-lH-

benzo[d]imidazola

MeO^^/NH2 HCOOH

MeO"^^NH2 MW @220 0C

9 10

0 composto-título 5,6-dimetóxi-lH-

benzo[d]imidazola (10) foi feito aquecendo 4,5-dimetóxi-l,2- fenilenodiamina di-hidroclorida (9) em ácido fórmico a 220 0C em microondas, seguido por concentração em vácuo.

Exemplo 6: Sintese de 6-Fluoro-lH-

benzo[d]imidazola (11) e 6-(trifluorometila)-ΙΗ-benzo[d]imidazola (12)

Os compostos-título foram feitos conforme descrito na Publicação de Pedido de Patente US N0 2004/0087601, de alguns dos inventores da presente invenção. Exemplo 7: Benzimidazola (13), 5-azabenzimidazola (14) , 6-cloro-5-fluorobenzimidazola (15) e 5-metilbenzimidazola (16)

Os compostos-titulo estavam comercialmente

disponíveis.

13 14 15 U

Exemplo 8: Sintese da amina primária, pirazina-2-

ilmetanamina

1. Raney NUH2

N^CN NH3 /Me OH “ 2. Boc2O I CH2CI2 N cromatografia J7 3. TFA /CH2CI2 18

Um catalisador de níquel de Raney foi lavado cuidadosamente com THF e metanol, tendo-se certeza de que o catalisador permaneceu úmido. O peso do catalisador úmido era de 2,5 g depois da lavagem. Este material foi acrescentado a uma solução de pirazinacarbonitrilo (17) (3,0 g) em 7 N de amônio metanólico (120 mL) . A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio a 50 p.s.i. durante 1,5 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado em vácuo para prover o composto-título bruto. A purificação foi realizada por conversão da amina bruta em carbamato de tércio-butila, com excesso de dicarbonato de di- tércio-butila em cloreto de metileno. A cromatografia de coluna (70:27:3 hexanos:acetato de etila:metanol) proveu 0,50 g de pirazina-2-ilmetilcarbamato de tércio-butila pura. Pirazina-2-

NH1 ilmetanamina (18) pura foi obtida como o sal de TFA, a partir da desproteção do carbamato com 1:1 de TFA/CH2C12.

Exemplo 9: Sintese de 3-Aminometila-2-

fluoropiridina

CN

CC

19

H2, Pd/C

BOH

20

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 0,3

g (2,46 mM) de 3-ciano-2-fluoropiridina (19), que foi, a seguir, diluída em 20 mL de EtOH. A solução foi aquecida com argônio e, a seguir, enquanto sob uma manta de argônio, foram adicionados 60 mg de Pd/C a 10% (20% em peso). 0 sistema foi, a seguir, lacrado por 10 septo e colocado sob vácuo. Um balão de hidrogênio foi, a seguir, adicionado e a reação foi agitada durante três horas (seguida por CCF). A reação foi posta novamente sob vácuo, a seguir, exposta ao ar e filtrada (mantendo o catalisador úmido). A solução resultante foi secada e evaporada para dar 0,28 g (90%) do composto-título, 15 3-aminometila-2-fluoropiridina (20).

Exemplo 10: Sintese de 3-Aminometila-6- metóxipiridina (21) , 3-Aminometila-6-metilpiridina (22) e 3- Aminometilquinolina (23)

As aminas-título foram obtidas a partir dos nitrilos correspondentes usando o mesmo procedimento que foi usado para obter 3-aminometila-2-fluoropiridina (20) a partir de 3- ciano-2-fluoropiridina (vide o Exemplo 9).

OMe

21 22 23

Exemplo 11: Sintese de 3-aminometila-2-metóxi

piridina N^uMe NaBH3CN

ts^CHO NH4QAC

^N OMe 25

MeOH

24

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 0,44

g (3,23 mM) de carboxaldeído de 2-metóxi-3-piridina (24), 1,24 g (16,15 mM) de acetato de amônia e 0,61 g (19,69 mM) de cianoboro- hidreto de sódio. O frasco foi, a seguir, aquecido com argônio e, 5 a seguir, 50 mL de MeOH seco foram adicionados através de seringa. A reação foi agitada durante 2 dias e neste ponto o MeOH foi evaporado. 25 mL de água foram adicionados e a mistura foi deixada com um pH=2 com HCl concentrado. Isto foi extraído duas vezes com EtOAc para remover o produto colateral de álcool. A mistura foi 10 deixada com um pH=10 usando pelotas de hidróxido de sódio, saturada com NaCl e extraída duas vezes com DCM e uma vez com EtOAc. Os orgânicos combinados foram secados e evaporados para dar

0,31 g (69%) de 3-aminometila-2-metóxipiridina (25).

correspondente usando o mesmo procedimento que foi usado para obter 3-aminometila-2-metóxipiridina a partir de carboxaldeído de

2-metóxi-3-piridina ((24), Exemplo 11).

Exemplo 12: Sintese de 3-(a-amino-etila)-2-

cloropiridina (26)

26

A amina-título foi obtida a partir da cetona

20

Exemplo 13: Sintese de 3-aminometila-4-

metilpiridina

27

28 10

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 0,45 g (3,30 mM) de 4-metilnicotinamida (27). O frasco foi aquecido com argônio e 50 mL de THF seco foram adicionados através de seringa. A solução resultante foi resfriada a 0 0C e 2,5 mL (4,96 mM) de uma solução de 2 M de um complexo de borano-dimetilsulf ida (em THF) foi adicionada. Um borbulhador foi acoplado e foi permitido que a solução se aquecesse de um dia para o outro à TA. A solução foi esfriada com MeOH, secada e evaporada para dar 0,38 g (95%) de

3-aminometila-4-metilpiridina (28).

Exemplo 14: Sintese hidronaf taleno-1-amina

de 5-fluoro-1,2,3,4-tetra-

O

Me

29

1. 9-BBN /THF

2. 1~Fluaro-2- iodobenzeno, NaOMe1 Pd(Cippf)2CI2

MeO.

NaOH

MeOH

1. (CICO)2 cat DMF CH2CI2

2. AICI3

HONH2-HCI NaOAc/EtOH

H2, Pd/C EtOH

de Metila

(2- (4-

4-(2-fluorofenila)butanoato metilbutanoato)fluorobenzeno, (30))

Um frasco de fundo redondo foi lacrado com um septo de borracha, aquecido com argônio, a seguir, carregado com 5,32 mL de 3-buteneoato de metila (29) e 100 mL de uma solução de 0,5 M de 9-BBN em THF. A solução foi agitada à TA durante três horas. Um frasco de fundo redondo com 2 pescoços foi equipado com um condensador e aquecido com argônio, a seguir, carregado com 7, 35 g de metóxido de sódio e 1,11 g de Pd (dppf) 2C12 . A esta mistura foram adicionados 20 mL de THF seco e 5,22 mL de 1-fluoro- 2-iodobenzeno. A solução de hidroboração foi adicionada por meio de cânula e a mistura resultante foi refluxada durante 16 horas. A solução foi resfriada à TA, diluída com 150 mL de água e extraída três vezes com éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas e evaporadas. A cromatografia de coluna (5% de EtOAc/hexanos) deu 1,79 g de 4-(2-fluorofenila) butanoato de metila (30) .

Ácido 4-(2-Fluorofenila)butanóico (31)

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 1,7 9 5 g de 2-(4-metilbutanoato) fluorobenzeno, que foi dissolvido em 17 mL de MeOH. A esta solução foi adicionada uma solução de 1 g de hidróxido de sódio. A mistura resultante foi agitada por 20 horas à TA. 0 solvente foi evaporado e o material bruto diluido com 15 mL de 0,5 M de HCl. A extração com DCM por três vezes deu 1,17 g 10 (92%) de ácido 4-(2-fluorofenila)butanóico (31).

5-Fluoro-3,4-di-hidronaftaleno-1(2H)-ona (32)

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 0,15 g de ácido 4-(2-fluorofenila)butanóico, que foi dissolvido em 20 mL de DCM e resfriado a 0 °C. Cloreto de oxalila (0,15 mL) foi 15 adicionado, seguido por 1 gota de DMF. Um tubo de secagem foi acoplado e a solução foi agitada a 0 0C durante duas horas. Cloreto de alumínio (0,121 g) foi adicionado e foi permitido que a solução se aquecesse lentamente de um dia para o outro à TA. A mistura foi vertida sobre água congelada e extraída três vezes com 20 DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 0,5 M de NaOH e salmoura. A fase orgânica foi secada, evaporada e purificada através de cromatografia de coluna (eludindo com 20% de EtOAc/Hexanos) , para dar 0,07 g (53%) de 5-fluoro-3,4-di- hidronaftaleno-1(2H)-ona (32).

5-fluoro-1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno-1-amina

(34)

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 0,5 g de 5-fluoro-3,4-di-hidronaftaleno-1(2H)-ona, 0,28 g de hidroxilamina hidroclorida e 0,34 g de acetato de sódio. Um 30 condensador foi acoplado e o frasco foi purgado com argônio. Foram adicionados 20 mL de EtOH seco e a mistura foi agitada em refluxo durante 18 horas. A solução foi resfriada à TA, diluída com EtOAc e lavada com água. A fase orgânica foi secada com sulfato de sódio e evaporada para dar 0,5 g do intermediário 5-fluoro-3,4-di- 35 hidronaftaleno-1(2H)-ona oxima (33), que foi reduzido com Pd/C em EtOH com hidrogênio (50 psi), para dar 0,43 g (86%) de 5-fluoro-

1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno-l-amina (34). Exemplo 15: Sintese de 8-fluorocromano-4-amina

HO

acido 3-Bromo prop ion ico

NaOH / H2O

HO

35

1. (CICO)2 cat. DMF CH2CI2

2. AICI3

HONH2-HCi

NaOAc/ EtOH

H2l Raney Ni

EtOH

38

Ácido 3-(2-fluorofenóxi)propanóico (36)

Uma mistura de 2-f luorof enol (35) (15 g) , ácido 3-bromopropanóico (20 g) e NaOH (11 g) foi refluxada em 50 mL de 5 água. A solução foi resfriada à TA e acidificada a um pH=2 com 3 M de HCl. O precipitado resultante foi isolado através de filtração, para obter 9,27 g do composto-título como um sólido branco. O filtrado foi extraído três vezes com EtOAc para obter 2,5 g do composto menos puro (36).

8-fluorocromano-4-ona (37)

Cloreto de oxalila (8,79 mL) e uma gota de DMF foram acrescentados a uma solução congelada de ácido 3-(2- f luorof enóxi) propanóico (9,27 g) em DCM (50 mL) . A solução foi agitada a 0 0C durante duas horas, cloreto de alumínio (7,39 g, 15 55,42 mM) foi adicionado e a solução foi agitada durante 16 horas à TA. A mistura foi vertida sobre água congelada e extraída três vezes com DCM. Os orgânicos combinados foram lavados com 0,5 M de NaOH e salmoura, secados, evaporados e purificados através de cromatografia de coluna (eludindo com 20% de EtOAc/Hex), para dar 20 8-fluorocromano-4-ona (37) (8,20 g, 98%) .

8-fluorocromano-4-amina (39)

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 8- fluorocromano-4-ona (8,2 g), hidroxilamina hidroclorida (3,78 g) e acetato de sódio (4,46 g) . Um condensador de refluxo foi adicionado, o frasco foi purgado com argônio, EtOH seco (20 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada em refluxo durante 18 horas. A solução foi resfriada à TA, diluída com EtOAc e lavada com água. A fase orgânica foi secada e evaporada para dar o intermediário 8-fluorocromano-4-ona oxima (38) , que foi reduzido

com Níquel de Raney em EtOH a 50 psi, para render a amina titulada (39) (4, 69 g, 57%) .

(3,40 g) , 2-metóxi-acetato de metila (2,44 g) e Novozyme 435 (Aldrich, 0,68 g) em éter de tércio-butila metila anidro (75 mL) foi aquecida em refluxo sob argônio durante duas horas (neste tempo a relação de produto acilado para não-acilado foi de 1:1 por CLAP - cromatografia líquida de alta pressão) . 0 sólido que se formou ao resfriar foi coletado por filtração e dissolvido em EtOAc. A mistura foi filtrada para remover o biocatalisador e lavada uma vez com 0,5 M de HCl para remover qualquer (S)-amina restante. 0 solvente foi evaporado e o produto foi recristalizado a partir de éter de tércio-butila metila, para obter (R)-N-(8- fluorocromano-4-ila)-2-metóxi-acetamida (0,78 g) . 0 solvente de reação e o licor "mãe" de recristalização foram lavados três vezes com 0,5 M de HCl e concentrados para obter (R)-N-(8-fluorocromano-

4-ila)-2-metóxi-acetamida (0,83 g) adicional. As camadas aquosas ácidas combinadas foram tornadas básicas por NaOH e extraídas com

F

Resolução de 8-fluorocromano-4-amina

F

Novozyme 435

F

MeOCH2COOMe

t-BuOMe

F

NH2

39b

Em resumo, uma mistura de 8-fluorocromano-4-amina DCM, para obter (5)-8-fluorocromano-4-amina (39a) (1,6 g) . Uma solução de (R)-N-(8-fluorocromano-4-ila)-2-metóxi-acetamida (0,78 g) em 8 M de HCl em EtOH (50 mL) foi aquecida em refluxo durante quatro horas. Os solventes foram removidos da mistura de reação 5 resfriada, o sólido resultante foi tomado em 50 mL de 0,5 M de NaOH, salgado com NaCl (s) e extraído quatro vezes com DCM para obter (R)-8-fluorocromano-4-amina (0,48 g (87%)) (39b). A % de ee foi conferida por método de CLAP quiral: Chiralcel OD-II (coluna analítica de 0,46 x 25 cm, Daicel Chemical Industries);

isocrático, 5% (0,05% de TFA/EtOH) e 95% (0,05% TFA/Hex) , Tr = 7,2 min enantiômero-(S), Tr = 9,2 min enantiômero-(R).

Exemplo 16: Sintese de 2-(lH-Benzo[d]imidazola-1- ila) -9- ( (R)-8-fluorocromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

2-(ÍH-Benzo[d]imidazol-l-ila)-N-((R)-8- fluorocromano-4-ila) -5-nitropirimidina-4-amina

(R)-8-fluorocromano-4-amina (60 mg, Exemplo. 15) foi acrescentado a uma solução de 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (70 mg) e DIEA (0,14 mL) em THF (5 mL) a -78 °C. A mistura de reação foi agitada por 15 min adicionais a -78 °C, a seguir, 20 removida do banho frio e aquecida à TA. Uma solução molar do sal de sódio de benzimidazola (0,7 ml, solução "de prateleira" preparada pela adição de hidreto de sódio a uma solução de benzimidazola em THF) foi acrescentada ao intermediário de reação ((R)-2-cloro-N-(8-fluorocromano-4-ila)-5-nitropirimidina-4-amina)

e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro à TA. A purificação por cromatografia de coluna (elução com MeOH/DCM) deu o composto titulado (120 mg). MH+ = 407.

2-(ÍH-Benzo[d]imidazol-l-ila)-9-((R)-8- fluorocromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

Um solução de hidrosulfito de sódio (Tec., 0,5 g)

e bicarbonato de sódio (0,25 g) em H2O (5 mL) recém-preparada foi acrescentada a uma solução do composto de nitro acima (120 mg) em THF (10 mL) . A mistura foi agitada vigorosamente por 30 min, a seguir, extraída com EtOAc (2 x) e DCM (2 x) , os orgânicos 10 combinados foram lavados com salmoura, secados, filtrados e concentrados para obter o intermediário 2-(ΙΗ-benzo[d]imidazol-l- ila) -N4- ( (R) -8-fluorocromano-4-ila)pirimidina-4,5-diamina, que foi usado como tal na próxima etapa.

Carbonildiimidazola (0,2 g) foi acrescentada a uma solução da amina acima em THF (10 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro à TA, gel de sílica foi adicionado, os solventes foram, a seguir, removidos sob pressão reduzida e foi purificada por cromatografia de coluna, eluição com 5% de MeOH/DCM, para obter o produto titulado (28 mg) , MH+ = 403, 1H NMR (CDCl3) δ 10,6 (s, 1H) , 8,9 (s, 1H) , 8,3 (s, 1H) , 7,8 (m, 2H) , 7,3 (m, 2H) , 7,0 (m, 1H) , 6,7 (m, 1H) , 5,9 (dd, 1H) , 4,7 (m, 1H) , 4,4 (t, 1H) , 2,7 (m, 1H) , 2,3 (m, 1H) ppm, 19F NMR δ-135,7 (m) . CLAP quiral - nenhuma evidência de outro enantiômero. Método: Chiralcel OD-II (coluna analítica de 0,46 x 25 cm, Daicel Chemical Industries), isocrático, 15% (0,05% de TFA/EtOH) e 85% (0,05% de TFA/Hex) , Tr = 19,5 min enantiômero-(R) , Tr = 22,4 min enantiômero-(S).

Exemplo 17: Sintese não regioespecifica de derivados de purinona de benzimidazola: Sintese de 5-Nitro-N- (piridina-3-ilmetila) -2- (6- (trif luorometóxi) -ΙΗ-benzo [d] imidazola-

1-ila)pirimidina-4-amina (42) e 5-nitro-N-(piridina-3-ilmetila)-2- (5- (trif luorometóxi) -ΙΗ-benzo [d] imidazol-l-ila) pirimidina-4-amina

(44) 41

43

F3C

F3CO H

45

O

NO2

44

2-Cloro-5-nitro-N-(piridina-3- ilmetila)pirimidina-4-amina (41)

Uma solução de 2, 4-dicloro-5-nitropiridina (40) (5 g) em cloreto de metileno (60 mL) foi resfriada a -78 0C e tratada com 3-(aminometila)piridina (2,8 g) . A mistura foi agitada a -78 0C durante seis horas e concentrada em vácuo à TA para prover 2-cloro-5-nitro-N-(piridina-3-ilmetila)pirimidina-4-amina

(41) bruta, que foi usada sem purificação adicional.

5-Nitro-N-(piridina-3-ilmetila)-2-(6- (trif luorometóxi) -ΙΗ-benzo [d] imidazola-l-ila) pirimidina-4-amina

(42) e 5-nitro-N-(piridina-3-ilmetila)-2-(5-(trifluorometóxi)-IH- benzo[d]imidazol-l-ila)pirimidina-4-amina (44)

ilmetila)pirimidina-4-amina (52 mg) bruta em acetonitrilo (10 mL) foi tratada com 6-(trifluorometóxi)-ΙΗ-benzo[d]imidazola (40 mg), carbonato de potássio (0,5 g) e aquecida a 80 0C durante quatro horas. A mistura foi diluída com água e extraída com cloreto de metileno. A camada orgânica foi separada, secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (70:22:8 de cloreto de metileno:acetato de etila:metanol) proveu 12 mg de 5-nitro-N-(piridina-3-ilmetila)-2-(5-(trifluorometóxi)- ΙΗ-benzo[d]imidazol-l-ila)pirimidina-4-amina como o primeiro

Uma suspensão de 2-cloro-5-nitro-N-(piridina-3- isômero de eluição e 15 mg de 5-nitro-N-(piridina-3-ilmetila)-2- (6- (trifluorometóxi)-ΙΗ-benzo[d] imidazol-l-ila)pirimidina-4-amina como o segundo isômero de eluição.

Isômero Rf alto: 1H-NMR (CDCl3) δ 9,2 (s, 1H), 8,9 (s, 1H) , 8,8 (m, 1H) , 8,6 (s, 1H) , 8,5 (d, 1H) , 8,2 (d, 1H, determ.: H-7 de anel de benzimidazola), 7,6 (d, 1H), 7,6 (s, 1H, determ.: H-4 de anel de benzimidazola), 7,2 (dd, 1H), 4,9 (d, 2H).

Isômero Rf baixo: 1H-NMR (CDCl3) δ 9,2 (s, 1H) ,

8.9 (s, 1H), 8,8 (m, 1H) , 8,6 (s, 1H) , 8,5 (d, 1H) , 8,2 (s, 1H, determ.: H-7 de anel de benzimidazola), 7,7 (d, 1H, determ.: H-4

de anel de benzimidazola), 7,6 (d, 1H), 7,2 (dd, 1H), 7,1 (d, 1H) ,

4.9 (d, 2H).

Exemplo 18: Sintese não regioespecifica de derivados de purinona de benzimidazola: Sintese de 9-(Piridina-3- ilmetila) -2- (6- (trifluorometóxi) -ΙΗ-benzo [d] imidazol-l-ila) -7H-

purina-8(9H)-ona (43) e 9-(piridina-3-ilmetila)-2-(5-

(trifluorometóxi) -ΙΗ-benzo [d] imidazol-l-ila) -7H-purina-8 (9H) -ona

(45)

Os compostos-titulo foram sintetizados a partir de 5-nitro-N-(piridina-3-ilmetila)-2-(6-(trifluorometóxi)-IH-

benzo[d]imidazol-l-ila)pirimidina-4-amina (42) e 5-nitro-N- (piridina-3-iImetila)-2-(5-(trifluorometóxi)-ΙΗ-benzo[d]imidazol-

l-ila) pirimidina-4-amina (44) , usando os mesmos procedimentos que foram usados para converter (R)-tércio-butila 2,4-

dimetóxibenzila(5-nitro-6-(1-(piridina-3-ila)etilamino)piridina-2- ila)carbamato em (R)-tércio-butila 2,4-dimetóxibenzila(2-oxo-3-(1- (piridina-3-ila)etila)-2, 3-di-hidro-lH-imidazo[4,5-b]piridina-5- ila)carbamato ((67); Exemplo 22 abaixo).

6-Trifluorometóxi isômero (não-sal): 1H-NMR (CD3OD) δ 9,3 (s, 1H), 8,8 (br s, 1H), 8,6 (s, 1H, determ.: H-7 de anel de benzimidazola), 8,6 (m, 1H) , 8,4 (s, 1H), 8,1 (d, 1H), 7,9 (d, 1H, determ.: H-4 de anel de benzimidazola), 7,5 (dd, 1H) , 7,4 (dd, 1H), 5,4 (s, 2H).

5-Trifluorometóxi isômero (não-sal): 1H-NMR (CD3OD) δ 9,3 (s, 1H) , 8,8 (s, 1H) , 8,7 (d, 1H, determ.: H-7 de anel de benzimidazola), 8,5 (d, 1H), 8,3 (s, 1H), 7,9 (d, 1H), 7,6 (s, 1Η, determ.: H-4 de anel de benzimidazola), 7,4 (dd, 1H), 7,3 (dd, 1H), 5,3 (s, 2H).

Exemplo 19: Sintese não regioespecifica de uma oxo-imidazopiridina e um derivado de imidazopiridina: Sintese de

5- (ÍH-Benzo [d] imidazol-l-ila) -3- (piridina-3-ilmetila) -IH- imidazo [4 ,5-b]piridina-2 (3H) -ona (50)

CL·

N==y

I I] ^

X--9 DMSCWH2O

49

6-lH-Benzo[d]imidazol-l-ila)-S-nitro-N-(piridina-

3-ilmetila)piridina-l-amina (48)

Uma solução de 2, 6-dicloro-3-nitropiridina (46) (0,5 g) em acetonitrilo (20 mL) foi resfriada a 0 0C e tratada com trietilamina (0,36 mL), seguido por 3-(aminometila)piridina (0,26 mL) . A mistura foi agitada durante 30 minutos a 0 0C e oito horas à TA. A solução resultante, que continha o intermediário 6-cloro-

3-nitro-N-(piridina-3-ilmetila)piridina-2-amina (47), foi

transferida para um tubo lacrado contendo benzimidazola (0,84 g) e carbonato de potássio (3 g) e aquecida a 70 0C por 16 h. A mistura foi resfriada e filtrada. Os precipitados foram lavados com água e secados a ar, para prover 239 mg do composto-título (48) .

5-(ÍH-Benzo[d]imidazol-l-ila)-3-(piridina-3- ilmetila)-lH-imidazo[4,5-b]piridina-2(3H)-ona (50) e 5-(lH- benzo [d] imidazol-l-ila) -3- (piridina-3-ilmetila) -3H-imidazo [4,5-

b]piridina (51)

Uma solução de 6-(ΙΗ-benzo[d]imidazol-l-ila)-3- nitro-N-(piridina-3-ilmetila) piridina-2-amina (48) (50 mg) em 1 mL 10 de DMSO foi tratada com uma solução de Na2S2O4 (300 mg) em 1 mL de água. A mistura foi agitada durante duas horas e diluída com 50 mL de acetato de etila. A mistura foi lavada três vezes com alíquotas de 50 mL de uma solução de cloreto de sódio saturada, secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo para prover o 15 intermediário 6- (ΙΗ-benzo[d]imidazol-l-ila)-N2-(piridina-3-

ilmetila)piridina-2,3-diamina (49). Metade do intermediário foi dissolvida em cloreto de metileno (2 mL) e tratada com 1,1'- carbonildiimidazola (46 mg) à TA durante 16 h. A mistura bruta resultante foi purificada por CCF (cromatografia de camada fina) 20 preparativa (1.000 mícrons, 5% de MeOH/CH2Cl2) para prover 7,1 mg de 5- (ΙΗ-benzo[d]imidazol-l-ila)-3-(piridina-3-ilmetila)-IH-

imidazo[4,5-b]piridina-2(3H)-ona (50): 1H-NMR (CDCl3) δ 10,0 (br s, IH) , 8,9 (s, IH) , 8,6 (d, IH) , 8,5 (s, IH) , 7,9 (m, 2H) , 7,8 (m, IH) , 7,6 (d, IH) , 7,4 (m, 2H) , 7,4 (m, IH) , 7,3 (d, IH) , 5,2 (s, 2H).

Exemplo 20: Sintese Regioespecifica: Sintese de

3- (9- (2 , 6-Dif luorobenzila) -8-oxo-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H- benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo H2N

avVcl

MeO.

OMe

CU

DlEA / THF

H^jÇjj H2N^XJI

NO2

DIEA/THF

1 ΝγγΚ.

OMe N^Anhz F 54

THF

Η

^Niió=° 55

TFA /Et3SiH

OMe

Bocp

TEA

MeOH

CH3CN

DCM

=*■

JCC1

NC-^^

NO2

F

NtH/DMF

56

NJO2 μ

. 'Ν-τΓΝ^τΛν_

1 Ν^Λ-^0 THF 'H2O

Boc

Boc

57

NH2

(MeO)3CH

Ηϊ^0=° PTsOH

MeOH

CN se

CN 59

Boc

N2- (2,4-Dimetóxibenzila)-N4-(2,6-difluorobenzila)- 5-nitropirimidina-2,4-diamina (53)

2,6-Difluorobenzilamina (0,24 mL) foi adicionada por gotejamento por mais de um minuto a uma solução de 2,4- dicloro-5-nitropirimidina (40) (0, 388 g) e DIEA (0,77 mL) em THF, em um banho frio ajustado para -78 °C. A mistura de reação foi agitada por 15 min adicionais a -78 °C, a seguir removida do banho frio e foi permitido que se aquecesse à TA. DIEA adicional (0,77 5 mL) foi acrescentada ao intermediário de reação (N-(2,6- difluorobenzila)-2-cloro-5-nitropirimidina-4-amina) (52) seguido pela adição de 2,4-dimetóxibenzilamina (0,30 mL) e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro à TA. A purificação por cromatografia de coluna (eludida com 1 e 2,5% de MeOH/DCM) deu 10 N2- (2, 4-dimetóxibenzila) -N4- (2, 6-dif luorobenzila) -5- nitropirimidina-2,4-diamina (53) (0, 80 g) , MH+ = 432.

2-(2,4-Dimetóxibenzilamino)-9- (2 , 6- difluorobenzila)-7H-purina-8(9H)-ona (55)

NI de Raney foi acrescentado a uma solução de N2- (2, 4-dimetóxibenzila) -N4- (2, 6-dif luorobenzila) -5-nitropirimidina-

2,4-diamina (0,80 g) em THF (50 mL) , sob aquecimento de argônio. A suspensão foi evacuada, carregada com hidrogênio (balão) e agitada por 16 h. A mistura resultante foi filtrada por um plugue de celite, que foi completamente enxaguado com THF e MeOH, para obter 20 N2- (2, 4-dimetóxibenzila) -N4- (2, 6-dif luorobenzila) pirimidina-2 , 4, 5- triamina (54), que foi usada como tal na próxima reação.

Carbonildiimidazola (0,93 g) foi acrescentada a uma solução de N2-(2 , 4-dimetóxibenzila)-N4-(2 , 6-

dif luorobenzila) pirimidina-2., 4, 5-triamina (54) em THF (20 mL) e a 25 mistura resultante foi agitada de um dia para o outro à TA; a seguir, os solventes foram removidos sob pressão reduzida e foi tomada em EtOAc e lavada três vezes com água. Os orgânicos foram secados, filtrados, evaporados e purificados por cromatografia de coluna, eluição com 2,5 e 4% de MeOH/DCM, para obter 2-(2,4- 30 Dimetóxibenzilamina)-9-(2,6-difluorobenzila)-7H-purina-8(9H)-ona (55) (0,58 g), MH+ = 428.

Tércio-Butila 9- (2,6-difluorobenzila)-2-amino-8- oxo-8,9-di-hidropurina-7-carboxilato (57)

Uma solução a 1:1 de TFA/DCM (10 mL) foi acrescentada a 2-(2,4-dimetóxibenzilamina)-9-(2,6-

difluorobenzila)-7H-purina-8(9H)-ona (55) (0,58 g) e agitada por 30 min, depois do que trietil-silano (2 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada por 4 h adicionais. Os solventes foram removidos sob vácuo, o resíduo tomado em MeOH mínimo e triturado com Et2O, para obter o sal de TFA de 9- (2, 6-dif luorobenzila) -2- amino-7H-purina-8 (9H)-ona (56) (0, 55 g) . MH+ = 278, como um sólido de cor salmão.

9-(2,6-Difluorobenzila)-2-amino-7H-purina-8(9H)- ona (0,55 g) foi dissolvida em uma mistura de MeOH/ACN/DCM (40 mL) , Et3N (2 mL) e dicarbonato de di-tércio-butila (0,61 g) foram adicionados e a mistura foi agitada de um dia para o outro à TA. 10 Os solventes de reação foram removidos e o material bruto foi tomado em DCM e lavado com H2O, evaporado e purificado por cromatografia de coluna, eluição com 2 e 3% de MeOH/DCM, para dar o produto titulado (57) (0, 36 g) . MH+ = 378, MH+-BoC = 278 (principal), (M+Na)+ = 400 e (2M+Na)+ = 777 também foram 15 observados.

Tércio-Butila 9-(2,6-difluorobenzila)-2-(5-ciano-

2-nitrofenilaàmino) -8-oxo-8 , 9-di-hidropurina-7-carboxilato (58)

Hidreto de sódio (88 mg, 95%) foi adicionado, sob aquecimento de argônio, a uma solução de tércio-butila 9-(2,6- difluorobenzila)-2-amino-8-oxo-8 , 9-di-hidropurina-7-carboxilato

(57) ( 191 mg) e 3-f luoro-4-nitrobenzonitrilo (415 mg) em DMF (5 mL) a -40 °C. Foi permitido que a mistura de reação se aquecesse a -20 0C durante 3 h, a seguir foi resfriada pela adição de NH4Cl saturado aquecido e uma vez na TA a mistura foi diluída com EtOAc 25 e separada. Os orgânicos foram lavados com salmoura (3 x), secados, filtrados e evaporados, purificados por cromatografia de coluna, (elução com DCM e 1 e 2,5% de MeOH/DCM) para obter tércio- Butila 9- (2,6-difluorobenzila)-2-(5-ciano-2-nitrofenilamino)-8- oxo-8,9-di-hidropurina-7-carboxilato (58) (288 mg), MH+ = 524.

Tércio-Butila 9-(2,6-difluorobenzila)-2-(6-ciano-

ΙΗ-benzo [d] imidazol-l-ila) -8-oxo-8 , 9-di-hidropurina-7-carboxilato (60)

Uma solução de hidrosulfito de sódio (tec. , 1 g) e bicarbonato de sódio (0,5 g) em H2O (10 mL) , recém-preparada, foi acrescentada a uma solução do composto de nitro acima (58) (288 mg) em THF (10 mL). A mistura foi agitada vigorosamente por 5 min, extraída com DCM (3 x) , os orgânicos combinado foram lavados com salmoura, secados, filtrados e concentrados para obter o intermediário tércio-butila 9-(2, 6-difluorobenzila)-2- (2-amino-5- cianofenilamino)-8-oxo-8, 9-di-hidropurina-7-carboxilato (59), que foi usado como tal na próxima etapa.

Uma quantidade catalítica de mono-hidrato de

ácido para-tolueno sulfônico foi acrescentada a uma solução do intermediário de amina acima e ortoformato de trimetila (3 mL) em MeOH (10 mL) . Depois de Iho material bruto foi adsorvido em gel de sílica e purificado através de cromatografia de coluna (elução 10 com 1 e 2% de MeOH/DCM), para obter tércio-Butila 9-(2,6- difluorobenzila)-2-(6-ciano-lH-benzo[d]imidazol-l-ila)-8-oxo-8,9- di-hidropurina-7-carboxilato (60) (164 mg), MH+ = 504 e MH+-BOC = 404 .

3- (9- (2,6-Difluorobenzila)-8-oxo-8,9-di-hidrò-7H- purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5-carbonitrilo (61)

Uma solução a 1:1 de TFA/DCM (10 mL) foi acrescentada a tércio-Butila 9-(2,6-difluorobenzila)-2-( 6-ciano-l- ΙΗ-benzo[d]imidazol-l-ila)-8-oxo-8,9-di-hidropurina-7-carboxilato (60) e agitada por I h. Os solventes foram removidos à vácuo e o 20 sólido resultante foi triturado com Et2O e suspenso em 6 N de HCl. A remoção dos solventes e a trituração com Et2O do sólido resultante deu o composto titulado (61) (68 mg) como um sal de HCl. MH+ = 404, 1H NMR (d6-DMS0) δ 11,8 (s, IH) , 9,2 (s, IH) , 8,8 (s, IH), 8,0 (s, IH), 7,9 (d, IH) , 7,8 (amplo s, IH), 7,4 (d, IH) , 25 7, 4 (quinteto, IH) , 7,1 (m, 2H) , 5,2 (s, 2H) ppm, 19F NMR δ -114,3 (m) .

Exemplo 21: Sintese de 3-(8-Oxo-9-(tetra-hidro- 2H-pirano-4-ila)-8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H- benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo (62).

62 O composto-titulo pode ser sintetizado usando os mesmos procedimentos conforme descrito para a síntese de 3-(9- (2,6-difluorobenzila) -8-oxo-8, 9-di-hidro-7H-purina-2-ila)-3H- benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo ((61), Exemplo 20).

1H NMR (d6-DMSO) 11,71 (s, IH) , 9,34 (s, IH) ,

8,94 (d, J = 1,5 Hz, IH) , 8,38 (s, IH) , 8,00 (d, J = 8,1 Hz, IH) , 7,79 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, IH) , 4,57 (m, IH) , 4,04 (m, 2H) , 3,50 (m, 2H), 2,59 (m, 2H), 1,79 (m, 2H); Massa (MH+) 362,1.

Exemplo 22: Sintese regioespecifica de um derivado de oxo-imidazopiridina: Sintese de 3-(2-oxo-3-((R)-1- (piridina-3-ila) etila) -2 , 3-di-hidro-lH-imidazo [4 ,5-b] piridina-5- ila) -3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo CL X!

Tl

MeO

MeO.

MeO

I JL TEA/THF

^s*^xno2

46

Il H H

11 N^N_N

OMe

MeO

H1 Boc2OZDMAP CH2CI2

Il ^0c H 1 n^n^n

OMe

64 ,lJ°2

Meon ^oc h o

Na2S2O4

1VS^I

65

CDI

THF/H2O/MeOH OMe

NH2

THF/50 0C

66

•Q

Q

TFAZEt3SH

CH2Q2

N._

h2n^n^ -r^

Il I >=0

67

H

68

H

Boc2O

K2CO3

CH3CN

.OMe

H

OyN^1NyIvN _„

' VS«l <b tea/thf

jÇF

MH/DMF

f»H V

çrO;>

CN 70 koc

Na2S2O4

THF /H2O/ MeOH

(MeO)3CH

pTsOH

THF

TFAZCH2Cb

o>

N Boc

72

Nsv-N N

x^r

(R) -N6-(2,4-Dimetóxibenzila)-3-nitro-N2-(1- (piridina-3-ila)etila)piridina-2,6-diamina (64)

Uma solução de 2,6-dicloro-5-nitropiridina (46) (0,5 g) em THF (20 mL) foi resfriada a O 0C e tratada com 1,6 mL de trietilamina, seguido por (R)-l-piridina-3-ila-etilamina (300 μL). A mistura foi agitada por 1,5 h, a seguir aquecida à TA e foi agitada durante outras 20 h. 2,4-Dimetóxibenzilamina (0,8 mL) foi adicionada e a mistura foi aquecida a 50 0C durante quatro horas. A mistura foi diluída com acetato de etila e lavada duas vezes com uma solução de cloreto de sódio saturada. A camada orgânica foi separada, secada em sulfato de sódio, filtrada e concentrada. A cromatografia de coluna (50 —» 100% de acetato de etila em 5 hexanos) proveu 761 mg de (R)-N6-(2,4-Dimetóxibenzila)-3-nitro-N2- (1-(piridina-3-ila)etila)piridina-2,6-diamina (64) .

(R)-tércio-Butila 2,4-dimetóxibenzila(5-nitro-6- (1- (piridina-3-ila) etilamino)piridina-2-ila) carbamato (65)

Uma solução de (R)-N6-(2,4-dimetóxibenzila)-3- 10 nitro-N2-(1-(piridina-3-ila) etila) piridina-2,6-diamina (64) (367 mg) em cloreto de metileno (20 mL) foi tratada com dicarbonato de di-tércio-butila (1,0 g) e 4-dimetilaminopiridina (22 mg) . A mistura foi agitada por 16 h e concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (50 —> 100% de acetato de etila em 15 hexanos) proveu 500 mg de (R)-tércio-Butila 2,4-dimetóxibenzila(5- nitro-6-(l-(piridina-3-ila)etilamino)piridina-2-ila)carbamato

(65) .

(R) -tércio-Butila 2,4-dimetóxibenzila(2-oxo-3-(1- (piridina-3-ila) etila) -2 ,3-di-hidro-lH-imidazo [4 ,5-b]piridina-5- ila)carbamato (67)

Uma solução de (R)-tércio-butila 2,4- dimetóxibenzila(5-nitro-6-(l-(piridina-3-ila)etilamino)piridina-2- ila) carbamato (500 mg) em THF (25 mL) foi tratada com uma solução aquosa compreendendo 2 g de Na2S2O4 e I g de NaHCO3 em 20 mL de 25 água, seguido por 1 mL de metanol. A mistura foi agitada durante 30 minutos, a seguir foi diluída com acetato de etila e lavada com uma solução de cloreto de sódio saturada. A camada orgânica foi separada, secada em sulfato de sódio, filtrada e concentrada para prover o intermediário (R)-tércio-butila 2,4-dimetóxibenzila(5- 30 amino-6-(1-(piridina-3-ila)etilamino)piridina-2-ila)carbamato

(66) . O intermediário foi dissolvido em THF (50 mL) e tratado com

1, 1'-carbonildiimidazola (0,5 g) a 50 0C por 20 h. A mistura foi concentrada e purificada através de cromatografia de coluna (2 —» 5% de MeOH em cloreto de metileno) para prover 413 mg de (R)-

tércio-Butila 2,4-dimetóxibenzila(2-oxo-3-(1-(piridina-3-

ila)etila)-2,3-di-hidro-lH-imidazo[4,5-b]piridina-5-ila)carbamato

(67) . (R) -tércio-Butila 5-amino-2-oxo-3- (1- (piridina-3- ila) etila) -2 ,3-di-hidro-imidazo [4 , 5-b] piridina-l-carboxilato (69)

Uma solução de (R)-tércio-butila 2,4- dimetóxibenzila(2-oxo-3-(1-(piridina-3-ila)etila)-2,3-di-hidro-lH- 5 imidazo[4,5-b]piridina-5-ila)carbamato em cloreto de metileno (15 mL) foi tratada com TFA (15 mL) e trietil-silano (1,0 mL) durante uma hora. A mistura foi concentrada para prover o intermediário (R) -5-amino-3-(l-(piridina-3-ila)etila)-IH-imidazo[455-b]piridina- 2(3H)-ona (68), que foi dissolvido em acetonitrilo (50 mL) e 10 agitado vigorosamente com dicarbonato de di-tércio-butila (1,0 g) e carbonato de potássio (3,0 g) durante 2 h. Cloreto de metileno (200 mL) e água (100 mL) foram adicionados e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com outros 100 mL de cloreto de metileno. As camadas orgânicas combinadas foram 15 separadas, secadas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas. A cromatografia de coluna (2 —» 3 —> 4% de MeOH em cloreto de metileno) proveu 235 mg de (R)-tércio-Butila 5-amino-2-oxo-3-(1- (piridina-3-ila)etila)-2,3-di-hidro-imidazo[4,5-b]piridina-l- carboxilato (69) .

(R)-tércio-Butila 5-(5-ciano-2-nitrofenilamino)-

2-OXO-3- (1- (piridina-3-ila) etila) -2 , 3-di-hidro-imidazo [4,5-

b]piridina-l-carboxilato (70)

Uma solução de (R) -tércio-butila 5-amino-2-oxo-3- (1- (piridina-3-ila)etila) -2, 3-di-hidroimidazo[4,5-b]piridina-l- carboxilato (94 mg) e 3-fluoro-4-nitrobenzonitrilo (225 mg) em DMF (6 mL) foi resfriada a -25 0C e tratada com NaH (60% em peso/peso, em óleo mineral, 75 mg) e foi permitido que se aquecesse lentamente a -15 °C. A mistura foi agitada durante quatro horas entre -20 0C e -15 °C, a seguir diluída com EtOAc e resfriada com uma solução de cloreto de amônia saturada. A fase orgânica foi lavada três vezes com salmoura, separada, secada em sulfato de sódio, filtrada e concentrada. A cromatografia de coluna (2% de MeOH em cloreto de metileno) proveu 100 mg de (R)-tércio-Butila 5- (5-ciano-2-nitrofenilamino)-2-oxo-3-(l-piridina-3-ila)etila)-2,3- di-hidro-imidazo[4,5-b]piridina-l-carboxilato (70). Tércio-Butila 5- (6-ciano-lH-benzo[d]imidazola-1- ila) -2-OXO-3- ( (R) -1- (piridina-3-ila) etila) -2 , 3-di-hidro- imidazo [4 ,5-b]piridina-l-carboxilato (72)

Uma solução de (R)-tércio-butila 5-(5-ciano-2- nitrofenilamino)-2-oxo-3-(1-(piridina-3-ila)etila)-2,3-di-hidro- imidazo [ 4 , 5-b] piridina-l-carboxilato (70) (100 mg) em THF (5 mL) foi tratada com uma solução aquosa compreendendo 0,5 g de Na2S2O4 e 0,25 g de NaHCO3 em 5 mL de água. A mistura passou rapidamente de uma cor vermelha para uma cor ligeiramente amarelada, o que indicou a redução do grupo nitro. A mistura foi diluída com acetato de etila e lavada com uma solução de cloreto de sódio saturada. A camada orgânica foi separada, secada em sulfato de sódio, filtrada e concentrada para prover o intermediário (R)- tércio-butila 5-(2-amino-5-cianofenilamino)-2-oxo-3-(l-piridina-3- ila)etila)-2,3-di-hidro-imidazo[4,5-b]piridina-l-carboxilato (71) . 0 intermediário foi dissolvido em THF (5 mL), DMF (1 mL) e trimetilortoformato (2 mL) . A mistura foi tratada com 10 mg de ácido p-tolueno-sulfônico e agitada por 20 h. A mistura foi diluída com acetato de etila e lavada uma vez com bicarbonato de sódio saturado e duas vezes com uma solução de NaCl saturada. A camada orgânica foi separada, secada em sulfato de sódio, filtrada e concentrada. A cromatografia de coluna (2% de MeOH em cloreto de metileno) proveu 57 mg de tércio-Butila 5-(6-ciano-lH- benzo[d]imidazola-l-ila)-2-oxo-3-((R)-1-(piridina-3-ila)etila)- 2,3-di-hidro-imidazo[4,5-b]piridina-l-carboxilato (72).

3- (2-oxo-3-((R)-1-(piridina-3-ila)etila)-2,3-di- hidro-lH-imidazo [4 , 5-b]piridina-5-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5- carbonitrilo (73)

Uma solução de tércio-butila 5-(6-ciano-lH- benzo[d]imidazola-l-ila)-2-oxo-3-((R)-1-(piridina-3-ila)etila)-

2,3-di-hidro-imidazo[4,5-b]piridina-l-carboxilato (72) (57 mg) em cloreto de metileno (1 mL) foi tratada com TFA (1 mL) durante uma hora. A mistura foi concentrada e o sal de TFA resultante foi convertido no sal de HCl, dissolvendo-se em 5 mL de EtOH e 35 adicionando-se 0,5 mL de HCl concentrado, concentrando-se a seguir a solução em vácuo. 0 processo foi repetido e o resíduo resultante foi dissolvido em uma quantidade mínima de metanol e triturado com 10

a adição de éter de etila. Depois de 3 triturações, sal de HCl 3-

(2-oxo-3- ( (R)-1-(piridina-3-ila)etila)-2,3-di-hidro-lH-

imidazo [4,5-b]piridina-5-ila)-3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo

(73) (39 mg) foi isolado como um sólido de cor marrom claro:

iH-

NMR (CD3OD) δ 9,9 (br s, IH) , 9,2 (s, IH) , 9,0 (m, 2H) , 8,5 (s, IH) , 8,3 (m, IH) , 8,2 (m, IH) , 8,1 (d, IH) , 7,9 (d, IH) , 7,8 (d, IH), 6,3 (q, IH) , 2,3 (d, 3H) .

Exemplo 24: Slntese de 2-(ÍH-Benzo[d]imidazola-l- ila) -9- (cis-3-metila-tetra-hidro-2H-pirano-4-ila)-7H-purina-8 (9H)- ona

cW DIEA

THF

CI

Benzirrtd.

K2CO3

THF

NO2

1. Ns2S2OiJ NaHCO3

THF/H2O/MeOH 2. CDi/THF

2-Cloro-N-(cis-3-metila-tetra-hidro-2H-pirano-4- ila)-5-nitropirimidina-4-amina

A uma suspensão de 0,24 g de sal de hidrocloreto de cis-3-metila-tetra-hidro-2H-pirano-4-amina (WO 2004/041161) e DIEA (1,5 mL) em THF (10 mL) a -78 °C, foi adicionada 2,4-dicloro-

5-nitropirimidina (0,72 g) . Foi permitido que a mistura alcançasse lentamente a temperatura ambiente, sendo agitada durante 16 horas. A mistura foi diluída com EtOAc e lavada 3 vezes com salmoura. A camada orgânica foi separada, secada em sulfato de sódio e 20 concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (20 —» 40% de EtOAc/hexanos) proveu 289 mg do composto-título.

2-(ÍH-Benzo[d]imidazola-l-ila)-N-(cis-3-metila- tetra-hidro-2H-pirano-4-ila) -5-nitropirimidina-4-amina

A uma solução de 2-cloro-N-(cis-3-metila-tetra- hidro-2H-pirano-4-ila)-5-nitropirimidina-4-amina (115 mg) em acetonitrilo (5 mL) foram adicionados carbonato de potássio (300 mg) e benzimidazola (150 mg) . A mistura foi agitada a 70 0C durante 2,5 horas. Depois de diluída com 70 mL de EtOAc, a mistura foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada 5 em vácuo. A cromatografia de coluna (50 —» 100% de EtOAc/hexanos) proveu 99 mg do composto-título.

2- (ÍH-Benzo[d]imidazola-l-ila)-9-(cis-3-metila- tetra-hidro-2H-pirano-4-ila) -7H-purina-8 (9H) -ona

A uma solução de 2-(ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)- N- (cis-3-metila-tetra-hidro-2H-pirano-4-ila)-5-nitropirimidina-4-

amina (51 mg) em THF (10 mL) foi adicionada uma solução de hidrosulfito de sódio (300 mg) e bicarbonato de sódio (150 mg) em água (10 mL) . A mistura se tornou azul, brevemente e depois ficou incolor. Metanol (1 mL) foi adicionado para manter a homogeneidade 15 da solução. A mistura foi diluída com 7 0 mL de EtOAc e lavada duas vezes com salmoura. As lavagens aquosas foram extraídas com outros

50 mL de EtOAc e, a seguir, as camadas orgânicas combinadas foram secadas em sulfato de sódio e concentradas em vácuo, para prover

2- (ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)-N4-(cis-3-metila-tetra-hidro-2H- 20 pirano-4-ila)pirimidina-4,5-diamina. 0 intermediário de diamina foi dissolvido em THF (5 mL) e tratado com 1,1'- carbonildiimidazola (80 mg) a 50 0C durante 16 horas. A mistura foi diluída com 50 mL de EtOAc e lavada 3 vezes com salmoura. A camada orgânica foi separada, secada em sulfato de sódio e 25 concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (2 —> 4% de MeOH/DCM) proveu 19,3 mg do composto-título. 1H-NMR (300 MHz, 5%

de O em Γ0 OO 9 (s, IH), 8,5 (d, IH), 8,2 (s, IH), OO (d, D I---I to r- CO U O Q D O IH) , 7,4 (t , IH) , 7,3 (t, IH), 4,7 (m, IH), 4,2 (d(br), IH) , 3,9 (d, IH) , 3, 7 (d, IH) , 3, 5 (m, 2H) , 2,3 (t (br) , IH), 1,8 (d (b r) , IH) , 1,2 (d, , 3H) . Exemplo 25 2- (5,6-Dicloro-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9- ( (R) -8-fluorocromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

Uma solução de (R)-2-cloro-N-(8-fluorocromano-4- ila)-5-nitropirimidina-4-amina em acetonitrilo foi tratada com 5,6-diclorobenzimidazola e carbonato de potássio. A mistura foi agitada em refluxo durante 6 horas, foi resfriada à temperatura ambiente, diluida com 150 mL de EtOAc e lavada duas vezes com porções de 30 mL de água. A camada orgânica foi separada, secada com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo. A purificação através de cromatografia de coluna (2% de MeOH/DCM) deu a nitropirimidinamina intermediária. O composto-título foi sintetizado a partir da nitropirimidinamina intermediária através dos procedimentos descritos no Exemplo 24. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,7 (s, IH) , 8,3 (s, IH) , 8,2 (s, IH) , 7,8 (t,. IH) , 7,0 (t, IH) , 6,6 (m, 2H) , 5,9 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 3,0 (m, IH) ,

2,3 (m, IH).

2-(5,6-Dimetila-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9- ((R)-8-fluorocromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

O composto-título foi sintetizado a partir de 5,6-diclorobenzimidazola, pelos procedimentos descritos no Exemplo 25. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9, 6 (s, IH) , 8,8 (s, IH) , 8,3 (s, IH) , 8,0 (s, IH) , 7,6 (s, IH) , 7,0 (t, IH) , 6,7 (m, IH) , 5,9 (t, IH), 4,7 (m, IH), 4,5 (m, IH) , 3,2 (m, 2H), 2,4 (d, 6H) . . 53 N

Çr

F3C

FaC'

ίο

15

53

9-((R)-8-Fluorocromano-4-ila)-2- (6- (trifluorometila) -ΙΗ-benzo [d] imidazol-l-ila) -7H-purina-8 (9H) -ona e 9- ( (R) -8-fluorocromano-4-ila) -2- (5- (trifluorometila) -IH- benzo[d]imidazol-l-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

0 composto-título foi sintetizado a partir de 5- trifluorometilbenzimidazola (US 2 004/0087 601), pelos procedimentos descritos no Exemplo 25. A purificação através de cromatografia de coluna (2% de MeOH/DCM) eluiu o isômero de 6-trifluorometila primeiro (1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (d, 2H) , 8,4 (s, IH) , 7,9 (d, IH) , 7,6 (d, 2H) , 7,0 (t, IH) , 6,7 (m, 2H) , 5,9 (t, IH) , 4,7 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 3,0 (m, IH) , 2,4 (m, IH)), seguido pelo isômero de 5-trif luorometila (1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,0 (s, IH) , 8,4 (s, IH) , 8,1 (s, IH) , 8,0 (d, IH) , 7,6 (d, 2H) , 7,0 (m, IH) , 6,8 (m, 2H) , 5,9 (t, IH) , 4,7 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 2,9 (m, IH), 2,4 (m, IH)).

N

&

N

20

N-((R)-8-Fluorocromano-4-ila)-2-(3H-imidazo[4,5- c]piridina-3-ila)-5-nitropirimidina-4-amina e N-((R)-8-

fluorocromano-4-ila)-2-(lH-imidazo[4,5-c]piridina-l-ila)-5- nitropirimidina-4-amina 10

15

20

O composto-título foi sintetizado a partir de 5- azabenzimidazola, pelo procedimento descrito no Exemplo 25. A purificação através de cromatografia de coluna (1% de MeOH/DCM) proveu N- ( (R)-8-fluorocromano-4-ila) -2-(3H-imidazo[4,5-c]piridina-

3-ila)-5-nitropirimidina-4-amina como o primeiro isômero de eluição: (1H - NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,8 (s, IH) , 9,4 (s, IH) , 9,2 (s, IH) , 8,9 (d, IH) , 8,6 (d, IH) , 7,8 (d, IH) , 7,1 (m, 2H) , 6,9 (m, IH) , 5,8 (q, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 2,6 (m, IH) , 2,4 (m, IH)). N-((R)-8-Fluorocromano-4-ila)-2-(IH-imidazo[4,5—

c]piridina—1-ila)-5-nitropirimidina-4-amina eluiu em segundo lugar: (1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,4 (s, IH) , 9,2 (s, IH) , 9,1 (s, IH) , 8,9 (d, IH) , 8,6 (d, IH) , 8,4 (d, IH) , 7,1 (m, 2H) , 6,9 (m, IH) , 5,7 (q, IH) , 4,5 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 2,6 (m, IH) , 2,4 (m, IH) ) .

ΧΛ-°

H

9- ( (R) -8-fluorocromano-4-ila)-2-(3H-imidazo[4,5-

c]piridina-3-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

0 composto-título foi sintetizado a partir de N- ((R)-8-fluorocromano-4-ila)-2-(3H-imidazo[4,5-c]piridina-3-ila)-5- nitropirimidina-4-amina, pelos procedimentos descritos no Exemplo 24. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,8 (s, IH) , 9,4 (s, IH) , 8,6 (d, IH) , 8,3 (m, 2H) , 7,0 (t, IH) , 6,7 (m, 2H) , 5,9 (t, IH) , 4,6 (m, IH), 4,4 (m, IH), 2,8 (m, IH), 2,4 (m, IH).

Nv^N μ

H

9- ( (R) -8-fluorocromano-4-ila) -2- (lH-imidazo [4,5-

c]piridina-l-ila)-purina-8(9H)-ona O composto-título foi sintetizado a partir de N- ((R) - 8-fluorocromano-4-ila)-2-(IH-imidazo[4,5-c]piridina-l-ila)-5- nitropirimidina-4-amina, pelos procedimentos descritos no Exemplo

g) em THF (100 mL) foi tratada com DIEA (6,3 mL) e 2,4- dimetóxibenzilamina (5,0 mL) e, a seguir, agitada por 24 h. O solvente foi evaporado e a mistura bruta foi dissolvida em EtOAc 15 (100 mL) . A solução foi lavada uma vez com I M de HCl e duas vezes com NaCl aquoso saturado (100 mL de cada vez) . A camada orgânica foi separada, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (20% de EtOAc/DCM) proveu 9,25 g do composto-título.

4- (2,4-dimetóxibenzilamina)-3-aminobenzonitrilo

nitrobenzonitrilo (4,54 g) em THF (400 mL) foi tratada com uma solução de hidrosulfito de sódio (20 g) e bicarbonato de sódio (10 g) em água destilada (350 mL), Bastante metanol foi imediatamente 25 adicionado (50 mL) , para manter a solução homogênea. Depois de 15 minutos, EtOAc (500 mL) e NaCl aquoso saturado (500 mL) foram adicionados e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída novamente com 400 mL de EtOAc. As camadas orgânicas

24. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,3 (d, 2H) , 8,4 (d, IH) , 8,3 (d,

2H) , 7,0 (t, IH) , 6,7 (m, 2H) , 5,9 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH), 2,8 (m, IH), 2,4 (m, IH).

Exemplo 26: Sintese de 3-(9-((R)-6,8-

dif luorocromano-4-ila) -8-oxo-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-

benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo

OMe

.OMe

OMe

DIEA

THF

10

4- (2,4-dimetóxibenzilamina)-3-nitrobenzonitrilo

Uma solução de 4-fluoro-3-nitrobenzonitrilo (5,0

Uma solução de 4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3- combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (500 mL) e separadas. A fase orgânica foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo, para prover 4,33 g do composto-título.

aminobenzonitrilo (3,9 g) em acetonitrilo (100 mL) foi resfriada a 0 0C e tratada com carbonato de potássio (6,3 g), seguido por uma solução contendo 3 g de 2-cloro-5-nitro-4-tiocianatopirimidina (WO 2003/032994) em acetonitrilo (50 mL) . A mistura foi agitada durante 30 minutos a 0 0C e 30 minutos à temperatura ambiente, resultando na formação de um precipitado. A mistura foi resfriada a 0 0C pela adição de ácido acético a 4% (150 mL) e filtrada. O precipitado foi agitado por rotação em 100 mL de acetonitrilo e filtrado novamente. O precipitado foi lavado com acetonitrilo, o que resultou na lenta dissolução do produto no filtrado. Depois da secagem com ar, 1,5 g do composto-título permaneceu como o bolo precipitado. O filtrado foi extraído com EtOAc, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. A cromatografia de coluna (0 —> 20% de EtOAc/DCM) e a recristalização de acetonitrilo proveram 0,415 g adicionais do composto-título.

OMe

NO2

4- (2,4-dimetóxibenzilamina)-3-(5-nitro-4- tiocianatopirimidina-2-ilamina)benzonitrilo

Uma solução de 4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3- (R)-4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3-(4- (6,8- difluorocromano-4-ilamina) -5-nitropirimidina-2- ilamino)benzonitrilo

Uma suspensão parcial de 4-(2,4-

dimetóxibenzilamina)-3-(5-nitro-4-tiocianatopirimidina-2-

ilamina) benzonitrilo (415 mg) em 40 mL de acetonitrilo foi tratada com uma solução de sal de HCl (R)-6,8-difluorocromano-4-amina (320 mg) em DMSO (10 mL) , seguido por carbonato de potássio (1,0 g) . A mistura foi agitada durante 24 horas e, a seguir, diluída com 10 EtOAc (200 mL). A mistura foi lavada uma vez com cloreto de amônia aquoso saturado (200 mL) e 3 vezes com NaCl aquoso saturado (200 mL de cada vez). A camada orgânica foi separada, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (20 —> 40% de EtOAc/hexanos) proveu 358 mg do composto-título.

(R) -4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3-(9-(6,8-

difluorocromano-4-ila) -8-oxo-8,9-di-hidro-7H-purina-2- ilamina)benzonitrilo

Uma solução de (R)-4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3- (4- (6,8-difluorocromano-4-ilamina)-5-nitropirimidina-2- ilamina) benzonitrilo (358 mg) em THF (25 mL) foi tratada com uma solução de hidrosulfito de sódio (1,5 g) e bicarbonato de sódio (1,5 g) em 20 mL de água destilada. Metanol (5 mL) foi adicionado para manter a solução homogênea. Depois de 15 minutos, a mistura foi diluída com EtOAc (100 mL) e lavada com NaCl aquoso saturado (2 x 100 mL) . A camada orgânica foi separada, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para prover o intermediário (R)-4- (2,4-dimetóxibenzilamina)-3-(5-amino-4-(6,8-difluorocromano-4- ilamina)pirimidina-2-ilamina)benzonitrilo. O intermediário foi dissolvido em THF (5 mL) e tratado com carbonildiimidazola (0,55 g) durante 16 horas. A mistura foi diluída com EtOAc (100 mL) e lavada duas vezes com NaCl aquoso saturado (2 x 100 mL) . A camada orgânica foi separada, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (2 —» 3% de MeOH/DCM) proveu 230 mg do composto-título.

(9- (6,8-difluorocromano-4-ila) -8-oxo-8, 9-di-hidro-7H-purina-2- ilamina) benzonitrilo (230 mg) em DCM (5 mL) foi tratada com TFA (5 mL) e trietil-silano (1 mL) por 16 h. A mistura foi concentrada em

difluorocromano-4-ila) -8-oxo-8, 9-di-hidro-7H-purina-2- ilamina)benzonitrilo. 0 intermediário foi dissolvido em 5 mL de THF e tratado com 3 mL de trimetilortoformato, seguido por ácido 15 p-tolueno-sulfônico (3 mg). Depois de 1 hora, a mistura foi diluída com EtOAc (100 mL) e lavada uma vez com bicarbonato de sódio aquoso saturado (100 mL). A camada orgânica foi separada, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (50 —> 100% de EtOAc/hexanos) proveu 78 mg do composto- 20 título. 1H-NMR (300 MHz, 5% CD3OD em CDCl3) δ 8,8 (s, IH) , 8,7 (s,

F

5

3- (9-((R)-6,8-difluorocromano-4-ila)-8-oxo-8,9- di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5-carbonitrilo

Uma solução de (R)-4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3-

vácuo para prover o intermediário (R)-4-amino-3-(9-(6,8-

1H) , 8,2 (s, IH) , 7,8 (d, IH) , 7,6 (dd, IH) , 6,8 (td, IH) , 6,4 (dd, IH) , 5,8 (dd, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (td, IH) , 2,9 (m, IH) ,

2,3 (m, IH). 3- (9- ( (R) -cromano-4-ila) -8-οχο-8 , 9-di-hidro-7H- purina-2-ila)-3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo

O composto-título foi sintetizado a partir de (R)-cromano-4-amina, pelos procedimentos descritos no Exemplo 26.

3-[9-(8-fluoro-cromano-4-ila)-8-oxo-8,9-di-hidro- 7H-purina-2-ila]-3H-benzo-imidazola-5-carbonitrilo

O composto-título foi sintetizado a partir de (R)-8-fluorocromano-4-amina pelos procedimentos descritos no

3- (9- ( (R)-6-fluorocromano-4-ila)-8-oxo-8,9-di- hidro-7H-purina-2-ila)-3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo

O composto-título foi sintetizado a partir de (R)-6-fluorocromano-4-amina, pelos procedimentos descritos no Exemplo 26. 1H NMR (300 MHz, CDCl3 + 5% de CD3OD): δ 8,86 (s, IH) ,

condições para introdução da amina de cromanila foram melhoradas, conforme descrito abaixo:

1H-NMR (300 MHz, 5% CD3OD em CDCl3) δ 8,8 (s, IH) , 8,5 (s, IH) , 8,2

(s, IH) , 7,8 (4 IH) , 7,5 (dd, IH) , 7,1 (m, 2H) , 6,8 (d, IH) , 6,7

(td, IH) , 5,8 (dd, IH) , 4,5 (m, IH) , 4,3 (td, IH) , 2,8 (m, IH) ,

2,3 (m, IH).

F

NC

H

Exemplo 26. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, IH) , 8,6 (s, IH) , 8,2 (s, IH) , 7,8 (d, IH) , 7,6 (d, IH) , 7,0 (t, IH) , 6,6 (m, 2H), 5,8 (t, IH), 4,6 (m, IH), 4,4 (m, IH), 2,8 (m, IH), 2,4 (m, IH).

8,41 (s, IH) , 8,18 (s, IH) , 7,72 (d, IH) , 7,51 (d, IH) , 7, 0-7,1 (m, IH) , 6,8-6,9 (m, IH) , 6,49 (dd, IH) , 5,76 (br t, IH) , 4, 4-4, 5 (m, IH) , 4,24 (br t, IH) , 2,7-2, 9 (m, IH) , 2,2-2, 3 (m, IH) . As OMe rir5) OMe f°v

IfV^NH η ρ |fV~NH ο V*

Meoj^ A-nYVcn nh-2^ - X»ynJih

Ν'^νΝ02 DlEA DMSO n^vNO9 CN CN

(R) -4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3-(4-(6- fluorocromano-4-ilamina) -5-nitropirimidina-2-ilamina) benzonitrilo

Uma solução de 4-(2,4-dimetóxibenzilamina)-3-(5- nitro-4-tiocianatopirimidina-2-ilamina)benzonitrilo (139 mg) em DMSO anidro (3 mL) foi acrescentada a uma solução de hidroclorida de (R)-6-f luorocromano-4-amina (79 mg) em DMSO anidro (3 mL) e DIEA (0,21 mL), a solução vermelho escuro resultante sendo agitada à TA sob uma atmosfera de ar e durante esse tempo a solução clareou para a cor amarelo. Na conclusão da reação, a mistura foi resfriada a 0 0C com um banho de gelo e água (25 mL) foi adicionada (exotermia). 0 sólido amarelo resultante foi coletado por filtração, lavado com água adicional, secado a ar, a seguir, dissolvido em CH2Cl2, a solução orgânica sendo secada (MgSO4) , filtrada e evaporada para obter o composto titulado (quant.). NMR CDCl3 1H δ 9,0 (s, IH) , 8,6(d, IH) , 7,7 (br s, IH) , 7,4 (dd, IH) ,

7,1 (d, IH), 7,0-6,8 (m, 4H), 6,5-6,4 (m, 2H), 5,2 (br s, IH), 4,3 (s, 2H) , 4,2 (br s, 2H) , 3,8 (s, 6H) , 2,2 (br s, IH) , 1,8 (br s, IH) ; 19F δ -123 ppm; MH+ = 572.

Este material foi tomado usando os mesmos procedimentos esboçados no Exemplo 26, para dar 3-(9-((R)-6- fluorocromano-4-ila)-8-oxo-8, 9-di-hidro-7H-purina-2-ila)-3H- benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo.

3-(9-((R)-7-fluorocromano-4-ila)-8-oxo-8,9-di- hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5-carbonitrilo

0 composto-titulo foi sintetizado a partir de

(R)-7-fluorocromano-4-amina, pelos procedimentos descritos no 10

15

20

Exemplo 26. 1H NMR (300 MHz, CDCl3 + 5% de CD3OD): δ 8,86 (s, IH) , 8,58 (s, IH), 8,19 (s, IH) , 7,79 (d, IH) , 7,56 (d, IH) , 6,7-6,9 (m, 2H) , 6,4-6,5 (m, IH) , 5,78 (br t, IH) , 4, 5-4, 6 (m, IH) , 4,32 (br t, IH), 2,7-2,9 (m, IH), 2,2-2,4 (m, IH) .

NO H

3- [9- (5,8-Difluoro-cromano-4-ila)-8-oxo-8,9-di- hidro-7H-purina-2-ila] -3H-benzo-imidazola-5-carbonitrilo

O composto-título foi sintetizado a partir de (R)-5,8-difluorocromano-4-amina, pelos procedimentos descritos no Exemplo 26. H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, IH) , 8,7 (s, IH) , 8,2 (s, IH), 7,8 (d, IH) , 7,6 (d, IH) , 7,0 (m, IH) , 6,4 (m, IH) , 5,9 (t, IH), 4,6 (m, IH), 4,4(m, IH), 2,5(m, 2H).

Exemplo 27: Sintese de 2-(6-fIuoro-IH- benzo[d]imnidazola-l-ila)-9-((R) -8-fluoro-cromano-4-ila)-7H- purina-8(9H)-ona

Jp=Y NH2 (BOC)2O

'-a^So2 dmap, dcm f

TFA -í

DCM

BOC

NH

Na2S2O4ZNaHCO3

NO2 THF / H2O / MeO H F

.Cc

BOC

NH

NH2

Imidodicarbonato de di-tércio-butila 4-fluoro-2- nitro-fenila

Uma quantidade catalítica de DMAP foi acrescentada a uma mistura de 4-fluoro-2-nitrobenzenamina (0,78 g) e dicarbonato de di-tércio-butila (2,18 g) em DCM (20 mL) e agitada à temperatura ambiente por 15 h. A mistura foi diluída com H2O e duas vezes extraída com DCM, os orgânicos combinados foram secados, filtrados e evaporados para obter o material bis-BOC (quant.). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,8 (dd, IH) , 7,3 (m, 2H) , 1,4 (s, 18H).

Tércio-Butila 4-fluoro-nitrofenilcarbamato

(Procedimento: Connell, R.D.; Rein, T.; Akermark,

B.; Helquist, P.J., J. Org. Chem., 1988, 55, 3845)

A uma solução agitada do material Bis-BOC em DCM (20 mL) , foi adicionado TFA (0,58 mL) . Depois de 3 h a reação foi resfriada com NaHCO3 aquoso (5 mL) , foi adicionada salmoura e a 10 mistura foi separada e extraída com DCM adicional. Os orgânicos combinados foram evaporados, purificados por cromatografia de coluna (elução com 7,5% de EtOAc/Hexano) , para dar o produto titulado (1,12 g) . 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,5 (br IH) , 8,5 (dd, IH) , 7,9 (dd, IH) , 7,3 (m, IH) , 1,5 (s, 9H) .

Tércio-Butila 2-amino-4-fluorofenilcarbamato

A uma solução de tércio-butila 4-fluoro-2- nitrof enilcarbamato (0,34 g) em THF (30 mL) foi adicionada uma solução pré-misturada de hidrosulfito de sódio (2 g) e bicarbonato de sódio (1 g) em água (50 mL) . MeOH (10 mL) também foi adicionado 20 para ajudar a solução da mistura, que foi agitada à temperatura ambiente por 30 min, quando cloreto de sódio foi adicionado para saturar a solução. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2x) . Os orgânicos combinados foram secados, filtrados e evaporados para obter o composto titulado (quant.), que foi usado 25 como tal para a próxima etapa. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,5 (dd, IH) , 6,6 (dd, IH) , 6,5 (m, IH) , 6,4 (br, IH) , 4,7 (br, 2H) , 1,5 (s, 9H) ; MH+ = 227 (secundário) 127 (-B0C), 171 (-tBu).

BOC

Λη

Ji

"NH2

! N Cl ϋγγ«;ΡΙ ___,

N^sNO, ΕΐσΗ Ν'^-'ΝΟο K2CO3i ACN

BOC

2-Cloro-5-nitro-4-tiocianatopirimidina

(Composto já conhecido, por- exemplo, na patente

WO 2003/032994) Tiocianato de Potássio (0,97 g, 10 mM) foi acrescentado a uma solução de 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (1,94 g, 10 mM) em EtOH (40 mL) , resfriada a 0 0C por um banho de gelo. A solução foi agitada a 0 0C por 30 min, a seguir, o banho foi 5 removido e foi permitido que a suspensão resultante alcançasse a TA durante 60 min, quando água (100 mL) foi adicionada. 0 precipitado foi coletado por filtração, lavado com água fria como gelo, dissolvido com DCM, secado (MgSO4) , filtrado e evaporado para obter o composto titulado (1,7 g). 1H- NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10 9,4 (s, IH).

Tércio-Butila 4-fluoro-2-(5-nitro-4-

tiocianatopirimidina-2-ilamina) fenilcarbamato

Carbonato de potássio (207 mg) foi acrescentado a uma solução agitada de 2-cloro-5-nitro-4-tiocianatopirimidina (108 15 mg) e tércio-butila 4-fluoro-2-nitrofenilcarbamato (113 mg) em ACN (5 mL) e agitada por 15 h. A solução foi diluida com salmoura e extraída com EtOAc (2x). Os orgânicos combinados foram evaporados e purificados por cromatografia de coluna; a eluição com 30% de EtOAc/Hex deu o composto titulado (144 mg, rendimento de 71%) . 1H- 20 NMR (300 MHz, DMS0-d6) δ 10,5 (br s, IH) , 9,3 (br s, IH) , 8,9 (br s, IH) , 7,7-7,4 (m, 2H), 7,1 (br s, IH), 1,5 (s, 9H) , 1,5 (s, 9H); MH+ = 407, 307 (-B0C), 351 (-tBu).

F

30CW

1 F /NaHCOg BQC_^ Φ

THF/H2O/MbOH

V iAo1 Vr

/NaHCOg BOC_^ CDt

J N^Xn0j KaCO3. ACN

NH

H2

THF

rO>_f j q F

VO {"Ή N VO ^tiioh Ço

DO” óríjcv **■*>

M CH FH

V

F

(R) -tércio-Butila 4-fluoro-2-(4-(8-fluorocromano-

4-ilamina) -5-nitropirimidina-2-ilamina) fenilcarbamato

Uma solução de (R)-8-fluorocromano-4-amina

hidroclorida (104 mg) em DMSO (2 mL) e carbonato de potássio (141 mg) foram acrescentados a uma solução agitada de tércio-butila 4- f Iuorο-2- (5-nitro-4-tiocianatopirimidina-2-ilamina) feni 1 carbamato (140 mg) em ACN (10 mL) . A mistura foi agitada por 15 h à temperatura ambiente, a seguir, particionada entre salmoura e EtOAc e separada. A camada aquecida foi lavada com EtOAc 5 adicional, os orgânicos combinados foram evaporados e purificados por cromatografia de coluna; a eluição com 20-30% de EtOAc/H deu o produto titulado com rendimento de 83%. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ

9,1 (s, IH) , 8,7(m, IH) , 8,2 (br s, IH) , 7,7 (m, IH) , 7,3 (m, IH) ,

7,3-6,8 (m, 4H) , 6,5 (s, IH) , 5,5 (br s, IH), 4,4 (m, 2H), 2,4 (m, IH), 2,2 (m, IH), 1,5 (s, 9H); MH+ = 515, 459 (-tBu).

(R)-tércio-Butila 4-fluoro-2-(9-(8-fluoroeromano-

4-ila) -8-OXO-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ilamina) fenilcarbamato

A uma solução de (R)-tércio-butila 4-fluoro-2-(4- (8-fluorocromano-4-ilamina)-5-nitropirimidina-2- 15 ilamina) fenilcarbamato (141 mg) em THF (20 mL) foi adicionada uma solução pré-misturada de hidrosulfito de sódio (0,6 g) e bicarbonato de sódio (0,3 g) em água (50 mL) . MeOH (5 mL) também foi adicionado para ajudar a solução da mistura, que foi agitada à temperatura ambiente por 30 min, quando cloreto de sódio foi 20 adicionado para saturar a solução. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2x) e os orgânicos combinados foram secados, filtrados e evaporados para obter (R)-tércio-butila 2-(5-amino-4- (8-fluorocromano-4-ilamina) pirimidina-2-ilamina)-A-

fluorofenilcarbamato, que foi usado como tal para a próxima etapa, MH+ = 4 85.

A uma solução agitada do material acima em THF (5 mL) , foi adicionado CDI (131 mg) . Depois de 15 h, salmoura e EtOAc foram adicionados e a mistura foi separada. A camada aquecida foi lavada com EtOAc adicional e os orgânicos combinados foram 30 evaporados e purificados através de cromatografia de coluna (elução com 3% de MeOH/DCM), para obter o produto titulado (86 mg, rendimento de 62% para duas etapas) . 1H-NMR (300 MHz, 5% de CD3OD em CDCl3) δ 7,9 (s, IH) , 7,4 (dd, IH) , 7,3 (m, IH) , 6,9 (dd, IH) ,

6,7-6,5 (m, 3H) , 5,7 (dd, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,3(td, IH) , 2,9 (m, IH), 2,2 (m, IH), 1,5 (s, 9H); MH+ = 511, 411 (-B0C), 455 (-tBu).

2-(6-fluoro-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-((R)-8- fluoroeromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona Um solução recém-preparada de 30% de TFA/DCM (5 mL) foi adicionada a (R)-tércio-butila 4-fluoro-2-(9-(8- fluorocromano-4-ila)-8-oxo-8, 9-di-hidro-7H-purina-2-ilamina) fenilcarbamato e a solução foi agitada à temperatura ambiente por 5 60 min, a seguir, os solventes foram removidos a vácuo para obter (R) -2- (2-amino-5-fluorofenilamino) -9-(8-fluorocromano-4-ila)-7H- purina-8(9H)-ona, que foi usada como tal; MH+ = 411.

À diamina acima foram adicionados MeOH (2 mL) , trimetilortoformato (2 mL) e p-TsOH (cat.) . A mistura foi agitada 10 à TA durante 60 min, a seguir, os solventes foram reduzidos e o material resultante particionado entre DCM e salmoura e separado. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (elução com 4% de MeOH/DCM) para obter o composto titulado (46 mg) . 1H-NMR (300 MHz, 5% de CD3OD em CDCl3) δ 8,7 (s, IH) , 8,1 (s, IH) , 7,5 (m, 15 2H) , 6,9 (m, 2H) , 6,6 (m, 2H) , 5,8 (dd, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,3 (td, IH), 2,8 (m, IH), 2,3 (m, IH); MH+ = 421.

2-(6-Fluoro-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-((R)-6- fluorocromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

O composto-título foi sintetizado a partir de (R)-6-fluorocromano-4-amina, pelos procedimentos descritos no Exemplo 27. 1H NMR (300 MHz, CDCl3 + 5% de CD3OD): δ 8,72 (s, IH) , 8,16 (s, IH) , 7,5-7,7 (m, 2H) , 6, 9-7,0 (m, 2H) , 6,8-6,9 (m, IH) , 6,54 (dd, IH) , 5,78 (br t, IH) , 4, 4-4,5 (m, IH) , 4,26 (m, IH) ,

2,7-2,8 (m, IH) , 2,2-2, 3 (m, IH) . 2- (6-fluoro-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-(tetra- hidro-2H-pirano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

0 composto-título foi sintetizado a partir de 4- amino-tetra-hidropirano, pelos procedimentos descritos no Exemplo 5 27. 1H NMR (d6-DMS0) δ 11,65 (s, 1H) , 9,13 (s, 1H) , 8,34 (s, 1H) , 8,28 (m, 1H) , 7,82 (m, 1H) , 7,25 (td, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H) , 4,56 (m, 1H) , 4,03 (dd, J = 11,1, 3,9 Hz, 2H) , 3,50 (t, J = 11,1 Hz, 2H), 2,59 (m, 2H), 1,78 (m, 2H).

2-(6-Cloro-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9- ( (R) -8- fluorocromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona

O composto-titulo foi sintetizado a partir de (R)-8-fluorocromano-4-amina e 4-cloro-2-nitrobenzenamina, pelos procedimentos descritos no Exemplo 27. 1H NMR (300 MHz, CDC3 + 5% de CD3OD): δ 8,7 (s, 1H) , 8,2 (s, 1H) , 8,1 (s, 1H) , 7,6 (d, 1H) , 15 7,2 (dd, 1H), 6,9 (td, 1H) , 6,7-6,5 (m, 2H) , 5,8 (dd, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,4 (td, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,3 (m, 1H).

Exemplo 28: Sintese de 2-(5-fIuoro-IH- beinzo [d] imidazola-l-ila) -9- ( (R) -8-fluorocromano-4-ila) -7H-purina- 8(9H)-ona

2 0 N-(2,4-Dimetóxibenzila)-5-fluoro-2-

nitrobenzenamina

Uma solução de 2,4-difluoro-l-nitrobenzeno (1,1 mL), 2,4-dimetóxi benzilamina (1,5 mL) e DIEA (5,2 mL), em THF (40 mL), foi aquecida a 60 0C por 60 min; foi permitido que resfriasse 25 à TA, particionada entre EtOAc e H2O, separada, secada (MgSO4) , filtrada e evaporada, para obter o produto titulado como um sólido amarelo (3,14 g) . 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,5 (br s, 1H) , 7,2 (dd, 1H) , 7,2 (d, 1H) , 6, 6-6, 4 (m, 3H) , 6,3 (m, 1H) , 4,3 (d, 2H) ,

3,9 (s, 3H), 3,8 (s, 3H).

N1-(2,4-Dimetóxibenzila)-5-fluorobenzeno-1,2-

diamina

Sob aquecimento de ar, uma quantidade catalítica

de uma solução de NI de Raney em água foi acrescentada a uma solução de N- (2,4-dimetóxibenzila)-5-fluoro-2-nitrobenzenamina (0,5 g) em THF (20 mL) . 0 frasco foi fechado com um septo, evacuado sob vácuo e hidrogênio foi adicionado por meio de um 10 balão. A suspensão resultante foi agitada à TA por 16 h, quando o balão de H2 foi removido e a mistura foi evacuada e filtrada por um plugue de celite, que foi enxaguado completamente com THF e MeOH para obter a diamina titulada, que foi usada como tal.

(R) -2-Cloro-N-(8-fluorocromano-4-ila)-5- nitropirimidina-4-amina

Uma solução de (R)-8-fluorocromano-4-amina hidroclorida (1,02 g) e DIEA (2,6 mL) em DCM (10 mL) foi acrescentada lentamente a uma solução de 2,4-dicloro-5- nitropirimidina (0,97 g) e THF (25 mL) a -78 °C. A mistura de 20 reação foi agitada por 30 min a -78 °C, a seguir, foi permitido que se aquecesse de um dia para o outro à TA. A reação foi resfriada com a adição de NH4Cl saturado (1 mL) , o volume de solvente foi reduzido em vácuo e a partição de mistura resultante entre EtOAc e água foi, a seguir, separada. 0 material bruto foi purificado por cromatograf ia de coluna e a eluição com 30% de EtOAc/Hex deu o produto titulado (1,43 g) . 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,1 (s, 1H), 8,6 (br d, 1H) , 7,1-6,8 (m, 3H), 5,6 (dd, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,3(m, 1H) , 2,4 (m, 1H) , 2,2 (m, 1H) .

(R) -N2- (2- (2,4-dimetóxibenzilamina) -4- fluorofenila) -N4- (8-f luorocromano-4-ila) -5-nitropirimidina-2 , 4- diamina

Uma mistura de (R)-2-cloro-N-(8-fluorocromano-4- ila)-5-nitropirimidina-4-amina (32 mg), N1-(2 , 4-dimetóxibenzila) -

5-fluorobenzeno-1,2-diamina (28 mg) e KCO3 (41 mg) em ACN foi aquecida a 65 °C durante 3 h, resfriada à TA, diluída com salmoura e extraída com EtOAc (2x) . Os orgânicos combinados foram evaporados e purificados através de cromatografia de coluna (elução com 30% de EtOAc/Hex), para obter o produto titulado (21 mg). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,0 (s, 1H) , 8,6 (br d, 1H) , 7,2-6, 8 (m, 6H) , 6,5-6,3 (m,4H), 4,4-4,2 (m, 4H) , 3,8 (s, 6H) , 2,3-2,2 (m, 2H) .

(R) -2- (2-(2,4-Dimetóxibenzilamina)-4- fluorofenilamina) -9- (8-fluorocromano-4-ila) -7H-purina-8 (9H) -ona

Sob uma atmosfera de ar, uma quantidade catalítica de uma solução de NI de Raney em água foi acrescentada a uma solução de (R)-N2-(2-(2,4-dimetóxibenzilamina)-4- f luorof enila) -N4- (8-f luorocromano-4-ila) -5-nitropirimidina-2 , 4- diamina (21 mg) em THF. 0 frasco foi fechado com um septo, evacuado sob vácuo e hidrogênio foi adicionado por meio de um balão. A suspensão resultante foi agitada à TA por 2 h e quando o balão de H2 foi removido, a mistura foi evacuada e filtrada através de um plugue de celite, que foi completamente enxaguado com THF e MeOH para obter (R)-N2-(2-(2,4-dimetóxibenzilamina)-4- f luorof enila) -N4- (8-fluorocromano-4-ila) pirimidina-2 , 4, 5-triamina, que foi usada diretamente.

A uma solução agitada do material acima em THF (5 mL) , foi adicionado CDI (12 mg) . Depois de 18 h, salmoura e EtOAc foram adicionados e a mistura foi separada. A camada orgânica foi evaporada e purificada através de cromatografia de coluna (elução com 4% de MeOH/DCM) para obter o produto titulado (14 mg) . 1H NMR (300 MHz, CDCl3 + 5% de CD3OD): δ 7,8 (s, 1H), 7,3 (s, 1H), 7,1 (d, 1Η) , 6,9 (m, 2Η) , 6,7-6,2 (m, 6Η) , 5,7 (dd, 1Η) , 4,5 (m, 1Η) , 4,2 (m, 1Η) , 4,1 (s, 2Η) , 3,8 (s, 3Η) , 3,7 (s, 3Η) , 2,8 (m, 1Η) , 2,2 (m, 1Η) .

2- (5-Fluoro-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-((R)-8-

fluorocromano-4-ila) -7H-purina-8(9H)-ona

Uma

mistura

de

(R)-2-(2—(2,4—

dimetóxibenzilamina)-4-fluorofenilamino)-9-(8-fluorocromano-4-

ila)-7H-purina-8 (9H)-ona (14 mg) e TFA (1 mL) foi agitada por 60 min, quando trietil-silano (0,5 mL) foi adicionado. A solução resultante foi agitada à TA por 16 h, a seguir, os solventes foram reduzidos a vácuo para obter (R)-2-(2-amino-4-fluorofenilamino)-9- (8-fluorocromano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona, que foi usada como

acrescentada a uma solução da amina acima em trimetilortoformato (2 mL) . A mistura foi agitada à TA por 15 h, a seguir, os solventes foram reduzidos e o material resultante particionado entre DCM e salmoura e separado. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (elução com 5% de MeOH/DCM) para obter 20 o composto titulado (9 mg). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10,0 (s, 1H),

tal.

Uma quantidade catalítica de p-TsOH foi

8,9 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 7,8 (dd, 1H), 7,4 (d, 1H), 7,1 (m, 2H) ,

6,8 (m, 2H), 5,9 (dd, 1H), 4,7 (m, 1H), 4,4 (td, 1H), 2,9 (m, 1H),

2,4 (m, 1H).

Exemplo 29: Sintese e Resolução de 8-

Fluorocromano-4-amina

F

NaOHZH2O

HO

O

O

HO"

Ácido 3-(2-Fluorofenóxi)propanóico Uma mistura de 2-fluorofenol (15 g) , ácido 3- bromopropanóico (20 g) e NaOH (11 g) foi refluxada em 50 mL de água. A solução foi resfriada à temperatura ambiente e acidificada para pH=2 com 3 M de HCl. 0 precipitado resultante foi isolado 5 através de filtração para obter 9,27 g do composto-titulo como um sólido branco. 0 filtrado foi extraído 3 vezes com EtOAc para obter 2,5 g de composto menos puro.

8-Fluorocromano-4-ona

Cloreto de oxalila (8,79 mL) e 1 gota de DMF 10 foram acrescentados a uma solução congelada de ácido 3— (2 — fluorofenóxi) propanóico (9,27 g) em DCM (50 mL) . A solução foi agitada a 0 0C durante 2 horas, a seguir, foi adicionado cloreto de alumínio (7,39 g, 55,42 mM) e a solução foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura foi vertida sobre água 15 gelada e extraída três vezes com DCM. Os orgânicos combinados foram lavados com 0,5 M de NaOH e salmoura, a seguir, secados, evaporados e purificados através de cromatografia de coluna (elução com 20% de EtOAc/Hex), para dar o composto-título (8,20 g, 98%) .

8-fluorocromano-4-amina

Um frasco de fundo redondo foi carregado com 8- fluorocromano-4-ona (8,2 g) , hidroxilamina hidroclorida (3,78 g) e acetato de sódio (4,46 g) . Um condensador de refluxo foi adicionado, o frasco foi purgado com argônio, EtOH seco (20 mL) 25 foi adicionado e a mistura foi agitada em refluxo durante 18 horas. A solução foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com EtOAc e lavada com água. A fase orgânica foi secada e evaporada para dar o intermediário 8-fluorocromano-4-amina oxima, que foi reduzido com Raney Níquel em EtOH a 50 psi, para obter a amina 30 titulada (4,69 g, 57%). F

F

F

NH2

Novozyme 435

MeOCH2COOMe

t-BuOMe

O

8 M HCt EtOH

F

NB*

Resolução de 8-fluorocromano-4-amina

(Procedimento baseado na patente US 0157739)

Uma mistura de 8-fluorocromano-4-amina (3,40 g)

2-metóxi-acetato de metila (2,44 g) e Novozyme 435 (Aldrich, 0,68 g) em éter de tércio-butila metila anidro (75 mL) foi aquecida em refluxo sob argônio durante 2 horas (nesse tempo a relação de produto acilado para não-acilado foi de 1:1 por CLAP) . 0 sólido que se formou no resfriamento foi coletado por filtração e dissolvido em EtOAc. A mistura foi filtrada para remover o bio- catalisador e lavada uma vez com 0,5 M de HCl para remover qualquer (S)-amina restante. 0 solvente foi evaporado e o produto foi recristalizado a partir de éter de tércio-butila metila, para obter (R)-N-(8 —fluorocromano—4 —ila)—2—metóxi —acetamida (0,78 g) . 0 solvente de reação e o licor "mãe" da recristalização foram lavados 3 vezes com 0,5 M de HCl e concentrados para obter (R)-N- (8-fluorocromano-4-ila)-2-metóxi-acetamida adicional (0,83 g) . As camadas aquosas ácidas combinadas foram tornadas básicas por NaOH e extraídas com DCM para obter (S)-8-fluorocromano-4-amina (1,6 g). Uma solução de (R)-N-(8-fluorocromano-4-ila)-2-metóxi- acetamida (0,78 g) em 8 M de HCl em EtOH (50 mL) foi aquecida em refluxo durante 4 horas. Os solventes foram removidos da mistura de reação resfriada, o sólido resultante foi tomado em 50 mL de 0,5 M de NaOH, salgado com NaCl e extraído 4 vezes com DCM para obter (R)-8-f luorocromano-4-amina (0,48 g (87%)). A % de ee foi conferida por CLAP quiral: método Chiralcel OD-H (coluna analítica de 0,46 x 25 cm, Daicel Chemical Industries) : isocrático, 5% (0,05% de TFA/ETOH) , 95% (0,05% de TFA/HEX) , Tr = 7,2 min, enantiômero-(S) , Tr = 9,2 min, enantiômero-(R) .

metilcromano-4-amina, 6-metóxicromano-4-amina, 7-f luorocromano-4- amina, 5, 8-dif luorocromano-4-amina e 6, 8-dif luorocromano-4-amina

descritos no Exemplo 29, para a síntese de 8-fluorocromano-4- amina. As cromano-4-onas correspondentes estavam comercialmente disponíveis como intermediários avançados para a síntese de cromano-4-amina, 6-fluorocromano-amina, 6-clorocromano-4-amina, 6- metilcromano-4-amina e 6-metóxicromano-4-amina. Para a síntese de 5-fluorocromano-4-amina, o intermediário 5-fluorocromano-4-ona foi obtido usando procedimentos da patente GB 2355264, que também proveram 7-fluorocromano-4-ona. A 7-Fluorocromano-4-ona poderia ser usada na síntese de 7-fluorocromano-4-amina. As cromano-4- amina, 5-fluorocromano-4-amina, 6-fluorocromano-4-amina, 7- fluorocromano-4-amina, 5, 8-difluorocromano-4-amina e 6,8- difluorocromano-4-amina foram resolvidas pelo procedimento descrito no Exemplo 29, para a resolução de 8-fluorocromano-4- amina.

amina

Exemplo 30: Cromano-4-amina, 5-fluorocromano-4-

6-fluorocromano-4-amina, 6-clorocromano-4-amina, 6-

F

F

Estas aminas foram preparadas por procedimentos

Exemplo 31: l-metila-4,5,6,7-tetra-hidro-lH-

indola-4-amina

NH2 O composto-titulo foi obtido a partir de 1- metila-6,7-di-hidro-lH-indola-4(5H)-ona ("Heterociclos"

(Heterocycles) (1984), 22, 2313), pelo procedimento descrito no Exemplo 29, que foi usado para obter 8-fluorocromano-4-amina a partir de 8-fluorocromano-4-ona.

Exemplo 32: Sintese de 5,6-Difluorocromano-4-

amina

Br

JL OH BrCH2CH^COOH

:-V

NaOH

0—^COOH

IJ(Coa)2 2) Aia3

NH2OH-HO1 NaOAc EIOH1 refluxo

1H2 / Raney-Ni 2. H21 Pd/C

Ácido 3-(2-Bromo-4,5-difluorofenóxi)propanóico

Uma solução de 1,68 g de NaOH (42 mmol) em 5 mL de água foi acrescentada lentamente a uma suspensão de 2,29 mL (20 mmol) de 2-bromo-4,5-dif luorof enol e 3,07 g (20 mmol) de ácido 3- bromopropiônico. A mistura foi aquecida a 100 0C em um banho de óleo durante 5 horas e, a seguir, foi permitido que resfriasse à temperatura ambiente. Água foi adicionada para dissolver completamente qualquer material sólido e a mistura de reação foi tornada ácida com HCl concentrado. 0 produto foi extraído em éter (3 vezes) e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e evaporadas, para dar 3,7 g (66%) do composto-título como um sólido marrom claro. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,4 (t, 1H) , 6,8 (q, 1H), 4,3 (t, 2H), 2,9 (t, 2H).

8-Bromo-5,6-difluoro-2,3-di-hidrocromano-4-ona

Cloreto de oxalila (1,7 mL, 20 mmol) foi acrescentado a uma solução de 2,8 g (10 mmol) de ácido 3-(2-bromo- 4,5-difluorofenóxi)-propanóico em 40 mL de DCM anidro, seguido por 25 uma gota de DMF. Depois de 1,5 horas, um tubo de secagem foi acoplado e a solução foi resfriada em um banho de água congelada. AlCl3 (1,5 g, 11 mmol) foi adicionado e foi permitido que a solução vermelho escuro alcançasse temperatura ambiente lentamente, sendo agitada durante 16 horas. A mistura foi vertida em gelo e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 0,5 N de NaOH e salmoura, a seguir, secadas em Na2SO4 e 5 concentradas. A cromatografia de coluna deste resíduo com hexano e EtOAc proveu 1,9 g do composto-título como um sólido quase branco (73%). 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,6 (t, 1H) , 4,65 (t, 2H) , 2,85 (t, 2H).

8-Bromo-5,6-difluoro-2,3-di-hidrocromano-4-ona

oxima

A uma solução de 8-bromo-5,6-difluoro-2,3-di- hidrocromano-4-ona (7,2 mmol) em 40 mL de etanol foi adicionada hidroxilamina hidroclorida (0,55 g, 7,9 mmol) e acetato de sódio (0,65 g, 7,9 mmol). Esta mistura foi aquecida em refluxo por 20 h.

A mistura foi resfriada, diluída com EtOAc, lavada com água e salmoura e, a seguir, foi secada com Na2SO4. A concentração do solvente proveu o composto-título como um sólido branco (1,9 g) . 1H NMR (300 MHz, 10% CD3OD em CDCl3): δ 7,3 (t, 1H) , 4,2 (t, 2H) ,

2,9 (t, 2H).

5,6-Difluoro-3,4-di-hidro-2H-cromano-4-amina

Raney-NI (5 mL de borra em água) foi acrescentada a uma solução de 8-Bromo-5,6-difluoro-2,3-di-hidrocromano-4-ona oxima (1,9 g) em 200 mL de MeOH. A mistura foi hidrogenada a 50 psi por 24 h para prover 8-bromo-5,6-difluoro-3,4-di-hidro-2H-

cromano-4-amina. Pd/C (0,3 g) foi acrescentado à mistura e a hidrogenação foi retomada a 50 psi durante 4 horas. 0 composto- título foi obtido depois de filtração e concentração em vácuo. 1H NMR (300 MHz, 10% CD3OD em CDCl3): δ 7,15 (q, 1H) , 6,6 (m, 1H) , 4,6 (bm, 1H), 4,25 (bm, 2H), 2,2-2,4 (m, 2H) .

Exemplo 33: Sintese de 4-Amino-3,4-di-hidro-2H-

cromano-8-carbonitrilo

CN ÇN NH4OAc/NaCNBH3

WIeOH/peneiras 3A

NH2

4-Amino-3,4-di-hidro-2H-cromano-8-carbonitrilo Uma mistura de 260 mg de 4-oxo-3,4-di-hidro-2H- cromano-8-carbonitrilo (feita a partir de 2-hidróxibenzonitrilo, pelo procedimento descrito no Exemplo 29), acetato de amônia (1,2 g) e peneiras moleculares de 3A (1,5 g) em 10 mL de metanol foi 5 agitada durante 5 dias. A mistura foi filtrada por celite e o filtrado concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi tratado com 100 mL de I M de HCl e extraído com éter de etila (3 x 100 mL) . A camada aquosa foi tornada básica para um pH=10 com NaOH saturado e extraída com DCM (3 x 100 mL) . As camadas de DCM combinadas foram 10 lavadas .. com salmoura, secadas em sulfato de magnésio e concentradas em vácuo para prover 150 mg do composto-título.

NC NH2

4-Amino-3,4-di-hidro-2H-cromano-6-carbonitrilo

0 composto-título foi feito a partir de 6-ciano-

4-cromanona (Syntech) pelo mesmo procedimento que foi descrito no Exemplo 33.

NH2

Acetato de 4-amino-l,2,3,5,4-tetra-

hidronaftaleno-l-ila

0 composto-título foi feito a partir de acetato de 4-oxo-l, 2, 3, 4-tetra-hidronaftaleno-l-ila [Tetrahedron:

Assimetry, 2001, 12, 2283) pelo mesmo procedimento que foi descrito no Exemplo 33.

,N,

H2N

6,7-Di-hidro-5H-ciclopenta[b]piridina-5-amina

O composto-título foi feito conforme descrito na patente WO 03/045924. Exemplo

hidroquinoxalina-5-amina Boc2O

34

DMAP '[ N

ch^cn Boc"NY" O

Sintese

H2NNH2

de

(R)-5,6,7,8-Tetra-

MeOH

Boc'

TFA

CH2CI2

90

NH2

acetila(5,6,7,8-tetra-

(R) -tércio-Butila hidroquinoxalina-5-ila)carbamato

Uma solução contendo 483 mg de (R)-N-(5,6,7,8-

tetra-hidroquinoxalina-5-ila)acetamida (J. Org. Chem. (2003), 68, 3546) em acetonitrilo (20 mL) foi tratada com Boc2O (3 g) e DMAP (5 mg) . A mistura foi aquecida a 60 0C por 1,5 h e, a seguir, concentrada em vácuo. A cromatografia de coluna (50% de EtOAc/hexanos) proveu 293 mg do composto-título.

(R) -tércio-Butila 5,6,7,8-tetra-hidroquinoxalina-

5-ilcarbamato

Uma solução de (R)-tércio-butila acetila(5,6,7,8- tetra-hidroquinoxalina-5-ila)carbamato (293 mg) em metanol (10 mL) 15 foi tratada com hidrato de hidrazina (0,5 mL) por 1,5 h. A mistura foi diluída com EtOAc e lavada duas vezes com cloreto de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi separada, secada com sulfato de - sódio e concentrada em vácuo para prover 238 mg do composto-título.

(R) -5,6,7,8-Tetra-hidroquinoxalina-5-amina

Uma solução de (R)-tércio-butila 5,6,7,8-tetra- hidroquinoxalina-5-ilcarbamato (238 mg) em 10 ml de 1:1 de TFA/DCM foi agitada durante 30 minutos. A mistura foi concentrada em vácuo para prover o composto-título como um sal de TFA.

Exemplo 35: Sintese de 2-(ÍH-Benzo[d]imidazola-l-

ila) -9- (4 , 5,6,7-tetra-hidro-lH-indola-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona >

Pl

PhSO2Cl, NaOH 1,2-di chloroethane

I >

N

SO2Ph

NH2

W

SO2Ph

N

,SO2Ph

sí?

4 N NaOH MeOH

Ç&

"y-N

XX>=°

1- (Fenil-sulfonila) -4-oxo-4 ,5,6, 7-tetra-hid.ro- indola

A uma suspensão de NaOH (4,44 g) em 1,2-dicloro- etano (250 mL) foi adicionada 4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro-indola (5,0 g) . A mistura foi, a seguir, resfriada a 0 0C e agitada por min e depois uma solução de cloreto de fenil-sulfonila (5,7 mL) em 1,2-dicloro-etano (50 mL) foi adicionada por gotejamento durante um período de 30 min. Depois de 30 min agitando, foi permitido que a mistura de reação alcançasse temperatura ambiente e foi agitada de um dia para o outro. A reação foi resfriada vertida sobre água destilada (100 mL) . A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 50 mL) . 0 extrato orgânico combinado foi lavado com água destilada para alcançar neutralidade, secado em MgSO4 e concentrado em vácuo para dispor 7,0 g do composto-título.

1-(Fenil-sulfonila)-4,5,6,7-tetra-hidro-lH- indola-4-amina

0 composto-título foi obtido a partir de 1- (fenil-sulfonila)-4-oxo-4, 5, 6, 7-tetra-hidro-indola pelo

procedimento descrito no Exemplo 29, que foi usado para obter 8- fluorocromano-4-amina a partir de 8-fluorocromano-4-ona.

2- (ÍH-Benzo[d]imidazola-l-ila)-9-(1-fenil- sulfonila) -4,5,6, 7-tetra-hidro-lH-indola-4-ila) -7H-purina-8 (9H) - ona

0 composto-título foi obtido a partir de 1-

(fenil-sulfonila)-4,5, 6, 7-tetra-hidro-lH-indola-4-amina pelos

procedimentos descritos no Exemplo 24. 10

15

2-(ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-(4,5,6,7-tetra- hidro-lH-indola-4-ila)-7H-purina-8 (9H) -ona

A uma solução de 2-(ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)- 9- (1- (fenil-sulfonila)-4, 5, 6, 7-tetra-hidro-lH-indol-4-ila)-7H- purina-8 (9H)-ona (50 mg) em MeOH (1 mL) foi adicionado 4 N de NaOH (1 mL) , a mistura foi refluxada de um dia para o outro e resfriada. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resultante neutralizado com 4 N de HCl. 0 precipitado branco foi filtrado, lavado com uma pequena quantidade de água e secado em vácuo para dispor 36 mg do composto-título. 1H NMR (d6-DMS0) δ 11,6 (s, 1H), 10,7 (s, 1H) , 8,86 (s, 1H), 8,27 (s, 1H) , 7,69 (d, J=7,8 Hz, 1H) , 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,33 (m, 2H) , 6,53 (t, J = 2,4 Hz, 1H) , 5,64 (t, J = 2,4 Hz, 1H) , 5,54 (m, 1H) , 2,72 (m, 2H) , 2,30 (m, 1H), 2,07 (m, 2H) , 1,84 (m, 1H) .

Exemplos 36 e 37 (Di-hidrobenzofurano): 2-(1H- benzo [d] imidazola-l-ila) -9- (2 , 3-di-hidrobenzofurano-3-ila) -7H- purina-8 (9H)-ona e 2-(ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-(4-fluoro-2,3- di-hidrobenzofurano-3-ila) -7H-purina-8 (9H) -ona

(COCO2

NH2OHmci

NaOAc

Γ

ÒÒ

.OH

Hg(AI)

THF

Ql 1) 2.5 eq TMSCHN2 2) HOAc

NH2

Cloreto de 2-fluoro-6-metoxibenzoila

Cloreto de oxalila (0,56 mL, 6,4 mmol) foi

acrescentado a uma solução de 1,0 g (5,9 mmol) de ácido 2-fluoro-

6-metoxibenzóico em 5 mL de CH2Cl2 anidro., a seguir, uma gota de DMF foi adicionada. Depois de uma hora, quando o borbulhamento lento cessou, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida 25 para dispor 1,1 g (95%) de cloreto de ácido como um líquido amarelo pálido. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,45 (q, 1H) , 6,7-6, 8 (m, 2H), 3,9 (s, 3H).

4-fluorobenzofurano-3(2H)-ona Uma solução de éter de (trimetil-

silila) diazometano amarela (2,0 M, 3,7 mL) foi acrescentada a 0,57 g (3,0 mmol) do cloreto de ácido acima, agitando. Depois de 3 horas, o solvente foi evaporado. O resíduo amarelo foi dissolvido 5 em 3 mL de ácido acético (gás forte e evolução de calor, foi usado um banho de água para resfriar o frasco durante um minuto) e agitado por 15 min à temperatura ambiente. Os solventes foram removidos sob vácuo e o resíduo vermelho foi tomado em 2 mL de CH2CL2, lavado duas vezes com água, a seguir, com salmoura e secado 10 em Na2SO4. Este produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna (elução com 10% de EtOAc em hexanos) para dar 0,24 g (53%) de 4-fluorobenzofurano-3(2H)-ona como um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,58 (m, 1H) , 6,92 (br d, 1H) , 6,71 (t, 1H), 4,65 (s, 2H).

(Z)-4-fluorobenzofurano-3(2H)-ona oxima

A cetona acima (0,70 g, 4,6 mmol) foi dissolvida em 5 mL de álcool etílico e, a seguir, foram adicionados 0,64 g (9,2 mmol) de hidroxilamina hidroclorida e 0,75 g (9.2 mmol) de acetato de sódio. Esta suspensão foi colocada em refluxo durante 1 20 h. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e foram adicionados 4 mL de água para dissolver os reagente em excesso. A filtração de sucção e, a seguir, a lavagem do bolo sólido com uma pequena quantidade de água fria, proveram 0,48 g (63%) da oxima desejada como cristais brancos em formato de agulha. 1H NMR (300 25 MHz, CDCl3): δ 8,38 (s, 1H) , 7,38 (q, 1H) , 6, 6-6, 8 (m, 2H) , 5,21 (s, 2H).

4-fluoro-2,3-di-hidrobenzofurano-3-amina

A oxima acima (0,48 g) foi dissolvida em 40 mL de THF anidro sob argônio. Amálgama de alumínio recém-preparada 30 (imergindo-se seqüencialmente 1 g de uma chapa de alumínio polida em uma solução aquosa de a HgCl2 2%, em água e finalmente em THF) foi adicionada rapidamente e a mistura foi refluxada durante 24 horas sob Argônio. Pelotas brihantes de mercúrio apareceram no fundo do frasco. Foi permitido que a mistura resfriasse à 35 temperatura ambiente, sendo filtrada por um bloco de celite. 0 frasco e o bolo sólido foram lavados três vezes com THF, a seguir, três vezes com metanol. 0 filtrado combinado foi evaporado por 10

15

20

rotação para dar 0,41 g de um sólido amarelo, como uma mistura (determinada por NMR)- de aproximadamente 20% da amina desejada com 80% da oxima inicial. Esta mistura foi usada para a próxima etapa sem purificação. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,18 (q, 1H) , 6, 5-6, 7 (m, 2H) , 4,8-4,9 (m, 1H) , 4,69 (t, 1H) , 4,2-4,3 (m, 1H) .

A 2-(ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-(2,3-di-

hidrobenzofurano-3-ila)-7H-purina-8(9H)-ona racêmica acima pode ser separada em uma coluna CHIRALCEL OD-H quiral (tris(3,5- dimetilfenilcarbamato celulose) em um substrato de 5 μΜ de sílica- gel, eluindo com 85:15 de hexanos:etanol (ambos com 0,1% de dietilamina) . Um enantiômero tem um tempo de retenção (Tr) de 25 min, o outro de 33,5 min.

Procedimentos e dados de NMR para análogos de purinona 7-alquilada.

Ioctometano

PS-BEMP

25

Exemplo 38: 2- (6-fluoro-ΙΗ-benzo[d]imidazola-l- ila) -9- ( (R) -8-fluorocromano-4-ila)-7-metila-7H-purina-8(9H)-ona

Uma suspensão de 2-(6-fIuoro-IH-

benzo[d]imidazola-l-ila) -9-((R) -8-fluorocromano-4-ila)-7H-purina- 8(9H)-ona (5 mg), 2-tércio-butilimino-2-dietilamina-l,3-dimetila- perhidro-1,3,3-diazafosforina em poliestireno (30 mg, 2,2 mM/g) e iodometano (5 μΐ^ em ACN (1 mL) foi agitada por 1 h à TA, a seguir, filtrada por um plugue curto de celite, que foi completamente enxaguado com MeOH. A evaporação dos solventes e a cromatografia de gel de sílica (elução com 4% de MeOH/DCM) deram o composto titulado (4 mg). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,7 (s, 1H) , 8,2 (s, 1Η) , 7,7 (m, 2Η) , 7,0 (m, 2Η) , 6,7 (m, 2Η) , 5,9 (dd, 1Η)

4,7 (m, 1Η) , 4,4 (td, 1Η) , 3,6 (s, 3Η) , 2,9 (m, 1Η) , 2,4 (m, 1Η) .

NC

H

Br

PS-BEMP

h

/

,O

Exemplo 39: 3-[9-cromano-4-ila-7-(2-metóxi-

etila) -8-οχο-β , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila] -3H-benzo-imidazola-5- carbonitrilo

8, 9-di-hidro-7H-purina-2-ila)-3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo (10 mg) em acetonitrilo (10 mL) foi tratada com éter de 2-bromo- etilmetila (23 μL) e 2-tércio-butilimino-2-dietilamina-l,3- dimetila-perhidro-1,3,2-diazafosforina em poliestireno (500 mg,

2,2 mmol de base/g) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas e, a seguir, filtrada por celite. 0 celite foi lavado com acetonitrilo e metanol e, a seguir, o filtrado coletado foi secado com sulfato de magnésio e concentrado em vácuo. A 15 purificação através de cromatografia de coluna (1% de MeOH/DCM) deu 4 mg do composto-título. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, 1H),

ila) -9- ( (R) -6-fluorocromano-4-ila) -7- (2-hidróxi-etila) -7H-puri.na- 8(9H)-ona

Uma solução de 3-(9-((R)-cromano-4-ila)-8-oxo-

8,6 (s, 1H) , 8,4 (s, 1H) , 7,9 (d, 1H) , 7,6 (d, 1H) , 7,2 (m, 2H)

6,9 (d, 1H) , 6,8 (d, 1H) , 5,9 (t, 1H) , 4,6 (m, 1H) , 4,4 (m, 1H)

4,2 (m, 2H), 3,8 (m, 2H), 3,4 (s, 3H), 2,8 (m, 1H), 2,4 (m, 1H).

OH

20

Exemplo 40: 2-(6-fluoro-lH-benzo[d]imidazola-1- 10

15

20

25

A uma solução de 5 mg de 2-(6-fIuoro-IH- benzo [d] imidazola-l-ila)-9-((R)-6-fluorocromano-4-ila)-7H-purina- 8(9H)-ona em 1 mL de acetonitrilo anidro foram adicionados 50 mg (em excesso) de 2-tércio-butilimino-2-dietilamina-l,3-dimetila- perhidro-1,3,2-diazafosforina em poliestireno (2,2 mmol de base/g, Fluka), a seguir, 10 μL (em excesso) de 2-iodo-etanol. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. A cromatograf ia de coluna com 3% de MeOH em CH2Cl2 e, a seguir, CLAP preparativa, proveram 3 mg do produto desejado como um sal de TFA. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9,14 (s, 1H) , 8,40 (s, 1H) , 7,7-7,9 (m, 2H) , 7,1-7,2 (m, 1H) , 7, 0-7,1 (m, 1H) , 6, 9-7,0 (m, 1H) , 6,59 (dd, 1H) , 5,88 (br t, 1H) , 4,5-4, 6 (m, 1H) , 4,32 (t, 1H) , 4,0-4,2 (m, 4H) , 2,7-2,9 (bs+m, 2H) , 2,2-2,3 (m, 1H) .

HCt

H

PS-BEMP

N-

/

Exemplo 41: 3-[9-Cromano-4-ila-7-(2-dimetilamino- etila) -8-OXO-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila] -3H-benzo-imidazola-5- carbonitrilo

Uma solução de 3-(9-((R)-cromano-4-ila)-8-oxo-

8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila)-3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo (65 mg) em acetonitrilo (10 mL) foi tratada com 2-cloro-N,N- dimetiletilamina hidroclorida (25 mg) e 2-tércio-butilimino-2- dietilamina-1, 3-dimetila-perhidro-l,3,2-diazafosforina em

poliestireno (325 mg, 2,2 mmol de base/g). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e, a seguir, filtrada por celite. 0 celite foi lavado com acetonitrilo e metanol e, a seguir, o filtrado coletado foi secado com sulfato de magnésio e concentrado em vácuo. A purificação através de cromatografia de coluna (2% de MeOH/DCM) deu 21 mg do composto-título. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,9 (s, 1H) , 8,5 (s, 1H) , 8,4 (s, 1H) , 7,8 (d, 1H) , 10

15

20

7,60 (d, 1H) , 7,2 (m, 2H) , 6,9 (d, 1H) , 6,8 (d, 1H) , 5,9 (t, 1H) ,

4,4 (m, 4H), 3,6 (m, 3H), 3,0 (s, 6H), 2,2 (m, 1H).

N

NC

TJ>

Br'

"CN

PS-BEMP

,N,

xxy°

NC

N

J

Exemplo 42: 3-(9-Cromano-4-ila-7-cianometila-8- oxo-8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo-imidazola-5- carbonitrilo

Uma solução de 3-(9-((R)-cromano-4-ila)-8-oxo-

8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo

(

(10 mg) em acetonitrilo (10 mL) foi tratada com bromo-acetonitrilo (17 μυ e 2-tércio-butilimino-2-dietilamina-l,3-dimetila-perhidro- 1,3,2-diazafosforina em poliestireno (500 mg, 2,2 mmol de base/g). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e, a seguir, filtrada por celite. 0 celite foi lavado com acetonitrilo e metanol e, a seguir, o filtrado coletado foi secado com sulfato de magnésio e concentrado em vácuo. A purificação através de cromatograf ia de coluna (1% de MeOH/DCM) deu 11 mg do composto- título. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, 1H) , 8,5 (s, 1H) , 8,4 (s, 1H) , 7,8 (d, 1H) , 7,6 (d, 1H) , 7,2 (m, 2H) , 6,8 (m, 2H) , 5,9 (t, 1H) , 5,0 (s, 2H) , 4,6 (m, 1H) , 4,4 (m, 1H) , 2,8 (m, 1H) , 2,4 (m, 1H) .

Br COOMe

PS-BEMP

MeOOC

Exemplo 43: 2-(2-(6-ciano-lH-benzo[d]imidazola-l- ila) -9- ( (R) -6,8-difluorocromano-4-ila)-8-oxo-8,9-di-hidropurina-7- ila)acetato de metila

Uma solução de 3-(9-((R)-6,8-difluorocromano-4- ila)-8-ΟΧΟ-8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila)-3H-benzo[d]imidazola-5- carbonitrilo (10 mg) em acetonitrilo (2 mL) foi tratada com bromo- acetato de metila (90 mg) e 2-tércio-butilimino-2-dietilamina-l,3- dimetila-perhidro-1,3,2-diazafosforina em poliestireno (100 mg,

2,2 mmol de base/g) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente

por 48 horas e, a seguir, filtrada. O filtrado coletado foi concentrado em vácuo. A purificação através de CCF preparativa (5% de MeOH/DCM) seguida por cromatograf ia de coluna deu 6 mg do composto-título. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,94 (s, 1H) , 8,78 (m, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 7,91 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,63 (dd, J = 8,1, 10 1,2 Hz, 1H) , 6,83 (m, 1H) , 6,42 (m, 1H) , 5,89 (m, 1H) , 4,77 (s, 2H) , 4,68 (m, 1H) , 4,41 (m, 1H) , 3,87 (s, 3H) , 2,98 (m, 1H) , 2,40 (m, 1H).

Exemplo 44: ácido 2-(2-(6-ciano-lH-

benzo [d] imidazola-l-ila) -9- ( (R) -6 ,8-dif luorocromano-4-ila) -8-oxo- 8,9-di-hidropurina-7-ila)acético

A uma solução de 2-(2(6-ciano-lH-

benzo[d]imidazola-l-ila)-9-((-R) -6, 8-difluorocromano-4-ila)-8-oxo-

8,9-di-hidropurina-7-ila)acetato de metila (4 mg) em MeOH (0,75 mL) e THF (0,25 mL) a 0 0C foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio (2 mg) em água (0,25 mL) . Foi permitido que a reação se aquecesse à temperatura ambiente, sendo agitada por 2 h. Depois de concentração sob pressão reduzida, o resíduo foi diluído com água e acidificado com 2 N de HCl para um pH=4. O sólido precipitado foi filtrado, lavado com uma pequena quantidade de água fria, tratado com I N de HCl em MeOH (0,5 mL) e concentrado em vácuo para dispor 2 mg do composto-título. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,04 (s, 1H) , 8,75 (m, 1H) , 8,46 (s, 1H) , 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,68 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, 1H) , 6,92 (m, 1H) , 6,70 (m, 1H) , 5,97 (m, 1H) , 4,77 (s, 2H) , 4,63 (m, 1H) , 4,44 (m, 1H) , 2,91 (m, 1H) , 2,42 (m, 1H). 10

15

20

Exemplo 45: Sintese de 2-(6-fIuoro-IH- benzo [d] imidazola-l-ila) -7- (piperidina-4-ila) -9- (tetra-hidro-2H- pirano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona -O.

^ 1)

HO-

N-Boc —>-

DIAD1 DCE Q-PPh3 2} H+

Trifenilfosfina ligada a resina (264 mg, 2,15 mM/g, Argonaut) e tércio-butila 4-hidróxipiperidina-l-carboxilato

6 (24 mg) foram acrescentados a 2-(6-fluoro-lH-benzo[d]imidazola-

l-ila) -9- (tetra-hidro-2H-pirano-4-ila)-7H-purina-8(9H)-ona em

dicloro-etano (6 mL) ; a mistura foi agitada por 10 min, quando azodicarboxilato de di-isopropila (64 μL) foi adicionado. Depois de 18 h, o material foi filtrado, as resinas foram completamente enxaguadas com ACN e MeOH e os orgânicos combinados foram evaporados e purificados por CLAP de fase reversa (Boc com TFA removido por evaporação) para obter o composto titulado como um sal de TFA (16 mg). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3 + 5% de CD3OD) δ 9,0 (s, IH) , 8,6 (s, IH) , 8,3 (dd, IH) , 7,7 (dd, IH) , 7,1 (td, IH) , 4,7-

4,4 (m, 2H) , 4,2 (dd, 2H) , 3,6 (t, 2H) , 3,3 (br d, 2H) , 2, 9-2,7 (m, 4H) , 2, 4-2,2 (m, 4H) , 2,9 (m, IH) , 1,9 (d, 2H) , 1,8 (d, 2H) ; 19F δ -76, -117 ppm; MH+ = 438; IR (CDCl3) 1726 (extensão C=O) .

\

2-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-((R) - fuorocromano-4-ila)-7-metila-7H-purina-8(9H)-ona

Este composto foi sintetizado pelo

método

descrito no exemplo 38. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, IH), 8,2 (s, IH) , 8,1 (m, IH) , 7,8 (m, 2H) , 7,3 (m, 2H), 7,0 (m, IH), 6,7 (m, 2H) , 5,9 (t, IH) , 4,7 (m, IH) , 4,4 (td, IH) , 3,6 (s, 3H) , 2,9 (m, IH) , 2,4 (m, IH) . 10

2-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-(6-fuorocromano- 4-ila)-7-metila-7H-purina-8(9H)-ona

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,80 (s, IH) , 8,19 (s, IH), 7,96 (d, IH) , 7,78 (d, IH) , 7,2-7,4 (m, 2H) , 6,8-7,1 (m, 2H) , 6,61 (dd, IH) , 5,88 (br t, IH) , 4,54 (m, IH) , 4,32 (m, IH), 3,56 (s, 3H) , 2,84 (m, IH) , 2,30 (m, IH) .

XXj-°

15

2- (ΙΗ-benzo [d] imidazola-l-ila) -9- ( (R) -5,8- difluorocromano-4-ila)-7-metila-7H-purina-8 (9H)-ona

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) : δ 8,7 (s, IH), 8,2 (s, IH) , 8,0 (d, IH), 7,9 (d, IH) , 7,4 (m, 2H) , 7,0 (t-d, IH), 6,5 (t-d, IH), 6,0 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 3,5 (s, 3H), 2,6 (m, IH), 2,5 (m, IH). 2- (ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-((R) -5,8- difluorocromano-4-ila)-7-etila-7H-purina-8(9H)-ona

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38 usando iodo-etano. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) : δ 8,8 (s, IH), 8,2 (s, IH) , 8,0 (d, IH) , 7,9 (d, IH) , 7,4 (m, 2H) ,

7,0 (t-d, IH) , 6,5 (t-d, IH) , 6,0 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH), 4,0 (m, 2H), 2,6 (m, IH) , 2,5 (m, IH), 1,5 (t, 3H) .

F

2- (ΙΗ-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-( (R)-5,8- difluorocromano-4-ila) -7-propila-7H-purina-8 (9H) -ona

Este composto foi sintetizado pelo método

descrito no exemplo 38 usando iodopropano. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) : δ 9,8 (sr IH), 8,2 (s, IH) , 8,0 (d, IH) , 7,9 (d, IH), 7,4 (m, 2H) ,

7,0 (t-d, IH) , 6,5 (t-d, IH) , 6,0 (t, IH) , 4,6 (m, 1H),4,4 (m, IH) , 4,0 (m, 2H) , 2,6 (m, IH) , 2,5 (m, IH) , 1,9 (m, 2H) , 1,0 (t, 3H).

F

9- ( (R) -5,8-difluorocromano-4-ila)-2-(6-fluoro-IH- benzo[d]imidazola-l-ila)-7-metila-7H-purina-8 (9H)-ona

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,7 (s, IH), 8,0 (m, IH) , 7,7 (dd, IH) , 7,1 (m, 2H) , 6,5 (td, IH) , 5,9 (dd, IH) ,

4,6 (m, IH), 4,5 (m, IH), 3,5 (s, 3H) , 2,6 (m, IH), 2,5 (m, IH) . F

9- ( (R) -5,8-difluorocromano-4-ila)-2-(6-fluoro-IH- benzo [d] imidazola-l-ila) -7- (2-metóxi-etila) -7H-purina-8 (9H) -ona

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 39. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,7 (s, IH), 8,4

9- ( (R) -5,8-difluorocromano-4-ila)-7-(2- (dime ti lamina) etila) -2- (6-fluoro-lH-benzo [d] imidazola-l-ila) -7H- purina-8(9H)-ona

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 41. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,2 (s, IH), 8,5 (s, IH) , 7,9 (m, IH) , 7,8 (dd, IH) , 7,2 (td, IH) , 7,1 (td, IH) ,

6,5 (td, IH) , 5,9 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,5 (m, 3H) , 3,6 (m, 2H) , 3,0 (s, 6H), 2,7 (m, IH), 2,5 (m, IH).

(s, IH)., 8,0 (m, IH) , 7,8 (dd, IH) , 7,2-7,0 (m, 2H) , 6,5 (td, IH)

6,0 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,5 (m, IH) , 4,1 (t, 2H) , 3,7 (t, 2H)

3,4 (s, 3H), 2,7 (m, IH), 2,4 (m, IH).

F 2-(6-Cloro-lH-benzo[d]imidazola-l-ila)-9-( (R) -8- fluorocromano-4-ila)-7-metila-7H-purina-8(9H)-ona

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,7 (s, IH) , 8,3 (m, IH) , 8,2 (s, IH) , 7,7 (d, IH) , 7,3 (dd, IH) , 7,0 (td, IH) ,

6,8-6,6 (m, 2H), 5,9 (dd, IH), 4,7 (m, IH) , 4,5 (td, IH) , 3,6 (s, 3H), 3,0 (m, IH), 2,4 (m, IH).

NC \

3-(7-metila-8-oxo-9-(tetra-hidro-2H-pirano-4- ila) -8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5- carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9,37 (s, IH) , 8,90. (m, IH) , 8,58 (s, IH) , 8,00 (d, J = 8,4 Hz, IH) , 7,79 (dd, J=8,4, 1,5 Hz, IH) , 4,63 (m, IH) , 4,03 (m, 2H) , 3,51 (m, 2H) , 3,44

NC I

3-(9-cromano-4-ila-7-metila-8-oxo-8,9-di-hidro- 7H-purina-2-ila)-3H-benzo-imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, IH), 8,5 (s, IH) , 8,2 (s, IH), 7,8 (d, IH) , 7,6 (d, IH) , 7,2 (m, 2H) , 6,9 (d, IH) , 6,8 (d, IH) , 5,9 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 3,6 (s, 3H), 2,8 (m, IH), 2,4 (m, IH). NC I

3-[9-(8-Fluoro) -cromano-4-ila)-7-metila-8-oxo-

8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila] -3H-benzo-imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38 . 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (d, 2H), 8,2 (s, IH) , 7,8 (d, IH), 7,6 (d, IH) , 7,0 (t, IH) , 6,6 (m, 2H) , 5,9 (t, IH) , 4,6 (m, IH), 4,4 (m, IH), 3,6 (s, 3H), 2,8 (m, IH), 2,4 (m, IH).

3-(9-((R)-6-fluoro)cromano-4-ila)-7-metila-8-oxo-

8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) : δ 8, 90 (s, IH) , 8,52 (s, IH) , 8,21 (s, IH) , 7, 84 (d, IH) , 7,59 (d, IH) , 7, 1-7,2 (m, IH) , 6,9-7,0 (m, IH), 6,59 (dd, IH), 5,89 (br t, IH) , 4, 5-4, 6 (m, IH) , 4,34 (br t, IH) , 3,59 (s , 3H) , 2 , 8-2 , 9 (m, IH) , 2, 3-2,4 (m, IH) . 3-(9- ( (R)-7-fluorocromano-4-ila)-7-metiIa-8-oxo- 8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) : δ 8,90 (s, IH) , 10

15

8,62 (s, 1Η) , 8,19 (s, IH)', 7,84 (d, 1Η) , 7,59 (d, 1Η) , 6,8-7,0 (m, 2H) , 6, 4-6, 6 (m, IH) , 5,86 (br t, IH) , 4, 5-4, 6 (m, IH) , 4,36 (br t, IH) , 3,59 (s, 3H) , 2, 8-2, 9 (m, IH) , 2,3-2, 4 (m, IH) .

NO \

3- (9- ( (R)-6,8-difluorocromano-4-ila)-7-metila-8- oxo-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5- carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,9 (s, IH), 8,8 (s, IH) , 8,2 (s, IH) , 7,9 (d, IH) , 7,6 (dd, IH) , 6,8 (td, IH) , 6,4 (dd, IH) , 5,9 (dd, IH) , 4,7 (m, IH) , 4,4 (td, IH) , 3,6 (s, 3H) ,

3,0 (m, IH), 2,4 (m, IH).

ϊΛ-°

3-(9-(5,8-difluorocromano-4-ila)-7-metila-8-oxo-

8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo-imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, IH) , 8,7 (s, IH) , 8,2 (s, IH), 7,8 (d, IH) , 7,6 (d, IH) , 7,0 (m, IH) , 6,5 (m, IH), 5,9 (t, IH) , 4,5 (m, 2H), 3,5 (s, 3H), 2,5 (m, 2H) . 3-[7-etila-9-(8-fluorocromano-4-ila)-8-oxo-8,9- di-hidro-7H-purina-2-ila] -3H-benzo-imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método

descrito no exemplo 38 usando iodo-etano . 1H- -NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,8 (s, 2H) , 8,2 (s , IH), 7,9 (d, IH), 7,6 (d, IH) , 7,0 (t, IH) , 6,7 (m, 2H) , 5,9 (t , IH), 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH) , 4,0 (q, 2H), 2,9 (m, IH) , 2,4 (m, IH), 1,4 (t, 3H). 3-(7-etila-9-((R)-7-fluorocromano-4-ila)-8-oxo- 8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método

descrito no exemplo 38 usando iodo-etano. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,88 (s, IH) , 8,62 (s, IH) , 8,21 (s, IH) , 7,84 (d, IH) , 7,59 (d, IH) , 6, 8-7,0 (m, 2H) , 6, 4-6, 6 (m, IH) , 5,86 (br t, IH) , 4, 5-4, 6 (m, IH) , 4,36 (br t, IH) , 4,0-4,1 (m, 2H) , 2, 8-2, 9 (m, IH) , 2,3- 2,4 (m, IH), 1,48 (t, 3H).

NO 3- (9-( (R)-6,8-difluorocromano-4-ila)-7-etila-8- oxo-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5- carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38 usando iodo-etano. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ

8,9 (s, IH) , 8,8 (s, IH), 8,2 (s, IH) , 7,9 (d, IH) , 7,6 (dd, IH) ,

6,8 (td, IH) , 6,4 (dd, IH) , 5,9 (dd, IH) , 4,7 (m, IH) , 4,4 (td, IH) , 4,1 (q, 2H) , 3,0 (m, IH) , 2,4 (m, IH) , 1,5 (t, 3H) .

10

15

20

3- (9- (5,8-difluorocromano-4-ila)-7-etila-8-oxo-

8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo-imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38 usando iodo-etano. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ

8,8 (s, IH) , 8,7 (s, IH) , 8,2 (s, IH) , 7,9 (d, IH) , 7,6 (d, IH) ,

7.0 (m, IH) , 6,4 (m, IH) , 5,9 (t, IH) , 4,6 (m, IH) , 4,4 (m, IH) ,

4.0 (q, 2H), 2,5 (m, 2H), 1,4 (t, 3H).

NC

3-[9-(5,8-Difluorocromano-4-ila)-7-isobutila-8- oxo-8,9-di-hidro-7H-purina-2-ila]-3H-benzo-imidazola-5- carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38 usando isobutila iodida. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,9 (s, IH) , 8,8 (s, IH) , 8,2 (s, IH) , 7,9 (d, IH) , 7,6 d, IH), 7,1 (m, IH) , 6, 5 (m, IH) , 5,9 (t, i---I (m, IH) , 4,4 m, IH), 3,8 (q, 2H) , 2,7 (m, IH) , 2,5 (m, IH), 2,3 (q, IH), 1,0 s, 6H) . 3-(7-benzila-8-oxo-9-(tetra-hidro-2H-pirano-4- 5 ila] -8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H-benzo [d] imidazola-5- carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 38 usando brometo de benzila. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9,30 (s, IH) , 9,01 (m, IH) , 8,23 (s, IH) , 7,89 (m, IH) , 7, 66 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, IH) , 7, 40-7, 32 (m, 5H) , 5,16 (s, 2H) , 4,75 (m, IH) , 4,18 (m, 2H) , 3,63 (m, 2H) , 2,81 (m, 2H) , 1,90 (m, 2H) .

NC \ ^OH

3-(9-(6,8-difluorocromano-4-ila)-7-(3- hidróxipropila) -8-oxo-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H- benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 40 usando 3-iodopropanol. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,92 (s, IH) , 8,77 (m, IH) , 8,38 (s, IH) , 7,90 (d, J=8,4 Hz, IH) , 7,62 (dd, J = 8,4, 1,5 Hz, IH) , 6,83 (m, IH) , 6,38 (m, IH) , 5,88 (m, IH) , 4,67 (m, IH) , 4,41 (m, IH) , 4,19 (t, J = 6,5 Hz, 2Η) , 3,74 (t, J = 5,6 Hz, 2Η) , 2,93 (m, 1Η) , 2,40 (m, 1Η) ,

2,08 (m, 2Η).

'νΛ

3-(7-(2-(dietilamina)etila)-9-((R)-T- f luorocromano -4-ila) -8-oxo-8 , 9-di-hidro-7H-purina-2-ila) -3H- benzo[d]imidazola-5-carbonitrilo

Este composto foi sintetizado pelo método descrito no exemplo 41 usando 2-cloro-N,N-dietiletilamina hidroclorida. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8,91 (s, IH) , 8,64 (s, IH) , 8,28 (s, IH) , 7,84 (d, IH) , 7,59 (d, IH) , 6, 8-7,0 (m, 2H) , 10 6, 4-6, 6 (m, IH) , 5,86 (br t, IH) , 4,5-4, 7 (m, IH) , 4, 3-4, 4 (m, IH) , 4, 0-4,1 (m, 2H) , 2, 8-3,0 (m, 3H) , 2,58 (q, 4H) , 2, 3-2, 4 (m, IH), 0,96 (t, 6H).

Ensaio de quinase de Jak3

c DNA de Jak3 humano foi amplificado por RCP 15 (reação em cadeia de polimerase). Um fragmento codificador do domínio catalítico de Jak3 (508aa até 1124aa) foi ligado com GST (glutationa-S-transferase) na extremidade 5'. Este fragmento de DNA GST-Jak3 fundido foi clonado no local de EcoRI da plasmida pFastBac 1 (Life Technologies #10359-016) do doador. A 20 transformação, transposição e transfecção de células de inseto (Sf9) foram executadas de acordo com as instruções de fabricação. O lisado de célula contendo GST-Jak3 recombinante foi usado no ensaio de quinase. Anticorpos anti-GST (10 μg/mL, Sigma #G1417) foram colocados em uma placa com 384 recipientes, a 4 °C, de um 25 dia para o outro. 0 lisado de célula contendo GST-Jak3 (diluição de 1:100) foi acrescentado às placas recobertas com anti-GST e o GST-Jak3 foi capturado por anticorpos anti-GST imobilizados. Os compostos de teste e a mistura de substrato (50 mM HEPES, pH=7, 0,5 mM de Na3VO4, 25 mM de MgCl2, I mM de DTT, 0,005% de BSA, 1 μπι de ATP e 4,5 μg/ml de biotinila poli-Glu,Ala,Tir) foram adicionados à placa para iniciar a reação. Depois de uma incubação de 60 min, a reação foi parada por 4 mM de EDTA e a fosforilação de biotinila poli-Glu,Ala,Tir foi detectada usando 17 μg/ml de 5 Cy5-estreptavidina (Amersham, #PA92005) e 2,7 μg/ml de anticorpos anti-fosfotirosina conjugados a Európio (PerkinElmer #AD0069), usando tecnologia de fluorescência de tempo resolvido homogênea (FTRH).

Ensaio celular de Jak3

A linhagem de células de linfócitos F7 pré-B de

rato foi usada para o ensaio celular de Jak3. O cDNA IL-2RPc humano é estavelmente expressado em células F7 (Kawahara et al., 1995) . As células F7 foram mantidas em um meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro bovino fetal mais IL-3. As células 15 (30.000 células/recipiente) em meio livre de soro foram semeadas em placas de 96 recipientes para o ensaio de proliferação de célula. Os compostos de teste foram acrescentados às células, seguido pela adição de IL-2 (20 ng/ml final) . Depois de uma incubação de 24 h o número de células viáveis foi determinado pelo 20 equipamento de Ensaio Luminescente de Viabilidade de Célula CellTiter-Glo (Promega, #G7573) de acordo com as instruções do fabricante.

Os resultados dos testes de espécies representativas são mostrados abaixo. Os compostos na Tabela 1 exibiram IC50 menor que 100 nM. Os compostos na Tabela 1 exibiram IC50 entre 101 nM e 1 μπι. Exemplo de Sintese

N0 de Referência

504

505

CN

506 Exemplo de Sintese

N0 de Referência

Exemplo

40

522

523

Exemplo

39

524

OCH3 HO Tabela I

Produção de IFN-γ induzida por IL-2 no rato

A administração de IL-2 conduz a um aumento de soro de IFN-γ no rato, devido à secreção AN (assassina natural) da citocina [Thornton S., Kuhn K.A., Finkelman F. D. e Hirsch R., "Células AN segregam altos niveis de IFN-γ em resposta à administração In vivo de IL-2" (NK cells secrete high leveis of IFN-γ in response to in vivo admínistration of IL-2), Eur. J. Immunol2001 31:3355-3360]. A experiência foi executada essencialmente de acordo com o protocolo em Thornton et al. e os compostos de teste foram administrados para determinar o nivel de inibição atingido. Em resumo, ratos fêmeas BALB/c sofreram jejum durante 12-18 horas antes de um estudo, mas tiveram livre acesso à água em todos os momentos. Os compostos de teste foram administrados através de gavagem uma hora antes da injeção intraperitoneal de IL-2 e anticorpos de captura. No término dos estudos, os ratos foram sacrificados por inalação de dióxido de carbono, as amostras de sangue terminal foram coletadas por punção cardíaca e o soro foi gerado. O soro foi armazenado congelado até ser analisado para IFN-γ, conforme descrito pelo fabricante do equipamento (BD Farmingen®, San Diego, CA).

Usando o método acima, os compostos dos exemplos experimentais 16, 28 e os exemplos 501, 504 e 505 da Tabela 1, a mg/kg, demonstraram inibir a produção de IFN-γ induzida por IL- 2 em mais de 40% in vivo, no rato. Um composto de referência, CP690550, exibiu inibição de 96% a 30 mg/kg nesta tela.

As purinonas 7-substituídas exibiram seletividade aumentada para Jak3, comparado aos seus congêneres não-7- substituídos.

O ensaio de quinase Aurora A foi executado usando

um formato de polarização de fluorescência. Uma solução de 100 mM de FAM PKAtide rotulada por fluorescência (Molecular Devices), o substrato para Aurora A (Upstate Biotechnologies), foi incubada com Aurora A (80 ng/ml) e 30 mM de ATP à temperatura ambiente 35 durante 1 hora, na presença de uma concentração apropriada de um inibidor de teste. A reação foi terminada pela adição de uma mistura de Reagente de Ligação Progressiva IMAP, de acordo com as instruções do fabricante (Molecular Devices). O sinal de polarização foi detectado usando Aquest (Molecular Devices).

abaixo. À esquerda estão os compostos não-7-substituídos e sua taxa de Jak3 para inibição de Aurora A, dada como seletividade de "x-vezes". À direita são mostrados os congêneres 7-substituídos junto com sua seletividade. Todos os IC50 para Jak3 estão abaixo de 100 nM.

Alguns exemplos comparativos são mostrados

NAO-7-SUBSTITUÍDOS

7-SUBSTITUÍDOS

112 vezes

H

1

14 vezes

58 vezes

CH3

NC

^ N vezes H

47 vezes

58 vezes ΝΑΟ-7-SUBSTITUÍDOS

7-SUBSTITUÍDOS

13 vezes

H

/

NC

j \

1S2 vezes CHs p r-O Í

'■ O r~\J

rVNYNy N F

\=/ I sl >=o

ISlC

Et

I40vezes_.o Γ

Γ v=<

NC

N

178 vezes

CPytó-o

f. >

/ NC

V

11 vezes

,O OH

\_/~~OH

200 vezes ΝΑΟ-7-SUBSTITUÍDOS

7-StJBST ITUIDOS

238 vezes GH3

(Hv F

V=' >=0

NC!

Et

123 vezes

NC

f

V^N(CH3)2 724 vezes

Embora a invenção, acima tenha sido descrita, em alguns detalhes, com o propósito de ilustração, será prontamente visível aos especialistas na área que mudanças e modificações podem ser feitas sem fugir do escopo da invenção aqui descrita.

Claims (44)

1. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA, PARA IMUNOSSUPRESSÃO", caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula III: <formula>formula see original document page 124</formula> em que Q1 e Q2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em CXi, CX2 e nitrogênio, em que Q1 e Q2 não são ambos nitrogênio; Q3 é N ou CH; Xi e X2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ciano, halo, halo (C1-C6) alquila, hidroxila, (C1-C6Jalcoxi; halo (C1-C6) alcóxi e nitro; R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila; y é zero ou um inteiro selecionado de 1, 2 e 3; R2 e R3 são selecionados independentemente para cada ocorrência de (CR2R3) , do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila; R4 é selecionado de um grupo que consiste em alquila, heterociclila, arila, hetero-arila, alquila substituída, heterociclila substituída, arila substituída, hetero-arila substituída; e R5 é selecionado do grupo que consiste em alquila, heterociclila, heterociclila substituída e C1-C6 alquila, em que (a) um ou dois CH2 são substituídos por um grupo escolhido de NH e N(alquila); (b) um ou dois CH2 são substituídos por O; (c) um ou dois CH2 são substituídos por (C=O) ; (d) dois CH2 são substituídos por CH=CH ou C=C; ou (e) qualquer combinação quimicamente estável de (a), (b) (c) e (d) ; e em que de zero até três hidrogênios são substituídos por um substituinte escolhido de: (a) halogênio, hidróxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino, alcóxi inferior; (b) heterociclila e heterociclila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila; (c) fenila e fenila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila, acilamino, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila, halo-alquila e heterociclila; e (d) hetero-arila e hetero-arila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila.

2. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula:

3. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 2, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 126</formula>

4. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 2, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 126</formula>

5. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 126</formula>

6. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 5, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 127</formula>

7. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUIDA" de acordo com a reivindicação 5, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 127</formula>

8. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUIDA" de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 127</formula>

9. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUIDA" de acordo com a reivindicação 8, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 128</formula>

10. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 8, caracterizados pelo fato de compreenderem um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 128</formula>

11. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizados pelo fato de que Xi e X2 são independentemente selecionados de hidrogênio, ciano, cloro, flúor, metila, trifluorometila e trifluorometóxi.

12. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizados pelo fato de que R1 é H.

13. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizados pelo fato de que, y é 1 ou 2 e R2 e R3 são hidrogênio ou metila.

14. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 13, caracterizados pelo fato de que R4 é selecionado de fenila, quinolina, piridina, pirazina e suas contrapartes substituídas.

15. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizados pelo fato de que y é zero.

16. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 15, caracterizados pelo fato de que R4 é selecionado de ciclopentila, ciclo-hexila, fenila, indano, tetralina, piperidina, oxepano, benzoxepano di- hidrociclopentapiridina, tetra-hidropirano, tetra-hidrofurano, tetra-hidro-indola, isoquinolina, tetra-hidro-isoquinolina, quinolina, tetra-hidroquinolina, cromano, piridina, pirimidina, di-hidropirano, di-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzotiofeno, furano, di-hidropirano[2,3-b]piridina, tetra-hidroquinoxalina, tetra-hidrotiopirano (tiano), tiocromano (di-hidrobenzotiína) e suas contrapartes substituídas.

17. "DERIVADOS DE PtTRINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizados pelo fato de que (a) y é zero e R4 é selecionado de ciclo-hexila, tetralina, indano, oxepano, benzoxepano, di- hidrociclopentapiridina, tetra-hidropirano, tetra-hidroquinolina, cromano, di-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzofurano, di- hidropirano [ 2,3-b]piridina e tetra-hidroquinoxalina, cada um opcionalmente substituído com hidróxi, oxo, ou halogênio; ou (b) y é 1 ou 2, R2 e R3 são hidrogênio ou metila e R4 é selecionado de fenila, piridina e pirazina, cada um opcionalmente substituído com halogênio.

18. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 17, caracterizados pelo fato de que y é 0 e R4 é escolhido de cromano-4-ila; 3,4-di-hidronaftaleno-1(2H)- ona-4-ila; 2,3-di-hidro-indeno-l-ona-4-ila e o suas contrapartes substituídas com flúor.

19. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 18, caracterizados pelo fato de que R4 é cromano-4-ila e o carbono na posição 4 do cromano é da configuração (R).

20. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 17, caracterizados pelo fato de que y é 0 e R4 é: <formula>formula see original document page 130</formula> em que W é CH2, C=O ou O; p é 1, 2 ou 3; A é um anel hetero-aromático de seis membros, contendo 1 ou 2 nitrogênios ou um anel de benzeno opcionalmente substituído com uma ou duas fluorinas; e a linha ondulada é o ponto de fixação à purinona.

21. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 20, caracterizados pelo fato de que o carbono marcado com um asterisco <formula>formula see original document page 130</formula> é da configuração (R).

22. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 17, caracterizados pelo fato de que y é I e R4 é selecionado de difluorofenila, fluorofenila, clorofenila, clorofluorofenila, piridina-3-ila e pirazina-3-ila.

23. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 17, caracterizados pelo fato de que y é zero e R4 é selecionado de tetra-hidropirano-4-ila, 4-hidróxi- ciclo-hexila, 4-oxociclo-hexila e oxepano-4-ila.

24. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 10, caracterizados pelo fato de que X1 e X2 são selecionados independentemente de hidrogênio, ciano, cloro e flúor e Ri é H.

25. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 24, caracterizados pelo fato de que (a) y é zero e R4 é selecionado de ciclo-hexila, tetralina, indano, oxepano, benzoxepano, di- hidrociclopentapiridina, tetra-hidropirano, tetra-hidroquinolina, cromano, di-hidrobenzofurano, tetra-hidrobenzofurano, di- hidropirano [2, 3-b] piridina e tetra-hidroquinoxalina, cada um opcionalmente substituído com hidróxi, oxo, ou halogênio; ou (b) y é 1 ou 2, R2 e R3 são hidrogênio ou metila e R4 é selecionado de fenila, piridina e pirazina, cada um opcionalmente substituído com halogênio.

26. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 25, caracterizados pelo fato de que R5 é Ci-C6 alquila, em que (a) um ou dois CH2 são substituídos por um grupo escolhido de NH e N(alquila); (b) um ou dois CH2 são substituídos por O; (c) um ou dois CH2 são substituídos por (C=O); (d) dois CH2 são substituídos por CH=CH ou C=C; ou (e) qualquer combinação quimicamente estável de (a) , (b) (c) e (d) ; e em que de zero até três hidrogênios são substituídos por um substituinte escolhido de: (a) halogênio, hidróxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, di-alquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino, alcóxi inferior; (b) heterociclila e heterociclila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila; (c) fenila e fenila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila, acilamino, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila, halo-alquila e heterociclila; e (d) hetero-arila e hetero-arila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila.

27. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 26, caracterizados pelo fato de que y é0 e R4 é <formula>formula see original document page 132</formula> em que o carbono marcado com um asterisco é da configuração (R); W é CH2, C=O ou 0; p é 1, 2 ou 3; A é um anel hetero-aromático de seis membros contendo 1 ou 2 nitrogênios ou um anel de benzeno opcionalmente substituído com uma ou duas fluorinas; e a linha ondulada é o ponto de fixação à purinona.

28. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 27, caracterizados pelo fato de que Xi é hidrogênio, X2 é um substituinte na posição 6 da benzimidazola e X2 é escolhido de hidrogênio, flúor e ciano.

29. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizados pelo fato de que R5 é Ci-C6 alquila ou C1-C6 fluoro- alquila.

30, "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 29, caracterizados pelo fato de que y é0 e R4 é <formula>formula see original document page 132</formula> em que o carbono marcado com um asterisco é da configuração (R); W é CH2, C=O ou 0; p é I, 2 ou 3; A é um anel hetero-aromático de seis membros contendo 1 ou 2 nitrogênios ou um anel de benzeno opcionalmente substituído com uma ou duas fluorinas; e a linha ondulada é o ponto de fixação à purinona.

31. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizados pelo fato de que R5 é Ci-C6 alquila e em que de zero até três hidrogênios são substituídos por um substituinte escolhidode: hidróxi, carbóxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, di- alquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino e alcóxi inferior.

32. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 31, caracterizados pelo fato de que y é 0 e R4 é <formula>formula see original document page 133</formula> em que o carbono marcado com um asterisco é da configuração (R); W é CH2, C=O ou 0; p é 1, 2 ou 3; A é um anel hetero-aromático de seis membros contendo 1 ou 2 nitrogênios ou um anel de benzeno opcionalmente substituído com uma ou duas fluorinas; e a linha ondulada é o ponto de fixação à purinona.

33. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ,12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ,28, 29, 30, 31 ou 32, caracterizados pelo fato de compreenderem uma composição farmacêutica incluindo um carreador farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 32.

34. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA, PARA IMUNOSSUPRESSÃO", caracterizados pelo fato de compreenderem um método para tratar um distúrbio que é dependente de inibição de quinase de Janus 3, o qual compreende administrar a um indivíduo em carência de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a fórmula III: <formula>formula see original document page 134</formula> em que Q1 e Q2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em CX1, CX2 e nitrogênio, em que Q1 e Q2 não são ambos nitrogênio; Q3 é N ou CH; X1 e X2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C6) alquila, ciano, halo, halo (C1-C6) alquila, hidroxila, (C1-C6Jalcoxi; halo (C1-C6) alcóxi e nitro; R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila; y é zero ou um inteiro selecionado de 1, 2 e 3; R2 e R3 são selecionados independentemente para cada ocorrência de (CR2R3) , do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila; R4 é selecionado de um grupo que consiste em alquila, heterociclila, arila, hetero-arila, alquila substituída, heterociclila substituída, arila substituída, hetero-arila substituída; e R5 é selecionado do grupo que consiste em alquila, heterociclila, heterociclila substituída e Ci-C6 alquila, em que (a) um ou dois CH2 são substituídos por um grupo escolhido de NH e N(alquila); (b) um ou dois CH2 são substituídos por 0; (c) um ou dois CH2 são substituídos por (C=O) ; (d) dois CH2 são substituídos por CH=CH ou C=C; ou (e) qualquer combinação quimicamente estável de (a) , (b) (c) e (d) ; e em que de zero até três hidrogênios são substituídos por um substituinte escolhido de: (a) halogênio, hidróxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino, alcóxi inferior; (b) heterociclila e heterociclila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila; (c) fenila e fenila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila, acilamino, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila, halo-alquila e heterociclila; e (d) hetero-arila e hetero-arila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila.

35. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA, PARA IMUNOSSUPRESSÃO", caracterizados pelo fato de compreenderem um método para tratar um distúrbio que é dependente de inibição de quinase de Janus 3, o qual compreende administrar a um indivíduo em carência de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a fórmula III: <formula>formula see original document page 136</formula> em que Q1 e Q2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em CXi, CX2 e nitrogênio, em que Qi e Q2 não são ambos nitrogênio; Q3 é N ou CH; X1 e X2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em hidrogênio, ciano, cloro e flúor; R1 é hidrogênio; y é zero, ou um inteiro selecionado de 1, 2 e 3; R2 e R3 são selecionados independentemente para cada ocorrência de (CR2R3) do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila; R4 é selecionado de um grupo que consiste em alquila, heterociclila, arila, hetero-arila, alquila substituída, heterociclila substituída, arila substituída, hetero-arila substituída; e R5 é selecionado do grupo que consiste em alquila, heterociclila, heterociclila substituída e C1-C6 alquila, em que (a) um ou dois CH2 são substituídos por um grupo escolhido de NH e N(alquila); (b) um ou dois CH2 são substituídos por O; (c) um ou dois CH2 são substituídos por (C=O) ; (d) dois CH2 são substituídos por CH=CH ou C=C; ou (e) qualquer combinação quimicamente estável de (a) , (b) (c) e (d) ; e em que de zero até três hidrogênios são substituídos por um substituinte escolhido de: (a) halogênio, hidróxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino, alcóxi inferior; (b) heterociclila e heterociclila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila; (c) fenila e fenila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila, acilamino, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila, halo-alquila e heterociclila; e (d) hetero-arila e hetero-arila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila.

36. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 34 ou 35, caracterizados pelo fato de que o dito distúrbio é selecionado de uma doença auto-imune, uma doença inflamatória, uma doença mediada por mastócitos, uma malignidade hematológica e rejeição de transplante de órgãos.

37. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 36, caracterizados pelo fato de que o dito distúrbio é rejeição de transplante de medula óssea.

38. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 36, caracterizados pelo fato de que a dita malignidade hematológica é selecionada de leucemia e Iinfoma.

39. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 36, caracterizados pelo fato de que o dito distúrbio é asma.

40. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 36, caracterizados pelo fato de que a dita doença auto-imune é selecionada de uma doença auto-imune específica, para um órgão específico e para um não-órgão.

41. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 36, caracterizados pelo fato de que o dito distúrbio é ceratoconjuntivite sicca.

42. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com a reivindicação 36, caracterizados pelo fato de que a dita malignidade hematológica é leucemia mielógena crônica.

43. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA", de acordo com as reivindicações 34 ou 35, caracterizados pelo fato de que o dito distúrbio é selecionado a partir de uma forma leucêmica de Iinfoma cutâneo de células-T e leucemia linfoblástica aguda.

44. "DERIVADOS DE PURINA 7-SUBSTITUÍDA, PARA IMUNOS SUPRE S SÃO", caracterizados pelo fato de compreenderem um método para tratar um distúrbio selecionado de uma doença auto- imune, uma doença inflamatória, uma doença mediada por mastócitos, uma malignidade hematológica e rejeição de transplante de órgãos, compreendendo administrar a um indivíduo em carência de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a fórmula III <formula>formula see original document page 138</formula> em que Qi e Q2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em CXi, CX2 e nitrogênio; em que Qi e Q2 não são ambos nitrogênio; Q3 é N ou CH; Xi e X2 são selecionados independentemente do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-C6) alquila, ciano, halo, halo (C1-C6) alquila, hidroxila, (C1-C6) alcóxi; halo (C1-C6) alcóxi e nitro; R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila; y é zero ou um inteiro selecionado de 1, 2 e 3; R2 e R3 são selecionados independentemente para cada ocorrência de (CR2R3) , do grupo que consiste em hidrogênio e (C1-C6) alquila; R4 é selecionado de um grupo que consiste em alquila, heterociclila, arila, hetero-arila, alquila substituída, heterociclila substituída, arila substituída, hetero-arila substituída; e R5 é selecionado do grupo que consiste em alquila, heterociclila, heterociclila substituída e C1-C6 alquila, em que (a) um ou dois CH2 são substituídos por um grupo escolhido de NH e N(alquila); (b) um ou dois CH2 são substituídos por O; (c) um ou dois CH2 são substituídos por (C=O) ; (d) dois CH2 são substituídos por CH=CH ou C=C; ou (e) qualquer combinação quimicamente estável de (a) , (b) (c) e (d) ; e em que de zero até três hidrogênios são substituídos por um substituinte escolhido de: (a) halogênio, hidróxi, ciano, alquilsulfonila inferior, alquilsulfonilóxi inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, alcóxi-amino, sulfonilamino, acilamino, arilamino, alcóxi inferior; (b) heterociclila e heterociclila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila; (c) fenila e fenila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila, acilamino, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila, halo-alquila e heterociclila; e (d) hetero-arila e hetero-arila substituída com um até três substituintes escolhidos de halogênio, hidróxi, alcóxi, alquila e alcoxicarbonila.