BR122020012255B1 - Uso de um anticorpo anti-il-13, usos de um inibidor da via de th2 e anticorpos anti-periostina - Google Patents

Uso de um anticorpo anti-il-13, usos de um inibidor da via de th2 e anticorpos anti-periostina Download PDF

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Abstract

São fornecidos métodos diagnósticos e tratamento de distúrbios relativos à inibição de TH2, incluindo, mas sem limitações, asma. Também são fornecidos métodos de seleção ou identificação de pacientes para tratamento com certos agentes terapêuticos que são inibidores da Via de TH2.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] O presente pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido Provisório Norte-Americano n° 61/459.760, depositado em 16 de dezembro de 2010, do Pedido Provisório Norte-Americano n° 61/465.425, depositado em 18 de março de 2011, do Pedido Provisório Norte-Americano n° 61/484.650, depositado em 10 de maio de 2011, do Pedido Provisório Norte- Americano n° 61/574.485, depositado em dois de agosto de 2011, e do Pedido Provisório Norte-Americano n° 61/557.295, depositado em oito de novembro de 2011, todos os quais são integralmente incorporados ao presente como referência.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi submetida em formato ASCII por meio de EFS-Web e é integralmente incorporada ao presente como referência. A mencionada cópia ASCII, criada em 17 de novembro de 2011, é denominada P4569R1WO_PCTSequenceListing.txt e seu tamanho é de 73.118 bytes.
CAMPO DA INVENÇÃO
[003] São fornecidos métodos diagnósticos e tratamento de distúrbios relativos à inibição de TH2, incluindo, mas sem limitações, asma. Também são fornecidos métodos de seleção ou identificação de pacientes para tratamento com certos agentes terapêuticos que são inibidores da via de TH2.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[004] Asma é uma doença complexa com incidência crescente em todo o mundo. Entre outros eventos, relatou-se inflamação eosinofílica nas vias aéreas de pacientes com asma. A patofisiologia da doença é caracterizada por obstrução do fluxo aéreo variável, inflamação das vias aéreas, hipersecreção de muco e fibrose subepitelial. Clinicamente, os pacientes podem apresentar tosse, espirros e respiração curta. Embora muitos pacientes sejam tratados adequadamente com terapias disponíveis atualmente, alguns pacientes com asma apresentam doença persistente, apesar do uso das terapias atuais.
[005] Existe uma série de drogas no mercado ou em desenvolvimento para o tratamento de asma. Um dos diversos alvos da terapia de asma é IL-13. IL-13 é uma citocina TH2 pleiotrópica produzida por células T ativadas, células NKT, basófilos, eosinófilos e células mastro e foi fortemente relacionada à patogênese de asma em modelos pré-clínicos. Apesar das muitas ligações entre IL-13, IL-4 e asma na literatura, muitas terapias com antagonistas de IL13 e/ou IL4 apresentaram resultados decepcionantes em uso clínico. Atualmente, nenhuma terapia com antagonista IL-3 ou IL-4 foi aprovada para uso em asma. Além disso, pacientes com asma moderada a severa continuam a perder boas opções de tratamento alternativo. Existe, portanto, a necessidade de identificar terapias melhores de tratamento de asma e métodos aprimorados de compreensão de como tratar pacientes com asma.
[006] Todas as referências mencionadas no presente, incluindo pedidos de patentes e publicações, são integralmente incorporadas como referência para todos os propósitos.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
[007] O presente pedido fornece agentes terapêuticos para inibição da via de TH2 e melhores métodos de sua utilização. O presente pedido também fornece métodos melhores de diagnóstico de doenças para uso no tratamento da doença, opcionalmene com o inibidor da via de TH2.
[008] Os métodos de tratamento e diagnóstico fornecidos no presente podem ser aplicados a pacientes que sofrem de asma, distúrbios eosinofílicos, distúrbios respiratórios, distúrbios mediados por IL-13 e/ou distúrbios mediados por IgE, ou sintomas relativos a esses distúrbios. Pacientes que sofrem de sintomas similares a asma incluem pacientes que não foram diagnosticados com asma, mas que podem ser tratados de acordo com os métodos fornecidos no presente.
[009] Segundo uma realização, um paciente tratado de acordo com os métodos fornecidos no presente sofre de asma, distúrbios eosinofílicos, distúrbios respiratórios, distúrbios mediados por IL-13 e/ou distúrbios mediados por IgE ou sintomas relativos a essas doenças e não é portador de câncer nem de neoplasma. Segundo uma outra realização, o paciente tratado de acordo com os métodos fornecidos no presente sofre de asma, distúrbios eosinofílicos, distúrbios respiratórios, distúrbios mediados por IL-13 e/ou distúrbios mediados por IgE ou sintomas relativos a esses distúrbios e tem 12 anos de idade ou mais, 18 anos de idade ou mais, 19 anos de idade ou mais, 12 a 17 anos de idade ou 18 a 75 anos de idade.
[010] Em uma realização, pacientes tratados com um inibidor da via de TH2 de acordo com a presente invenção também são tratados com um, dois, três ou mais agentes terapêuticos. Em uma realização, o paciente é um paciente com asma. Segundo uma realização, o paciente é tratado com o inibidor da via de TH2 e um, dois, três ou mais agentes terapêuticos, em que pelo menos um agente terapêutico diferente do inibidor de TH2 é um corticosteroide, antagonista de leucotrieno, LABA, composição de combinação de corticosteroide e LABA, teofilina, cromolina sódio, nedocromil sódio, omalizumab, LAMA, MABA, inibidor de proteína de ativação de 5-lipoxigenase (FLAP) ou um inibidor de enzima PDE-4. Segundo um aspecto da presente invenção, é administrado um inibidor da via de TH2 a um paciente com asma diagnosticado como estado EIP, em que o diagnóstico compreende o uso de um teste de EID (isoladamente ou em combinação com outros testes) para determinar o estado de EIP. Em uma realização adicional, o paciente com asma encontra-se não controlado com corticosteroide antes do tratamento. Em outra realização, o paciente com asma também está sendo tratado com um segundo controlador. Em uma realização, o segundo controlador é um corticosteroide, LABA ou antagonista de leucotrieno. Em uma realização adicional, o paciente com asma sofre de asma moderada a severa. Desta forma, em uma realização, o paciente a ser tratado com o inibidor da via de TH2 é um paciente com asma moderada a severa que se encontra não controlado em corticosteroide antes do tratamento com o inibidor da via de TH2 e é tratado em seguida com o inibidor da via de TH2 e um, dois, três ou mais controladores. Em uma realização, pelo menos um dos controladores é um corticosteroide. Em uma realização adicional, esse paciente é tratado com um inibidor da via de TH2, corticosteroide e outro controlador. Em outra realização, o paciente sofre de asma suave, mas não é tratado com corticosteroide. Dever-se-á compreender que os agentes terapêuticos podem possuir diferentes ciclos de tratamento em comparação com o inibidor de TH2 e, consequentemente, podem ser administrados em tempos diferentes em comparação com o inibidor de TH2, como parte do tratamento do paciente. Segundo uma realização, portanto, os métodos de tratamento de acordo com a presente invenção compreendem as etapas de administração ao paciente de um inibidor da via de TH2 e, opcionalmente, administração de pelo menos um, dois ou três agentes terapêuticos adicionais. Em uma realização, o inibidor da via de TH2 está presente em composição com outro agente terapêutico. Em uma outra realização, o inibidor da via de TH2 não está presente em composição com outro agente terapêutico.
[011] Segundo outra realização, a presente invenção compreende um método de tratamento de asma que compreende a administração de anticorpo anti-IL-13 que compreende VH que compreende SEQ ID NO: 9 e VL que compreende SEQ ID NO: 10 ou um anticorpo anti-IL- 13 que compreende HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 como dose plana. Em uma realização, um anticorpo anti-IL-13 que compreende VH que compreende SEQ ID NO: 9 e VL que compreende SEQ ID NO: 10 é administrado como uma dose plana de 125 a 1000 mg (ou seja, não dependente de peso), por meio de injeção subcutânea ou de injeção intravenosa, em frequência selecionada a partir de: a cada duas semanas, a cada três semanas e a cada quatro semanas. Em uma realização, um anticorpo anti-IL-13 que compreende HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 é administrado como uma dose plana de 125 a 1000 mg (ou seja, não dependente de peso), por meio de injeção subcutânea ou de injeção intravenosa, em frequência selecionada a partir de: a cada duas semanas, a cada três semanas e a cada quatro semanas. Em uma realização, o anticorpo anti-IL-13 é lebrikizumab, que é administrado como uma dose plana de 125 a 1000 mg (ou seja, não dependente de peso), por meio de injeção subcutânea ou de injeção intravenosa, em frequência selecionada a partir de: a cada duas semanas, a cada três semanas e a cada quatro semanas. Em uma outra realização, o paciente é diagnosticado com estado de EIP utilizando um Teste de Periostina Total para determinar o estado de EIP.
[012] Segundo uma outra realização, um anticorpo que compreende VH que compreende SEQ ID NO: 9 e VL que compreende SEQ ID NO: 10 é administrado para tratar asma em quantidade terapeuticamente eficaz suficiente para reduzir a taxa de agravamentos do paciente ao longo do tempo ou aprimorar FEV1. Em ainda outra realização, a presente invenção compreende um método de tratamento de asma que compreende a administração de anticorpo anti-IL-13 que compreende VH que compreende SEQ ID NO: 9 e VL que compreende SEQ ID NO: 10 ou um anticorpo anti-IL- 13 que compreende HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 na forma de dose plana (ou seja, não dependente do peso) de 37,5 mg ou dose plana de 125 mg, ou dose plana de 250 mg. Em certas realizações, a dose é administrada por meio de injeção subcutânea uma vez a cada quatro semanas por um período de tempo. Em certas realizações, o período de tempo é de seis meses, um ano, dois anos, cinco anos, dez anos, quinze anos, vinte anos ou por toda a vida do paciente. Em certas realizações, a asma é asma severa e o paciente é não controlado ou controlado inadequadamente com corticosteroides inalados mais uma segunda medicação de controle. Em uma outra realização, o paciente é diagnosticado com estado de EIP utilizando um Teste de Periostina Total para determinar o estado de EIP e o paciente é selecionado para tratamento com um anticorpo anti-IL-13 conforme descrito acima. Em uma outra realização, o método compreende o tratamento de pacientes com asma com um anticorpo anti-IL-13 conforme descrito acima, em que o paciente foi diagnosticado anteriormente com estado de EIP utilizando um Teste de Periostina Total para determinar o estado de EIP. Em uma realização, o paciente com asma tem 18 anos de idade ou mais. Em uma realização, o paciente com asma tem 12 a 17 anos de idade e o anti- IL-13 é administrado na forma de dose plana de 250 mg ou dose plana de 125 mg. Em uma realização, o paciente com asma tem 6 a 11 anos de idade e o anticorpo anti-IL-13 é administrado na forma de dose plana de 125 mg ou dose plana de 62,5 mg.
[013] A presente invenção fornece um teste de periostina. Em uma realização, o teste de periostina é um Teste de Periostina Total. Em outra realização, o Teste de Periostina Total compreende o uso de um ou mais dos anticorpos antiperiostina de acordo com a presente invenção para ligação à Periostina Total em uma amostra biológica obtida de um paciente. Em ainda outra realização da presente invenção, a amostra biológica é soro otido de sangue integral. Em uma realização, a amostra biológica é obtida de pacientes com asma. Em uma realização adicional, o paciente com asma sofre de asma moderada a severa. Em ainda outra realização, o paciente com asma moderada a severa é não controlado com corticosteroide e, opcionalmente, está sendo tratado com um, dois, três ou mais controladores.
[014] Os testes antiperiostina e testes com anticorpos descritos no presente podem ser utilizados para outras doenças nas quais periostina é elevada tais como fibrose pulmonar idiopática (IPF), pneumonia intersticial não específica (NSIP) e câncer.
[015] A presente invenção fornece um agente terapêutico que é um inibidor da via de TH2 para uso no tratamento de asma ou distúrbios respiratórios em pacientes, em que o paciente expressa níveis elevados de periostina total. Em uma realização, o alvo de inibição na via de TH2 é selecionado a partir de: IL-9, IL-5, IL-13, IL-4, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 e IgE; e receptores tais como: receptor de IL-9, receptor de IL-5, receptor de IL-4 alfa, receptor de IL-13 alfa 1 e receptor de IL-13 alfa 2, OX40, TSLP-R, IL-7R alfa (correceptor de TSLP), IL17RB (receptor de IL-25), ST2 (receptor de IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2, Fc épsilon RI e Fc épsilon RII/CD23 (receptores de IgE). Em uma realização, o paciente a ser tratado segundo os métodos de acordo com a presente invenção sofre de asma suave a severa, opcionalmente asma moderada a severa, em que a asma é não controlada com corticosteroide. Em uma realização adicional, o nível em soro de Periostina Total no paciente asmático moderado a severo que é não controlado com corticosteroide é de mais de 20 ng/ml, 21 ng/ml, 22 ng/ml, 23 ng/ml, 24 ng/ml ou 25 ng/ml em um Teste E4. Em ainda outra realização, o paciente a ser tratado adicionalmente possui níveis de expressão elevados de qualquer um, uma combinação ou todos dentre mRNAs ou proteínas CEA, TARC (CCL17) e MCP-4 (CCL13). Em ainda outra realização, o paciente a ser tratado, além de ter níveis de expressão elevados de periostina conforme descrito no presente, possui nível de FENO de mais de 21 ppb ou mais de 35 ppb.
[016] A presente invenção fornece o uso de agente terapêutico que liga um alvo na via de asma induzido por TH2 na preparação de medicamentos para o tratamento de pacientes portadores de asma ou distúrbios respiratórios, em que o paciente expressa níveis elevados de periostina total e o alvo é IL-9, IL-5, IL- 13, IL-4, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 e IgE; e receptores tais como: receptor de IL-9, receptor de IL-5, receptor de IL-4 alfa, receptor de IL-13 alfa 1 e receptor de IL-13 alfa2, OX40, TSLP-R, IL-7R alfa (correceptor de TSLP), IL17RB (receptor de IL-25), ST2 (receptor de IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2, Fc épsilon RI e Fc épsilon RII/CD23 (receptores de IgE). Em uma realização, o paciente é EIP. Segundo uma realização, determinou-se que o paciente possui EIP utilizando um teste de acordo com a presente invenção. Em ainda outra realização, o teste é um Teste de Periostina Total. Em uma outra realização, o teste mede o nível de Periostina Total em uma amostra biológica obtida do paciente. Em uma realização, o teste mede o nível de proteína Periostina Total na amostra de soro obtida do paciente.
[017] A presente invenção compreende um kit ou artigo industrializado para diagnóstico de um subtipo de asma em pacientes, que compreende: (1) determinação dos níveis de Periostina Total em uma amostra de soro obtida do paciente e, opcionalmente, os níveis de expressão de proteína para uma ou mais proteínas selecionadas a partir de TARC e MCP-4; e (2) instruções para medir os níveis de expressão da Periostina total e, opcionalmente, das proteínas TARC e/ou MCP-4 na amostra de soro, em que os níveis de expressão elevados de qualquer uma delas, sua combinação ou todas as mencionadas proteínas são indicativos do subtipo de asma.
[018] Em ainda outra realização, são fornecidos métodos de identificação de pacientes com asma ou pacientes com distúrbio respiratório propensos a ser responsivos ao tratamento com um inibidor da via de TH2. Em certas realizações, os métodos compreendem a determinação se o paciente é Positivo para Inflamações Eosinofílicas (EIP) utilizando um Teste Diagnóstico de Inflamações Eosinofílicas (EIDA), em que o estado de EIP indica que o paciente é propenso a ser responsivo ao tratamento com um Inibidor da Via de TH2.
[019] Em outra realização, são fornecidos métodos de identificação de pacientes com asma ou pacientes com distúrbio respiratório propensos a sofrer agravamentos severos. Em certas realizações, os métodos compreendem a determinação se o paciente é EIP utilizando EIDA, em que o estado de EIP indica que o paciente é propenso a sofrer de aumento de agravamentos severos.
[020] Em ainda outra realização, são fornecidos métodos de identificação de pacientes com asma ou pacientes com distúrbio respiratório propensos a ser responsivos ao tratamento com um inibidor da via de TH2. Em certas realizações, os métodos compreendem a determinação se o paciente é Negativo para Inflamações Eosinofílicas (EIN) utilizando EIDA, em que o estado de EIN indica que o paciente é menos propenso a ser responsivo ao tratamento com um Inibidor da Via de TH2.
[021] Em outra realização, são fornecidos métodos de monitoramento de pacientes com asma que são tratados com um inibidor da via de TH2. Em certas realizações, os métodos compreendem a determinação se o paciente é EIP ou EIN utilizando EIDA. Em uma realização, o método compreende a determinação de um regime de tratamento para o Inibidor da via de TH2. Em uma realização, a determinação de EIP indica a continuação da terapia com o Inibidor da via de TH2 e a determinação de EIN indica a descontinuação da terapia com o Inibidor da via de TH2.
[022] Em certas realizações, o EIDA utilizado em métodos descritos acima compreende as etapas de: (a) determinação da quantidade de Periostina total em amostras obtidas de pacientes com asma; (b) comparação da quantidade de Periostina Total determinada na etapa (a) com uma quantidade de referência; e (c) estratificação do mencionado paciente dentro da categoria de responsivo ou não responsivo com base na comparação obtida na etapa (b). Em certas realizações, a Periostina Total é periostina de soro, em que a periostina é medida utilizando um imunoensaio. Em certas realizações, o imunoensaio é um imunoensaio sanduíche. Em certas realizações, o imunoensaio sanduíche é realizado por um analisador Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). Em certas realizações, o imunoensaio sanduíche é um teste E4. Em uma realização, a quantidade de referência para EIP é 23 ng/ml maior ao utilizar-se o Teste E4 na etapa (a). Em uma realização, a quantidade de referência para EIP é de 50 ng/ml ou mais ao utilizar-se o analisador Elecsys® na etapa (a). Em uma realização, a quantidade de referência para EIN é de 21 ng/ml ou menos ao utilizar-se o Teste E4 na etapa (a). Em uma realização, a quantidade de referência para EIN é de 48 ng/ml ou menos ao utilizar-se o analisador Elecsys® na etapa (a).
[023] Em certas realizações, o paciente de acordo com os métodos descritos acima sofre de asma moderada a severa. Em certas realizações, a asma ou o distúrbio respiratório é não controlado com corticosteroide. Em certas realizações, o corticosteroide é um corticosteroide inalado. Em certas realizações, o corticosteroide inalado é Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® ou Azmacort®. Em uma realização, o paciente também está sendo tratado com um segundo controlador. Em certas realizações, o segundo controlador é um broncodilatador de ação prolongada (LABD). Em certas realizações, o LABD é um agonista beta-2 de ação prolongada (LABA), antagonista receptor de leucotrienos (LTRA), antagonista muscarínico de ação prolongada (LAMA), teofilina ou corticosteroides orais (OCS). Em certas realizações, o LABD é Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, Perforomist® ou Serevent®.
[024] Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 de acordo com os métodos acima inibe o alvo ITK, BTK, IL-9 (tal como MEDI-528), IL-5 (tal como Mepolizumab, CAS N° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (tal como IMA-026, IMA-638 (também denominado anrukinzumab, INN N° 910649-32-0; QAX-576; armadilha para IL4/IL13), tralokinumab (também denominado CAT- 354, CAS N° 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (também denominado anticorpo 13C5.5 humanizado), IL-4 (tal como AER-001, armadilha para IL4/IL13), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 e IgE (tal como XOLAIR, QGE-031; MEDI-4212); e receptores tais como: receptor de IL-9, receptor de IL-5 (tal como MEDI-563 (benralizumab, CAS N° 1044511-01-4), receptor de IL-4 alfa (tal como AMG-317, AIR-645), receptor de IL-13 alfa 1 (tal como R-1671) e receptor de IL-13 alfa 2, OX40, TSLP-R, IL-7R alfa (correceptor de TSLP), IL17RB (receptor de IL-25), ST2 (receptor de IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (tal como AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc épsilon RI, Fc épsilon RII/CD23 (receptores de IgE), Flap (tal como GSK2190915), Syk quinase (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935), ou é um inibidor de múltiplas citocinas de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (tal como TPI ASM8). Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um inibidor anti-via de IL-13/IL-4 ou um agente de ligação anti-IgE. Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um anticorpo anti-IL-13. Em certas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é um anticorpo que compreende um VH que compreende SEQ ID NO: 9 e VL que compreende SEQ ID NO: 10, um anticorpo anti-IL13 que compreende HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 ou lebrikizumab. Em certas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é um anticorpo biespecífico que também liga IL-4. Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um anticorpo anti-IgE. Em certas realizações, o anticorpo anti- IgE é (i) o anticorpo XOLAIR®, (ii) anticorpo anti-M1’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável é SEQ ID NO: 24 e a cadeia leve variável é SEQ ID NO: 25 ou (iii) um anticorpo anti-M1’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável compreende adicionalmente um HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 e a cadeia leve variável compreende adicionalmente HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 e: (a) o HVR-H1 são os resíduos 26-35 de SEQ ID NO: 24, [GFTFSDYGIA]; (b) o HVR-H2 são os resíduos 49-66 de SEQ ID NO: 24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) o HVR-H3 são os resíduos 97-106 de SEQ ID NO: 24, [ARDNWDAMDY]; (d) o HVR-L1 são os resíduos 24-39 de SEQ ID NO: 25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) o HVR-L2 são os resíduos 55-61 de SEQ ID NO: 25, [KVSNRFS]; (f) o HVR-L3 são os resíduos 94-102 de SEQ ID NO: 25 [SQNTLVPWT].
[025] Em outro aspecto, usos de um kit de detecção de Periostina Total em uma amostra obtida de um paciente com asma para estratificar/classificar pacientes com asma em prováveis responsivos e não responsivos para tratamento terapêutico com um Inibidor da Via de TH2. Em certas realizações, a Periostina Total é detectada utilizando EIDA, em que EIDA compreende as etapas de: (a) determinação da quantidade de Periostina total em amostras obtidas de pacientes com asma; (b) comparação da quantidade de Periostina Total determinada na etapa (a) com uma quantidade de referência; e (c) estratificação do mencionado paciente dentro da categoria de responsivo ou não responsivo com base na comparação obtida na etapa (b). Em certas realizações, a Periostina Total é periostina de soro, em que a periostina é medida utilizando um imunoensaio. Em certas realizações, o imunoensaio é um imunoensaio sanduíche. Em certas realizações, o imunoensaio sanduíche é realizado por um analisador Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). Em certas realizações, o imunoensaio sanduíche é um teste E4. Em uma realização, a quantidade de referência para EIP é 23 ng/ml maior ao utilizar-se o Teste E4 na etapa (a). Em uma realização, a quantidade de referência para EIP é de 50 ng/ml ou mais ao utilizar-se o analisador Elecsys® na etapa (a).
[026] Em certas realizações, o paciente de acordo com os usos descritos no parágrafo acima sofre de asma moderada a severa. Em certas realizações, a asma ou o distúrbio respiratório é não controlado com corticosteroide. Em certas realizações, o corticosteroide é um corticosteroide inalado. Em certas realizações, o corticosteroide inalado é Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® ou Azmacort®. Em uma realização, o paciente também está sendo tratado com um segundo controlador. Em certas realizações, o segundo controlador é um broncodilatador de ação prolongada. Em certas realizações, o LABD é um agonista beta-2 de ação prolongada (LABA), antagonista receptor de leucotrieno (LTRA), antagonista muscarínico de ação prolongada (LAMA), teofilina ou corticosteroides orais (OCS). Em certas realizações, o LABD é Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, Perforomist® ou Serevent®.
[027] Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 de acordo com os usos acima inibe o alvo ITK, BTK, IL-9 (tal como MEDI-528), IL-5 (tal como Mepolizumab, CAS N° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (tal como IMA- 026, IMA-638 (também denominado anrukinzumab, INN N° 910649-32-0; QAX- 576; armadilha para IL4/IL13), tralokinumab (também denominado CAT-354, CAS N° 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (também denominado anticorpo 13C5.5 humanizado), IL-4 (tal como AER-001, armadilha para IL4/IL13), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 e IgE (tal como XOLAIR, QGE-031; MEDI-4212); e receptores tais como: receptor de IL-9, receptor de IL-5 (tal como MEDI-563 (benralizumab, CAS N° 1044511-01-4), receptor de IL-4 alfa (tal como AMG- 317, AIR-645), receptor de IL-13 alfa 1 (tal como R-1671) e receptor de IL-13 alfa 2, OX40, TSLP-R, IL-7R alfa (correceptor de TSLP), IL17RB (receptor de IL-25), ST2 (receptor de IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (tal como AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc épsilon RI, Fc épsilon RII/CD23 (receptores de IgE), Flap (tal como GSK2190915), Syk quinase (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935), ou é um inibidor de múltiplas citocinas de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (tal como TPI ASM8). Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um inibidor anti-via de IL-13/IL-4 ou um agente de ligação anti-IgE. Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um anticorpo anti-IL-13. Em certas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é um anticorpo que compreende um VH que compreende SEQ ID NO: 9 e VL que compreende SEQ ID NO: 10, um anticorpo anti-IL13 que compreende HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 ou lebrikizumab. Em certas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é um anticorpo biespecífico que também liga IL-4. Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um anticorpo anti-IgE. Em certas realizações, o anticorpo anti-IgE é (i) o anticorpo XOLAIR®, (ii) anticorpo anti-M1’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável é SEQ ID NO: 24 e a cadeia leve variável é SEQ ID NO: 25 ou (iii) um anticorpo anti-M1’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável compreende adicionalmente um HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 e a cadeia leve variável compreende adicionalmente HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 e: (a) o HVR-H1 são os resíduos 26-35 de SEQ ID NO: 24, [GFTFSDYGIA]; (b) o HVR-H2 são os resíduos 49-66 de SEQ ID NO: 24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) o HVR-H3 são os resíduos 97-106 de SEQ ID NO: 24, [ARDNWDAMDY]; (d) o HVR-L1 são os resíduos 24-39 de SEQ ID NO: 25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) o HVR-L2 são os resíduos 55-61 de SEQ ID NO: 25, [KVSNRFS]; (f) o HVR-L3 são os resíduos 94-102 de SEQ ID NO: 25 [SQNTLVPWT].
[028] Em ainda outro aspecto, são fornecidos kits de medição da Periostina Total em amostras biológicas obtidas de pacientes com asma ou pacientes que sofrem de distúrbios respiratórios, em que o kit compreende uma primeira molécula de ácido nucleico que se hibridiza a uma segunda molécula de ácido nucleico, a segunda molécula de ácido nucleico codifica Periostina Total ou uma porção da mesma ou o kit compreende um anticorpo que se liga a Periostina Total. Em certas realizações, o kit compreende uma bula que contém informações que descrevem os usos fornecidos acima.
[029] Em ainda outro aspecto, são fornecidos kits diagnósticos de um subtipo de asma em pacientes, em que os kits compreendem: (1) determinação dos níveis de Periostina Total em amostras de soro obtidas do paciente e, opcionalmente, os níveis de expressão de proteína na amostra de soro para uma ou mais proteínas selecionadas a partir de TARC e MCP-4; e (2) instruções de medição dos níveis da Periostina Total e, opcionalmente, TARC e/ou MCP-4 na amostra de soro, em que os níveis de expressão elevados de qualquer uma, uma combinação ou todas as mencionadas proteínas são indicativos do subtipo de asma. Em certas realizações, o kit compreende ainda uma bula para determinar se um paciente com asma ou paciente com distúrbio respiratório é EIP ou EIN. Em certas realizações, o kit compreende ainda uma bula para determinar se um paciente com asma é propenso a ser responsivo a um Inibidor de Via de TH2. Em certas realizações, o kit compreende adicionalmente uma bula que contém informações que descrevem quaisquer dos usos fornecidos acima. Em certas realizações, o kit compreende adicionalmente um recipiente vazio para reter uma amostra biológica. Em certas realizações, o kit compreende dois anticorpos antiperiostina para uso em um imunoensaio para determinar os níveis de Periostina Total.
[030] Em outro aspecto, métodos de tratamento de asma ou distúrbio respiratório que compreendem a administração de anticorpos anti-IL- 13 que compreendem HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes possuem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 a um paciente que sofre de asma ou distúrbios respiratórios em uma dose plana de 125 a 500 mg a cada duas a oito semanas. Em certas realizações, o paciente sofre de asma moderada a severa. Em certas realizações, a asma ou o distúrbio respiratório é não controlado com corticosteroide. Em certas realizações, a asma ou o distúrbio respiratório é não controlado com corticosteroide inalado. Em certas realizações, a asma ou o distúrbio respiratório é não controlado com uma dose diária total de pelo menos 500 mcg de propionato de fluticasona (FP). Em certas realizações, o corticosteroide é um corticosteroide inalado, que é Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® ou Azmacort®. Em certas realizações, o paciente também está sendo tratado com um segundo controlador. Em certas realizações, o paciente continua a ser tratado com um corticosteroide, opcionalmente um corticosteroide inalado, durante o tratamento com o anticorpo anti-IL-13. Em certas realizações, o paciente continua a ser tratado com um segundo controlador durante o tratamento com o anticorpo anti-IL-13. Em certas realizações, o segundo controlador é um broncodilatador de ação prolongada. Em certas realizações, o broncodilatador de ação prolongada é LABA, LTRA, LAMA, teofilina ou OCS. Em certas realizações, determinou-se que o paciente é EIP. Em certas realizações, determinou-se que o paciente é EIP utilizando um kit conforme descrito acima. Em certas realizações, determinou-se que o paciente é EIP utilizando um método conforme descrito acima. Em certas realizações, administra-se ao paciente uma dose plana de 125 mg ou 250 mg a cada quatro semanas. Em certas realizações, o paciente tem 18 anos de idade ou mais, o paciente tem de 12 a 17 anos de idade ou mais, o paciente tem de 6 a 11 anos de idade ou tem 6 anos de idade ou mais.
[031] Em certas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é administrado por via subcutânea. Em certas realizações, o anticorpo anti-IL- 13 é administrado utilizando uma seringa previamente cheia ou dispositivo autoinjetor. Em certas realizações, o paciente com asma a ser tratado de acordo com os métodos acima tem 18 anos de idade ou mais ou possui periostina de soro a > 50 ng/ml e é não controlado com corticosteroide inalado e uma segunda medicação de controle. Em certas realizações, a periostina de soro é medida utilizando um imunoensaio, em que esse imunoensaio é selecionado a partir de teste de periostina Elecsys® e Teste E4. Em certas realizações, a periostina de soro é medida utilizando um kit conforme descrito acima. Em algumas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é um anticorpo que compreende um domínio VH que compreende SEQ ID NO: 9 e um domínio VL que compreende SEQ ID NO: 10. Em certas realizações, o anticorpo anti- IL-13 é lebrikizumab. Em certas realizações, o paciente com asma a ser tratado de acordo com os métodos descritos acima tem 12 anos de idade ou mais e é não controlado com corticosteroide inalado e uma segunda medicação de controle.
[032] Em ainda outro aspecto, são fornecidos métodos de tratamento de asma ou doenças respiratórias que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de lebrikizumab ao paciente. Em certas realizações, o tratamento resulta em aprimoramento relativo de FEV1 de mais de 5% em comparação com antes do tratamento com lebrikizumab. Em certas realizações, o aprimoramento relativo de FEV1 é de mais de 8% em comparação com antes do tratamento com lebrikizumab. Em certas realizações, o tratamento resulta em redução de agravamentos severos.
[033] Em ainda outro aspecto, são fornecidos métodos de tratamento de pacientes que sofrem de asma ou doenças respiratórias que compreendem a administração de um inibidor da via de TH2 ao paciente diagnosticado como EIP. Em certas realizações, os métodos compreendem a etapa de diagnóstico do paciente como EIP utilizando um teste de Periostina Total. Em certas realizações, os métodos compreendem adicionalmente a etapa de novo tratamento do paciente com o Inibidor da Via de TH2 caso se determine que o paciente é EIP. Em certas realizações, soro do paciente é utilizado para determinar se o paciente é EIP.
[034] Em certas realizações, o estado de EIP determinada de acordo com os métodos acima utiliza EIDA que compreende as etapas a seguir: (a) determinação da quantidade de Periostina total em amostras obtidas do paciente; (b) comparação da quantidade de Periostina Total determinada na etapa (a) com uma quantidade de referência; e (c) estratificação do mencionado paciente dentro da categoria de responsivo ou não responsivo com base na comparação obtida na etapa (b). Em certas realizações, a Periostina Total é periostina de soro, em que a periostina é medida utilizando um imunoensaio. Em certas realizações, o imunoensaio é um imunoensaio sanduíche. Em certas realizações, o imunoensaio sanduíche é realizado por um analisador Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). Em certas realizações, o imunoensaio sanduíche é um teste E4. Em uma realização, a quantidade de referência para EIP é 23 ng/ml maior ao utilizar-se o Teste E4 na etapa (a). Em uma realização, a quantidade de referência para EIP é de 50 ng/ml ou mais ao utilizar-se o analisador Elecsys® na etapa (a).
[035] Em certas realizações, o paciente de acordo com os métodos descritos acima sofre de asma moderada a severa. Em certas realizações, a asma ou o distúrbio respiratório é não controlado com corticosteroide. Em certas realizações, o corticosteroide é um corticosteroide inalado. Em certas realizações, o corticosteroide inalado é Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® ou Azmacort®. Em uma realização, o paciente também está sendo tratado com um segundo controlador. Em certas realizações, o segundo controlador é um broncodilatador de ação prolongada. Em certas realizações, o LABD é um agonista beta-2 de ação prolongada (LABA), antagonista receptor de leucotrienos (LTRA), antagonista muscarínico de ação prolongada (LAMA), teofilina ou corticosteroides orais (OCS). Em certas realizações, o LABD é Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, Perforomist® ou Serevent®.
[036] Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 de acordo com os métodos acima inibe o alvo ITK, BTK, IL-9 (tal como MEDI-528), IL-5 (tal como Mepolizumab, CAS N° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (tal como IMA-026, IMA-638 (também denominado anrukinzumab, INN N° 910649-32-0; QAX-576; armadilha para IL4/IL13), tralokinumab (também denominado CAT- 354, CAS N° 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (também denominado anticorpo 13C5.5 humanizado), IL-4 (tal como AER-001, armadilha para IL4/IL13), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 e IgE (tal como XOLAIR®, QGE-031; MEDI-4212); e receptores tais como: receptor de IL-9, receptor de IL-5 (tal como MEDI-563 (benralizumab, CAS N° 1044511-01-4), receptor de IL-4 alfa (tal como AMG-317, AIR-645), receptor de IL-13 alfa 1 (tal como R-1671) e receptor de IL-13 alfa 2, OX40, TSLP-R, IL-7R alfa (correceptor de TSLP), IL17RB (receptor de IL-25), ST2 (receptor de IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (tal como AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc épsilon RI, Fc épsilon RII/CD23 (receptores de IgE), Flap (tal como GSK2190915), Syk quinase (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935), ou é um inibidor de múltiplas citocinas de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (tal como TPI ASM8). Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um inibidor anti-via de IL-13/IL-4 ou um agente de ligação anti-IgE. Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um anticorpo anti-IL-13. Em certas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é um anticorpo que compreende um VH que compreende SEQ ID NO: 9 e VL que compreende SEQ ID NO: 10, um anticorpo anti-IL-13 que compreende HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 ou lebrikizumab. Em certas realizações, o anticorpo anti-IL-13 é um anticorpo biespecífico que também liga IL-4.
[037] Em certas realizações, o Inibidor da Via de TH2 é um anticorpo anti-IgE. Em certas realizações, o anticorpo anti-IgE é (i) o anticorpo XOLAIR®, (ii) anticorpo anti-M1’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável é SEQ ID NO: 24 e a cadeia leve variável é SEQ ID NO: 25 ou (iii) um anticorpo anti-M1’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável compreende adicionalmente um HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 e a cadeia leve variável compreende adicionalmente HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 e: (a) o HVR- H1 são os resíduos 26-35 de SEQ ID NO: 24, [GFTFSDYGIA]; (b) o HVR-H2 são os resíduos 49-66 de SEQ ID NO: 24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) o HVR-H3 são os resíduos 97-106 de SEQ ID NO: 24, [ARDNWDAMDY]; (d) o HVR-L1 são os resíduos 24-39 de SEQ ID NO: 25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) o HVR-L2 são os resíduos 55-61 de SEQ ID NO: 25, [KVSNRFS]; (f) o HVR-L3 são os resíduos 94102 de SEQ ID NO: 25 [SQNTLVPWT].
[038] Em outro aspecto, são fornecidos métodos de avaliação de eventos adversos em pacientes associados ao tratamento de asma com lebrikizumab. Em certas realizações, os métodos compreendem as etapas de monitoramento da quantidade e/ou da severidade de eventos que são agravamentos, pneumonia adquirida na comunidade, anafilaxia, dores musculoesqueléticas, distúrbios musculoesqueléticos, dores de tecidos conjuntivos ou distúrbios de tecidos conjuntivos. Em certas realizações, o distúrbio dos tecidos conjuntivos ou musculoesquelético é artralgia, dores nas costas, dores nas extremidades, mialgia, dores no pescoço, artrite, anormalidades do desenvolvimento ósseo, bursite, costocondrite, exostose, dores nos flancos, dores torácicas musculoesqueléticas, dores musculoesqueléticas, dores da mandíbula ou tendinite.
[039] Em ainda outro aspecto, são anticorpos antiperiostina. Em certas realizações, o anticorpo antiperiostina compreende as sequências de HVR de SEQ ID NO: 1 e as sequências de HVR de SEQ ID NO: 2. Em certas realizações, o anticorpo antiperiostina compreende as sequências de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2. Em certas realizações, o anticorpo antiperiostina compreende as sequências de HVR de SEQ ID NO: 3 e as sequências de HVR de SEQ ID NO: 4. Em certas realizações, o anticorpo antiperiostina compreende as sequências de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4. Em certas realizações, são fornecidos Testes de Periostina Total que compreendem o uso dos anticorpos antiperiostina acima.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[040] A Figura 1 fornece um esquema do teste de desafio de alérgenos descrito no Exemplo 1.
[041] A Figura 2 exibe alterações induzidas por alérgenos em FEV1 após desafios na seleção (A) e na semana 13 (B). FEV1 foi medido a cada dez minutos pelos primeiro noventa minutos e, em seguida, a cada hora a partir de duas a oito horas após desafio com alérgenos. As barras de erro representam desvios padrão da média.
[042] A Figura 3 exibe níveis em soro de IgE, CCL13 (MCP-4) e CCL17 (TARC). (A) Níveis em soro expressos como percentuais dos níveis de doses prévias ao longo tempo em pacientes tratados com placebo e (B) pacientes tratados com lebrikizumab. As linhas representam pacientes individuais; médias dos grupos não são indicadas. As setas indicaram dosagem nas semanas 0, 4, 8 e 12 (dias 0, 28, 56 e 84). (C) Reduções de IgE, CCL13 e CCL17 na Semana 13 em pacientes individuais com relação aos níveis de linha base desses marcadores.
[043] A Figura 4 exibe a inibição induzida por lebrikizumab da reação asmática posterior (LAR) em subgrupos de pacientes com alto teor de biomarcador e baixo teor de biomarcador. Os dados são expressos na forma de redução média corrigida por placebo em AUC (área sob a curva) do LAR na Semana 13 (n = 5 a 8 pacientes ativos/grupo).
[044] A Figura 5 fornece um esquema do teste de asma descrito no Exemplo 2.
[045] A Figura 6 fornece as características de linha base de pacientes participantes do teste de asma do Exemplo 2.
[046] A Figura 7 fornece resultados do teste de asma do Exemplo 2.
[047] A Figura 8 fornece resultados de FEV1 do teste de asma do Exemplo 2 para todos os pacientes com eficácia avaliável (A) e apenas para pacientes com alto teor de periostina (B).
[048] A Figura 9 fornece velocidades de redução de agravamentos do teste de asma do Exemplo 2.
[049] A Figura 10 fornece o percentual de alteração de FENO do teste de asma do Exemplo 2.
[050] A Figura 11 fornece resultados de segurança do teste de asma do Exemplo 2.
[051] A Figura 12 fornece um esquema do teste de asma descrito no Exemplo 3.
[052] A Figura 13 fornece um esquema de um estudo de observação de asma descrito no Exemplo 5.
[053] A Figura 14 exibe correlação entre pacientes entre níveis de periostina no soro ao longo de diversas visitas na coorte BOBCAT conforme descrito no Exemplo 5. (A) Correlação entre a visita 1 e a visita 2; (B) correlação entre a visita 1 e a visita 3; (C) correlação entre a visita 2 e a visita 3; (D) correlação entre a visita 1 e o nível médio de periostina no soro ao longo de todas as visitas; (E) correlação entre a visita 2 e o nível médio de periostina no soro ao longo de todas as visitas; e (F) correlação entre a visita 3 e o nível médio de periostina no soro ao longo de todas as visitas.
[054] A Figura 15 demonstra que FENO diferencia asmáticos não controlados moderados a severos com alta dose de ICS de acordo com inflamações eosinofílicas aéreas (coorte BOBCAT) conforme descrito no Exemplo 5. (A) Asmáticos com >3% de eosinófilos da saliva apresentaram FENO significativamente elevado em comparação com asmáticos com <3% de eosinófilos da saliva (p < 0,001 por meio do teste de soma de avaliação Wilcoxon). (B) Asmáticos com > 22 eosinófilos/mm2 de tecido dos brônquios total apresentaram tendência de FENO elevado em comparação com asmáticos com < 22 eosinófilos/mm2 de tecido dos brônquios total (p = 0,07 de acordo com o teste de soma de avaliação Wilcoxon). (C) Avaliação composta de eosinófilos nas vias aéreas em que 0 = eosinófilos na saliva < 3% E eosinófilos no tecido (“Bx”) < 22/mm 2; 1 - eosinófilos na saliva > 3% OU eosinófilos no tecido > 22 /mm2 (exclusive); 2 = AMBOS eosinófilos na saliva > 3% E eosinófilos no tecido > 22/mm2 demonstraram forte tendência positiva de aumento dos níveis de FENO com aumento da avaliação composta de eosinófilos nas vias aéreas (p = 0,001 por meio de regressão logística). O estado de periostina no soro é indicada como nas legendas. (D) Periostina do soro e FENO foram elevados na maior parte dos pacientes com eosinófilos do tecido ou saliva elevados, mas subconjuntos de pacientes apresentaram elevação apenas de periostina ou FENO. A maior parte dos pacientes que não possuem eosinófilos elevados na saliva E no tecido exibiu baixo teor de periostina no soro e baixo FENO. (E) Análise da curva de características de operação de receptor (ROC) da sensibilidade e da especificidade de periostina no soro, FENO, eosinófilos do sangue e IgE do soro para o estado composta das vias aéreas e eosinófilos. AUC = área sob a curva.
[055] A Figura 16 fornece o percentual de pacientes sem falhas no tratamento no teste de asma descrito no Exemplo 3.
[056] A Figura 17 exibe comparação entre os níveis de periostina no soro conforme medido em testes similares ao teste do Exemplo 4 (Teste E4) ou teste de periostina Elecsys® (Exemplo 7) para amostras obtidas dos testes clínicos descritos no Exemplo 3 e no Exemplo 5.
[057] A Figura 18 exibe a farmacodinâmica de periostina no soro em pacientes com baixo teor de periostina (A) e em pacientes com alto teor de periostina (B) conforme descrito no Exemplo 2.
[058] A Figura 19 exibe o percentual de alteração dos níveis médios de periostina ao longo do tempo em pacientes tratados com placebo e tratados com lebrikizumab conforme descrito no Exemplo 2.
[059] A Figura 20 exibe a correlação entre o percentual de alteração em FEV1 na semana 12 e o peso do corpo para indivíduos no estudo de Fase II descrito no Exemplo 2 (A) e no estudo de Fase II descrito no Exemplo 3 (B) conforme descrito no Exemplo 6.
[060] A Figura 21 exibe a proporção prevista de pacientes com concentrações em tina no estado estável acima de diversos níveis conforme descrito no Exemplo 6.
[061] A Figura 22 exibe o efeito de lebrikizumab sobre os níveis de CCL17 em soro (TARC) ao longo do tempo para o estudo do Exemplo 2 (A) e o estudo do Exemplo 3 (B) conforme descrito no Exemplo 6.
[062] A Figura 23 exibe os perfis de PK de população simulada em cada uma das doses da Fase III, 250 mg a cada quatro semanas, 125 mg a cada quatro semanas e 37,5 mg a cada quatro semanas, conforme descrito no Exemplo 6.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[063] A menos que definido em contrário, os termos técnicos e científicos utilizados no presente possuem o mesmo significado conforme comumente compreendido pelos técnicos comuns no assunto a que pertence a presente invenção. Singleton et al, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, segunda edição, J. Wiley & Sons (Nova Iorque NY, 1994) e March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure, quarta edição, John Wiley & Sons (Nova Iorque NY, 1992), fornecem aos técnicos no assunto uma orientação geral para vários dos termos utilizados no presente pedido.
DEFINIÇÕES:
[064] Para fins de interpretação do presente relatório descritivo, aplicar-se-ão as definições a seguir e, sempre que apropriado, os termos utilizados no singular também incluirão o plural e vice-versa. Caso qualquer definição estabelecida abaixo entre em conflito com qualquer documento incorporado ao presente como referência, deverá ser considerada a definição descrita abaixo.
[065] Da forma utilizada no presente relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas no singular “um”, “um” e “o/a” incluem referências ao plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Desta forma, por exemplo, referência a “uma proteína” ou “um anticorpo” inclui uma série de proteínas ou anticorpos, respectivamente; referência a “uma célula” inclui misturas de células e similares.
[066] A expressão “Periostina Total”, da forma utilizada no presente, indica pelo menos as isoformas 1, 2, 3 e 4 de periostina. As isoformas 1, 2, 3 e 4 de periostina humana são conhecidas na técnica como compreendendo as sequências de aminoácidos a seguir: NP_006466.2 (SEQ ID NO: 19); NP_001129406.1 (SEQ ID NO: 20), NP_001129407.1 (SEQ ID NO: 21) e NP_001129408.1 (SEQ ID NO: 22), respectivamente, de acordo com o banco de dados NCBI. Além disso, os depositantes detectaram uma forma adicional de periostina. Esta nova isoforma é denominada no presente “isoforma 5” e foi sequenciada parcialmente. A isoforma 5 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23. Em uma realização, as isoformas de periostina são periostinas humanas. Em uma realização adicional, a expressão Periostina Total inclui a isoforma 5 de periostina humana além das isoformas 1 a 4. Em outra realização, a Periostina Total é Periostina Total em Soro ou Periostina Total em Plasma (ou seja, Periostina Total de uma amostra de soro obtida a partir de sangue integral ou uma amostra de plasma obtida do sangue integral, respectivamente, o sangue integral obtido de um paciente).
[067] A expressão “Teste de Periostina Total” designa um teste que mede os níveis de Periostina Total em uma amostra biológica. Em uma realização, os níveis de Periostina Total são medidos utilizando anticorpos antiperiostina. Em outra realização, os anticorpos antiperiostina são os anticorpos antiperiostina descritos no presente. Em outro exemplo, os Níveis de Periostina Total são medidos utilizando uma ou mais sequências de ácidos nucleicos sem sentido para mRNA que codificam as isoformas 1 a 4 de periostina. Em ainda outra exemplo, o Teste de Periostina Total é o teste descrito no Exemplo 4 (“Teste do Exemplo 4” ou “Teste E4”). Em uma realização, o Teste de Periostina Total compreende o uso de (1) um anticorpo que compreende as sequências SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 (o anticorpo “25D4”) e/ou um anticorpo que compreende as sequências de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4 (o anticorpo “23B9”) para ligar periostina em uma amostra biológica; (2) um anticorpo que compreende as sequências de região variável SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 e/ou um anticorpo que compreende as sequências de região variável de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4 para ligar periostina em uma amostra biológica; (3) um anticorpo que compreende as sequências de HVR de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 e/ou um anticorpo que compreende as sequências de HVR de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4 para ligar periostina em uma amostra biológica; e (4) um anticorpo que compreende as sequências de HVR que são 95% ou mais idênticas às sequências de HVR de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 e/ou um anticorpo que compreende sequências de HVR que são 95% ou mais idênticas às sequências de HVR de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4.
[068] Da forma utilizada no presente, “Teste Diagnóstico de Inflamações Eosinofílicas”, abreviado “EIDA”, é um teste diagnóstico de pacientes que possuem inflamações eosinofílicas no corpo ou inflamações da via de TH2 no corpo por meio de medição dos níveis de um marcador de inflamações eosinofílicas em uma amostra biológica de um paciente, em que o marcador é selecionado a partir do grupo que consiste de níveis de mRNA de Periostina ou níveis de proteína de Periostina, níveis de mRNA de iNOS, níveis de proteína de iNOS, níveis de FENO, níveis de mRNA de CCL26 ou de proteína CCL26, níveis de mRNA de serpin B2 ou níveis de proteína serpin B2, níveis de mRNA de serpin B4 ou níveis de proteína serpin B4, níveis de mRNA de CST1 ou níveis de proteína CST1, níveis de mRNA de CST2 ou níveis de proteína CST2, níveis de mRNA de CST4 ou níveis de proteína CST4. Em uma realização, são medidos os níveis de Periostina Total em plasma ou soro. Exemplos altamente eficazes de testes incluem, mas sem limitações, o exemplo descrito no Exemplo 4 abaixo (também denominado Teste E4), ou outros testes de periostina que medem os níveis em soro ou plasma do total de periostina em uma amostra biológica. Podem ser conduzidos dois ou mais testes para elaborar diagnóstico de inflamações eosinofílicas em pacientes. Em uma realização, o teste EID compreende um Teste de Periostina Total em combinação com um teste de FENO. Em outra realização, o teste EID compreende um teste de periostina total +/- teste de níveis de FENO em combinação com um teste que mede os níveis de qualquer um ou uma combinação dos marcadores a seguir: CST1, CST2, CCL26, CLCA1, PRR4, PRB4, SERPIN B2, CEACAM5, iNOS, SERPIN B4, CST4 e SERPIN B10.
[069] A expressão “anticorpo de periostina” ou “anticorpo antiperiostina” designa um anticorpo que se liga a uma isoforma de periostina. Em uma realização, a periostina é periostina humana. Em uma realização, o anticorpo compreende as sequências SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 (o anticorpo “25D4”) ou compreende as sequências SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4 (o anticorpo “23B9”). Em outra realização, o anticorpo compreende as sequências de região variável de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 ou compreende as sequências de região variável de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4. Em outra realização, o anticorpo compreende as sequências de HVR de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 ou as sequências de HVR de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO:. Em outra realização, o anticorpo compreende as sequências de HVR que são 95% ou mais idênticas às sequências de HVR de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 e/ou um anticorpo que compreende sequências de HVR que são 95% ou mais idênticas às sequências de HVR de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4.
[070] Estado ou paciente positivo para inflamação eosinofílica (EIP): designa um paciente que, caso tenha sido testada uma amostra de plasma ou soro daquele paciente para determinar os níveis de periostina em plasma ou soro, respectivamente, utilizando o teste E4 (Exemplo 4), teria níveis de periostina total no soro de 20 ng/ml ou superiores (Positivo Eosinofílico). Segundo uma realização, os níveis totais de periostina em um paciente que é EIP podem ser selecionados a partir do grupo que consiste de 21 ng/ml ou superior, 22 ng/ml ou superior, 23 ng/ml ou superior, 24 ng/ml ou superior, 25 ng/ml ou superior, 26 ng/ml ou superior, 27 ng/ml ou superior, 28 ng/ml ou superior, 29 ng/ml ou superior, 30 ng/ml ou superior, 31 ng/ml ou superior, 32 ng/ml ou superior, 33 ng/ml ou superior, 34 ng/ml ou superior, 35 ng/ml ou superior, 36 ng/ml ou superior, 37 ng/ml ou superior, 38 ng/ml ou superior, 39 ng/ml ou superior, 40 ng/ml ou superior, 41 ng/ml ou superior, 42 ng/ml ou superior, 43 ng/ml ou superior, 44 ng/ml ou superior, 45 ng/ml ou superior, 46 ng/ml ou superior, 47 ng/ml ou superior, 48 ng/ml ou superior, 49 ng/ml ou superior, 50 ng/ml ou superior, 51 ng/ml ou superior, 52 ng/ml ou superior, 53 ng/ml ou superior, 54 ng/ml ou superior, 55 ng/ml ou superior, 56 ng/ml ou superior, 57 ng/ml ou superior, 58 ng/ml ou superior, 59 ng/ml ou superior, 60 ng/ml ou superior, 61 ng/ml ou superior, 62 ng/ml ou superior, 63 ng/ml ou superior, 64 ng/ml ou superior, 65 ng/ml ou superior, 66 ng/ml ou superior, 67 ng/ml ou superior, 68 ng/ml ou superior, 69 ng/ml ou superior ou 70 ng/ml no soro ou plasma. Dever-se-á compreender que o estado de EIP representa o estado do paciente e não depende do tipo de teste utilizado para determinar o estado. Desta forma, outros Testes Diagnósticos de Inflamação Eosinofílica, incluindo outros testes de periostina tais como o teste de periostina Elecsys® exibido no Exemplo 7, podem ser utilizados ou desenvolvidos para uso no teste do estado Positivo para Inflamação Eosinofílica.
[071] Estado ou Paciente Negativo para Inflamação Eosinofílica (EIN) designa um paciente que, caso tenha sido testada uma amostra de plasma ou soro daquele paciente para determinar os níveis de periostina em plasma ou soro, respectivamente, utilizando o teste E4, teria níveis de periostina total no soro de menos de 20 ng/ml. Dever-se-á compreender que o estado de EIN representa o estado do paciente e não depende do tipo de teste utilizado para determinar o estado. Desta forma, outros Testes Diagnósticos de Inflamação Eosinofílica, incluindo outros testes de periostina tais como o teste de periostina Elecsys® exibido no Exemplo 7, podem ser utilizados ou desenvolvidos para uso no teste do estado Negativo para Inflamação Eosinofílica.
[072] A expressão “amostra biológica”, da forma utilizada no presente, inclui, mas sem limitações, sangue, soro, plasma, saliva, biópsias de tecido (tais como amostras do pulmão) e amostras nasais que incluem cotonetes ou pólipos nasais.
[073] Teste de FENO designa um teste que mede FENO (óxido nítrico exalado fracional). Esses níveis podem ser avaliados utilizando, por exemplo, um dispositivo portátil manual, NIOX MINO (Aerocrine, Solna, Suécia), de acordo com orientações publicadas pela Sociedade Torácica Norte- Americana (ATS) em 2005. FENO pode ser indicado em outras formas similares, tais como FeNO ou FENO, e dever-se-á compreender que todas essas variações similares possuem o mesmo significado.
[074] A idade dos pacientes a serem testados ou tratados de acordo com os métodos fornecidos no presente inclui: todas as idades. Em uma realização, as idades são de 18 anos ou mais. Em outra realização, as idades são de 12 anos ou mais. Em ainda outra realização, as idades são de 2 anos ou mais. Em uma realização, as idades são de 18 a 75 anos, 12 a 75 anos ou 2 a 75 anos.
[075] Asma é um distúrbio complexo caracterizado por sintomas variáveis e recorrentes, obstrução do fluxo aéreo reversível (tal como por broncodilatador) e hiper-reação dos brônquios que pode ou não ser associada a inflamações subjacentes. Exemplos de asma incluem asma exacerbada/sensível a aspirina, asma atópica, asma severa, asma suave, asma moderada a severa, asma isenta de corticosteroides, asma crônica, asma resistente a corticosteroides, asma refratária a corticosteroides, asma recém-diagnosticada e não tratada, asma devido ao fumo, asma não controlada com corticosteroides e outras asmas conforme mencionado em J. Allergy Clin. Immunol. (2010) 126 (5): 926-938.
[076] Distúrbio eosinofílico indica: um distúrbio associado a excesso de números eosinofílicos, em que sintomas atípicos podem manifestar-se devido aos níveis ou à atividade de eosinófilos de forma local ou sistêmica no corpo. Os distúrbios associados à atividade ou números de eosinófilos excessivos incluem, mas sem limitações, asma (incluino asma sensível a aspirina), asma atópica, dermatite atópica, rinite alérgica (incluindo rinite alérgica sazonal), rinite não alérgica, asma, asma severa, pneumonia eosinofílica crônica, aspergilose bronquiopulmonar alérgica, doença celíaca, síndrome de Churg-Strauss (periatrite nodosa mais atopia), síndrome de mialgia eosinofílica, síndrome hipereossinofílica, reações edematosas incluindo angiodema episódico, infecções por helmíntios, em que os eosinófilos podem possuir papel protetor, dermatite oncocercal e distúrbios gastrointestinais associados a eosinófilos, incluindo, mas sem limitações, esofagite eosinofílica, gastrite eosinofílica, gastroenterite eosinofílica, enterite eosinofílica e colite eosinofílica, micropolipose e polipose nasal, intolerância à aspirina, asma e apneia do sono obstrutiva. Produtos de secreção derivados de eosinófilos também foram associados à promoção de angiogênese e à formação de tecidos conjuntivos em tumores e as reações fibróticas observadas em condições tais como asma crônica, mal de Crohn, escleroderma e fibrose do endomiocárdio (Munitz, A., Levi-Schaffer, F., Allergy 2004; 59: 268-75, Adamko et al, Allergy 2005; 60: 13-22, Oldhoff et al, Allergy 2005; 60: 693-6). Outros exemplos incluem câncer (tais como glioblastoma (como glioblastoma multiforme), linfoma não de Hodgkin (NHL)), dermatite atópica, rinite alérgica, asma, fibrose, doença intestinal inflamatória, fibrose pulmonar (incluindo fibrose pulmonar idiopática (IPF) e fibrose pulmonar secundária a esclerose), COPD, fibrose hepática.
[077] Distúrbio mediado por IL-13 indica um distúrbio associado ao excesso de atividade ou níveis de IL-13, em que sintomas atípicos podem manifestar-se devido aos níveis ou à atividade de IL-13 de forma local e/ou sistêmica no corpo. Exemplos de distúrbios mediados por IL-13 incluem: cânceres (tais como linfoma não de Hodgkin, glioblastoma), dermatite atópica, rinite alérgica, asma, fibrose, doença intestinal inflamatória (tal como mal de Crohn), distúrbios inflamatórios do pulmão (tais como fibrose pulmonar, como IPF), COPD e fibrose hepática.
[078] Distúrbio mediado por IL-4 indica: distúrbio associado a excesso de atividade ou níveis de IL-4, em que sintomas atípicos podem manifestar-se devido aos níveis ou à atividade de IL-4 de forma local e/ou sistêmica no corpo. Exemplos de distúrbios mediados por IL4 incluem: cânceres (tais como linfoma não de Hodgkin, glioblastoma), dermatite atópica, rinite alérgica, asma, fibrose, doença intestinal inflamatória (tal como mal de Crohn), distúrbios inflamatórios do pulmão (tais como fibrose pulmonar, como IPF), COPD e fibrose hepática.
[079] Distúrbio mediado por IL-5 indica: distúrbio associado a excesso de atividade ou níveis de IL-5, em que sintomas atípicos podem manifestar-se devido aos níveis ou à atividade de IL-5 de forma local e/ou sistêmica no corpo. Exemplos de distúrbios mediados por IL-5 incluem: cânceres (tais como linfoma não de Hodgkin, glioblastoma), dermatite atópica, rinite alérgica, asma, fibrose, doença intestinal inflamatória (tal como mal de Crohn), distúrbios inflamatórios do pulmão (tais como fibrose pulmonar, como IPF), COPD e fibrose hepática.
[080] Distúrbio mediado por IL-9 indica: distúrbio associado a excesso de atividade ou níveis de IL-9, em que sintomas atípicos podem manifestar-se devido aos níveis ou à atividade de IL-9 de forma local e/ou sistêmica no corpo. Exemplos de distúrbios mediados por IL-9 incluem: cânceres (tais como linfoma não de Hodgkin, glioblastoma), dermatite atópica, rinite alérgica, asma, fibrose, doença intestinal inflamatória (tal como mal de Crohn), distúrbios inflamatórios do pulmão (tais como fibrose pulmonar, como IPF), COPD e fibrose hepática.
[081] Distúrbio mediado por TSLP indica: distúrbio associado a excesso de atividade ou níveis de TSLP, em que sintomas atípicos podem manifestar-se devido aos níveis ou à atividade de TSLP de forma local e/ou sistêmica no corpo. Exemplos de distúrbios mediados por TSLP incluem: cânceres (tais como linfoma não de Hodgkin, glioblastoma), dermatite atópica, rinite alérgica, asma, fibrose, doença intestinal inflamatória (tal como mal de Crohn), distúrbios inflamatórios do pulmão (tais como fibrose pulmonar, como IPF), COPD e fibrose hepática.
[082] Distúrbio mediado por IgE indica: distúrbio associado a excesso de atividade ou níveis de IgE, em que sintomas atípicos podem manifestar-se devido aos níveis de IgE de forma local e/ou sistêmica no corpo. Esses distúrbios incluem asma, dermatite atópica, rinite alérgica, fibrose (tal como fibrose pulmonar, como IPF).
[083] Sintomas similares a asma incluem sintomas selecionados a partir do grupo que consiste de respiração curta, tosse (alterações na produção de saliva e/ou qualidade da saliva e/ou frequência da tosse), espirros, rigidez do peito, bronquioconstrição e despertar noturno atribuído a um dos sintomas acima ou a uma combinação desses sintomas (Juniper et al (2000), Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162 (4), 1330-1334).
[084] A expressão “distúrbio respiratório” inclui, mas sem limitações, asma (tal como asma alérgica e não alérgica (devido, por exemplo, a infecções, tal como com vírus sincitial respiratório (RSV), por exemplo, em crianças mais jovens)); bronquite (tal como bronquite crônica); doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) (tal como enfizema (por exemplo, enfizema induzido por cigarro); condições que envolvem inflamações das vias aéreas, eosinofilia, fibrose e excesso de produção de muco, tal como fibrose cística, fibrose pulmonar e rinite alérgica. Exemplos de doenças que podem ser caracterizadas por inflamações das vias aéreas, excesso de secreção das vias aéreas e obstrução das vias aéreas incluem asma, bronquite crônica, bronquiectase e fibrose cística.
[085] Agravamentos (comumente denominadas ataques de asma ou asma aguda) são episódios de aumento novo ou progressivo da respiração curta, tosse (alterações da produção de saliva e/ou qualidade de saliva e/ou frequência da tosse), espirros, rigidez do peito e despertar noturno atribuído a um dos sintomas acima ou a uma combinação desses sintomas. Os agravamentos são frequentemente caracterizados por reduções do fluxo de ar expiratório (PEF ou FEV1). A capacidade de variação de PEF, entretanto, não aumenta normalmente durante um agravamento, embora possa fazê-lo gerando ou durante a recuperação de um agravamento. A severidade dos agravamentos varia de suave a potencialmente mortal e pode ser avaliada com base em sintomas e na função pulmonar. Os agravamentos severos da asma, conforme descritos no presente, incluem agravamentos que resultam em qualquer uma ou em uma combinação da hospitalização seguinte para tratamento de asma, alto uso de corticosteroides (tal como quadruplicando a dose diária total de corticosteroides ou uma dose diária total maior ou igual a 500 microgramas de FP ou equivalente por três dias consecutivos ou mais) ou uso de corticosteroides oral/parenteral.
[086] Um inibidor da via de TH2 é um agente que inibe a via de TH2.
[087] Exemplos de um inibidor da via de TH2 incluem inibidores da atividade de qualquer um dos alvos selecionados a partir do grupo que consiste de: ITK, BTK, IL-9 (tal como MEDI-528), IL-5 (tal como Mepolizumab, CAS N° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (tal como IMA-026, IMA-638 (também denominado anrukinzumab, INN N° 910649-32-0; QAX-576; armadilha para IL4/IL13), tralokinumab (também denominado CAT-354, CAS N° 1044515-889); AER-001, ABT-308 (também denominado anticorpo 13C5.5 humanizado), IL-4 (tal como AER-001, armadilha para IL4/IL13), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 e IgE (tal como XOLAIR, QGE-031; MEDI-4212); e receptores tais como: receptor de IL-9, receptor de IL-5 (tal como MEDI-563 (benralizumab, CAS N° 1044511-01-4), receptor de IL-4 alfa (tal como AMG-317, AIR-645), receptor de IL-13 alfa 1 (tal como R-1671) e receptor de IL-13 alfa 2, OX40, TSLP-R, IL-7R alfa (correceptor de TSLP), IL17RB (receptor de IL-25), ST2 (receptor de IL- 33), CCR3, CCR4, CRTH2 (tal como AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc épsilon RI, Fc épsilon RII/CD23 (receptores de IgE), Flap (tal como GSK2190915), Syk quinase (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935) e inibidor de múltiplas citocinas de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (tal como TPI ASM8). Exemplos de inibidores dos alvos mencionados acima são descritos, por exemplo, em WO 2008/086395; WO 2006/085938; US 7.615.213; US 7.501.121; WO 2006/085938; WO 2007/080174; US 7.807.788; WO 2005/007699; WO 2007/036745; WO 2009/009775; WO 2007/082068; WO 2010/073119; WO 2007/045477; WO 2008/134724; US 2009/0047277; e WO 2008/127271).
[088] Um agente terapêutico fornecido no presente inclui um agente que pode ligar-se ao alvo identificado acima, tal como um ou mais polipeptídeos (por exemplo, um anticorpo, imunoadesina ou pepticorpo), um aptâmero ou molécula pequena que pode ligar-se a uma proteína ou molécula de ácido nucleico que pode ligar-se a uma molécula de ácido nucleico que codifica um alvo identificado no presente (ou seja, siRNA).
[089] “Inibidor anti-Via de IL-13/IL-4” designa um agente terapêutico que inibe a sinalização de IL-13 e/ou IL-4. Exemplos de inibidores anti-via de IL-13/IL-4 incluem inibidores da interação de IL13 e/ou IL4 com seu(s) receptor(es). Esses inibidores incluem, mas sem limitações, agentes de ligação anti-IL-13, agentes de ligação anti-IL-4, agentes de ligação anti-IL-4 receptor alfa, agentes de ligação anti-IL-13 receptor alfa 1 e agentes de ligação anti-IL-13 receptor alfa 2. Anticorpos de domínio isolado que podem ligar IL13, IL-4 (incluindo anticorpo biespecífico com um IL-13 de ligação de domínio simples e IL-4 de ligação de domínio simples), IL-13R alfa 1, IL-13R alfa2 ou IL- 4R alfa são especificamente incluídos como inibidores). Dever-se-á compreender que são incluídas moléculas que podem ligar mais de um alvo.
[090] “Agentes de ligação anti-IL-4” designam um agente que se liga a IL-4 humano. Esses agentes de ligação podem incluir uma molécula pequena, aptâmero ou polipeptídeo. Esse polipeptídeo pode incluir, mas sem limitações, um ou mais polipeptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de uma imunoadesina, anticorpo, corpo de peptídeo e peptídeo. Segundo uma realização, o agente de ligação liga-se a uma sequência de IL-4 humana com afinidade de 1 μM a 1 pM. Exemplos específicos de agentes de ligação anti-IL-4 podem incluir IL-4 Receptor alfa solúvel (tal como domínio extracelular de receptor IL-4 Receptor fundido a uma região Fc humana), anticorpo anti-IL-4 e IL-13 receptor alfa 1 solúvel (tal como domínio extracelular de IL-13 recepto ralfa 1 fundido a uma região Fc humana).
[091] “Agente de ligação anti-IL-4 receptor alfa” designa um agente que se liga a IL4 receptor alfa humano. Esses agentes de ligação podem incluir uma molécula pequena, aptâmero ou polipeptídeo. Esse polipeptídeo pode incluir, mas sem limitações, um ou mais polipeptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de uma imunoadesina, anticorpo, corpo de peptídeo e peptídeo. Segundo uma realização, o agente de ligação liga-se a uma sequência de IL-4 receptor alfa humana com afinidade de 1 μM a 1 pM. Exemplos específicos de agentes de ligação anti-IL-4 receptor alfa podem incluir anticorpos anti-IL-4 receptor alfa.
[092] “Agentes de ligação anti-IL-4” designam um agente que se liga a IL13 humano. Esses agentes de ligação podem incluir uma molécula pequena, aptâmero ou polipeptídeo. Esse polipeptídeo pode incluir, mas sem limitações, um ou mais polipeptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de uma imunoadesina, anticorpo, corpo de peptídeo e peptídeo. Segundo uma realização, o agente de ligação liga-se a uma sequência de IL-13 humana com afinidade de 1 μM a 1 pM. Exemplos específicos de agentes de ligação anti-IL-13 podem incluir anticorpos anti-IL-13, IL-13 receptor alfa 2 solúvel fundido a um Fc humano, IL-4 receptor alfa solúvel fundido a um Fc humano, IL-13 receptor alfa solúvel fundido a um Fc humano. Segundo uma realização, o anticorpo anti-IL-13 compreende (1) um HVRH1 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 11; (2) HVRH2 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 12; (3) HVRH3 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 13; (4) HVRL1 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 14; (5) HVRL2 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 15; e (6) HVRL3 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 16. Em outra realização, o anticorpo anti-IL-13 compreende um domínio VH que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 9 e um domínio VL que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 10. Segundo uma realização, o anticorpo é um anticorpo IgG1. Segundo uma outra realização, o anticorpo é um anticorpo IgG4. Segundo uma realização, o anticorpo IgG4 compreende uma mutação S228P no seu domínio constante.
[093] “Agentes de ligação anti-IL-13 receptor alfa 1” designa um agente que se liga especificamente a IL-IL13 receptor alfa 1 humano. Esses agentes de ligação podem incluir uma molécula pequena, aptâmero ou polipeptídeo. Esse polipeptídeo pode incluir, mas sem limitações, um ou mais polipeptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de uma imunoadesina, anticorpo, corpo de peptídeo e peptídeo. Segundo uma realização, o agente de ligação liga-se a uma sequência de IL-13 receptor alfa 1 humano com afinidade de 1 μM a 1 pM. Exemplos específicos de agentes de ligação anti-IL-13 receptor alfa 1 podem incluir anticorpos anti-IL-13 receptor alfa 1.
[094] “Agentes de ligação anti-IL-13 receptor alfa 2” designa um agente que se liga especificamente a IL-13 receptor alfa 2. Esses agentes de ligação podem incluir uma molécula pequena, aptâmero ou polipeptídeo. Esse polipeptídeo pode incluir, mas sem limitações, um ou mais polipeptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de uma imunoadesina, anticorpo, corpo de peptídeo e peptídeo. Segundo uma realização, o agente de ligação liga-se a uma sequência de IL-13 receptor alfa 2 humana com afinidade de 1 μM a 1 pM. Exemplos específicos de agentes de ligação anti-IL-13 receptor alfa 2 podem incluir anticorpos anti-IL-13 receptor alfa 2.
[095] “Agente de ligação anti-IgE” designa um agente que se liga especificamente a IgE humano. Esses agentes de ligação podem incluir uma molécula pequena, aptâmero ou polipeptídeo. Esse polipeptídeo pode incluir, mas sem limitações, um ou mais polipeptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de uma imunoadesina, anticorpo, corpo de peptídeo e peptídeo. Segundo uma realização, o anticorpo anti-IgE compreende uma sequência VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17; e uma sequência VH que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 18.
[096] “Agentes de ligação anti-M1’” designa um agente que se liga especificamente à região M1’ próxima da membrana do IgE expresso na superfície sobre células B. Esses agentes de ligação podem incluir uma molécula pequena, aptâmero ou polipeptídeo. Esse polipeptídeo pode incluir, mas sem limitações, um ou mais polipeptídeos selecionados a partir do grupo que consiste de uma imunoadesina, anticorpo, corpo de peptídeo e peptídeo. Segundo uma realização, o anticorpo anti-IgE compreende um anticorpo descrito em WO 2008/116149 ou sua variante. Segundo outra realização, o anticorpo anti-M1’ compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável é SEQ ID NO: 24 e a cadeia leve variável é SEQ ID NO: 25. Segundo uma outra realização, um anticorpo anti- IgE/M1’ compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável compreende adicionalmente um HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 e a cadeia leve variável compreende adicionalmente HVR- L1, HVR-L2 e HVR-L3 e: (a) o HVR-H1 são os resíduos 26-35 de SEQ ID NO: 24, [GFTFSDYGIA]; (b) o HVR-H2 são os resíduos 49-66 de SEQ ID NO: 24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) o HVR-H3 são os resíduos 97-106 de SEQ ID NO: 24, [ARDNWDAMDY]; (d) o HVR-L1 são os resíduos 24-39 de SEQ ID NO: 25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) o HVR-L2 são os resíduos 55-61 de SEQ ID NO: 25, [KVSNRFS]; (f) o HVR-L3 são os resíduos 94-102 de SEQ ID NO: 25 [SQNTLVPWT].
[097] A expressão “molécula pequena” designa uma molécula orgânica que possui peso molecular de 50 Daltons a 2500 Daltons.
[098] O termo “anticorpo” é utilizado no sentido mais amplo e cobre especificamente, por exemplo, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos com especificidade poliepitópica, anticorpos de fita única, anticorpos multiespecíficos e fragmentos de anticorpos. Esses anticorpos podem ser quiméricos, humanizados, humanos e sintéeticos. Esses anticorpos e métodos de sua geração são descritos com mais detalhes abaixo.
[099] A expressão “não controlado” ou “incontrolável” designa a inadequação de um regime de tratamento para minimizar sintomas de doenças. Da forma utilizada no presente, as expressões “não controlado” e “controlado inadequadamente” podem ser utilizadas de forma intercambiável e destinam-se a designar o mesmo estado. O estado de controle do paciente pode ser determinado pelo médico atendente com base em uma série de fatores que inclui o histórico clínico do paciente, capacidade de reação ao tratamento e nível do tratamento atual prescrito. O médico pode, por exemplo, considerar fatores tais como FEV1 <75% previsto ou melhor pessoal, frequência de necessidade de SABA nas últimas duas a quatro semanas (tal como maior ou igual a duas doses por semana), acordar noturno/sintomas nas últimas duas a quatro semanas (tal como menor ou igual a duas noites por semana), limitações da atividade nas últimas duas a quatro semanas e sintomas diurnos nas últimas duas a quatro semanas.
[0100] A expressão “agente terapêutico” designa qualquer agente que seja utilizado para tratar a doença.
[0101] O termo “controlador” ou “prevenção” designa qualquer agente terapêutico que seja utilizado para controlar inflamações por asma. Exemplos de controladores incluem corticosteroides, antagonistas receptores de leucotrieno (tais como os que inibem a síntese ou a atividade de leucotrienos como montelukast, zileuton, pranlukast, zafirlukast), LABAs, composições de combinação de corticosteroide e LABA, teofilina (incluindo aminofilina), cromolin sódio, nedocromil sódio, omalizumab, LAMAs, MABA (tal como antagonista muscarínico-agonista beta2 bifuncional), inibidores da proteína de ativação de 5-lipoxigenase (FLAP) e inibidor da enzima PDE-4 (tal como roflumilast). “Segundo controlador” designa tipicamente um controlador que não é o mesmo primeiro controlador.
[0102] A expressão “limitação de corticosteroide” ou “CS” indica a redução da frequência e/ou quantidade ou a eliminação de corticosteroide utilizado para tratar doenças em pacientes que tomam corticosteroides para o tratamento da doença devido à administração de outro agente terapêutico. “Agente de CS” indica agente terapêutico que pode causar CS em pacientes que tomam corticosteroide.
[0103] O termo “corticosteroide” inclui, mas sem limitações, fluticasona (incluindo propionato de fluticasona (FP)), beclometasona, budesonida, ciclesonida, mometasona, flunisolida, betametasona e triancinolona. “Corticosteroide inalável” indica um corticosteroide que é apropriado para fornecimento por meio de inalação. Exemplos de corticosteroides inaláveis são fluticasona, dipropionato de beclometasona, budenosida, furoato de mometasona, ciclesonida, flunisolida, triancinolona acetonida e qualquer outro corticosteroide atualmente disponível ou que se torne disponível no futuro. Exemplos de corticosteroides que podem ser inalados e são combinados com um agonista beta 2 de ação prolongada incluem, mas sem limitações: budesonida/formoterol e fluticasona/salmeterol.
[0104] Exemplos de drogas de combinação de corticosteroides e LABA incluem furoato de fluticasona/trifenatato de vilanterol e indacaterol/mometasona.
[0105] O termo “LABA” indica agonista beta-2 de ação prolongada, em que esse agonista inclui, por exemplo, salmeterol, formoterol, bambuterol, albuterol, indacaterol, arformoterol e clenbuterol.
[0106] O termo “LAMA” indica um antagonista musarínico de ação prolongada, em que esse agonista inclui tiotrópio.
[0107] Exemplos de combinações de LABA e LAMA incluem, mas sem limitações: tiotrópio de olodaterol (da Boehringer Ingelheim) e glicopirrônio de indacaterol (Novartis).
[0108] O termo “SABA” indica agonistas de beta 2 de ação curta, em que esses agonistas incluem, mas sem limitações, salbutamol, levosalbutamol, fenoterol, terbutalina, pirbuterol, procaterol, bitolterol, rimiterol, carbuterol, tulobuterol e reproterol.
[0109] Antagonistas receptores de leucotrieno (às vezes denominados leukast) (LTRA) são drogas que inibem leucotrienos. Exemplos de inibidores de leucotrieno incluem montelukast, zileuton, pranlukast e zafirlukast.
[0110] O termo “FEV1” designa o volume de ar exalado no primeiro segundo de uma expiração forçada. É uma medida da obstrução das vias aéreas. A concentração provocadora de metacolina necessária para induzir um declínio de 20% em FEV1 (PC20) é uma medida da hiper-reação das vias aéreas. FEV1 pode ser indicado em outras formas similares, tais como FEV1, e dever-se-á compreender que todas essas variações similares possuem o mesmo significado.
[0111] A expressão “alteração relativa de FEV1” = (FEV1 na semana 12 do tratamento - FEV1 antes do início do tratamento) dividido por FEV1.
[0112] A expressão “asma suave” designa um paciente que geralmente experimenta sintomas ou agravamentos menos de seis vezes por semana, sintomas noturnos menos de duas vezes por mês e é assintomático entre os agravamentos. Asma suave intermitente é frequentemente tratada conforme o necessário com os seguintes: broncodilatadores inalados (agonistas beta2 inalados de curta duração); evitam-se acionadores conhecidos; vacinação anual contra influenza; vacinação pneumocócica a cada seis a dez anos e, em alguns casos, agonista beta2 inalado, cromolina ou nedocromil antes da exposição a acionadores identificados. Caso o paciente possua necessidade crescente de agonista beta2 de curta duração (utilizando, por exemplo, agonista beta2 de curta duração mais de três a quatro vezes por dia para agravamento agudo ou utilizando mais de um cartucho por mês para sintomas), o paciente pode necessitar de um aumento na terapia.
[0113] A expressão “asma moderada” designa geralmente asma na qual o paciente experimenta agravamentos mais de duas vezes por semana e os agravamentos afetam o sono e a atividade; o paciente apresenta despertar noturno devido à asma mais de duas vezes por mês; o paciente apresenta sintomas de asma crônica que necessitam de agonista beta2 inalado de curta duração diariamente ou em dias alternados; e a linha base de PEF ou FEV1 de tratamento prévio do paciente é de 60 a 80% previsto e a variabilidade de PEF é de 20 a 30%.
[0114] A expressão “asma severa” designa, de forma geral, asma na qual o paciente apresenta sintomas quase contínuos, agravamentos frequentes, despertar noturno frequente devido à asma, atividades limitadas, linha base de PEF ou FEV1 de menos de 60% previstos e variabilidade de PEF de 20 a 30%.
[0115] Exemplos de medicações de resgate incluem albuterol, ventolina e outros.
[0116] “Resistente” designa uma doença que demonstra pouca ou nenhuma melhoria clinicamente significativa após tratamento com um agente terapêutico. Asma que necessita de tratamento com alta dose de ICS (tal como o quádruplo da dose total diária de corticosteroide ou dose total diária maior ou igual a 500 microgramas de FP (ou equivalente) por pelo menos três dias consecutivos ou mais ou corticosteroide sistêmico para um teste de duas semanas para estasbelecer se a asma permanece sem controle ou se FEV1 não melhora é frequentemente considerada asma refratária severa.
[0117] Um agente terapêutico conforme fornecido no presente pode ser administrado por quaisquer meios apropriados, incluindo por via parenteral, subcutânea, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal. As infusões parenterais incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Em uma realização, o agente terapêutico é inalado. Segundo uma outra realização, a dosagem é fornecida por meio de injeções, tais como injeções intravenosas ou subcutâneas. Em ainda outra realização, o agente terapêutico é administrado utilizando uma seringa (tal como previamente cheia ou não) ou um autoinjetor.
[0118] Para a prevenção ou tratamento de doença, a dosagem apropriada de agente terapêutico dependerá do tipo de doença a ser tratado, conforme definido acima, da severidade e do curso da doença, se o agente terapêutico é administrado para propósitos preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do paciente e reação ao agente terapêutico e do critério do médico atendente. O agente terapêutico é administrado adequadamente ao paciente de uma vez ou ao longo de uma série de tratamentos. A composição de agente terapêutico de acordo com a presente invenção será formulada, dosada e administrada de forma consistente com a boa prática médica. Fatores para consideração neste contexto incluem o distúrbio específico sendo tratado, o mamífero específico sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúrbio, o local de fornecimento do agente, o método de administração, o cronograma de administração e outros fatores conhecidos dos praticantes da medicina.
[0119] Dosagem de lebrikizumab para doenças eosinofílicas (incluindo asma) e para o tratamento de outras doenças utilizando terapias de TH2: lebrikizumab pode ser administrado a 0,1 mg/kg até 100 mg/kg do peso do corpo do paciente. Em uma realização, a dosagem administrada ao paciente é de 0,1 mg/kg a 20 mg/kg do peso do corpo do paciente. Em outra realização, a dose é de 1 mg/kg a 10 mg/kg do peso do corpo do paciente.
[0120] Em uma realização alternativa, lebrikizumab pode ser administrado como dose plana. Em uma realização, lebrikizumab é administrado como uma dose plana de 125 a 1000 mg (ou seja, não dependente do peso), por meio de injeção subcutânea ou de injeção intravenosa, em frequência selecionada a partir do grupo que consiste de: a cada 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas, 12 semanas, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 16 semanas, 1 mês, 2 meses, 3 meses ou 4 meses. Em outra realização, caso o paciente esteja acima do peso, lebrikizumab pode ser administrado, por exemplo, a 125-250 mg em frequência de três vezes por mês. Em uma realização, o lebrikizumab é administrado na forma de dose plana de 125 mg, 250 mg ou 500 mg a cada quatro semanas. Em uma outra realização, o lebrikizumab é administrado a pacientes com mais de 40 kg na forma de dose plana de 37,5 mg, 125 mg, 250 mg ou 500 mg a cada quatro semanas.
[0121] Em uma realização, o paciente tem 18 anos de idade ou mais. Em uma realização, o paciente com asma tem 12 a 17 anos de idade e o lebrikizumab é administrado na forma de dose plana de 250 mg ou dose plana de 125 mg. Em uma realização, o paciente com asma tem 6 a 11 anos de idade e o lebrikizumab é administrado na forma de dose plana de 125 mg.
[0122] “Reação do paciente” ou “reação” (e suas variações gramaticais) podem ser determinadas utilizando qualquer objetivo que indique benefício para o paciente, incluindo, sem limitações: (1) inibição, até certo ponto, do progresso da doença, incluindo a redução da velocidade e a suspensão completa; (2) redução da quantidade de episódios e/ou sintomas da doença; (3) redução do tamanho das lesões; (4) inibição (ou seja, redução, redução da velocidade ou suspensão completa) da infiltração de células doentes em órgãos e/ou tecidos periféricos adjacentes; (5) inibição (ou seja, redução, redução da velocidade ou suspensão completa) da difusão da doença; (6) redução da reação autoimune, que pode, mas não necessita, resultar na regressão ou ablação da lesão doente; (7) alívio, até certo ponto, de um ou mais sintomas associados ao distúrbio; (8) aumento da duração da apresentação livre de doença após o tratamento; e/ou (9) redução da mortalidade em um dado momento após o tratamento.
[0123] “Afinidade” designa a resistência da soma total de interações não covalentes entre um único local de ligação de uma molécula (tal como um anticorpo) e seu parceiro de ligação (tal como um antígeno). A menos que indicado em contrário, da forma utilizada no presente, “afinidade de ligação” designa afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre membros de um par de ligação (tal como braço de ligação de anticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula X para o seu parceiro Y pode geralmente ser representada pela constante de dissociação (Kd). A afinidade pode ser medida por meio de métodos comuns conhecidos na técnica, que incluem os descritos no presente. Exemplos e ilustrações específicas de realizações de medição da afinidade de ligação encontram-se descritos a seguir.
[0124] Anticorpo “amadurecido por afinidade” designa um anticorpo com uma ou mais alterações em uma ou mais de suas regiões hipervariáveis (HVRs), em comparação com um anticorpo parental que não possui essas alterações, em que essas alterações resultam em aumento da afinidade do anticorpo para antígeno.
[0125] As expressões “anticorpo antialvo” e “anticorpo que se liga a alvo” designam um anticorpo que é capaz de ligar o alvo com afinidade suficiente, de tal forma que o anticorpo seja útil como um agente diagnóstico e/ou terapêutico dirigido ao alvo. Em uma realização, a extensão da ligação de um anticorpo antialvo a uma proteína não de alvo não relacionada é de menos de cerca de 10% da ligação do anticorpo ao alvo conforme medido, por exemplo, por meio de um radioimunoensaio (RIA) ou teste Biacore. Em certas realizações, um anticorpo que se liga a um alvo possui uma constante de dissociação (Kd) de < 1 μM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM ou < 0,001 nM (tal como 10-8 M ou menos, por exemplo de 10-8 M a 10-13 M, tal como de 10-9 M a 10-13 M). Em certas realizações, um anticorpo antialvo liga-se a um epítopo de alvo que é conservado entre diferentes espécies.
[0126] O termo “anticorpo” no presente é utilizado no sentido mais amplo e engloba diversas estruturas de anticorpos, incluindo, mas sem limitações, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (tais como anticorpos biespecíficos) e fragmentos de anticorpos, desde que exibam a atividade de ligação de antígenos desejada.
[0127] “Fragmento de anticorpo” designa uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma parte de um anticorpo intacto que liga o antígeno ao qual se liga o anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de anticorpos incluem, mas sem limitações, fragmentos de Fv, Fab, Fab’, Fab’- SH e F(ab’)2; diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpos de fita simples (tais como scFv); e anticorpos multiespecíficos formados com fragmentos de anticorpos.
[0128] “Anticorpo que se liga ao mesmo epítopo”, como anticorpo de referência, designa um anticorpo que bloqueia a ligação do anticorpo de referência ao seu antígeno em um teste de competição em 50% ou mais e, por outro lado, o anticorpo de referência bloqueia a ligação do anticorpo ao seu antígeno em um teste de competição em 50% ou mais. É fornecido no presente um exemplo de teste de competição.
[0129] “Estrutura humana receptora”, para os propósitos do presente, é uma estrutura que compreende a sequência de aminoácidos de uma estrutura de domínio variável de cadeia leve (VL) ou uma estrutura de domínio variável de cadeia pesada (VH) derivada de uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana, conforme definido abaixo. Estrutura humana receptora “derivada de” uma estrutura de imunoglobulina humana ou estrutura de consenso humano pode compreender a sua mesma sequência de aminoácidos ou pode conter alterações de sequência de aminoácidos. Em algumas realizações, a quantidade de alterações de aminoácidos é de dez ou menos, nove ou menos, oito ou menos, sete ou menos, seis ou menos, cinco ou menos, quatro ou menos, três ou menos ou duas ou menos. Em algumas realizações, a estrutura humana receptora VL possui sequência idêntica à sequência de estrutura de imunoglobulina humana VL ou sequência de estrutura de consenso humana.
[0130] A expressão anticorpo “quimérico” designa um anticorpo no qual uma parte da cadeia leve e/ou pesada é derivada de uma fonte ou espécie específica, enquanto o restante da cadeia leve e/ou pesada é derivado de uma fonte ou espécie diferente.
[0131] A “classe” de um anticorpo designa o tipo de domínio constante ou região constante da sua cadeia pesada. Existem cinco classes principais de anticorpos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e várias delas podem ser adicionalmente divididas em subclasses (isotipos), tais como IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Os domínios constantes de cadeia pesada que correspondem às classes diferentes de imunoglobulinas são denominados α, δ, ε, Y e μ, respectivamente.
[0132] A expressão “agente citotóxico”, da forma utilizada no presente, indica uma substância que inibe ou evita uma função celular e/ou causa destruição ou morte das células. Os agentes citotóxicos incluem, mas sem limitações, isótopos radioativos (tais como At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu), drogas ou agentes quimioterapêuticos (tais como metotrexato, adriamicina, vinca alcaloides (vincristina, vinblastina, etoposida), doxorubicina, melfalan, mitomicina C, clorambucil, daunorubicina ou outros agentes intercalantes); agentes inibidores do crescimento; enzimas e seus fragmentos, tais como enzimas nucleolíticas; antibióticos; toxinas, tais como toxinas de moléculas pequenas ou toxinas enzimaticamente ativas de origem animal, vegetal, fúngica ou bacteriana, incluindo seus fragmentos e/ou variantes; e os diversos agentes antitumores ou anticancerígenos descritos abaixo.
[0133] As “funções efetoras” designam as atividades biológicas que podem ser atribuídas à região Fc de um anticorpo, que variam de acordo com o isotipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpos incluem: citotoxicidade dependente de complemento (CDC) e ligação de C1q; ligação de receptor Fc; citotoxicidade mediada por células dependentes de anticorpos (ADCC); fagocitose; regulagem para baixo de receptores da superfície celular (tais como receptores de células B); e ativação de células B.
[0134] “Quantidade eficaz” de um agente, tal como formulação farmacêutica, designa uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado terapêutico ou profilático desejado.
[0135] A expressão “região Fc” no presente é utilizada para definir uma região terminal C de uma cadeia pesada de imunoglobulina que contém pelo menos uma parte da região constante. A expressão inclui regiões Fc de sequência nativa e regiões Fc variantes. Em uma realização, uma região Fc de cadeia pesada de IgG humana estende-se de Cys226 ou de Pro230 até o terminal carboxila da cadeia pesada. A lisina C terminal (Lys447) da região Fc pode, entretanto, ou não estar presente. A menos que especificado em contrário no presente, a numeração de resíduos de aminoácidos na região Fc ou região constante é de acordo com o sistema de numeração EU, também denominado índice EU, conforme descrito em Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda MD, 1991.
[0136] Resíduos de “estrutura” ou “FR” designam resíduos de domínios variáveis diferentes dos resíduos de região hipervariável (HVR). A FR de um domínio variável geralmente consiste de quatro domínios de FR: FR1, FR2, FR3 e FR4. Consequentemente, as sequências de FR e HVR geralmente aparecem na sequência a seguir em VH (ou VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3- H3(L3)-FR4.
[0137] As expressões “anticorpo com comprimento total”, “anticorpo intacto” e “anticorpo inteiro” são utilizadas no presente de forma intercambiável para designar um anticorpo que possui uma estrutura substancialmente similar a uma estrutura de anticorpo nativo ou que possui cadeias pesadas que contêm uma região Fc conforme definido no presente.
[0138] As expressões “célula hospedeira”, “linhagem de células hospedeiras” e “cultivo de células hospedeiras” são utilizadas de forma intercambiável e designam células nas quais o ácido nucleico exógeno tenha sido introduzido, incluindo a prole dessas células. As células hospedeiras incluem “transformadores” e “células transformadas", que incluem a célula transformada primária e a prole delas derivada sem considerar o número de passagens. A prole pode não ter teor de ácido nucleico completamente idêntico a uma célula parental, mas pode conter mutações. Inclui-se no presente prole mutante que possui a mesma função ou atividade biológica conforme selecionado na célula transformada originalmente.
[0139] “Anticorpo humano” é aquele que possui uma sequência de aminoácidos que corresponde à de um anticorpo produzido por um ser humano, célula humana ou derivada de fonte não humana que utiliza repertórios de anticorpos humanos ou outras sequências de codificação de anticorpos humanos. Esta definição de anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado que compreende resíduos de ligação de antígenos não humanos.
[0140] “Estrutura de consenso humano” é uma estrutura que representa os resíduos de aminoácidos de ocorrência mais comum em uma seleção de sequências de estrutura VL ou VH de imunoglobulina humana. Geralmente, a seleção de sequências VL ou VH de imunoglobulina humana é de um subgrupo de sequências de domínio variável. Geralmente, o subgrupo de sequências é um subgrupo tal como em Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edição, Publicação NIH 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. Em uma realização, para o VL, o subgrupo é subgrupo capa I como em Kabat et al, acima. Em uma realização, para o VH, o subgrupo é subgrupo III como em Kabat et al, acima.
[0141] Anticorpo “humanizado” designa um anticorpo quimérico que compreende resíduos de aminoácidos de HVRs não humanas e resíduos de aminoácidos de FRs humanas. Em certas realizações, um anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos dentre pelo menos um, tipicamente dois domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as HVRs (tais como CDRs) correspondem às de um anticorpo não humano e todas ou substancialmente todas as FRs correspondem às de um anticorpo humano. Um anticorpo humanizado pode opcionalmente compreender pelo menos uma parte de uma região constante de anticorpo derivada de um anticorpo humano. “Forma humanizada” de um anticorpo, tal como um anticorpo não humano, designa um anticorpo que tenha sofrido humanização.
[0142] A expressão “região hipervariável” ou “HVR”, da forma utilizada no presente, indica cada uma das regiões de um domínio variável de anticorpo que são de sequência hipervariável e/ou formam circuitos definidos estruturalmente (“circuitos hipervariáveis”). Geralmente, os anticorpos com quatro cadeias nativas compreendem seis HVRs; três na VH (H1, H2, H3) e três na VL (L1, L2, L3). HVRs compreendem geralmente resíduos de aminoácidos dos circuitos hipervariáveis e/ou das “regiões de determinação de complementaridade” (CDRs), em que estas últimas possuem variabilidade de sequências mais alta e/ou estão envolvidas no reconhecimento de antígenos. Uma região HVR da forma utilizada no presente compreende qualquer número de resíduos localizados nas posições 24-36 (para HVRL1), 46-56 (para HVRL2), 89-97 (para HVRL3), 26-35B (para HVRH1), 47-65 (para HVRH2) e 93-102 (para HVRH3).
[0143] “Imunoconjugado” é um anticorpo conjugado a uma ou mais moléculas heterólogas, incluindo, mas sem limitações, um agente citotóxico.
[0144] “Indivíduo” ou “paciente” é um mamífero. Os mamíferos incluem, mas sem limitações, animais domesticados (tais como vacas, carneiros, gatos, cães e cavalos), primatas (tais como seres humanos e primatas não humanos como macacos), coelhos e roedores (tais como ratos e camundongos). Em certas realizações, o indivíduo ou paciente é um ser humano.
[0145] Polipeptídeo “isolado” é aquele que foi separado de um componente do seu ambiente natural. Em algumas realizações, um anticorpo é purificado até pureza de mais de 95% ou 99%, conforme determinado, por exemplo, por meio de eletroforese (tal como SDS-PAGE, concentração isoelétrica (IEF), eletroforese capilar) ou cromatografia (tal como HPLC de fase reversa ou troca de íons). Para análise dos métodos de determinação, por exemplo, da pureza de anticorpos, vide, por exemplo, Flatman et al, J. Chromatogr. B 848: 79-87 (2007).
[0146] Ácido nucleico “isolado” designa uma molécula de ácido nucleico que tenha sido separada de um componente do seu ambiente natural. Uma molécula de ácido nucleico isolada inclui uma molécula de ácido nucleico contida em células que normalmente contêm a molécula de ácido nucleico, mas a molécula de ácido nucleico está presente de forma extracromossômica ou em um local cromossômico que é diferente do seu local cromossômico natural.
[0147] “Ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo antialvo” designa uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam cadeias leve e pesada de anticorpos (ou seus fragmentos), incluindo a(s) molécula(s) de ácido nucleico em um único vetor ou em vetores separados e a(s) molécula(s) de ácido nucleico presente(s) em um ou mais locais em uma célula hospedeira.
[0148] A expressão “anticorpo monoclonal”, da forma utilizada no presente, designa um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos e/ou ligam o mesmo epítopo, exceto por possíveis anticorpos variantes, por exemplo, que contêm mutações de ocorrência natural ou que surgem durante a produção de um anticorpo monoclonal, em que essas variantes estão geralmente presentes em quantidades menores. Ao contrário das preparações de anticorpos policlonais, que incluem tipicamente diferentes anticorpos dirigidos a diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpos monoclonais é dirigido a um único determinante sobre um antígeno. Desta forma, o adjetivo “monoclonal” indica a característica do anticorpo como sendo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser considerado exigindo a produção do anticorpo por meio de nenhum método específico. Os anticorpos monoclonais a serem utilizados de acordo com a presente invenção podem ser elaborados, por exemplo, por meio de uma série de métodos, incluindo, mas sem limitações, o método de hibridoma, métodos de DNA recombinante, métodos de exibição de fagos e métodos que utilizam animais transgênicos que contêm, no todo ou em parte, os locais de imunoglobulina humana, em que esses métodos e outros exemplos de métodos de elaboração de anticorpos monoclonais são descritos no presente.
[0149] “Anticorpo bruto” designa um anticorpo que não é conjugado a uma porção heteróloga (tal como uma porção citotóxica) ou rádio marca. O anticorpo bruto pode estar presente em uma formulação farmacêutica.
[0150] “Anticorpos nativos” designam moléculas de imunoglobulina de ocorrência natural com estruturas variáveis. Anticorpos de IgG nativos, por exemplo, são glicoproteínas heterotetraméricas com cerca de 150.000 daltons, compostas de duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas que são ligadas por dissulfeto. Do terminal N ao C, cada cadeia pesada possui uma região variável (VH), também denominada domínio pesado variável ou domínio variável de cadeia pesada, seguido por três domínios constantes (CH1, CH2 e CH3). De forma similar, do terminal N ao C, cada cadeia leve possui uma região variável (VL), também denominada domínio leve variável ou domínio variável de cadeia leve, seguido por um domínio leve constante (CL). A cadeia leve de um anticorpo pode ser atribuída a um dentre dois tipos, denominados capa (K) e lambda (A), com base na sequência de aminoácidos do seu domínio constante.
[0151] O termo “bula” é utilizado para designar instruções costumeiramente incluídas em embalagens comerciais de produtos terapêuticos que contêm informações sobre as indicações, uso, dosagem, administração, terapia de combinação, contraindicações e/ou avisos referentes à utilização desses produtos terapêuticos. O termo “bula” também é utilizado para designar instruções costumeiramente incluídas em embalagens comerciais de produtos diagnósticos que contêm informações sobre o uso pretendido, princípio de teste, preparação e manipulação de reagentes, coleta e preparação de amostras, calibragem do tecido e procedimento de testes, dados de desempenho e precisão tais como sensibilidade e especificidade do teste.
[0152] “Percentual (%) de identidade de sequência de aminoácidos”, com relação a uma sequência de polipeptídeo de referência, é definido como o percentual de resíduos de aminoácidos em uma possível sequência que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência de polipeptídeos de referência, após o alinhamento das sequências e introdução de lacunas, se necessário, para atingir o percentual máximo de identidade de sequências, sem considerar nenhuma substituição conservadora como parte da identidade de sequências. O alinhamento para propósitos de determinação do percentual de identidade de sequências de aminoácidos pode ser atingido de várias formas que se encontram dentro do conhecimento da técnica, utilizando, por exemplo, software de computador disponível ao público, tal como software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Os técnicos no assunto podem determinar parâmetros apropriados para o alinhamento de sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para atingir o alinhamento máximo ao longo do comprimento total das sequências sendo comparadas. Para os propósitos do presente, entretanto, os valores percentuais de identidade de sequências de aminoácidos são gerados utilizando o programa de computador de comparação de sequências ALIGN-2. O programa de computador de comparação de sequências ALIGN-2 foi desenvolvido pela Genentech, Inc. e o código fonte foi depositado com a documentação do usuário no Escritório Norte-Americano de Direitos Autorais, Washington DC 20559, onde foi registrado com o n° de Registro de Direitos Autorais Norte-Americano TUX510087. O programa ALIGN-2 é disponível ao público por meio da Genentech, Inc., South San Francisco, Califórnia, ou pode ser compilado a partir do código fonte. O programa ALIGN-2 deverá ser compilado para uso em um sistema operativo UNIX, incluindo UNIX digital V4.0D. Todos os parâmetros de comparação de sequências são estabelecidos pelo programa ALIGN-2 e não variam.
[0153] Em estados em que ALIGN-2 é empregado para comparações de sequências de aminoácidos, o percentual de identidade de sequências de aminoácidos de uma dada sequência de aminoácidos A para, com ou contra uma dada sequência de aminoácidos B (que pode ser alternativamente expressa como uma dada sequência de aminoácidos A que possui ou compreende um certo percentual de identidade de sequências de aminoácidos para, com ou contra uma dada sequência de aminoácidos B) é calculado conforme segue: 100 vezes a fração X/Y, em que X é a quantidade de resíduos de aminoácidos avaliados como coincidências idênticas pelo programa de alinhamento de sequências ALIGN-2 no alinhamento de A e B naquele programa e em que Y é a quantidade total de resíduos de aminoácidos em B. Apreciar-se-á que, quando o comprimento da sequência de aminoácidos A não for igual ao comprimento da sequência de aminoácidos B, o percentual de identidade de sequências de aminoácidos entre A e B não será igual ao percentual de identidade de sequências de aminoácidos entre B e A. A menos que especificado especificamente em contrário, todos os valores percentuais de identidade de sequências de aminoácidos utilizados no presente são obtidos conforme descrito no parágrafo imediatamente anterior, utilizando o programa de computador ALIGN-2.
[0154] A expressão “formulação farmacêutica” designa uma preparação que se encontra em uma forma que permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo nela contido seja efetiva e que não contém componentes adicionais que sejam inaceitavelmente tóxicos para um paciente a quem a formulação seria administrada.
[0155] “Veículo farmaceuticamente aceitável” designa um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente do ingrediente ativo, que é atóxico para o paciente. Veículo farmaceuticamente aceitável inclui, mas sem limitações, tampão, excipiente, estabilizante ou conservante.
[0156] O termo “alvo”, da forma utilizada no presente, designa qualquer molécula nativa de qualquer fonte vertebrada, incluindo mamíferos tais como primatas (por exemplo, seres humanos) e roedores (tais como ratos e camundongos), a menos que indicado em contrário. O termo engloba alvo não processado de "comprimento total", bem como qualquer forma de alvo que resulte do processamento na célula. O termo também engloba variantes de alvos de ocorrência natural, tais como variantes divididas ou variantes alélicas.
[0157] Da forma utilizada no presente, “tratamento” (e suas variações gramaticais tais como “tratar” ou “tratando”) indica intervenção clínica em uma tentativa de alterar o curso natural do indivíduo sendo tratado e pode ser realizado para profilaxia ou durante o transcurso de patologia clínica. Os efeitos desejáveis de tratamento incluem, mas sem limitações, a prevenção da ocorrência ou reincidência da doença, alívio dos sintomas, redução de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, prevenção de metástase, redução da velocidade de progresso da doença, melhoria ou redução do estado doentio e remissão ou melhor prognóstico. Em algumas realizações, anticorpos são utilizados para retardar o desenvolvimento de doenças ou reduzir a velocidade do progresso da doença.
[0158] A expressão “região variável” ou “domínio variável” designa o domínio de uma cadeia leve ou pesada de anticorpo que está envolvida na ligação do anticorpo ao antígeno. Os domínios variáveis da cadeia pesada e cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente possuem estruturas similares, em que cada domínio compreende quatro regiões de estrutura (FRs) conservadas e três regiões hipervariáveis (HVRs) (vide, por exemplo, Kindt et al, Kuby Immunology, sexta edição, W. H. Freeman & Co., pág. 91 (2007)). Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação de antígenos. Além disso, anticorpos que ligam um antígeno específico podem ser isolados utilizando um domínio VH ou VL de um anticorpo que liga o antígeno para selecionar uma biblioteca de domínios VL ou VH complementares, respectivamente. Vide, por exemplo, Portolano et al, J. Immunol. 150: 880-887 (1993); Clarkson et al, Nature 352: 624-628 (1991).
[0159] O termo “vetor”, da forma utilizada no presente, designa uma molécula de ácido nucleico capaz de propagar outro ácido nucleico ao qual é ligado. O termo inclui o vetor como estrutura de ácido nucleico autorreprodutora, bem como o vetor incorporado ao genoma de uma célula hospedeira na qual tenha sido introduzido. Certos vetores são capazes de dirigir a expressão de ácidos nucleicos aos quais são ligados operativamente. Esses vetores são denominados no presente “vetores de expressão”.
COMPOSIÇÕES E MÉTODOS:
[0160] Em um aspecto, a presente invenção é baseada, em parte, em novos testes diagnósticos e melhores métodos de tratamento. Em certas realizações, são fornecidos anticorpos que se ligam a periostina. Os anticorpos de acordo com a presente invenção são úteis, por exemplo, para o diagnóstico ou tratamento de asma e outras doenças.
EXEMPLOS DE ANTICORPOS: ANTICORPOS ANTIPERIOSTINA:
[0161] Em um aspecto, a presente invenção fornece anticorpos isolados que se ligam a periostina. Em certas realizações, um anticorpo antiperiostina pode ligar-se às isoformas 1 a 4 de periostina humana com boa afinidade.
[0162] Em uma realização, o anticorpo compreende as sequências SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 (o anticorpo “25D4”) ou compreende as sequências SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4 (o anticorpo “23B9”). Em outra realização, o anticorpo compreende as sequências de região variável de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 ou compreende as sequências de região variável de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4. Em outra realização, o anticorpo compreende as sequências de HVR de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 ou as sequências de HVR de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4. Em outra realização, o anticorpo compreende as sequências de HVR que são 95% ou mais idênticas às sequências de HVR de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 e/ou um anticorpo que compreende sequências de HVR que são 95% ou mais idênticas às sequências de HVR de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4.
[0163] Em qualquer das realizações acima, um anticorpo antiperiostina pode ser humanizado. Em uma realização, um anticorpo antiperiostina compreende HVRs como em qualquer uma das realizações acima e compreende adicionalmente uma estrutura humana receptora, tal como uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[0164] Em outro aspecto, um anticorpo antiperiostina compreende uma sequência de domínio variável de cadeia pesada (VH) que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em certas realizações, uma sequência de VH que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (tais como substituições conservadoras), inserções ou exclusões com relação à sequência de referência, mas um anticorpo antiperiostina que compreende aquela sequência retém a capacidade de ligar- se a periostina. Em certas realizações, ao todo, de um a dez aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou excluídos em SEQ ID NO: 1. Em certas realizações, substituições, inserções ou exclusões ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo antiperiostina compreende a sequência VH em SEQ ID NO: 1, incluindo modificações daquela sequência após a tradução.
[0165] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo antiperiostina, em que o anticorpo compreende um domínio variável de cadeia leve (VL) que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. Em certas realizações, uma sequência de VL que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (tais como substituições conservadoras), inserções ou exclusões com relação à sequência de referência, mas um anticorpo antiperiostina que compreende aquela sequência retém a capacidade de ligar- se a periostina. Em certas realizações, ao todo, de um a dez aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou excluídos em SEQ ID NO: 2. Em certas realizações, as substituições, inserções ou exclusões ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo antiperiostina compreende a sequência VL em SEQ ID NO: 2, incluindo modificações daquela sequência após a tradução.
[0166] Em outro aspecto, um anticorpo antiperiostina compreende uma sequência de domínio variável de cadeia pesada (VH) que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Em certas realizações, uma sequência de VH que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (tais como substituições conservadoras), inserções ou exclusões com relação à sequência de referência, mas um anticorpo antiperiostina que compreende aquela sequência retém a capacidade de ligar- se a periostina. Em certas realizações, ao todo, de um a dez aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou excluídos em SEQ ID NO: 3. Em certas realizações, substituições, inserções ou exclusões ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo antiperiostina compreende a sequência VH em SEQ ID NO: 3, incluindo modificações daquela sequência após a tradução.
[0167] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo antiperiostina, em que o anticorpo compreende um domínio variável de cadeia leve (VL) que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. Em certas realizações, uma sequência de VL que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (tais como substituições conservadoras), inserções ou exclusões com relação à sequência de referência, mas um anticorpo antiperiostina que compreende aquela sequência retém a capacidade de ligar- se a periostina. Em certas realizações, ao todo, de um a dez aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou excluídos em SEQ ID NO: 4. Em certas realizações, as substituições, inserções ou exclusões ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo antiperiostina compreende a sequência VL em SEQ ID NO: 4, incluindo modificações daquela sequência após a tradução.
[0168] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo antiperiostina, em que o anticorpo compreende uma VH como em qualquer das realizações fornecidas acima e uma VL como em qualquer das realizações fornecidas acima.
[0169] Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo de um anticorpo antiperiostina fornecido no presente. Em certas realizações, é fornecido, por exemplo, um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo de um anticorpo antiperiostina que compreende uma sequência VH de SEQ ID NO: 1 e uma sequência VL de SEQ ID NO: 2. Em certas realizações, é fornecido, por exemplo, um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo de um anticorpo antiperiostina que compreende uma sequência VH de SEQ ID NO: 3 e uma sequência VL de SEQ ID NO: 4.
[0170] Em um aspecto adicional da presente invenção, um anticorpo antiperiostina de acordo com qualquer das realizações acima é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma realização, um anticorpo antiperiostina é um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fv, Fab, Fab’, scFv, diacorpo ou F(ab’)2. Em uma outra realização, o anticorpo é um anticorpo com comprimento total, tal como um anticorpo IgG1 ou IgG4 intacto ou outra classe de anticorpo ou isotipo conforme definido no presente. Segundo uma outra realização, o anticorpo é um anticorpo biespecífico.
[0171] Em um aspecto adicional, um anticorpo antiperiostina de acordo com qualquer das realizações acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito nos Capítulos 1 a 7 abaixo.
ANTICORPOS ANTI-IL13:
[0172] Em um aspecto, a presente invenção fornece anticorpos isolados que se ligam a IL-13 humano.
[0173] Em uma realização, o anticorpo anti-IL-13 compreende um HVR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; um HVR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15; um HVR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16); um HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11; um HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; e um HVR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13.
[0174] Em outra realização, o anticorpo compreende as sequências de região variável de SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 10.
[0175] Em qualquer das realizações acima, um anticorpo anti-IL- 13 pode ser humanizado. Em uma realização, um anticorpo anti-IL-13 compreende HVRs como em qualquer uma das realizações acima e compreende adicionalmente uma estrutura humana receptora, tal como uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana.
[0176] Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-13 compreende uma sequência de domínio variável de cadeia pesada (VH) que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9. Em certas realizações, uma sequência de VH que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (tais como substituições conservadoras), inserções ou exclusões com relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-IL-13 que compreende aquela sequência retém a capacidade de ligar-se a IL-13 humano. Em certas realizações, ao todo, de um a dez aminoácidos foram substituídos, alterados, inseridos e/ou excluídos em SEQ ID NO: 9. Em certas realizações, substituições, inserções ou exclusões ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-IL13 compreende a sequência VH em SEQ ID NO: 9, incluindo modificações daquela sequência após a tradução.
[0177] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-IL-13, em que o anticorpo compreende um domínio variável de cadeia leve (VL) que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10. Em certas realizações, uma sequência de VH que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (tais como substituições conservadoras), inserções ou exclusões com relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-IL-13 que compreende aquela sequência retém a capacidade de ligar-se a IL-13. Em certas realizações, ao todo, de um a dez aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou excluídos em SEQ ID NO: 10. Em certas realizações, as substituições, inserções ou exclusões ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-IL-13 compreende a sequência VL em SEQ ID NO: 10, incluindo modificações daquela sequência após a tradução.
[0178] Em ainda outra realização, o anticorpo anti-IL-13 compreende uma região VL que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 e uma região VH que possui pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequências com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9. Em ainda outra realização, o anticorpo anti-IL-13 compreende um HVR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 14; um HVR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 15; um HVR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 16); um HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11; um HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; e um HVR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13.
[0179] Em outro aspecto, é fornecido um anticorpo anti-IL-13, em que o anticorpo compreende uma VH como em qualquer das realizações fornecidas acima e uma VL como em qualquer das realizações fornecidas acima.
[0180] Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo de um anticorpo anti-IL-13 fornecido no presente. Em certas realizações, é fornecido, por exemplo, um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo ou pode ser completamente inibido por um um anticorpo anti-IL-13 que compreende uma sequência VH de SEQ ID NO: 9 e uma sequência VL de SEQ ID NO: 10.
[0181] Em um aspecto adicional da presente invenção, um anticorpo anti-IL-13 de acordo com qualquer das realizações acima pode ser um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma realização, o anticorpo anti-IL13 é um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fv, Fab, Fab’, scFv, diacorpo ou F(ab’)2. Em uma outra realização, o anticorpo é um anticorpo com comprimento total, tal como um anticorpo IgG1 ou IgG4 intacto ou outra classe de anticorpo ou isotipo conforme definido no presente. Segundo uma outra realização, o anticorpo é um anticorpo biespecífico. Em uma realização, o anticorpo biespecífico compreende as HVRs ou compreende as regiões VH e VL descritas acima.
[0182] Em um aspecto adicional, um anticorpo anti-IL-13 de acordo com qualquer das realizações acima pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito nos Capítulos 1 a 7 abaixo.
1. AFINIDADE DE ANTICORPO:
[0183] Em certas realizações, um anticorpo fornecido no presente possui uma constante de dissociação (Kd) de < 1 μM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM ou < 0,001 nM (tal como 10-8 M ou menos, por exemplo de 10-8 M a 10-13 M, tal como de 10-9 M a 10-13 M).
[0184] Em uma realização, Kd é medido por meio de um teste de ligação de antígenos radiomarcados (RIA) realizado com a versão Fab de um anticorpo de interesse e seu antígeno conforme descrito pelo teste a seguir. A afinidade de ligação de soluções de Fabs para antígeno é medida por meio de equilíbrio de Fab com uma concentração mínima de antígeno marcado com (125I) na presença de uma série de titulação de antígeno não marcado e captura em seguida de antígeno ligado com uma placa revestida com anticorpo anti-Fab (vide, por exemplo, Chen et al, J. Mol. Biol. 293: 865-881 (1999)). Para estabelecer condições para o teste, placas com múltiplas cavidades MICROTITER® (Thermo Scientific) são revestidas por uma noite com 5 μg/ml de anticorpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) em 50 mM de carbonato de sódio (pH 9,6) e bloqueadas em seguida com albumina de soro bovino a 2% (p/v) em PBS por duas a cinco horas à temperatura ambiente (cerca de 23 °C). Em uma placa não adsorvente (Nunc n° 269620), 100 pM ou 26 pM de antígeno [125I] são misturados com diluições em série de um Fab de interesse (tal como consistente com a determinação do anticorpo anti-VEGF, Fab-12, em Presta et al, Cancer Res. 57: 4593-4599 (1997)). O Fab de interesse é incubado em seguida por uma noite; a incubação pode prosseguir, entretanto, por um período mais longo (tal como cerca de 65 horas) para garantir que o equilíbrio seja atingido. Em seguida, as misturas são transferidas para a placa de captura para incubação à temperatura ambiente (tal como por uma hora). A solução é removida em seguida e a placa é lavada por oito vezes com 0,1% polissorbato 20 (TWEEN 20®) em PBS. Após a secagem das placas, adiciona- se 150 μl/cavidade de cintilante (MICROSCINT 20®; Packard) e as placas são contadas em um contador gama TOPCOUNT® (Packard) por dez minutos. Concentrações de cada Fab que geram 20% ou menos de ligação máxima são selecionadas para uso em testes de ligação competitiva.
[0185] De acordo com uma outra realização, Kd é medido utilizando testes de ressonância de plasma de superfície empregando BIACORE® 2000 ou BIACORE® 3000 (BIAcore, Inc., Piscataway NJ) a 25 °C com lascas de antígeno CM5 imobilizado a cerca de dez unidades de resposta (RU). Resumidamente, lascas de biossensores de dextran carboximetilado (CM5, BIACORE Inc.) são ativadas com cloridrato de N-etil-N’-(3- dimetilaminopropil)-carbodi-imida (EDC) e N-hidroxissuccinimida (NHS) de acordo com as instruções do fornecedor. Antígeno é diluído com 10 mM de acetato de sódio, pH 4,8, até 5 μg/ml (cerca de 0,2 μM) antes da injeção em velocidade de fluxo de 5 μl/minuto para atingir cerca de dez unidades de resposta (RU) de proteína acoplada. Após a injeção de antígeno, 1 M de etanolamina é injetado para bloquear grupos não reagidos. Para medições cinéticas, diluições seriais em duas vezes de Fab (0,78 nM a 500 nM) são injetadas em PBS com 0,05% de tensoativo polissorbato 20 (TWEEN-20®) (PBST) a 25 °C sob velocidade de fluxo de cerca de 25 μl/min. Taxas de associação (kon) e taxas de dissociação (koff) são calculadas utilizando um modelo de ligação Langmuir um a um simples (Software de Avaliação BIACORE® versão 3.2) por meio de configuração simultânea dos sensogramas de associação e dissociação. A constante de dissociação de equilíbrio (Kd) é calculada como razão koff/kon. Vide, por exemplo, Chen et al, J. Mol. Biol. 293: 865-881 (1999). Caso a taxa de associação exceda 106 M-1 s-1 por meio do teste de ressonância de plasma de superfície acima, a taxa de associação pode ser determinada em seguida utilizando um método de resfriamento fluorescente que mede o aumento ou a redução da intensidade de emissão de fluorescência (excitação = 295 nm; emissão = 340 nm, passagem de faixa de 16 nm) a 25 °C de 20 nM de anticorpo de antígeno (forma de Fab) em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno conforme medido em espectrômetro, tal como espectrômetro equipado com fluxo de parada (Aviv Instruments) ou espectrofotômetro SLM-AMINCO® série 8000 (ThermoSpectronic) com uma cubeta agitada.
2. FRAGMENTOS DE ANTICORPOS:
[0186] Em certas realizações, um anticorpo fornecido no presente é um fragmento de anticorpo. Os fragmentos de anticorpos incluem, mas sem limitações, fragmentos de Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv e scFv, bem como outros fragmentos desritos abaixo. Para análise de certos fragmentos de anticorpos, vide Hudson et al, Nat. Med. 9: 129-134 (2003). Para análise de fragmentos de scFv, vide, por exemplo, Pluckthün, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore Eds. (Springer-Verlag, Nova Iorque), págs. 269-315 (1994); vide também WO 93/16185; e Patentes Norte-Americanas n° 5.571.894 e 5.587.458. Para discussão de fragmentos de Fab e F(ab’)2 que compreendem resíduos de epítopos de ligação de receptores salvos e possuem maior meia vida in vivo, vide a Patente Norte- Americana n° 5.869.046.
[0187] Diacorpos são fragmentos de anticorpos com dois locais de ligação de antígenos que podem ser bivalentes ou biespecíficos. Vide, por exemplo, EP 404.097; WO 1993/01161; Hudson et al, Nat. Med. 9: 129-134 (2003); e Hollinger et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90: 6444-6448 (1993). Triacorpos e tetracorpos também são descritos em Hudson et al, Nat. Med. 9: 129-134 (2003).
[0188] Anticorpos com domínio simples são fragmentos de anticorpos que compreendem, no todo ou em parte, o domínio variável de cadeia pesada ou, no todo ou em parte, o domínio variável de cadeia leve de um anticorpo. Em certas realizações, um anticorpo com domínio simples é um anticorpo com domínio simples humano (Domantis, Inc., Waltham MA; vide, por exemplo, a Patente Norte-Americana n° 6.248.516 B1).
[0189] Podem ser elaborados fragmentos de anticorpos por meio de diversos métodos, incluindo, mas sem limitações, digestão proteolítica de um anticorpo intacto, bem como produção por células hospedeiras recombinantes (tais como E. coli ou fago), conforme descrito no presente.
3. ANTICORPOS QUIMÉRICOS E HUMANIZADOS:
[0190] Em certas realizações, um anticorpo fornecido no presente é um anticorpo quimérico. Certos anticorpos quiméricos são descritos, por exemplo, na Patente Norte-Americana n° 4.816.567; e Morrison et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81: 6851-6855 (1984)). Em um exemplo, um anticorpo quimérico compreende uma região variável não humana (tal como uma região variável derivada de camundongo, rato, hamster, coelho ou primata não humano, tal como macaco) e uma região constante humana. Em um exemplo adicional, um anticorpo quimérico é um anticorpo com “classe trocada” no qual a classe ou subclasse foi alterada com relação ao anticorpo parental. Anticorpos quiméricos incluem seus fragmentos de ligação de antígenos.
[0191] Em certas realizações, um anticorpo quimérico é um anticorpo humanizado. Tipicamente, um anticorpo não humano é humanizado para reduzir a imunogenicidade para seres humanos, mantendo ao mesmo tempo a especificidade e afinidade do anticorpo não humano parental. Geralmente, um anticorpo humanizado compreende um ou mais domínios variáveis nos quais HVRs, tais como CDRs (ou suas partes), são derivadas de um anticorpo não humano e FRs (ou suas partes) são derivadas de sequências de anticorpos humanos. Um anticorpo humanizado também compreenderá opcionalmente pelo menos uma parte de uma região constante humana. Em algumas realizações, alguns resíduos de FR em um anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (tal como o anticorpo do qual são derivados os resíduos de HVR), por exemplo, para restaurar ou aumentar a especificidade ou afinidade de anticorpos.
[0192] Anticorpos humanizados e os métodos de sua elaboração são analisados, por exemplo, em Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13: 16191633 (2008) e são adicionalmente descritos, por exemplo, em Riechmann et al, Nature 332: 323-329 (1988); Queen et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 86: 10029-10033 (1989); e Patentes Norte-Americanas n° 5.821.337, 7.527.791, 6.982.321 e 7.087.409; Kashmiri et al, Methods 36: 25-34 (2005) (que descreve enxerto de SDR (a-CDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28: 489-498 (1991) (que descreve “nova formação de superfície”); Dall’Acqua et al, Methods 36: 43-60 (2005) (que descreve “mudança de FR”); e Osbourn et al, Methods 36: 61-68 (2005) e Klimka et al, Br. J. Cancer, 83: 252-260 (2000) (que descreve a abordagem de “seleção orientada” para troca de FR).
[0193] As regiões de estrutura humana que podem ser utilizadas para humanização incluem, mas sem limitações: regiões de estrutura selecionadas utilizando o método de "melhor adequação" (vide, por exemplo, Sims et al, J. Immunol. 151: 2296 (1993)); regiões de estrutura derivadas da sequência de consenso de anticorpos humanos de um subgrupo específico de regiões variáveis de cadeia leve ou pesada (vide, por exemplo, Carter et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 89: 4285 (1992); e Presta et al, J. Immunol., 151: 2623 (1993)); regiões de cadeia principal maduras humanas (que sofreram mutação somática) ou regiões de cadeia principal de linhagem de germens humanos (vide, por exemplo, Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)); e regiões de cadeia principal derivadas de bibliotecas de FR de seleção (vide, por exemplo, Baca et al, J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 (1997); e Rosok et al, J. Biol. Chem. 271: 22611-22618 (1996)).
4. ANTICORPOS HUMANOS:
[0194] Em certas realizações, um anticorpo fornecido no presente é um anticorpo humano. Anticorpos humanos podem ser produzidos utilizando diversos métodos conhecidos na técnica. Anticorpos humanos são descritos de forma geral em van Dijk e van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) e Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20: 450-459 (2008).
[0195] Podem ser preparados anticorpos humanos por meio da administração de imunogenes a um animal transgênico que tenha sido modificado para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta a desafio antigênico. Esses animais contêm tipicamente, no todo ou em parte, os locais de imunoglobulina humana, que substituem os locais de imunoglobulina endógena ou que estão presentes de forma extracromossômica ou integrados aleatoriamente aos cromossomos do animal. Nesses camundongos transgênicos, os locais de imunoglobulina endógena foram, de forma geral, desativados. Para análise de métodos de obtenção de anticorpos humanos de animais transgênicos, vide Lonberg, Nat. Biotech. 23: 1117-1125 (2005). Vide também, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas n° 6.075.181 e 6.150.584, que descrevem tecnologia XENOMOUSE®; Patente Norte-Americana n° 5.770.429, que descreve a tecnologia HUMAB®; Patente Norte-Americana n° 7.041.870, que descreve tecnologia K-M MOUSE®; e o Pedido de Patente Norte-Americano publicado n° US 2007/0061900, que descreve a tecnologia VELOCIMOUSE®). Regiões variáveis humanas de anticorpos intactos gerados por esses animais podem ser adicionalmente modificadas, por exemplo, por meio de combinação com uma região constante humana diferente.
[0196] Podem também ser elaborados anticorpos humanos por meio de métodos com base em hibridoma. Linhagens celulares de mieloma humano e heteromieloma humano/de camundongos também foram descritas para a produção de anticorpos monoclonais humanos (vide, por exemplo, Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984); e Brodeur et al, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, págs. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., Nova Iorque, 1987); e Boerner et al, J. Immunol., 147: 86 (1991)). Os anticorpos humanos gerados por meio da tecnologia de hibridoma de células B humanas também são descritos em Li et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 103: 3557-3562 (2006). Métodos adicionais incluem os descritos, por exemplo, na Patente Norte-Americana n° 7.189.826 (que descreve a produção de anticorpos IgM humanos monoclonais de linhagens de células de hibridoma) e Ni, Xiandai Mianyixue, 26 (4): 265-268 (2006) (que descreve hibridomas humanos). Tecnologia de hibridomas humanos (tecnologia Trioma) também é descrita em Vollmers e Brandlein, Histology and Histopathology, 20 (3): 927-937 (2005) e Vollmers e Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27 (3): 185-91 (2005).
[0197] Anticorpos humanos podem também ser gerados por meio do isolamento de sequências de domínio variável de clone de Fv selecionadas a partir de bibliotecas de exibição de fagos derivadas de seres humanos. Essas sequências de domínios variáveis podem ser combinadas em seguida com um domínio constante humano desejado. Métodos de seleção de anticorpos humanos a partir de bibliotecas de anticorpos são descritos abaixo.
5. ANTICORPOS DERIVADOS DE BIBLIOTECAS:
[0198] Os anticorpos de acordo com a presente invenção podem ser isolados por meio da seleção de bibliotecas combinatórias em busca de anticorpos com a(s) atividade(s) desejada(s). Diversos métodos são conhecidos na técnica, por exemplo, para gerar bibliotecas de exibição de fagos e selecionar essas bibliotecas em busca de anticorpos que possuam as características de ligação desejadas. Esses métodos são analisados, por exemplo, em Hoogenboom et al em Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O’Brien et al, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) e adicionalmente descritos, por exemplo, em McCafferty et al, Nature 348: 552-554; Clackson et al, Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al, J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks e Bradbury em Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al, J. Mol. Biol. 338 (2): 299-310 (2004); Lee et al, J. Mol. Biol. 340 (2): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101 (34): 12467-12472 (2004); e Lee et al, J. Immunol. Methods 284 (1-2): 119-132(2004).
[0199] Em certos métodos de exibição de fagos, repertórios de genes VH e VL são clonados separadamente por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR) e novamente combinados aleatoriamente em bibliotecas de fagos, que podem ser pesquisadas em seguida em busca de fago de ligação de antígenos conforme descrito em Winter et al, Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Fago tipicamente exibe fragmentos de anticorpos, seja na forma de fragmentos de Fv de fita simples (scFv) ou de fragmentos de Fab. Bibliotecas de fontes imunizadas fornecem anticorpos com alta afinidade para o imunogene sem a necessidade de construção de hibridomas. Alternativamente, o repertório nativo pode ser clonado (por exemplo, de seres humanos) para fornecer uma única fonte de anticorpos para uma ampla variedade de antígenos próprios e não próprios sem nenhuma imunização, conforme descrito por Griffiths et al, EMBO J., 12: 725-734 (1993). Por fim, bibliotecas nativas podem também ser elaboradas sinteticamente por meio de clonagem dos segmentos de genes V não redispostos de células haste, utilizando primers de PCR que contêm sequência aleatória para codificar as regiões de CDR3 altamente variáveis e realizar redisposição in vitro conforme descrito por Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992). Publicações de patentes que descrevem bibliotecas de fagos de anticorpos humanos incluem, por exemplo: Patente Norte-Americana n° 5.750.373 e Patentes Norte-Americanas publicadas n° 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 e 2009/0002360.
[0200] Anticorpos ou fragmentos de anticorpos isolados de bibliotecas de anticorpos humanos são considerados anticorpos humanos ou fragmentos de anticorpos humanos no presente.
6. ANTICORPOS MULTIESPECÍFICOS:
[0201] Em certas realizações, um anticorpo fornecido no presente é um anticorpo multiespecífico, tal como um anticorpo biespecífico. Os anticorpos multiespecíficos são anticorpos monoclonais que possuem especificidades de ligação para pelo menos dois locais diferentes. Em certas realizações, uma das especificidades de ligação é para IL-13 e a outra é para qualquer outro antígeno. Em certas realizações, anticorpos biespecíficos podem ligar-se a dois epítopos diferentes de IL-13. Anticorpos biespecíficos podem também ser utilizados para localizar agentes citotóxicos para células. Anticorpos biespecíficos podem ser preparados na forma de anticorpos de comprimento total ou fragmentos de anticorpos.
[0202] Os métodos de elaboração de anticorpos multiespecíficos incluem, mas sem limitações, coexpressão recombinante de dois pares de cadeia leve e cadeia pesada de imunoglobulina que possuem especificidades diferentes (vide Milstein e Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829 e Traunecker et al, EMBO J. 10: 3655 (1991)) e engenharia “botão no orifício” (vide, por exemplo, Patente Norte-Americana n° 5.731.168). Anticorpos multiespecíficos podem também ser preparados por meio da realização de efeitos de direcionamento eletrostático para elaborar moléculas heterodiméricas de Fc de anticorpos (WO 2009/089004A1); retícula de dois ou mais anticorpos ou fragmentos (vide, por exemplo, Patente Norte-Americana n° 4.676.980 e Brennan et al, Science, 229: 81 (1985)); utilizando fechos de leucina para produzir anticorpos biespecíficos (vide, por exemplo, Kostelny et al, J. Immunol., 148 (5): 1547-1553 (1992)); utilizando tecnologia de “diacorpos” para elaborar fragmentos de anticorpos biespecíficos (vide, por exemplo, Hollinger et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 90: 6444-6448 (1993)); e utilizando dímeros Fv de fita simples (sFv) (vide, por exemplo, Gruber et al, J. Immunol., 152: 5368 (1994)); e preparação de anticorpos triespecíficos conforme descrito, por exemplo, em Tutt et al, J. Immunol. 147: 60 (1991).
[0203] São também incluídos no presente anticorpos elaborados com três ou mais locais de ligação de antígenos funcionais, incluindo “anticorpos Octopus” (vide, por exemplo, US 2006/0025576A1).
[0204] O anticorpo ou fragmento do presente também inclui um “FAb de Ação Dupla” ou “DAF” que compreende um local de ligação de antígenos que se liga a IL-13, bem como um outro antígeno diferente (vide, por exemplo, US 2008/0069820).
7. VARIANTES DE ANTICORPOS:
[0205] Em certas realizações, são contempladas variantes de sequências de aminoácidos dos anticorpos fornecidos no presente. Pode ser desejável, por exemplo, aprimorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo. Variantes de sequências de aminoácidos de um anticorpo podem ser preparadas por meio da introdução de modificações apropriadas na sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo, ou por meio da síntese de peptídeos. Essas modificações incluem, por exemplo, exclusões e/ou inserções e/ou substituições de resíduos nas sequências de aminoácidos do anticorpo. Qualquer combinação de exclusão, inserção e substituição pode ser feita para chegar à construção final, desde que a construção final possua as características desejadas, tais como ligação de antígenos. VARIANTES DE SUBSTITUIÇÃO, INSERÇÃO E EXCLUSÃO:
[0206] Em certas realizações, são fornecidas variantes de anticorpos que contêm uma ou mais substituições de aminoácidos. Locais de interesse para mutagênese de substituição incluem HVRs e FRs. Substituições conservadoras são exibidas na Tabela 1 sob o título “substituições conservadoras”. Alterações mais substanciais são fornecidas na Tabela 1 com o título “exemplos de substituições” e conforme descrito adicionalmente abaixo com referência a classes de cadeias laterais de aminoácidos. Substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em um anticorpo de interesse e os produtos são selecionados para determinar uma atividade desejada, tal como ligação de antígenos retida/aprimorada, redução da imunogenicidade ou aumento de ADCC ou CDC.
Figure img0001
[0207] Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com as propriedades de cadeia lateral comuns: (1) hidrofóbicos: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) ácidos: Asp, Glu; (4) básicos: His, Lys, Arg; (5) resíduos que influenciam a orientação de cadeias: Gly, Pro; e (6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.
[0208] Substituições não conservadoras causarão a substituição de um membro de uma dessas classes por outra classe.
[0209] Um tipo de variante de substituição envolve a substituição de um ou mais resíduos da região hipervariável de um anticorpo parental (por exemplo, anticorpo humano ou humanizado). Geralmente, a(s) variante(s) resultante(s) selecionada(s) para estudo adicional conterá(ão) modificações (tais como melhorias) em certas propriedades biológicas (tais como aumento da afinidade e redução da imunogenicidade) com relação ao anticorpo parental e/ou possuirão certas propriedades biológicas substancialmente retidas do anticorpo parental. Um exemplo de variante de substituição é um anticorpo amadurecido por afinidade, que pode ser gerado convenientemente, utilizando, por exemplo, métodos de amadurecimento por afinidade com base em exibição de fagos, tais como os descritos no presente. Resumidamente, um ou mais resíduos de HVR sofreram mutação e os anticorpos variantes são exibidos sobre fago e selecionados por uma atividade biológica específica (tal como afinidade de ligação).
[0210] Podem ser elaboradas alterações (tais como substituições) em HVRs, por exemplo, para aumentar a afinidade de anticorpo. Essas alterações podem ser feitas em “pontos quentes” de HVR, ou seja, resíduos codificados por códons que sofrem mutação sob alta frequência durante o processo de amadurecimento somático (vide, por exemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179-196 (2008)) e/ou SDRs (a-CDRs), em que a variante resultante VH ou VL é testada para determinar a afinidade de ligação. O amadurecimento por afinidade por meio da construção e nova seleção de bibliotecas secundárias foi descrito, por exemplo, em Hoogenboom et al em Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O’Brien et al, Ed., Human Press, Totowa NJ (2001)). Em algumas realizações de amadurecimento por afinidade, a diversidade é introduzida nos genes variáveis selecionados para determinar o amadurecimento por qualquer um dentre uma série de métodos (tais como PCR à prova de erros, alteração de cadeias ou mutagênese dirigida a oligonucleotídeos). É criada em seguida uma biblioteca secundária. A biblioteca é selecionada em seguida para identificar quaisquer variantes de anticorpos com a afinidade desejada. Um outro método de introdução da diversidade envolve abordagens dirigidas a HVR, em que diversos resíduos de HVR (tais como quatro a seis resíduos de cada vez) são aleatorizados. Resíduos de HVR envolvidos na ligação de antígenos podem ser especificamente identificados, utilizando, por exemplo, modelagem ou mutagênese de varrimento de alanina. CDR-H3 e CDR-L3 são particularmente dirigidos frequentemente.
[0211] Em certas realizações, substituições, inserções ou exclusões podem ocorrer em até um ou mais HVRs, desde que essas alterações não reduzam substancialmente a capacidade do anticorpo de ligar antígeno. Alterações conservadoras, por exemplo, (tais como substituições conservadoras conforme fornecido no presente), que não reduzem substancialmente a afinidade de ligação podem ser elaboradas em HVRs. Essas alterações podem estar fora de “pontos quentes” de HVR ou SDRs. Em certas realizações das sequências de VH e VL variantes fornecidas acima, cada HVR é inalterado ou contém não mais de uma, duas ou três substituições de aminoácidos.
[0212] Um método útil de identificação de certos resíduos ou regiões de anticorpo que podem ser dirigidos para mutagênese é denominado “mutagênese de varrimento de alanina”, conforme descrito por Cunningham e Wells (1989), Science, 244: 1081-1085. Nesse método, um resíduo ou grupo de resíduos alvo (por exemplo, resíduos carregados, tais como arg, asp, his, lys e glu) é identificado e substituído por um aminoácido neutro ou com carga negativa (tal como alanina ou polialanina) para determinar se é afetada a interação do anticorpo com o antígeno. Substituições adicionais podem ser introduzidas nos locais de aminoácidos que demonstram sensibilidade funcional às substituições iniciais. Alternativa ou adicionalmente, uma estrutura de cristal do complexo de antígeno e anticorpo identifica pontos de contato entre o anticorpo e o antígeno. Esses resíduos de contato e resíduos vizinhos podem ser dirigidos ou eliminados para possível substituição. Variantes podem ser selecionadas para determinar se elas contêm as propriedades desejadas.
[0213] As inserções de sequências de aminoácidos incluem fusões de terminais carboxila e/ou amino que variam de comprimento de um resíduo até polipeptídeos que contêm cem ou mais resíduos, bem como inserções intrassequenciais de resíduos de aminoácidos isolados ou múltiplos. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo com um resíduo de metionila N-terminal. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo incluem a fusão ao terminal N ou C do anticorpo a uma enzima (por exemplo, para ADEPT) ou polipeptídeo que aumente a meia vida do anticorpo em soro.
VARIANTES DE GLICOSILAÇÃO:
[0214] Em certas realizações, um anticorpo fornecido no presente é alterado para aumentar ou reduzir a extensão de glicosilação do anticorpo. A adição ou exclusão de locais de glicosilação para um anticorpo pode ser convenientemente realizada por meio da alteração da sequência de aminoácidos, de tal forma que seja criado ou removido um ou mais locais de glicosilação.
[0215] Quando o anticorpo compreender uma região Fc, o carboidrato a ele ligado pode ser alterado. Os anticorpos nativos produzidos por células de mamíferos compreendem tipicamente um oligossacarídeo biantenário ramificado que geralmente é ligado por uma ligação N a Asn297 do domínio CH2 da região Fc. Vide, por exemplo, Wright et al, TIBTECH 15: 26-32 (1997). O oligossacarídeo pode incluir vários carboidratos, tais como manose, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, bem como uma fucose ligada a um GlcNAc na “haste” da estrutura de oligossacarídeo biantenária. Em algumas realizações, podem ser elaboradas modificações do oligossacarídeo em um anticorpo de acordo com a presente invenção, a fim de criar variantes de anticorpos com certas propriedades aprimoradas.
[0216] Em uma realização, são fornecidas variantes de anticorpos que possuem uma estrutura de carboidrato que não contém fucose ligada (direta ou indiretamente) a uma região Fc. A quantidade de fucose nesse anticorpo pode ser, por exemplo, de 1% a 80%, de 1% a 65%, de 5% a 65% ou de 20% a 40%. A quantidade de fucose é determinada por meio do cálculo da quantidade média de fucose na cadeia de açúcar em Asn297, com relação à soma de todas as glicoestruturas ligadas a Asn 297 (tais como estruturas com alto teor de manose híbridas e complexas) conforme medido por meio de espectrometria de massa MALDI-TOF, conforme descrito, por exemplo, em WO 2008/077546. Asn297 designa o resíduo de asparagina localizado perto da posição 297 na região Fc (numeração Eu de resíduos de região Fc); Asn297 pode também estar localizado, entretanto, a cerca de três aminoácidos acima ou abaixo no fluxo da posição 297, ou seja, entre as posições 294 e 300, devido a variações menores de sequências de anticorpos. Essas variantes de fucosilação podem possuir função ADCC aprimorada. Vide, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas publicadas n° US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Exemplos de publicações relativas a variantes de anticorpos “desfucosilados” ou “com deficiência de fucose” incluem: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al, J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004); e Yamane- Ohnuki et al, Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Exemplos de linhagens celulares que produzem anticorpos defucosilados incluem células CHO de Lec13 com deficiência na fucosilação de proteínas (Ripka et al, Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986); Pedido de Patente Norte-Americano n° US 2003/0157108 A1, Presta, L.; e WO 2004/056312 A1, Adams et al, especialmente no Exemplo 11) e linhagens de células knockout, tais como gene alfa-1,6-fucosiltransferase, FUT8, células de CHO knockout (vide, por exemplo, Yamane-Ohnuki et al, Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al, Biotechnol. Bioeng., 94 (4): 680-688 (2006); e WO 2003/085107).
[0217] Variantes de anticorpos possuem adicionalmente oligossacarídeos bisseccionados, tais como em que um oligossacarídeo biantenário ligado à região Fc do anticorpo é bisseccionado por GlcNAc. Essas variantes de anticorpos podem possuir fucosilação reduzida e/ou função de ADCC aprimorada. Exemplos dessas variantes de anticorpos são descritos, por exemplo, em WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al); Patente Norte-Americana n° 6.602.684 (Umana et al); e US 2005/0123546 (Umana et al). Também são fornecidas variantes de anticorpos com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc. Essas variantes de anticorpos podem possuir função CDC aprimorada. Essas variantes de anticorpos são descritas, por exemplo, em WO 1997/30087 (Patel et al); WO 1998/58964 (Raju, S.); e WO 1999/22764 (Raju, S.).
VARIANTES DE REGIÃO FC:
[0218] Em certas realizações, uma ou mais modificações de aminoácidos podem ser introduzidas na região Fc de um anticorpo fornecido no presente, de forma a gerar uma variante de região Fc. A variante de região Fc pode compreender uma sequência de região Fc humana (tal como região Fc de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 humano) que compreende uma modificação de aminoácidos (tal como substituição) em uma ou mais posições de aminoácidos.
[0219] Em certas realizações, a presente invenção contempla uma variante de anticorpo que possui algumas mas não todas as funções efetoras, o que o torna candidato desejável para aplicações nas quais a meia vida do anticorpo in vivo é importante, mas certas funções efetoras (tais como complemento e ADCC) são desnecessárias ou prejudiciais. Testes de citotoxicidade in vitro e/ou in vivo podem ser conduzidos para confirmar a redução/esgotamento das atividades de CDC e/ou ADCC. Testes de ligação de receptores Fc (FcR), por exemplo, podem ser conduzidos para garantir que o anticorpo não apresente ligação de FCYR (portanto, propenso a não apresentar atividade de ADCC), mas retenha a capacidade de ligação de FcRn. As células primárias para a mediação de ADCC, células NK, expressam unicamente FcRIII, enquanto monócitos expressam FcRI, FcRII e FcRIII. A expressão de FcR sobre células hematopoiéticas é resumida na Tabela 3 da página 464 de Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991). Exemplos não limitadores de testes in vitro para determinar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse são descritos na Patente Norte-Americana n° 5.500.362 (vide, por exemplo, Hellstrom, I. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 83: 70597063 (1986)) e Hellstsrom, I. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 82: 1499-1502 (1985); 5.821.337 (vide Bruggemann, M. et al, J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987)). Alternativamente, podem ser empregados métodos de teste não radioativos (vide, por exemplo, teste de citotoxicidade não radioativo ACTI® para citometria de fluxo (CellTechnology, Inc., Mountain View CA; e teste de citotoxicidade não radioativo CytoTox 96® (Promega, Madison WI). Células efetoras úteis para esses testes incluem células mononucleares sanguíneas periféricas (PBMC) e células Matadoras Naturais (NK). Alternativa ou adicionalmente, a atividade de ADCC da molécula de interesse pode ser determinada in vivo, tal como em um modelo animal como o descrito em Clynes et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 95: 652-656 (1998). Testes de ligação de C1q podem também ser conduzidos para confirmar que o anticorpo é incapaz de ligar C1q e, desta forma, não apresenta atividade de CDC. Vide, por exemplo, ELISA de ligação de C1q e C3c em WO 2006/029879 e WO 2005/100402. Para determinar a ativação do complemento, pode ser realizado teste de CDC (vide, por exemplo, Gazzano-Santoro et al, J. Immunol. Methods 202: 163 (1996); Cragg, M. S. et al, Blood 101: 1045-1052 (2003); e Cragg, M. S. e M. J. Glennie, Blood 103: 2738-2743 (2004)). Determinações de meia vida/liberação in vivo e ligação de FcRn podem também ser realizadas utilizando métodos conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Petkova, S. B. et al, Intl. Immunol. 18 (12): 1759-1769 (2006)).
[0220] Anticorpos com função efetora reduzida incluem aqueles com substituição de um ou mais dos resíduos da região Fc 238, 265, 269, 270, 297, 327 e 329 (Patente Norte-Americana n° 6.737.056). Esses mutantes de Fc incluem mutantes de Fc com substituições em duas ou mais das posições de aminoácidos 265, 269, 270, 297 e 327, incluindo a chamada mutante Fc “DANA” com substituição dos resíduos 265 e 297 por alanina (Patente Norte- Americana n° 7.332.581).
[0221] São descritas certas variantes de anticorpos com maior ou menor ligação a FcRs (vide, por exemplo, a Patente Norte-Americana n° 6.737.056; WO 2004/056312 e Shields et al, J. Biol. Chem. 9 (2): 6591-6604 (2001)).
[0222] Em certas realizações, uma variante de anticorpo compreende uma região Fc com uma ou mais substituições de aminoácidos que aumentam ADCC, tais como substituições nas posições 298, 333 e/ou 334 da região Fc (numeração de resíduos EU).
[0223] Em algumas realizações, são realizadas alterações na região Fc que resultam em ligação de C1q e/ou Citotoxicidade Dependente de Complemento (CDC) alterada (ou seja, aumentada ou reduzida), conforme descrito, por exemplo, na Patente Norte-Americana n° 6.194.551, WO 99/51642 e Idusogie et al, J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
[0224] Anticorpos com maiores meias vidas e ligação aprimorada ao receptor Fc neonatal (FcRn), que é responsável pela transferência de IgGs maternos para o feto (Guyer et al, J. Immunol. 117: 587 (1976); e Kim et al, J. Immunol. 24: 249 (1994)), são descritos em US 2005/0014934A1 (Hinton et al). Estes anticorpos compreendem uma região Fc com uma ou mais substituições que aumentam a ligação da região Fc a FcRn. Essas variantes de Fc incluem aquelas com substituições em um ou mais dos resíduos da região Fc: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 ou 434, tais como substituição do resíduo da região Fc 434 (Patente Norte- Americana n° 7.371.826).
[0225] Vide também Duncan & Winter, Nature 322: 738-40 (1988); Patente Norte-Americana n° 5.648.260; Patente Norte-Americana n° 5.624.821; e WO 94/29351 com referência a outros exemplos de variantes de região Fc.
VARIANTES DE ANTICORPOS ELABORADOS COM CISTEÍNA:
[0226] Em certas realizações, pode ser desejável criar anticorpos elaborados com cisteína, tais como “tioMAbs”, em que um ou mais resíduos de um anticorpo são substituídos por resíduos de cisteína. Em realizações específicas, os resíduos substituídos ocorrem em locais acessíveis do anticorpo. Substituindo esses resíduos por cisteína, grupos tiol reativos são posicionados, portanto, em locais acessíveis do anticorpo e podem ser utilizados para conjugar o anticorpo a outras porções, tais como porções de drogas ou porções de droga e ligante, para criar um imunoconjugado, conforme descrito adicionalmente no presente. Em certas realizações, qualquer um ou mais dos resíduos a seguir podem ser substituídos por cisteína: V205 (numeração de Kabat) da cadeia leve; A118 (numeração EU) da cadeia pesada; e S400 (numeração EU) da região Fc de cadeia pesada. Anticorpos elaborados com cisteína podem ser gerados conforme descrito, por exemplo, na Patente Norte-Americana n° 7.521.541.
DERIVADOS DE ANTICORPOS:
[0227] Em certas realizações, um anticorpo fornecido no presente pode ser adicionalmente modificado para que contenha porções não proteináceas adicionais que são conhecidas na técnica e facilmente disponíveis. As porções apropriadas para derivação do anticorpo incluem, mas sem limitações, polímeros hidrossolúveis. Exemplos não limitadores de polímeros hidrossolúveis incluem, mas sem limitações, polietileno glicol (PEG), copolímeros de etileno glicol e propileno glicol, carboximetilcelulose, dextran, álcool polivinílico, polivinil pirrolidona, póli-1,3-dioxolano, póli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno e anidrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros ou copolímeros aleatórios) e dextran ou póli(n-vinil pirrolidona) polietileno glicol, homopolímeros de propropileno glicol, copolímeros de óxido de polipropileno e óxido de etileno, polióis polioxietilados (tais como glicerol), álcool polivinílico e suas misturas. Propionaldeído de polietileno glicol pode apresentar vantagens de fabricação devido à sua estabilidade em água. O polímero pode ser de qualquer peso molecular e pode ser ramificado ou não ramificado. A quantidade de polímeros ligados ao anticorpo pode variar e, caso mais de um polímero seja ligado, eles podem ser moléculas idênticas ou diferentes. Geralmente, a quantidade e/ou o tipo de polímeros utilizados para derivação podem ser determinados com base em considerações que incluem, mas sem limitações, as propriedades ou funções específicas do anticorpo a ser aprimorado, se o derivado de anticorpo será utilizado em terapia sob condições definidas etc.
[0228] Em uma outra realização, são fornecidos conjugados de um anticorpo e porção não proteinácea que podem ser seletivamente aquecidos por meio de exposição à radiação. Em uma realização, a porção não proteinácea é um nanotubo de carbono (Kam et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102: 11600-11605 (2005)). A radiação pode ser de qualquer comprimento de onda e inclui, mas sem limitações, comprimentos de onda que não prejudicam células comuns, mas que aquecem a porção não proteinácea até uma temperatura na qual células próximas da porção não proteinácea de anticorpos são mortas.
COMPOSIÇÕES E MÉTODOS RECOMBINANTES:
[0229] Anticorpos podem ser produzidos utilizando composições e métodos recombinantes, tal como conforme descrito na Patente Norte- Americana n° 4.816.567. Em uma realização, é fornecido um ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo antiperiostina descrito no presente. Esse ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência VL e/ou de aminoácidos que compreende o VH do anticorpo (tais como as cadeias leve e/ou pesada do anticorpo). Em uma realização adicional, são fornecidos um ou mais vetores (tais como vetores de expressão) que compreendem esse ácido nucleico. Em uma realização adicional, é fornecida uma célula hospedeira que compreende esse ácido nucleico. Em uma dessas realizações, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com): (1) um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende o VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos que compreende o VH do anticorpo; ou (2) um primeiro vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende o VL do anticorpo e um segundo vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende o VH do anticorpo. Em uma realização, a célula hospedeira é eucariótica, tal como uma célula de Ovário de Hamster Chinês (CHO) ou célula linfoide (tal como célula Y0, NS0, Sp20). Em uma realização, é fornecido um método de elaboração de um anticorpo antiperiostina, em que o método compreende o cultivo de uma célula hospedeira que compreende um ácido nucleico que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições apropriadas para a expressão do anticorpo, e recuperação opcional do anticorpo da célula hospedeira (ou meio de cultivo de células hospedeiras).
[0230] Para produção recombinante de um anticorpo antiperiostina, ácido nucleico que codifica um agente impulsionador, tal como conforme descrito acima, é isolado e inserido em um ou mais vetores para clonagem e/ou expressão adicional em uma célula hospedeira. Esse ácido nucleico pode ser facilmente isolado e sequenciado utilizando procedimentos convencionais (utilizando-se, por exemplo, sondas de oligonucleotídeos que sejam capazes de ligar-se especificamente a genes codificadores das cadeias pesada e leve do anticorpo).
[0231] Células hospedeiras apropriadas para clonagem ou expressão de vetores que codificam anticorpos incluem células eucarióticas ou procarióticas descritas no presente. Anticorpos podem ser produzidos, por exemplo, em bactérias, particularmente quando não forem necessárias glicosilação e função efetora de Fc. Para a expressão de fragmentos de anticorpos e polipeptídeos em bactérias, vide, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas n° 5.648.237, 5.789.199 e 5.840.523 (vide também Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa NJ, 2003), págs. 245-254, que descreve a expressão de fragmentos de anticorpos em E. coli). Após a expressão, o anticorpo pode ser isolado da pasta de células bacterianas em uma fração solúvel e pode ser adicionalmente purificado.
[0232] Além de procariotes, micróbios eucarióticos tais como leveduras ou fungos filamentosos são hospedeiros de expressão ou clonagem apropriados para vetores codificadores de anticorpos, incluindo linhagens de fungos e leveduras cujos processos de glicosilação tenham sido “humanizados”, o que resulta na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação total ou parcialmente humano. Vide Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004) e Li et al, Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006).
[0233] As células hospedeiras apropriadas para a expressão de anticorpo glicosilado também são derivadas de organismos multicelulares (vertebrados e invertebrados). Exemplos de células de invertebrados incluem células de plantas e de insetos. Foram identificadas numerosas linhagens bacilovirais que podem ser utilizadas em conjunto com células de insetos, particularmente para transfecção de células de Spodoptera frugiperda.
[0234] Cultivos de células vegetais podem também ser utilizados como hospedeiros. Vide, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas n° 5.959.177, 6.040.498, 6.420.548, 7.125.978 e 6.417.429 (que descrevem tecnologia PLANTIBODIES® para a produção de anticorpos em plantas transgênicas).
[0235] Células de vertebrados podem também ser utilizadas como hospedeiros. Linhagens de células de mamíferos que são adaptadas para crescimento em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos de linhagens de células hospedeiras de mamíferos úteis são linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem de rim embriônico humano (células 293 ou 293 conforme descrito, por exemplo, em Graham et al, J. Gen. Virol. 36: 59 (1977)); células de rim de filhote de hamster (BHK); células sertoli de camundongo (células TM4 conforme descrito, por exemplo, em Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980); células de rim de macaco (CV1); células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma da cervical humano (HELA); células de rim canino (MDCK; células do fígado de ratos búfalo (BRL 3A); células do pulmão humano (W138); células do fígado humano (Hep G2); tumor mamário de camundongos (MMT 060562); células TRI, conforme descrito, por exemplo, em Mather et al, Annals N. Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982); células MRC 5; e células FS4. Outras linhagens de células hospedeiras de mamíferos úteis incluem células de ovário de hamster chinês (CHO), incluindo células CHO DHFR- (Urlaub et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 77: 4216 (1980)); e linhagens de células de mieloma tais como Y0, NS0 e Sp2/0. Para análise de certas linhagens de células de hospedeiros mamíferos apropriadas para a produção de anticorpos, vide, por exemplo, Yazaki e Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa NJ), págs. 255-268 (2003).
TESTES:
[0236] Os anticorpos antiperiostina fornecidos no presente podem ser identificados, selecionados ou caracterizados pelas suas propriedades físico-químicas e/ou atividades biológicas por meio de vários testes conhecidos na técnica.
TESTES DE LIGAÇÃO E OUTROS TESTES:
[0237] Em um aspecto, um anticorpo de acordo com a presente invenção é testado para determinar a sua atividade de ligação de antígenos, por exemplo, por meio de métodos conhecidos tais como ELISA, Western Blot etc.
[0238] Em outro aspecto, podem ser utilizados testes de competição para identificar um anticorpo que compita com IL-13 ou periostina pela ligação a IL13 ou periostina, respectivamente. Em certas realizações, esse anticorpo competidor liga-se ao mesmo epítopo (tal como um epítopo linear ou de conformação) que é ligado por lebrikizumab ou outro anticorpo anti-IL13 especificado no presente ou anticorpo antiperiostina especificado no presente. Exemplos detalhados de métodos de mapeamento de epítopos aos quais se liga um anticorpo são fornecidos em Morris (1996), Epitope Mapping Protocols em Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa NJ).
[0239] Em um exemplo de teste de competição, periostina imobilizada é incubada em uma solução que compreende um primeiro anticorpo marcado que se liga a periostina (tal como 25D4) e um segundo anticorpo não marcado que está sendo testado para determinar a sua capacidade de competir com o primeiro anticorpo pela ligação a periostina. O segundo anticorpo pode estar presente em um sobrenadante de hibridoma. Como controle, periostina imobilizada é incubada em uma solução que compreende o primeiro anticorpo marcado, mas não o segundo anticorpo não marcado. Após a incubação sob condições que permitam a ligação do primeiro anticorpo a periostina, o excesso de anticorpo não ligado é removido e é medida a quantidade de marca associada a periostina imobilizada. Se a quantidade de marca associada a periostina imobilizada for substancialmente reduzida na amostra de teste com relação à amostra controle, isso indica que o segundo anticorpo está concorrendo com o primeiro anticorpo pela ligação a periostina. Vide Harlow e Lane (1988), Antibodies: A Laboratory Manual, cap. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
TESTES DE ATIVIDADE:
[0240] Em um aspecto, são fornecidos testes de identificação de anticorpos anti-IL-13 que possuem atividade biológica. A atividade biológica pode incluir, por exemplo, atividade em asma. Também são fornecidos anticorpos que possuem essa atividade biológica in vivo e/ou in vitro.
[0241] Em certas realizações, um anticorpo de acordo com a presente invenção é testado para determinar essa atividade biológica.
IMUNOCONJUGADOS:
[0242] A presente invenção também fornece imunoconjugados que compreendem um anticorpo antiperiostina conjugado no presente a um ou mais agentes citotóxicos, tais como agentes quimioterapêuticos ou drogas, agentes inibidores do crescimento, toxinas (tais como toxinas de proteínas, toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, ou seus fragmentos) ou isótopos radioativos.
[0243] Em uma realização, um imunoconjugado é um conjugado de droga e anticorpo (ADC) no qual um anticorpo é conjugado a uma ou mais drogas, que incluem, mas sem limitações, um maitansinoide (vide as Patentes Norte-Americanas n° 5.208.020, 5.416.064 e Patente Europeia n° EP 0.425.235 B1); uma auristatina tal como as porções de droga monometilauristatina DE e DF (MMAE e MMAF) (vide as Patentes Norte-Americanas n° 5.635.483, 5.780.588 e 7.498.298); dolastatina; uma caliqueamicina ou seu derivado (vide as Patentes Norte-Americanas n° 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116, 5.767.285, 5.770.701, 5.770.710, 5.773.001 e 5.877.296; Hinman et al, Cancer Res. 53: 3336-3342 (1993); e Lode et al, Cancer Res. 58: 2925-2928 (1998)); uma antraciclina tal como daunomicina ou doxorubicina (vide Kratz et al, Current Med. Chem. 13: 477-523 (2006); Jeffrey et al, Bioorganic & Med. Chem. Letters 16: 358-362 (2006); Torgov et al, Bioconj. Chem. 16: 717-721 (2005); Nagy et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97: 829-834 (2000); Dubowchik et al, Bioorg. & Med. Chem. Letters 12: 1529-1532 (2002); King et al, J. Med. Chem. 45: 4336-4343 (2002); e Patente Norte-Americana n° 6.630.579); metotrexato; vindesina; um taxano tal como docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel e ortataxel; tricoteceno; e CC1065.
[0244] Em uma outra realização, um imunoconjugado compreende um anticorpo conforme descrito no presente conjugado a uma toxina enzimaticamente ativa ou seu fragmento, incluindo, mas sem limitações, cadeia de difteria A, fragmentos ativos não de ligação de toxina de difteria, cadeia de exotoxina A (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia rícina A, cadeia de abrina A, cadeia modeccina A, alfassarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII e PAP-S), inibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina e os tricotecenos.
[0245] Em uma outra realização, um imunoconjugado compreende um anticorpo conforme descrito no presente, conjugado a um átomo radioativo para formar um radioconjugado. Uma série de isótopos radioativos é disponível para a produção de radioconjugados. Exemplos incluem At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu. Quando o radioconjugado for utilizado para detecção, ele pode compreender um átomo radioativo para estudos cintigráficos, tal como tc99m ou I123, ou marca de centrifugação para formação de imagens por meio de ressonância magnética nuclear (NMR) (também conhecida como formação de imagens por ressonância magnética, MRI), tal como novamente iodo-123, iodo-131, índio-111, flúor-19, carbono-13, nitrogênio-15, oxigênio-17, gadolínio, manganês ou ferro.
[0246] Os conjugados de um anticorpo e agente citotóxico podem ser fabricados utilizando uma série de agentes acopladores de proteínas bifuncionais, tais como propionato de N-succinimidil-3-(2-piridilditiol) (SPDP), ciclo-hexano-1-carboxilato de succinimidil-4-(N-maleimidometila) (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésteres (tais como adipimidato de dimetila HCl), ésteres ativos (tais como suberato de dissuccinimidila), aldeídos (tais como glutaraldeído), compostos bisazido (tais como bis(p- azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bisdiazônio (tais como bis-(p- diazoniobenzoil)-etilenodiamina), di-isocianatos (tais como 2,6-di-isocianato de tolueno) e compostos de flúor bisativo (tais como 1,5-difluoro-2,4- dinitrobenzeno). Imunotoxina rícina pode ser preparada, por exemplo, conforme descrito em Vitetta et al, Science 238: 1098 (1987). Ácido 1-isotiocianatobenzil- 3-metildietileno triaminopenta-acético marcado por carbono 14 (MX-DTPA) é um exemplo de agente quelante para conjugação de radionucleotídeo ao anticorpo. Vide WO 94/11026. O ligante pode ser um “ligante divisível” que possibilita a liberação de uma droga citotóxica na célula. Pode-se utilizar, por exemplo, um ligante instável ácido, ligante sensível a peptidase, ligante fotoinstável, ligante de dimetila ou ligante contendo dissulfeto (Chari et al, Cancer Res. 52: 127-131 (1992); Patente Norte-Americana n° 5.208.020).
[0247] Os imunoconjugados ou ADCs contemplam expressamente no presente, mas sem limitações, os conjugados preparados com reagentes reticulantes, que incluem, mas sem limitações, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo- SMCC, sulfo-SMPB e SVSB (benzoato de succinimidil-(4-vinilsulfona)) que são disponíveis comercialmente (tal como por meio da Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL, Estados Unidos).
MÉTODOS E COMPOSIÇÕES DIAGNÓSTICOS E DETECÇÃO:
[0248] Em certas realizações, qualquer um dos anticorpos antiperiostina fornecidos no presente é útil para detectar a presença de periostina em amostras biológicas. O termo “detecção”, da forma utilizada no presente, engloba detecção qualitativa ou quantitativa. Em certas realizações, amostras biológicas compreendem uma célula ou tecido, tal como soro, plasma, swabs nasais e saliva.
[0249] Em uma realização, é fornecido um anticorpo antiperiostina para uso em um método de detecção ou diagnósico. Em um aspecto adicional, é fornecido um método de detecção da presença de periostina em uma amostra biológica. Em certas realizações, o método compreende o contato da amostra biológica com um anticorpo antiperiostina conforme descrito no presente sob condições permissivas para ligação do anticorpo antiperiostina a periostina e detecção se é formado um complexo entre o anticorpo antiperiostina e periostina. Esse método pode ser um método in vitro ou in vivo. Em uma realização, um anticorpo antiperiostina é utilizado para selecionar pacientes propensos a terapia com anticorpo anti-I3 ou qualquer outro inibidor da Via de TH2, tal como em que periostina é um biomarcador para seleção de pacientes.
[0250] Exemplos de distsúrbios que podem ser diagnosticados utilizando um anticorpo de acordo com a presente invenção são fornecidos no presente.
[0251] Em certas realizações, são fornecidos anticorpos antiperiostina marcados. As marcas incluem, mas sem limitações, marcas ou porções que são detectadas diretamente (tais como marcas fluorescentes, cromofóricas, densas em elétrons, quimioluminescentes e radioativas), bem como porções, tais como enzimas ou ligantes, que são detectadas indiretamente, tal como por meio de reação enzimática ou interação molecular. Exemplos dessas marcas incluem, mas sem limitações, os radioisótopos 32P, 14C, 125I, 3H e 131I, fluoroforos tais como quelatos de terra rara ou fluoresceína e seus derivados, rodamina e seus derivados, dansil, umbeliferona, luceriferases, tais como luciferase de vaga-lume e luciferase bacteriana (Patente Norte-Americana n° 4.737.456), luciferina, 2,3-di- hidroftalazinodionas, peroxidase de rabanete silvestre (HRP), fosfatase alcalina, β-galactosidase, glucoamilase, lisozima, sacarídeo oxidases, tais como glicose oxidase, galactose oxidase e glicose-6-fosfato desidrogenase, oxidases heterocíclicas tais como uricase e xantino oxidase, acopladas a uma enzima que emprega peróxido de hidrogênio para oxidar precursor de tintura tal como HRP, lactoperoxidase ou microperoxidase, biotina/avidina, marcas de centrifugação, marcas de bacteriófagos, radicais livres estáveis e similares.
FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS:
[0252] Formulações farmacêuticas de um anticorpo anti-IL-13 ou outros inibidores da via de TH2, conforme descritos no presente, são preparados por meio da mistura desse anticorpo ou molécula que possui o grau desejado de pureza com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16a edição, Osol, A., Ed.: (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Veículos farmaceuticamente aceitáveis geralmente são atóxicos para os pacientes nas dosagens e concentrações empregadas e incluem, mas sem limitações: tampões tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes que incluem ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; álcool fenólico, butílico ou benzílico; alquil parabens tais como metil ou propil paraben; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos com baixo peso molecular (menos de cerca de dez resíduos); proteínas, tais como albumina de soro, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sais tais como sódio; complexos metálicos (tais como complexos de proteína e Zn); e/ou tensoativos não iônicos, tais como polietileno glicol (PEG). Exemplos de veículos farmaceuticamente aceitáveis no presente incluem ainda agentes de dispersão de drogas intersticiais tais como glicoproteínas de hialuronidase ativas neutras solúveis (sHASEGP), como glicoproteínas de hialuronidase PH-20 solúveis humanas, tais como rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.) Certos exemplos de sHASEGPs e métodos de uso, incluindo rHuPH20, são descritos nas Patentes Norte-Americanas publicadas n° 2005/0260186 e 2006/0104968. Em um aspecto, um sHASEGP é combinado com uma ou mais glicosaminoglicanases adicionais, tais como condroitinases.
[0253] Exemplos de formulações de anticorpos liofilizadas encontram-se descritos na Patente Norte-Americana n° 6.267.958. Formulações de anticorpos aquosas incluem as descritas na Patente Norte- Americana n° 6.171.586 e WO 2006/044908, em que estas últimas formulações incluem um tampão de acetato de histidina.
[0254] A formulação do presente pode também conter mais de um ingrediente ativo conforme o necessário para a indicação específica sendo tratada, preferencialmente aqueles com atividades complementares que não se prejudiquem entre si. Pode ser desejável, por exemplo, fornecer adicionalmente um controlador com o inibidor da via de TH2. Esses ingredientes ativos encontram-se adequadamente presentes em combinação, em quantidades que são eficazes para o propósito pretendido.
[0255] Os ingredientes ativos podem ser capturados em microcápsulas preparadas, por exemplo, por métodos de aglutinação ou por polimerização interfacial, tais como microcápsulas de hidroximetilcelulose ou gelatina e microcápsulas de póli(metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de fornecimento de drogas coloidais (tais como lipossomos, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Esses métodos são descritos em Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16a edição, Osol, A., Ed. (1980).
[0256] Podem ser fabricadas preparações de liberação prolongada. Exemplos apropriados de preparações de liberação prolongada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos que contêm o anticorpo, em que as matrizes se encontram na forma de artigos moldados, tais como filmes ou microcápsulas.
[0257] As formulações a serem utilizadas para administração in vivo são geralmente estéreis. A esterilidade pode ser facilmente obtida, por exemplo, por meio de filtragem através de membranas de filtragem estéreis.
COMPOSIÇÕES E MÉTODOS TERAPÊUTICOS:
[0258] Inflamações eosinofílicas são associadas a uma série de doenças, tanto alérgicas quanto não alérgicas (Gonlugur (2006), Immunol. Invest. 35 (1): 29-45). A inflamação é uma reação restauradora de tecidos vivos a lesões. Uma característica de reações inflamatórias é o acúmulo de leucócitos em tecidos lesionados devido a certas substâncias produzidas no próprio tecido. Leucócitos de eosinófilos acumulam-se em uma ampla variedade de condições, tais como distúrbios alérgicos, infecções helmínticas e doenças neoplásticas (Kudlacz et al (2002), Inflammation 26: 111-119). Leucócitos de eosinófilos, um componente do sistema imunológico, são elementos defensivos de superfícies da mucosa. Eles reagem não apenas a antígenos, mas a parasitas, substâncias e traumas.
[0259] Eosinofilia de tecidos ocorre em doenças da pele tais como eczema, pênfigo, urticária aguda e necrólise epidérmica tóxica, bem como em dermatite atópica (Rzany et al, 1996). Eosinófilos acumulam-se no tecido e proteínas de grânulos vazias em reações da pele alérgicas mediadas por IgE (Nielsen et al, 2001). Eosinófilos combinados com células mastro são propensos a causar inflamações das juntas (Miossec et al, 1997). Inflamações eosinofílicas às vezes acompanham traumas das juntas. Eosinofilia do fluido sinovial pode ser associada a doenças tais como artrite reumatoide, doenças parasíticas, síndrome hipereosinofílica, mal de Lyme e processos alérgicos, bem como hemartrose e artrografia (Atanes et al, 1996). Inflamações eosinofílicas podem também afetar os ossos (Yetiser et al, 2002). Exemplos de doenças musculares eosinofílicas incluem perimiosite eosinofílica, polimiosite eosinofílica e miosite eosinofílica focal (Lakhanpal et al, 1988). Inflamações eosinofílicas que afetam músculos do esqueleto podem ser associadas a infecções parasitas, drogas ou características de alguns distúrbios sistêmicos de hipereosinofilia (tais como síndrome hipereosinofílica idiopática e síndrome de eosinofilia-mialgia). Eosinófilos participam da reação inflamatória a epítopos reconhecidos por anticorpos autoimunes (Engineer et al, 2001). Doenças de tecidos conjuntivos podem gerar inflamações vasculares neutrofílicas, eosinofílicas ou linfocíticas (Chen et al, 1996). Eosinofilia de tecidos e sangue periférico pode ocorrer em doenças de reumatismo ativas. A elevação dos níveis de ECP no soro em espondilite anquilosante, um tipo de doença dos tecidos conjuntivos, sugere que eosinófilos também estão envolvidos no processo subjacente (Feltelius et al, 1987). Granulomatose de Wegener pode raramente estar presente com nódulos pulmonares, efusão da pleura e eosinofilia do sangue periférico (Krupsky et al, 1993).
[0260] Eosinofilia do sangue periférico de pelo menos 400/mm3 pode ocorrer em 7% dos casos de esclerose sistêmica, 31% dos casos de escleroderma localizado e 61% dos casos de fascite eosinofílica (Falanga e Medsger, 1987). Escleroderma gera um processo inflamatório que lembra muito os plexos de Meissner e Auerbach e consiste de células mastro e leucócitos eosinofílicos no sistema gastrointestinal. Neurotoxinas derivadas de eosinófilos podem contribuir com distúrbios motores gastrointestinais, como ocorre em escleroderma (de Schryver Kecskemeti e Clouse, 1989).
[0261] Eosinófilos podem acompanhar a proliferação de tecidos conjuntivos localizada (Varga e Kahari, 1997) ou sistêmica (Bouros et al, 2002). Eles podem incitar a fibrose inibindo a degradação de proteoglicano em fibroblastas (Hernnas et al, 1992) e fibroblastas mediam a sobrevivência de eosinófilos por meio da secreção de GM-CSF (Vancheri et al, 1989). Eosinófilos podem ser encontrados em tecidos de pólipos nasais (Bacherct et al, 2001), dos brônquios (Arguelles e Blanco, 1983) e gastrointestinais (Assarian e Sundareson, 1985). De forma similar, eosinófilos podem estar localizados em pseudotumores inflamatórios (tumor miofibroblástico). Eosinófilos frequentemente acompanham pseudotumores inflamatórios na região orbital e, neste caso, a condição pode imitar angioedema ou rinoconjuntivite alérgica (Li et al, 1992).
[0262] Inflamações eosinofílicas podem ser encontradas em trauma de tecido (como resultado, por exemplo, de cirurgia ou lesão). Inflamações eosinofílicas podem também estar associadas a doenças cardiovasculares (tais como miocardite eosinofílica, arterite coronariana eosinofílica, doença de coração isquêmico, enfarte agudo do miocárdio e ruptura cardíaca). Processos inflamatórios necróticos podem também envolver inflamação eosinofílica (polimiosite, dissecção das artérias coronarianas, lesões necrotizantes de mal neuro Behcet, demência e enfarte cerebral).
[0263] São fornecidos no presente métodos de identificação de pacientes positivos para inflamações eosinofílicas (EIP) que preveem reação ao tratamento com um inibidor da via de TH2 (ou que responderão a ele) por meio de medição dos níveis totais de periostina no soro do paciente.
[0264] Também são fornecidos no presente métodos de tratamento de asma, distúrbios eosinofílicos, distúrbios mediados por IL-13, distúrbios mediados por IL4, distúrbios mediados por IL9, distúrbios mediados por IL5, distúrbios mediados por IL33, distúrbios mediados por IL25, distúrbios mediados por TSLP, distúrbios mediados por IgE ou sintomas similares a asma que compreendem a administração de inibidores da via de TH2 a pacientes positivos para inflamações eosinofílicas, em que o paciente foi diagnosticado como sendo EIP por meio de medição dos níveis totais de periostina no soro do paciente.
[0265] Em certas realizações, são fornecidos métodos de tratamento de asma, distúrbios eosinofílicos, distúrbios mediados por IL-13, distúrbios mediados por IL-4 ou distúrbios mediados por IgE que compreendem a administração de lebrikizumab a pacientes positivos para inflamações eosinofílicas.
[0266] Em certas realizações, são fornecidos métodos de tratamento de asma, distúrbios eosinofílicos, distúrbios mediados por IL-13, distúrbios mediados por IL-4 ou distúrbios mediados por IgE que compreendem a administração de uma dose plana de 125 a 500 mg de lebrikizumab a cada quatro semanas a pacientes que sofrem do distúrbio.
[0267] Também são fornecidos métodos de tratamento de asma (ou doenças respiratórias) que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de lebrikizumab ao paciente com asma, em que os resultados de tratamento em alteração relativa de FEV1 são de mais de 5%. Em outra realização, o FEV1 é de mais de 6%, 7%, 8%, 9% ou 10% de FEV1. Em outra realização, o paciente foi diagnosticado como EIP utilizando um teste de Periostina Total. Em outra realização, o paciente com asma foi diagnosticado com um teste de periostina total no soro.
[0268] Em certas realizações, são fornecidos métodos de tratamento de asma (ou doenças respiratórias) que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de lebrikizumab ao paciente com asma, em que o tratamento resulta em redução da taxa de agravamento de mais de 35% (em outras realizações, mais de 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, até 85%; outra realização, em que o paciente foi diagnosticado como EIP).
[0269] Em certas realizações, são fornecidos métodos de tratamento de asma (ou doenças respiratórias) que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de lebrikizumab ao paciente com asma, em que o tratamento resulta em redução do despertar noturno. Em uma realização, o paciente é diagnosticado por meio da medição dos níveis totais de periostina no soro do paciente. Em outra realização, a asma do paciente é não controlada com corticosteroide. Em uma outra realização, o paciente é diagnosticado com EIP.
[0270] Também são fornecidos métodos de tratamento de asma (ou doenças respiratórias) que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de lebrikizumab ao paciente com asma, em que o tratamento resulta em melhoria do controle de asma. Em uma realização, o paciente é diagnosticado por meio da medição dos níveis totais de periostina no soro do paciente. Em outra realização, a asma é não controlada em tratamento com corticosteroide. Em uma outra realização, o paciente é diagnosticado com EIP.
[0271] São fornecidos métodos de tratamento de asma (ou doenças respiratórias) que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de lebrikizumab ao paciente com asma, em que o tratamento resulta em redução de inflamações dos pulmões. Em uma realização, o paciente é diagnosticado por meio da medição dos níveis totais de periostina no soro do paciente. Em outra realização, a asma é incontrolável em tratamento com corticosteroide. Em uma outra realização, o paciente é diagnosticado com EIP.
[0272] Em certas reailzações, são fornecidos métodos de tratamento de distúrbios eosinofílicos em pacientes que sofrem de distúrbio eosinofílico e são tratados com um corticosteroide que compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de lebrikizumab ao paciente com asma, em que o tratamento resulta em redução ou eliminação do tratamento com corticosteroide (quantidade ou frequência) utilizado para o tratamento da doença. Em uma realização, o paciente é diagnosticado por meio da medição dos níveis totais de periostina no soro do paciente. Em outra realização, a asma do paciente é incontrolável com corticosteroide. Em uma outra realização, o paciente é diagnosticado com EIP antes do tratamento.
[0273] Também são fornecidos métodos de tratamento de pacientes que sofrem de asma (ou doenças respiratórias) que compreendem o diagnóstico do paciente como EIP utilizando um Teste de Periostina Total, administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de Inibidor da Via de TH2 ao paciente com asma, diagnóstico do estado de EIP do paciente e novo tratamento do paciente com o Inibidor da Via de TH2 caso o estado seja EIP. O diagnóstico é realizado utilizando Teste de Periostina Total isoladamente ou em combinação com os níveis de FENO e, opcionalmente, em combinação com outros biomarcadores selecionados a partir de: CST1, CST2, CCL26, CLCA1, PRR4, PRB4, SERPIN B2, CEACAM5, iNOS, SERPIN B4, CST4 e SERPIN B10. Em ainda outra realização, o paciente a ser tratado, além de ter níveis de expressão elevados de periostina conforme descrito no presente, possui nível de FENO de mais de 21 ppb. Em ainda outra realização, o paciente a ser tratado, além de ter níveis de expressão elevados de periostina conforme descrito no presente, possui nível de FENO de mais de 35 ppb.
[0274] Em certas realizações, são fornecidos métodos de identificação de pacientes que são negativos para inflamações eosinofílicas (EIN), que compreendem a etapa de medição dos níveisde periostina total em um paciente e determinação que o paciente é EIN.
[0275] Qualquer um dos inibidores da via de TH2 fornecidos no presente pode ser utilizado em métodos terapêuticos descritos no presente, especialmente asma. Em uma realização, o paciente com asma está sendo tratado com um corticosteroide e foi diagnosticado como responsivo a um inibidor da via de TH2 utilizando um teste de periostina descrito no presente. Em uma realização adicional, o paciente com asma sofre de asma moderada a severa. Em outra realização, o paciente sofre de asma suave, mas não é tratado com corticosteroides.
[0276] Um anticorpo de acordo com a presente invenção (e qualquer agente terapêutico adicional) pode ser administrado por qualquer meio apropriado, que inclui parenteral, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As infusões parenterais incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. A dosagem pode ser fornecida por qualquer via apropriada, tal como por meio de injeções, como injeções intravenosas ou subcutâneas, dependendo, em parte, de se a administração é rápida ou crônica. São contemplados no presente diversos cronogramas de dosagem, que incluem, mas sem limitações, administrações isoladas ou múltiplas ao longo de diversos momentos, administração de mistura e infusão de pulso.
[0277] Os anticorpos de acordo com a presente invenção seriam formulados, dosados e administrados de forma consistente com a boa prática médica. Fatores para consideração neste contexto incluem o distúrbio específico sendo tratado, o mamífero específico sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúrbio, o local de fornecimento do agente, o método de administração, o cronograma de administração e outros fatores conhecidos dos praticantes da medicina. O anticorpo não necessita ser, mas é opcionalmente formulado com um ou mais agentes atualmente utilizados para evitar ou tratar o distúrbio em questão. A quantidade eficaz desses outros agentes depende da quantidade de anticorpo presente na formulação, do tipo de distúrbio ou tratamento e de outros fatores discutidos acima. Estes são geralmente utilizados nas mesmas dosagens e com vias de administração conforme descrito no presente ou cerca de 1 a 99% das dosagens descritas no presente ou em qualquer dosagem e por meio de qualquer processo que seja determinado empírica ou clinicamente como sendo apropriado.
[0278] Para a prevenção ou o tratamento de doença, a dosagem apropriada de um anticorpo de acordo com a presente invenção (quando utilizado isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais) dependerá do tipo de doença a ser tratado, do tipo de anticorpo, da severidade e do curso da doença, se o anticorpo é administrado para propósitos preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do paciente, reação ao anticorpo e do critério do médico atendente. O anticorpo é administrado adequadamente ao paciente uma vez ou ao longo de uma série de tratamentos. Dependendo do tipo e da severidade da doença, cerca de 1 μg/kg a cerca de 15 mg/kg (por exemplo, 0,1 mg/kg a 10 mg/kg) de anticorpo pode ser uma dosagem inicial possível para administração ao paciente, seja, por exemplo, por meio de uma ou mais administrações separadas ou de infusão contínua. Uma dosagem diária típica poderá variar de cerca de 1 μg/kg a 100 mg/kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima. Para administrações repetidas ao longo de vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento seria geralmente mantido até que ocorra uma supressão desejada de sintomas da doença. Um exemplo de dosagem do anticorpo estaria na faixa de cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 10 mg/kg. Desta forma, uma ou mais doses de cerca de 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg ou 10 mg/kg (ou qualquer de suas combinações) podem ser administradas ao paciente. Essas doses podem ser administradas intermitentemente, tal como semanalmente ou a cada três semanas (por exemplo, de tal forma que o paciente receba cerca de duas a cerca de vinte, tal como cerca de seis doses do anticorpo). Podem, entretanto, ser úteis outros regimes de dosagem. O progresso desta terapia é facilmente monitorado por meio de técnicas e testes convencionais.
[0279] Em certas realizações, um anticorpo de acordo com a presente invenção é administrado na forma de dose plana (ou seja, não dependente do peso) de 37,5 mg, dose plana de 125 mg ou dose plana de 250 mg. Em certas realizações, a dose é administrada por meio de injeção subcutânea uma vez a cada quatro semanas por um período de tempo. Em certas realizações, o período de tempo é de seis meses, um ano, dois anos, cinco anos, dez anos, quinze anos, vinte anos ou por toda a vida do paciente. Em certas realizações, a asma é asma severa e o paciente é não controlado ou controlado inadequadamente com corticosteroides inalados mais uma segunda medicação de controle. Em uma outra realização, o paciente é diagnosticado com estado de EIP utilizando um Teste de Periostina Total para determinar o estado de EIP e o paciente é selecionado para tratamento com um anticorpo anti-IL-13 conforme descrito acima. Em uma outra realização, o método compreende o tratamento de pacientes com asma com um anticorpo anti-IL-13 conforme descrito acima, em que o paciente foi diagnosticado anteriormente com estado de EIP utilizando um Teste de Periostina Total para determinar o estado de EIP. Em uma realização, o paciente com asma tem 18 anos de idade ou mais. Em uma realização, o paciente com asma tem 12 a 17 anos de idade e o anti-IL-13 é administrado na forma de dose plana de 250 mg ou dose plana de 125 mg. Em uma realização, o paciente com asma tem 6 a 11 anos de idade e o anticorpo anti-IL-13 é administrado na forma de dose plana de 125 mg.
[0280] Compreende-se que qualquer uma das formulações ou métodos terapêuticos acima pode ser conduzida utilizando um imunoconjugado de acordo com a presente invenção no lugar ou além de um anticorpo antialvo ou anticorpo antiperiostina.
ARTIGOS INDUSTRIALIZADOS:
[0281] Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um artigo industrializado que contém materiais úteis para o tratamento, prevenção e/ou diagnóstico dos distúrbios descritos acima. O artigo industrializado compreende um recipiente e um rótulo ou bula sobre o recipiente ou a ele associado. Os recipientes apropriados incluem, por exemplo, garrafas, ampolas, seringas, sacos de solução intravenosa etc. Os recipientes podem ser formados a partir de uma série de materiais tais como vidro ou plástico. O recipiente contém uma composição que, por si própria ou quando combinada com outra composição, é eficaz para o tratamento, prevenção e/ou diagnóstico da condição e pode ter uma porta de acesso estéril (o recipiente pode ser, por exemplo, um saco de solução intravenosa ou ampola que contém uma tampa perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo da composição é um anticorpo de acordo com a presente invenção. O rótulo ou bula indica que a composição é utilizada para o tratamento da condição específica. Além disso, o artigo industrializado pode compreender (a) um primeiro recipiente com uma composição nele contida, em que a composição compreende um anticorpo de acordo com a presente invenção; e (b) um segundo recipiente com um composição nele contida, em que a composição compreende um agente citotóxico ou terapêutico de outra forma adicional. O artigo industrializado desta realização da presente invenção pode compreender adicionalmente uma bula que indica que as composições podem ser utilizadas para o tratamento de uma condição específica. Alternativa ou adicionalmente, o artigo industrializado pode compreender adicionalmente um segundo (ou terceiro) recipiente que compreende um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como água bacteriostática para injeção (BWFI), solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Ele pode ainda incluir outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.
[0282] Compreende-se que qualquer um dos artigos industrializados acima pode incluir um imunoconjugado de acordo com a presente invenção no lugar ou além de um anticorpo antialvo ou anticorpo antiperiostina.
EXEMPLOS EXEMPLO 1
[0283] Estudo clínico de desafio de alérgenos: Estudo de fase II aleatorizado, duplo cego e controlado por placebo; 5 mg/kg de lebrikizumab:placebo (razão 1:1) por via subcutânea q4 semanas por 12 semanas. Um resumo de alto nível do projeto de teste encontra-se na Tabela 2 e na Figura 1. A medida de resultado primária foi a reação asmática posterior (LAR) induzida por alérgenos na Semana 13. Os pacientes receberam desafio de alérgenos seguido por desafio de metacolina 18 a 24 horas mais tarde durante o período de seleção e na semana 13. Biomarcadores de soro também foram determinados para demonstrar a inibição da via de IL13 e para identificar pacientes com maior benefício de lebrikizumab.
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[0284] Os pacientes incluídos no estudo foram asmáticos suaves, com 18 a 55 anos de idade, com: (a) teste de pele positivo (> 3 mm sobre o controle negativo) em seleção para ácaro da poeira doméstica, raiva felina ou ambrósia; (b) volume de vencimento forçado em um segundo (FEV1) > 70% do previsto; e (c) reação asmática inicial > 20% de redução em FEV1 em cinco a trinta minutos após o desafio com alérgenos e reação asmática posterior (LAR) > 15% de redução em FEV1 em duas a oito horas após o desafio.
[0285] Foram incluídos 28 pacientes na análise do objetivo primário (n = 16 placebo, 12 lebrikizumab). Na semana 13, lebrikizumab inibiu LAR. A AUC (área sob a curva) média de FEV1 em duas a oito horas após o desafio com alérgenos (LAR) em pacientes tratados com lebrikizumab foi reduzida em 48% em comparação com placebo (26,3% x 50,5%; 95% CI: -19 a 90%), sem efeito sobre a reação de fase inicial (EAR) na semana 13. A AUC média de FEV1 e a redução máxima de FEV1 em zero a duas horas após o desafio com alérgenos foram similares nos grupos de lebrikizumab e placebo (27,5% x 26,4% para os dois parâmetros; Tabela 3). Vide também a Figura 2. Não foi observada nenhuma diferença significativa entre os grupos de lebrikizumab e placebo sobre a hiper-reatividade das vias aéreas a metacolina. A média aritmética da dose dobrada de metacolina no grupo de lebrikizumab foi 0,33 doses dobradas mais alta que no grupo placebo (1,58 x 1,25, 95% CI - 0,64 a 1,3), o que não foi considerado inibição clinicamente significativa.
Figure img0003
[0286] O tratamento com lebrikizumab claramente exerceu efeitos sistêmicos sobre os marcadores de inflamações de TH2, com reduções médias ajustadas por placebo de 24%, 25% e 26% em IgE de soro, MCP- 4/CCL13 e TARC/CCL17, respectivamente (P < 0,01). Vide as Figuras 3A e 3B. Os níveis de periostina no soro foram levemente reduzidos (5 a 10%) após o tratamento. Os níveis de IL-13 no soro foram principalmente abaixo do nível de detecção (< 150 pg/ml) após o tratamento. A Figura 3C exibe reduções de IgE, CCL13 e CCL17 na Semana 13 em pacientes individuais com relação aos níveis de linha base desses marcadores. De forma geral, os níveis de periostina, YKL-40, CEA e eosinófilos do sangue não se alteraram significativamente após o tratamento com lebrikizumab (dados não exibidos).
[0287] Pacientes com níveis de linha base acima da média de eosinófilos do sangue periférico, IgE do soro ou periostina do soro exibiram maior redução dependente de lebrikizumab ajustado por placebo em LAR que pacientes com níveis de linha base desses biomarcadores abaixo da média. Vide a Figura 4.
[0288] Os pacientes foram classificados como “alto biomarcador” ou “baixo biomarcador” conforme possuem mais ou menos que os níveis médios de biomarcadores inflamatórios na linha base: IgE do soro, CLL13, CCL17, CEA, periostina, YKL-40 e eosinófilos do sangue periférico. Conforme exibido na Fig. 4, os resultados de IgE do soro, eosinófilos e periostina indicaram que pacientes com IgE de soro de linha base elevado (em comparação com a média), periostina ou eosinófilos do sangue periférico aumentados eram mais propensos a ser responsivos ao bloqueio de IL13 (tal como por lebrikizumab).
[0289] Concluindo, o estudo atingiu o seu objetivo primário: 48% de redução (90% CI (-19%, 90%)) em AUC de fase posterior média. Lebrikizumab reduziu significativamente LAR em comparação com placebo. Nenhum sinal de segurança foi observado nos dados de segurança. O bloqueio terapêutico de IL-13 pode ser um tratamento eficaz de asma alérgica, particularmente em pacientes com marcadores elevados de inflamação de TH2 das vias aéreas.
EXEMPLO 2
[0290] Estudo clínico de pacientes com asma I: Foi conduzido um estudo aleatorizado, duplo cego e controlado com placebo para avaliar os efeitos de lebrikizumab em pacientes com asma que permanecem controlados inadequadamente ou não controlados durante terapia crônica com ICS. Os pacientes prosseguiram com sua terapia padrão que incluiu a inalação de corticosteroides (ICS) e poderá também incluir LABA. Neste estudo duplo, os pacientes foram alocados aleatoriamente para receber lebrikizumab ou placebo por seis meses. Durante um período de condução de 14 a 20 dias (Visita 1 a Visita 3), os pacientes necessitaram demonstrar atendimento a ICS e sua capacidade de uso do equipamento necessário para monitoramento diário ao longo de todo o estudo. Os pacientes tiveram determinada a sua elegibilidade para o estudo e foram alocados aleatoriamente (1:1) à droga do estudo (lebrikizumab ou placebo) com estratificação com base no estado substituído de assinatura de IL-13 (descrito adicionalmente abaixo), uso de LABA e local do estudo. A primeira dose SC ocorreu em até 24 horas após a alocação aleatória (Dia de Estudo 1, ou seja, dia de alocação aleatória, independentemente da primeira data de administração da droga de estudo). A administração de droga de estudo foi repetida uma vez a cada quatro semanas pelos vinte dias seguintes (para um total de seis doses de droga de estudo fornecendo um período de tratamento de 24 semanas). Medidas da eficácia de lebrikizumab foram determinadas durante o período de tratamento.
[0291] A droga de estudo foi administrada a pacientes selecionados por meio de injeção subcutânea (SC) nos momentos a seguir: Dia 1 e Semanas 4, 8, 12, 16 e 20. Cada dose de lebrikizumab foi de 250 mg. Cada dose de placebo foi de 2 ml do mesmo fluido sem lebrikizumab. Injeções SC foram administradas no braço, coxa ou abdômen. Um esquema desse projeto de teste pode ser observado na Figura 5.
[0292] A análise primária foi conduzida após o tratamento de todos (cerca de 200) os pacientes e seu acompanhamento por 24 semanas após a alocação aleatória (Dia 1). Determinou-se a segurança ao longo de todo o estudo. Após a dose final (Semana 20) de droga de estudo, os pacientes foram monitorados por doze semanas adicionais; as quatro primeiras semanas após a dose final foram consideradas parte do período de tratamento (24 semanas) e as oito semanas finais contituíram o período de acompanhamento. O período de oito semanas de acompanhamento, em conjunto com as últimas quatro semanas do período de tratamento, permitiu o monitoramento de pacientes por três a quatro meias-vidas após a última dose. Os pacientes geralmente participaram do estudo, portanto, por um total de cerca de 34 semanas. Vide a Figura 5. Pacientes com eficácia avaliável (n = 180) foram definidos para fins de tomada de decisões, para excluir pacientes por duas razões: (1) não serem parte de uma população alvo em características fundamentais e (2) FEV1 de linha base não confiável para medição do efeito de tratamento. Vide a Figura 6 para características de linha base de pacientes participantes deste teste.
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[0293] Os principais critérios de inclusão incluíram os seguintes: capacidade de realização de espirometria nas Visitas 1 a 3 de acordo com o manual do Teste de Função Pulmonar (PFT) específico do estudo; radiografia do tórax em até doze meses após a Visita 1 sem evidência de anormalidade clinicamente significativa; capacidade de preencher materiais de estudo conforme medido por meio do atendimento ao preenchimento diário e medições de PEF entre as Visitas 1 e 3; asma não controlada selecionada com base em todos os critérios a seguir: - diagnóstico de asma > 12 meses; - reação ao broncodilatador na Visita 1 ou 2; - broncodilatador prévio FEV1 > 40% e < 80% previsto nas Visitas 1 e 3; - uso de ICS > 200 μg e dose diária < 1000 μg de propionato de fluticasona (FP) ou equivalente por pelo menos seis meses consecutivos antes da Visita 1; - avaliação do Questionário de Controle de Asma (ACQ) na Visita 3 > 1,5, apesar do atendimento ao ICS.
[0294] Os principais critérios de exclusão incluíram os seguintes: Condições médicas: - agravamento de asma, obstrução significativa do fluxo aéreo ou infecção respiratória entre as Visitas 1 e 3; - malignidade conhecida ou avaliação atual de potencial malignidade; - imunodeficiência conhecida, incluindo, mas sem limitações, infecção por HIV; - doença pulmonar pré-existente diferente de asma, incluindo infecções ativas; - doença médica clinicamente significativa não controlada.
[0295] Exposições: - fumante atual ou ex-fumante com histórico de fumo ao longo da vida de > 10 anos-carteira; - medicações concomitantes proibidas (esteroides diferentes de ICS, broncodilatadores de curta duração diferentes de SABA, agentes imunomoduladores); - gravidez ou indisposição ao uso de contracepção com alta eficácia.
[0296] Considerando as dificuldades práticas de medição de IL- 13 no próprio pulmão, os níveis de eosinófilos e IgE em sangue periférico foram utilizados como medição substituta, indicada como “substituto de assinatura de IL-13”. Pacientes positivos para substituto de assinatura de IL-13 foram definidos como pacientes com IgE total > 100 UI/ml e eosinófilos do sangue > 0,14 x 10xe9 células/l, enquanto os pacientes negativos para substituto de assinatura de IL-13 apresentaram IgE total < 100 UI/ml ou eosinófilos do sangue < 0,14 x 10xe9 células/l. Os critérios para os níveis de IgE e eosinófilos que determinaram o estado dos pacientes para substituto de assinatura de IL- 13 foram estabelecidos a partir de pacientes com asma nos quais a expressão genética induzida por IL-13 no epitélio dos brônquios (assinatura de IL-13) foi correlacionada ao IgE e eosinófilos do sangue periférico (Corren et al, N. Engl. J. Med. 365: 1088-1098 (2011)).
[0297] A eficácia de lebrikizumab foi determinada utilizando diversas medidas de atividade de asma, incluindo função pulmonar (ou seja, FEV1, fluxo de pico incluindo variabilidade do fluxo de pico, reação a metacolina em centros selecionados, óxido nítrico exalado fracional (FENO)) e medidas da atividade ou controle da doença (ou seja, resultados relatados pelo paciente (PROs), uso de medicação de resgaste, taxa de agravamentos). A alteração de FEV1 foi o resultado primário. Marcadores após o tratamento com lebrikizumab a seguir: TARC (CCL17), MCP-4 (CCL13) e IgE para análises farmacodinâmicas.
[0298] Medida do resultado de eficácia primária: A medida do resultado de eficácia primária foi a alteração relativa de FEV1 antes do broncodilatador (volume) da linha base até a Semana 12.
[0299] Medidas do resultado da eficácia secundárias: As medidas do resultado da eficácia secundárias foram as seguintes: alteração relativa de FEV1 antes do broncodilatador (volume) da linha base até a Semana 24; alteração relativa de FEV1 antes do broncodilatador (volume) da linha base até a Semana 12 para pacientes com estado positivo de substituto de assinatura de IL-13; alteração da avaliação do Questionário de Controle de Asma (ACQ) da linha base até a Semana 12; alteração da avaliação de sintomas de asma conforme medido pelo Diário de Controle de Asma (ACDD) da linha base até a Semana 12; alteração do valor de fluxo de pico antes do broncodilatador matinal da linha base até a Semana 12; taxa de agravamentos de asma durante o período de tratamento de 24 horas; taxa de agravamentos de asma severas durante o período de tratamento de 24 semanas; alterações do uso de medicação de resgate (medidas pelo número de aspirações por dia de medicação de resgate ou medicação de resgate nebulizada) da linha base até a Semana 12.
[0300] Medidas exploratórias: Foram determinadas as medidas de resultado exploratório a seguir: alteração do número de dias por semana com asma bem controlada, conforme medido por meio de ACDD da linha base até a Semana 12; alteração da frequência semanal de despertar noturno devido à asma da linha base até a Semana 12; alteração dos níveis de FENO da linha base até a Semana 12.
[0301] Observações iniciais: Neste estudo de pacientes com asma mal controlada, o tratamento com lebrikizumab foi associado a uma melhoria estatisticamente significativa de FEV1 antes do broncodilatador, a variável de saída primária. A melhoria de FEV1 ocorreu logo após o início do tratamento, o que indica que a inibição de IL-13 apresentou impacto sobre as medidas de fluxo de ar de forma relativamente rápida. Embora o tratamento com lebrikizumab não gerasse reduções estatisticamente significativas dos agravamentos severos e definidas por protocolo utilizando o teste de periostina Elecsys® (descrito abaixo, devido a valores indisponíveis para colaborar com a análise), observou-se tendência à redução das taxas de agravamentos severos, especialmente para pacientes com alta periostina. Utilizando o teste E4 conforme descrito abaixo, entretanto, o tratamento com lebrikizumab gerou reduções estatisticamente significativas de agravamentos severos e definidas por protocolo (84% no subgrupo de alta periostina (95% CI 14%, 97%, p = 0,03). Vide também abaixo. Além disso, a análise do subgrupo FENO atingiu redução estatisticamente significativa de agravamentos severos (p = 0,04). Tratamento com lebrikizumab não melhorou os sintomas de asma conforme medido pela versão apenas de sintomas do ACQ5 (que excluiu o uso de SABA de resgaste e FEV1) ou pelas medições do diário.
[0302] A redução de quemoquinas TH2 do soro, CCL13 e CCL17, e IgE sustenta um efeito biológico mediado por lebrikizumab subjacente ao impacto clínico medido nas vias aéreas. O leve aumento da contagem de eosinófilos do sangue é consistente com a redução do tráfego geral de eosinófilos do sangue para o compartimento do pulmão após a inibição de quemoquinas atraentes de eosinófilos. A descoberta de que lebrikizumab reduziu FENO é consistente com essa sugestão. Lebrikizumab podem apresentar redução de FENO, entretanto, por meio de inibição indireta da expressão de sintase de óxido nítrico por meio de bloqueio de IL-13, em vez de modificar a inflamação eosinofílica (que também se acredita possuir impacto sobre FENO).
[0303] Os critérios de elegibilidade de pacientes para este estudo exigiram capacidade de reversão de pelo menos 12% até 400 μg de albuterol (sem uso de SABA por pelo menos quatro horas e sem uso de LABA por pelo menos doze horas antes das visitas). Isso serviu para garantir que os pacientes tivessem “espaço para mover-se” ao buscar alteração relativa geral de pelo menos 10% na função pulmonar. Esse teste clínico simples pode limitar a capacidade de generalização desses dados para populações de pacientes com asma mais gerais e não selecionadas. De fato, a razão mais comum da ineligibilidade dos pacientes foi a falha neste teste (em 92 de 263 pacientes que foram reprovados na seleção).
[0304] Neste estudo, formulamos em primeiro lugar a hipótese de que a combinação de alto teor de IgE no soro e alta contagem de eosinófilos no sangue foi um substituto para a identificação de pacientes com aumento da expressão de genes relativos a IL-13 no pulmão (substituto da assinatura de IL- 13 ou TH2 alto). Embora os dados ainda fossem mascarados para atribuição de tratamento, redigimos um plano de análise estatística para utilizar diferenciação com base nos níveis de periostina no soro. Conforme descrito com mais detalhes abaixo, esta análise de subgrupo demonstrou que a eficácia do tratamento com lebrikizumab foi aprimorada em pacientes com alta periostina com relação a pacientes com baixa periostina, conforme observado com aumento mais robusto de FEV1 e declínio maior de FENO, bem como um teste de interação significativa. Estas descobertas sugerem que o marcador previamente especificado, periostina de soro, poderá ser potencialmente utilizado para selecionar pacientes com asma que podem ser mais responsivos ao tratamento com lebrikizumab.
[0305] As características de linha base dos pacientes participantes do estudo são exibidas na Figura 6. Os números referem-se à média (desvio padrão) a menos que indicado em contrário. Periostina alta designa pacientes com periostina em linha base de mais de 23 ng/ml de acordo com o Teste E4 descrito abaixo. Periostina baixa designa paientes com periostina em linha base abaixo de 23 ng/ml de acordo com o Teste E4 descrito abaixo.
[0306] As alterações relativas em FEV1 (litros) após 12 semanas e após 24 semanas (intervalos de confiança de 95%) para os pacientes tratados são exibidas na Figura 7. Em comparação com os pacientes poitivos para assinatura de IL-13, os pacientes positivos para periostina experimentaram alteração relativa mais alta em FEV1.
[0307] A Figura 7 demonstra que a alteração relativa corrigida por placebo de FEV1 da linha base para 12 semanas para todos os participantes foi de 5,9% (95% CI 0,9%, 10,9%, p = 0,2) e 10% para o subgrupo de alta periostina (95% CI 2,5%, 17,5%, p = 0,01)). A alteração relativa corrigida por placebo de FEV1 da linha base para 24 semanas para todos os participantes foi de 4,8% (95% CI 0,3%, 9,3%, p = 0,04) e 6,1% para o subgrupo de alta periostina (95% CI -1,4%, 13,6%, p = 0,11). A Figura 8 exibe a alteração relativa de FEV1 ao longo de todo o período de tratamento (32 semanas) para todos os pacientes com eficácia avaliável (A) e apenas para pacientes com alta periostina. A eficácia de lebrikizumab após 32 semanas de tratamento não diminuiu, o que sugere que pode ser possível reduzir a frequência na qual é administrado lebrikizumab.
[0308] Também examinamos o efeito do tratamento com lebrikizumab sobre FEV1 após o broncodilatador como resultado exploratório e substituto indireto para remodelagem das vias aéreas. A alteração de FEV1 após o broncodilatador após vinte semanas foi medida após quatro inalações de 100 μg de albuterol. Na linha base antes da administração de drogas de estudo, o FEV1 médio após o broncodilatador foi de 2,50 litros (0,71) e 2,54 litros (0,73) nos grupos de placebo e lebrikizumab, respectivamente. Isso correspondeu a 77,9% previsto nos dois grupos. A alteração corrigida por placebo gerada em FEV1 após o broncodilatador foi de 4,9% (95% CI 0,2% a 9,6%; p = 0,04). No grupo de alta periostina, tratamento com lebrikizumab aumentou o FEV1 após o broncodilatador após vinte semanas (8,5%; 95% CI 1,1% a 16%; p = 0,03). Não houve evidência de melhoria de FEV1 após o broncodilatador no grupo de baixa periostina (1,8%; 95% CI -4,1 a 7,7; p = 0,55). Além disso, lebrikizumab aumentou o FEV1 após o broncodilatador absoluto no grupo de alta periostina (170 ml; 95% CI 10 a 320 ml). Concluímos que lebrikizumab aumentou FEV após o broncodilatador em pacientes com asma não controlada que apresentaram evidência do aumento das inflamações das vias aéreas TH2 (alta periostina). Com base nesses dados, lebrikizumab pode possuir o potencial de reduzir a remodelagem das vias aéreas em asma.
[0309] A Figura 9 exibe a taxa de agravamento e observou-se taxa de agravamento severo após 24 semanas de tratamento. A taxa de agravamento foi reduzida em 37% em todos os participantes tratados com lebrikizumab em comparação com placebo (95% CI -22%, 67%, p = 0,17) e em 61% no subgrupo de alta periostina (95% CI -6%, 86%, p = 0,07). A taxa de agravamento severo foi reduzida em 51% (95% CI -33%, 82%, p = 0,16) para todos os participantes e em 84% no subgrupo de alta periostina (95% CI 14%, 97%, p = 0,03). Também examinamos as taxas de agravamentos severos após 32 semanas, o final do período de acompanhamento, 12 semanas após a dose final de lebrikizumab na população de ITT. Conforme exibido na Tabela 10, as taxas de agravamento severo ao longo de todos os pacientes após 32 semanas foram significativamente reduzidas em 50% em pacientes tratados com lebrikizumab em comparação com placebo (p = 0,03). A taxa de agravamentos severos foi mais baixa em pacientes com alta periostina tratados com lebrikizumab (0,13); a redução da taxa de placebo, entretanto, não atingiu significado estatístico nas subanálises. Concluímos que lebrikizumab apresentou benefício significativo na redução de agravamentos severos em pacientes controlados inadequadamente por ICS. A maior redução dos agravamentos severos foi observada em pacientes com altos níveis de periostina antes do tratamento. A duração de observação para capturar eventos é importante em estudos de alimentação para esse objetivo e a observação por 32 semanas em comparação com 24 semanas pode ser necessária para detectar redução de pelo menos 50% em cerca de 200 pacientes. TABELA 10 TAXA DE AGRAVAMENTO SEVERO APÓS 32 SEMANAS, 12 SEMANAS APÓS A DOSE FINAL
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[0310] Lebrikizumab atendeu ao seu objetivo primário e foi muito eficaz na redução de agravamentos severos. Os dados sugerem que o estado de periostina do paciente pode ser prognóstico de eventos de agravamento e, até menor ponto, FEV1. Os dados sustentam o valor de previsão dos níveis de periostina para determinar a reação ao tratamento com lebrikizumab. Utilizando o teste E4, por exemplo, os pacientes com níveis de periostina em soro ou plasma abaixo de 20 ng/ml são menos propensos a beneficiar-se de lebrikizumab, enquanto os pacientes com níveis de periostina de mais de 20 ng/ml são mais propensos a beneficiar-se de lebrikizumab. Além disso, os pacientes com nível de periostina em plasma ou soro de mais de 23 ng/ml (conforme determinado pelo teste E4) possuem probabilidade ainda maior de beneficiar-se do tratamento com lebrikizumab.
[0311] Resultados relatados pelo paciente: ACQ e mini-AQLQ não demonstraram diferenças consistentes entre os grupos de tratamento. Após várias visitas, os dados de ACDD demonstraram algumas diferenças nas avaliações médias entre grupos de tratamento em dias bem controlados, sintomas de asma, despertar noturno e uso de medicação de resgaste, todos favorecendo o tratamento com lebrikizumab. Para todos os objetivos nos dados de ACDD (dias bem controlados, sintomas de asma, despertar noturno e uso de medicação de resgate), houve efeito de tratamento corrigido por placebo maior em pacientes com alta periostina em comparação com todos os pacientes; nenhuma das diferenças entre grupos de tratamento após doze semanas, entretanto, foi estatisticamente significativa.
[0312] Função pulmonar: Observou-se melhoria da função pulmonar (PEF) a partir da linha base para a maior parte dos momentos em todos os pacientes tratados com lebrikizumab e em todos os momentos para pacientes tratados com lebrikizumab com alta periostina. Pacientes tratados com placebo caíram com relação à linha base em todos os momentos.
[0313] Inflamação pulmonar: FENO caiu (melhorou) ao longo de todo o estudo para pacientes tratados com lebrikizumab e os do subconjunto de alta periostina, enquanto pacientes tratados com placebo apreentaram aumentos de FENO (piora). O percentual de alteração de FENO após doze semanas foi de -20,1% para pacientes tratados com lebrikizumab (n = 83) em comparação com 15% para pacientes tratados com placebo (n = 86) (p < 0,01). O percentual de alteração de FENO após doze semanas foi de -24,2% para pacientes tratados com lebrikizumab em comparação com 17,5% para pacientes tratados com placebo (n = 44) (p < 0,01). As diferenças entre os grupos de tratamento após doze semanas foram estatisticamente significativas. Vide a Figura 10. Em análise post hoc, alto FENO em linha base também foi associado à eficácia na melhoria de FEV1 e taxa de agravamento severo mais baixa em comparação com placebo. Observamos, entretanto, que FENO em linha base exibiu maior variabilidade entre pacientes durante a condução que periostina (19,8% contra 5,0%).
[0314] Também examinamos os dados para determinar se pacientes que possuíam alta periostina e alto FENO beneficiaram-se do tratamento com lebrikizumab no mesmo grau de pacientes com alta periostina. Na linha base, observamos correlação moderada entre FENO e periostina em soro (RS = 0,31, P < 0,001; N = 210 com dados coincidentes). Utilizando cortes médios, o estado de periostina e o estado de FENO sobrepuseram-se de forma geral, mas incompleta (Tabela 11). Para os dados exibidos na Tabela 11, o corte de periostina foi de 25 ng/ml utilizando o Teste E4 descrito abaixo e o corte de FENO foi de 21 ppb conforme medido utilizando metodologia padrão conhecida na técnica. A avaliação de FEV1 com base no estado composto de periostina e FENO revelou que o efeito ajustado por placebo de lebrikizumab após doze semanas foi maior no grupo com níveis altos de periostina e FENO (Tabela 12). Por outro lado, o benefício de tratamento observado no grupo com baixa periostina e alto FENO foi marginal (2,3%, P = 0,73). Desta forma, FENO aparentemente não identifica um subconjunto de pacientes com baixa periostina que se beneficiam de lebrikizumab. O valor de previsão relativo de periostina e FENO para reação a tratamento com lebrikizumab merece estudos adicionais. TABELA 11 DISTRIBUIÇÃO DE PACIENTES DE ACORDO COM O ESTADO DE FENO E PERIOSTINA DE LINHA BASE
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p = 0,0004 por meio de teste exato de Fisher (um lado). TABELA 12 ALTERAÇÃO RELATIVA MÉDIA DE FEVI DA LINHA BASE APÓS 12 SEMANAS EM PACIENTES COM ITT
[0315] Os níveis de linha base médios de FENO ou periostina para todos os pacientes que atenderam a critérios de ingresso definidos por protocolo foram utilizados para definir os subconjuntos descritos na tabela (alto = valor médio ou mais alto; baixo = valor abaixo da média).
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[0316] As características farmacocinéticas de lebrikizumab foram similares àquelas que haviam sido observadas em artigos anteriores. O peso do corpo dos pacientes apresentou impacto sobre a farmacocinética de lebrikizumab.
[0317] Diversos marcadores foram avaliados para determinar a sua capacidade de fornecer o valor de previsão em termos de benefício de tratamento acima, além ou alternativamente aos níveis de periostina em soro.
[0318] Estes marcadores incluíram CEA, IgE, TARC (CCL17) e MCP-4 (CCL13).
[0319] Além disso, formulamos a hipótese de que o excesso de periostina no soro em pacientes com alta periostina com asma deve-se aos efeitos de IL-13. Desta forma, buscamos determinar a contribuição relativa de IL-13 com os níveis de periostina sistêmica total em pacientes tratados com placebo e lebrikizumab com asma não controlada. Para estes experimentos, medimos periostina em soro utilizando o teste de periostina Elecsys® descrito no Exemplo 7. Conforme exibido nas Figuras 18 e 19, descobrimos que a maior parte (>90%) dos pacientes com baixa periostina na linha base permaneceu baixa nos dois braços do estudo (Fig. 18A), enquanto 72% de pacientes com alta periostina tratados com placebo e 40% tratados com lebrikizumab permaneceram com alta periostina na Semana 12 (Fig. 18B). Concluímos que, em adultos com asma não controlada apesar de ICS, pacientes com alta periostina exibiram redução significativa dos níveis de periostina em soro mediante tratamento com lebrikizumab em comparação com placebo, mas pacientes com baixa periostina não exibiram redução significativa em reação a lebrikizumab. Estas descobertas sugerem que, em pacientes com asma não controlada, o excesso de periostina em soro deve-se à atividade de IL-13 e a inibição de IL-13 com lebrikizumab reduz os níveis de periostina em soro.
[0320] Quatro pacientes tratados com lebrikizumab experimentaram sérios eventos adversos (SAEs) (agravamento de asma (n = 2), pneumonia adquirida na comunidade e pneumotórax traumático relativo a um acidente de carro). Seis pacientes com placebo experimentaram sete SAEs (agravamento de asma (n = 2), dores de cabeça, vazamento de fluido cerebroespinhal após epidural, herpes zóster, meningite purulenta aguda e vício em medicamentos contra dores). Vide Figura 11 para resultados de segurança deste teste.
[0321] A frequência geral de AEs foi similar nos dois braços de tratamento (lebrikizumab, 74,5%; placebo, 78,6%), bem como as frequências de AEs sérios (lebrikizumab, 3,8%; placebo, 5,4%) (Tabela 9). Eventos músculo-esquelétricos foram mais comuns com lebrikizumab (lebrikizumab, 13,2%; placebo, 5,4%; P = 0,045) (Tabela 9). 25 pacientes (11,5%) suspenderam o estudo mais cedo, incluindo 12 pacientes tratados com placebo e 13 com lebrikizumab.
Figure img0008
EXEMPLO 3
[0322] Estudo de Pacientes com Asma II (Estudo de Variação de Dose): Foi conduzido um estudo de variação de dose aleatorizado, duplo cego, controlado por placebo com quatro braços para avaliar adicionalmente a relação entre a dose de lebrikizumab e a reação em termos da eficácia, segurança e tolerabilidade em pacientes com asma que não eram tratados com corticosteroides inalados. Vide a Figura 12 para um projeto esquemático deste teste. Pacientes selecionados apresentaram reação de broncodilatador de pelo menos 15% e FEV1 antes do broncodilatador > 60% e < 85% previsto com estabilidade da doença demonstrada durante o período de condução. Pacientes selecionados para o estudo que receberam anteriormente ICS não puderam receber ICS por pelo menos trinta dias antes da primeira visita do estudo (Visita 1). O estudo não apresentou período de retirada; os pacientes não tiveram corticosteroides retirados para o propósito único de serem elegíveis para o estudo.
[0323] O primeiro procedimento relativo ao estudo na Visita 1 iniciou o período de condução de cerca de duas semanas. Durante o período de condução (Visitas 1 a 3), foram determinados o controle de asma (medido por meio da avaliação do Questionário de Controle de Asma (ACQ)) e a função pulmonar. A asma dos pacientes foi adicionalmente caracterizada com teste de picada na pele e biomarcadores relevantes incluindo IgE e eosinófilos do sangue periférico. Os níveis de IgE e eosinófilos foram utilizados para classificar pacientes com base na seu estado de substituição de assinatura IL- 13. Ao final do período de condução, pacientes elegíveis foram alocados aleatoriamente (1:1:1:1) para receber uma dentre três doses (500 mg, 250 mg ou 125 mg) de lebrikizumab ou placebo por meio de administração SC. A droga do estudo foi administrada por quatro vezes durante o período de tratamento de doze semanas. Após a dose final de droga de estudo, os pacientes foram monitorados por um período de acompanhamento de oito semanas adicional. A maior parte dos pacientes participou do estudo, portanto, pelo total de cerca de 22 semanas após a Visita 1 e, durante esse período, foram obtidas amostras de PK intermitentes. Realizou-se amostragem intensiva de PK com amostras de PK adicionais obtidas durante o estudo e o período de acompanhamnto, bem como uma amostra de PK adicional 16 semanas após a última administração de droga de estudo, até que 70 pacientes completassem a amostragem de PK intensiva. A participação no estudo dos pacientes no grupo de amostragem de PK intensiva durou, portanto, cerca de 26 semanas após a Visita 1. Determinou-se a segurança ao longo de todo o estudo e limites previamente especificados de falha de tratamento foram definidos de tal forma que os pacientes pudessem abandonar a droga do estudo para retomar terapia padrão caso apresentassem deterioração clinicamente significativa.
[0324] Observações iniciais: Eficácia: a alteração relativa corrigida por placebo em FEV1 da linha base até 12 semanas para todos os pacientes tratados com lebrikizumab foi melhoria de 4,1% (95% CI -0,4, 8,6%; p = 0,075). Ao longo de todo o período de tratamento de doze semanas, o risco estimado de falha do tratamento em todos os pacientes tratados com lebrikizumab foi 75% mais baixo que pacientes tratados com placebo (HR 0,25, 95% CI: 0,11, 0,78, p = 0,001). Estes resultados foram considerados clínica e estatisticamente significativos. Não houve evidência de reação de dosagem (vide Fig. 16).
[0325] Segurança: Não houve desequilíbrios clinicamente significativos entre os pacientes tratados com lebrikizumab e tratados com placebo, exceto por reações no local de injeção (23% contra 6%, lebrikizumab para placebo, respectivamente).
EXEMPLO 4
[0326] Teste de Periostina (teste E4): É descrito abaixo um teste ELISA de captura de periostina que é muito sensível (sensibilidade de 1,88 ng/ml). Os anticorpos reconhecem isoformas de periostina 1-4 em afinidade de nM (SEQ ID NO: 5-8).
[0327] Dilua 80 μl de anticorpo monoclonal purificado, 25D4 (anticorpo de revestimento, SEQ ID NO: 1 e 2, expresso a partir de um hibridoma ou linhagem de células CHO) com solução salina tamponada por fosfato até concentração final de 2 μg/ml. Revista as placas de microtítulos por uma niote, cobertas, a 2-8 °C com 100 μl de anticorpo de revestimento por cavidade. Lave a placa por três vezes com 400 μl de tampão de lavagem (PBS/0,05% Tween (polissorbato 20) por cavidade por ciclo de tampão de lavagem à temperatura ambiente. Adicione 200 μl por cavidade de tampão de bloqueio à placa. Incube a placa coberta à temperatura ambiente com agitação por uma hora e meia.
[0328] Prepare curva padrão de rhu Periostina (Estoque Padrão de rhu Periostina = isoforma 1 de rhu Periostina, R&D Systems 3548-F2, 5,25 ng/ml, em Diluente de Teste (PBS/0,5% albumina de soro bovino (BSA)/0,05% polissorbato 20/0,05% ProClin 300, pH 7,4). Diluente de curva padrão = PBS/0,5% BSA/0,05% polissorbato 20, 0,05% ProClin 300, pH 7,4. Por exemplo:
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[0329] Prepare controles e amostras. Três controles: Controle de fonte de agulha (comprimento total de rhu Periostina, isoforma 1, R&D Systems n° 3548-F2), Controle de Matriz Normal (conjunto de soro humano normal, Bioreclamation, Inc.), Controle de Matriz Alta (conjunto de soro humano normal, mais 100 ng/ml de agulha de rhu Periostina).
[0330] Por exemplo: 10 μl de soro controle (ou amostra) + 1,99 ml de diluente controle/amostra = 1:200; 300 μl de diluição 1:200 + 300 μl de diluente controle/amostra = 1:400; 300 μl de diluição 1:400 + 300 μl de diluente controle/amostra = 1:800; 300 μl de diluição 1:800 + 300 μl de diluente controle/amostra = 1:1600.
[0331] Cada diluição é conduzida em uma via. - Controles de Matriz de Construção utilizando um conjunto de soro humano normal. Use soro humano reunido sem agulha como Controle Normal. Gere o Alto Controle com 100 ng/ml de rhuPOSTN com agulha no soro reunido conforme descrito acima. Calcule a média, desvio padrão (SD) e coeficiente de variação percentual (CV, expresso em percentual) para as quatro diluições de cada controle sobre cada placa. CV é a magnitude de variação quantificada em medições de réplicas com relação à média das réplicas. %CV = 100*(SD/média). Avalie essas concentrações médias ao longo de todas as placas para determinar a precisão entre as placas. Essa tabela controle é utilizada em seguida para definir os critérios de aprovação e reprovação de Controle Normal e Alto, definindo a variação permissível em ± 20% da concentração média para cada controle.
[0332] Lave a placa por três vezes com 400 μl por cavidade por ciclo de tampão de lavagem (PBS/0,05% polissorbato 20). Adicione padrões diluídos (cavidades duplicadas), controles (todas as quatro diluições) e amostras (todas as quatro diluições) à placa, 100 μl por cavidade. Incube a placa coberta à temperatura ambiente com agitação por duas horas à temperatura ambiente. Dilua 80 μl de estoque I de MAb de detecção (periostina anti-humana murina biotinilada, MAb 23B9, 7,5 μg/ml em diluente de teste) até 12 ml com diluente de teste = 50 ng/ml. Lave a placa por quatro vezes com 400 μl por cavidade por ciclo de tampão de lavagem. Adicione MAb de detecção diluído à placa, 100 μl por cavidade. Incube a placa coberta à temperatura ambiente por uma hora com agitação. Dilua 80 μl de estoque I de HRP e estreptavidina (AMDEX estreptavidina-HRP, GE Healthcare n° RPN4401, cerca de 1 mg/ml) diluído a 1:80 em Diluente de Teste até 12 ml com Diluente de Teste = 1:12k. Lave a placa por quatro vezes com 400 μl por cavidade por ciclo de tampão de lavagem. Adicione estreptavidina-HRP diluída à placa, 100 μl por cavidade. Incube a placa coberta à temperatura ambiente por 45 minutos com agitação. Traga os reagentes TMB de duas etapas da Kirkegaard & Perry (KPL) para a temperatura ambiente; não os combine. Lave a placa por quatro vezes com 400 μl por cavidade por ciclo de tampão de lavagem. Misture volumes iguais de componentes de substrato TMB da KPL e adicione à placa, 100 μl por cavidade. Incube a placa por vinte minutos à temperatura ambiente com agitação. Adicione 1 M de ácido fosfórico à placa, 100 μl por cavidade. Leia a placa utilizando comprimento de onda de leitura de 450 nm e comprimento de onda de referência de 650 nm. Este teste ou um teste similar ao teste acima foi utilizado no teste clínico descrito no Exemplo 3.
[0333] Um teste de periostina utilizando anticorpos contra a isoforma 1 (não Periostina Total) foi realizado sobre diferentes amostras de pacientes com asma utilizando um formato de captura de anticorpo similar. Resultados preliminares indicam que a isoforma de periostina 1 não é tão robusta quanto um marcador da inflamação de TH2 como periostina total.
EXEMPLO 5
[0334] Estudo de Observação de Pacientes com Asma (BOBCAT): Relatamos anteriormente certas descobertas de biomarcadores com base em nossos estudos de amostras biológicas armazenadas no Banco de Tecidos das Vias Aéreas na Universidade da Califórnia, São Francisco (UCSF) que haviam sido recolhidas durante a broncoscopia realizada com fins de pesquisa em voluntários saudáveis e asmáticos. Vide, por exemplo, a Patente Internacional n° WO 2009/124090. Para verificar essas descobertas em uma grande coorte de asma moderada a severa e generalizá-las ao longo de diversos locais clínicos, conduzimos um estudo de observação de três visitas com múltiplos centros (“BBOCAT”) de asmáticos moderados a severos não controlados (ACQ > 1,50 e FEV1 de 40 a 80%) sobre altas doses de ICS (> 1000 μg/dia de fluticasona DPI ou equivalente) com a coleta de saliva induzida, biópsias endobrônquicas e sangue periférico. Obtivemos dados das vias aéreas e sangue coincidente de 59 pacientes (vide análise do estudo na Fig. 13). Detalhes do estudo são fornecidos abaixo.
[0335] BOBCAT (estudo de pesquisa exploratória broncoscópica de biomarcadores em asma refratária a corticosteroides) foi um estudo com múltiplos centros conduzido nos Estados Unidos, Canadá e Reino Unido para coletar amostras de sangue e vias aéreas coincidentes em cerca de 60 asmáticos moderados a severos. Os critérios de inclusão exigiam diagnóstico de asma moderada a severa (confirmado por FEV1 de 40 a 80% do previsto, bem como evidência nos últimos cinco anos de capacidade de reversão de >12% de obstrução das vias aéreas com um broncodilatador de ação curta ou sensibilidade a metacolina (PC20) < 8 mg/ml) que foi não controlado (conforme definido por pelo menos duas agravamentos no ano anterior ou avaliação de > 1,50 no Questionário de Controle de Asma (ACQ) (Juniper, E. F. et al, Respir. Med. 100, 616-621 (2006)) mediante regime de dose estável (> 6 semanas) de alta dose de ICS (>1000 μg de fluticasona ou equivalente por dia) com ou sem um agonista beta de ação prolongada. Medicações concomitantes permitidas também incluíram antagonistas receptores de leucotrieno e corticosteroides orais. O esquema do estudo BOBCAT é ilustrado na Fig. 13.
[0336] FENO, broncoscopia, BAL, saliva induzida e imuno- histoquímica para contagens de eosinófilos foram realizados conforme descrito anteriormente (Woodruff, P. G. et al, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 180, 388- 395 (2009); Boushey, H. A. et al, N. Engl. J. Med. 352, 1519-1528 (2005); Brightling, C. E. et al, Thorax 58, 528-532 (2003); Lemiere et al, J. Allergy Clin. Immunol. 118, 1033-1039 (2006)). Todos os protocolos de pesquisa foram aprovados por quadros de análise institucional relevantes e foi obtido consentimento informado de todos os pacientes antes da inscrição. Dados demográficos e da função pulmonar dos pacientes encontram-se resumidos na Tabela 5 abaixo. TABELA 5 DADOS DEMOGRÁFICOS E CLÍNICOS DE BOBCAT
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[0337] N. D.: não determinado.
[0338] Valores apresentados como média ± desvio padrão ou mediano (faixa).
[0339] * FPI, dipropionato de fluticasona. Razão equivalente de fluticasona: budesonida = 1:1,6.
[0340] ** Destes, seis pacientes também recebiam corticosteroides sistêmicos, recebendo de 4 a 20 mg de equivalentes de prednisolona por dia.
[0341] *** Destes, sete pacientes também recebiam corticosteroides sistêmicos, recebendo de 5 a 40 mg de equivalentes de prednisolona por dia.
[0342] Utilizamos valores de corte previamente especificados consistentes com estudos anteriores de 3% para eosinófilos da saliva (Green, R. H. et al, Lancet 360, 1715-1721 (2002); Haldar, P. et al, N. Engl. J. Med. 360, 973-984 (2009)) e 22 eosinófilos/mm2 da área de biópsia total (Miranda, C. A. et al, J. Allergy Clin. Immunol. 113, 101-108 (2004); Silkoff, P. E. et al, J. Allergy Clin. Immunol. 116, 1249-1255 (2005)). Os níveis de periostina no soro foram muito estáveis em pacientes individuais ao longo das três visitas, cobrindo até cinco semanas (dados não exibidos). Os níveis médios de periostina foram significativamente mais altos em pacientes com “eosinófilos altos” em comparação com pacientes com “eosinófilos baixos” conforme definido por medições de eosinófilos em tecido ou saliva (dados não exibidos). Pacientes estratificados por uma avaliação composta de 0 para nenhum, 1 para qualquer um ou 2 para ambos, eosinofilia de saliva e tecido, exibiram tendência altamente significativa de aumento da periostina do soro com avaliações de eosinófilos crescentes (dados não exibidos). Além disso, asmáticos não eosinofílicos ao longo de todas as coortes apresentaram consistentemente níveis de periostina no soro abaixo de 25 ng/ml utilizando o teste E4 descrito acima. Utilizando 25 ng/ml de periostina de soro como corte, pacientes com “baixos eosinófilos” e “altos eosinófilos” em BOBCAT foram efetivamente diferenciados com valor de previsão positivo de 93% (Tabela 6). As contagens de neutrófilos de tecidos apresentaram correlação positiva com os níveis de periostina no soro e eosinófilos de tecido (dados não exibidos). Tomados em conjunto, estes dados demonstram que periostina em soro é um biomarcador sistêmico de eosinofilia das vias aéreas persistente em asmáticos moderados a severos apesar do tratamento com esteroides. TABELA 6 TABELA DE CONTINGÊNCIA PARA VALORES DE CORTE DE PERIOSTINA EM SORO (N = 57) E FENO (N = 56) x ESTADO DE EOSINÓFILOS DAS VIAS AÉREAS COMPOSTAS EM BOBCAT
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[0343] Baixos eosinófilos: eosinófilos na saliva < 3% E eosinófilos na biópsia < 22/mm2.
[0344] Altos eosinófilos: eosinófilos na saliva > 3% OU eosinófilos na biópsia > 22/mm2.
[0345] PPV, valor de previsão positivo.
[0346] NPV, valor de previsão negativo.
[0347] O valor p é o teste exato de Fisher (duas pontas). COMPARAÇÃO ENTRE PERIOSTINA DE SORO E ÓXIDO NÍTRICO EXALADO FRACIONAL (FENO), EOSINÓFILOS DO SANGUE PERIFÉRICO, IGE DE SORO E YKL-40 DE SORO COMO BIOMARCADORES DA ASMA:
[0348] Nos últimos anos, foram descritos outros biomarcadores não invasivos da severidade da asma e inflamações das vias aéreas. Quatro marcadores de interesse específico são óxido nítrixo exalado fracional (FENO), um gás exalado produzido pela ação da enzima iNOS (sintase de óxido nítrico induzida) em mucosa dos brônquios inflamada (Pavord, I. D. et al, J. Asthma 45, 523-531 (2008)); eosinófilos do sangue periférico; IgE em soro; e YKL-40, uma proteína similar a chitinase detectável em sangue periférico (Chupp, G. L. et al, N. Engl. J. Med. 357, 2016-2027 (2007)). Medimos esses biomarcadores em nossas coortes asmáticas e comparamos os valores com eosinofilia das vias aéreas e outros biomarcadores.
[0349] Nem periostina, FENO, IgE nem eosinófilos do sangue foram correlacionados significativamente com ACQ, FEV1, idade, sexo ou índice de massa corporal (BMI) em BOBCAT. Em BOBCAT, os níveis de FENO, como os níveis de periostina em soro, foram geralmente consistentes ao longo de diversas visitas, embora FENO tenha variado mais em níveis mais altos (dados não exibidos) enquanto eosinófilos do sangue foram consideravelmente mais variáveis (r2 = 0,18 para eosinófilos do sangue entre as visitas 1 e 3, não exibidas, em comparação com r2 = 0,65 para periostina do soro entre as visitas 1 e 3). Conforme exibido na Fig. 14 A-F, os níveis de periostina no soro nas visitas 1, 2 e 3 apresentaram alta correlação entre si e com o nível médio de periostina ao longo de todas as visitas em BOBCAT.
[0350] Após a estratificação para o estado de eosinófilos em saliva e biópsia conforme indicado na Tabela 6, os níveis de FENO foram significativamente mais altos em asmáticos eosinofílicos em comparação com asmáticos não eosinofílicos. Embora tanto FENO quanto periostina possuíssem alto grau de especificidade, exibindo valores consistentemente baixos para pacientes com “baixos eosinófilos”, FENO detectou menos pacientes com eosinofilia de tecidos e exibiu maior sobreposição entre pacientes com “baixos eosinófilos” e “altos eosinófilos” de acordo com cada medida empregada (Figs. 15A-D). Enquadramos um modelo de regressão logística incorporando idade, sexo, BMI, eosinófilos do sangue, IgE de soro, FENO e periostina do soro (Tabela 7) e descobrimos que periostina era o previsor isolado mais significativo do estado de eosinófilos das vias aéreas compostas (p = 0,007). TABELA 7 MODELO DE REGRESSÃO LOGÍSTICA DE BIOMARCADORES X ESTADO DE EOSINÓFILOS NO ESTUDO BOBCAT (N = 59)
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[0351] Utilizando um valor de corte de 35 ppb conforme descrito anteriormente (Dweik, R. A. et al, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 181, 1033-1041 (2010)), FENO diferenciou asmáticos com “baixos eosinófilos” e “altos eosinófilos” com especificidade comparável mas sensibilidade mais baixa que um corte de periostina de 25 ng/ml (Tabela 6). Eosinófilos do sangue periférico apresentaram tendência mais alta em asmáticos com “altos eosinófilos”, mas não atingiram significado estatístico (dados não exibidos). Para determinar o desempenho relativo de cada marcador em base contínua, realizamos análise das características de operação receptora (ROC) de periostina, FENO, eosinófilos do sangue e IgE de soro em comparação com o estado de eosinófilos das vias aéreas compostos e concluímos que periostina apresentou desempenho favorável para FENO (AUCs de 0,84 e 0,79, respectivamente), enquanto eosinófilos do sangue e IgE de soro apresentaram desempenho substancialmente mais baixo (Fig. 15 E).
[0352] YKL-40 não exibiu correlações significativas com periostina nem com nenhuma medida de eosinofilia periférica ou das vias aéreas em nenhuma coorte (dados não exibidos). De forma consistente com essas descobertas de níveis de biomarcador do sangue e exalado, descobrimos que os níveis de expressão de genes epiteliais dos brônquios de periostina e NOS2 (o gene que codifica iNOS) foram significativamente correlacionados entre si e com os níveis de expressão da mucosa dos brônquios de IL-13 e IL-5, enquanto a expressão de CHI3L1 (o gene que codifica YKL-40) não foi correlacionado com periostina, IL-13, nem IL-5 (Tabela 8). Tomados em conjunto, esses dados sugerem que periostina do sangue periférico é um indicador mais confiável de inflamações eosinofílicas/de TH2 das vias aéreas que FENO, eosinófilos do sangue, IgE do soro ou YKL-40 em asmáticos ao longo de uma faixa de severidade e tratamento com esteroides. TABELA 8 MATRIZ DE CORRELAÇÃO ENTRE NÍVEIS DE EXPRESSÃO DE GENES CODIFICADORES DE BIOMARCADORES E CITOQUINAS TH2
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[0353] Valores fornecidos como correlação de avaliação de Spearman (valor p).
[0354] Níveis de expressão de IL-13 e IL-5 determinados a partir de biópsias endobronquiais por meio de qPCR.
[0355] Periostina (POSTN_210809_s_at), NOS2 (NOS2_210037_s_at) e CHI3L1 (CHI3L1_209395_at), o gene que codifica YKL-40, determinados a paritr de microconjunto epitelial dos brônquios descrito em Truyen, E. L. et al, Thorax 61, 202-208 (2006).
ANÁLISE:
[0356] Embora a asma seja tradicionalmente considerada doença alérgica mediada por inflamação dirigida por TH2 (1), existem evidências crescentes de heterogeneidade patofisiológica (3-8). Demonstramos recentemente que, em asmáticos suaves a moderados sem tratamento com esteroides, apenas cerca da metade dos pacientes apresenta evidências de inflamação de TH2 nas suas vias aéreas. O subconjunto com “alto TH2” é diferenciado por marcadores elevados de alergia, inflamações das vias aéreas eosinofílicas, fibrose brônquica e sensibilidade a ICS (13). Como os antagonistas das citocinas de TH2 IL-4, IL-5 e IL-13 encontram-se sob desenvolvimento ativo como terapêuticos da asma (35-37), tornar-se-á importante identificar os asmáticos mais propensos a beneficiar-se dessas terapias dirigidas. Embora a broncoscopia, amostragem de saliva induzida e a medição de gases exalados permitam a caracterização direta de processos inflamatórios nas vias aéreas, essas modalidades podem ser demoradas, caras, invasivas e/ou não estão amplamente disponíveis em ambientes de cuidados primários. Além disso, os procedimentos de teste não são padronizados ao longo dos relativamente poucos centros equipados para analisar amostras das vias aéreas, o que torna desafiadora a implementação em testes clínicos com múltiplos centros. Desta forma, para selecionar pacientes com evidência de inflamações eosinofílicas dirigidas por TH2 nas suas vias aéreas para terapias dirigidas, será benéfico desenvolver biomarcadores não invasivos de inflamações das vias aéreas eosinofílicas dirigidas por TH2 amplamente disponíveis em plataformas de teste acessíveis. Para atender a essa necessidade utilizamos formação de perfis de expressão genética em amostras das vias aéreas de asmáticos para permitir a descoberta e a caracterização de biomarcadores periféricos clinicamente úteis de inflamações das vias aéreas eosinofílicas dirigidas por TH2.
[0357] Periostina é uma proteína matricelular secretada associada a fibrose cuja expressão é regulada para cima por IL-4 e IL-13 recombinantes em células epiteliais dos brônquios cultivadas (21, 38) e fibroblastas dos brônquios (39). Ela é expressa em níveis elevados in vivo em um modelo de asma em camundongos (40), modelo de asma em rhesus (dados não publicados), em células epiteliais dos brônquios (21) e na camada brônquica subepitelial (39) de asmáticos humanos. Em asmáticos humanos, os níveis de expressão de periostina correlacionam-se com a espessura da membrana base reticular, um indicador de fibrose subepitelial (23). Periostina também é sobre-expressa em pólipos nasais associados a asma sensível a aspirina (41, 42) e no epitélio do esôfago de pacientes com esofagite eosinofílica de forma dependente de IL-13 (43) e, portanto, pode desempenhar papel na infiltração em tecido de eosinófilos em processos de doença dirigidos por TH2 (44). Também se observou expressão elevada de periostina em vários tipos de cânceres derivados epiteliais (45-49) e níveis elevados de periostina solúvel foram relatados no soro de alguns pacientes com câncer (24-26, 45, 46). Ainda não está claro se a expressão local e sistêmica de periostina em asma ou outras condições deve-se às ações diretas ou indiretas de IL-13 e isso será mais bem abordado por determinações que comparam a expressão de periostina antes e depois do bloqueio terapêutico de IL-13.
[0358] Periostina é detectável em concentrações sistêmicas consideráveis no sangue periférico de pacientes não asmáticos, mas é elevada no sangue periférico de um subconjunto de asmáticos fora de tratamento com ICS. A sua expressão em epitélio dos brônquios é suprimida por tratamento com ICS (13, 21) e os seus níveis sistêmicos são geralmente mais baixos em asmáticos moderados relativamente bem controlados com ICS em comparação com asmáticos sem ICS, embora com heterogeneidade considerável. Considerando que ICS exerce principalmente os seus efeitos localmente nas vias aéreas e os níveis de periostina sistêmicos (conforme exibimos anteriormente; vide, por exemplo, a Patente Internacional Publicada n° WO 2009/124090) são suprimidos em asmáticos após passarem por tratamento com ICS, pode-se concluir que uma fração substancial de periostina sistêmica origina-se das vias aéreas em asmáticos e, protanto, diferenças de níveis de periostina sistêmica de 10 a 20% são clinicamente significativos com relação a inflamações das vias aéreas.
[0359] FENO é associado a inflamações das vias aéreas e prevê a capacidade de reação de ICS em asmáticos com severidade variável (11, 34). Os níveis de FENO não refletem de forma confiável, entretanto, eosinofilia das vias aéreas em asma dependente de esteroides severa e existem discrepâncias entre a quantificação de eosinófilos na saliva e na mucosa com relação a FENO (29, 50). Tratamento com ICS de titulação para suprimir a contagem de eosinófilos da saliva reduz a taxa de agravamentos de asma severos (12), mas o tratamento com ICS de titulação até os níveis de FENO não o faz (51). YKL-40 do soro foi descrito como marcador de inflamações das vias aéreas asmáticas, mas os seus níveis não estavam correlacionados com medidas de inflamações de TH2 tais como IgE ou eosinófilos (33). Consequentemente, no presente estudo, descobrimos que níveis de expressão de genes epiteliais brônquicos de periostina e NOS2, mas não de CHI3L1, foram correlacionados à expressão de IL-13 e IL-5 dos brônquios (Tabela 8). Embora tenhamos observado correlações positivas relativamente fortes entre os níveis de periostina no soro e eosinofilia brônquica ou sistêmica, as correlações entre eosinofilia e FENO foram mais fracas e não observamos correlação entre YKL-40 do soro e inflamações eosinofílicas nos asmáticos estudados. As contagens de eosinófilos no sangue e na saliva e FENO estão sujeitas a variabilidade temporal significativa dependendo da exposição a alérgenos, agravamentos e tratamento com esteroides (50, 52, 53). Embora a meia-vida de periostina em circulação atualmente seja desconhecida, é possível que, caso periostina apresente vida relativamente longa no sangue, os níveis de periostina sistêmica possam refletir uma integração de inflamações de TH2 das vias aéreas totais ao longo de um período de tempo mais longo. De forma consistente com essa possibilidade, observamos relativamente pouca variabilidade de periostina no soro entre pacientes em três medições ao longo de até cinco semanas (dados não exibidos). Estudos futuros deverão ser dirigidos à determinação comparativa da variabilidade entre pacientes longitudinal em periostina no soro, eosinofilia das vias aéreas, FENO e outros possíveis biomarcadores de inflamações de TH2 por períodos de tempo mais longos.
[0360] O padrão de cuidado para asma brônquica que não é bem controlada com terapia sintomática (tal como, agonistas β) é a inalação de corticosteroides (ICS). Em asmáticos suaves a moderados com níveis elevados de IL-13 nas vias aéreas (19) e em pacientes com esofagite eosinofílica com níveis de expressão elevados de IL-13 em tecido do esôfago (43), o tratamento com ICS reduz substancialmente o nível de IL-13 e genes induzidos por IL-13 nos tecidos afetados. No epitélio das vias aéreas de asmáticos após uma semana de tratamento com ICS e em células epiteliais dos brônquios em cultivo, demonstramos que o tratamento com corticosteroides reduz substancialmente os níveis de expressão induzidos por IL-13 de genes de assinatura de TH2 (13, 21). Esta regulagem para baixo poderá ser o resultado de redução mediada por ICS dos níveis de IL-13, redução mediada por ICS da expressão de genes alvo ou uma combinação de ambas. Em asmáticos severos refratários ao tratamento com ICS, concluiu-se que uma fração similar de pacientes (cerca de 40%) possui níveis de IL-13 em saliva detectáveis aos observados em asmáticos que não receberam ICS suaves (19), o que é comparável com a proporção de pacientes com a assinatura de TH2 epitelial brônquica que descrevemos (13). Observações similares foram relatadas para persistência em asmáticos refratários a esteroides de células que expressam IL-4 e IL-5 e 54 em BAL (54) e inflamação eosinofílica em biópsias dos brônquios e saliva (8). Estas observações sugerem que, embora a inflamação eosinofílica dirigida por TH2 seja suprimida por tratamento de ICS em asmáticos moderados, ela surge novamente em um subconjunto de asmáticos severos controlados incompletamente por tratamento com esteroides. Uma complicação adicional é causada pela adesão incompleta à terapia de ICS prescrita, que pode causar baixo controle em alguns asmáticos severos. Desta forma, estudos futuros deverão ser dirigidos à determinação de níveis de periostina no sangue no contexto de estado de tratamento de ICS, dose de ICS, sensibilidade intrínseca a esteroides e adesão à terapia de ICS em asmáticos controlados e não controlados.
[0361] Atualmente, existem diversos produtos terapêuticos biológicos em desenvolvimento clínico dirigidos a IL-13 e fatores relacionados que dirigem a inflamação de TH2 em asma (35-37), incluindo os descritos no presente. É importante que esses tratamentos sejam dirigidos a pacientes com patologia molecular relevante, caso contrário efeitos importantes do tratamento podem ser subestimados; estudos de terapia anti-IL-5 destacam este ponto (14, 15, 55). Nossas descobertas sugerem que cerca da metade dos asmáticos suaves a moderados que não receberam esteroides pode exibir atividade da Via de TH2 nas suas vias aéreas e uma fração similar de asmáticos refratários a esteroides moderados a severos exibe atividade dessa via. Conforme descrito no presente, portanto, biomarcadores que identificam asmáticos propensos a ter inflamações dirigidas por TH2 nas suas vias aéreas podem auxiliar na identificação e seleção de pacientes mais propensos a ser responsivos a essas terapias alvo experimentais. REFERÊNCIAS (EXEMPLO 5): 1. Galli, S. J., M. Tsai e A. M. Piliponsky, The development of allergic inflammation. Nature 454, 445-454 (2008). 2. Haldar, P. e I. D. Pavord, Noneosinophilic asthma: a distinct clinical and pathologic phenotype. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 10431052; quiz 1053-1044 (2007). 3. Anderson, G. P., Endotyping asthma: new insights into key pathogenic mechanisms in a complex, heterogeneous disease. Lancet 372, 1107-1119 (2008). 4. Moore, W. C., D. A. Meyers, S. E. Wenzel, W. G. Teague, H. Li, X. Li, R. D’Agostino, Jr., M. Castro, D. Curran-Everett, A. M. Fitzpatrick, B. Gaston, N. N. Jarjour, R. Sorkness, W. J. Calhoun, K. F. Chung, S. A. Comhair, R. A. Dweik, E. Israel, S. P. Peters, W. W. 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EXEMPLO 6
[0362] Estudo com pacientes com asma III (para determinar a segurança, tolerabilidade e eficácia): O estudo será um estudo aleatorizado, com múltiplos centros, duplo cego, controlado por placebo de grupos paralelos de lebrikizumab em pacientes com asma severa que permanece não controlada apesar da terapia diária com ICS (500 a 2000 μg/dia de inalador em pó seco propionato de fluticasona (DPI) ou equivalente) mais uma segunda medicação de controle, tal como agonista β de ação prolongada (LABA), antagonista receptor de leucotrieno (LTRA), antagonista muscarínico de ação prolongada (LAMA) ou teofilina. Este estudo também determinará o valor diagnóstico de níveis de linha base de periostina em soro > 50 ng/ml (conforme medido por meio do teste Elecsys®). Embora prosseguindo com o seu padrão de terapia de cuidado, que deve incluir ICS e uma segunda medicação de controle, os pacientes serão atribuídos aleatoriamente a uma dentre três doses de lebrikizumab ou placebo por um período controlado por placebo de 52 semanas.
[0363] Durante um período de condução de duas semanas, também denominado período de seleção (Visita 1 à Visita 3), será determinada a aceitação dos pacientes à sua terapia de asma atual e sua capacidade de uso do equipamento necessário para visitas clínicas mensais ao longo de todo o estudo, bem como o grau de controle de asma fornecido pelas suas medicações padrão de cuidado. Os pacientes que relatam uma avaliação do Questionário de Controle de Asma (ACQ-5) > 1,5 e um ou mais sintomas de asma que não são controlados (despertar noturno > 1 vez por semana, sintomas > 2 dias por semana, uso de SABA > 2 dias por semana e/ou interferência com atividades diárias) serão considerados não controlados. Pacientes cujos sintomas permanecem não controlados na Visita 1 ou Visita 2 e Visita 3 apesar da adesão a remédios de controle serão elegíveis para participar. O período de seleção pode ser estendido em uma semana caso os dados de adesão estejam incompletos e para pacientes cujo ACQ-5 é < 1,5 na Visita 3, caso a experiência do pesquisador com esse paciente sugira que essa semana foi atípica para a sua doença. Os pacientes podem ser elegíveis para nova seleção por razões selecionadas por até duas vezes adicionais.
[0364] Ao final do período de condução (seleção), os pacientes elegíveis serão alocados aleatoriamente (1:1:1:1) à droga do estudo (placebo ou 37,5 mg de lebrikizumab SC mensais, 125 mg SC mensais ou 250 mg SC a cada quatro semanas). A aleatorização será estratificada por periostina em soro de linha base conforme medido utilizando o teste Elecsys® (< 42 ng/ml, > 42 a < 50 ng/ml, > 50 a < 58 ng/ml, > 58 ng/ml), histórico de agravamentos de asma nos últimos doze meses (0, 1-2, > 3 eventos), medicações de asma de linha base (dose de ICS > 1000 μg/dia de propionato de fluticasona DPI ou equivalente mais LABA (sim, não)) e região geográfica (Estados Unidos/Canadá, Europa, Ásia, resto do mundo). Os pacientes continuarão com doses estáveis da sua terapia padrão de cuidado, que devem incluir ICS (500 a 2000 μg/dia de propionato de fluticasona DPI ou equivalente) e uma segunda medicação de controle, além de receber tratamento de estudo duplo cego por 52 semanas.
[0365] A primeira injeção SC do tratamento de estudo ocorrerá no mesmo dia da aleatorização (Visita 3 (Dia 1)) e a dosagem será repetida uma vez a cada quatro semanas ao longo do período de 52 semanas controlado por placebo (para um total de 13 doses de tratamento de estudo). Medidas de segurança, eficácia e resultado relatado pelo paciente (PRO) serão determinadas ao longo de todo o período de 52 semanas controlado por placebo. O objetivo de eficácia primário é a taxa de agravamentos de asma e será determinado ao longo do período de 52 semanas controlado por placebo.
[0366] Pacientes que completam o período de 52 semanas controlado por placebo (ou seja, pacientes que não suspenderam prematuramente o tratamento de estudo) continuarão em uma extensão de tratamento ativo por 52 semanas.
[0367] Todos os pacientes que continuarem pelo estudo de extensão de tratamento ativo por 52 semanas receberão lebrikizumab SC duplo cego em dose de 125 mg ou 250 mg a cada quatro semanas. Os pacientes designados para receber 125 mg ou 250 mg de lebrikizumab durante o período de 52 semanas controlado por placebo permanecerão na sua dose de lebrikizumab atribuída. Os pacientes designados para receber placebo ou lebrikizumab a 37,5 mg SC a cada quatro semanas durante o período de 52 semanas controlado por placebo serão aleatorizados em razão 1:1 a 125 mg ou 250 mg de lebrikizumab SC a cada quatro semanas pela extensão de tratamento ativo por 52 semanas, com a aleatorização estratificada por nível de periostina de linha base e atribuição de tratamento anterior.
[0368] Na semana 76 da extensão de tratamento ativo por 52 semanas, cada paciente terá determinado o controle de asma utilizando dados das três visitas mais recentes (Semanas 68, 72 e 76). Pacientes cujos sintomas de asma foram controlados pelas doze semanas consecutivas (ACQ 5 < 0,75 em cada determinação) e que não apresentaram agravamentos na primeira metade da extensão de tratamento ativo (Semanas 52-76) suspenderão a terapia com lebrikizumab e iniciarão o período de acompanhamento. Durante o acompanhamento, os pacientes serão seguidos para determinar a segurança por 24 semanas após a última dose da droga de estudo. Pacientes que permanecem sintomáticos (ACQ-5 > 0,75) na Semana 76 ou que experimentaram um evento de agravamento durante a primeira metade da extensão de tratamento ativo (Semanas 52-76) continuarão em tratamento com lebrikizumab por 28 semanas adicionais. Segurança, eficácia e medidas de PRO serão determinadas ao longo de toda a extensão de tratamento ativo por 52 semanas.
[0369] No período de acompanhamento, todos os pacientes serão acompanhados para determinação da segurança por 24 semanas (> 5 meias-vidas da droga) após a última dose de tratamento de estudo sempre que isso venha a ocorrer, seja conforme programado no protocolo ou no caso de suspensão precoce do tratamento de estudo. Para os pacientes que completarem o estudo até a Visita 23 (Semana 76), forem bem controlados e tiverem o tratamento de estudo suspenso, a Visita 23 substituirá a Visita de Acompanhamento de Segurança 1. Para os pacientes que completarem todo o estudo até a Visita 30 (Semana 104), a Visita 30 substituirá a Visita de Acompanhamento de Segurança 1. Nestes dois casos, a próxima visita no período de acompanhamento será a Visita de Acompanhamento de Segurança 2 na Semana 12. Para todos os outros pacientes, a primeira visita de acompanhamento será a Visita de Acompanhamento de Segurança na Semana 4 (cerca de quatro semanas após a última dose de tratamento de estudo) do período de acompanhamento de segurança.
[0370] A participação total no estudo, desde a aleatorização na Visita 3 (Dia 1), incluindo o período de 52 semanas controlado por placebo, a extensão de tratamento ativo por 52 semanas e o período de acompanhamento de segurança, pode ser de até 124 semanas.
[0371] Cerca de 1400 pacientes (175 pacientes por grupo de tratamento (lebrikizumab SC a 250 mg, 125 mg, 37,5 mg ou placebo) por grupo de periostina (alta periostina > 50 ng/ml, baixa periostina < 50 ng/ml)) serão inscritos no estudo em cerca de 250 locais em todo o mundo. Pelo menos 650 pacientes serão inscritos no grupo de alta periostina (> 50 ng/ml). Pelo menos cerca de 450 pacientes tratados com ICS fluticasona > 1000 μg/dia DPI ou equivalente mais LABA serão inscritos.
[0372] Os principais critérios de inclusão incluíram os seguintes: Diagnóstico de asma > 12 meses antes da seleção; reação/reversibilidade de broncodilatador: Os pacientes devem possuir reação de broncodilatador > 12% em reação a quatro aspirações de agonista β de curta duração (tal como albuterol ou salbutamol) durante o período de seleção; FEV1 antes do broncodilatador a 40%-80% do previsto na Visita 2 e na Visita 3; em ICS > 500 (tal como 500 a 2000) μg de propionato de fluticasona DPI ou equivalente (dose diária total) por > 6 meses antes da seleção; em segunda medicação de controle (tal como LABA, LAMA, LTRA ou teofilina dentro da faixa prescrita) por seis meses antes da seleção; asma não controlada demonstrada durante o período de seleção (ou seja, Visita 1 (Dia -14) ou Visita 2 (Dia -7)) e no momento da aleatorização (Visita 3 (Dia 1)), definida conforme segue: avaliação ACQ-5 > 1,5 e pelo menos um dos sintomas de asma a seguir que não é controlado com base no Relatório do Quadro de Especialistas 3 do Instituto Nacional do Coração, Pulmão e Sangue e do Programa Nacional de Prevenção e Educação Sobre Asma (3007) e nas orientações da Iniciativa Global Sobre Asma (2010): - sintomas > 2 dias/semana; - despertar noturno > 1 vez/semana; - uso de SABA como medicação de resgate > 2 dias/semana; - interferência com as atividades diárias normais.
[0373] Raio X do tórax ou varrimento por tomografia computadorizada (CT) obtido em até doze meses antes da Visita 1 ou raio X do tórax durante o período de seleção que confirma a ausência de outra doença pulmonar; e adesão demonstrada à medicação de controle de > 70% durante o período de seleção (a adesão é definida como pacientes que respondem afirmativamente que tomaram sua terapia de controle da asma > 70% dos dias durante o período de seleção (Visita 1 à Visita 3) conforme registrado no seu dispositivo medidor do fluxo de pico).
[0374] Os principais critérios de exclusão incluem os seguintes: histórico de reação alérgica severa ou reação anafilática a um agente biológico ou hipersensibilidade conhecida a qualquer componente da injeção de lebrikizumab; terapia com corticosteroide oral de manutenção, definida como terapia de manutenção com corticosteroide oral diária ou em dias alternados em até três meses antes da Visita 1; agravamento de asma durante as quatro semanas antes da seleção (Visita 1) ou a qualquer momento durante a seleção que necessitou de corticosteroides sistêmicos (orais, intravenosos (IV) ou intramusculares (IM)) por qualquer razão, incluindo eventos de agravamento agudo; um episódio importante de infecção que necessite de qualquer um dos seguintes: 1. hospitalização por > 24 horas dentro das quatro semanas antes da seleção (Visita 1); 2. tratamento com antibióticos IV dentro das quatro semanas de seleção (Visita 1); 3. antibióticos orais dentro das duas semanas antes da seleção (Visita 1); 4. infecções parasíticas ativas em até seis meses antes da Visita 1; tuberculose necessitando de tratamento dentro dos doze meses antes da seleção (são permitidos pacientes tratados de tuberculose sem recorrência em doze meses após o término do tratamento); imunodeficiência conhecida, incluindo, mas sem limitações, infecções por HIV; uso atual de terapia imunomoduladora; malignidade atual conhecida ou avaliação atual em busca de potencial malignidade; evidência de hepatite ativa B/C ou doença do fígado instável; infecção parasítica ativa dentro de seis meses antes da seleção; elevação de AST/ALT > 2,0 o limite superior do normal; histórico de fibrose cística, doença pulmonar obstrutiva crônica e/ou outra doença pulmonar clinicamente significativa diferente de asma; fumante atual ou histórico de fumo > 10 anos-carteira; uso de terapia biológica a qualquer momento durante os seis meses antes da seleção; pacientes mulheres com potencial reprodutivo que não estão dispostas a utilizar um método de contracepção de alta eficácia pela duração do estudo ou que estejam grávidas ou em lactação; outras doenças médicas instáveis; índice de massa corporal > 38 kg/m2; peso do corpo < 40 kg.
[0375] Raciocínio de dosagem de fase III: Análise de população PK: Um modelo PK de população preliminar foi desenvolvido para descrever o perfil PK de lebrikizumab em pacientes adultos. Ao todo, 4914 amostras de tempo e concentração em soro de 333 pacientes tratados com lebrikizumab nos estudos descritos acima foram utilizadas para desenvolver o modelo. Nenhuma diferença aparente foi observada ao longo dos estudos, conforme evidenciado por boa concordância entre o perfil PK médio obsrevado em cada estudo e o perfil previsto a partir de dados históricos.
[0376] Um modelo bicomportamental com cinética de eliminação e absorção de primeira ordem descreveu adequadamente os dados de tempo e concentração de lebrikizumab em soro. Os parâmetros de modelo estrutural incluíram liberação (CL), volume de distribuição do compartimento central (V1), volume do compartimento periférico (V2), liberação entre os compartimentos (Q), bem como taxa em primeira ordem de absorção (Ka) e biodisponibilidade (F) após administração SC. Todos os parâmetros, exceto V2 e Q (que foram fixados em valores médios da população), foram considerados distribuídos normalmente.
[0377] CL e V1 médios da população foram estimados em 0,18 l/dia e 3,7 l, respectivamente. A biodisponibilidade média da população foi estimada em 76%. A variabilidade entre indivíduos de parâmetros PK foi modesta, variando de 15% a 27%. Descobriu-se que o peso do corpo é uma covariação significativa para CL e os volumes de distribuição de lebrikizumab, com pesos mais altos associados a liberações mais altas e volumes de distribuição mais altos. Cerca de 19% da variabilidade de CL entre indivíduos e 11% da variabilidade de V1 entre indivíduos foram explicados pelo peso do corpo. Os parâmetros PK da população estimados encontram-se resumidos na Tabela 13. A análise de PK da população indicou que as características de PK de lebrikizumab são consistentes com as típicas de um anticorpo monoclonal de IgG.
[0378] O efeito de periostina sobre os parâmetros de PK foi determinado por meio de comparação das estimativas post hoc individuais de parâmetros de PK entre pacientes com níveis de periostina de linha base acima e abaixo da média no estudo do Exemplo 2 e no estudo do Exemplo 3. As diferenças foram insignificantes (p > 0,05) nos dois estudos para CL (p = 0,54, 0,11), V1 (p = 0,83, 0,79) e F (p = 0,74, 0,37). TABELA 13 PARÂMETROS DE PK NA POPULAÇÃO COM LEBRIKIZUMAB
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[0379] BW = peso do corpo; CL = liberação; PK = farmacocinético; Q = liberação entre compartimentos; SE = desvio padrão; V1 = volume de distribuição do compartimento central; V2 = volume de distribuição do compartimento periférico.
[0380] Obs.: o efeito de BW foi modelado como função da potência, TVPi = θ1 * (BWi/BWRef)θ2, para a qual TVP é um valor típico do parâmetro PK; BWi designa o peso do corpo para o i° indivíduo, BWRef designa o peso do corpo de referência, que é o peso do corpo médio de todos os pacientes incluídos no modelo PK da população (82 kg), θ1 designa a estimativa média da população do parâmetro PK e θ2 designa o efeito do peso do corpo sobre o parâmetro PK.
[0381] Raciocínio de dosagem plana: Utilizou-se dosagem plana nos estudos de Fase II descritos acima. Considerando o efeito do peso do corpo sobre o perfil PK de lebrikizumab, pacientes mais pesados geralmente apresentaram exposição à droga mais baixa. Não foi encontrada, entretanto, correlação entre o peso do corpo e a mudança proporcional em FEV1 da linha base até a Semana 12 em pacientes individuais tratados com lebrikizumab, o que indica que o efeito do peso do corpo sobre a exposição não apresentou impacto sobre a eficácia (vide a Figura 20). Além disso, os dados desses estudos não indicaram preocupação de segurança com dosagem plana dentro da faixa de peso do corpo testada (53-135 kg).
[0382] Para avaliar o impacto da dosagem plana sobre a variabilidade geral da exposição a lebrikizumab, foram realizadas simulações de PK da população para comparar a dosagem plana e os regimes de dosagem com base em peso do corpo equivalentes (ou seja, mg/kg), considerando distribuição de peso do corpo similar à observada nos estudos de Fase II descritos acima. A proporção prevista de pacientes com concentrações em cuba em estado estável acima de vários níveis foi similar entre regimes de dosagem plana e com base no peso do corpo (vide a Figura 21), o que não sugere vantagem clara para a dosagem com base em peso do corpo. Consequentemente, selecionou-se dosagem plana para o estudo de Fase III, considerando sua vantagem para reduzir o risco de erro de dosagem e complexidade operacional (tal como a preparação de droga) em comparação com dosagem com base no peso do corpo individualizada.
[0383] Raciocínio de concentrações alvo: Foram realizadas análises de reação à exposição utilizando os dados de Fase II para derivar concentrações de lebrikizumab alvo para informar a seleção de dose para os estudos de Fase III. Nos dois estudos de Fase II descritos acima, nenhuma correlação aparente foi encontrada entre a alteração corrigida por placebo em FEV1 a partir da linha base e a concentração de droga em cuba de soro na Semana 12 (dados não exibidos) em pacientes individuais tratados com lebrikizumab, o que sugere que o efeito de lebrikizumab sobre FEV1 é saturado na faixa de exposição testada nos dois estudos. Além disso, determinações da correlação entre a alteração em biomarcadores de PD (FeNO, IgE, CCL17 e CCL13) e concentrações de droga em cuba de soro nos estudos de Fase II sugeriram saturação dessas reações de PD durante o período de tratamento nos dois estudos. Os resultados foram similares no grupo com alta periostina. Com base nesses resultados, foi proposta uma concentração de cuba em estado estável de soro alvo de 10 μg/ml para incluir a extremidade inferior da faixa Ccuba, semana 12 observada nos dois estudos (5° ao 95° percentual: 9,6 a 50 μg/ml no estudo do Exemplo 2; 9,4 a 73 μg/ml no estudo do Exemplo 3). Além disso, espera-se que uma concentração em soro de 10 μg/ml mantenha nível de droga suficientemente alto no pulmão para neutralizar IL 13 em pacientes com asma, considerando a partição entre soro e pulmão considerada dos níveis de lebrikizumab (1:500) e IL-13 no pulmão com base em dados disponíveis na literatura. Antecipa-se, portanto, que uma dose eficaz na Fase III manterá concentração na cuba em estado estável em soro > 10 μg/ml.
[0384] Para selecionar uma dose parcialmente eficaz em Fase III, foi proposta concentração em cuba em estado estável alvo inferior de 5 μg/ml para garantir ausência de sobreposição com a faixa de Ccuba, semana 12 observada nos estudos do Exemplo 2 e do Exemplo 3, nos quais foi observada a eficácia. Além disso, nos dois estudos, o efeito de lebrikizumab sobre os níveis de CCL17 em soro (TARC) retornou para a linha base durante a lavagem de droga (vide a Figura 22; (A) estudo de Exemplo 2, (B) estudo de Exemplo 3) em concentrações médias de lebrikizumab em soro > 5 μg/ml. Embora o efeito de lebrikizumab sobre CCL17 em soro (TARC) não fosse correlacionado diretamente com a eficácia, a recuperação desse biomarcador sugere a supressão abaixo da ideal da atividade de IL-13 em certos processos biológicos nessa concentração. É proposta, portanto, uma dose parcialmente eficaz para manter concentração em cuba em estado estável em soro < 5 μg/ml.
[0385] Raciocínio para as doses de Fase III propostas: Considerando a falta de uma reação à dosagem clara no estudo do Exemplo 3 conforme descrito acima (ou seja, as doses de 125 mg, 250 mg e 500 mg pareceram igualmente eficazes), as doses de Fase III foram selecionadas para demonstrar reação de dosagem de lebrikizumab por meio da inclusão de níveis de dosagem eficazes e parcialmente eficazes. Para atender a esse objetivo, as doses propsotas de lebrikizumab para o programa de Fase III incluem 250 mg, 125 mg e 37,5 mg administradas por meio de injeção SC a cada quatro semanas (q4wk). A Figura 23 exibe os perfis PK da população simulada nessas doses, considerando distribuição em peso do corpo similar à observada nos estudos de Fase II.
[0386] Antecipa-se que a dose mais alta de 250 mg (duas injeções SC de 1 ml) q4wk demonstra eficácia clínica em Fase III. É o único regime de dosagem estudado no estudo de prova de conceito de Fase II (Exemplo 2) e exibiu eficácia na redução da taxa de agravamentos de asma severos em pacientes cuja asma era não controlada apesar da terapia com ICS, a população de pacientes destinada a tratamento. Os pacientes do Exemplo 2 apresentaram asma não controlada apesar do tratamento com ICS com ou sem outro controlador e > 90% de pacientes no Exemplo 2 que recebiam ICS > 500 μg/dia também estavam recebendo medicação LABA. Nesse regime de dosagem, prevê-se que quase todos os pacientes (99%) atinjam o Ccuba,ss alvo de 10 μg/ml com base nas simulações de PK da população (vide a Tabela 14), o que indica que se espera eficácia máxima. Essa dose será testada, portanto, para reproduzir a eficácia clínica observada na Fase II. TABELA 14 PERCENTUAL PREVISTO DE PACIENTES COM CONCENTRAÇÃO EM CUBA EM ESTADO ESTÁVEL ACIMA DO ALVO NAS DOSES PROPOSTAS PARA A FASE III
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[0387] Uma dose intermediária de 125 mg (uma injeção SC de 1 ml) q4wk é proposta com base nas magnitudes similares de melhoria de FEV1 observadas a 125 e 250 mg q4wk no estudo de variação de dosagem de Fase II (Exemplo 3). É razoável esperar que a mesma relação entre dose e reação mantenha-se verdadeira na população de pacientes com asma severa para o objetivo de agravamento e, portanto, antecipa-se que a dose de 125 mg exibe eficácia na Fase III. Esta expectativa é adicionalmente sustentada pelas simulações de PK da população, o que sugere que a maior parte (78%) dos paciente atingirá o Ccuba,ss alvo de 10 μg/ml com esse regime de dosagem (vide Tabela 14).
[0388] A dose de 37,5 mg (uma injeção SC de 0,3 ml) q4wk é proposta a fim de demonstar uma dose parcialmente eficaz ou clinicamente ineficaz de lebrikizumab que seja importante para estabelecer uma relação de reação à dosagem. Este regime de dosagem é selecionado levando em conta as considerações a seguir: - capacidade de manter Ccuba,ss abaixo de 5 μg/ml na maior parte (72%) dos pacientes e abaixo de 10 μg/ml em quase todos os pacientes (99%) (vide Tabela 14); - separação razoável (3,3 vezes) da dose intermediária; - sobreposição mínima na faixa simulada de exposição de soro a lebrikizumab com a dose intermediária (vide a Tabela 14), a fim de demonstrar reações clínicas diferenciais; - volume de injeção conveniente (múltiplo de 0,1 ml) para reduzir possíveis erros de dosagem.
[0389] As várias medidas de resultado desse teste de Fase III são descritas abaixo.
[0390] Medidas do resultado: Cada um dos objetivos a seguir será determinado separadamente em pacientes com alta periostina e baixa periostina. O teste será considerado positivo se o objetivo primário for atendido no grupo com alta periostina quando o grupo de 250 mg de lebrikizumab for comparado com o grupo placebo.
[0391] Medida do resultado de eficácia primária: A medida do resultado de eficácia primário é a taxa de agravamentos de asma durante o período de 52 semanas controlado por placebo. Para este teste, agravamentos de asma serão definidos como sintomas de asma novos ou mais altos (incluindo, por exemplo, respiração ofegante, tosse, dispneia, rigidez do peito ou despertar noturno devido a esses sintomas) que levam a tratamento com corticosteroides sistêmicos ou hospitalização. Neste ponto, o tratamento com corticosteroides sistêmicos é definido com corticosteroides orais (ou seja, OCS) ou parenterais por > 3 dias em uma visita ao departamento de emergência com uma ou mais doses de corticosteroides parenterais (IV ou IM).
[0392] Medidas do resultado da eficácia secundárias: As medidas de resultado de eficácia secundárias na Semana 52 são as seguintes: alteração relativa de FEV1 antes do broncodilatador da linha base até a Semana 52; tempo até o primeiro agravamento de asma durante o período de tratamento de 52 semanas; alteração da excreção fracional de óxido nítrico (FENO) da linha base até a Semana 52; alteração da qualidade de vida relativa à saúde específica de asma, determinada pela Avaliação Geral da Versão Padronizada do Questionário de Qualidade de Vida com Asma (AQLQ(S)) da linha base até a Semana 52; alteração do uso da medicação de resgate (medida pelo número de inalações por dia de medicação de resgate ou medicação de resgate nebulizada (ou seja, SABA)) da linha base até a Semana 52; taxa de utilização de assistência méidca de urgência relativa à asma (ou seja, hospitalizações, visitas a pronto-socorros e visitas de assistência aguda) durante o período de 52 semanas controlado por placebo.
[0393] Medidas de resultado exploratório: As medidas de resultado exploratório incluirão as seguintes: proporção de pacientes que não experimentaram agravamento de asma definida por protocolo durante o período de 52 semanas controlado por placebo; alteração do valor de fluxo de pico após o broncodilatador matinal (l/min) da linha base até a Semana 52; alteração de FEV1 após o broncodilatador da linha base até a Semana 52; tempo até melhoria de 150 ml em FEV1 antes do broncodilatador durante o período de 52 semanas controlado por placebo; alteração relativa em FEV1 antes do broncodilatador (litros) a partir da linha base com média calculada ao longo das Semanas 4 a 52; alteração relativa da capacidade vital forçada da linha base até a Semana 52; taxa de agravamentos que são associados ao declínio da função pulmonar, definida como agravamento resultante em PEF ou FEV1 <60% do valor mais alto durante o período de seleção (Visitas 1 a 3) que necessita de tratamento com corticosteroides sistêmicos; alteração do impedimento para o trabalho, escola e atividades conforme determinado pelo Questionário de Asma - Impedimento à Atividade e Produtividade no Trabalho (WPAI-Asma) da linha base até a Semana 52; alteração da avaliação do Questionário de Controle de Asma 5 (ACQ-5) da linha base até a Semana 52; alteração dos sintomas de asma, conforme medido pelo Índice de Utilidade de Sintomas de Asma (ASUI) da linha base até a Semana 52; alteração de utilidades de saúde, conforme determinado pelo EQ-5D, da linha base até a Semana 52; alteração da Avaliação Global de Eficácia de Tratamento (GETE) da linha base até a Semana 52.
[0394] Estas medidas de resultado exploratório podem também ser determinadas durante a extensão de tratamento ativo por 52 semanas e o período de acompanhamento de 24 semanas. As medidas de resultados exploratórios adicionais podem incluir a frequência e a severidade de eventos adversos em pacientes expostos a lebrikizumab por >52 semanas; alteração dos biomarcadores de PB relativos a asma/interleucina 13 (IL-13) durante a extensão de tratamento ativo por 52 semanas ou o período de acompanhamento de 24 semanas; e concentrações de lebrikizumab em soro durante a extensão de tratamento ativo por 52 semanas ou o período de acompanhamento de 24 semanas.
[0395] Resultados relatados pelo paciente. QUESTIONÁRIO DE QUALIDADE DE VIDA COM ASMA - PADRONIZADO (AQLQ(S)):
[0396] O AQLQ(S) será utilizado para determinar a qualidade de vida relativa à saúde específica de asma dos pacientes (Juniper, 2005). O questionário contém quatro domínios que incluem limitações da atividade, sintomas, função emocional e estímulos ambientais. O AQLQ(S) foi validado para uso nessa população de estudo. O AQLQ(S) possui especificação de rechamada de duas semanas. O AQLQ(S) será administrado ao paciente antes de todas as outras determinações não de PRO e antes que o paciente receba qualquer informação sobre o estado da doença ou droga de estudo durante aquela determinação. IMPEDIMENTO DE ATIVIDADES, PRODUTIVIDADE E TRABALHO - ASMA (WPAI- ASMA):
[0397] Para determinar o impedimento no trabalho, escola e atividades, será administrado o questionário WPAI-Asma (Reilly et al, 1993, 1996). Os itens do questionário são adaptados do questionário WPAI- Específico de Alergia (WPAI-AS), substituindo todas as ocorrências do termo alergia por asma. O WPAI-AS será administrado ao paciente antes de todas as outras determinações não de PRO e antes que o paciente receba qualquer informação sobre o estado da doença ou droga de estudo durante aquela determinação. QUESTIONÁRIO EURO-QOL 5D (EQ-5D):
[0398] NO EQ-5D é um questionário genérico da qualidade de vida relativa à saúde com base em preferências que fornece um único valor índice para o estado de saúde (The EuroQol Group, 1990). EQ-5D é projetado para autopreenchimento pelos pacientes. Eq-5D será administrado ao paciente antes de todas as outras determinações não de PRO e antes que o paciente receba qualquer informação sobre o estado da doença ou droga de estudo durante aquela determinação. ÍNDICE DE UTILIDADE DE SINTOMAS DE ASMA (ASUI):
[0399] ASUI (Revicki, 1998) é um questionário de sintomas específicos de asma que mede tosse, dificuldade de respiração, respiração curta e despertar noturno. ASUI será administrado ao paciente antes de todas as outras determinações não de PRO e antes que o paciente receba qualquer informação sobre o estado da doença ou droga de estudo durante aquela determinação.
EXEMPLO 7
[0400] Teste de periostina Elecsys®: A detecção quantitativa de periostina é determinada em um analisador automático Roche cobas e601 Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). O teste é conduzido em formato sanduíche, em que a periostina analisada é colocada em sanduíche entre dois anticorpos monoclonais que se ligam a dois epítopos diferentes sobre periostina. Um anticorpo é biotinilado e permite a captura do complexo imuno a esferas magnéticas revestidas com estreptavidina. O segundo anticorpo contém um cátion de rutênio em complexo como porção de sinalização que permite a detecção eletroquimioluminescente dependente de voltagem do complexo imuno ligado.
[0401] Detalhadamente, são utilizados os reagentes a seguir: - Esferas (M): 0,72 mg/ml de micropartículas magnéticas revestidas com estreptavidina; conservante. - Reagente 1 (R1): anticorpo antiperiostina e biotina:
[0402] Este anticorpo monoclonal de camundongo purificado corresponde ao anticorpo de revestimento 25D4 de acordo com o Exemplo 4 e é utilizado em forma biotinilada > 1,0 mg/l; tampão TRIS > 100 mmol/l, pH 7,0; conservante. - Reagente 2 (R2): anticorpo antiperiostina e Ru(bpy):
[0403] Este anticorpo antiperiostina monoclonal de camundongo purificado corresponde ao anticorpo de detecção 23B9 de acordo com o Exemplo 4 e é utilizado em forma marcada (marcada com um complexo de tris(2,2’-bipiridil)rutênio (II) (complexo (Ru(bpy)) > 1,0 mg/l; tampão TRIS > 100 mmol/l, pH 7,0; conservante.
[0404] O imunoensaio é conduzido utilizando duas incubações. Na primeira incubação de cerca de nove minutos, periostina em 20 μl de amostra e o anticorpo antiperiostina monoclonal biotinilado (R1) formam um complexo. Na segunda etapa de incubação por nove minutos adicionais, anticorpo antiperiostina monoclonal rutenilado (R2) e micropartículas revestidas com estreptavidina (M) são adicionados à ampola da primeira incubação, de tal maneira que um complexo em sanduíche com três membros é formado e ligase à fase sólida (micropartículas) por meio da interação de biotina e estreptavidina.
[0405] A mistura de reação é aspirada à célula de medição, na qual as micropartículas são capturadas magneticamente sobre a superfície de um eletrodo de platina. As substâncias não ligadas são retiradas por meio de lavagem e a célula recebe fluxo de ProCell, um reagente que contém tripropilamina. A aplicação de voltagem ao eletrodo induz em seguida uma emissão quimioluminescente que é medida por um fotomultiplicador.
[0406] Os resultados são determinados por meio de uma curva de calibragem específica de instrumentos que é gerada por meio de calibragem de dois pontos e uma curva mestre fornecida por meio do código de barras de reagente. O calibrador é livre de analisado, enquanto o calibrador 2 contém 50 ng/ml de periostina humana recombinante em uma matriz tamponada. Para verificar a calibragem, são empregados dois controles com cerca de 30 e 80 ng/ml de periostina.
EXEMPLO 8
[0407] Comparação de teste E4 e teste de periostina Elecsys®: Os níveis de periostina foram medidos em amostras de soro de pacientes dos testes clínicos descritos em cada um dentre o Exemplo 2 e o Exemplo 3 utilizando métodos similares ao Teste E4 (Exemplo 4) e ao teste de periostina Elecsys® (Exemplo 7). Os resultados de amostras dos dois testes demonstraram que os valores de periostina foram sobrepostos. A variabilidade e a difusão foram comparáveis ao longo dos testes. De forma geral, na média, os resultados de teste Elecsys® foram tipicamente iguais ou > 2 vezes mais altos que os resultados do teste E4. Vide a Figura 17, ou seja, a média foi de 50-51 ng/ml para o teste de periostina Elecsys® e a média foi 23 ng/ml para o Teste E4.
[0408] Embora a presente invenção tenha sido descrita em alguns detalhes como forma de ilustração e exemplo para fins de clareza de compreensão, as descrições e os exemplos não deverão ser interpretados como limitadores do escopo da presente invenção. As descrições de todas as literaturas científicas e patentes mencionadas no presente são expressamente incorporadas integralmente como referência. CHAVE DE LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
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Claims (49)

1. USO DE UM ANTICORPO ANTI-IL-13, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar asma ou um distúrbio respiratório em um paciente, em que o anticorpo anti-IL-13 compreende HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes possuem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16, e em que o medicamento é administrado a um paciente que sofre de asma ou de um distúrbio respiratório em uma dose plana de 125 a 500 mg a cada duas a oito semanas.
2. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo paciente estar sofrendo de asma moderada a severa.
3. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pela asma ou distúrbio respiratório não ser controlado com um corticosteroide.
4. USO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pela asma ou distúrbio respiratório não ser controlado com um corticosteroide inalado.
5. USO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pela asma ou distúrbio respiratório não ser controlado por uma dose diária total de pelo menos 500 mg de propionato de fluticasona (FP).
6. USO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo corticosteroide inalado ser Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® ou Azmacort®.
7. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo paciente ser tratado com um segundo controlador.
8. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo paciente continuar a ser tratado com um corticosteroide, opcionalmente um corticosteroide inalado, durante o tratamento com o anticorpo anti-IL-13.
9. USO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo paciente continuar a ser tratado com um segundo controlador durante o tratamento com o anticorpo anti-IL-13.
10. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 ou 9, caracterizado pelo segundo controlador ser um broncodilatador de ação prolongada.
11. USO, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo broncodilatador de ação prolongada ser um LABA, LTRA, LAMA, teofilina ou OCS.
12. USO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo paciente ter sido determinado como sendo Positivo para Inflamações Eosinofílicas (EIP).
13. USO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo paciente ter sido determinado como sendo EIP utilizando um kit para diagnosticar um subtipo de asma em um paciente que compreende determinar os níveis de Periostina Total em uma amostra de soro obtida a partir do paciente e opcionalmente os níveis de expressão de proteína na amostra de soro para uma ou mais proteínas selecionadas a paritr de TARC e MCP-4; e instruções para medir os níveis de expressão de Periostina Total e opcionalmente uma ou mais proteínas selecionadas a paritr de TARC e MCP-4 na amostra de soro, em que os níveis de expressão elevados de qualquer uma delas, sua combinação ou de todas as mencionadas proteínas são indicativos do subtipo de asma; e uma bula para determinar se um paciente com asma ou paciente com distúrbio respiratório é EIP.
14. USO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo paciente ter sido determinado como sendo EIP utilizando um Teste Diagnóstico de Inflamações Eosinofílicas (EIDA), em que o estado EIP indica que o paciente é propenso a ser responsivo ao tratamento com o Inibidor da Via de TH2, em que o EIDA compreende as etapas de a) determinação da quantidade de Periostina Total em uma amostra obtida de um paciente com asma; b) comparação da quantidade de Periostina Total determinada na etapa a) com uma quantidade de referência; e c) estratificação do mencionado paciente dentro da categoria de responsivo ou não responsivo com base na comparação obtida na etapa b), em que a Periostina Total compreende pelo menos as isoformas 1, 2, 3 e 4 de periostina.
15. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo paciente ser administrado com uma dose plana de 125 mg ou 250 mg a cada quatro semanas.
16. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo paciente ter 18 anos de idade ou mais.
17. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo paciente ter 12 a 17 anos de idade ou 12 anos de idade ou mais.
18. USO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo paciente ter 6 a 11 anos de idade ou 6 anos de idade ou mais.
19. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo anticorpo anti-IL-13 ser administrado por via subcutânea.
20. USO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo anticorpo anti-IL-13 ser administrado utilizando uma seringa previamente cheia ou dispositivo autoinjetor.
21. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo paciente com asma a ser tratado ter 18 anos de idade ou mais e possuir periostina de soro a > 50 ng/ml e ser não controlado com um corticosteroide inalado e uma segunda medicação controladora.
22. USO, de acordo com a reivindicaão 19, caracterizado pela periostina de soro ser medida utilizando um Teste Diagnóstico de Inflamações Eosinofílicas (EIDA), que compreende as etapas de a) determinação da quantidade de Periostina Total em uma amostra obtida a partir de um paciente com asma; b) comparação da quantidade de Periostina Total determinada na etapa a) com uma quantidade de referência; e estratificação do mencionado paciente dentro da categoria de responsivo ou não responsivo com base na comparação obtida na etapa b).
23. USO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pela periostina de soro ser medida utilizando um kit para medir a Periostina Total em uma amostra biológica obtida a partir de um paciente com asma ou um paciente que sofre de um distúrbio respiratório, em que o kit compreende (1) uma primeira molécula de ácido nucleico que se hibridiza a uma segunda molécula de ácido nucleico, em que a segunda molécula de ácido nucleico codifica Periostina Total ou uma porção da mesma, ou (2) o kit compreende um anticorpo que se liga a Periostina Total.
24. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo anticorpo anti-IL-13 ser um anticorpo que compreende um VH compreendendo SEQ ID NO: 9 e um VL que compreende SEQ ID NO: 10.
25. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo anticorpo anti-IL-13 ser lebrikizumab.
26. USO, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo paciente com asma ter 12 anos de idade ou mais e não controlado com um corticosteroide inalado e uma segunda medicação controladora.
27. USO DE UM INIBIDOR DA VIA DE TH2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar um paciente que sofre de asma ou de uma doença respiratória, e que tenha sido diagnosticado como EIP, em que o Inibidor da Via TH2 é um anticorpo anti-IL-13 que compreende um VH compreendendo SEQ ID NO: 9 e VL compreendendo SEQ ID NO: 10, um anticorpo anti-IL-13 compreendendo HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2 e HVRL3, em que os HVRs correspondentes contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16.
28. USO, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo anticorpo anti-IL-13 ser lebrikizumab.
29. USO DE UM INIBIDOR DA VIA DE TH2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar um paciente que sofre de asma ou de uma doença respiratória, e que tenha sido diagnosticado como EIP, em que o Inibidor da Via TH2 é um anticorpo anti-IgE, em que o anticorpo anti-IgE é (i) o anticorpo XOLAIR®, (ii) anticorpo anti-Mi’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável é SEQ ID NO: 24 e a cadeia leve variável é SEQ ID NO: 25 ou (iii) um anticorpo anti-Ml’ que compreende uma cadeia pesada variável e uma cadeia leve variável, em que a cadeia pesada variável compreende adicionalmente um HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 e a cadeia leve variável compreende adicionalmente um HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 e: (a) o HVR-H1 são os resíduos 26-35 de SEQ ID NO: 24, [GFTFSDYGIA]; (b) o HVR-H2 são os resíduos 49-66 de SEQ ID NO: 24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) o HVR-H3 são os resíduos 97-106 de SEQ ID NO: 24, [ARDNWDAMDY]; (d) o HVR-L1 são os resíduos 24-39 de SEQ ID NO: 25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) o HVR-L2 são os resíduos 55-61 de SEQ ID NO: 25, [KVSNRFS]; e (f) o HVR-L3 são os resíduos 94-102 de SEQ ID NO: 25 [SQNTLVPWT].
30. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 29, caracterizado por compreender adicionalmente a etapa de re-tratar o paciente com o Inibidor da Via de TH2 se o paciente for determinado como sendo EIP.
31. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 30, caracterizado pelo soro do paciente ser usado para determinar se o paciente é EIP.
32. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 30, caracterizado pelo estado EIP ser diagnosticado utilizando um EIDA, em que o teste compreende as etapas de: a) determinação da quantidade de Periostina Total em uma amostra obtida do paciente; b) comparação da quantidade de Periostina Total determinada na etapa a) com uma quantidade de referência; e estratificação do mencionado paciente dentro da categoria de responsivo ou não responsivo com base na comparação obtida na etapa b).
33. USO, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pela Periostina Total ser periostina de soro, em que a periostina é medida utilizando um imunoensaio.
34. USO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo imunoensaio ser um imunoensaio sanduíche.
35. USO, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo imunoensaio sanduíche ser realizado por um analisador Elecsys®.
36. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 35, caracterizado pela quantidade de referência ser 23 ng/ml ou mais ao utilizar-se o Teste E4 na etapa a).
37. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 35, caracterizado pela quantidade de referência ser 50 ng/ml ou mais ao utilizar-se o Teste de Periostina Elecsys® na etapa a).
38. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 37, caracterizado pelo paciente estar sofrendo de asma moderada a severa.
39. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 38, caracterizado pela asma ou distúrbio respiratório ser não controlado com um corticosteroide.
40. USO, de acordo a reivindicação 39, caracterizado pelo corticosteroide ser um corticosteroide inalado.
41. USO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo corticosteroide inalado ser Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® ou Azmacort®.
42. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 40 caracterizado pelo paciente também estar sendo tratado com um segundo controlador.
43. USO, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo segundo controlador ser um broncodilatador de ação prolongada (LABD).
44. USO, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo LABD ser um LABA, LTRA, LAMA, teofilina ou OCS.
45. USO, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo LABD ser Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, PerforomistTM ou Serevent®.
46. ANTICORPO ANTI-PERIOSTINA que se liga a Periostina Total, caracterizado por compreender as sequências HVR de SEQ ID NO: 1 e as sequências HVR de SEQ ID NO: 2.
47. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo anticorpo compreender as sequências de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2.
48. ANTICORPO ANTI-PERIOSTINA que se liga a Periostina Total, caracterizado por compreender as sequências HVR de SEQ ID NO: 3 e as sequências HVR de SEQ ID NO: 4.
49. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo anticorpo compreender as sequências de SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4.
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