JP6250351B2 - 好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー - Google Patents
好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー Download PDFInfo
- Publication number
- JP6250351B2 JP6250351B2 JP2013204787A JP2013204787A JP6250351B2 JP 6250351 B2 JP6250351 B2 JP 6250351B2 JP 2013204787 A JP2013204787 A JP 2013204787A JP 2013204787 A JP2013204787 A JP 2013204787A JP 6250351 B2 JP6250351 B2 JP 6250351B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- information
- marker
- subject
- ccl27
- cxcl9
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 46
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 title description 86
- 208000037883 airway inflammation Diseases 0.000 title description 84
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 77
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 claims description 54
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 29
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 claims description 20
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 claims description 20
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 claims description 20
- 230000010365 information processing Effects 0.000 claims description 17
- 102100021936 C-C motif chemokine 27 Human genes 0.000 claims description 13
- 238000004590 computer program Methods 0.000 claims description 13
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 claims description 9
- 101000897494 Homo sapiens C-C motif chemokine 27 Proteins 0.000 claims 6
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 claims 6
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 50
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 29
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 26
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 25
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 15
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 15
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 15
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 12
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 102100037765 Periostin Human genes 0.000 description 11
- 101710199268 Periostin Proteins 0.000 description 11
- 102100023698 C-C motif chemokine 17 Human genes 0.000 description 10
- 101000978362 Homo sapiens C-C motif chemokine 17 Proteins 0.000 description 10
- 101710112538 C-C motif chemokine 27 Proteins 0.000 description 7
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 6
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 5
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 101710085500 C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 108010040471 CC Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 102000001902 CC Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 108050006947 CXC Chemokine Proteins 0.000 description 2
- 102000019388 CXC chemokine Human genes 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 2
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 2
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 2
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 2
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 2
- 210000001552 airway epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 2
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 108010088144 CCR10 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000008683 CCR10 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 201000006306 Cor pulmonale Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000039989 IL-17 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069193 IL-17 family Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 208000002200 Respiratory Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010038731 Respiratory tract irritation Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009798 acute exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000010085 airway hyperresponsiveness Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- UKWLRLAKGMZXJC-QIECWBMSSA-L disodium;[4-chloro-3-[(3r,5s)-1-chloro-3'-methoxyspiro[adamantane-4,4'-dioxetane]-3'-yl]phenyl] phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].O1OC2([C@@H]3CC4C[C@H]2CC(Cl)(C4)C3)C1(OC)C1=CC(OP([O-])([O-])=O)=CC=C1Cl UKWLRLAKGMZXJC-QIECWBMSSA-L 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004202 respiratory function Effects 0.000 description 1
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6869—Interleukin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/08—Detecting, measuring or recording devices for evaluating the respiratory organs
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/12—Pulmonary diseases
- G01N2800/122—Chronic or obstructive airway disorders, e.g. asthma COPD
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Surgery (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカーに関する。
気管支喘息（以下、単に「喘息」ともいう）は、気道の慢性炎症と種々の程度の可逆的気道狭窄と気道過敏性の亢進、そして臨床的には繰り返し起こる咳、喘鳴、呼吸困難によって特徴づけられる。喘息の鑑別診断においては、（１）発作性の咳、喘鳴、呼吸困難の反復、（２）可逆性の気流制限、（３）他の心肺疾患などに関連していないこと、が重要視されている。また、喘息の治療は発作の発生頻度をコントロールし、健常人と変わらない日常生活が送れることが目標とされており、現在のガイドラインでは、喘息症状や呼吸機能をモニタリングして治療方針が決定されている。
喘息診断において、気道炎症の存在は、上記（１）〜（３）などの所見と共に観察されることによって、被診断者が喘息に罹患しているという診断結果を支持する情報になり得るとされている。気道炎症は、好酸球や好塩基球などが気道に浸潤し、エフェクター細胞として機能することで生じる。特に、好酸球を主な構成要素とする炎症誘発性細胞集団の浸潤を原因とする気道炎症は、好酸球性気道炎症とも呼ばれ、喘息の重症発作を引き起こす最も重要な病態である。好酸球性気道炎症の状態を判定する（モニターする）指標としては例えば気管支肺胞洗浄液(BALF)中の高好酸球状態と喀痰中好酸球数がある。
気管支肺胞洗浄液(BALF)中の高好酸球状態を判別する方法としては、特許文献１に記載の方法が挙げられる。特許文献１には、気管支肺胞洗浄液(BALF)中の特定のサイトカインレベルのパターンに基づいて、重症の喘息患者とそうでない患者とを区別できることが記載されている。この特許文献１には、MIG（CXCL9, CXC Chemokine Ligand 9）は重症喘息患者においてレベルが低減するサイトカインであると記載されており、MIG、Eotaxin、IL-8(Interleukin-8)およびIL-17(Interleukin-17)レベルの組合せが高好酸球状態の判別に役立つことが記載されている。しかしながら、気管支肺胞洗浄液(BALF)を採取する方法は侵襲度が高い。
また、喀痰中好酸球数が喘息の病型判別や治療方針の決定において有用であるとの報告がなされている（非特許文献１および非特許文献２参照）。
例えば、非特許文献１には、喀痰中好酸球数に基づく治療管理は、従来の標準的な治療管理と比べて、喘息の急性増悪(または重症発作)を顕著に抑制することが記載されている。
また、非特許文献２には、好酸球性炎症の情報を用いることで難治療の喘息患者から好酸球性炎優勢群（症状の程度は低いが好酸球性炎症が高い群）を特定できること、その群に対して喀痰中好酸球に基づく治療管理を行った場合、標準的な治療管理と比べて喘息の悪化を抑制できることが記載されている。
例えば、非特許文献１には、喀痰中好酸球数に基づく治療管理は、従来の標準的な治療管理と比べて、喘息の急性増悪(または重症発作)を顕著に抑制することが記載されている。
また、非特許文献２には、好酸球性炎症の情報を用いることで難治療の喘息患者から好酸球性炎優勢群（症状の程度は低いが好酸球性炎症が高い群）を特定できること、その群に対して喀痰中好酸球に基づく治療管理を行った場合、標準的な治療管理と比べて喘息の悪化を抑制できることが記載されている。
以上のことから、喀痰中好酸球数の検査（喀痰検査）は実際の臨床診断において行われているが、喀痰検査に際しては、すべての喘息患者から自発的に排出された痰を採取できるわけではない。自発的に排出された痰が得られない場合には、患者に高張食塩水を吸入させることによって喀痰排出を誘発する方法が用いられているが、咽頭痛を伴ったり、気道への刺激で喘息発作を誘発したりするおそれがある。
そのため、好酸球性気道炎症の指標となりうるバイオマーカーの探索においては、より確実に、かつ、安全に喘息患者から採取できる検体として、血液が注目されている。
例えば、非特許文献３には、吸入コルチコステロイド治療を受けてもなお症状を呈していた重度の喘息患者において、血中Periostinレベルを好酸球性気道炎症の全身性バイオマーカーとして用い得ることが記載されている。
例えば、非特許文献３には、吸入コルチコステロイド治療を受けてもなお症状を呈していた重度の喘息患者において、血中Periostinレベルを好酸球性気道炎症の全身性バイオマーカーとして用い得ることが記載されている。
The Lancet, Volume 360, Pages 1715-1721, 2002
Am J Respir Crit Care Med, Volume 178, Pages 218-224, 2008
J Allergy Clin Immunol, Volume 130, Pages 647-654, 2012
しかし、好酸球性気道炎症の血中マーカーは研究段階であり、マーカーのさらなる開発が求められている。そこで、本発明は、そのような新規マーカーを同定し、それらを用いて被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得する方法を提供することを目的とする。
発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、血中の好酸球性気道炎症マーカーの新規マーカーとしてCCL27 (CC Chemokine Ligand 27)およびCXCL9 (CXC Chemokine Ligand 9)を見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明によれば、
被験者の血液試料中の、CCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量を測定し、
得られた測定値に基づいて、前記被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得する方法が提供される。
被験者の血液試料中の、CCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量を測定し、
得られた測定値に基づいて、前記被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得する方法が提供される。
また、本発明によれば、CCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つである、好酸球性気道炎症に関する情報を取得するためのマーカーが提供される。
被験者の血液試料中の本発明のマーカーの量に基づいて、当該被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。
本発明の好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法（以下、単に「方法」ともいう）の第１工程は、被験者の血液試料中のCCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量を測定する工程（測定工程）である。
本発明の方法において、被験者は特に限定されず、例えば医師により喘息に罹患していると診断された患者をはじめ、喘息に罹患している可能性がある成人または小児、および喘息に罹患していない（非喘息）健常な成人または小児などである。
本発明の方法において、血液試料とは、血液（全血）、血清または血漿である。血液試料は、採取が簡便なものがとりわけ好ましく、例えば末梢血およびそれから取得される血清および血漿などが挙げられる。
CCL27は、CTACKとも呼ばれ、表皮ケラチノサイトに特異的に発現し、リンパ球細胞表面において発現するCCR10受容体のリガンド分子として機能するケモカインとして当業者に周知である。
当該技術において、CCL27タンパク質のアミノ酸配列自体は公知である。このタンパク質のアミノ酸配列は、例えばSWISS-PROT（アクセッション番号：Q9Y4X3）などの公知のデータベースから知ることができる。
当該技術において、CCL27タンパク質のアミノ酸配列自体は公知である。このタンパク質のアミノ酸配列は、例えばSWISS-PROT（アクセッション番号：Q9Y4X3）などの公知のデータベースから知ることができる。
CXCL9は、MIGとも呼ばれ、好酸球および気道上皮細胞などにおいて、IFN-γおよびTNF-αなどの炎症刺激により誘導されるケモカインとして当業者に周知である。
当該技術において、CXCL9タンパク質のアミノ酸配列自体は公知である。このタンパク質のアミノ酸配列は、例えばNational Center for Biotechnology Information （NCBI；アクセッション番号：NM_002416）などの公知のデータベースから知ることができる。
当該技術において、CXCL9タンパク質のアミノ酸配列自体は公知である。このタンパク質のアミノ酸配列は、例えばNational Center for Biotechnology Information （NCBI；アクセッション番号：NM_002416）などの公知のデータベースから知ることができる。
本発明の実施形態においては、CCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーに加えて、IL-25マーカーを加えることもできる。
IL-25は、Th2細胞、気道上皮細胞、および肥満細胞などによって産生される、Pro-Th2サイトカインであり、IL-17ファミリーのサイトカインとして公知である。
当該技術において、IL-25タンパク質のアミノ酸配列自体は公知である。このタンパク質のアミノ酸配列は、例えばSWISS-PROT（アクセッション番号：Q9H293）などの公知のデータベースから知ることができる。
IL-25は、Th2細胞、気道上皮細胞、および肥満細胞などによって産生される、Pro-Th2サイトカインであり、IL-17ファミリーのサイトカインとして公知である。
当該技術において、IL-25タンパク質のアミノ酸配列自体は公知である。このタンパク質のアミノ酸配列は、例えばSWISS-PROT（アクセッション番号：Q9H293）などの公知のデータベースから知ることができる。
本発明の方法において、マーカーの量とは、上記血液試料中の当該マーカータンパク質の量を意味し、マーカーの量の測定は、上記血液試料中に当該マーカータンパク質が有るか無いかを判定するための定性的な測定を含む。
マーカータンパク質の量の測定方法は、当業者に周知の抗原抗体反応に基づくタンパク質測定法であれば特に限定されないが、例えばELISA法、ウェスタンブロット法などが挙げられ、好ましくはELISA法である。これらの測定方法に用いられる抗体は、血液試料中の各マーカータンパク質を特異的に認識して結合することができる抗体であれば特に限定されない。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルの全長抗体または抗体フラグメント（Fab、F(ab')2）などであり得る。このような抗体の作製方法は、当業者に公知である。あるいは、抗体は市販製品であってもよい。
マーカータンパク質の量の測定には、当業者に公知の市販のタンパク質定量キット、例えば、R&D systems社製Duoset ELISA測定用キット、Peprotech社製ELISA development kitなどを用いてもよい。
マーカーの量の測定値は、測定値そのもの（生データ）又はその値に基づいて算出された値であってもよく、例えば、濃度、強度、レベル、質量（重量）、比、などのいずれの形式又は単位でも表すことができる。
マーカータンパク質の量の測定方法は、当業者に周知の抗原抗体反応に基づくタンパク質測定法であれば特に限定されないが、例えばELISA法、ウェスタンブロット法などが挙げられ、好ましくはELISA法である。これらの測定方法に用いられる抗体は、血液試料中の各マーカータンパク質を特異的に認識して結合することができる抗体であれば特に限定されない。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルの全長抗体または抗体フラグメント（Fab、F(ab')2）などであり得る。このような抗体の作製方法は、当業者に公知である。あるいは、抗体は市販製品であってもよい。
マーカータンパク質の量の測定には、当業者に公知の市販のタンパク質定量キット、例えば、R&D systems社製Duoset ELISA測定用キット、Peprotech社製ELISA development kitなどを用いてもよい。
マーカーの量の測定値は、測定値そのもの（生データ）又はその値に基づいて算出された値であってもよく、例えば、濃度、強度、レベル、質量（重量）、比、などのいずれの形式又は単位でも表すことができる。
本発明の方法の第２工程は、上記の測定工程で得られた測定値に基づいて、被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得する工程（情報取得工程）である。ここで、好酸球性気道炎症に関する情報とは、好酸球性気道炎症の診断の指標となり得る情報であれば特に限定されないが、好ましくは、好酸球性気道炎症の発生もしくは状態またはその両方を示す情報である。そのような情報としては、例えば、好酸球性気道炎症が被験者に発生している可能性、好酸球性気道炎症がこれから被験者に発生する危険性などが挙げられる。また、被験者に好酸球性気道炎症が発生している場合は、好酸球性気道炎症に関する情報として、被験者の予後、好酸球性気道炎症の重篤度などが挙げられる。
また、本発明の実施形態においては、複数のマーカーの量の測定値を用いて解析を行う場合、各マーカーの量の測定値を所定の式に代入することで、各マーカーの量の測定値から導き出される多重ロジスティックモデルに、各マーカーの量の測定値を代入することで被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。例えば、CCL27の測定値およびCXCL9の測定値を用いて解析を行う場合、CCL27の測定値およびCXCL9の測定値から多重ロジスティックモデルにより算出される予測値に基づいて、被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。IL-25マーカーの量をさらに測定する場合、CCL27の測定値、CXCL9の測定値、およびIL-25の測定値から多重ロジスティックモデルにより算出される予測値に基づいて、被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。
また、本発明の実施形態においては、測定工程で得られた測定値と所定の閾値との比較結果に基づいて、被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。この場合、測定工程で得られた測定値が所定の閾値より高いか、または閾値と同じという結果が得られた場合、好酸球性気道炎症が被験者に発生していることを示唆する情報またはこれから被験者が好酸球性気道炎症になる危険性が高いという情報を取得することができる。また、被験者に好酸球性気道炎症が発生している場合は、好酸球性気道炎症に関する情報として、被験者の予後が不良であるという情報または好酸球性気道炎症の重篤度が高いという情報を取得することができる。また、測定工程で得られた測定値がCCL27の測定値であり、所定の閾値より高いか、または閾値と同じという結果が得られた場合、CCL27陽性（＋）または好酸球性気道炎症陽性という情報を取得することができる。測定工程で得られた測定値がCXCL9の測定値であり、所定の閾値より高いか、または閾値と同じという結果が得られた場合、CXCL9陽性（＋）または好酸球性気道炎症陽性という情報を取得することができる。
反対に、測定工程で得られた測定値が所定の閾値よりも低いという結果が得られた場合、好酸球性気道炎症が被験者に発生していないことを示唆する情報またはこれから被験者が好酸球性気道炎症になる危険性が低いという情報を取得することができる。また、被験者に好酸球性気道炎症が発生している場合は、好酸球性気道炎症に関する情報として、被験者の予後が良好であるという情報または好酸球性気道炎症の重篤度が低いという情報を取得することができる。また、測定工程で得られた測定値がCCL27の測定値であり、所定の閾値よりも低いという結果が得られた場合、CCL27陰性（−）または好酸球性気道炎症陰性という情報を取得することができる。測定工程で得られた測定値がCXCL9の測定値であり、所定の閾値よりも低いという結果が得られた場合、CXCL9陰性（−）または好酸球性気道炎症陰性という情報を取得することができる。
また、複数のマーカーの量の測定値を用いて解析を行う場合、各マーカーの量の測定値から導き出される多重ロジスティックモデルに、各マーカーの量の測定値を代入することで算出された値と所定の閾値との比較結果に基づいて、被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。例えば、CCL27の測定値およびCXCL9の測定値を用いて解析を行う場合、CCL27の測定値およびCXCL9の測定値から多重ロジスティックモデルにより算出される予測値が所定の閾値より高いか、または閾値と同じという結果が得られた場合、好酸球性気道炎症陽性という情報を取得することができる。反対に、CCL27の測定値およびCXCL9の測定値から多重ロジスティックモデルにより算出される予測値が所定の閾値よりも低いという結果が得られた場合、好酸球性気道炎症陰性という情報を取得することができる。
なお、所定の閾値は特に限定されず、種々の血液試料についてのデータの蓄積により経験的に設定することができる。あるいは、次のようにして所定の閾値を設定してもよい。まず、好酸球性気道炎症に罹患していない被験者の血液試料、および、好酸球性気道炎症に罹患する患者の血液試料について、マーカーの量を測定する。次いで、得られた測定結果に基づいて、好酸球性気道炎症に罹患していない被験者の血液試料における測定値よりも高く、且つ、好酸球性気道炎症に罹患する患者の血液試料における測定値よりも低い範囲から閾値を設定する。好ましくは、好酸球性気道炎症に罹患していない被験者の血液試料と好酸球性気道炎症に罹患する患者の血液試料とを高精度に区別し得る値を、閾値として設定する。あるいは、当該技術において公知の統計解析法により判別式を作成し、この式を用いてこれらの蓄積された測定値から閾値を算出してもよい。
本発明の範囲には、好酸球性気道炎症に関する情報を取得するためのマーカー（以下、単に「マーカー」ともいう）も含まれる。本発明のマーカーは、CCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つである。
本実施形態では、被験者から採取した血液試料中のマーカーの量の測定値に基づいて、前記被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。なお、マーカーの量の測定および好酸球性気道炎症に関する情報の取得については、これまでに述べたことと同様である。
本実施形態では、被験者から採取した血液試料中のマーカーの量の測定値に基づいて、前記被験者における好酸球性気道炎症に関する情報を取得することができる。なお、マーカーの量の測定および好酸球性気道炎症に関する情報の取得については、これまでに述べたことと同様である。
また、本発明によれば、
被験者の血液試料中のCCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量に関する情報を取得する測定部と、
前記測定部で取得したマーカーの量に関する情報に基づいて、前記被験者についての好酸球性気道炎症に関する情報を取得する情報処理部と、
前記情報処理部で得られた情報を出力する出力部と
を備える、好酸球性気道炎症に関する情報の取得装置(以下、単に「情報取得装置」ともいう)が提供される。
被験者の血液試料中のCCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量に関する情報を取得する測定部と、
前記測定部で取得したマーカーの量に関する情報に基づいて、前記被験者についての好酸球性気道炎症に関する情報を取得する情報処理部と、
前記情報処理部で得られた情報を出力する出力部と
を備える、好酸球性気道炎症に関する情報の取得装置(以下、単に「情報取得装置」ともいう)が提供される。
更に、本発明によれば、
コンピュータに、
被験者の血液試料中のCCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量に関する情報を受け取る受領ステップと、
前記受領ステップで受け取ったマーカーの量に関する情報に基づいて、前記被験者についての好酸球性気道炎症に関する情報を取得する情報取得ステップと、
前記情報取得ステップで得られた情報を出力する出力ステップと、
を実行させるためのコンピュータプログラムが提供される。
コンピュータに、
被験者の血液試料中のCCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量に関する情報を受け取る受領ステップと、
前記受領ステップで受け取ったマーカーの量に関する情報に基づいて、前記被験者についての好酸球性気道炎症に関する情報を取得する情報取得ステップと、
前記情報取得ステップで得られた情報を出力する出力ステップと、
を実行させるためのコンピュータプログラムが提供される。
なお、上記の情報取得装置およびコンピュータプログラムの実施形態では、マーカーの量に関する情報には、IL-25マーカーの量に関する情報が含まれていてもよい。
本発明の実施形態に係る情報取得装置およびコンピュータプログラムについては、以下図面を参照して説明する。
本実施形態に係る情報取得装置は、本発明の実施形態に係る情報取得方法を実施するのに好適な装置の一例である。なお、本実施形態に係る情報取得装置は、上記マーカーの量に関する情報として、タンパク質測定で得られた発光強度に基づいて算出した量の測定値を採用し、該測定値と測定値についての閾値とを比較して情報取得を行なう装置である。
本実施形態に係る情報取得装置は、本発明の実施形態に係る情報取得方法を実施するのに好適な装置の一例である。なお、本実施形態に係る情報取得装置は、上記マーカーの量に関する情報として、タンパク質測定で得られた発光強度に基づいて算出した量の測定値を採用し、該測定値と測定値についての閾値とを比較して情報取得を行なう装置である。
図４は、本発明の一実施の形態に係る情報取得装置１の全体構成を示すブロック図である。
本実施の形態に係る情報取得装置１は、タンパク質測定装置１００(以下、「測定部１００」ともいう)と、これと接続された情報処理装置２００(以下、「コンピュータ２００」ともいう)とから構成されている。
測定部１００は、全自動ＥＬＩＳＡ装置などのタンパク質測定法を実行可能なタンパク質測定装置からなる。測定部１００は、血液試料中のマーカーの量の測定時に観測されたマーカーの量に関する情報、例えば発光強度などを測定する装置である。
測定部１００には、コンピュータ２００が接続されている。コンピュータ２００は、測定部１００の動作を制御するとともに、測定部１００で測定された上記の発光強度などのデータに基づいて、好酸球性気道炎症に関する情報を取得する。
本実施の形態に係る情報取得装置１は、タンパク質測定装置１００(以下、「測定部１００」ともいう)と、これと接続された情報処理装置２００(以下、「コンピュータ２００」ともいう)とから構成されている。
測定部１００は、全自動ＥＬＩＳＡ装置などのタンパク質測定法を実行可能なタンパク質測定装置からなる。測定部１００は、血液試料中のマーカーの量の測定時に観測されたマーカーの量に関する情報、例えば発光強度などを測定する装置である。
測定部１００には、コンピュータ２００が接続されている。コンピュータ２００は、測定部１００の動作を制御するとともに、測定部１００で測定された上記の発光強度などのデータに基づいて、好酸球性気道炎症に関する情報を取得する。
コンピュータ２００は、情報処理装置本体２１０(以下、「情報処理部２１０」ともいう)と、必要なデータを情報処理部２１０に入力する入力デバイス２３０と、入出力データなどを表示する表示部(出力部)２２０とを備えている。コンピュータ２００には、必要に応じて、外部記録媒体２４０が含まれる。
コンピュータ２００は、情報処理部２１０と、表示部２２０と、入力デバイス２３０とから主として構成されている。情報処理部２１０は、ＣＰＵ２１０ａと、ＲＯＭ２１０ｂと、ＲＡＭ２１０ｃと、ハードディスク２１０ｄと、読出装置２１０ｅと、入出力インタフェース２１０ｆおよび画像出力インタフェース２１０ｈは、バス２１０ｉによって互いにデータ通信可能に接続されている。
情報処理部２１０は、ＣＰＵ２１０ａと、ＲＯＭ２１０ｂと、ＲＡＭ２１０ｃと、ハードディスク２１０ｄと、読出装置２１０ｅと、入出力インタフェース２１０ｆと、画像出力インタフェース２１０ｈと、バス２１０ｉとを備えている。
情報処理部２１０内において、ＣＰＵ２１０ａ、ＲＯＭ２１０ｂ、ＲＡＭ２１０ｃ、ハードディスク２１０ｄ、読出装置２１０ｅ、入出力インタフェース２１０ｆおよび画像出力インタフェース２１０ｈは、それぞれバス２１０ｉによって、データの送受信が可能に接続されている。
情報処理部２１０は、ＣＰＵ２１０ａと、ＲＯＭ２１０ｂと、ＲＡＭ２１０ｃと、ハードディスク２１０ｄと、読出装置２１０ｅと、入出力インタフェース２１０ｆと、画像出力インタフェース２１０ｈと、バス２１０ｉとを備えている。
情報処理部２１０内において、ＣＰＵ２１０ａ、ＲＯＭ２１０ｂ、ＲＡＭ２１０ｃ、ハードディスク２１０ｄ、読出装置２１０ｅ、入出力インタフェース２１０ｆおよび画像出力インタフェース２１０ｈは、それぞれバス２１０ｉによって、データの送受信が可能に接続されている。
ＣＰＵ２１０ａは、ＲＯＭ２１０ｂに記憶されているコンピュータプログラムおよびＲＡＭ２１０ｃにロードされたコンピュータプログラムを実行することができる。ＲＯＭ２１０ｂには、ＣＰＵ２１０ａによって実行されるコンピュータプログラムおよびＣＰＵ２１０ａがコンピュータプログラムを実行するためのデータなどが記録されている。ＲＡＭ２１０ｃは、ＲＯＭ２１０ｂおよびハードディスク２１０ｄに記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、ＲＡＭ２１０ｃは、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ２１０ａの作業領域として利用される。
ハードディスク２１０ｄには、オペレーティングシステム(OS)、アプリケーションプログラムなど、ＣＰＵ２１０ａに実行させるための種々のコンピュータプログラムおよびそのコンピュータプログラムの実行に用いられるデータがインストールされている。
ハードディスク２１０ｄにインストールされているプログラムには、好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法を実現するためのアプリケーションプログラム２４０ａおよび測定部１００を制御するプログラムが含まれている。また、ハードディスク２１０ｄには、好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法を実現するためのプログラムの実行に用いられるデータとして、閾値などが記憶されている。
ハードディスク２１０ｄには、オペレーティングシステム(OS)、アプリケーションプログラムなど、ＣＰＵ２１０ａに実行させるための種々のコンピュータプログラムおよびそのコンピュータプログラムの実行に用いられるデータがインストールされている。
ハードディスク２１０ｄにインストールされているプログラムには、好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法を実現するためのアプリケーションプログラム２４０ａおよび測定部１００を制御するプログラムが含まれている。また、ハードディスク２１０ｄには、好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法を実現するためのプログラムの実行に用いられるデータとして、閾値などが記憶されている。
読出装置２１０ｅは、フレキシブルディスクドライブ、CD-ROMドライブ、DVD-ROMドライブなどによって構成されており、外部記録媒体２４０に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。なお、アプリケーションプログラム２４０ａは、外部記録媒体２４０に記録されていてもよく、情報処理装置本体２１０内に設けられたＲＯＭ２１０ｂまたはＲＡＭ２１０ｃに保存されていてもよい。
また、ＣＰＵ２１０ａが外部記録媒体２４０から当該アプリケーションプログラム２４０ａを読み出し、アプリケーションプログラム２４０ａをハードディスク２１０ｄにインストールすることも可能である。
また、ＣＰＵ２１０ａが外部記録媒体２４０から当該アプリケーションプログラム２４０ａを読み出し、アプリケーションプログラム２４０ａをハードディスク２１０ｄにインストールすることも可能である。
また、ハードディスク２１０ｄには、例えば米国マイクロソフト社が製造販売するWindows（登録商標）などのグラフィカルユーザインタフェース環境を提供するオペレーションシステムがインストールされている。以下の説明においては、上述した判定に係るアプリケーションプログラム２４０ａは、該オペレーティングシステム上で動作するものとしている。
入出力インタフェース２１０ｆは、例えばＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ−２３２Ｃなどのシリアルインタフェース、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、ＩＥＥＥ１２８４などのパラレルインタフェースおよびＤ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインタフェースなどから構成されている。入出力インタフェース２１０ｆには、キーボードやマウスなどの入力デバイス２３０が接続されている。また、入出力インタフェース２１０ｆには測定部１００が接続されている。これにより、情報処理部２１０は、入出力インタフェース２１０ｆを介して測定部１００とデータの送受信が可能である。
画像出力インタフェース２１０ｈは、ＬＣＤまたはＣＲＴなどで構成された表示部２２０に接続されており、ＣＰＵ２１０ａから与えられた画像データに応じた映像信号を表示部２２０に出力する。表示部２２０は、入力された映像信号にしたがって、画像(画面)を表示する。また、表示部２２０は、後述するＣＰＵ２１０ａから与えられた判定結果を出力する。
ここで、上記の情報取得装置１において実行されるアプリケーションプログラム２４０ａの動作フローの一例について、図５を参照して説明する。
まず、測定部１００から入出力インタフェース２１０ｆを介して、タンパク質測定で得られた発光強度などのデータが受領される（ステップＳ１）。
次いで、ステップＳ２において、ＣＰＵ２１０ａは、タンパク質測定で得られた発光強度のデータに基づき、マーカーの量の測定値を算出する。
ステップＳ３において、ＣＰＵ２１０ａは、アプリケーションプログラム２４０ａのデータとしてハードディスク２１０ｄに予め記憶させた発光強度の閾値のデータと、上記の発光強度のデータとを比較する。このステップＳ３では、該発光強度が発光強度の閾値よりも大きいか否かについて比較判断される。
発光強度が閾値以上である場合(Ｙｅｓ)、ステップＳ４−１に処理を進める。反対に、発光強度が閾値未満である場合(Ｎｏ)、ステップＳ４−２に処理を進める。
発光強度が閾値以上である場合(Ｙｅｓ)、ステップＳ４−１に処理を進める。反対に、発光強度が閾値未満である場合(Ｎｏ)、ステップＳ４−２に処理を進める。
ステップＳ４−１において、ＣＰＵ２１０ａは、好酸球性気道炎症陽性であるという情報をＲＡＭ２１０ｃに格納するとともに、画像出力インタフェース２１０ｈを介して表示部２２０に出力する。具体的には、マーカーとしてCCL27が用いられた場合、CCL27陽性（＋）または好酸球性気道炎症陽性という情報を出力する。マーカーとしてCXCL9が用いられた場合、CXCL9陽性（＋）または好酸球性気道炎症陽性という情報を出力する。本発明においては、好酸球性気道炎症が被験者に発生しているか、またはこれから被験者が好酸球性気道炎症になる危険性が高いという情報を出力してもよい。また、被験者に好酸球性気道炎症が発生している場合は、被験者の予後が不良であるか、または好酸球性気道炎症の重篤度が高いという情報を出力してもよい。
あるいは、ステップＳ４−２において、ＣＰＵ２１０ａは、好酸球性気道炎症陰性であるという情報をＲＡＭ２１０ｃに格納するとともに、画像出力インタフェース２１０ｈを介して表示部２２０に出力する。具体的には、マーカーとしてCCL27が用いられた場合、CCL27陰性（−）または好酸球性気道炎症陰性という情報を出力する。マーカーとしてCXCL9が用いられた場合、CXCL9陰性（−）または好酸球性気道炎症陰性という情報を出力する。本発明においては、好酸球性気道炎症が被験者に発生していないか、またはこれから被験者が好酸球性気道炎症になる危険性が低いという情報を出力してもよい。また、被験者に好酸球性気道炎症が発生している場合は、被験者の予後が良好であるか、または好酸球性気道炎症の重篤度が低いという情報を出力してもよい。
なお、本実施形態において、ステップＳ３では、該発光強度が発光強度の閾値よりも大きいか否かについて比較判断されるが、これに限定されるものではない。複数のマーカーの量の測定値を用いて解析を行う場合、各マーカーの量の測定値を所定の式に代入することで、各マーカーの量の測定値に対して重要度に応じた重み付けを行って算出された値が所定の閾値よりも大きいか否かについて比較判断されてもよい。この場合、所定の閾値は、ＣＰＵ２１０ａは、アプリケーションプログラム２４０ａのデータとしてハードディスク２１０ｄに予め記憶されている。
なお、本実施形態において、タンパク質測定で得られた発光強度のデータは、測定部１００から入出力インタフェース２１０ｆを介して取得されるが、これに限定されるものではない。ユーザーがタンパク質測定で得られた発光強度のデータを入力デバイス２３０により入力し、ＣＰＵ２１０ａが、これら入力された値を発光強度として取得してもよい。
なお、本実施形態において、タンパク質測定で得られた発光強度のデータは、測定部１００から入出力インタフェース２１０ｆを介して取得されるが、これに限定されるものではない。ユーザーがタンパク質測定で得られた発光強度のデータを入力デバイス２３０により入力し、ＣＰＵ２１０ａが、これら入力された値を発光強度として取得してもよい。
以下に、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
実施例１および比較例１
本発明のマーカーCCL27およびCXCL9を単独で用いた場合の性能を調べるため、下記のような試験を行った。また、比較のために、好酸球性気道炎症の既知マーカーであるPeriostin、好酸球との関連性が示唆されているEotaxinおよびTARC（CCL17, CC Chemokine Ligand 17）についても同様に試験を行った。
本発明のマーカーCCL27およびCXCL9を単独で用いた場合の性能を調べるため、下記のような試験を行った。また、比較のために、好酸球性気道炎症の既知マーカーであるPeriostin、好酸球との関連性が示唆されているEotaxinおよびTARC（CCL17, CC Chemokine Ligand 17）についても同様に試験を行った。
(1) 試料の調製
国立病院機構相模原病院より、喘息患者39名の血清試料を入手した。これらの喘息患者について、喀痰を用いてハンセル法による好酸球検査を行った結果、喀痰好酸球が検出された(喀痰好酸球陽性)患者は33名、喀痰好酸球が検出されなかった(喀痰好酸球陰性)患者は6名であった。
国立病院機構相模原病院より、喘息患者39名の血清試料を入手した。これらの喘息患者について、喀痰を用いてハンセル法による好酸球検査を行った結果、喀痰好酸球が検出された(喀痰好酸球陽性)患者は33名、喀痰好酸球が検出されなかった(喀痰好酸球陰性)患者は6名であった。
(2) ELISA測定
上記で得た血清試料を用いて、各マーカーの量を測定するために下記のようにしてELISA測定を行った。
(2-1) CCL27
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY376)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液(4μg/mL固相抗体,0.05% NaN3, PBS PH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファー(0.05%Tween20, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)で3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファー(1% BSA,0.5% Casein, 0.05% Tween20, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)で、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA, 0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.075μg/mL標識抗体, 1% BSA, 0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase [R&D systems AR001 ], 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)を添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファー(20mM Tris 10mM MgCl pH9.8)で1回洗浄し、基質(CDP-Star Ready-to-use Sapphire II Tropix)を100μL添加し、化学発光検出装置(FLUO star OPTIMA BMG LabTech)で発光シグナルを検出した。
上記で得た血清試料を用いて、各マーカーの量を測定するために下記のようにしてELISA測定を行った。
(2-1) CCL27
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY376)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液(4μg/mL固相抗体,0.05% NaN3, PBS PH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファー(0.05%Tween20, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)で3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファー(1% BSA,0.5% Casein, 0.05% Tween20, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)で、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA, 0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.075μg/mL標識抗体, 1% BSA, 0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase [R&D systems AR001 ], 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS PH7.4)を添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファー(20mM Tris 10mM MgCl pH9.8)で1回洗浄し、基質(CDP-Star Ready-to-use Sapphire II Tropix)を100μL添加し、化学発光検出装置(FLUO star OPTIMA BMG LabTech)で発光シグナルを検出した。
(2-2) CXCL9
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY392)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液(1μg/mL固相抗体, PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)にて４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.2μg/mL標識抗体, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4) を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄する。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、基質を添加し、100μLの化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY392)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液(1μg/mL固相抗体, PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)にて４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.2μg/mL標識抗体, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4) を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄する。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、基質を添加し、100μLの化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
(2-3) Periostin
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY3548)を使用した。
まず、384ウェルELISAプレートに50μLの抗体希釈液( 1μg/mL固相抗体,PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、100μLのブロッキングバッファー(1% BSA,0.5% Casein, 0.05% Tween20, 0.05% NaN3, PBS pH7.4) で、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で100倍希釈した血清を50μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し50μLの標識抗体液(2μg/mL標識抗体, 1% BSA, 0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。50μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を50μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、100μLのALP活性化バッファーで洗浄し、50μLの基質を添加し、化学発光検出装置(FLUO star OPTIMA BMG LABTECH)で発光シグナルを検出した。
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY3548)を使用した。
まず、384ウェルELISAプレートに50μLの抗体希釈液( 1μg/mL固相抗体,PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、100μLのブロッキングバッファー(1% BSA,0.5% Casein, 0.05% Tween20, 0.05% NaN3, PBS pH7.4) で、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で100倍希釈した血清を50μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し50μLの標識抗体液(2μg/mL標識抗体, 1% BSA, 0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。50μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を50μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、100μLのALP活性化バッファーで洗浄し、50μLの基質を添加し、化学発光検出装置(FLUO star OPTIMA BMG LABTECH)で発光シグナルを検出した。
(2-4) Eotaxin
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY320)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液( 2μg/mL固相抗体, PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.1μg/mL標識抗体, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄する。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、100μLの基質を添加し、化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY320)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液( 2μg/mL固相抗体, PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.1μg/mL標識抗体, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄する。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、100μLの基質を添加し、化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
(2-5) TARC
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY364)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液(2μg/mL固相抗体, PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.1μg/mL標識抗体, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を添加する。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、100μLの基質を添加し、化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
ELISA測定用キットとしてR&D systems社製 Duoset (DY364)を使用した。
まず、96ウェルELISAプレートに100μLの抗体希釈液(2μg/mL固相抗体, PBS pH7.4)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer (1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.1μg/mL標識抗体, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)を添加する。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、100μLの基質を添加し、化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
(3) ELISA測定結果の解析
各マーカーについて、濃度既知のスタンダードの発光シグナル（RLU）から4-Parameter fitにより検量線を作成した。検体から得られた発光シグナル（RLU）を検量線にあてはめ、血清中のマーカー濃度を算出した。解析には解析ソフトMARS(BGM LABTECH)を使用した。
各マーカーについて、濃度既知のスタンダードの発光シグナル（RLU）から4-Parameter fitにより検量線を作成した。検体から得られた発光シグナル（RLU）を検量線にあてはめ、血清中のマーカー濃度を算出した。解析には解析ソフトMARS(BGM LABTECH)を使用した。
(4) 統計解析
統計解析にはStatFlex Version 6.0 (YUMIT)を使用した。
(4-1) 有意差検定
喀痰好酸球の陽性または陰性に応じて患者群を２群に分け、マンホイットニー検定にて血清中のマーカー濃度差を検定した。検定結果を表１−１にまとめる。
(4-2) 感度および特異度の算定
ROC曲線を求め喀痰好酸球陽性または陰性のカットオフを設定し感度および特異度を算出した。
カットオフの設定は、ROC曲線において、（感度、１−特異度）が（１、０）である点から最も近いポイント（図中に矢印で表記）に設定した。
(4-3) ROC曲線の比較
各項目間でHanleyの方法によりROC曲線の曲線下面積（AUC）を比較した。
統計解析にはStatFlex Version 6.0 (YUMIT)を使用した。
(4-1) 有意差検定
喀痰好酸球の陽性または陰性に応じて患者群を２群に分け、マンホイットニー検定にて血清中のマーカー濃度差を検定した。検定結果を表１−１にまとめる。
ROC曲線を求め喀痰好酸球陽性または陰性のカットオフを設定し感度および特異度を算出した。
カットオフの設定は、ROC曲線において、（感度、１−特異度）が（１、０）である点から最も近いポイント（図中に矢印で表記）に設定した。
(4-3) ROC曲線の比較
各項目間でHanleyの方法によりROC曲線の曲線下面積（AUC）を比較した。
CCL27(図１Ａ)およびCXCL9(図１Ｂ)について得られた解析結果を実施例１として、Periostin(図１Ｃ)、Eotaxin(図１Ｄ)およびTARC(図１Ｅ)について得られた解析結果を比較例１として示す。また、解析結果を下記の表１−２にまとめる。
表１−１より、Periostin、Eotaxin、およびTARCについては、喀痰好酸球陽性患者と陰性患者との間のマーカー濃度に有意差が見られない一方、CCL27およびCXCL9については、喀痰好酸球陽性患者と陰性患者との間のマーカー濃度に有意差が見られた。このことから、CCL27およびCXCL9は、喘息患者における喀痰好酸球陽性患者と陰性患者とを判別することが可能なマーカーであることがわかる。
また、表１−２の結果から、CCL27およびCXCL9は、感度と特異度の観点から、Periostin、EotaxinおよびTARCよりも優れた性能を有するマーカーであることが明らかとなった。
実施例２および比較例２
実施例２において、本発明者は、CCL27およびCXCL9について、好酸球性気道炎症の一次スクリーニング用マーカーとしての性能を調べるために、非喘息健常成人の血清中のマーカー濃度を測定し、実施例１で得られたマーカー濃度を比較および解析する実験を行った。具体的には、非喘息健常成人検体として健常ボランティア12名から得られた血清試料を用いて実施例１と同様にELISAによるマーカー濃度測定を行い、実施例１で用いた血清試料39検体から得られたマーカー濃度のデータと組み合わせて実施例１と同様の統計解析を行った。なお、非喘息健常成人は、喀痰好酸球陰性群に含めて扱った。
実施例２において、本発明者は、CCL27およびCXCL9について、好酸球性気道炎症の一次スクリーニング用マーカーとしての性能を調べるために、非喘息健常成人の血清中のマーカー濃度を測定し、実施例１で得られたマーカー濃度を比較および解析する実験を行った。具体的には、非喘息健常成人検体として健常ボランティア12名から得られた血清試料を用いて実施例１と同様にELISAによるマーカー濃度測定を行い、実施例１で用いた血清試料39検体から得られたマーカー濃度のデータと組み合わせて実施例１と同様の統計解析を行った。なお、非喘息健常成人は、喀痰好酸球陰性群に含めて扱った。
CCL27(図２Ａ)およびCXCL9(図２Ｂ)について得られた解析結果を実施例２として、Periostin(図２Ｃ)、Eotaxin(図２Ｄ)およびTARC(図２Ｅ)について得られた解析結果を比較例２として示す。また、解析結果を下記の表２−１および表２−２にまとめる。
表２−１より、PeriostinおよびTARCについては、喀痰好酸球陽性患者と陰性患者との間のマーカー濃度に有意差が見られない一方、CCL27、CXCL9およびEotaxinについては、喀痰好酸球陽性群（喀痰好酸球陽性患者）と陰性群（喀痰好酸球陰性患者および非喘息健常成人）との間のマーカー濃度に有意差が見られた。このことから、CCL27、CXCL9、およびEotaxinは、喀痰好酸球陽性群と陰性群とを判別することが可能なマーカーであることがわかる。
また、表２−２の結果から、CCL27およびCXCL9は、感度と特異度の観点から、好酸球性気道炎症の一次スクリーニング用マーカーとして、Periostin、EotaxinおよびTARCよりも優れた性能を有するマーカーであることが明らかとなった。特に、CCL27の特異度は、健常成人を加えた場合に、健常成人を加えない場合（実施例１、図１Ａ）よりも著しく向上し、その結果AUCも極めて良好なものとなっている（表２および図２Ａ）。上記の結果から、CCL27は、健常成人および喘息患者の両方を対象とする好酸球性気道炎症の一次スクリーニングなどにおいて特に優れた性能を有するマーカーとして利用できることが示唆された。
上記の実施例１および２の結果を総合すると、CCL27およびCXCL9はいずれも公知の好酸球性気道炎症マーカーおよび好酸球関連タンパク質よりも優れた性能を有する好酸球性気道炎症マーカーとして利用することができると考えられる。また、CCL27は、喘息に罹患していない被験者を含めた母集団のなかから好酸球性気道炎症に罹患している疑いのある患者を選抜するためのマーカーとして特に良好な性能を有すると考えられる一方、CXCL9は、喘息に罹患する患者のなかから、好酸球性気道炎症に罹患する患者と罹患していない患者とを判別するためのマーカーとして特に良好な性能を有すると考えられる。
実施例３
実施例３において、本発明者は、単独で良好な判別性能を示した本発明のマーカーCCL27とCXCL9とを組み合わせて、更に優れた判別性能が得られるかどうかを調べた。また、本発明のマーカーCCL27とCXCL9にさらにIL-25を組み合わせて、更に優れた判別性能が得られるかどうかを調べた。
実施例３において、本発明者は、単独で良好な判別性能を示した本発明のマーカーCCL27とCXCL9とを組み合わせて、更に優れた判別性能が得られるかどうかを調べた。また、本発明のマーカーCCL27とCXCL9にさらにIL-25を組み合わせて、更に優れた判別性能が得られるかどうかを調べた。
IL-25濃度のELISA測定は、実施例１においてマーカー濃度のデータを取得したものと同一の血清試料について行い、具体的には下記のようにして行った。
ELISA測定にはPeprotech社製 ELISA development kit (900-K234)を使用した。
まず、ELISAプレートに100μLの抗体希釈液(1μg/mL固相抗体, PBS pH12.0)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer(1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.25μg/mL標識抗体, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、100μLの基質を添加し、化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
ELISA測定にはPeprotech社製 ELISA development kit (900-K234)を使用した。
まず、ELISAプレートに100μLの抗体希釈液(1μg/mL固相抗体, PBS pH12.0)を添加し、４℃で一晩抗体を固相化した。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのブロッキングバッファーで、室温で2時間以上ブロッキングした。ELISA Dilution Buffer(1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)で４倍希釈した血清を100μL添加し、4℃で一晩反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し100μLの標識抗体液(0.25μg/mL標識抗体, 1% BSA,0.5% Casein, 0.05% NaN3, PBS)を添加した。2時間室温で反応し、洗浄バッファーで3回洗浄した。100μLのアルカリフォスファターゼ標識ストレプトアビジン液(1：1000希釈Streptavidin-Alkaline Phosphatase, 1% BSA, 0.05% NaN3, PBS pH7.4)100μL添加し、20分間反応させた。洗浄バッファーで3回洗浄し、250μLのALP活性化バッファーで洗浄し、100μLの基質を添加し、化学発光検出装置で発光シグナルを検出した。
次に、目的変数を喀痰好酸球測定結果（陽性/陰性）、説明変数を血清中のCCL27およびCXCL9濃度として多重ロジスティックモデルを作成し、各マーカーの量の測定値を代入することで喀痰好酸球測定結果の予測値を取得した（変数指定法）。各血清試料から得られたマーカー濃度について予測値を算出した。喀痰好酸球陽性患者について算出された予測値は、大部分が1.0付近に集中している一方、喀痰好酸球陰性患者について算出された予測値は、0付近〜0.8付近に分布していることがわかる（図３Ａ）。次いで、算出された予測値に基づいて、ROC解析を行った。感度と特異度が一致するポイントにカットオフを設定し、AUCを算出した結果、カットオフは約0.847（感度および特異度は0.76）、AUCは約0.879であった。設定したカットオフを図３Ａに示す。このカットオフを用いることで、喀痰好酸球陽性喘息患者と陰性患者とを高精度で判別することが可能であることがわかる。
更に、目的変数を喀痰好酸球測定結果（陽性/陰性）、説明変数を血清中のCCL27、CXCL9およびIL-25濃度として多重ロジスティックモデルを作成し、各マーカーの量の測定値を代入することで喀痰好酸球測定結果の予測値を取得した（変数指定法）。各血清試料から得られたマーカー濃度について予測値を算出した。喀痰好酸球陽性患者について算出された予測値は、大部分が1.0付近に集中している一方、喀痰好酸球陰性患者について算出された予測値は、0.2付近〜0.85付近に分布していることがわかる（図３Ｂ）。次いで、算出された予測値に基づいて、ROC解析を行った。感度と特異度が一致するポイントにカットオフを設定し、AUCを算出した結果、カットオフは約0.767（感度および特異度は0.88）、AUCは約0.960であった。設定したカットオフを図３Ｂに示す。このカットオフを用いることで、喀痰好酸球陽性喘息患者と陰性患者とを高精度で判別することが可能であることがわかる。
図３Ａと図１Ａおよび１Ｂとの比較から、本発明のマーカーCCL27およびCXCL9の組合せ（図３Ａ）は、これらをそれぞれ単独で用いる場合（実施例１）よりも、喀痰好酸球陽性喘息患者と陰性患者とを判別する上で優れた性能を有することが示唆された。
更に、本発明のマーカーに加えて、IL-25を組み合わせた場合（図３Ｂ）には、CCL27およびCXCL9を組み合わせた場合（図３Ａ）よりも優れた判別性能が得られることが示唆された。
更に、本発明のマーカーに加えて、IL-25を組み合わせた場合（図３Ｂ）には、CCL27およびCXCL9を組み合わせた場合（図３Ａ）よりも優れた判別性能が得られることが示唆された。
１００ タンパク質測定装置（測定部）
２００ 情報処理装置（コンピュータ）
２１０ 情報処理装置本体（情報処理部）
２２０ 表示部（出力部）
２３０ 入力デバイス
２４０ 外部記録媒体
２１０ａ ＣＰＵ
２１０ｂ ＲＯＭ
２１０ｃ ＲＡＭ
２１０ｄ ハードディスク
２１０ｅ 読出装置
２１０ｆ 入出力インタフェース
２１０ｈ 画像出力インタフェース
２１０ｉ バス
２４０ａ アプリケーションプログラム
２００ 情報処理装置（コンピュータ）
２１０ 情報処理装置本体（情報処理部）
２２０ 表示部（出力部）
２３０ 入力デバイス
２４０ 外部記録媒体
２１０ａ ＣＰＵ
２１０ｂ ＲＯＭ
２１０ｃ ＲＡＭ
２１０ｄ ハードディスク
２１０ｅ 読出装置
２１０ｆ 入出力インタフェース
２１０ｈ 画像出力インタフェース
２１０ｉ バス
２４０ａ アプリケーションプログラム
Claims (6)
- 被験者の血液試料中の、CCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの量を測定し、
得られた測定値と所定の閾値とを比較し、その比較結果に基づいて、前記被験者が、喀痰好酸球陽性であるか又は喀痰好酸球陰性であるかを判別する方法。 - 被験者の血液試料中の、CCL27およびCXCL9のマーカーの量を測定し、
CCL27の測定値およびCXCL9の測定値に基づいて、前記被験者が、喀痰好酸球陽性であるか又は喀痰好酸球陰性であるかを判別する請求項１に記載の方法。 - CCL27の測定値およびCXCL9の測定値に基づいて、多重ロジスティックモデルにより予測値を取得し、
取得された予測値と所定の閾値とを比較し、その比較結果に基づいて、前記被験者が、喀痰好酸球陽性であるか又は喀痰好酸球陰性であるかを判別する請求項２に記載の方法。 - さらにIL-25マーカーの量を測定する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
- 被験者の血液試料中のCCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの測定値を取得する測定部と、
前記測定部で取得したマーカーの測定値と、所定の閾値とを比較し、その比較結果に基づいて、前記被験者が、喀痰好酸球陽性であるか又は喀痰好酸球陰性であるかについての情報を取得する情報処理部と、
前記情報処理部で得られた情報を出力する出力部と
を備える、喀痰好酸球に関する情報の取得装置。 - コンピュータに、
被験者の血液試料中のCCL27およびCXCL9から選択される少なくとも１つのマーカーの測定値を受け取る受領ステップと、
前記受領ステップで受け取ったマーカーの測定値と、所定の閾値とを比較し、その比較結果に基づいて、前記被験者が、喀痰好酸球陽性であるか又は喀痰好酸球陰性であるかについての情報を取得する情報取得ステップと、
前記情報取得ステップで得られた情報を出力する出力ステップと、
を実行させるためのコンピュータプログラム。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013204787A JP6250351B2 (ja) | 2013-09-30 | 2013-09-30 | 好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー |
| US14/487,811 US20150093814A1 (en) | 2013-09-30 | 2014-09-16 | System, an apparatus and a computer program product for obtaining an information related to eosinophilic airway inflammation |
| CN201410513445.XA CN104515858A (zh) | 2013-09-30 | 2014-09-29 | 取得关于嗜酸性粒细胞性呼吸道炎症的信息的装置及方法 |
| EP14186939.6A EP2853896A3 (en) | 2013-09-30 | 2014-09-30 | A method and apparatus for obtaining an information related to eosinophilic airway inflammation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013204787A JP6250351B2 (ja) | 2013-09-30 | 2013-09-30 | 好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2015068760A JP2015068760A (ja) | 2015-04-13 |
| JP6250351B2 true JP6250351B2 (ja) | 2017-12-20 |
Family
ID=51625932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013204787A Active JP6250351B2 (ja) | 2013-09-30 | 2013-09-30 | 好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20150093814A1 (ja) |
| EP (1) | EP2853896A3 (ja) |
| JP (1) | JP6250351B2 (ja) |
| CN (1) | CN104515858A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6868418B2 (ja) * | 2017-02-27 | 2021-05-12 | シスメックス株式会社 | 喘息患者の重症発作の発生可能性の予測を補助する方法、装置およびコンピュータプログラム |
| EP3875958A4 (en) * | 2018-10-29 | 2022-10-05 | National University Corporation Tokyo Medical and Dental University | METHOD OF GATHERING INFORMATION ABOUT THE RISK OF REDUCED RESPIRATORY FUNCTIONING IN PATIENTS WITH INTERSTITIAL PNEUMONIA AND USE THEREOF |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1692161A (zh) * | 2002-03-01 | 2005-11-02 | 儿童医院医疗中心 | 哮喘或过敏症的治疗 |
| JP2004041121A (ja) * | 2002-07-12 | 2004-02-12 | Hitachi Ltd | アレルギー解析方法及びシステム |
| US8563476B2 (en) * | 2002-11-15 | 2013-10-22 | Morehouse School Of Medicine | Anti-CXCL9, anti-CXCL10, anti-CXCL11, anti-CXCL13, anti-CXCR3 and anti-CXCR5 agents for inflammatory disorders |
| JP2006515619A (ja) * | 2003-01-07 | 2006-06-01 | チルドレンズ ホスピタル メディカル センター | 好酸球のサイトカイン阻害 |
| EP1719051A4 (en) * | 2004-02-27 | 2009-06-17 | Bioseek Inc | BIOLOGICAL RECORDING OF ASTHMA AND ATOPY |
| WO2005115430A1 (en) * | 2004-05-27 | 2005-12-08 | Gropep Limited | Treatment of inflammatory airway disease |
| WO2006023791A2 (en) * | 2004-08-20 | 2006-03-02 | Amgen Inc. | Methods and compositions for treating allergic inflammation |
| JP2006071359A (ja) * | 2004-08-31 | 2006-03-16 | Sysmex Corp | 遠隔管理方法、遠隔管理システム、状態報告装置、および管理装置 |
| GB0707505D0 (en) * | 2007-04-18 | 2007-05-30 | Medical Res Council | Antibodies against il-25 |
| US8053199B2 (en) * | 2007-07-23 | 2011-11-08 | Brasier Allan R | Molecular phenotyping of severe asthma |
| US20090075266A1 (en) * | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Predictive Biosciences Corporation | Multiple analyte diagnostic readout |
| US8454955B2 (en) * | 2007-11-28 | 2013-06-04 | Riken | Methods for treating allergic airway inflammation, airway hypersensitivity, and eosinophilia |
| JP5403534B2 (ja) * | 2008-10-29 | 2014-01-29 | インフォコム株式会社 | 食道癌の予後予測のための情報を提供する方法 |
| EP2411019A2 (en) * | 2009-03-27 | 2012-02-01 | Merck Sharp&Dohme Corp. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF SIGNAL TRANSDUCER AND ACTIVATOR OF TRANSCRIPTION 1 (STAT1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
| US8309299B2 (en) * | 2010-05-19 | 2012-11-13 | Hoffmann-La Roche Inc. | Combination therapy and method for assessing resistance to treatment |
| MX352789B (es) * | 2010-12-16 | 2017-12-08 | Genentech Inc | Anticuerpo anti-il-13 para usarse en tratar un asma o un trastorno respiratorio. |
| AU2012249288C1 (en) * | 2011-04-29 | 2017-12-21 | Cancer Prevention And Cure, Ltd. | Methods of identification and diagnosis of lung diseases using classification systems and kits thereof |
-
2013
- 2013-09-30 JP JP2013204787A patent/JP6250351B2/ja active Active
-
2014
- 2014-09-16 US US14/487,811 patent/US20150093814A1/en not_active Abandoned
- 2014-09-29 CN CN201410513445.XA patent/CN104515858A/zh active Pending
- 2014-09-30 EP EP14186939.6A patent/EP2853896A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2853896A2 (en) | 2015-04-01 |
| EP2853896A3 (en) | 2015-06-17 |
| CN104515858A (zh) | 2015-04-15 |
| US20150093814A1 (en) | 2015-04-02 |
| JP2015068760A (ja) | 2015-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2300829B1 (en) | New biomarker for diagnosis, prediction and/or prognosis of sepsis and uses thereof | |
| JP6018923B2 (ja) | 敗血症の予後の予測方法 | |
| US20150355180A1 (en) | Differential Expression of Novel Protein Markers for the Diagnosis and Treatment of Eosinophilic Esophagitis | |
| JP6774925B2 (ja) | 性別に基づく疾病の識別・評価・予防及び治療を含む、肺病の識別・評価・予防及び治療のための方法並びにそのキット | |
| US11193935B2 (en) | Compositions, methods and kits for diagnosis of lung cancer | |
| Rajkumar et al. | Validation of the diagnostic utility of salivary interleukin 8 in the differentiation of potentially malignant oral lesions and oral squamous cell carcinoma in a region with high endemicity | |
| US20130210667A1 (en) | Biomarkers for Predicting Kidney and Glomerular Pathologies | |
| Bawiskar et al. | Hematological manifestations of COVID-19 and their prognostic significance in an intensive care unit: a cross-sectional study | |
| Tang et al. | Relationship of blood eosinophils with fractional exhaled nitric oxide and pulmonary function parameters in chronic obstructive pulmonary disease (COPD) exacerbation | |
| Wu et al. | Elevated serum levels of periostin in patients with allergic bronchopulmonary aspergillosis | |
| Machida et al. | Thymus and activation-regulated chemokine (TARC/CCL17) predicts decline of pulmonary function in patients with chronic obstructive pulmonary disease | |
| JP5805518B2 (ja) | マルチプレックス大腸がんマーカーパネル | |
| JP6250351B2 (ja) | 好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー | |
| Vernia et al. | Fecal lactoferrin and other putative fecal biomarkers in Crohn’s disease: do they still have a potential clinical role? | |
| JP2019527840A (ja) | ヒトサンプル中のタンパク質を検出する方法及びその方法の使用 | |
| JP6868418B2 (ja) | 喘息患者の重症発作の発生可能性の予測を補助する方法、装置およびコンピュータプログラム | |
| El-dib et al. | Diagnostic and prognostic role of procalcitonin in CAP | |
| CN113699235B (zh) | 免疫原性细胞死亡相关基因在头颈鳞癌生存预后及放疗应答性中的应用 | |
| TWI739155B (zh) | Copd指數值的測量方法 | |
| JP6220222B2 (ja) | 関節リウマチの診断を補助するための方法、システム及びコンピュータプログラム製品 | |
| Baldo et al. | Periostin as an important biomarker of inflammatory phenotype T2 in Brazilian asthma patients | |
| CN117147877A (zh) | Ang1-7作为生物标志物在预测、诊断儿童脓毒症中的应用 | |
| CN117310165A (zh) | 肾素作为生物标志物在预测、诊断或监测儿童脓毒症及脓毒性肺损伤中的应用 | |
| Almurshedi et al. | The Role of Interleukin-22 in The Diagnosis and Evaluation of Disease Activity in Rheumatoid Arthritis | |
| JP6312054B2 (ja) | 間質性肺炎のバイオマーカー |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160304 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170125 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170307 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170501 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20171031 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171122 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6250351 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |