BR112017012755B1 - Compostos de heteroarila de anel fundido inibidores de trk - Google Patents

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Abstract

COMPOSTOS DE HETEROARILA DE ANEL FUNDIDO E SEU USO COMO INIBIDORES DE TRK. A descrição fornece novos compostos químicos representados por Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos. Os compostos podem ser usados como um inibidor de Trk e são úteis no tratamento da dor, câncer, inflamação, doença neurodegenerativa e certas doenças infecciosas. Em alguns compostos de Fórmula I, Q é -CH=CR3C(O)NR4R5, -C(ligação tripla)CC(O)NR4R5, ou (II).

Description

CAMPO
[001] Esta descrição refere-se a novas entidades químicas e uso das entidades como inibidores de TRK.
ANTECEDENTE
[002] Trk’s são receptores de tirosina cinase de alta afinidade que são ativados por Neurotrofinas (NT). A família do receptor de Trk tem três membros: TrkA, TrkB e TrkC. Entre as neurotrofinas está um grupo de fatores de crescimento solúveis, Fator de Crescimento Nervoso (NGF) que ativa TrkA, Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF) e NT-4/5 que ativa TrkB, e Neurotrofina-3 (NT3) que ativa TrkC. Trk’s são amplamente expressas no tecido neuronal e estão envolvidas na manutenção, sinalização e sobrevivência das células neuronais (Pata- poutian, A. et al., Current Opinion in Neurobiology, 2001, 11, 272-280).
[003] Os inibidores da série de reação de Trk/neutrofina demons traram ser efetivos em numerosos modelos animais pré-clínicos de dor. Anticorpos de NGF e TrkA antagônicos mostraram ser eficazes em modelos animais de dor inflamatória e neuropática e em experiências clínicas humanas. (Woolf, C.J. et al. Neuroscience 1994, 62, 327331; Zahn, P.K. et al. J. Pain 2004, 5, 157-163; McMahon, S.B. et al. Nat. Med. 1995, 1, 774-780; Ma, Q.P. e Woolf, C. J. Neuroreport 1997, 8, 807-810; Shelton, D.L. et al. Pain 2005, 116, 8-16; Delafoy, L. et al. Pain 2003, 105, 489-497; Lamb, K. et al. Neurogastroenterol. Motil. 2003, 15, 355-361; Jaggar, S.I. et al. Br. J. Anaesth.1999, 83, 442448.)
[004] Foi mostrado que NGF segregado por células de tumor e macrófagos de invasão de tumor diretamente estimula a TrkA localizada em fibras de dor periférica. Usando os vários modelos de tumor igualmente em camundongos e ratos, foi demonstrado que a neutralização de NGF com um anticorpo monoclonal inibe a dor relacionada ao câncer a um grau similar ou superior à dose mais elevada tolerada de morfina. A ativação da série de reação de BDNF/TrkB tem sido envolvida em numerosos estudos como um modulador de vários tipos de dor, incluindo dor inflamatória (Matayoshi, S., J. Physiol. 2005, 569:685-695), dor neuropática (Thompson, S.W. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96:7714-7718) e dor cirúrgica (Li, C.-Q. et al. Molecular Pain, 2008, 4(28), 1-11). Porque as TrkA e TrkB cinases podem servir como um mediador de respostas biológicas direcionadas por NGF, os inibidores de TrkA e/ou outras Trk cinases podem fornecer um tratamento eficaz para estados de dor crônica.
[005] A associação entre a superexpressão, ativação, amplifica ção e/ou mutação de Trk cinases e vários cânceres, como observado com estudos de conduta sobre neuroblastoma (Brodeur, G.M. Nat. Rev. Cancer 2003, 3, 203-216), câncer ovariano (Kruettgen et al. Brain Pathology 2006, 16:304-310), câncer de próstata (Dionne et al. Clin. Cancer Res. 1998, 4(8), 1887-1898), câncer pancreático (Dang et al. j of Gastroenterology and Hepatology 2006, 21(5), 850-858), tumores neuroendócrinos de células grandes (Marchetti et al. Human Mutation 2008, 29(5), 609-616), e câncer colorretal (Bardelli, A. Science 2003, 300, 949) apoiam o raciocínio de que as implicações terapêuticas de um inibidor de Trk efetivo podem se estender muito além da terapia da dor. Em modelos pré-clínicos de câncer, os inibidores de moléculas pequenas não seletivos de TrkA, B e C foram efetivos tanto na inibição do crescimento de tumor quanto na interrupção da metástase de tumor (Nakagawara, A. Cancer Letters 2001, 169:107-114; Meyer, J. et al. Leukemia 2007, 1-10; Pierottia, M.A. e Greco A. Cancer Letters, 2006, 232:90-98; Eric Adriaenssens, E. et al. Cancer Res 2008, 68(2), 346351).
[006] Da mesma forma, a inibição da série de reação de neuro- trofina/Trk mostrou-se eficaz no tratamento de doenças inflamatórias pulmonares, incluindo a asma (Freund-Michel, V. et. al. Pharmacology & Therapeutics 2008, 117(1), 52-76), cistite intersticial (Hu Vivian Y, et. al. The Journal of Urology 2005, 173(3), 1016-1021), doenças intestinais inflamatórias incluindo colite ulcerativa e doença de Crohn (Di Mola, F.F, et. al. Gut 2000, 46(5), 670-678) e doenças inflamatórias da pele como a dermatite atópica (Dou, Y.C. et. al. Archives of Dermatological Research 2006, 298(1), 31-37), eczema e psoríase (Ray- chaudhuri, S.P. et. al. J. Investigative Dermatology 2004, 122(3), 812819).
[007] A modulação da série de reação de neurotrofina/Trk mos trou da mesma forma ter um efeito na etiologia das doenças neurode- generativas incluindo esclerose múltipla, doença de Parkinson e doença de Alzheimer (Sohrabji, F. et. al. Neuroendocrinology 2006, 27(4), 404-414).
[008] A literatura recente identificou novas fusões de genes em pacientes com câncer de pulmão que abrigam o domínio da cinase do gene NTRK1 que codifica a proteína de TrkA receptora do fator de crescimento do nervo de alta afinidade (Vaishnavi, A. et. al. Nature Medisine 2013, 19(11), 1469-1472).
[009] A informação anterior é fornecida como base para entender os aspectos da invenção e não constitui uma admissão da técnica anterior.
SUMÁRIO
[0010] O presente pedido descreve novas entidades químicas. Estas novas entidades químicas podem trabalhar com inibidores de Trk e são consideradas úteis no tratamento de múltiplos tipos de dor aguda e crônica, incluindo, porém, não limitadas à, dor inflamatória, dor neuropática e dor associada ao câncer, cirurgia e fratura óssea. Os compostos são da mesma forma considerados úteis no tratamento do câncer, inflamação, doenças neurodegenerativas e certas doenças infecciosas.
[0011] Um aspecto da invenção fornece um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos:
[0012] Em algumas modalidades, R1 de Fórmula I é um anel de fenila opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes ou um anel de heteroarila de 5-6 membros opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes, em que o um ou mais grupos substituintes são independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em halogênio, -CF3, -CHF2, NH2, hidroxila, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, C1-C4 alcóxi linear, e C1-C4 alcóxi ramificado. Além disso, na Fórmula I, R2 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear e C1-C4 alquila linear ramificada. Além disso, na Fórmula I, X é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH2-, -CH2CH2-, -CH2O-, -CH2NH-, - CH2N(C1-C4 alquil)-, -CH(F)-, -CF2-, -CH(Cl)-, -CH(OH)-, -CH(OCH3)-, -CH(NH2)-, ou -C(CH3)2-. Além disso, na Fórmula I, Q é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH=CR3C(O)NR4R5, - CH=CR3NR4C(O)R5, -CH=CR3NR4C(O)NR4R5, -CH=CR3R5, - C“ CC(O)NR4R5, - C CCR5, e .
[0013] Em Q de Fórmula I, R3 é selecionado a partir do grupo con sistindo em hidrogênio, halogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada. Em Q de Fórmula I, -NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros ou não forma uma estrutura de anel, o anel heterocí- clico sendo anel de heteroarila ou de heterocicloalquila. Quando - NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros, o anel heterocí- clico de 4-7 membros inclui um heteroátomo secundário ideal além do nitrogênio de -NR4R5 e é opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em C1-C6 alquila linear, C1-C6 alquila ramificada, hi- droxila, ácido carboxílico, ácido carboxílico de C1-C4 alquila linear, e ácido carboxílico de C2-C4 alquila ramificada. Quando -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila, C1-C6 alquila ramificada opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidro- xila, e C1-C6 cicloalquila opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila. Além disso, em Q de Fórmula I, Y1, Y2, Y3, e Y4 são cada qual independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em -CH, N, O, S, -CR6, e -NR6, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, anel de arila de 5-6 membros, anel de heteroarila de 5-6 membros, anel de heterocicloalquila de 3-7 membros, anel de cicloalquila de 3-7 membros, -NHCO-(anel de arila), e - CH2CO-(anel heterocíclico de C3-C6 membros).
[0014] Em outras modalidades, R1 de Fórmula I é um anel de hete- roarila ou de arila de 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em halogênio, hidroxila, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, C1-C4 alcóxi linear, e C1-C4 alcóxi ramificado. Além disso, na Fórmula I, R2 é hidrogênio, C1-C4 alquila linear ou C1- C4 alquila linear ramificada; e X é -CH2-, -CH2CH2-, -CH2O- ou -CH(Z)- , em que Z é halogênio; e Q é -CH=CR3C(O)NR4R5, -C CC(O)NR4R5, ou.
[0015] Além disso, em Q de Fórmula I, R3 é hidrogênio ou halogê- nio. Além disso, em Q de Fórmula I, -NR4R5 forma um anel heterocí- clico de 4-7 membros ou não forma uma estrutura de anel, o anel hete- rocíclico sendo anel de heteroarila ou de heterocicloalquila. Quando - NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros, o anel heterocí- clico de 4-7 membros inclui um heteroátomo secundário ideal além do nitrogênio de -NR4R5 e é opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em C1-C6 alquila linear, C1-C6 alquila ramificada, hi- droxila, ácido carboxílico, ácido carboxílico de C1-C4 alquila linear, e ácido carboxílico de C2-C4 alquila ramificada. Quando -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo con-sistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila, C1-C6 alquila ramificada opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidro- xila, e C1-C6 cicloalquila opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila. Em Q de Fórmula I, Y1, Y2, Y3, e Y4 são cada qual independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em -CH, N, O, S, -CR6, e -NR6, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, anel de arila de 5-6 membros, anel de heteroarila de 5-6 membros, anel de heterocicloalquila de 3-7 membros, anel de ci- cloalquila de 3-7 membros, -NHCO-(anel de arila), e -CH2CO-(anel he- terocíclico de C3-C6 membros).
[0016] No composto anterior de Fórmula I, R1, um anel de fenila substituído com um ou mais grupos substituintes, pode ser independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em flúor, metóxi e etóxi; R2 e R3 são H; R5 pode ser selecionado a partir do grupo consistindo em H, metila, etila, iso-propila, ciclopropila, t-butila, metoxietila e hidroxietila. No composto de Fórmula I, R1 pode ser um anel de piri- dina substituído com pelo menos um selecionado a partir do grupo consistindo em flúor e metóxi; R2 e R3 são H; R5 pode ser selecionado a partir do grupo consistindo em H, metila, etila, iso-propila, ciclopropi- la, t-butila, metoxietila e hidroxietila. No composto de Fórmula I, R1 pode ser um anel de pirid-2-on-3-ila opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em halogênio e C1-C4 alquila.
[0017] No composto de Fórmula I, quando -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em C1-C6 fluoroalquila linear, C1-C6 fluoroalquila ramificada, C1-C6 difluoroalquila linear, C1-C6 di- fluoroalquila ramificada, C1-C6 trifluoroalquila linear, C1-C6 trifluoroal- quila ramificada, C1-C6 hidroxialquila linear, C1-C6 hidroxialquila ramificada, C2-C6 difluoroalquila linear, e C2-C6 difluoroalquila ramificada. No composto de Fórmula I, -NR4R5 formando um anel heterocíclico de 4-7 membros pode ser um anel de heterocicloalquila de 4-7 membros. No composto de Fórmula I, quando -NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros, o heteroátomo secundário no anel heterocíclico de 47 membros pode ser selecionado a partir do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio e enxofre.
[0018] O composto de Fórmula I é um composto de Fórmula II:
[0019] O composto de Fórmula I é um composto de Fórmula III:
[0020] O composto de Fórmula I é um composto de Fórmula IV:
[0021] O sal do composto de Fórmula I pode ser selecionado a partir do grupo consistindo em acetato, benzoato, besilato, bitartarato, brometo, carbonato, cloreto, edetato, edisilato, estolato, fumarato, glu- ceptato, gliconato, bromidrato, cloridrato, iodeto, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, brometo de metila, sulfato de metila, mucato, napsilato, nitrato, oxalato, pamoato, fosfato, difosfato, salicilato, dissalicilato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tosilato, trietiodeto, trifluoroacetato e valerato.
[0022] Outro aspecto da invenção fornece um método de tratar ou de profilaxia de uma doença mediada por TRK selecionada a partir do grupo consistindo em carcinoma de tireoide papilar, câncer pancreáti- co, câncer de pulmão, câncer de cólon, carcinoma de mama, neu roblastoma, dor, caquexia, dermatite e asma. O método compreende administrar uma quantidade farmaceuticamente efetiva do composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo em necessidade de tal tratamento.
[0023] Ainda outro aspecto da invenção fornece um método de inibir uma enzima de TRK. O método compreende administrar uma quantidade farmaceuticamente efetiva do composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo em necessidade de tal inibição.
DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES
[0024] Os novos aspectos da invenção são mencionados com par ticularidade nas reivindicações anexas. Uma melhor compreensão dos aspectos e vantagens da presente invenção será obtida por referência à descrição detalhada que se segue, que apresenta modalidades ilustrativas, nas quais os princípios da invenção são utilizados. Embora algumas modalidades da presente invenção tenham sido mostradas e descritas aqui, tais modalidades são fornecidas apenas a título de exemplo. Deve ser entendido que várias alternativas às modalidades da invenção aqui descritas podem ser empregadas na prática da invenção. Aqueles de experiência ordinária na técnica apreciarão que inúmeras variações, mudanças e substituições são possíveis sem se afastar da invenção. Pretende-se que as seguintes reivindicações definam o escopo dos aspectos da invenção e que os métodos e estruturas dentro do escopo destas reivindicações e os seus equivalentes sejam abrangidos por esta.
[0025] Os títulos de seção usados aqui são apenas para propósi tos organizacionais e não devem ser interpretados como limitantes do assunto descrito. Todos os documentos,partes de documentos, citados no pedido, incluindo, sem limitação, patentes, pedidos de patentes, artigos, livros, manuais, e tratados são expressamente incorporados por referência na sua totalidade para qualquer finalidade.
Definições
[0026] A menos que definido de outra maneira, todos os termos técnicos e científicos aqui usados têm o mesmo significado que é geralmente entendido por alguém de experiência na técnica a que pertence o assunto reivindicado. Todas as patentes, pedidos de patentes, materiais publicados referidos em toda a descrição completa aqui, a menos que de outra maneira notado, são incorporados por referência em sua totalidade. No caso de haver uma pluralidade de definições para os termos aqui, prevalecem aqueles nesta seção. Onde a referência é feita para um URL ou outro desse identificador ou endereço, entende-se que tais identificadores podem mudar e informações particulares na internet podem ir e vir, porém, informações equivalentes podem ser encontradas pesquisando-se na internet ou outra fonte de referência apropriada. Referência a isto evidencia a disponibilidade e divulgação pública dessas informações.
[0027] Deve ser entendido que a descrição geral anterior e a des crição detalhada a seguir são exemplares e explicativas e não são restritivas de qualquer assunto reivindicado. Neste pedido, o uso do singular inclui o plural, a menos que especificamente declarado de outra forma. Deve notar-se que, quando usado na relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "a/o" incluem os referentes plurais, a menos que o contexto dite claramente o contrário. Deve da mesma forma notar-se que o uso de "ou" significa "e/ou", a menos que de outra maneira declarado. Além disso, o uso do termo "incluindo" bem como outras formas, tais como "incluir", "inclui", e "incluído" não é limitativo. Do mesmo modo, o uso do termo "compreendendo", bem como outras formas, tais como "compreender", "compreende", e "compreendido" não é limitativo.
[0028] A definição dos termos químicos padrão pode ser encon- trado em trabalhos de referência, incluindo Carey and Sundberg "ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4TH ED." Vols. A (2000) e B (2001), Plenum Press, New York. A menos que de outra maneira indicado, métodos convencionais de espectroscopia de massa, espectroscopia de RMN, HPLC, IR e UV/Vis e farmacologia, dentro da experiência da técnica são empregados. A menos que as definições específicas se-jam fornecidas, a nomenclatura empregada em conexão com, e os procedimentos e técnicas laboratoriais de química analítica, química orgânica sintética, química médica e farmacêutica aqui descritas são conhecidas na técnica. As técnicas padrão podem ser usadas para sínteses químicas, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação, liberação e tratamento de pacientes. As reações e técnicas de purificação podem ser realizadas, por exemplo, usando kits de especificações do fabricante ou como geralmente realizado na técnica ou como aqui descrito. As técnicas e procedimentos anteriores podem ser geralmente realizados de métodos convencionais bem conhecidos na técnica e como descrito em várias referências gerais e mais específicas que são citadas e discutidas ao longo do presente relatório descritivo. Ao longo do relatório descritivo, grupos e substituintes dos mesmos podem ser escolhidos por alguém versado no campo para fornecer porções e compostos estáveis.
[0029] Onde os grupos substituintes são especificados por suas fórmulas químicas convencionais, escritas da esquerda para a direita, abrangem igualmente os substituintes quimicamente idênticos que resultariam da escrita da estrutura da direita para a esquerda. Como um exemplo não limitativo, CH2O é equivalente a OCH2. A menos que outra maneira notado, o uso de termos químicos gerais, tal como não se limitando à "alquila", "amina", "arila", são equivalentes às suas formas opcionalmente substituídas. Por exemplo, "alquila", quando aqui usado, inclui alquila opcionalmente substituída.
[0030] Os compostos aqui apresentados podem possuir um ou mais estereocentros e cada centro pode existir na configuração R ou S, ou suas combinações. Da mesma forma, os compostos aqui apresentados podem possuir uma ou mais ligações duplas e cada qual pode existir na configuração E (trans) ou Z (cis), ou suas combinações. A apresentação de um estereoisômero, regioisômero, diastereômero, enantiômero ou epímero particular deve ser entendida como incluindo todos os possíveis estereoisômeros, regioisômeros, diastereômeros, enantiômeros ou epímeros e suas misturas. Desse modo, os compostos aqui apresentados incluem todas as formas estereoisoméricas, re- gioisoméricas, diastereoméricas, enantioméricas e epiméricas configu- racionais separadas, bem como as suas misturas correspondentes. Técnicas para reverter ou deixar inalterado um estereocêntrico particular, e aqueles para resolver misturas de estereoisômeros são bem conhecidos na técnica e está bem dentro da capacidade de alguém versado na técnica para escolher um método apropriado para uma situação particular. Veja, por exemplo, Fumiss et al. (eds.), VOGEL'S ENCYCLOPEDIA OF PRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5.sup.TH ED., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, 809-816; e Heller, Acc. Chem. Res. 1990, 23, 128.
[0031] O termo "ligação" ou "ligação simples" refere-se a uma liga ção química entre dois átomos, ou duas porções quando os átomos ligados pela ligação são considerados parte da subestrutura maior.
[0032] O termo "opcional" ou "opcionalmente" significa que o even to ou circunstância subsequentemente descrito pode ou não ocorrer, e que a descrição inclui exemplos em que o evento ou circunstância ocorre e exemplos em que não ocorrem. Por exemplo, "alquila opcionalmente substituída" significa "alquila" ou "alquila substituída", como definido abaixo. Além disso, um grupo opcionalmente substituído pode ser não substituído (por exemplo, CH2CH3), completamente substituído (por exemplo, CF2CF3), mono-substituído (por exemplo, CH2CH2F) ou substituído em um nível em qualquer lugar entre completamente substituído e mono-substituído (por exemplo, CH2CHF2, CF2CH3, CFHCHF2, etc.) Será entendido por aqueles versados na técnica em relação a qualquer grupo que contenha um ou mais substituintes que esses grupos não se destinem a introduzir substituição ou padrões de substituição (por exemplo, alquila substituída inclui grupos cicloalquila opcionalmente substituídos, que por sua vez são definidos como incluindo grupos alquila opcionalmente substituídos, potencialmente infinitos) que são estericamente impraticáveis e/ou sinteticamente não viáveis. Desse modo, quaisquer substituintes descritos geralmente devem ser entendidos como tendo um peso molecular máximo de cerca de 1.000 daltons, e mais tipicamente, até cerca de 500 daltons (exceto nos casos em que os substituintes macromoleculares são claramente desti-nados, por exemplo, polipeptídeos, polissacarídeos, polietileno glicóis, DNA, RNA e similares).
[0033] Quando aqui usado, C1-Cn, inclui C1-C2, C1-C3, ... C1-Cn. Apenas a título de exemplo, um grupo designado como "C1-C4" indica que existem um a quatro átomos de carbono na porção, isto é, grupos contendo 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono ou 4 átomos de carbono, bem como as faixas C1-C2 e C1-C3. Desse modo, apenas por meio de exemplo, "C1-C4 alquila" indica que existem um a quatro átomos de carbono no grupo alquila, isto é, o grupo alquila é selecionado entre metila, etila, propila, iso-propila, n- butila, isobutila, sec-butila e t-butila. Sempre que aparece aqui, uma faixa numérica tal como "1 a 10" refere-se a cada número inteiro na faixa dada; por exemplo, "1 a 10 átomos de carbono" significa que o grupo pode ter 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, 4 átomos de carbono, 5 átomos de carbono, 6 átomos de carbono, 7 átomos de carbono, 8 átomos de carbono, 9 átomos de carbono, 10 átomos de carbono.
[0034] O termo "heteroátomo" ou "hetero" quando aqui usado, so zinho ou em combinação, refere-se a um átomo exceto carbono e hidrogênio. Heteroátomos são independentemente selecionados entre oxigênio, nitrogênio, enxofre, fósforo, silício, selênio e estanho, porém, não limitados a estes átomos. Quando dois ou mais heteroátomos estão presentes, os dois ou mais heteroátomos podem ser iguais uns aos outros, ou alguns ou todos os dois ou mais heteroátomos podem cada qual ser diferente dos outros.
[0035] O termo "alquila" quando aqui usado, sozinho ou em com binação, refere-se a uma cadeia linear opcionalmente substituída, ou monorradical de hidrocarboneto saturado de cadeia ramificada opcionalmente substituído tendo de um a cerca de dez átomos de carbono, mais preferivelmente um a seis átomos de carbono. Exemplos incluem, porém, não limitados à metila, etila, n-propila, isopropila, 2-metil-1- propila, 2-metil-2-propila, 2-metil-1-butila, 3 -metil-1-butila, 2-metil-3- butila, 2,2-dimetil-1-propila, 2-metil-1-pentila, 3 -metil-1 -pentila, 4- metil-1-pentila, 2-metil-2-pentila, 3-metil-2-pentila, 4-metil-2-pentila, 2,2 -dimetil-1-butila, 3,3 -dimetil-1 -butila, 2 -etil-1-butila, n-butila, isobutila, sec-butila, t-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, terc-amila e hexila, e grupos alquila mais longos, tais como heptila, octila e similares. Sempre que aparecer aqui, uma faixa numérica como "C1-C6 alquil" ou "C1_6 alquila", significa que o grupo alquila pode consistir em 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, 4 átomos de carbono, 5 átomos de carbono ou 6 átomos de carbono, embora a presente definição da mesma forma abranja a ocorrência do termo "alquila" onde nenhuma faixa numérica é designada.
[0036] O termo "alquileno" quando aqui usado, sozinho ou em combinação, refere-se a um dirradical derivado do monorradical acima definido, alquila. Exemplos incluem, porém, não limitados a metileno (- CH2), etileno (-CH2CH2), propileno (-CH2CH2CH2), isopropileno (- CH(CH3)CH2 ) e similares.
[0037] O termo "alquenila" quando aqui usado, sozinho ou em combinação, refere-se a uma cadeia linear opcionalmente substituída, ou monorradical de hidrocarboneto de cadeia ramificada opcionalmente substituído tendo uma ou mais ligações duplas de carbono-carbono e tendo de dois a cerca de dez átomos de carbono, mais preferivelmente dois a cerca de seis átomos de carbono. O grupo pode ser na conformação cis ou trans a cerca da(s) ligação(ões) dupla(s), e deve entender-se que inclui ambos os isômeros. Exemplos incluem, porém, não limitados à etenila (CH=CH2), 1-propenila (CH2CH=CH2), isopro- penila [C(CH3)=CH2], butenila, 1,3-butadienila e similares. Sempre que aparecer aqui, uma faixa numérica tal como "C2-C6 alquenila" ou "C2_6 alquenila", significa que o grupo alquenila pode consistir em 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, 4 átomos de carbono, 5 átomos de carbono ou 6 átomos de carbono, embora a presente definição da mesma forma abranja a ocorrência do termo "alquenila", onde nenhuma faixa numérica é designada.
[0038] O termo "alquinila" quando aqui usado, sozinho ou em combinação, refere-se a um monorradical de hidrocarboneto de cadeia ramificada opcionalmente substituído ou de cadeia linear opcionalmente substituída tendo uma ou mais ligações triplas de carbono-carbono e tendo de dois a cerca de dez átomos de carbono, mais preferivelmente de dois a cerca de seis átomos de carbono. Exemplos incluem, porém, não limitados a etinila, 2-propinila, 2-butinila, 1,3-butadiinila e similares. Sempre que aparecer aqui, uma faixa numérica tal como "C2-C6 alquinila" ou "C2_6 alquinila", significa que o grupo alquinila pode consistir em 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, 4 átomos de carbono, 5 átomos de carbono or 6 átomos de carbono, embora a presente definição da mesma forma abranja a ocorrência do termo "al- quinila" onde nenhuma faixa numérica é designada.
[0039] O termo "alifático" quando aqui usado, sozinho ou em com binação, refere-se a um hidrocarboneto não aromático opcionalmente substituído, de cadeia linear ou de cadeia ramificada, não cíclico, saturado, parcialmente insaturado, ou completamente insaturado. Desse modo, o termo coletivamente inclui grupos alquila, alquenila e alquinila.
[0040] Os termos "heteroalquila", "heteroalquenila" e "heteroal- quinila" quando aqui usados, sozinhos ou em combinação, referem-se às estruturas de alquila, alquenila e alquinila opcionalmente substituídas respectivamente, como descrito acima, em que um ou mais dos átomos de carbono de cadeia esquelética (e quaisquer átomos de hidrogênio associados, quando apropriado) são cada qual independentemente substituídos com um heteroátomo (isto é, um átomo exceto carbono, tal como embora não limitados a oxigênio, nitrogênio, enxofre, silício, fósforo, estanho ou combinações dos mesmos.
[0041] Os termos "haloalquila", "haloalquenila" e "haloalquinila" quando aqui usados, sozinhos ou em combinação, referem-se aos grupos alquila, alquenila e alquinila opcionalmente substituídos respectivamente, como definido acima, em que um ou mais átomos de hidrogênio é substituído por átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo, ou combinações dos mesmos. Quando dois ou mais átomos de hidrogênio podem ser substituídos com átomos de halogênio que são os mesmos um do outro (por exemplo difluorometila). Quando dois ou mais átomos de hidrogênio podem ser substituídos com átomos de halogênio que não são todos iguais entre si (por exemplo, 1-cloro-1-fluoro-1- iodoetila). Exemplos não limitantes de grupos haloalquila são fluoro- metila e bromoetila. Um exemplo não limitante de um grupo haloal- quenila é bromoetenila. Um exemplo não limitante de um grupo halo- alquinila é cloroetinila.
[0042] Os termos "ciclo", "cíclico", "anel" e "anel de membros" quando aqui usados, sozinhos ou em combinação, referem-se a qualquer estrutura covalentemente fechada, incluindo sistemas de anel ali- cíclicos, heterocíclicos, aromáticos, heteroaromáticos e policíclicos fundidos ou não fundidos como descrito aqui. Os anéis podem ser opcionalmente substituídos. Os anéis podem formar parte de um sistema de anel fundido. O termo "de membro" é pretendido denotar o número de átomos esqueléticos que constituem o anel. Desse modo, apenas por meio de exemplo, ciclo-hexano, piridina, pirano e pirimidina são anéis de seis membros e ciclopentano, pirrol, tetra-hidrofurano e tiofe- no são anéis de cinco membros.
[0043] O termo "fundido" quando aqui usado, sozinho ou em com binação, refere-se às estruturas cíclicas em que dois ou mais anéis compartilham uma ou mais ligações.
[0044] O termo "cicloalquila" quando aqui usado, sozinho ou em combinação, refere-se a um anel de monorradical de hidrocarboneto opcionalmente substituído, saturado, contendo de três a cerca de quinze átomos de carbono no anel ou de três a cerca de dez átomos de carbono no anel, embora possam incluir átomos de carbono sem anel, adicionais como substituintes (por exemplo, metilciclopropila).
[0045] Um exemplo não limitante de "cicloalquila" inclui azinila, azetidinila, oxetanila, tietanila, homopiperidinila, oxepanila, tiepanila, oxazepinila, diazepinila, tiazepinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinila, 2- pirrolinila, 3-pirrolinila, indolinila, 2H-piranila, 4H-piranila, dioxanila, 1,3- dioxolanila, pirazolinila, ditianila, ditiolanila, di-hidropiranila, di- hidrotienila, di-hidrofuranila, pirazolidinila, imidazolinila, imidazolidinila, 3-azabiciclo[3.1.0]hexila, 3-azabiciclo [4. 1.0]heptila, 3H-indolila e qui- nolizinila e similares. Os termos da mesma forma incluem todas as formas de anel dos carboidratos, incluindo, porém, não limitados aos monossacarídeos, aos dissacarídeos e aos oligossacarídeos.
[0046] O termo "aromático" quando aqui usado, refere-se a uma porção de anel planar, cíclica ou policíclica, tendo um sistema desloca- lizado no elétron contendo 4n+2 n elétrons, onde n é um número inteiro. Anéis aromáticos podem ser formados por cinco, seis, sete, oito, nove ou mais de nove átomos. Aromáticos podem ser opcionalmente substituídos e podem ser anel fundido monocíclico ou policíclico. O termo aromático abrange todos os anéis contendo carbono (por exemplo, fenila) e aqueles anéis contendo um ou mais heteroátomos (por exemplo, piridina).
[0047] O termo "arila" quando aqui usado, sozinho ou em combi nação, refere-se a um radical de hidrocarboneto opcionalmente substituído aromático de seis a cerca de vinte átomos de carbono no anel, e inclui anéis de arila fundidos e não fundidos. Um radical de anel de ari- la fundido contém de dois a quatro anéis fundidos, onde o anel de ligação é um anel de arila, e os outros anéis individuais podem ser alicícli- cos, heterocíclicos, aromáticos, heteroaromáticos ou qualquer combinação dos mesmos. Além disso, o termo arila inclui anéis fundidos e não fundidos contendo de seis a cerca de doze átomos de carbono no anel, bem como aqueles contendo de seis a cerca de dez átomos de carbono no anel. Um exemplo não limitante de um grupo arila de anel simples inclui fenila; um grupo arila de anel fundido inclui naftila, fenan- trenila, antracenila, azulenila; e um grupo bi-arila não fundido inclui bi- fenila.
[0048] O termo "heteroarila" quando aqui usado, sozinho ou em combinação, refere-se a monorradicais aromáticos opcionalmente substituídos contendo de cerca de cinco a cerca de vinte átomos no anel esqueléticos, onde um ou mais dos átomos no anel é um heteroá- tomo independentemente selecionado entre oxigênio, nitrogênio, enxofre, fósforo, silício, selênio e estanho, porém, não limitados a estes átomos e com a condição de que o anel do referido grupo não contenha dois átomos de O ou S adjacentes. Quando dois ou mais heteroá- tomos estão presentes no anel, os dois ou mais heteroátomos podem ser iguais uns aos outros, ou alguns ou todos os dois ou mais heteroá- tomos podem ser diferentes dos outros. O termo heteroarila inclui radicais de heteroarila opcionalmente substituídos fundidos e não fundidos tendo pelo menos um heteroátomo. O termo heteroarila da mesma forma inclui heteroarilas fundidas e não fundidas tendo de cinco a cerca de doze átomos no anel esqueléticos, bem como aqueles tendo de cinco a cerca de dez átomos no anel esqueléticos. A ligação a um grupo heteroarila pode ser por meio de um átomo de carbono ou um heteroátomo. Desse modo, como um exemplo não limitante, um grupo imidiazol pode ser ligado a uma molécula de origem por meio de quaisquer de seus átomos de carbono (imidazol-2-ila, imidazol-4-ila ou imidazol-5-ila), ou seus átomos de nitrogênio (imidazol-1-ila ou imi- dazol-3-ila). Da mesma forma, um grupo heteroarila pode ser também substituído por meio de qualquer ou todos os seus átomos de carbono, e/ou qualquer ou todos os seus heteroátomos. Um radical de hetero- arila fundido pode conter de dois a quatro anéis fundidos onde o anel de ligação é um anel heteroaromático e os outros anéis individuais podem ser alicíclicos, heterocíclicos, aromáticos, heteroaromáticos ou qualquer combinação destes. Um exemplo não limitante de um grupo heteroarila de anel simples inclui piridila; grupos heteroarila de anel fundido incluem benzimidazolila, quinolinila, acridinila; e um grupo bi- heteroarila não fundido inclui bipiridinila. Além disso, exemplos de he- teroarilas incluem, sem limitação, furanila, tienila, oxazolila, acridinila, phenazinila, benzimidazolila, benzofuranila, benzoxazolila, benzoti- azolila, benzotiadiazolila, benzotiofenila, benzoxadiazolila, benzotriazolila, imidazolila, indolila, isoxazolila, isoquinolinila, indolizinila, iso- tiazolila, isoindoliloxadiazolila, indazolila, piridila, piridazila, pirimidila, pirazinila, pirrolila, pirazolila, purinila, ftalazinila, pteridinila, quinolinila, quinazolinila, quinoxalinila, triazolila, tetrazolila, tiazolila, triazinila, tia- diazolila e similares, e seus óxidos, tal como por exemplo, piridil-N- óxido e similares.
[0049] O termo "heterociclila" quando aqui usado, sozinho ou em combinação, refere-se coletivamente aos grupos heteroaliciclila e hete- roarila. Aqui, sempre que o número de átomos de carbono em um he- terociclo é indicado (por exemplo, C1-C6 heterociclo), pelo menos um átomo sem carbono (o heteroátomo) deve estar presente no anel. As designações tal como "C1-C6 heterociclo" referem-se apenas ao número de átomos de carbono no anel e não referem-se ao número total de átomos no anel. As designações tal como "heterociclo de 4-6 membros" referem-se ao número total de átomos que estão contidos no anel (isto é, um anel de quatro, cinco ou seis membros, em que pelo menos um átomo é um átomo de carbono, pelo menos um átomo é um heteroátomo e os dois a quatro átomos restantes são átomos de carbono ou heteroátomos). Para os heterociclos tendo dois ou mais hete- roátomos, aqueles dois ou mais heteroátomos podem ser iguais ou diferentes uns dos outros. Os heterociclos podem ser opcionalmente substituídos. Grupos heterocíclicos não aromáticos incluem grupos tendo apenas três átomos no anel, enquanto os grupos heterocíclicos aromáticos devem ter pelo menos cinco átomos no anel. A ligação (isto é, a ligação a uma molécula de origem ou outra substituição) a um heterociclo pode ser por meio de um heteroátomo ou um átomo de carbono. O termo "alcóxi", quando aqui usado, sozinho ou em combinação, refere-se a um radical de alquil éter, O-alquila, incluindo os grupos O-alifático e O-carbociclo, em que os grupos alquila, alifáticos e carbociclos podem ser opcionalmente substituídos e em que os termos alquila, alifático e carbociclo são como aqui definidos. Exemplos não limitantes de radicais alcóxi incluem metóxi, etóxi, n-propóxi, isopropó- xi, n-butóxi, iso-butóxi, sec-butóxi, terc-butóxi e similares.
[0050] O termo "composição farmacêutica", quando aqui usado, refere-se a um composto biologicamente ativo, opcionalmente misturado com pelo menos componente químico farmaceuticamente aceitável, tal como, embora não limitado a veículos, estabilizadores, diluen- tes, agentes de dispersão, agentes de suspensão, agentes espessan- tes, e/ou excipientes.
[0051] O termo "solvato" quando aqui usado refere-se a uma com binação de um composto desta invenção com uma molécula solvente formada por solvatação. Em algumas situações, o solvato refere-se a um hidrato, isto é, a molécula solvente é uma molécula de água, a combinação de um composto desta invenção e água forma um hidrato.
[0052] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" quando aqui usado, refere-se aos sais que mantém a eficácia biológica dos ácidos e bases livres do composto especificado e que não são biologicamente ou de outra forma indesejáveis. Os compostos aqui descritos podem possuir grupos ácidos ou básicos e, portanto, podem reagir com qualquer uma das várias bases inorgânicas ou orgânicas, e ácidos inorgânicos e orgânicos, para formar um sal farmaceuticamente aceitável. Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação final dos compostos da invenção, ou por reação separada de um composto purificado em sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e por isolamento do sal desse modo formado. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles sais preparados por reação dos compostos aqui descritos com um ácido mineral ou orgânico ou uma base inorgânica, incluindo tais sais, acetato, acrilato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benze- nossulfonato, bissulfato, bissulfito, brometo, butirato, butin-1,4-dioato, canforato, canforsulfonato, caprilato, clorobenzoato, cloreto, citrato, ciclopentanopropionato, decanoato, digliconato, di-hidrogenofosfato, dinitrobenzoato, dodecilsulfato, etanossulfonato, formiato, fumarato, glicoeptanoato, glicerofosfato, glicolato, hemissulfato, heptanoato, he- xanoato, hexina-1,6-dioato, hidroxibenzoato, hidroxibutirato, cloridrato, bromidrato, hidroiodeto, 2-hidroxietanossulfonato, iodeto, isobutirato, lactato, maleato, malonato, metanossulfonato, mandelato. metafosfato, metoxibenzoato, metilbenzoato, mono-hidrogenofosfato, 1- naftalenossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, palmoa- to, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, pirossulfato, pirofosfato, propiolato, ftalato, fenilacetato, fenilbutirato, propanossulfonato, salicilato, succinato, sulfato, sulfito, suberato, sebacato, sulfonato, tartarato, tiocianato, tosilato undeconato e xilenossulfonato. Outros ácidos, tal como oxálico, embora eles próprios não sejam farmaceuticamente aceitáveis, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos da invenção e seus sais de adição de ácido farmaceutica- mente aceitáveis (Veja, exemplos em Berge et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19.). Além disso, aqueles compostos descritos aqui em que podem compreender um grupo ácido livre podem reagir com uma base adequada, tal como hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um cátion de metal farmaceuticamente aceitável, com amônia ou com uma amina primária, secundária ou terciária orgânica farmaceuticamente aceitável. Os sais alcalinos ou alcalinoterrosos representativos incluem os sais de lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio e similares. Exemplos ilustrativos de bases incluem hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de colina, carbonato de sódio, IV' (C1_4 alquil)4, e similares. As aminas orgânicas representativas úteis para a formação de sais de adição de base incluem etilamina, dietilamina, etileno- diamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina e similares. Deve ser entendido que os compostos aqui descritos da mesma forma incluem a quaternização de quaisquer grupos contendo nitrogênio básico que possam conter. Os produtos dispersíveis solúveis em água ou oleosos podem ser obtidos por tal quaternização. Veja, por exemplo, Berge et al., supra.
[0053] O termo "polimorfo" or "polimorfismo" quando aqui usado refere-se a um composto desta invenção presente em formas de treli- ça de cristal diferentes.
[0054] O termo "éster" quando aqui usado refere-se a um derivado de um composto desta invenção derivado de um grupo oxoácido e um grupo hidroxila, qualquer um dos quais podem estar presentes no composto desta invenção.
[0055] O termo "tautômero" quando aqui usado refere-se a um isômero facilmente interconvertido a partir de um composto desta invenção, por exemplo, migração de um átomo de hidrogênio ou próton.
[0056] O termo "derivado ou profármaco farmaceuticamente acei tável" quando aqui usado, refere-se a qualquer sal farmaceuticamente aceitável, éster, sal de um éster ou outro derivado de um composto desta invenção, que, na administração a um recipiente, é capaz de proporcionar, quer direta quer indiretamente, um composto desta invenção ou um metabólito farmaceuticamente ativo ou resíduo do mesmo. Os derivados ou profármacos especialmente favorecidos são aqueles que aumentam a biodisponibilidade dos compostos desta invenção quando tais compostos são administrados a um paciente (por exemplo, ao permitir que o composto administrado oralmente seja mais facilmente absorvido no sangue) ou que realce a liberação do composto de origem a um compartimento biológico (por exemplo, o cérebro ou sistema linfático).
[0057] Os profármacos farmaceuticamente aceitáveis dos compos tos aqui descritos incluem, porém, não estão limitados a, ésteres, carbonatos, tiocarbonatos, derivados de N-acila, derivados de N- aciloxialquila, derivados quaternários de aminas terciárias, bases de N- Mannich, bases de Schiff, conjugados de aminoácido, ésteres de fosfato, sais de metal e ésteres de sulfonato. Várias formas de profárma- cos são bem conhecidas na técnica. Veja, por exemplo, Design of Prodrugs, Bundgaard, A. Ed., Elseview, 1985 and Method in Enzymology, Widder, K. et al., Ed.; Academic, 1985, vol. 42, p. 309-396; Bundgaard, H. "Design and Application of Prodrugs" in A Textbook ofDrug Design and Development, Krosgaard-Larsen and H. Bund- gaard, Ed., 1991, Chapter 5, p. 113-191; e Bundgaard, H., Advanced Drug Delivery Review, 1992, 8, 1-38, cada dos quais é incorporado aqui por referência. Os profármacos aqui descritos incluem, porém, não estão limitados a os seguintes grupos e combinações desses gru-pos; profármacos derivados de amina: Profármacos de hidróxi incluem, porém, não estão limitados a, aciloxialquil ésteres, alcoxicarboniloxial- quil ésteres, alquil ésteres, aril ésteres e ésteres contendo dissulfeto.
[0058] O termo "inibidor de Trk" quando aqui usado refere-se a um composto que exibe uma IC50, com respeito à atividade de Trk, atividade de não mais do que cerca de 100 μm, de não mais do que cerca de 50 μM, quando medida em um ensaio de pan-Trk cinase descrito geralmente aqui. "IC50" é aquela concentração de inibidor que reduz a atividade de uma enzima (por exemplo, Trk) a um nível quase máximo. Os compostos aqui descritos foram descobertos para exibir inibição contra a Trk. Os compostos da presente invenção exibem preferivelmente uma IC50 em relação à Trk de não mais do que cerca de 10 μM, mais preferivelmente, não mais do que cerca de 5 μm preferivelmente, não mais do que cerca de 1 μM, e mais preferivelmente, não mais do que cerca de 200 nM, quando medida no ensaio de Trk cinase descrito aqui.
[0059] O termo "seletivo", "seletivamente" ou "seletividade" quando aqui usado refere-se a um composto desta invenção tendo um valor de IC50 inferior para uma enzima de Trk em comparação a quaisquer outras enzimas (por exemplo, pelo menos 2, 5, 10 ou mais vezes inferior).
[0060] O termo "pessoa", "paciente" ou "indivíduo" quando aqui usado em referência a indivíduos que sofrem de um transtorno, uma condição e similares, abrange mamíferos e não mamíferos. Exemplos de mamíferos incluem, porém, não estão limitados a, qualquer membro da classe de Mamíferos: humanos, primatas não humanos, tais como chimpanzés e outros macacos e espécies de macacos; animais de fazenda tais como bovinos, cavalos, ovelhas, cabras, suínos; animais domésticos tais como coelhos, cachorros e gatos; animais de laboratório incluindo roedores, tais como ratos, camundongos e cobaias, e similares. Exemplos de não mamíferos incluem, porém, não estão limitados a, aves, peixe e similares. Em uma modalidade dos métodos e composições fornecidos aqui, o mamífero é um humano.
[0061] Os termos "tratar", "tratando" ou "tratamento" e outros equi valentes gramaticais como aqui usados, incluem aliviar, diminuir ou melhorar os sintomas da doença ou condição, prevenir sintomas adicionais, melhorar ou prevenir as causas metabólicas subjacentes dos sintomas, inibir a doença ou condição, por exemplo, interromper o desenvolvimento da doença ou condição, aliviar a doença ou condição, causar a regressão da doença ou condição, aliviar uma condição causada pela doença ou condição, ou interromper os sintomas da doença ou condição, e se destinam a incluir a profilaxia. Os termos também incluem a obtenção de um benefício terapêutico e/ou um benefício profilático. Por benefício terapêutico se entende a erradicação ou melhora do transtorno subjacente a ser tratado. Da mesma forma, um benefício terapêutico é alcançado com a erradicação ou melhora de um ou mais dos sintomas fisiológicos associados com o transtorno subjacente, de modo que uma melhora é observada no paciente, apesar do paciente ainda estar afligido com o transtorno subjacente. Para o benefício profilático, as composições podem ser administradas a um paciente em risco de desenvolver uma doença particular, ou a um paciente que re late um ou mais dos sintomas fisiológicos de uma doença, mesmo que não tenha sido feito um diagnóstico desta doença.
[0062] Os termos "quantidade efetiva", "quantidade terapeutica- mente efetiva" ou "quantidade farmaceuticamente efetiva" quando aqui usados, referem-se a uma quantidade suficiente de pelo menos um agente ou composto a ser administrado, que irá aliviar até certo ponto um ou mais dos sintomas da doença ou condição a ser tratada. O resultado pode ser redução e/ou alívio dos sinais, sintomas ou causas de uma doença ou qualquer outra alteração desejada de um sistema biológico. Por exemplo, uma "quantidade eficaz" para usos terapêuticos é a quantidade da composição compreendendo um composto como aqui descrito requerido para fornecer uma diminuição clinicamente significativa de uma doença. Uma quantidade "efetiva" adequada em qualquer caso individual pode ser determinada usando técnicas, como um estudo de aumento progressivo de dose.
[0063] Os termos "administrar", "administrando", "administração" e similares, quando aqui usados, referem-se aos métodos que podem ser usados para permitir a liberação de compostos ou composições ao sítio desejado da ação biológica. Estes métodos incluem, porém, não estão limitados a rotinas orais, rotinas intraduodenais, injeção parenteral (incluindo intravenosa, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular, intravascular ou infusão), administração tópica e retal. Aqueles versados na técnica estão familiarizados com as técnicas de administração que podem ser empregadas com os compostos e métodos aqui descritos, por exemplo, como discutido em Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; e Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, Pa. Em modalidades preferidas, os compostos e composições descritos aqui são administrados oralmente.
[0064] O termo "aceitável" quando aqui usado, com respeito a uma Formulação, composição ou ingrediente, significa não ter efeito prejudicial persistente sobre a saúde geral de um indivíduo que está sendo tratado.
[0065] O termo "farmaceuticamente aceitável" quando aqui usado, refere-se a um material, tal como um veículo ou diluente, que não ab- roga a atividade biológica ou propriedades dos compostos aqui descritos e é relativamente não tóxico, ou seja, o material pode ser administrado a um indivíduo sem causar efeitos biológicos indesejáveis ou que interage de forma prejudicial com qualquer um dos componentes da composição em que está contido.
[0066] O termo "veículo" quando aqui usado, refere-se a compos tos ou agentes químicos relativamente não tóxicos que facilitam a in-corporação de um composto em células ou tecidos.
[0067] O termo "agonista", quando aqui usado, refere-se a uma molécula tal como um composto, um fármaco, um ativador de enzima ou um modulador de hormônio que realça a atividade de outra molécula ou a atividade de um sítio receptor.
[0068] O termo "antagonista", quando aqui usado, refere-se a uma molécula tal como um composto, um fármaco, um inibidor de enzima, ou um modulador de hormônio, que diminui, ou impede a ação de outra molécula ou a atividade de um sítio receptor.
[0069] O termo "modular", quando aqui usado, significa interagir com um alvo, direta ou indiretamente, de modo a alterar a atividade do alvo, incluindo, apenas a título de exemplo, realçar a atividade do alvo, inibir a atividade do alvo, limitar a atividade do alvo, ou estender a atividade do alvo.
[0070] O termo "modulador", quando aqui usado, refere-se a uma molécula que interage com um alvo, direta ou indiretamente. As interações incluem, porém, não são limitadas a, interações de um agonista e um antagonista.
[0071] Os termos "realçar" ou "realçando", quando aqui usados, significam aumentar ou prolongar a potência ou a duração de um efeito desejado. Desse modo, no que diz respeito ao realce do efeito dos agentes terapêuticos, o termo "realçando" refere-se à capacidade de aumentar ou prolongar, tanto na potência quanto na duração, o efeito de outros agentes terapêuticos em um sistema.
[0072] Uma "quantidade eficaz de realce", quando aqui usado, re fere-se a uma quantidade adequada para realçar o efeito de outro agente terapêutico em um sistema desejado.
[0073] Os termos "combinação farmacêutica", "administrar uma terapia adicional", "administrar um agente terapêutico adicional" e similares, quando aqui usados, referem-se a uma terapia farmacêutica resultante da mistura ou combinação de mais de um ingrediente ativo e inclui igualmente combinações fixas e não fixas dos ingredientes ativos. O termo "combinação fixa" significa que pelo menos um dos compostos aqui descritos, e pelo menos um coagente, são ambos administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem. O termo "combinação não fixa" significa que pelo menos um dos compostos aqui descritos, e pelo menos um coagente, são administrados a um paciente como entidades separadas simultaneamente, concomitantemente ou sequencialmente com limites de tempo intervenientes variáveis, em que tal administração fornece níveis efeti-vos dos dois ou mais compostos no corpo do paciente. Estes também se aplicam a terapias de coquetel, por exemplo, a administração de três ou mais ingredientes ativos.
[0074] Os termos "coadministração", "administrado em combina ção com" e os seus equivalentes gramaticais ou similares, quando aqui usados, devem abranger a administração dos agentes terapêuticos selecionados a um único paciente, e destinam-se a incluir regimes de tratamento nos quais os agentes são administrados pela mesma ou diferente rotina de administração ou em tempos iguais ou diferentes. Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos serão coadmi- nistrados com outros agentes. Estes termos abrangem a administração de dois ou mais agentes a um animal de modo que ambos os agentes e/ou os seus metabólitos estejam presentes no animal ao mesmo tempo. Eles incluem a administração simultânea em composições separadas, administração em diferentes momentos em composições separadas e/ou administração em uma composição em que ambos os agentes estão presentes. Desse modo, em algumas modalidades, os compostos da invenção e o(s) outro(s) agente(s) são administrados em uma única composição.
[0075] O termo "metabólito", quando aqui usado, refere-se a um derivado de um composto que é formado quando o composto é meta- bolizado.
[0076] O termo "metabólito ativo", quando aqui usado, refere-se a um derivado biologicamente ativo de um composto que é formado quando o composto é metabolizado.
[0077] O termo "metabolizado", quando aqui usado, refere-se à soma dos processos (incluindo, porém, não limitados a, reações de hidrólise e reações catalisadas por enzimas) pelos quais uma substância particular é alterada por um organismo. Desse modo, as enzimas podem produzir alterações estruturais específicas a um composto. Por exemplo, o citocromo P450 catalisa uma variedade de reações oxidati- vas e redutoras enquanto que difosfato de uridina glicuroniltransfera- ses catalisa a transferência de uma molécula de ácido glicurônico ativada para alcoóis aromáticos, alcoóis alifáticos, ácidos carboxílicos, aminas e grupos sulfidrila livres. Mais informações sobre o metabolismo podem ser obtidas a partir de The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill (1996).
Novos Compostos
[0078] De acordo com as modalidades da invenção, novos com postos químicos incluem um composto de Fórmula I ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profár- maco dos mesmos.
[0079] Em algumas modalidades, R1 de Fórmula I é um anel de fenila opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes ou um anel de heteroarila de 5-6 membros opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes, em que o um ou mais grupos substituintes são independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em halogênio, -CF3, -CHF2, NH2, hidroxila, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, C1-C4 alcóxi linear, e C1-C4 alcóxi ramificado.
[0080] Em algumas modalidades, R2 é selecionado a partir do gru po consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear e C1-C4 alquila linear ramificada. Além disso, na Fórmula I, X é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH2-, -CH2CH2-, -CH2O-, -CH2NH-, -CH2N(C1- C4 alquil)-, -CH(F)-, -CF2-, -CH(Cl)-, -CH(OH)-, -CH(OCH3)-, -CH(NH2)- , ou -C(CH3)2-. Além disso, na Fórmula I, Q é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH=CR3C(O)NR4R5, -CH=CR3NR4C(O)R5, - CH=CR3NR4C(O)NR4R5, -CH=CR3R5, -C CC(O)NR4R5, - C CCR5, e
[0081] Em algumas modalidades, R3 é selecionado a partir do gru po consistindo em hidrogênio, halogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada.
[0082] Em algumas modalidades, -NR4R5 forma um anel heterocí- clico de 4-7 membros ou não forma uma estrutura de anel, o anel hete- rocíclico sendo anel de heteroarila ou de heterocicloalquila.
[0083] Em modalidades onde -NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros, o anel heterocíclico de 4-7 membros inclui um hete- roátomo secundário ideal além do nitrogênio de -NR4R5 e é opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em C1-C6 alquila linear, C1-C6 alquila ramificada, hidroxila, ácido carboxílico, ácido car- boxílico de C1-C4 alquila linear, e ácido carboxílico de C2-C4 alquila ramificada.
[0084] Em modalidades onde -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila, C1-C6 alquila ramificada opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila, e C1-C6 cicloalquila opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila.
[0085] Em algumas modalidades, Y1, Y2, Y3, e Y4 são cada qual independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em - CH, N, O, S, -CR6, e -NR6, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, anel de arila de 5-6 membros, anel de heteroarila de 5-6 membros, anel de heterocicloalquila de 3-7 membros, anel de cicloalquila de 3-7 membros, -NHCO-(anel de arila), e -CH2CO-(anel heterocíclico de C3-C6 membros).
[0086] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula I é um composto de Fórmula II, III ou IV:
[0087] Em algumas modalidades, alguns compostos de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos têm uma estrutura em que, Q é anel de heteroarila de 5-6 membros incluindo, porém, não são limitados às seguintes estruturas: e tautômeros daqueles anteriores.
[0088] Exemplos adicionais de Q incluem as seguintes estruturas:
[0089] Em certas modalidades, R5 é selecionado a partir de metila, etila, propila, isopropila, terc-butila, isobutila, -C(CH3)2CH2F, -CHCF2, CH2CHF2, CF3, CH2CF3 e CH(CH3)CF3.
[0090] Em certas modalidades, R5 é -(C1-C6)hidroxialquila ou [(C1-C6)alcóxi](C1-C6)alquil-. Exemplos incluem -CH2CH2OH, - CH2CH2CH2OH, -CH2CH2CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3, - C(CH3)2CH2OH, -CH2C(CH3)2OH, -CH(CH3)CH2OH, - CH2C(CH3)2CH2OH, -CH(CH2OH)CH(CH3)2, -CH(CH2CH3)CH2OH, - CH(CH2OH)C(CH3)3, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH3, - CH2CH2CH2CH2OCH3, -CH2CH(OCH3)CH3, -C(CH3)2CH2OCH3, - CH2C(CH3)2OCH3, -CH(CH3)CH2OCH3, -CH2C(CH3)2CH2OCH3, - CH(CH2OCH3)CH(CH3)2, -CH(CH2CH3)CH2OCH3, e - CH(CH2OCH3)C(CH3)3. Um exemplo particular é -CH2CH2OH ou CH2CH2OCH3.
[0091] Em uma modalidade, R5 é -(C1-C6)hidroxialquila ou [(C1- C6)alcóxi](C1-C6)alquil- e R4 é hidrogênio.
[0092] Em uma modalidade, R5 é -(C1-C6)hidroxialquila ou [(C1- C6)alcóxi](C1-C6)alquil- e R4 é -(C1-C6)alquila.
[0093] Em certas modalidades, R5 é -(C2-C6)di-hidroxialquila. Ex emplos incluem -CH2CH(OH)CH2OH, -C(CH3)(CH2OH)2, -CH(CH2OH)2 e -CH(CH2OH)(CHOHCH3). Exemplos particulares incluem - CH2CH(OH)CH2OH e -C(CH3)(CH2OH)2. Em uma modalidade, R5 é - (C2-C6)di-hidroxialquila e R4 é hidrogênio. Em uma modalidade, R5 é - (C2-C6)di-hidroxialquila e R4 é -(C1-C6)alquila.
[0094] Em certas modalidades, R5 é -O(C1-C6)alquila que é opci- onalmente substituída com OH ou (C1-C4)alcóxi, e R4 é hidrogênio. Exemplos de R5 incluem -OMe, -OEt, -OCH2CH2OH, - OCH2CH2CH2OH, -OCH2CH(OH)CH3, -OCH2C(CH3)2OH, OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2CH2OCH3, e -OCH2CH(OCH3)CH3.
[0095] Em certas modalidades, R5 é:
[0096] Em certas modalidades, R5 é:
[0097] Em certas modalidades, NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros tendo um átomo de nitrogênio no anel e opcionalmen- te tendo um heteroátomo no anel secundário selecionado a partir de N e O, em que o referido anel é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de (C1- C6)alquila, OH, COOH, e (C1-C3 alquil)COOH. Em certas modalidades, o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com um ou dois dos referidos substituintes. Exemplos particulares incluem, porém, não são limitados às seguintes estruturas:
[0098] Em algumas modalidades, R1 é fenila opcionalmente substi tuída com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de halogênio, (C1-C4)alcóxi, -CF3, -CHF2, -O(C1-C4 alquil), - (C1-C4)alquila e NH2, ou um anel de heteroarila de 5-6 membros tendo um heteroátomo no anel selecionado a partir de N e S, em que o referido anel de heteroarila é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de halogênio, - O(C1-C4 alquil), (C1-C4)alquila e NH2, ou um anel de pirid-2-on-3-ila opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de halogênio e (C1-C4)alquila. Exemplos particulares incluem, porém, não são limitados às seguintes estruturas:
[0099] Em modalidades, Fórmulas I, II, III, e IV incluem os com postos mostrados abaixo:
[00100] Onde os compostos descritos aqui têm pelo menos um centro quiral, eles podem existir como enantiômeros e diastereômeros in-dividuais ou como misturas de tais isômeros, incluindo racematos. A separação dos isômeros individuais ou síntese seletiva dos isômeros individuais é realizada por aplicação de vários métodos que são bem conhecidos pelos profissionais na técnica. A menos que de outra maneira indicado, todos os tais isômeros e misturas dos mesmos são incluídos no escopo dos compostos descritos aqui. Além disso, os compostos descritos aqui podem existir em uma ou mais formas cristalinas ou amorfas. A menos que de outra maneira indicado, todas as tais formas estão incluídas no escopo dos compostos descritos aqui incluindo quaisquer formas polimórficas. Além disso, alguns dos compostos descritos aqui podem formar solvatos com água (isto é, hidratos) ou solventes orgânicos comuns. A menos que de outra maneira indicado, tais solvatos são incluídos no escopo dos compostos descritos aqui.
[00101] O técnico versado reconhecerá que algumas estruturas descritas aqui podem ser formas de ressonância ou tautômeros de compostos que podem ser representados de maneira justa por outras estruturas químicas, mesmo quando cineticamente; o técnico reconhece que tais estruturas podem representar apenas uma porção muito pequena de uma amostra de tal(ais) composto(s). Tais compostos são considerados dentro do escopo das estruturas descritas, embora tais formas de ressonância ou tautômeros não estejam aqui representadas.
[00102] Os isótopos podem estar presentes nos compostos descri- tos. Cada elemento químico como representado em uma estrutura de composto pode incluir qualquer isótopo do referido elemento. Por exemplo, em uma estrutura de composto, um átomo de hidrogênio pode ser explicitamente revelado ou compreendido estar presente no composto. Em qualquer posição do composto que um átomo de hi-drogênio pode estar presente, o átomo de hidrogênio pode ser qualquer isótopo de hidrogênio, incluindo, porém, não limitado a hidrogê- nio-1 (protium) e hidrogênio-2 (deutério). Desse modo, a referência aqui a um composto abrange todas as formas isotópicas potenciais a menos que o contexto dite claramente o contrário.
Composições Farmacêuticas, Tratamento de Doenças, Adminis-tração
[00103] Os novos compostos descritos acima são inibidores de TrkA, TrkB e/ou TrkC e são úteis para tratar dor, cânceres e outras doenças hiperproliferativas. Em um aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica incluindo um ou mais dos compostos químicos de Fórmula I ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos, polimorfos, ésteres, tautômeros ou profármacos para uso no tratamento de dor, cânceres e outras doenças hiperproliferati- vas.
[00104] Em modalidades, a composição farmacêutica inclui uma quantidade efetiva de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos. Além disso, a composição farmacêutica também inclui um veículo farmaceuticamente aceitável, adjuvantes e/ou excipientes. Em algumas modalidades, uma tal composição pode conter pelo menos um dentre preservativos, agentes para retardar a absorção, cargas, aglutinantes, absorventes, tampões, agentes de desintegração, agentes de solubilização, e outros veículos, adjuvantes e/ou excipien- tes como ingredientes inertes. A composição pode ser formulada com um método bem conhecido na técnica.
[00105] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é em uma forma adequada para administração oral. Em outras ou modalidades adicionais, a composição farmacêutica é na forma de um comprimido, cápsula, pílula, pó, formulação de liberação prolongada, solução e suspensão. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é em uma forma adequada para injeção parenteral, tal como uma solução, suspensão ou emulsão estéril; para administração tópica como um unguento ou creme ou para administração retal como um supositório.
[00106] Em algumas modalidades, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada oralmente, intraduodenal- mente, parenteralmente (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou por infusão), topicamente ou retalmente. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é em uma forma adequada para administração oral. Em outras ou modalidades adicionais, a composição farmacêutica é na forma de um comprimido, cápsula, pílula, pó, formulações de liberação prolongada, solução e suspensão para administração oral, para injeção parenteral como uma solução, suspensão ou emulsão estéril, para administração tópica como um unguento ou creme, ou para administração retal como um supositório. Em outras ou modalidades adicionais, a composição farmacêutica é em formas de dosagem unitária adequadas para única administração de dosagens precisas. Em outras ou modalidades adicionais, a composição farmacêutica também compreende um veículo, excipien- te e/ou adjuvante farmacêutico.
[00107] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de administrar uma quantidade terapeuticamente efetiva da composição farmacêutica a um indivíduo para o tratamento de dor, inflamação, doenças neurodegenerativas, certas doenças infecciosas, câncer, ou- tras doenças hiperproliferativas ou condições moduladas pela cascata de Trk em um mamífero incluindo humano.
[00108] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para inibir uma enzima de Trk. O método compreende contatar a referida enzima de Trk com uma quantidade de uma composição compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos, suficiente para inibir a referida enzima, em que a referida enzima é inibida. Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método para seletivamente inibir uma enzima de Trk.
[00109] Em outro aspecto, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para inibir uma enzima de Trk.
[00110] Em modalidades, a enzima de Trk é Trk cinase. Em algumas modalidades, a enzima de Trk é TrkA. Em algumas modalidades, a enzima de Trk é TrkB. Em algumas modalidades, a enzima de Trk é TrkC.
[00111] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula I podem seletivamente inibir uma enzima de TrkA, enzima de TrkB ou enzima de TrkC. Em algumas outras modalidades, os compostos de Fórmula I podem não ter uma seletividade de enzima de TrkA, enzima de TrkB e enzima de TrkC.
[00112] Em algumas modalidades, o contato ocorre dentro de uma célula. Em outras ou modalidades adicionais, a célula é uma célula mamífera. Em outras ou modalidades adicionais, a célula mamífera é uma célula humana. Em outras ou modalidades adicionais, a enzima de Trk é inibida com uma composição compreendendo um sal farma- ceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I.
[00113] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método de tratamento de um transtorno mediado por Trk em um indivíduo sofrendo do referido transtorno compreendendo administrar ao referido indivíduo uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos.
[00114] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de um transtorno mediado por Trk.
[00115] Em outras ou modalidades adicionais, a composição farma-cêutica é em formas de dosagem unitária adequadas para única admi-nistração de dosagens precisas. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,001 a cerca de 1000 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg/kg de peso cor- poral/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,001 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,002 a cerca de 6 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,005 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,01 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,02 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,1 a cerca de 1 g/dia.
[00116] Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem abaixo de um limite inferior de uma faixa acima mencionada podem ser maiores do que os adequados. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem acima do limite superior da faixa acima mencionada podem ser requeridos. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em dose única, uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em múltiplas doses, mais de uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado duas vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado três vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado quatro vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado mais que quatro vezes por dia. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é para administração a um mamífero.
[00117] Em outras ou modalidades adicionais, a composição farma-cêutica também compreende pelo menos um agente terapêutico. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo consistindo em agentes citotóxicos, agentes antian- giogênese e agentes antineoplásicos.
[00118] Em outras ou modalidades adicionais, o agente antineoplá- sico é selecionado a partir do grupo consistindo em agentes de alqui- lação, antimetabólitos, epidofilotoxinas; enzimas antineoplásicas, inibidores de topoisomerase, procarbazinas, mitoxantronas, complexos de coordenação de platina, modificadores de resposta biológica e inibidores de crescimento, agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, e fatores de crescimento hematopoéticos. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é taxol, bortezomibe ou ambos. Em outras ou modalidades adicionais, a composição farmacêutica é admi-nistrada em combinação com uma terapia adicional. Em outras ou mo-dalidades adicionais, a terapia adicional é radioterapia, quimioterapia ou uma combinação de ambas. Em outras ou modalidades adicionais, a composição farmacêutica compreende um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I.
[00119] Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 1% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 2% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 3% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 4% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 5% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 10% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 20% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 25% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 30% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 40% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 50% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 60% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 7a% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 75% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 80% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é pelo menos cerca de 90% inibida. Em outras ou modalidades adicionais, uma enzima é essencialmente completamente inibida.
[00120] Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,001 a cerca de 1000 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adici-onais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,001 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,01 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,02 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,1 a cerca de 1 g/dia.
[00121] Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem abaixo de um limite inferior de uma faixa acima mencionada podem ser maiores do que os adequados. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem acima do limite superior da faixa acima mencionada podem ser requeridos. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em dose única, uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em múltiplas doses, mais de uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado duas vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado três vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado quatro vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado mais que quatro vezes por dia.
[00122] Em algumas modalidades, o indivíduo sofrendo do transtorno mediado por Trk é um mamífero. Em outras ou modalidades adicionais, o indivíduo é um humano. Em algumas modalidades, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com uma terapia adicional. Em outras ou modalidades adicionais, a terapia adicional é radioterapia, quimioterapia ou uma combinação de ambas. Em outras ou modalidades adicionais, a com-posição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com pelo menos um agente terapêutico. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo de agentes citotóxicos, agentes antiangiogênese e agentes anti- neoplásicos.
[00123] Em outras ou modalidades adicionais, o agente antineoplá- sico é selecionado a partir do grupo consistindo em agentes de alqui- lação, antimetabólitos, epidofilotoxinas; enzimas antineoplásicas, inibidores de topoisomerase, procarbazinas, mitoxantronas, complexos de coordenação de platina, modificadores de resposta biológica e inibidores de crescimento, agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, e fatores de crescimento hematopoéticos.
[00124] Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir de taxol, bortezomibe ou ambos. Em algumas modalidades, o transtorno mediado por Trk é selecionado a partir do grupo consistindo em doenças inflamatórias, infecções, transtornos autoimunes, acidente vascular cerebral, isquemia, transtorno cardíaco, transtornos neurológicos, transtornos fibrogênicos, transtornos prolife- rativos, transtornos hiperproliferativos, transtornos hiperproliferativos sem câncer, tumores, leucemias, neoplasmas, cânceres, carcinomas, doenças metabólicas, doença maligna, reestenose vascular, psoríase, aterosclerose, artrite reumatoide, osteoartrite, insuficiência cardíaca, dor crônica, dor neuropática, olho seco, glaucoma de ângulo fechado e glaucoma de ângulo amplo.
[00125] Em outras ou modalidades adicionais, o transtorno mediado por Trk é uma doença inflamatória. Em outras ou modalidades adicionais, o transtorno mediado por Trk é uma doença hiperproliferativa. Em outras ou modalidades adicionais, o transtorno mediado por Trk é selecionado a partir do grupo consistindo em tumores, leucemias, ne-oplasmas, cânceres, carcinomas e doença maligna. Em outras ou mo-dalidades adicionais, o câncer é câncer cerebral, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer renal, câncer colorretal ou leucemia. Em outras ou modalidades adicionais, o transtorno fibrogenético é escleroderma, polimiosite, lúpus sistêmico, artrite reumatoide, cirrose hepática, for-mação de queloide, nefrite intersticial ou fibrose pulmonar. Em outras ou modalidades adicionais, uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I é administrada.
[00126] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método para degradar, inibir o crescimento de ou exterminar uma célula cancerosa compreendendo contatar a referida célula com uma quantidade de uma composição efetiva para degradar, inibir o crescimento de ou exterminar a referida célula, a composição com-preendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos.
[00127] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para degradar e/ou inibir o crescimento de ou exterminar uma célula cancerosa.
[00128] Em algumas modalidades, as células cancerosas compreendem células de câncer cerebral, mama, pulmão, ovariano, pancreá- tico, próstata, renal ou colorretal. Em outras ou modalidades adicionais, a composição é administrada com pelo menos um agente tera- pêutico. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é taxol, bortezomibe ou ambos. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo consistindo em agentes citotóxicos, agentes antiangiogênese e agentes antineoplási- cos. Em outras ou modalidades adicionais, os agentes antineoplásicos selecionados a partir do grupo consistindo em agentes de alquilação, antimetabólitos, epidofilotoxinas; enzimas antineoplásicas, inibidores de topoisomerase, procarbazinas, mitoxantronas, complexos de coor-denação de platina, modificadores de resposta biológica e inibidores de crescimento, agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, e fatores de crescimento hematopoéticos.
[00129] Em algumas modalidades, as células cancerosas são de gradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 1% das células can-cerosas é degradada. Em outras ou modalidades adicionais, 2% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adici-onais, 3% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou mo-dalidades adicionais, 4% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 5% das células cancerosas são de-gradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 10% das células can-cerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 20% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 25% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 30% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 40% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 50% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 60% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 70% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 75% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 80% das célu- las cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 90% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, 100% das células cancerosas são degradadas. Em outras ou modalidades adicionais, essencialmente todas as células cancerosas são degradadas.
[00130] Em algumas modalidades, as células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 1% das células cancerosas é morta. Em outras ou modalidades adicionais, 2% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 3% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 4% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 5% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 10% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 20% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 25% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 30% das células cance-rosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 40% das cé-lulas cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 50% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 60% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 70% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 75% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 80% das células cance-rosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 90% das cé-lulas cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, 100% das células cancerosas são mortas. Em outras ou modalidades adicionais, essencialmente todas as células cancerosas são mortas.
[00131] Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 1% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 2% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 3% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 4% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 5% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 10% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 20% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 25% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 30% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 40% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 50% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 60% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 70% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o cres-cimento das células cancerosas é cerca de 75% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 80% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 90% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, o crescimento das células cancerosas é cerca de 100% inibido. Em outras ou modalidades adicionais, uma composição compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I é usada.
[00132] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método para o tratamento ou profilaxia de uma doença pro- liferativa em um indivíduo compreendendo administrar ao referido indivíduo uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solva- to, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos.
[00133] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento ou profilaxia de uma doença proliferativa.
[00134] Em algumas modalidades, a doença proliferativa é câncer, psoríase, reestenose, doença autoimune, ou aterosclerose. Em outras ou modalidades adicionais, a doença proliferativa é uma doença hiper- proliferativa. Em outras ou modalidades adicionais, a doença prolifera- tiva é selecionada a partir do grupo consistindo em tumores, leucemias, neoplasmas, cânceres, carcinomas e doença maligna. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer cerebral, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer renal, câncer colorretal ou leucemia. Em outras ou modalidades adicionais, o transtorno fibrogenético é escleroderma, polimiosite, lúpus sistêmico, artrite reumatoide, cirrose hepática, for-mação de queloide, nefrite intersticial ou fibrose pulmonar. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer cerebral, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer renal, câncer colorretal ou leucemia. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer cerebral ou carcinoma adrenocortical. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer de mama. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer ovariano. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer pancreático. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer de próstata. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer renal. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer colorre- tal. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é leucemia mieloi- de. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é glioblastoma. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é linfoma folicular. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é leucemia aguda pré-B. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é leucemia B linfocítica crônica. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é mesotelio- ma. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer de linhagem de células pequenas.
[00135] Em algumas modalidades, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com uma terapia adicional. Em outras ou modalidades adicionais, a terapia adicional é radioterapia, quimioterapia ou uma combinação de ambas. Em outras ou modalidades adicionais, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com pelo menos um agente terapêutico. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo de agentes citotóxi- cos, agentes antiangiogênese e agentes antineoplásicos. Em outras ou modalidades adicionais, o agente antineoplásico é selecionado a partir do grupo consistindo em agentes de alquilação, antimetabólitos, epidofilotoxinas; enzimas antineoplásicas, inibidores de topoisomerase, procarbazinas, mitoxantronas, complexos de coordenação de platina, modificadores de resposta biológica e inibidores de crescimento, agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, e fatores de crescimento hematopoéticos. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir de taxol, bortezomibe ou ambos. Em algumas modalidades, a composição é administrada oralmente, intraduodenalmente, parenteralmente (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou por infusão), topicamente ou retalmente.
[00136] Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,001 a cerca de 1000 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adici-onais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,001 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,01 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,02 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,1 a cerca de 1 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem abaixo de um limite inferior de uma faixa acima mencionada podem ser maiores do que os adequados. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem acima do limite superior da faixa acima mencionada podem ser requeridos.
[00137] Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em dose única, uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em múltiplas doses, mais de uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado duas vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado três vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado quatro vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado mais que quatro vezes por dia. Em algumas modalidades, o indivíduo sofrendo da doença proliferativa é um mamífero. Em outras ou modalidades adicionais, o indivíduo é um humano. Em outras ou modalidades adicionais, uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I é administrada.
[00138] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método para o tratamento ou profilaxia de uma doença inflamatória em um indivíduo compreendendo administrar ao referido indivíduo uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos.
[00139] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento ou profilaxia de uma doença inflamatória.
[00140] Em outras ou modalidades adicionais, a doença inflamatória é selecionada a partir de doenças inflamatórias crônicas, artrite reumatoide, espondiloartropatias, artrite gotosa, osteoartrite, artrite ju-venil, artrite reumática aguda, artrite enteropática, artrite neuropática, artrite psoriática, artrite piogênica, aterosclerose, lúpus eritematoso sistêmico, doença intestinal inflamatória, síndrome do intestino irritável, colite ulcerativa, esofagite de refluxo, doença de Crohn, gastrite, asma, alergias, síndrome da angústia respiratória, pancreatite, doença pul-monar obstrutiva crônica, fibrose pulmonar, psoríase, eczema ou es-cleroderma. Em algumas modalidades, a composição compreendendo um composto de Fórmula é administrada em combinação com uma terapia adicional. Em outras ou modalidades adicionais, a composição compreendendo um composto de Fórmula é administrada em combinação com pelo menos um agente terapêutico. Em algumas modalidades, a composição é administrada oralmente, intraduodenalmente, pa- renteralmente (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intra-vascular ou por infusão), topicamente ou retalmente.
[00141] Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,001 a cerca de 1000 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,001 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,01 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,02 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,1 a cerca de 1 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem abaixo de um limite inferior de uma faixa acima mencionada podem ser maiores do que os adequados. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem acima do limite superior da faixa acima mencionada podem ser requeridos.
[00142] Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em dose única, uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em múltiplas doses, mais de uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado duas vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado três vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado quatro vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado mais que quatro vezes por dia. Em algumas modalidades, o indivíduo sofrendo da doença inflamatória é um mamífero. Em outras ou modalidades adicionais, o indivíduo é um humano. Em outras ou modalidades adicionais, uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I é administrada.
[00143] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método para o tratamento ou profilaxia de câncer em um indivíduo compreendendo administrar ao referido indivíduo uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos.
[00144] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento ou profilaxia de um câncer.
[00145] Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer cerebral, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer renal, câncer colorretal ou leu-cemia. Em outras ou modalidades adicionais, o transtorno fibrogenéti- co é escleroderma, polimiosite, lúpus sistêmico, artrite reumatoide, cirrose hepática, formação de queloide, nefrite intersticial ou fibrose pulmonar. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer cerebral, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer renal, câncer colorretal ou leucemia. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer cerebral ou carcinoma adrenocortical. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer de mama. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer ovariano. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer pancreático. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer de próstata. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer renal. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer colorretal. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é leucemia mieloide. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é glioblastoma. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é linfoma folicular. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é leucemia aguda pré-B. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é leucemia B linfocítica crônica. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é mesotelioma. Em outras ou modalidades adicionais, o câncer é câncer de linhagem de células pequenas.
[00146] Em algumas modalidades, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com uma terapia adicional. Em outras ou modalidades adicionais, a terapia adicional é radioterapia, quimioterapia ou uma combinação de ambas. Em outras ou modalidades adicionais, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com pelo menos um agente terapêutico. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo de agentes citotóxi- cos, agentes antiangiogênese e agentes antineoplásicos. Em outras ou modalidades adicionais, o agente antineoplásico é selecionado a partir do grupo consistindo em agentes de alquilação, antimetabólitos, epidofilotoxinas; enzimas antineoplásicas, inibidores de topoisomerase, procarbazinas, mitoxantronas, complexos de coordenação de platina, modificadores de resposta biológica e inibidores de crescimento, agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, e fatores de crescimento hematopoéticos. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir de taxol, bortezomibe ou ambos. Em algumas modalidades, a composição é administrada oralmente, intraduodenalmente, parenteralmente (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou por infusão), topicamente ou retalmente.
[00147] Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,001 a cerca de 1000 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adici-onais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,001 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,01 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,02 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,1 a cerca de 1 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem abaixo de um limite inferior de uma faixa acima mencionada podem ser maiores do que os adequados. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem acima do limite superior da faixa acima mencionada podem ser requeridos.
[00148] Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em dose única, uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em múltiplas doses, mais de uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado duas vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado três vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado quatro vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado mais que quatro vezes por dia. Em algumas modalidades, o indivíduo sofrendo de câncer é um mamífero. Em outras ou modalidades adicionais, o indivíduo é um humano. Em outras ou modalidades adicionais, uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I é administrada.
[00149] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método de reduzir o tamanho de um tumor, inibir o aumento do tamanho do tumor, reduzir a proliferação do tumor ou prevenir a proliferação do tumor em um indivíduo, compreendendo administrar ao referido indivíduo uma quantidade efetiva de uma composição com-preendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos.
[00150] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para reduzir o tamanho de um tumor, inibir o aumento do tamanho do tumor, reduzir a proliferação do tumor ou prevenir a proliferação do tumor.
[00151] Em algumas modalidades, o tamanho de um tumor é reduzido. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 1%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 2%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 3%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 4%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 5%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 10%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 20%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 25%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 30%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 40%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 50%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 60%. Em outras ou modalidades adi-cionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 70%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 75%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 80%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 85%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 90%. Em outras ou modalidades adicionais, o tamanho de um tumor é reduzido por pelo menos 95%. Em outras ou modalidades adicionais, o tumor é erradicado. Em algumas modalidades, o tamanho de um tumor não aumenta.
[00152] Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 1%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 2%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 3%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 4%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 5%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 10%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 20%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 25%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 30%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 40%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 50%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 60%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 70%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 75%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 80%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 90%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é reduzida por pelo menos 95%. Em algumas modalidades, a proliferação do tumor é prevenida.
[00153] Em algumas modalidades, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com uma terapia adicional. Em outras ou modalidades adicionais, a terapia adicional é radioterapia, quimioterapia ou uma combinação de ambas. Em outras ou modalidades adicionais, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com pelo menos um agente terapêutico. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir do grupo de agentes citotóxi- cos, agentes antiangiogênese e agentes antineoplásicos.
[00154] Em outras ou modalidades adicionais, o agente antineoplá- sico é selecionado a partir do grupo consistindo em agentes de alqui- lação, antimetabólitos, epidofilotoxinas; enzimas antineoplásicas, inibidores de topoisomerase, procarbazinas, mitoxantronas, complexos de coordenação de platina, modificadores de resposta biológica e inibidores de crescimento, agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, e fatores de crescimento hematopoéticos. Em outras ou modalidades adicionais, o agente terapêutico é selecionado a partir de taxol, borte- zomibe ou ambos. Em algumas modalidades, a composição é adminis-trada oralmente, intraduodenalmente, parenteralmente (incluindo intra-venosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou por infusão), topi-camente ou retalmente.
[00155] Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,001 a cerca de 1000 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adici-onais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,001 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,01 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,02 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,1 a cerca de 1 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem abaixo de um limite inferior de uma faixa acima mencionada podem ser maiores do que os adequados. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem acima do limite superior da faixa acima mencionada podem ser requeridos.
[00156] Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em dose única, uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em múltiplas doses, mais de uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado duas vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado três vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado quatro vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado mais que quatro vezes por dia. Em algumas modalidades, o indivíduo sofrendo de câncer é um mamífero. Em outras ou modalidades adicionais, o indivíduo é um humano. Em outras ou modalidades adicionais, uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I é administrada.
[00157] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada a um método para obter um efeito em um paciente compreendendo a administração de uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos, a um paciente, em que o efeito é selecionado a partir do grupo consistindo na inibição de vários cânceres, doenças imunológi- cas, e doenças inflamatórias. Em algumas modalidades, o efeito é a inibição de vários cânceres. Em outras ou modalidades adicionais, o efeito é a inibição de doenças imunológicas. Em outras ou modalidades adicionais, o efeito é a inibição de doenças inflamatórias.
[00158] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcionada ao uso de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos em uma preparação de uma composição farmacêutica para a inibição de vários cânceres, doenças imunológicas, e/ou doenças inflamatórias.
[00159] Em algumas modalidades, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com uma terapia adicional. Em outras ou modalidades adicionais, a terapia adicional é radioterapia, quimioterapia ou uma combinação de ambas. Em outras ou modalidades adicionais, a composição compreendendo um composto de Fórmula I é administrada em combinação com pelo menos um agente terapêutico. Em algumas modalidades, a composição é administrada oralmente, intraduodenalmente, parenteralmente (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou por infusão), topicamente ou retalmente.
[00160] Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,001 a cerca de 1000 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adici-onais, a quantidade de composto de Fórmula I está em uma faixa de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,001 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,01 a cerca de 7 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,02 a cerca de 5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, a quantidade de composto de Fórmula I é cerca de 0,1 a cerca de 1 g/dia. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem abaixo de um limite inferior de uma faixa acima mencionada podem ser maiores do que os adequados. Em outras ou modalidades adicionais, os níveis de dosagem acima do limite superior da faixa acima mencionada podem ser requeridos.
[00161] Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em dose única, uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado em múltiplas doses, mais de uma vez por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado duas vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado três vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado quatro vezes por dia. Em outras ou modalidades adicionais, o composto de Fórmula I é administrado mais que quatro vezes por dia. Em algumas modalidades, o indivíduo sofrendo de câncer é um mamífero. Em outras ou modalidades adicionais, o indivíduo é um humano. Em outras ou modalidades adicionais, uma quantidade efetiva de uma composição compreendendo um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de Fórmula I é administrada.
[00162] Em algumas modalidades, a presente invenção é direcio- nada a um processo para preparar um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo, éster, tautômero ou profármaco dos mesmos. Preparação dos compostos de Fórmula I
[00163] O esquema anterior fornece as retinas sintéticas para os compostos de Fórmula I, II, e IV. O composto intermediário principal 3 pode ser obtido por meio da reação de acoplamento de composto de amina cíclica com o composto heterocíclico bicíclico 1 contendo vários grupos funcionais Q. As várias porções heterocíclicas de cinco membros nos compostos de Fórmula I são introduzidas por meio da reação de acoplamento, condensação ou reações de ciclização do composto 3. Os compostos de Fórmula II podem ser preparados do composto 3 contendo a porção de aldeído pela reação de HEW, hidrólise seguida por reação de acoplamento de amida. No caso da Fórmula IV, a reação de Sonogashira com composto de iodo 3 proporcionou os compostos desejados. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS Os espectros de RMN foram registrados em CDCl3 e solução de DMSO-d6 em tubos o.d. de 5 mm (Norell, Inc. 507-HP) a 30 °C e foram coletados em Varian VNMRS- 400 a 400 MHz para 1H. Os desvios químicos (δ) são relativos a tetra- metilsilano (TMS = 0,00 ppm) e expressos em ppm. LC/MS foi adotada em Espectrômetro de Massa de armadilha de íons em FINNIGAN Thermo LCQ Advantage MAX, Agilent LC série 1200 (Coluna : YMC Hidrosfere (C18, 04,6 x 50 mm, 3 μm, 120 A, 40 °C) operando em modo de ionização de ESI(+); taxa de fluxo = 1,0 mL/min. Fase móvel = 0,01 % de ácido heptafluorobutírico (HFBA) e 1,0 % de álcool iso- propílico (IPA) em água ou CH3CN. Exemplo 1: Preparação do Composto Intermediário 1 Legenda: to r.t. = em temperatura ambiente Composto Intermediário 1: 3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina Etapa A: terc-butil 2-oxopirrolidina-1-carboxilato
[00165] A uma solução de pirrolidin-2-ona (10,0 g, 118 mmol) em CH3CN (118 mL) foram adicionados TEA (19,6 mL, 141 mmol), DMAP (7,18 g, 58,8 mmol) e (t-Boc)2O (32,7 mL, 141 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e em seguida dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica separada foi lavada com HCl aq. a 1 N, NaOH aq. a 1 N e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar terc-butil 2-oxopirrolidina-1-carboxilato (21,0 g, 96 %) como um óleo amarelo pálido. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,53 (9H, s), 2,00 (2H, quint, J = 8,0 Hz), 2,52 (2H, t, J = 8,0 Hz), 3,75 (2H, t, J = 7,6 Hz). Etapa B: terc-butil 4-(5-fluoropiridin-3-il)-4-oxobutilcarbamato
[00166] A uma solução de 3-bromo-5-fluoropiridina (4,26 g, 24,2 mmol) em THF seco (25 mL) foi adicionado cloreto de isopropilmagné- sio (2,0 M em THF, 14,5 mL, 29,0 mmol) a -78 °C. A mistura foi lentamente aquecida a 0 °C, agitada durante 1 hora a 0 °C e em seguida resfriada a -78 °C. Depois da adição de uma solução de terc-butil 2- oxopirrolidina-1-carboxilato (5,38 g, 29,0 mmol) em THF seco (10 mL) a -78 °C, a mistura reacional foi permitida aquecer em temperatura ambiente, agitada em temperatura ambiente durante 2 horas e extinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtO- Ac = 2 : 1 a 1 : 1) para proporcionar terc-butil 4-(5-fluoropiridin-3-il)-4- oxobutilcarbamato (4,73 g, 69 %) como um óleo amarelo. Etapa C: 3-(3,4-di-hidro-2H-pirrol-5-il)-5-fluoropiridina
[00167] A uma solução de terc-butil 4-(5-fluoropiridin-3-il)-4- oxobutilcarbamato (4,73 g, 16,7 mmol) em DCM (17 mL) foi adicionado TFA (6,45 mL, 84 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas e em seguida concentrada em vácuo. O resíduo foi diluído com EtOAc, lavado com NaHCO3 aq. satu-rado, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo para pro-porcionar 3-(3,4-di-hidro-2H-pirrol-5-il)-5-fluoropiridina (1,83 g, 66,5 %) como um sólido amarelo, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,10 (2H, quint, J = 8,0 Hz), 2,96 (2H, t, J = 8,4 Hz), 4,10 (2H, t, J = 7,6 Hz), 7,94 (1H, d, J = 9,2 Hz), 8,53 (1H, d, J = 2,4 Hz), 8,79 (1H, s). Etapa D: 3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina
[00168] A uma solução de 3-(3,4-di-hidro-2H-pirrol-5-il)-5- fluoropiridina (1,83 g, 11,1 mmol) em MeOH (16 mL) e água (4,0 mL) foi adicionado em porções boro-hidreto de sódio (0,843 g, 22,3 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente e em seguida extinguida com HCl aq. a 2 N. Depois da eva-poração de MeOH, o resíduo foi basificado com NaOH aq. a 1 N e ex-traído com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para pro-porcionar 3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina (1,62 g, 87 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,60-1,69 (1H, m), 1,81-1,98 (3H, m), 2,20-2,29 (1H, m), 3,03-3,10 (1H, m), 3,15-3,20 (1H, m), 4,22 (1H, t, J = 7,6 Hz), 7,49 (1H, d, J = 10,0 Hz), 8,32 (1H, d, J = 2,4 Hz), 8,40 (1H, s). Exemplo 2: Preparação do Composto Intermediário 2 Legenda: to r.t. = em temperatura ambiente Composto Intermediário 2: 2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina Etapa A: terc-butil 4-(2,5-difluorofenil)-4-oxobutilcarbamato
[00169] A uma solução de 2-bromo-1,4-difluorobenzeno (5,81 mL, 51,8 mmol) em THF seco (50 mL) foi adicionado cloreto de isopropil- magnésio (2,0 M em THF, 31,1 mL, 62,2 mmol) a -78 °C. A mistura foi lentamente aquecida a 0 °C, agitada durante 1 hora nessa temperatura e em seguida resfriada a -78 °C novamente. Depois da adição de uma solução de terc-butil 2-oxopirrolidina-1-carboxilato (11,5 g, 62,2 mmol) em THF seco (20 mL) a -78 °C, a mistura reacional foi permitida aquecer em temperatura ambiente com agitação durante 2 horas e extinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar terc-butil 4-(2,5-difluorofenil)-4-oxobutilcarbamato (15,5 g, 100 %) como um óleo verde pálido, que foi usado para a próxima rea- ção sem outra purificação. Etapa B: 5-(2,5-difluorofenil)-3,4-di-hidro-2H-pirrol
[00170] A uma solução de terc-butil 4-(2,5-difluorofenil)-4- oxobutilcarbamato (15,5 g, 51,8 mmol) em DCM (52 mL) foi adicionado TFA (19,9 mL, 259 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas e em seguida concentrada em vácuo. O resíduo foi diluído com EtOAc, lavado com NaHCO3 aq. satu-rado, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo para pro-porcionar 5-(2,5-difluorofenil)-3,4-di-hidro-2H-pirrol (6,17 g, 65,8 %) como um óleo avermelhado, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,00-2,08 (2H, m), 2,97-3,02 (2H, m), 3,99-4,04 (2H, m), 7,04-7,08 (2H, m), 7,64-7,68 (1H, m). Etapa C: 2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina
[00171] A uma solução de 5-(2,5-difluorofenil)-3,4-di-hidro-2H-pirrol (6,17 g, 34,1 mmol) em MeOH (60 mL) e água (15 mL) foi adicionado em porções boro-hidreto de sódio (2,58 g, 68,1 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente e em seguida extinguida com HCl aq. a 2 N. Depois da evaporação de MeOH, o resíduo foi basificado com NaOH aq. a 1 N e extraído com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar 2- (2,5-difluorofenil)pirrolidina (5,94 g, 95 %) como um óleo amarelo. 1H- RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,56-1,65 (1H, m), 1,78-1,94 (3H, m), 2,21-2,30 (1H, m), 3,01-3,08 (1H, m), 3,13-3,18 (1H, m), 4,40 (1H, t, J = 7,2 Hz), 6,82-6,88 (1H, m), 6,91-6,97 (1H, m), 7,22-7,26 (1H, m). Exemplo 3: Preparação do Composto Intermediário 3 Legenda: to r.t. = em temperatura ambiente Composto Intermediário 3: 5-fluoro-2-metóxi-3-(pirrolidin-2-il)piridina Etapa A: 2-(but-3-inil)isoindolina-1,3-diona
[00172] A uma solução de ftalimida (10,0 g, 68,0 mmol), but-3-in-1- ol (5,24 g, 74,8 mmol) e trifenilfosfina (19,6 g, 74,8 mmol) em tolueno (136 mL) foi lentamente adicionado DIAD (15,8 mL, 82,0 mmol) a 0 °C durante 10 min. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Depois da adição de MeOH (50 mL), a mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e lavado com MeOH. O filtrado foi concentrado em vácuo e um sólido residual foi triturado com MeOH e coletado por filtração para proporcionar 2-(but-3-inil)isoindolina-1,3-diona (10,9 g, 81 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 2,52 (2H, dt, J = 7,2, 2,4 Hz), 2,78-2,80 (1H, m), 3,68 (2H, t, J = 6,8 Hz), 7,80-7,86 (4H, m). Etapa B: 2-(4-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)but-3-inil)isoindolina-1,3- diona
[00173] Uma solução de 3-bromo-5-fluoro-2-metoxipiridina (4,00 g, 19,4 mmol), 2-(but-3-inil)isoindolina-1,3-diona (3,87 g, 19,4 mmol) e TEA (10,8 mL, 78 mmol) em DMF (40 mL) foi desgaseificada com ar- gônio. Depois da adição de Pd(PPh3)4 (1,12 g, 0,971 mmol) e CuI (0,370 g, 1,94 mmol), a mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 2 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da adição de MeOH, um sólido precipitado foi coletado por filtração. O sólido foi lavado com MeOH e secado sob vácuo para proporcionar 2-(4-(5-fluoro- 2-metoxipiridin-3-il)but-3-inil)isoindolina-1,3-diona (5,80 g, 92 %) como um sólido macio branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,90 (2H, t, J = 6,8 Hz), 3,85 (3H, s), 3,99 (2H, t, J = 6,8 Hz), 7,34 (1H, dd, J = 7,6, 2,4 Hz), 7,73-7,75 (2H, m), 7,87-7,89 (3H, m). Etapa C: 4-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)but-3-in-1-amina
[00174] A uma solução de 2-(4-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)but-3- inil)isoindolina-1,3-diona (6,44 g, 19,8 mmol) em MeOH (20 mL) e DCM (100 mL) foi adicionado hidrazina (1,39 mL, 29,8 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas, ao mesmo tempo que um insolúvel sólido foi observado. O sólido foi filtrado e lavado com DCM. O filtrado foi la- vado com água. A camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concen-tradas em vácuo para proporcionar 4-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)but- 3-in-1-amina (3,86 g, 100 %) como um sólido amarelo, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,41 (2H, br. s), 2,61 (2H, t, J = 6,4 Hz), 2,95 (2H, t, J = 6,4 Hz), 3,97 (3H, s), 7,40 (1H, dd, J = 8,0, 2,8 Hz), 7,92 (1H, d, J = 2,8 Hz). Etapa D: 3-(3,4-di-hidro-2H-pirrol-5-il)-5-fluoro-2-metoxipiridina
[00175] Uma mistura de 4-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)but-3-in-1- amina (3,86 g, 19,8 mmol) e PdCl2 (35,0 mg, 0,199 mmol) em CH3CN (50 mL) e água (17 mL) foi aquecida a 80 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dividido entre DCM e água. A camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 5 : 1 a 3 : 1) para proporcionar 3-(3,4-di-hidro-2H-pirrol-5-il)-5-fluoro-2- metoxipiridina (2,10 g, 54 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,01 (2H, quint, J = 7,6 Hz), 3,01 (2H, t, J = 7,6 Hz), 3,97 (3H, s), 3,99 (2H, t, J = 7,6 Hz), 7,92 (1H, dd, J = 8,4, 2,8 Hz), 8,04 (1H, d, J = 2,8 Hz). Etapa E: 5-fluoro-2-metóxi-3-(pirrolidin-2-il)piridina
[00176] A uma dispersão de 3-(3,4-di-hidro-2H-pirrol-5-il)-5-fluoro-2- metoxipiridina (500 mg, 2,57 mmol) em MeOH (10 mL) e água (2,5 mL) foi adicionado em porções boro-hidreto de sódio (195 mg, 5,15 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente e em seguida extinguida com HCl aq. a 2 N. Depois da eva-poração de MeOH, a mistura foi basificada com NaOH aq. a 1 N e ex-traída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para pro-porcionar 5-fluoro-2-metóxi-3-(pirrolidin-2-il)piridina (437 mg, 87 %) como um óleo amarelo, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,50-1,59 (1H, m), 1,79-1,87 (2H, m), 1,93 (1H, br. s), 2,20-2,28 (1H, m), 3,01-3,15 (2H, m), 3,93 (3H, s), 4,29 (1H, t, J = 7,6 Hz), 7,57 (1H, dd, J = 8,8, 3,2 Hz), 7,83 (1H, d, J = 3,2 Hz). Exemplo 4: Preparação do Composto Intermediário 4 Legenda: to r.t. = em temperatura ambiente Composto Intermediário 4: (R)-3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina Etapa A: 4-cloro-N-metóxi-N-metilbutanamida
[00177] A uma solução de cloreto de 4-clorobutanoíla (50,0 g, 355 mmol) e N-MeO-N-Metil amina HCl (34,6 g, 355 mmol) em DCM (709 mL) foi lentamente adicionado TEA (109 mL, 780 mmol) a 0 °C durante 30 minutos. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 3 horas e em seguida tratada com água (250 mL). A camada orgânica separada foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar 4-cloro-N-metóxi-N-metilbutanamida (55,0 g, 94 %) como óleo amarelo, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,12 (2H, quint, J = 6,4 Hz), 2,63 (2H, t, J = 7,2 Hz), 3,19 (3H, s), 3,64 (2H, t, J = 6,4 Hz), 3,71 (3H, s). Etapa B: 4-cloro-1-(5-fluoropiridin-3-il)butan-1-ona
[00178] A uma solução de 3-bromo-5-fluoropiridina (30,0 g, 170 mmol) em THF seco (170 mL) foi adicionado cloreto de isopropilmag- nésio (2,0 M em THF, 102 mL, 205 mmol) a -78 °C. A mistura foi lentamente aquecida a 0 °C, agitada durante 1 hora nessa temperatura e em seguida resfriada a -78 °C novamente. Depois da adição de uma solução de 4-cloro-N-metóxi-N-metilbutanamida (31,1 g, 188 mmol) em THF seco (100 mL), a mistura reacional foi permitida aquecer em temperatura ambiente com agitação durante 4 horas e extinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 7 : 1 a 6 : 1) para proporcionar 4-cloro-1-(5-fluoropiridin-3-il)butan-1-ona (25,1 g, 125 mmol, 73 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 2,27 (2H, quint, J = 6,4 Hz), 3,22 (2H, t, J = 6,8 Hz), 3,70 (2H, t, J = 6,4 Hz), 7,93-7,97 (1H, m), 8,68 (1H, d, J = 3,2 Hz), 9,03 (1H, t, J = 1,6 Hz). Etapa C: (S,Z)-N-(4-cloro-1-(5-fluoropiridin-3-il)butilideno)-2-metilpropano-2-sulfin-amida.
[00179] Uma solução de 4-cloro-1-(5-fluoropiridin-3-il)butan-1-ona (25,1 g, 125 mmol), (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida (22,6 g, 187 mmol) e tetraetoxititânio (42,6 g, 187 mmol) em THF (249 mL) foi aquecida a 75 °C durante 48 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da adição de EtOAc (100 mL) e salmoura (100 mL), a mistura resultante foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Um sólido precipitado foi filtrado e lavado com EtOAc. O filtrado foi lavado com água duas vezes, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 3 : 1 a 2 : 1) para proporcionar (S,Z)-N- (4-cloro-1-(5-fluoropiridin-3-il)butilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (30,0 g, 79 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,35 (9H, s), 2,09-2,26 (2H, m), 3,31-3,38 (1H, m), 3,44-3,51 (1H, m), 3,62-3,71 (2H, m), 7,87 (1H, d, J = 9,2 Hz), 8,59 (1H, d, J = 2,8 Hz), 8,92 (1H, s). Etapa D: 3-((R)-1-((S)-terc-butilsulfinil)-pirrolidin-2-il)-5-fluoropiridina
[00180] A uma solução de (S,Z)-N-(4-cloro-1-(5-fluoropiridin-3- il)butilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (10,0 g, 32,8 mmol) em THF seco (131 mL) foi adicionado Super hidreto (1 M em THF, 36,1 mL, 36,1 mmol) a -78 °C. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 1 hora, aquecida em temperatura ambiente e agitada durante 12 horas em temperatura ambiente. Depois de ser extinguida com NH4Cl aq. saturado, a mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1 a 1:2 a 1:3 a EtOAc) para proporcionar 3-((R)-1-((S)-terc-butilsulfinil)-pirrolidin-2-il)- 5-fluoropiridina (3,73 g, 42 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,13 (9H, s), 1,75-1,79 (1H, m), 1,79-2,04 (2H, m), 2,28-2,36 (1H, m), 2,97-3,03 (1H, m), 3,90-3,95 (1H, m), 4,71 (1H, t, J = 7,2 Hz), 7,33-7,36 (1H, m), 8,38-8,39 (2H, m). Etapa E: (R)-3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina
[00181] A uma solução de 3-((R)-1-((S)-terc-butilsulfinil)-pirrolidin-2- il)-5-fluoropiridina (7,47 g, 27,6 mmol) em MeOH (55 mL) foi adicionado HCl (4 M em dioxano, 34,5 mL, 138 mmol) a 0 °C. A mistura reaci- onal foi agitada durante 12 horas em temperatura ambiente. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dissolvido em água (100 mL) e lavado com EtOAc (100 mL). A camada aquosa separada foi neutralizada com NaOH aq. a 1 N (150 mL), extraída com DCM (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar (R)-3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina (4,35 g, 95 %) como um óleo avermelhado. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,60-1,69 (1H, m), 1,83-1,97 (3H, m), 2,20-2,29 (1H, m), 3,04-3,10 (1H, m), 3,15-3,21 (1H, m), 4,23 (1H, t, J = 7,6 Hz), 7,47-7,51 (1H, m), 8,33 (1H, d, J = 2,8 Hz), 8,40 (1H, s). Exemplo 5: Preparação do Composto Intermediário 5 Legenda: to r.t. = em temperatura ambiente Composto Intermediário 5: (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina Etapa A: 4-cloro-1-(2,5-difluorofenil)butan-1-ona
[00182] A uma solução de 2-bromo-1,4-difluorobenzeno (30,0 g, 155 mmol) em THF seco (155 mL) foi adicionado cloreto de isopropil- magnésio (2 M em THF, 93,0 mL, 187 mmol) a -78 °C. A mistura foi lentamente aquecida a 0 °C, agitada durante 1 hora nessa temperatura e em seguida resfriada a -78 °C novamente. Depois da adição de uma solução de 4-cloro-N-metóxi-N-metilbutanamida (28,3 g, 171 mmol) em THF (100 mL), a mistura reacional foi permitida aquecer em temperatura ambiente com agitação durante 4 horas e extinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 7 : 1 a 6 : 1) para proporcionar 4-cloro-1-(2,5-difluorofenil)butan-1-ona (13,3 g, 39 %) como um óleo amarelo pálido. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,22 (2H, quint, J = 6,8 Hz), 3,16-3,20 (2H, m), 3,67 (2H, t, J = 6,4 Hz), 7,11-7,17 (1H, m), 7,20-7,26 (1H, m), 7,55-7,59 (1H, m). Etapa B: (S,Z)-N-(4-cloro-1-(2,5-difluorofenil)butilideno)-2- metilpropano-2-sulfinamida
[00183] Uma solução de 4-cloro-1-(2,5-difluorofenil)butan-1-ona (16,4 g, 75,0 mmol), (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida (13,6 g, 113 mmol) e tetraetoxititânio (25,7 g, 113 mmol) em THF (150 mL) foi aquecida a 75 °C durante 48 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da adição de EtOAc (50 mL) e salmoura (50 mL), a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Um sólido precipitado foi filtrado e lavado com EtOAc. O filtrado foi lavado com água duas vezes, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 3 : 1 a 2 : 1) para proporcionar (S,Z)-N-(4-cloro-1-(2,5-difluorofenil)butilideno)-2-metilpropano-2- sulfinamida (16,3 g, 67 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,15 e 1,21 (9H, s e s), 1,86-2,12 (2H, m), 2,783,30 (2H, m), 3,60-3,76 (2H, m), 7,20-7,60 (3H, m). Etapa C: (R)-1-((S)-terc-butilsulfinil)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina
[00184] A uma solução de (S,Z)-N-(4-cloro-1-(2,5- difluorofenil)butilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (16,3 g, 50,7 mmol) em THF seco (203 mL) foi adicionado Super hidreto (sol a 1 M em THF, 55,7 mL, 55,7 mmol) a -78 °C. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 1 hora, aquecida em temperatura ambiente e agitada durante 12 horas em temperatura ambiente. Depois de ser extinguida com NH4Cl aq. saturado, a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica separada foi lavada com água, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 6 : 1 a 5 : 1 a 4 : 1) para proporcionar (R)-1-((S)-terc-butilsulfinil)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina (8,60 g, 59 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,15 (9H, s), 1,75-1,80 (1H, m), 1,82-1,98 (2H, m), 2,24-2,32 (1H, m), 2,95-3,01 (1H, m), 3,87-3,93 (1H, m), 4,96 (1H, t, J = 7,2 Hz), 6,87-6,93 (1H, m), 6,95-7,06 (2H, m). Etapa D: (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina
[00185] A uma solução de (R)-1-((S)-terc-butilsulfinil)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidina (8,60 g, 29,9 mmol) em MeOH (60 mL) foi adici-onado HCl (4 M em dioxano, 37,4 mL, 150 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 12 horas em temperatura ambiente. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dissolvido em água (100 mL) e lavado com EtOAc (100 mL). A camada aquosa separada foi neutralizada com NaOH aq. a 1 N (150 mL), extraída com DCM (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com sal-moura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina (5,06 g, 92 %) como um óleo avermelhado. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,56-1,65 (1H, m), 1,78-1,93 (3H, m), 2,21-2,30 (1H, m), 3,01-3,08 (1H, m), 3,133,18 (1H, m), 4,39 (1H, t, J = 7,6 Hz), 6,82-6,88 (1H, m), 6,91-6,97 (1H, m), 7,22-7,26 (1H, m). Exemplo 6: Preparação dos Compostos Intermediários 6 e 7 Legenda da Figura: - to r.t. = em temperatura ambiente-imida Compostos Intermediários 6 e 7: (2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina (6) e (2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidina (7) Etapa A: (R)-4-(terc-butildimetilsililóxi)pirrolidin-2-ona
[00186] A uma solução de (R)-4-hidroxipirrolidin-2-ona (5,00 g, 49,5 mmol) em DMF (24 mL) foram adicionados TBSCl (7,83 g, 51,9 mmol) e imidazol (5,05 g, 74,2 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas e vertida em água gelada. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para produzir (R)-4-(terc-butildimetilsililóxi)pirrolidin-2-ona (9,64 g, 91 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 0,07 (6H, s), 0,89 (9H, s), 2,27 e 2,54 (2H, ABq, JAB = 16,8 Hz), 3,24 e 3,59 (2H, ABq, JAB = 9,8 Hz), 4,53-4,58 (1H, m), 6,25 (1H, s). Etapa B: (R)-terc-butil 4-(terc-butildimetilsililóxi)-2-oxopirrolidina-1- carboxilato
[00187] A uma solução de (R)-4-(terc-butildimetilsililóxi)pirrolidin-2- ona (9,64 g, 44,8 mmol) em CH3CN (90 mL) foram adicionados TEA (7,49 mL, 53,7 mmol), DMAP (5,47 g, 44,8 mmol) e (t-Boc)2O (12,5 mL, 53,7 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e em seguida dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica separada foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 3 : 1) para proporcionar (R)-terc-butil 4-(terc- butildimetilsililóxi)-2-oxopirrolidina-1-carboxilato (13,4 g, 95 %) como um sólido marrom pálido. 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 0,077 (3H, s), 0,082 (3H, s), 0,88 (9H, s), 1,53 (9H, s), 2,47 e 2,71 (2H, ABq, JAB = 17,4 Hz), 3,62 e 3,86 (2H, ABq, JAB = 11,3 Hz), 4,37-4,41 (1H, m). Etapa C: terc-butil (2R)-2-(terc-butildimetilsililóxi)-4-(2,5-difluorofenil)-4- hidróxi-butilcarbamato
[00188] A uma solução de 2-bromo-1,4-difluorobenzeno (3,97 mL, 35,4 mmol) em THF seco (118 mL) foi adicionado cloreto de isopropil- magnésio (2,0 M em THF, 21,2 mL, 42,5 mmol) a -78 °C. A mistura foi lentamente aquecida a 0 °C e agitada durante 1 hora nessa temperatura e em seguida resfriada a -78 °C novamente. Depois da adição de uma solução de (R)-terc-butil 4-(terc-butildimetilsililóxi)-2- oxopirrolidina-1-carboxilato (13,4 g, 42,5 mmol) em THF seco (40 mL) a -78 °C, a mistura reacional foi permitida aquecer a 0 °C com agitação durante 1 hora. Depois da adição de MeOH (118 mL) seguido por NaBH4 (2,01 g, 53,1 mmol) a 0 °C, a mistura resultante foi agitada durante 1 hora e em seguida extinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 6 : 1) para proporcionar terc- butil (2R)-2-(terc-butildimetilsililóxi)-4-(2,5-difluorofenil)-4- hidroxibutilcarbamato (10,2 g, 67 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 0,09-0,14 (6H, m), 0,91-0,93 (9H, m), 1,44 (9H, s), 1,73-1,93 (2H, m), 3,22-3,44 (2H, m), 3,66-3,83 (1H, m), 4,064,15 (1H, m), 4,81 (1H, s), 5,15-5,21 (1H, m), 6,87-6,97 (2H, m), 7,227,29 (1H, m). Etapa D: (4R)-terc-butil 4-(terc-butildimetilsililóxi)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidina-1-carboxilato
[00189] A uma solução de (2R)-2-(terc-butildimetilsililóxi)-4-(2,5- difluorofenil)-4-hidroxibutilcarbamato (10,0 g, 23,2 mmol) em DCM (116 mL) foram adicionados TEA (9,69 mL, 69,5 mmol) e MsCl (1,99 mL, 25,5 mmol) a -60 °C. A mistura foi agitada durante 30 min a -60 °C. Depois da adição de DBU (5,24 mL, 34,8 mmol) a -60 °C, a mistura reacional foi lentamente aquecida em temperatura ambiente e agitada durante a noite. Depois do tratamento de água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2sO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em siO2 (Hex : EtOAc = 8 : 1) para proporcionar (4R)-terc-butil 4-(terc- butildimetilsililóxi)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina-1-carboxilato como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 0,00-0,34 (6H, m), 0,86-1,08 (9H, m), 1,36-1,62 (9H, m), 2,04-2,67 (2H, m), 3,60-3,93 (2H, m), 4,50-4,55 (1H, m), 5,17-5,49 (1H, m), 6,98-7,33 (3H, m). Etapa E: (4R)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4-hidroxipirrolidina-1- carboxilato
[00190] A uma solução de (4R)-terc-butil 4-(terc-butildimetilsililóxi)- 2-(2,5-difluorofenil)-pirrolidina-1-carboxilato (7,23 g, 17,5 mmol) em THF (35,0 mL) foi adicionado TBAF (1,0 M em THF, 22,7 mL, 22,7 mmol) em temperatura ambiente. Depois de ser agitada durante 1 hora em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água gelada e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1) para proporcionar (4R)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4- hidroxipirrolidina-1-carboxilato (3,81 g, 73 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 1,20-1,46 (9H, m), 1,94-2,13 (2H, m), 2,42-2,59 (1H, m), 3,56-3,81 (2H, m), 4,49-4,50 (1H, m), 5,06-5,30 (1H, m), 6,88-7,08 (3H, m). Etapa F: (2R,4S)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidina-1- carboxilato (6a) e (2S,4S)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina-1-carboxilato (7a)
[00191] A uma solução de (4R)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4- hidroxipirrolidina-1-carboxilato (1,00 g, 3,34 mmol) em DCM (11 mL) foi adicionado DAST (0,883 mL, 6,68 mmol) a -78 °C. Depois de ser agitada durante 2 horas a -78 °C, a mistura reacional foi lentamente aquecida em temperatura ambiente e agitada durante a noite. Depois de extinguida por adição lenta de solução de NaHCO3 aq. saturada, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 10 : 1) para proporcionar (2R,4S)-terc-butil 2-(2,5- difluorofenil)-4-fluoropirrolidina-1-carboxilato (6a) (383 mg, 38 %) e (2S,4S)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidina-1-carboxilato (7a) (252 mg, 25 %) como um óleo incolor. (A estereoquímica de cada isômero foi proposta pela com-paração com referência (WO2012034095A1) Para (2R,4S)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina-1-carboxilato (6a) 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 1,21-1,46 (9H, m), 1,94-2,10 (1H, m), 2,71-2,79 (1H, m), 3,62-3,75 (1H, m), 3,98-4,14 (1H, m), 5,09-5,48 (2H, m), 6,92-7,01 (3H, m) Para (2S,4S)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina-1-carboxilato (7a) 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 1,20-1,49 (9H, s), 2,25-2,35 (1H, m), 2,48-2,60 (1H, m), 3,71-4,03 (1H, m), 5,19-5,33 (2H, m), 6,88-6,99 (3H, m). Etapa G: (2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidina (6)
[00192] A uma solução de (2R,4S)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina-1-carboxilato (383 mg, 1,27 mmol) em DCM (2,5 mL) foi adicionado TFA (1,96 mL, 25,4 mmol) em temperatura ambiente. Depois de ser agitada durante 1 hora em temperatura ambiente, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi neu-tralizado com NaHCO3 aq. saturado e extraído com EtOAc. A camada orgânica foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar (2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidina (100 mg, 39 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 1,66-1,83 (1H, m), 1,91 (1H, s), 2,58-2,69 (1H, m), 3,16-3,40 (2H, m), 4,71-4,75 (1H, m), 5,20-5,35 (1H, m), 6,84-6,90 (1H, m), 6,93-6,99 (1H, m), 7,28-7,31 (1H, m). Etapa H: (2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidina (7)
[00193] A uma solução de (2S,4S)-terc-butil 2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina-1-carboxilato (252 mg, 0,836 mmol) em DCM (1,67 mL) foi adicionado TFA (1,29 mL, 16,7 mmol) em temperatura ambiente. Depois de ser agitada durante 1 hora, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi neutralizado com NaHCO3 aq. saturado e extraído com EtOAc. A camada orgânica foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir (2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidina (117 mg, 70 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian 400 MHz): δ 1,90- 2,05 (2H, m), 2,53-2,68 (1H, m), 2,98-3,11 (1H, m), 3,44-3,52 (1H, m), 4,42 (1H, t, J = 7,8 Hz), 5,28 (1H, dt, J = 52,4, 4,8 Hz), 6,87-6,92 (1H, m), 6,93-7,00 (1H, m), 7,28-7,31 (1H, m). Exemplo 7: Preparação do Composto Intermediário 8 Composto Intermediário 8: ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico Etapa A: etil 5-oxo-4,5-di-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato
[00194] Uma mistura de etil-5-amino-1H-pirazol-4-carboxilato (20,0 g, 129 mmol), (E)-etil 3-etoxiacrilato (22,4 mL, 155 mmol) e carbonato de césio (63,0 g, 193 mmol) em DMF (322 mL) foi agitada a 110 °C durante a noite. Depois de ser resfriada a 0 °C, a mistura reacional foi acidificada com HCl aq. a 2 N. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e lavado com água e EtOAc para proporcionar etil 5-oxo-4,5- di-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (24,7 g, 92 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,27 (3H, t, J = 7,2 Hz), 4,80 (2H, q, J = 6,8 Hz), 6,16 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,14 (1H, s), 8,58 (1H, d, J = 8,0 Hz), 11,7 (1H, br. s). Etapa B: etil 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato
[00195] Uma mistura de etil-5-oxo-4,5-di-hidropirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxilato (24,7 g, 119 mmol) e POCl3 (111 mL, 1,19 mol) foi refluxada durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc:DCM = 3 : 1 : 1 a 2 : 1 : 1) para proporcionar etil 5- cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (15,6 g, 58 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,42 (3H, t, J = 7,2 Hz), 4,42 (2H, q, J = 7,2 Hz), 7,00 (1H, d, J = 7,2 Hz), 8,64 (1H, s), 8,64 (1H, d, J = 7,2 Hz). Etapa C: etil 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxilato
[00196] Uma mistura de etil 5-cloropirazolo [1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (1,00 g, 4,43 mmol), 2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina (Inter-mediário 2, 853 mg, 4,65 mmol) e KF (1,28 g, 22,1 mmol) em DMSO (14 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar etil 5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (1,51 g, 91 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,30-1,49 (3H, m), 1,98-2,18 (3H, m), 2,43-2,58 (1H, m), 3,95-4,20 (2H, m), 4,25-4,48 (2H, m), 5,18-5,23 (1H, m), 5,82-5,94 (1H, m), 6,68-6,80 (1H, m), 6,86-6,98 (1H, m), 7,00-7,12 (1H, m), 8,08-8,22 (1H, m), 8,29 (1H, s). Etapa D: ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico
[00197] A uma solução de etil 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (1,51 g, 4,06 mmol) em EtOH (15 mL) e água (5,0 mL) foi adicionado LiOH (291 mg, 12,1 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi refluxada durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6, e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram la-vadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (1,33 g, 95 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,12 (3H, m), 2,35-2,46 (1H, m), 3,58-3,85 (1H, m), 3,94-4,06 (1H, m), 5,31 e 5,53 (1H, s+s), 6,07 e 6,67 (1H, s+s), 6,90-7,42 (3H, m), 8,10-8,24 (1H, m), 8,58 e 8,71 (1H, s+s), 11,4 (1H, br. s). Exemplo 8: Preparação do Composto Intermediário 9 Composto Intermediário 9: ácido 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico Etapa A: etil 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxilato
[00198] Uma mistura de etil 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (1,05 g, 4,65 mmol), 23-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina (Intermediário 1, 812 mg, 4,89 mmol) e KF (1,35 g, 23,3 mmol) em DMSO (15 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar etil 5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (1,53 g, 93 %) como um sólido amarelo. 1H -RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,22-1,48 (3H, m), 2,01-2,28 (3H, m), 2,24-2,61 (1H, m), 3,514,20 (2H, m), 4,21-4,40 (2H, m), 5,02 e 5,62 (1H, s+s), 5,90 e 6,31 (1H, s+s), 7,20-7,50 (1H, m), 8,10-8,45 (4H, m). Etapa B: ácido 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxílico
[00199] A uma solução de etil 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (1,53 g, 4,31 mmol) em EtOH (32 mL) e água (10 mL) foi adicionado LiOH (309 mg, 12,9 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi refluxada durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6, e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (1,23 g, 87 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,19-2,20 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,60-3,82 (1H, m), 4,00-4,08 (1H, m), 5,255,48 (1H, m), 6,12 e 6,65 (1H, s+s), 7,66-7,80 (1H, m), 8,10-8,26 (1H, m), 8,40-8,80 (3H, m), 11,6 (1H, br. s). Preparação dos Compostos Químicos 1-10 Exemplo 9: Preparação do Composto Químico 1: 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-metil- 1,3,4-oxadiazol Etapa A: N'-acetil-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00200] A uma solução de ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 8, 100 mg, 0,290 mmol) em DMF (2,0 mL) foram adicionados aceto-hidrazida (43,0 mg, 0,581 mmol), DIPEA (0,152 mL, 0,871 mmol), HATU (166 mg, 0,436 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agi-tada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar N'-acetil-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (72,0 mg, 62 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-1,92 (2H, m), 1,90-1,98 (1H, m), 2,10-2,16 (2H, m), 2,38-2,48 (1H, m), 3,66-3,78 (1H, m), 5,35-5,37 (1H, m), 6,26-6,27 e 6,69-6,71 (1H, m), 7,02-7,34 (3H, m), 8,14-8,28 (1H, m), 8,61-8,68 (1H, m), 8,82-8,93 (1H, m), 9,78 e 10,0 (1H, s+s). * Dois prótons de NHNH não foram observados. Etapa B: 2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin- 3-il)-5-metil-1,3,4-oxadiazol.
[00201] A uma solução de N'-acetil-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (40,0 mg, 0,100 mmol) em DCM (0,6 mL) foi adicionado piridina (0,0180 mL, 0,220 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e em seguida anidrido tríflico (0,0350 mL, 0,210 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3 a 1:7) para proporcionar 2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-metil-1,3,4-oxadiazol (15,0 mg, 40 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,042,25 (3H, m), 2,43-2,56 (3H, m), 4,05-4,30 (2H, m), 5,20 e 5,70 (1H, s+s), 5,93 e 6,37 (1H, s+s), 6,74-6,83 (1H, m), 6,85-7,20 (2H, m), 7,527,54 e 7,67-7,71 (1H, m+m), 8,19-8,56 (2H, m). MS: 383,3 [MH+]. Exemplo 10: Preparação do Composto Químico 2: 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-metil- 1,3,4-tiadiazol
[00202] A uma solução de N'-acetil-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (63,0 mg, 0,157 mmol) em tolueno (3,0 mL) foi adicionado reagente de Lawesson (70,0 mg, 0,173 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 110 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM apenas para DCM:MeOH = 10 : 1) para proporcionar 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-metil-1,3,4- tiadiazol (63,0 mg, 100 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,04-2,30 (3H, m), 2,40-2,60 (1H, m), 2,32-2,94 (2H, m), 3,60-4,40 (3H, m), 5,22 e 5,66 (1H, s+s), 5,91 e 6,39 (1H, s+s), 6,65-7,18 (3H, m), 8,20-8,37 (1H, m), 8,50-8,60 (1H, m). MS : 399,3 [MH+]. Exemplo 11: Preparação do Composto Químico 3: 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-etil-1,3,4- oxadiazol Etapa A: terc-butil 2-propionil-hidrazinacarboxilato
[00203] A uma solução de terc-butil-hidrazinacarboxilato (3,00 g, 22,7 mmol), TEA (6,33 mL, 45,4 mmol) em DCM (51 mL) foi adicionado uma solução de cloreto de propionila (3,00 mL, 34,0 mmol) em DCM (10 mL) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 2 horas e extinguida com água. A mistura foi extraída com DCM, lavada com HCl aq. a 1 N e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1 a 1 : 1) para proporcionar terc- butil 2-propionil-hidrazinacarboxilato (2,03 g, 47 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,19 (3H, t, J = 7,6 Hz), 1,47 (9H, s), 2,26 (2H, q, J = 7,6 Hz), 6,66 (1H, br. s), 7,67 (1H, br. s). Etapa B: cloridrato de propiono-hidrazida
[00204] A uma solução de terc-butil 2-propionil-hidrazinacarboxilato (615 mg, 3,27 mmol) em dioxano (11 mL) foi adicionado HCl (4 N em dioxano, 6,53 mL, 26,1 mmol) em temperatura ambiente. A mistura re- acional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e concentrada em vácuo. O resíduo foi tratado com éter. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar clori- drato de propiono-hidrazida (272 mg, 66 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ1,00 (3H, t, J = 7,6 Hz), 2,20 (2H, q, J = 7,6 Hz), 10,4 (3H, br. s), 11,0 (1H, br. s). Etapa C: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'-propionilpirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida.
[00205] A uma solução de ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 8, 200 mg, 0,581 mmol) em DMF (4,0 mL) foram adicionados cloridrato de propio- no-hidrazida (145 mg, 1,16 mmol), DIPEA (0,406 mL, 2,32 mmol), HATU (331 mg, 0,871 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar 5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'-propionilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo- hidrazida (177 mg, 73 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 1,27 (3H, t, J = 7,4 Hz), 2,04-2,28 (3H, m), 2,32-2,48 (2H, m), 2,48-2,51(1H, m), 3,70-4,24 (2H, m), 5,22 (0,7H, d, J = 7,2 Hz), 5,50-5,56 (0,3H, m), 5,92 (0,7H, d, J = 7,2 Hz), 6,30-6,38 (0,3H, m), 6,72-7,09 (3H, m), 8,02-8,12 (0,3H, m), 8,16 (0,7H, d, J = 7,2 Hz), 8,27-8,40 (1H, m), 9,13 (0,7H, d, J = 6,8 Hz), 9,44-9,52 (0,3H, m), 10,9 (1H, d, J = 6,8 Hz). Etapa D: 2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin- 3-il)-5-etil-1,3,4-oxadiazol
[00206] A uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'- propionilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (50,0 mg, 0,121 mmol) em DCM (1,0 mL) foi adicionado piridina (0,0220 mL, 0,278 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e em seguida anidrido tríflico (0,0430 mL, 0,253 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:2 a 1:3) para proporcionar 2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-etil-1,3,4-oxadiazol (22,1 mg, 46 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,301,50 (3H, m), 2,00-2,18 (3H, m), 2,40-2,62 (1H, m), 2,80-3,04 (2H, m), 3,66-4,26 (2H, m), 5,21 e 5,74 (1H, s+s), 5,93 e 6,39 (1H, s+s), 6,727,6,80 (1H, m), 6,82-7,13 (2H, m), 8,10-8,40 (2H, m). MS: 397,3 [MH+]. Exemplo 12: Preparação do Composto Químico 4: 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-etil-1,3,4- tiadiazol <DRAW-CODE>>
[00207] A uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'- propionilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (50,0 mg, 0,121 mmol) em tolueno (2,5 mL) foi adicionado reagente de Lawesson (54,0 mg, 0,133 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 110 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM apenas para DCM:MeOH = 50 : 1) para proporcionar 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-etil-1,3,4- tiadiazol (32,8 mg, 65 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 1,37-1,52 (3H, m), 2,00-2,21 (3H, m), 2,42-2,64 (1H, m), 3,31-3,22 (2H, m), 3,36-4,20 (2H, m), 5,21 e 5,69 (1H, s+s), 5,90 e 6,26 (1H, s+s), 6,65-6,70 (1H, m), 6,88-7,05 (2H, m), 8,20-8,38 (1H, m), 8,52-8,63 (1H, m). MS: 413,3 [MH+]. Exemplo 13: Preparação do Composto Químico 5: 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-isopropil- 1,3,4-oxadiazol Etapa A: terc-butil 2-isobutiril-hidrazinacarboxilato
[00208] A uma mistura de terc-butil-hidrazinacarboxilato (10,0 g, 76,0 mmol), TEA (21,1 mL, 151 mmol) em DCM (170 mL) foi adicionado uma solução de cloreto de isobutirila (12,1 g, 113 mmol) em DCM (34 mL) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 hora e extinguida com água. A mistura foi extraída com DCM, lavada com HCl aq. a 1 N e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc= 2 : 1 a 1 : 1) para proporcionar terc-butil 2- isobutiril-hidrazinacarboxilato (14,0 g, 91 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,20 (6H, d, J = 6,8 Hz), 1,47 (9H, s), 2,41-2,47 (1H, m), 6,63 (1H, br. s), 7,57 (1H, br. s). Etapa B: cloridrato de isobutiro-hidrazida
[00209] A uma solução de terc-butil 2-isobutiril-hidrazinacarboxilato (14,0 g, 69,2 mmol) em dioxano (230 mL) foi adicionado HCl (4 N em dioxano, 104 mL, 415 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e concentrada em vácuo. O resíduo foi tratado com éter. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar clori- drato de isobutiro-hidrazida (8,78 g, 92 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,06 (6H, d, J = 6,8 Hz), 2,52-2,59 (1H, m), 10,4 (3H, br. s), 11,1 (1H, br. s). Etapa C: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'-isobutirilpirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00210] A uma solução de ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 8, 200 mg, 0,581 mmol) em DMF (4,0 mL) foram adicionados cloridrato de isobuti- ro-hidrazida (161 mg, 1,16 mmol), DIPEA (0,406 mL, 2,32 mmol), HATU (331 mg, 0,871 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar 5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'-isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo- hidrazida (186 mg, 75 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,28 (6H, d, J = 6,0 Hz), 2,52-2,19 (3H, m), 2,50-2,61 (2H, m), 3,71-4,25 (2H, m), 5,22 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 5,58-5,62 (0,3H, m), 5,92 (0,7H, d, J = 7,2 Hz), 6,30-6,38 (0,3H, m), 6,72-7,09 (3H, m), 8,02-8,12 (0,3H, m), 8,19 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 8,28-8,37 (1H, m), 9,02 (0,7H, d, J = 6,0 Hz), 9,52-9,60 (0,3H, m), 10,9 (1H, d, J = 7,2 Hz). Etapa D: 2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin- 3-il)-5-isopropil-1,3,4-oxadiazol.
[00211] A uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'- isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (70,0 mg, 0,163 mmol) em DCM (1,0 mL) foi adicionado piridina (0,0300 mL, 0,376 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e em seguida anidrido tríflico (0,0580 mL, 0,343 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:2 a 1:3) para proporcionar 2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-isopropil-1,3,4-oxadiazol (39,0 mg, 58 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,281,52 (6H, m), 2,00-2,21 (2H, m), 2,40-2,60 (1H, m), 3,10-3,30 (1H, m), 3,50-4,18 (3H, m), 5,22 e 5,80 (1H, s+s), 5,91 e 6,39 (1H, s+s), 6,696,80 (1H, m), 6,85-7,12 (2H, m), 8,12-8,42 (2H, m). MS: 411,3 [MH+]. Exemplo 14: Preparação do Composto Químico 6: 2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-isopropil- 1,3,4-tiadiazol
[00212] A uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'- isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (100 mg, 0,233 mmol) em tolueno (4,6 mL) foi adicionado Reagente de Lawesson (104 mg, 0,23 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 110 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex: EtOAc = 1:2 a EtO- Ac apenas) para proporcionar 2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-isopropil-1,3,4-tiadiazol (61,0 mg, 61 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,381,58 (6H, m), 2,01-2,28 (3H, m), 2,47-2,60 (1H, m), 3,42-3,75 (2H, m), 3,85-4,20 (2H, m), 5,22 e 5,72 (1H, s+s), 5,90 e 6,38 (1H, s+s), 6,626,80 (1H, m), 6,81-7,02 (2H, m), 8,20-8,37 (1H, m), 8,50-8,61 (1H, m). MS: 427,3 [MH+] Exemplo 15: Preparação do Composto Químico 7: 2-ciclopropil-5- (5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-oxadiazol Etapa A: terc-butil 2-(ciclopropanocarbonil)hidrazinacarboxilato
[00213] A uma mistura de terc-butil-hidrazinacarboxilato (3,00 g, 22,7 mmol), TEA (6,33 mL, 45,4 mmol) em DCM (51 mL) foi adicionado uma solução de cloreto de ciclopropanocarbonila (3,10 mL, 34,0 mmol) em DCM (10 mL) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 hora e extinguida com água. A mistura foi extraída com DCM, lavada com HCl aq. a 1 N e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1 a 1 : 1) para proporcionar terc-butil 2-(ciclopropanocarbonil)hidrazinacarboxilato (2,16 g, 47 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 0,81-0,84 (2H, m), 1,02-1,04 (2H, m), 1,45-1,52 (10H, m), 6,65 (1H, br. s), 7,95 (1H, br. s). Etapa B: cloridrato de ciclopropanocarbo-hidrazida
[00214] A uma solução de terc-butil 2- (ciclopropanocarbonil)hidrazinacarboxilato (2,16 g, 10,8 mmol) em dioxano (36 mL) foi adicionado HCl (4 N em dioxano, 6,53 mL, 26,1 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e concentrada em vácuo. O resíduo foi tratado com éter. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar cloridrato de ciclopropano- carbo-hidrazida (1,38 g, 94 %) como um sólido amarelo pálido. 1H- RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 0,77-0,88 (4H, m), 1,73-1,79 (1H, m), 10,5 (3H, br. s), 11,3 (1H, br. s). Etapa C: N'-(ciclopropanocarbonil)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida.
[00215] A uma solução de ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 8, 200 mg, 0,581 mmol) em DMF (4,0 mL) foram adicionados cloridrato de ciclo- propanocarbo-hidrazida (159 mg, 1,16 mmol), DIPEA (0,406 mL, 2,32 mmol) e HATU (331 mg, 0,871 mmol) em temperatura ambiente. A mis-tura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 100 : 1 a 20 : 1) para proporcionar N'-(ciclopropanocarbonil)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (215 mg, 87 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 0,84-0,90 (2H, m), 1,09-0,15 (2H, m), 2,00-2,25 (3H, m), 2,482,61 (1H, m), 3,71-4,17 (3H, m), 5,22 (0,7H, d, J = 8,4 Hz), 5,50-5,58 (0,3H, m), 5,91 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 6,30-6,38 (0,3H, m), 6,71-7,09 (2H, m), 8,18 (0,7H, d, J = 7,2 Hz), 8,52-8,62 (0,3H, m), 8,25-8,37 (2H, m), 9,04-9,46 (1H, m), 10,65-10,75 (1H, m). Etapa D: 2-ciclopropil-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol
[00216] A uma solução de N'-(ciclopropanocarbonil)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (100 mg, 0,235 mmol) em DCM (1,5 mL) foi adicionado piridina (0,0440 mL, 0,539 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e em seguida anidrido tríflico (0,0830 mL, 0,492 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3 a 1:7) para proporcionar 2-ciclopropil-5-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4- oxadiazol (49,0 mg, 51 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,00-1,18 (4H, m), 2,01-2,18 (4H, m), 2,32-2,61 (1H, m), 3,61-4,20 (2H, m), 5,20 e 5,77 (1H, s+s), 5,92 e 6,39 (1H, s+s), 6,70-6,80 (1H, m), 6,82-7,12 (2H, m), 8,12-8,37 (2H, m). MS: 409,3 [MH+]. Exemplo 16: Preparação do Composto Químico 8: 2-ciclopropil-5- (5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-tiadiazol
[00217] A uma solução de N'-(ciclopropanocarbonil)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (80,0 mg, 0,188 mmol) em tolueno (3,5 mL) foi adicionado reagente de Lawesson (76,0 mg, 0,188 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 110 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 10 : 1) para proporcionar 2-ciclopropil-5-(5- (2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4- tiadiazol (23,0 mg, 29 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 0,88-0,95 (2H, m), 1,10-1,30 (2H, m), 2,01-2,25 (3H, m), 2,40-2,61 (2H, m), 3,61-3,67 (1H, m), 3,82-4,10 (1H, m), 5,21 e 5,68 (1H, s+s), 5,90 e 6,37 (1H, s+s), 6,62-6,80 (1H, m), 6,83-7,02 (1H, m), 7,04-7,12 (1H, m), 8,15-8,42 (1H, m), 8,50-8,61 (1H, m). MS: 425,3 [MH+]. Exemplo 17: Preparação do Composto Químico 9: 2-terc-butil-5- (5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-oxadiazol Etapa A: terc-butil 2-pivaloil-hidrazinacarboxilato
[00218] A uma solução de terc-butil-hidrazinacarboxilato (5,00 g, 37,8 mmol), TEA (10,6 mL, 76,0 mmol) em DCM (85 mL) foi adicionado uma solução de cloreto de pivaloíla (6,98 mL, 56,7 mmol) em DCM (85 mL) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 hora e extinguida com água. A mistura foi extraída com DCM, lavada com HCl aq. a 1 N e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar terc-butil 2-pivaloil- hidrazinacarboxilato (7,65 g, 93 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,25 (9H, s), 1,47 (9H, s), 6,48 (1H, br. s), 7,39 (1H, br. s). Etapa B: cloridrato de pivalo-hidrazida
[00219] A uma solução de terc-butil 2-pivaloil-hidrazinacarboxilato (7,65 g, 35,4 mmol) em dioxano (118 mL) foi adicionado HCl (4 N em dioxano, 70 mL, 283 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reaci- onal foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e concentrada em vácuo. O resíduo foi tratado com éter. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar cloridrato de pivalo-hidrazida (5,06 g, 94 %) como um sólido amarelo pálido. 1H- RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,17 (9H, s), 10,3 (3H, br. s), 10,8 (1H, br. s). Etapa C: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00220] A uma solução de ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 8, 441 mg, 1,28 mmol) em DMF (8,5 mL) foram adicionados cloridrato de pivalo- hidrazida (391 mg, 2,56 mmol), DIPEA (0,895 mL, 5,12 mmol), HATU (730 mg, 1,92 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, vertida em água e agitada 30 min adicionais em temperatura ambiente. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5- (2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbo-hidrazida (454 mg, 80 %) como um sólido amarelo pálido. 1H- RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,19 (9H, s), 1,81-2,15 (3H, m), 2,45-2,50 (1H, m), 3,65-3,72 (1H, m), 4,00-4,08 (1H, m), 5,36-5,42 (1H, m), 6,70 (1H, d, J = 8,0 Hz), 6,95-7,11 (3H, m), 8,23 (1H, s), 8,55 (1H, s), 8,83 (1H, d, J = 8,0 Hz), 9,53 (1H, s). Etapa D: 2-terc-butil-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol
[00221] A uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (651 mg, 1,47 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado piridina (0,274 mL, 3,38 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e em seguida anidrido tríflico (0,522 mL, 3,09 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3 a 1:4) para proporcionar 2-terc-butil-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol (402 mg, 64 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,27 e 1,44 (9H, s+s), 1,82-2,18 (3H, m), 2,32-2,44 (1H, m), 3,54-3,90 (1H, m), 4,00-4,08 (1H, m), 5,32-5,38 (0,3H, m), 5,67 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 6,06-6,12 (0,3H, m), 6,71 (0,7H, d, J = 8,0 Hz), 6,88-7,38 (3H, m), 8,32-8,42 (1H, m), 8,58-8,65 (0,3H, m), 8,84 (0,7H, d, J = 8,0 Hz). MS: 425,3 [MH+]. Exemplo 18: Preparação do Composto Químico 10: 2-terc-butil-5- (5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-tiadiazol
[00222] A uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (50,0 mg, 0,113 mmol) em diglima (2,2 mL) foram adicionados P4S10 (100 mg, 0,226 mmol) e Na2CO3 (48,0 mg, 0,452 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 90 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 10 : 1) para proporcionar 2-terc- butil-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-tiadiazol (30,0 mg, 60 %) como um sólido branco. MS: 441,4 [MH+]. Preparação dos Compostos Químicos 11-15 Legenda da Figura: - to r.t. = em temperatura ambiente Exemplo 19: Preparação do Composto Químico 11: 2-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-metil- 1,3,4-tiadiazol Etapa A: N'-acetil-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00223] A uma solução de ácido 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 9, 200 mg, 0,611 mmol) em DMF (4,0 mL) foram adicionados aceto-hidrazida (91,0 mg, 1,22 mmol), DIPEA (0,320 mL, 283 mmol) e HATU (349 mg, 0,917 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar N'-acetil-5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (168 mg, 71 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,002,15 (5H, m), 2,50-2,63 (1H, m), 3,68-4,30 (2H, m), 5,06 e 5,30 (1H, s+s), 5,68 e 6,39 (1H, s+s), 7,10-7,40 (1H, m), 8,20-9,04 (4H, m), 9,84 e 10,8 (1H, s+s). * Dois prótons de NHNH não foram observados. Etapa B: 2-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-5-metil-1,3,4-tiadiazol
[00224] A uma solução de N'-acetil-5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (50,0 mg, 0,130 mmol) em diglima (2,6 mL) foram adicionados P4S10 (116 mg, 0,261 mmol) e Na2CO3 (55,0 mg, 0,522 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 90 °C durante a noite, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 100 : 1 a 10 : 1) para proporcionar 2-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-metil-1,3,4- tiadiazol (36,0 mg, 72 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 2,00-2,30 (3H, m), 2,50-2,80 (4H, m), 3,62-4,12 (2H, m), 5,01 e 5,49 (1H, s+s), 5,90 e 6,68 (1H, s+s), 7,20-2,26 (1H, m), 8,29-8,62 (4H, m). MS: 382,3 [MH+]. Exemplo 20: Preparação do Composto Químico 12: 2-etil-5-(5-(2- (5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-tiadiazol Etapa A: N'-acetil-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00225] A uma solução de ácido 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 9, 200 mg, 0,611 mmol) em DMF (4,0 mL) foram adicionados cloridrato de propiono- hidrazida (152 mg, 1,22 mmol), DIPEA (0,320 mL, 283 mmol) e HATU (349 mg, 0,917 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar N'-acetil- 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo- hidrazida (168 mg, 71 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 1,27 (3H, t, J = 7,4 Hz), 2,00-2,28 (3H, m), 2,32-2,45 (3H, m), 2,50-2,67 (1H, m), 3,73-4,26 (2H, m), 5,07 e 5,72 (1H, s+s), 5,71 e 5,90 (1H, s+s), 7,21-7,40 (1H, m), 8,19-9,04 (4H, m), 9,96 e 10,84 (1H, s+s). Etapa B: 2-etil-5-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol
[00226] A uma solução de 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'- propionilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (50,0 mg, 0,126 mmol) em diglima (2,6 mL) foram adicionados P4S10 (112 mg, 0,252 mmol) e Na2CO3 (53,0 mg, 0,503 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 90 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 50 : 1 a 10 : 1) para proporcionar 2-etil-5-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (36,0 mg, 72 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,40-1,52 (3H, m), 2,00-2,23 (3H, m), 2,52-2,65 (1H, m), 3,053,20 (2H, m), 3,60-3,80 (2H, m), 5,08 e 5,52 (1H, s+s), 5,88 e 6,38 (1H, s+s), 7,24-7,26 (1H, m), 8,30-8,60 (4H, m). MS: 396,3 [MH+]. Exemplo 21: Preparação do Composto Químico 13: 2-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5- isopropil-1,3,4-tiadiazol Etapa A: 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'-isobutirilpirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00227] A uma solução de ácido 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 9, 200 mg, 0,611 mmol) em DMF (4,0 mL) foram adicionados cloridrato de isobutiro- hidrazida (161 mg, 1,22 mmol), DIPEA (0,427 mL, 2,44 mmol) e HATU (349 mg, 0,917 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'-isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbo-hidrazida (208 mg, 83 %) como um sólido amarelo pálido. 1H- RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,26-1,39 (6H, m), 2,00-2,26 (3H, m), 2,50-2,62 (2H, m), 3,70-4,26 (2H, m), 5,06 e 5,32 (1H, s+s), 5,76 (0,3H, s), 6,39 (0,7H, d, J = 8,0 Hz), 7,26-7,52 (1H, m), 8,24-8,90 (5H, m), 10,06 e 10,85 (1H, s+s). Etapa B: 2-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-5-isopropil-1,3,4-tiadiazol
[00228] A uma solução de 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'- isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (50,0 mg, 0,122 mmol) em diglima (2,6 mL) foram adicionados P4S10 (108 mg, 0,243 mmol) e Na2CO3 (52,0 mg, 0,486 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 90 °C durante a noite, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 100 : 1 a 20 : 1) para proporcionar 2-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-isopropil- 1,3,4-tiadiazol (37,0 mg, 74 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,35-1,70 (7H, m), 2,00-2,28 (3H, m), 2,52-2,67 (1H, m), 3,38-3,57 (1H, m), 3,61-3,80 (1H, m), 3,87-4,17 (1H, m), 5,08 e 5,51 (1H, s+s), 5,84 e 6,38 (1H, s+s), 7,22-7,26 (1H, m), 8,29-8,40 (1H, m), 8,42 (1H,s), 8,55 (1H, s). MS: 410,3 [MH+]. Exemplo 22: Preparação do Composto Químico 14:2-ciclopropil-5- (5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-tiadiazol Etapa A: N'-(ciclopropanocarbonil)-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00229] A uma solução de ácido 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 9, 200 mg, 0,611 mmol) em DMF (4,0 mL) foram adicionados cloridrato de ciclopropano- carbo-hidrazida (167 mg, 1,22 mmol), DIPEA (0,427 mL, 2,44 mmol) e HATU (349 mg, 0,917 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar N'- (ciclopropanocarbonil)-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (196 mg, 78 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 0,80-0,98 (2H, m), 1,15-1,28 (2H, m), 1,50-1,55 (1H, m), 1,97-2,27 (3H, m), 2,472,61 (1H, m), 3,60-4,30 (2H, m), 5,06 e 5,66 (1H, s+s), 5,88 e 6,39 (1H, s+s), 7,02-7,33 (1H, m), 8,24-8,36 (4H, m), 8,74 e 9,21 (1H, s+s), 9,94 e 10,71 (1H, s+s). Etapa B: 2-ciclopropil-5-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol
[00230] A uma solução de N'-(ciclopropanocarbonil)-5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo- hidrazida (50,0 mg, 0,122 mmol) em diglima (2,6 mL) foram adicionados P4S10 (109 mg, 0,244 mmol) e Na2CO3 (52,0 mg, 0,488 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 90 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 100 : 1 a 20 : 1) para pro-porcionar 2-ciclopropil-5-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (33,0 mg, 66 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 0,94-1,17 (2H, m), 1,17-1,31 (2H, m), 2,04-2,28 (3H, m), 2,37-2,48 (1H, m), 2,52-2,68 (1H, m), 3,50-4,17 (3H, m), 5,07 e 5,58 (1H, s+s), 5,90 e 6,37 (1H, s+s), 7,22 (1H, d, J = 7,2 Hz), 8,30-8,40 (1H, m), 8,43 (1H, s), 8,48-5,56 (1H, m). MS: 408,3 [MH+]. Exemplo 23: Preparação do Composto Químico 15: 2-terc-butil-5- (5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-tiadiazol Etapa A: 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00231] A uma solução de ácido 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 9, 316 mg, 0,965 mmol) em DMF (6,4 mL) foram adicionados cloridrato de pivalo- hidrazida (442 mg, 290 mmol), DIPEA (0,674 mL, 3,86 mmol) e HATU (551 mg, 1,45 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbo-hidrazida (362 mg, 88 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,20 (9H, s), 1,80-2,10 (3H, m), 2,402,50 (1H, m), 3,62-3,82 (1H, m), 4,00-4,10 (1H, m), 5,36 (0,7H, d, J = 8,0 Hz), 6,17 (0,3H, d, J = 8,4 Hz), 6,71 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 7,65 (0,3H, d, J = 8,0 Hz), 7,51 (1H, d, J = 7,4 Hz), 8,13 e 8,22 (1H, s+s), 8,28 e 8,43 (1H, s+s), 8,36 e 8,50 (1H, s+s), 8,64 (0,3H, d, J = 7,2 Hz), 8,83 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 8,79 (1H, s), 9,55 e 9,80 (1H, s+s). Etapa B: 2-terc-butil-5-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol
[00232] A uma solução de 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (100 mg, 0,235 mmol) em diglima (4,7 mL) foram adicionados P4S10 (209 mg, 0,470 mmol) e Na2CO3 (100 mg, 0,940 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 90 °C durante 4 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 20 : 1) para proporcionar 2-terc-butil-5-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (34,0 mg, 34 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,42 e 1,48 (9H, s+s), 1,90-2,07 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,69 (1H, q, J = 8,8 Hz), 4,00-4,18 (1H, m), 5,35 (0,2H, s), 5,46 (0,8 H, d, J = 8,4 Hz), 6,18 (0,2H, s), 6,71 (0,8 H, d, J = 8,0 Hz), 7,69 (1H, d, J =10,0 Hz), 8,38-8,40 (2H, m), 8,48 (1H, s), 8,83 (1H, d, J = 7,6 Hz). MS: 424,4 [MH+]. Exemplo 24: Preparação do Composto Químico 16: 2-terc-butil-5- (5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-oxadiazol
[00233] Uma mistura de 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (60,0 mg, 0,141 mmol) e POCl3 (0,394 mL, 4,23 mmol) foi refluxada durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e DCM. A camada orgânica separada foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 50 : 1 a 30 : 1) para proporcionar 2-terc-butil-5-(5- (2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4- oxadiazol (38,0 mg, 66 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO- d6, Varian, 400 MHz): δ 1,27 e 1,44 (9H, s+s), 1,89-2,21 (3H, m), 2,402,50 (1H, m), 3,61-3,88 (1H, m), 3,93-4,11 (1H, m), 5,32 (0,3H, s), 5,55 (0,7 H, d, J = 8,0 Hz), 6,18 (0,3H, s), 6,70 (0,7 H, d, J = 7,6 Hz), 7,65 (1H, d, J =9,2 Hz), 8,34-8,45 (3H, m), 8,64-8,83 (1H, m). MS: 408,4 [MH+]. Exemplo 25: Preparação do Composto Intermediário 10 Composto Intermediário 10: ácido (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico Etapa A: Etil (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxilato
[00234] Uma mistura de etil 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (1,30 g, 5,76 mmol), (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina (Intermediário 5, 1,13 g, 6,6 mmol) e KF (1,67 g, 28,8 mmol) em DMSO (19 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi pu-rificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar etil (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (2,11 g, 98 %) como um sólido amarelo. MS: 372,90 [MH+] Etapa B: ácido (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxílico
[00235] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (2,11 g, 5,68 mmol) em EtOH (42 mL) e água (14 mL) foi adicionado LiOH (408 mg, 17,0 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6, e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (1,92 g, 98 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ1,92-2,04 (3H, m), 2,33-2,60 (1H, br. s), 3,64 (0,5H, br. s), 3,77 (0,5H, br. s), 4,00 (1H, br. s), 5,32 (0,5H, s), 5,53 (0,5H, s), 6,07 (0,5H, s), 6,67 (0,5H, s), 6,99-7,33 (3H, m), 8,15-8,19 (1H, m), 8,59 e 8,77 (1H, s+s), 11,45 (1H, s). Exemplo 26: Preparação do Composto Intermediário 11 Composto Intermediário 11: ácido (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico Etapa A: (R)-etil 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxilato
[00236] Uma mistura de etil 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (5,70 g, 25,3 mmol), (R)-3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina (Intermediário 4, 4,37 g, 26,3 mmol) e KF (7,34 g, 126 mmol) em DMSO (15 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3 a 1:4) para proporcionar (R)-etil 5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (6,42 g, 71 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz: δ 1,17-1,30 (3H, m), 1,91-2,09 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,61-3,82 (1H, m), 3,94-4,08 (1H, m), 4,09-4,29 (2H, m), 5,24-5,34 (0,3H, m), 5,35-5,48 (0,7H, m), 6,10-6,19 (0,3H, m), 6,65-6,71 (0,7H, m), 7,607,74 (1H, m), 8,12-8,24 (1H, m), 8,36-8,54 (2H, m), 8,55-8,65 (0,3H, m), 8,70-8,81 (0,7H, m). Etapa B: ácido (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxílico
[00237] A uma solução de (R)-etil 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (6,56 g, 18,4 mmol) em EtOH (70 mL) e água (23 mL) foi adicionado LiOH (1,33 g, 55,4 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6, e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (5,80 g, 96 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,89-2,20 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,61-3,82 (1H, m), 3,92-4,08 (1H, m), 5,24-5,48 (1H, m), 6,12 e 6,63 (1H, s+s), 7,56-7,78 (1H, m), 8,46 (1H, s), 8,32-8,78 (3H, m), 11,54 (1H, s). Exemplo 27: Preparação do Composto Intermediário 12 Composto Intermediário 12: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído Etapa A: pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol
[00238] A uma solução de metal de sódio (11,1 g, 481 mmol) em EtOH (344 mL) foram adicionados 1H-pirazol-3-amina (20,0 g, 241 mmol) e 1,3-dimetilpirimidina-2,4(1H,3H)-diona (35,4 g, 253 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi refluxada durante a noite e resfriada em temperatura ambiente. Um sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com EtOH frio e secado sob vácuo para proporcionar pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol (36,0 g, >99 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 5,35 (1H, d, J = 1,6 Hz), 5,63 (1H, d, J = 7,2 Hz), 7,43 (1H, d, J = 1,6 Hz), 7,97 (1H, d, J = 7,2 Hz). * Um próton de OH não foi observado. Etapa B: 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina
[00239] Uma mistura de pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ol (32,0 g, 237 mmol) e POCl3 (177 mL, 1,89 mol) foi refluxada durante 3 horas. De- pois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo foi diluído com DCM, lavado com NaHCO3 aq. saturado, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1) para proporcionar 5-cloropirazolo[1,5- a]pirimidina (14,1 g, 38 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (DMSO- d6, Varian, 400 MHz): δ 6,73 (1H, dd, J = 2,0, 0,8 Hz), 7,14 (1H, d, J = 7,2 Hz), 8,29 (1H, d, J = 2,4 Hz), 9,19 (1H, dd, J = 7,2, 0,8 Hz). Etapa C: 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído
[00240] A uma solução de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina (14,1 g, 92,0 mmol) em DMF (184 mL) foi adicionado POCl3 (21,4 mL, 230 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e em seguida extinguida com gelo. A mistura foi neutralizada com NaOH aq. a 1 N. Um sólido precipitado amarelo foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (15,1 g, 90 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 7,50 (1H, d, J = 7,2 Hz), 8,76 (1H, s), 9,40 (1H, d, J = 7,2 Hz), 10,09 (1H, s). Etapa D: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbaldeído
[00241] Uma mistura de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbaldeído (4,70 g, 25,9 mmol), (R)-2-(2,5-difluorofeil)pirrolidina (Intermediário 5, 5,07 g, 27,7 mmol) e KF (7,52 g, 129 mmol) em DMSO (86 mL) foi aquecida a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtra- das e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1) para proporcionar 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (8,50 g, 100 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,90-2,28 (3H, m), 2,38-2,60 (1H, m), 3,60-4,18 (2H, m), 5,14-5,28 (0,6H, m), 5,54-5,72 (0,4H, m), 5,84-6,02 (0,6H, m), 6,35-6,46 (0,4H, m), 6,68-6,78 (1H, m), 6,82-7,20 (2H, m), 8,10-8,36 (2H, m), 9,77 e 10,11 (1H, s+s). Exemplo 28: Preparação do Composto Químico 17 Composto Químico 17: (R)-2-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-isopropil-1,3,4-tiadiazol Etapa A: (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'- isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00242] A uma solução de ácido (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 11, 5,65 g, 17,3 mmol) em DMF (115 mL) foram adicionados cloridrato de isobutiro-hidrazida (4,78 g, 34,5 mmol), DIPEA (12,1 mL, 69,0 mmol) e HATU (13,1 mg, 34,5 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 20 : 1) para proporcionar (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)-N'-isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (6,14 g, 86 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,03-1,42 (6H, m), 1,80-2,10 (3H, m), 3,66-3,81 (1H, m), 4,00-4,15 (1H, m), 5,36 (0,3H, d, J = 7,2 Hz), 5,43 (0,7H, d, J = 6,8 Hz), 6,17 (0,3H, d, J = 7,6 Hz), 6,71 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 7,53 (0,7H, d, J = 9,6 Hz), 7,65 (0,3H, d, J = 10,0 Hz), 8,14 e 8,23 (1H, s+s), 8,29 e 8,43 (1H, s+s), 8,36 e 8,50 (1H, s+s), 8,64 (0,3H, d, J = 7,2 Hz), 8,83 (0,7H, d, J = 8,0 Hz), 9,08 (0,7H, d, J = 2,8 Hz), 9,92 (0,3H, s), 10,10 (0,7H, d, J = 3,6 Hz), 10,44 (0,3H, s). * Dois prótons de NHNH não foram observados. Etapa B: (R)-2-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-5-isopropil-1,3,4-tiadiazol
[00243] A uma solução de (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)- N'-isobutirilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (5,20 g, 12,6 mmol) em THF (250 mL) foi adicionado reagente de Lawesson (10,2 g, 25,3 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e dividida entre água e EtO- Ac. A camada orgânica separada foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 50 : 1) para proporcionar (R)-2-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-isopropil-1,3,4-tiadiazol (1,88 g, 36 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,34-1,38 (6H, m), 1,87-2,10 (3H, m), 3,35-3,85 (1H, m), 3,66-3,75 (1H, m), 4,03-4,12 (1H, m), 5,35 (0,2H, d, J = 6,4 Hz), 5,44 (0,8H, d, J = 6,8 Hz), 6,17 (0,2H, s), 6,71 (0,8H, d, J = 7,6 Hz), 7,70 (1H, d, J = 9,2 Hz), 8,35-8,44 (2H, m), 8,45-5,57 (2H, m), 8,64 (0,2H, s), 8,83 (0,8H, d, J = 8,0 Hz). MS: 410,4 [MH+]. Exemplo 29: Preparação do Composto Químico 18 Legenda da Figura: - r.t. = temperatura ambiente Composto Químico 18: il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-(piperazin-1-il)-1,3,4-oxadiazol Etapa A: (R)-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol-2-amina
[00244] A uma solução de cloridrato de hidrazinacarboxamida (85,0 mg, 0,761 mmol) e acetato de sódio (62,0 mg, 0,761 mmol) em água (1,5 mL) foi adicionado uma solução de (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (Intermediário 12, 250 mg, 0,761 mmol) em MeOH (1,5 mL) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 10 min e concentrada em vácuo. O resíduo resultante foi dissolvido em dioxano (7,7 mL). Depois da adição de K2CO3 (316 mg, 2,28 mmol) seguido por iodo (232 mg, 0,914 mmol), a mistura reacio- nal foi agitada a 80 °C durante 4 horas, resfriada em temperatura ambiente, e em seguida extinguida com Na2S2O3 aq. a 5 %. A mistura foi extraída com DCM/MeOH (10 : 1, 10 mL X 4). As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 50 : 1 a 25 : 1) para proporcionar (R)-5-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4- oxadiazol-2-amina (179 mg, 61 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,05 (3H, m), 2,35-2,55 (1H, m), 3,50-3,80 (1H, m), 3,90-4,05 (1H, m), 5,30 e 5,54 (1H, s+s), 6,05-6,67 (1H, m), 6,68-7,38 (4H, m), 8,00-8,18 (1H, m), 8,50-8,80 (1H, m). Etapa B: (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol
[00245] A uma solução de brometo de cobre(II) (125 mg, 0,560 mmol) e terc-butil nitrito (0,0670 mL, 0,560 mmol) em CH3CN (1,9 mL) foi adicionado uma solução de (R)-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol-2-amina (179 mg, 0,467 mmol) em CH3CN (3,8 mL) em temperatura ambiente. A mistura reaci- onal foi agitada a 65 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e EtOAc. A camada aquosa separada foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1 a 1 : 1) para proporcionar (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol (72,0 mg, 34 %) como sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Vari- an, 400 MHz): δ 1,80-2,05 (3H, m), 2,35-2,50 (1H, m), 3,60-3,88 (1H, m), 3,96-4,08 (1H, m), 5,36 e 5,53 (1H, s+s), 6,12 e 6,69 (1H, s+s), 6,90-7,40 (3H, m), 8,33-8,40 (1H, m), 8,62-8,82 (1H, m). Etapa C: (R)-terc-butil 4-(5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol-2-il)piperazina-1- carboxilato
[00246] A uma solução de (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol (72,0 mg, 0,161 mmol) e terc-butil piperazina-1-carboxilato (60,0 mg, 0,322 mmol) em DMF (2,0 mL) foram adicionados DIPEA (0,0840 mL, 0,483 mmol) e DMAP (20,0 mg, 0,161 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 7 horas e vertida em H2O. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3 a 1:9) para proporcionar (R)-terc- butil 4-(5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3- il)-1,3,4-oxadiazol-2-il)piperazina-1-carboxilato (58,0 mg, 65 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,45 (9H, s), 1,80-2,10 (3H, m), 2,30-2,45 (1H, m), 2,95-3,08 (1H, m), 3,20-3,63 (4H, m), 3,40-3,51 (3H, m), 3,52-3,88 (1H, m), 3,98-4,08 (1H, m), 5,39 e 5,69 (1H, s+s), 6,14 e 6,66 (1H, s+s), 6,82-7,40 (3H, m), 8,20-8,30 (1H, m), 8,55-5,88 (1H, m). Etapa D: (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-5-(piperazin-1-il)-1,3,4-oxadiazol
[00247] A uma solução de (R)-terc-butil 4-(5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol- 2-il)piperazina-1-carboxilato (58,0 mg, 0,105 mmol) em DCM (0,70 mL) foi adicionado TFA (0,162 mL, 2,10 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, basificado com NaHCO3 aq. saturado, lavado com salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 30 : 1 a 4 : 1) para proporcionar o (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-(piperazin-1-il)-1,3,4-oxadiazol (29,0 mg, 61 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,82-2,08 (4H, m), 2,30-2,45 (1H, m), 2,74-2,90 (4H, m), 3,10-3,28 (3H, m), 3,36-3,45 (1H, m), 3,52-3,84 (1H, m), 3,96-4,06 (1H, m), 5,29 e 5,61 (1H, s+s), 6,06 e 6,66 (1H, s+s), 6,90-7,40 (3H, m), 8,20-8,30 (1H, m), 8,55-8,80 (1H, m). MS: 453,2 [MH+]. Exemplo 30: Preparação do Composto Químico 19 Composto Químico 19: (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)-1,3,4-tiadiazol Etapa A: (R)-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00248] A uma mistura de ácido (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 10,1,00 g, 2,90 mmol) e hidrazinacarbotioamida (265 mg, 2,90 mmol) foi adicionado POCl3 (1,08 mL, 11,6 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 3 horas em tubo selado ao mesmo tempo que pressão acumulada foi liberada a cada hora. Depois de ser resfriada a 0 °C, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi agitada vi-gorosamente durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e secado em vácuo para proporcionar (R)- 5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4- tiadiazol-2-amina (1,16 g, >99 %) como um sólido amarelo pálido, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,85-2,20 (3H, m), 2,45-2,55 (1H, m), 3,50-3,75 (4H, m), 5,38 (0,5H, d, J = 8,0 Hz), 5,50 (0,5H, d, J = 7,6 Hz), 6,15 (0,5H, d, J = 7,6 Hz), 6,73 (0,5H, d, J = 7,6 Hz), 6,95-7,30 (2H, m), 7,33-7,39 (1H, m), 8,37 e 8,49 (1H, s+s), 8,72 (0,5H, d, J = 6,0 Hz), 8,92 (0,5H, d, J = 7,6 Hz). 9,36 (1H, br. s). Etapa B: (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol
[00249] A uma solução de CuBr2 (777 mg, 3,48 mmol) e terc-butil nitrito (4,14 mL, 3,48 mmol) em CH3CN (9,6 mL) foi adicionado uma solução de (R)-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (1,15 g, 2,90 mmol) em CH3CN (19 mL) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 65 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e EtOAc. A camada aquosa separada foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1 a 1:2) para proporcionar (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (586 mg, 43 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,14-2,18 (3H, m), 2,462,56 (1H, m), 3,63-3,82 (1H, m), 4,03-4,07 (1H, m), 5,36 (0,3 H, d, J = 8,4 H), 5,46 (0,7H, d. J = 8,4), 6,37 (0,3H, d. J = 7,2 Hz), 6,72 (0,7H, d, J = 8,0 Hz), 6,95-7,40 (3H, m), 8,40 e 8,50 (1H, s+s), 8,66 (0,3H, d , J = 7,2 Hz), 8,85 (0,7H, d, J = 7,6 Hz). Etapa C: (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)-1,3,4-tiadiazol
[00250] Uma mistura de (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (100 mg, 0,216 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-carboxilato (127 mg, 0,432 mmol), K3PO4 (137 mg, 0,648 mmol) e aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (35,0 mg, 0,043 mmol) em dioxano (1,9 mL) e água (0,21 mL) foi desgaseifi- cada com gás N2. A mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 15 horas em um tubo selado. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com EtOAc e filtrado através de uma almofada de sílica gel. O filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 50 : 1 a 15 : 1) para proporcionar o (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-(1H-pirazol-4-il)-1,3,4-tiadiazol (14,0 mg, 14 %) como um sólido branco. MS: 451,2 [MH+]. Exemplo 31: Preparação do Composto Químico 20: (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1 -il)-3-(1-(piperidin-4-il)-1H-1,2,3-triazol-4- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina
[00251] Uma mistura de (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (100 mg, 0,216 mmol), ácido 1H-pirazol-3-ilborônico (48,0 mg, 0,432 mmol), K3PO4 (137 mg, 0,648 mmol) e aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (35,0 mg, 0,043 mmol) em dioxano (1,9 mL) e água (0,21 mL) foi des- gaseificada com gás N2. A mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 15 horas em um tubo selado. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com EtOAc e filtrado através de uma almofada de sílica gel. O filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 50 : 1 a 15 : 1) para proporcionar o (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-(1H-pirazol-3-il)-1,3,4-tiadiazol (16,0 mg, 16 %) como um sólido branco. MS: 451,2 [MH+]. Exemplo 32: Preparação do Composto Químico 21: (R)-N-(5-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4- tiadiazol-2-il)benzamida
[00252] A uma solução de (R)-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (50,0 mg, 0,125 mmol) em DMF (0,20 mL) foi adicionado TEA (0,0130 mL) seguido por cloreto de benzoíla (0,0150 mL, 0,125 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 8 horas em temperatura ambiente e em seguida tratada com água. Um sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e secado sob vácuo. O sólido foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtO- Ac = 1:4 a 1:5) para proporcionar (R)-N-(5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol-2- il)benzamida (23,0 mg, 36 %) como um sólido amarelo pálido. MS: 504,3 [MH+]. Exemplo 33: Preparação do Composto Químico 22 Composto Químico 22: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1- (piperidin-4-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina
[00253] A uma solução de (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (89,0 mg, 0,192 mmol) e piperazina (41,0 mg, 0,480 mmol) em DMF (2,4 mL) foi adicionado DIPEA (0,0840 mL, 0,480 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 70 °C durante 16 horas, resfriada em temperatura ambiente e vertida em água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sob Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1 a MeOH apenas) para proporcionar (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-5-(piperazin-1-il)-1,3,4-tiadiazol (12,0 mg, 13 %) como um sólido amarelo. MS: 469,3 [MH+]. Exemplo 34: Preparação do Composto Químico 23: (R)-2-(1,4- diazepan-1 -il)-5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1 -il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol
[00254] A uma solução de (R)-2-bromo-5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (100 mg, 0,216 mmol) e 1,4-diazepano (43,0 mg, 0,432 mmol) em DMF (2,7 mL) foi adicionado DIPEA (0,113 mL, 0,648 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 70 °C durante 16 horas, resfriada em temperatura ambiente e vertida em água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sob Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1 a MeOH apenas) para proporcionar (R)-2-(1,4-diazepan-1-il)-5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-tiadiazol (16,0 mg, 15 %) como um sólido amarelo. MS: 483,3 [MH+]. Exemplo 35: Preparação do Composto Químico 24 Composto Químico 24: (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-(piperidin-4-il)-1,3,4-oxadiazol Etapa A: terc-butil 4-(hidrazinacarbonil)piperidina-1-carboxilato
[00255] A uma solução de 1-terc-butil 4-etil piperidina-1,4- dicarboxilato (2,00 g, 7,77 mmol) em EtOH (26 mL) foi adicionado hidrato de hidrazina (5,84 g, 117 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi refluxada durante a noite, resfriada em temperatura ambiente e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM, lavado com água 3 vezes e salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo para proporcionar terc-butil 4- (hidrazinacarbonil)piperidina-1-carboxilato (985 mg, 52 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,46 (9H, s), 1,581,70 (2H, m), 1,73-1,85 (2H, m), 2,19-2,26 (1H, m), 2,27 (2H, br. s), 3,90 (2H, s), 4,15 (2H, br. s), 6,99 (1H, s). Etapa B: (R)-terc-butil 4-(2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonil)hidrazinacarbonil)piperidina-1- carboxilato
[00256] A uma solução de ácido (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (Intermediário 10, 200 mg, 0,581 mmol) em DMF (3,8 mL) foram adicionados terc-butil 4- (hidrazinacarbonil)piperidina-1-carboxilato (212 mg, 0,871 mmol), DIPEA (0,304 mL, 1,74 mmol), HATU (331 mg, 0,871 mmol) em tempe- ratura ambiente, A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para produzir o (R)-terc-butil 4-(2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonil)hidrazinacarbonil)piperidina-1- carboxilato (265 mg, 80 %) como um sólido branco. MS: 569,90 [MH+]. (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5- (piperidin-4-il)-1,3,4-oxadiazol
[00257] A uma solução de (R)-terc-butil 4-(2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbonil)hidrazinacarbonil)piperidina-1-carboxilato (90,0 mg, 0,158 mmol) em DCM (1,0 mL) foi adicionado piridina (0,0290 mL, 0,363 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e anidrido tríflico (0,0560 mL, 0,332 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1 a 5 : 1) para proporcionar (R)-2-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5-(piperidin-4-il)-1,3,4-oxadiazol (31,0 mg, 43 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,28 (4H, m), 2,30-2,62 (4H, m), 3,13-3,33 (2H, m), 3,35- 3,74 (4H, m), 3,82-4,22 (2H, m), 5,21 e 5,76 (1H, s+s), 5,93 e 6,42 (1H, s+s), 6,65-6,80 (1H, m), 6,58-7,15 (2H, m), 8,19-8,38 (2H, m). Exemplo 36: Preparação do Composto Químico 25: (R)-2-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5- (piperidin-4-il)-1,3,4-tiadiazol
[00258] A uma solução de (R)-terc-butil 4-(2-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbonil)hidrazinacarbonil)piperidina-1-carboxilato (90,0 mg, 0,158 mmol) em diglima (3,1 mL) foram adicionados P4S10 (140 mg, 0,316 mmol) e Na2CO3 (67,0 mg, 0,632 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada a 90 °C durante 2 horas, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 10 : 1) para proporcionar (R)-2-(5- (2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-5- (piperidin-4-il)-1,3,4-tiadiazol (49,0 mg, 66 %) como um sólido amarelo. MS: 468,2 [MH+]. Exemplo 37: Preparação do Composto Químico 26 Composto Químico 26: 2-terc-butil-5-(5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol Etapa A: (R)-etil 5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato
[00259] Uma mistura de etil 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (100 mg, 0,443 mmol), (2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina (Intermediário 6, 94,0 mg, 0,465 mmol) e KF (129 mg, 2,21 mmol) em DMSO (1,5 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar (R)-etil 5-((2R,4S)-2- (2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (161 mg, 93 %) como um espuma amarela pálida. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,16-1,30 (3H, m), 2,10-2,34 (1H, m), 2,73-2,95 (1H, m), 4,00-4,30 (3H, m), 4,52 e 5,47 (1H, s+s), 5,49-5,67 (2H, m), 6,11 e 6,74 (1H, s+s), 7,12-7,40 (3H, m), 8,15-8,30 (1H, m), 8,60-8,82 (1H, m). Etapa B: ácido 5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico
[00260] A uma solução de etil 5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (161 mg, 0,412 mmol) em EtOH (3,0 mL) e água (1,0 mL) foi adicionado LiOH (30,0 mg, 1,24 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da eva-poração de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6, e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas or-gânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido 5- ((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxílico (107 mg, 72 %) como um sólido branco. 1H- RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 2,93-2,37 (1H, m), 2,70-2,95 (1H, m), 3,94-4,60 (2H, m), 5,35-5,68 (2H, m), 6,11 e 6,71 (1H, s+s), 7,00-7,40 (3H, m), 8,17 (1H, s), 8,60-6,82 (1H, m), 11,60 (1H, br. s). Etapa C: 5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00261] A uma solução de ácido 5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (107 mg, 0,295 mmol) em DMF (2,0 mL) foram adicionados cloridrato de pivalo- hidrazida (135 mg, 0,886 mmol), DIPEA (0,206 mL, 1,18 mmol) e HATU (168 mg, 0,443 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5- ((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (101 mg, 74 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,171,26 (9H, m), 2,10-2,30 (1H, m), 2,78-2,95 (1H, m), 4,10-4,38 (2H, m), 5,35-5,67 (2H, m), 6,14 (0,3H, s), 6,76 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 7,02-7,40 (3H, m), 8,15 e 8,24 (1H, s+s), 8,39 e 8,71 (1H, s+s), 8,86 (1H, d, J = 7,2 Hz), 9,48 e 9,83 (1H, s+s). Etapa D: 2-terc-butil-5-(5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol
[00262] A uma solução de 5-((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo- hidrazida (101 mg, 0,219 mmol) em DCM (1,5 mL) foi adicionado piri- dina (0,0410 mL, 0,505 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e em seguida anidrido tríflico (0,0780 mL, 0,461 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAC = 1 : 1) para proporcionar 2-terc-butil-5-(5- ((2R,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol (68,0 mg, 70 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,23-1,44 (9H, m), 2,102,38 (1H, m), 2,80-3,00 (1H, m), 4,00-4,60 (2H, m), 5,35-5,51 (1H, m), 5,52-5,71 (1H, m), 6,14 e 6,81 (1H, s+s), 7,02-7,40 (3H, m), 8,38 (1H, s), 8,71-8,87 (1H, m). MS: 443,4 [MH+]. Exemplo 38: Preparação do Composto Químico 27 Composto Químico 27: 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo- hidrazida Etapa A: 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato.
[00263] Uma mistura de etil 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (112 mg, 0,496 mmol), (2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidina (Intermediário 7, 105 mg, 0,521 mmol) e KF (114 mg, 2,48 mmol) em DMSO (1,6 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar etil 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (171 mg, 88 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,04-1,38 (3H, m), 2,17-2,40 (1H, m), 2,62-2,98 (1H, m), 3,85-4,39 (4H, m), 5,455,53 (1H, m), 5,61 e 5,75 (1H, s+s), 6,17 e 6,71 (1H, s+s), 6,87-6,95 (1H, m), 7,05-7,40 (2H, m), 8,18-8,29 (1H, m), 8,60-8,90 (1H, m). Etapa B: ácido 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico
[00264] A uma solução de etil 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (171 mg, 0,438 mmol) em EtOH (3,3 mL) e água (1,1 mL) foi adicionado LiOH (31,0 mg, 1,31 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6, e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido 5- ((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxílico (150 mg, 95 %) como um sólido amarelo. 1H- RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 2,26-2,34 (1H, m), 2,70-2,95 (1H, m), 3,92-4,18 (1H, m), 4,20-4,38(1H, m), 5,46-6,17 (3H, m), 6,846,92 (1H, m), 7,09-7,19 (1H, m), 7,25-7,28 (1H, m), 8,18 (1H, s), 8,608,75 (1H, m). * Um próton de CO2H não foi observado. Etapa C: 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00265] A uma solução de ácido 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (150 mg, 0,414 mmol) em DMF (2,7 mL) foram adicionados cloridrato de pivalo- hidrazida (190 mg, 1,24 mmol), DIPEA (0,289 mL, 1,65 mmol) e HATU (236 mg, 0,621 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5- ((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (102 mg, 53 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 2,15-2,40 (1H, m), 2,70-2,98 (1H, m), 3,88-4,18 (1H, m), 4,20-4,45 (1H, m), 5,40-5,60 (2H, m), 6,75 (1H, d, J = 7,6 Hz), 6,857,40 (3H, m), 8,17 e 8,27 (1H, s+s), 8,53 e 8,71 (1H, s+s), 8,91 (1H, d, J = 7,6 Hz), 9,39 e 9,55 (1H, s+s). Etapa D: 2-terc-butil-5-(5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol
[00266] A uma solução de 5-((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4- fluoropirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo- hidrazida (102 mg, 0,222 mmol) em DCM (1,5 mL) foi adicionado piri- dina (0,0410 mL, 0,509 mmol) a 0 °C. A mistura foi resfriada a - 10 °C, e em seguida anidrido tríflico (0,0790 mL, 0,465 mmol) foi adicionado gota a gota a isto. A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 1 hora e em seguida a 0 °C durante 1 hora. Depois de extinguida com água, a mistura foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3) para proporcionar 2-terc-butil-5-(5- ((2S,4S)-2-(2,5-difluorofenil)-4-fluoropirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol (28,0 mg, 26 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,15-1,52 (9H, m), 2,202,40 (1H, m), 2,65-2,81 (1H, m), 3,88-4,38 (2H, m), 5,40-5,85 (2H, m), 6,19-6,75 (1H, m), 6,85-7,40 (3H, m), 8,34 (1H, s), 8,70-8,70 (1H, m). MS: 443,4 [MH+]. Exemplo 39: Preparação do Composto Químico 28 Composto Químico 28: 2-terc-butil-5-(5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol Etapa A: Etil 5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato
[00267] Uma mistura de etil 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxilato (200 mg, 0,886 mmol), 5-fluoro-2-metóxi-3-(pirrolidin-2- il)piridina (Intermediário 3, 186 mg, 0,948 mmol) e KF (257 mg, 4,43 mmol) em DMSO (3,0 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica separada foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar etil 5-(2-(5-fluoro-2- metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (225 mg, 74 %) como uma espuma branca. 1H-RMN (DMSO-d6, Vari- an, 400 MHz): δ 1,25-1,30 (3H, m), 1,88-2,08 (3H, m), 2,23-2,37 (1H, m), 3,48-3,85 (1H, m), 3,90-4,09 (5H, m), 4,15-4,30 (1H, m), 5,14 (0,3H, m), 5,48 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 5,98 (0,3H, m), 6,65 (0,7H, d, J = 6,8 Hz), 7,22-7,41 (1H, m), 7,93-8,11 (1H, m), 8,12-8,30 (1H, m). 8,53 (0,3H, s), 8,76 (0,7H, d, J = 7,2 Hz). Etapa B: ácido 5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico
[00268] A uma solução de etil 5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3- il)ciclopentil)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato (255 mg, 0,663 mmol) em EtOH (5,0 mL) e água (1,6 mL) foi adicionado LiOH (48,0 mg, 1,99 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6, e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido 5-(2-(5-fluoro-2- metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (170 mg, 72 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,82-2,08 (3H, m), 2,26-2,48 (1H, m),3,45-3,80 (2H, m), 3,88-4,08 (3H, m), 5,15 e 5,46 (1H, s+s), 6,64 e 7,34 (1H, s+s), 7,34 (1H, s), 7,92-8,18 (2H, m), 8,42-8,85 (1H, m). * Um próton de CO2H não foi observado. Etapa C: 5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'- pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida
[00269] A uma solução de ácido 5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico (170 mg, 0,476 mmol) em DMF (3,1 mL) foram adicionados cloridrato de pivalo- hidrazida (218 mg, 0,1,43 mmol), DIPEA (0,332 mL, 1,90 mmol) e HATU (271 mg, 0,714 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5-(2-(5- fluoro-2-metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (164 mg, 76 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,10-1,23 (9H, m), 1,77-2,10 (3H, m), 2,20-2,48 (1H, m), 3,57-3,78 (1H, m), 3,88-3,99 (3H, m), 4,004,10 (1H, m), 5,19 (0,3H, d, J = 7,2 Hz), 5,31 (0,7H, d, J = 8,8 Hz), 6,01 (0,3H, d, J = 8,4 Hz), 6,69 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 7,3-7,42 (1H, m), 7,897,98 (1H, m), 8,05-8,18 (1H, m), 8,19-8,32 (1H, m), 8,60 (0,3H, d, J = 8,0 Hz), 8,83 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 9,29 e 9,54 (1H, s+s). Etapa D: 2-terc-butil-5-(5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1,3,4-oxadiazol
[00270] Uma mistura de 5-(2-(5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)pirrolidin- 1-il)-N'-pivaloilpirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbo-hidrazida (110 mg, 242 mmol) e POCl3 (0,675 mL, 7,25 mmol) foi refluxada durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi dividida entre água e DCM. A camada orgânica separada foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1 a 1:4) para proporcionar 2-terc-butil-5-(5-(2- (5-fluoro-2-metoxipiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)- 1,3,4-oxadiazol (61,0 mg, 58 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,22 e 1,44 (9H, s+s), 1,70-2,10 (3H, m), 2,20-2,40 (1H, m), 3,52-3,85 (1H, m), 3,95-4,12 (4H, m), 5,15 (0,3H, d, J = 7,6 Hz), 5,50 (0,7H, d, J = 7,6 Hz), 6,00 (0,3H, d, J = 7,2 Hz), 6,70 (0,7H, d, J = 8,0 Hz), 7,23-7,42 (1H, m), 7,95-8,15 (1H, m), 8,30-8,42 (1H, m), 8,60 (0,3H, d, J = 7,2 Hz), 8,83 (0,7H, d, J = 7,2 Hz). MS: 438,4 [MH+]. Exemplo 40: Preparação do Composto Químico 29 Composto Químico 29: 5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)oxazol Etapa A: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbaldeído
[00271] Uma mistura de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbaldeído (300 mg, 1,65 mmol), 2-(2,5-difluorofeil)pirrolidina (Intermediário 2, 324 mg, 1,77 mmol) e KF (480 mg, 8,26 mmol) em DMSO (5,5 mL) foi aquecida a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1) para proporcionar 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (540 mg, 100 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,90-2,28 (3H, m), 2,38-2,60 (1H, m), 3,60-4,18 (2H, m), 5,14-5,28 (0,6H, m), 5,545,72 (0,4H, m), 5,84-6,02 (0,6H, m), 6,35-6,46 (0,4H, m), 6,68-6,78 (1H, m), 6,82-7,20 (2H, m), 8,10-8,36 (2H, m), 9,77 e 10,11 (1H, s+s). Etapa B: 5-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin- 3-il)oxazol
[00272] A uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (300 mg, 0,914 mmol) em MeOH (9,2 mL) foram adicionados 1-(isocianometilsulfonil)-4- metilbenzeno (178 mg, 0,914 mmol) e K2CO3 (126 mg, 0,914 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi refluxada durante 4 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de MeOH, o resíduo foi dividido entre DCM e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar 5-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)oxazol (46,0 mg, 13 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (MeOH-d4, Varian, 400 MHz): δ 1,95-2,25 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,50-3,88 (2H, m), 3,89-4,10 (1H, m), 5,20-5,70 (1H, m), 6,56-6,77 (1H, m), 6,80-7,20 (3H, m), 7,077,20 (1H, m), 7,92-8,20 (1H, m), 8,22-8,55 (1H, m). MS: 368,2 [MH+]. Exemplo 41: Preparação do Composto Químico 30 Legenda da Figura: - r.t. = temperatura ambiente Composto Químico 30: 4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)isoxazol Etapa A: 5-cloro-3-iodopirazolo[1,5-a]pirimidina
[00273] A uma solução de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina (1,00 g, 6,51 mmol) em DMF (13 mL) foi adicionado em porções N- iodossucinamida (1,61 g, 7,16 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente. Depois da adição de água, a mistura foi agitada durante outros 30 min em temperatura ambiente. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar 5-cloro-3-iodopirazolo[1,5- a]pirimidina (1,74 g, 96 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 7,15 (1H, d, J = 7,2 Hz), 8,34 (1H, s), 9,17 (1H, d, J = 7,2 Hz). Etapa B: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-iodopirazolo[1,5- a]pirimidina
[00274] Uma solução de 5-cloro-3-iodopirazolo[1,5-a]pirimidina (621 mg, 2,22 mmol), 2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina (Intermediário 2, 407 mg, 2,22 mmol) e KF (645 mg, 11,1 mmol) em DMSO (7,4 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi diluída com água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas fo- ram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concen-tradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 5 : 1 a 3 : 1 a 2 : 1) para proporcionar 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-iodopirazolo[1,5-a]pirimidina (819 mg, 86 %) um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,15 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,50-3,80 (1H, m), 3,953,99 (1H, m), 5,21-5,51 (1H, m), 5,99 e 6,53 (1H, s+s), 6,97 (1H, s), 7,11-7,26 (1H, m), 7,95 (1H, m), 8,44-8,64 (1H, m). Etapa C: 4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin- 3-il)isoxazol
[00275] Uma mistura de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- iodopirazolo[1,5-a]pirimidina (40,0 mg, 0,0940 mmol), K3PO4 (60,0 mg, 0,282 mmol), aduzido de PdCh(dppf)-CH2Ch (7,66 mg, 9,39 μmol) e ácido isoxazol-4-ilborônico (21,0 mg, 0,188 mmol) em dioxano (0,90 mL) e água (0,10 mL) foi desgaseificada com gás N2. A mistura reacio- nal foi aquecida a 100 °C durante 15 horas em um frasco selado e resfriada em temperatura ambiente. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com EtOAc, filtrado através de uma almofada de sílica gel. O filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3 a 1:4) para proporcionar 4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)isoxazol (5,90 mg, 17 %) como um óleo marrom. 1H- RMN (MeOH-d4, Varian, 400 MHz): δ 1,95-2,20 (3H, m), 2,40-2,60 (1H, m), 3,50-4,12 (3H, m), 5,12-5,70 (1H, m), 5,80-6,40 (1H, m), 6,74 (1H, s), 6,92 (1H, s), 7,00-7,18 (1H, m), 8,00 (1H, s), 8,10-8,50 (2H, m). MS: 368,2 [MH+]. Exemplo 42: Preparação do Composto Químico 31: 4-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3,5- dimetilisoxazol
[00276] Uma mistura de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- iodopirazolo[1,5-a]pirimidina (90,0 mg, 0,211 mmol), K3PO4 (134 mg, 0,634 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (17,0 mg, 0,0210 mmol) e ácido 3,5-dimetilisoxazol-4-ilborônico (60,0 mg, 0,422 mmol) em dioxano (1,9 mL) e água (0,21 mL) foi desgaseificada com gás N2. A mistura reacional foi aquecida a cerca de 100 °C durante 15 horas em um tubo selado, resfriada em temperatura ambiente e dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica separada foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1:3 a 1:4) para proporcionar 4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3,5-dimetilisoxazol (13,0 mg, 15 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,95-2,63 (10H, m), 3,70 (1H, s), 3,91 (1H, s), 5,08-5,55 (1H, m), 5,70-6,38 (1H, m), 6,84 (1H, m), 6,91 (1H, m), 7,00-7,10 (1H,m ), 7,84 (1H, s), 8,27 (1H, m). MS: 369,2 [MH+]. Exemplo 43: Preparação do Composto Químico 32 Composto Químico 32: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(5-metil- 1H-1,2,4-triazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina Etapa A: 5-oxo-4,5-di-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonitrila
[00277] Uma mistura de 5-amino-1H-pirazol-4-carbonitrila (1,00 g, 9,25 mmol), etil 3-etoxiacrilato (2,00 mL, 13,8 mmol) e Cs2CO3 (4,52 g, 13,88 mmol) em DMF (18 mL) foi aquecida a 100 °C durante 9 horas. A mistura reacional foi resfriada a 0 °C e acidificada com HCl aq. a 2 N até o pH = 2-3. Um sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com água, seguido por EtOAc e secado sob vácuo para proporcionar 5-oxo-4,5-di-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonitrila (1,33 g, 90 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 6,24 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,31 (1H, s), 8,63 (1H, d, J = 7,6 Hz), 13,24 (1H, br. s). Etapa B: 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonitrila
[00278] Uma mistura de 5-oxo-4,5-di-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina- 3-carbonitrila (1,33 g, 8,31 mmol) e POCl3 (7,74 mL, 83 mmol) foi aquecida a 150 °C durante 3 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1) para proporcionar 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonitrila (343 mg, 23 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 7,09 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,39 (1H, s), 8,68 (1H, d, J = 7,2 Hz). Etapa C: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbonitrila
[00279] Uma mistura de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbonitrila (343 mg, 1,92 mmol) e 2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina (Intermediário 2, 343 mg, 1,87 mmol) em DMSO (10 mL) foi aquecida a 180 °C durante 1 hora e resfriada em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com água e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1 a 1 : 1) para proporcionar 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonitrila (611 mg, 98 %) como um sólido marfim. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,05-2,11 (3H, m), 2,47-2,55 (1H, m), 3,67-4,10 (2H, m), 5,20 (0,7 H, s), 5,65 (0,3 H, s), 5,96 (0,7 H, s), 6,43 (0,3 H, s), 6,69-6,73 (1H, m), 6,96-7,09 (2H, m), 8,01-8,31 (3H, m). Etapa D: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxamida
[00280] Uma mistura de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonitrila (230 mg, 0,707 mmol) e H2SO4 conc. (1,13 mL, 21,2 mmol) foi agitada a 0 °C durante 5 horas. Depois da adição de gelo-água, a mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carboxamida (172 mg, 71 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,05-1,11 (2H, m), 2,47-2,55 (1H, m), 3,67-4,10 (2H, m), 5,12-5,32 (1H, m), 5,52 (0,6H, s), 5,74 (0,4H, s), 5,90 (0,4H, s), 6,32 (0,6H, s), 6,69-6,74 (1H, m), 6,96-7,09 (2H, m), 7,80 (0,5H, s), 8,20 (0,5H, s), 8,25-8,40 (1H, m). * Dois prótons de NH2NH2 não foram observados. Etapa E: (Z)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N-(1- (dimetilamino)etilideno)-pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida
[00281] Uma mistura de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida (100 mg, 0,291 mmol) e 1,1- dimetóxi-N,N-dimetiletanamina (1,06 mL, 7,28 mmol) foi aquecida 120 °C durante 2 horas em um tubo selado. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente e concentrada em vácuo para proporcionar (Z)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N-(1- (dimetilamino)etilideno)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida cru (160 mg, 99 %), que foi usado para a próxima reação sem outra purifi-cação. Etapa F: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(5-metil-1H-1,2,4-triazol- 3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina
[00282] A uma solução de (Z)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-N- (1-(dimetilamino)etilideno)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida cru (160 mg, 0,291 mmol) em AcOH (1,0 mL) foi adicionado hidrato de hi- drazina (22,0 mg, 0,437 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 2 horas e em seguida concentrada em vácuo. O resíduo foi tratado com água, ao mesmo tempo que um sólido foi precipitado. O sólido foi coletado por filtração, lavado com água e hexanos e secado sob vácuo para proporcionar 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(5- metil-1H-1,2,4-triazol-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina (58,0 mg, 52 %) como um sólido branco. 1H-RMN (MeOH-d4, Varian, 400 MHz): δ 1,922,26 (3H, m), 2,34 (3H, m), 2,44-2,60 (2H, m), 3,67-4,22 (2H, m), 5,17 (0,4H, s), 5,68 (0,6H, s), 6,11 (0,4H, s), 6,65 (0,6H, s), 6,80-7,20 (2H, m), 7,20-7,43 (1H, m), 8,20-8,60 (2H, m). MS: 382,3 [MH+]. Exemplo 44: Preparação do Composto Intermediário 13 Legenda da Figura: - r.t. = temperatura ambiente Composto Intermediário 13: terc-butil 3-(4-(5-((R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)piperidina-1-carboxilato Etapa A: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina
[00283] Uma mistura de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina (1,18 g, 7,68 mmol), (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidina (1,51 g, 8,22 mmol) e KF (2,32 g, 39,1 mmol) em DMSO (26 mL) foi aquecida a 180 °C durante 2 horas. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente e vertida em água. A mistura foi agitada durante 30 min adicionais em temperatura ambiente. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina (1,70 g, 74 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,88-2,06 (3H, m), 2,33-2,45 (1H, m), 3,56-3,70 (1H, m), 3,90-4,00 (1H, m), 5,38 (1H, s), 5,98 (1H, s), 6,10-6,50 (1H, m), 6,85-6,91 (1H, m), 7,10-7,15 (1H, m), 7,26-7,32 (1H, m), 7,81 (1H, d, J = 1,6 Hz), 8,60 (1H, s). Etapa B: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-iodopirazolo[1,5- a]pirimidina
[00284] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina (975 mg, 3,25 mmol) em DMF (6,5 mL) foi adicionado em porções NIS (804 mg, 3,57 mmol) em temperatura am-biente. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas e vertida em água. A mistura foi agitada durante outros 30 min. Um sólido precipitado foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar (R)- 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-iodopirazolo[1,5-a]pirimidina (1,19 g, 86 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,15 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,50-3,80 (1H, m), 3,95-3,99 (1H, m), 5,21-5,51 (1H, m), 5,99 e 6,53 (1H, s+s), 6,97 (1H, s), 7,11-7,26 (1H, m), 7,95 (1H, m), 8,44-8,64 (1H, m). Etapa C: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- ((trimetilsilil)etinil)pirazolo-[1,5-a]pirimidina
[00285] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- iodopirazolo[1,5-a]-pirimidina (1,19 g, 2,79 mmol) em THF (10 mL) e TEA (10 mL) foram adicionados CuI (53,0 mg, 0,279 mmol), PdCl2(PPh3)2 (196 mg, 0,279 mmol) e etiniltrimetilsilano (0,596 mL, 4,19 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Depois da filtração através de almofada em Celite ao mesmo tempo que lavando com EtOAc, o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi diluído com EtOAc, lavado com salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 2 : 1 a 1 : 1) para proporcionar (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- ((trimetilsilil)etinil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (832 mg, 75 %) como um óleo amarelo viscoso. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 0,260 (9H, s), 2,03-2,20 (3H, m), 2,49 (1H, br. s), 3,63-4,15 (2H, m), 5,17 e 6,25 (1H, br. s + br. s), 5,83 (1H, br. s), 6,73-6,77 (1H, m), 6,91 (1H, br. s), 7,04 (1H, br. s), 7,93 (1H, s), 8,11 (1H, br. s). Etapa D: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-etinilpirazolo[1,5- a]pirimidina
[00286] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- ((trimetilsilil)etinil)-pirazolo[1,5-a]pirimidina (832 mg, 2,10 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado TBAF (solução a 1 M em THF, 2,52 mL, 2,52 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 min. Depois de extinguida com NH4Cl aq. saturado, a mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 3:2 a 1 : 1) para proporcionar (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-etinilpirazolo[1,5-a]pirimidina (659 mg, 97 %) como um óleo amarelo viscoso. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,98-2,18 (3H, m), 2,50 (1H, br. s), 3,24 (1H, s), 3,93 (1H, br. s), 4,06 (1H, br. s), 5,19 (1H, br. s), 5,87 (1H, br. s), 6,75 (1H, br. s), 6,92 (1H, br. s), 7,05 (1H, br. s), 7,96 (1H, s), 8,14 (1H, br. s). Exemplo 45: Preparação do Composto Químico 33 Composto Químico 33: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1- (piperidin-4-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina Etapa A: terc-butil 4-hidroxipiperidina-1-carboxilato
[00287] A uma solução de terc-butil 4-oxopiperidina-1-carboxilato (1,00 g, 5,02 mmol) em MeOH (16 mL) foi adicionado NaBH4 (285 mg, 7,53 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 hora. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dividido entre EtOAc e água. A camada aquosa separada foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar terc-butil 4- hidroxipiperidina-1-carboxilato (1,01 g, 100 %) como um óleo amarelo viscoso pálido, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,46 (9H, s), 1,48-1,50 (2H, m), 1,84-1,87 (2H, m), 2,99-3,06 (2H, m), 3,81-3,87 (3H, m). * OH não foi observado. Etapa B:terc-butil 4-(metilsulfonilóxi)piperidina-1-carboxilato
[00288] A uma solução de terc-butil 4-hidroxipiperidina-1-carboxilato (1,01 g, 5,02 mmol) em DCM (16 mL) foram adicionados TEA (0,909 mL, 6,52 mmol) e DMAP (61,0 mg, 0,502 mmol) seguido por MsCl (0,469 mL, 6,02 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM, lavada com água, HCl aq. a 2 N, NaHCO3 aq. saturado e salmoura sucessivamente, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar terc-butil 4-(metilsulfonilóxi)piperidina-1- carboxilato (1,40 g, 100 %) como um sólido branco, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,46 (9H, s), 1,78-1,86 (2H, m), 1,94-1,99 (2H, m), 3,04 (3H, s), 3,27-3,34 (2H, m), 3,68-3,72 (2H, m), 4,86-4,91 (1H, m). Etapa C: terc-butil 4-azidopiperidina-1-carboxilato
[00289] A uma solução de terc-butil 4-(metilsulfonilóxi)piperidina-1- carboxilato (1,40 g, 5,02 mmol) em DMF (25 mL) foi adicionado azida de sódio (979 mg, 15,0 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 12 horas com agitação, ao mesmo tempo que um sólido branco foi formado. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dividido entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtO- Ac. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 5 : 1) para proporcionar terc-butil 4-azidopiperidina-1-carboxilato (948 mg, 83 %) como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,46 (9H, s), 1,53-1,57 (2H, m), 1,85-1,88 (2H, m), 3,05-3,12 (2H, m), 3,54-3,60 (1H, m), 3,81-3,84 (1H, m). Etapa D: (R)-terc-butil 4-(4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)piperidina-1- carboxilato
[00290] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- etinilpirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermediário 13, 144 mg, 0,444 mmol) e terc-butil 4-azidopiperidina-1-carboxilato (111 mg, 0,488 mmol) em tBuOH (2,0 mL) foi adicionado pó de cobre (23,0 mg, 0,355 mmol) se-guido por água (1,0 mL) e solução aq. a 1 M de sulfato de cobre (0,089 mL, 0,089 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 90 min. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente e diluída com EtOAc. Depois da adição de NH4OH conc. (2,0 mL) seguido por água (2,0 mL), a mistura foi vigorosamente agitada durante 30 min e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concen-tradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 30 : 1) para pro-porcionar (R)-terc-butil-4-(4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)piperidina-1- carboxilato (177 mg, 72 %) como uma espuma amarela. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,49 (9H, s), 1,83-2,22 (7H, m), 2,48 (1H, br. s), 2,97 (2H, s), 3,66 (1H, br. s), 3,91 (1H, br. s), 4,35 (2H, br. s), 4,67 (1H, br. s), 5,70 (1H, br. s), 6,34 (1H, br. s), 6,75 (1H, br. s), 6,91 (1H, br. s), 7,13 (1H, br. s), 7,52 (1H, s), 8,35 (1H, br. s), 8,48 (1H, s). Etapa E: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(piperidin-4-il)- 1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina
[00291] A uma solução de (R)-terc-butil-4-(4-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)piperidina-1-carboxilato (177 mg, 0,321 mmol) em DCM (1,6 mL) foi adicionado TFA (0,867 mL, 11,2 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Depois da con-centração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, lavado com NaHCO3 aq. saturado e salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e con-centrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 10 : 1 a 3 : 1 a 2 : 1) para proporcionar (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(piperidin-4-il)-1H- 1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina (100 mg, 69 %) como uma espuma amarela. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,83-2,30 (8H, m), 2,50 (1H, br. s), 2,85 (2H, t, J = 11,2 Hz), 3,30-3,33 (2H, m), 3,69 (1H, br. s), 3,93 (1H, br. s), 4,58 (1H, br. s), 5,24 e 5,68 (1H, br. s + br. s), 5,87 e 6,30 (1H, br. s + br. s), 6,75 (1H, br. s), 6,90 (1H, br. s), 7,12 (1H, br. s), 7,57 (1H, s), 8,30 (1H, br. s), 8,48 (1H, s). MS: 451,1 [MH+]. Exemplo 46: Preparação do Composto Químico 34: 5-((R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1 -il)-3-(1-(piperidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-4- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina Etapa A: terc-butil 3-(metilsulfonilóxi)piperidina-1-carboxilato
[00292] A uma solução de terc-butil 3-hidroxipiperidina-1-carboxilato (1,00 g, 4,97 mmol) em DCM (16 mL) foi adicionado TEA (0,895 mL, 6,46 mmol) seguido por MsCl (0,465 mL, 5,96 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM, lavada com água, HCl aq. a 2 N, NaHCO3 aq. saturado, e salmoura sucessivamente, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar terc-butil 3-(metilsulfonilóxi)piperidina-1-carboxilato (1,39 g, 100 %) como um óleo incolor, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 1,55 (1H, br. s), 1,78-2,01 (3H, m), 3,06 (3H, s), 3,28-3,38 (1H, m), 3,42-3,48 (1H, m), 3,54-3,68 (2H, m), 4,72 (1H, br. s). Etapa B: terc-butil 3-azidopiperidina-1-carboxilato
[00293] A uma solução de terc-butil 3-(metilsulfonilóxi)piperidina-1- carboxilato (1,39 g, 4,98 mmol) em DMF (24 mL) foi adicionado azida de sódio (970 mg, 14,9 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 4 horas com agitação, ao mesmo tempo que um sólido branco foi formado. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dividido entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtO- Ac. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 20 : 1 a 10 : 1 a 5 : 1) para proporcionar terc-butil 3-azidopiperidina-1- carboxilato (840 mg, 74 %) como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 1,49-1,62 (2H, m), 1,77 (1H, br. s), 1,96 (1H, br. s), 2,90-3,30 (2H, m), 3,44-3,50 (1H, m), 3,52-3,90 (2H, m). Etapa C: terc-butil 3-(4-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)piperidina-1- carboxilato
[00294] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- etinilpirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermediário 13, 92,0 mg, 0,284 mmol) e terc-butil 3-azidopiperidina-1-carboxilato (71,0 mg, 0,312 mmol) em tBuOH (1,4 mL) foram adicionados pó de cobre (14,0 mg, 0,227 mmol) seguido por água (1,0 mL) e solução aq. a 1 M de sulfato de cobre (0,057 mL, 0,057 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 90 min. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente e em seguida diluída com EtOAc. Depois da adição de NH4OH conc. (2,0 mL) seguido por água (2,0 mL), a mistura foi vigorosamente agitada durante 30 min e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas or- gânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 30 : 1) para proporcionar terc-butil 3-(4-(5-((R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)piperidina-1-carboxilato (123 mg, 79 %) como um óleo amarelo. 1H- RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,48 (9H, s), 1,63-1,76 (2H, m), 1,90-1,94 (1H, m), 2,04 (1H, br. s), 2,16 (2H, br. s), 2,29 (1H, br. s), 2,40-2,58 1H, m), 2,80-3,50 (2H, m), 3,68 (1H, br. s), 3,92 (1H, br. s), 4,18 (1H, br. s), 4,30-4,60 (2H, m), 5,23 e 5,66 (1H, br. s + br. s), 5,86 e 6,31 (1H, br. s + br. s), 6,75-6,77 (1H, m), 6,91 (1H, br. s), 7,04 (1H, br. s), 7,56 (1H, s), 8,31 (1H, br. s), 8,47 (1H, s). Etapa D: 5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(piperidin-3-il)- 1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina
[00295] A uma solução de terc-butil 3-(4-(5-((R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)piperidina-1-carboxilato (123 mg, 0,223 mmol) em DCM (1,1 mL) foi adicionado TFA (0,602 mL, 7,82 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Depois da con-centração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, lavado com NaHCO3 aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e con-centrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 10 : 1 a 3 : 1) para proporcionar 5- ((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(piperidin-3-il)-1H-1,2,3- triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina (70,0 mg, 69 %) como uma espuma amarela. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,92-1,95 (1H, m), 1,89-2,14 (8H, m), 2,28 (1H, br. s), 2,49 (1H, br. s), 2,77 (1H, t, J = 10,8 Hz) 2,85-3,18 (2H, m), 3,40 (1H, br. s), 3,66 (1H, br. s), 3,91 (1H, br. s), 4,50 (1H, br. s), 5,30 e 5,67 (1H, br. s + br. s), 5,85 e 6,29 (1H, br. s + br. s), 6,75 (1H, s), 6,90 (1H, s), 7,00-7,10 (1H, m), 7,57 (1H, s), 8,31 (1H, br. s), 8,47 (1H, s). MS: 451,1 [MH+]. Exemplo 47: Preparação do Composto Químico 35: 5-((R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1 -il)-3-(1-(pirrolidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-4- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina Etapa A: terc-butil 3-(metilsulfonilóxi)pirrolidina-1-carboxilato
[00296] A uma solução de terc-butil 3-hidroxipirrolidina-1-carboxilato (1,00 g, 5,34 mmol) em DCM (17 mL) foi adicionado TEA (0,962 mL, 6,94 mmol) seguido por MsCl (0,499 mL, 6,41 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM, lavada com água, HCl aq. a 2 N, NaHCO3 aq. saturado e salmoura sucessivamente, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar terc-butil 3-(metilsulfonilóxi)pirrolidina-1-carboxilato (1,42 g, 100 %) como um óleo incolor, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 2,06-2,20 (1H, m), 2,21-2,36 (1H, m), 3,05 (3H, s), 3,44-3,54 (1H, m), 3,54-3,72 (3H, m), 5,27 (1H, br. s). Etapa B: terc-butil 3-azidopirrolidina-1-carboxilato
[00297] A uma solução de terc-butil 3-(metilsulfonilóxi)pirrolidina-1- carboxilato (1,42 g, 5,35 mmol) em DMF (26 mL) foi adicionado azida de sódio (1,04 g, 16,0 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 4 horas com agitação, ao mesmo tempo que um sólido branco foi formado. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dividido entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtO- Ac. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 10 : 1 a 5 : 1) para proporcionar terc-butil 3-azidopirrolidina-1- carboxilato (1,07 g, 94 %) como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 2,02-2,08 (2H, m), 3,35-3,54 (4H, m), 4,14-4,16 (1H, m). Etapa C: terc-butil 3-(4-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)pirrolidina-1- carboxilato
[00298] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- etinilpirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermediário 13, 92,0 mg, 0,284 mmol) e terc-butil 3-azidopirrolidina-1-carboxilato (66,0 mg, 0,312 mmol) em tBuOH (1,4 mL) foram adicionados pó de cobre (14,0 mg, 0,227 mmol) seguido por água (1,0 mL) e solução aq. a 1 M de sulfato de cobre (0,057 mL, 0,057 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 90 min. A mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente e em seguida diluída com EtOAc. Depois da adição de NH4OH conc. (2,0 mL) seguido por água (2,0 mL), a mistura foi vigorosamente agitada durante 30 min e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas or- gânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 30 : 1) para proporcionar terc-butil 3-(4-(5-((R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)pirrolidina-1-carboxilato (127 mg, 83 %) como uma espuma amarela. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,50 (9H, s), 1,98-2,20 (3H, m), 2,22-2,63 (3H, m), 3,50-3,83 (4H, m), 3,83-4,20 (2H, m), 5,15 (1H, br. s), 5,30 e 5,66 (1H, br. s + br. s), 5,84 e 6,31 (1H, br. s + br. s), 6,75 (1H, br. s), 6,91 (1H, br. s), 7,00-7,18 (1H, m), 7,52 (1H, s), 8,32 (1H, br. s), 8,48 (1H, s). Etapa D: 5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(pirrolidin-3-il)- 1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina
[00299] A uma solução de terc-butil 3-(4-(5-((R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)pirrolidina-1-carboxilato (127 mg, 0,237 mmol) em DCM (1,2 mL) foi adicionado TFA (0,638 mL, 8,28 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Depois da con-centração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, lavado com NaHCO3 aq. saturado e salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e con-centrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 10 : 1 a 3 : 1 a 2 : 1) para proporcionar 5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(pirrolidin-3-il)-1H- 1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina (78,0 mg, 76 %) como uma espuma amarela. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,00-2,20 (4H, m), 2,26-2,60 (3H, m), 3,11 (1H, br. s), 3,24-3,46 (3H, m), 3,68 (1H, br. s), 3,91 (1H, br. s), 5,02 (1H, br. s), 5,39 e 5,64 (1H, br. s + br. s), 5,84 e 6,30 (1H, br. s + br. s), 6,75 (1H, s), 6,90 (1H, br. s), 7,06 (1H, br. s), 7,56 (1H, s), 8,31 (1H, br. s), 8,46 (1H, s). Exemplo 48: Preparação do Composto Químico 36: (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1 -il)-3-(1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-1H-1,2,3- triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina Etapa A: tetra-hidro-2H-piran-4-il metanossulfonato
[00300] A uma solução de tetra-hidro-2H-piran-4-ol (500 mg, 4,90 mmol) em DCM (16 mL) foi adicionado TEA (0,882 mL, 6,36 mmol) seguido por MsCl (0,458 mL, 5,87 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reaci- onal foi diluída com DCM, lavada com água, HCl aq. a 2 N, NaHCO3 aq. saturado e salmoura sucessivamente, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar tetra-hidro-2H-piran-4-il metanossulfonato (882 mg, 100 %) como um óleo incolor, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Va- rian, 400 MHz): δ 1,84-1,92 (2H, m), 2,03-2,07 (2H, m), 3,04 (3H, s), 3,52-3,58 (2H, m), 3,92-3,97 (2H, m), 4,87-4,93 (1H, m). Etapa B: 4-azidotetra-hidro-2H-pirano
[00301] A uma solução de tetra-hidro-2H-piran-4-il metanossulfona- to (0,882 g, 4,89 mmol) em DMF (16 mL) foi adicionado azida de sódio (954 mg, 14,68 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 2 horas. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi dividido entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 3 : 1) para proporcionar 4-azidotetra-hidro-2H-pirano (110 mg, 17 %) como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,60-1,70 (2H, m), 1,88-1,92 (2H, m), 3,44-3,50 (2H, m), 3,56-3,63 (1H, m), 3,923,97 (2H, m). Etapa C : (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(tetra-hidro-2H- piran-4-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina
[00302] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- etinilpirazolo[1,5-a]pirimidina (96,0 mg, 0,296 mmol) e 4-azidotetra- hidro-2H-pirano (41,0 mg, 0,326 mmol) em tBuOH (1,5 mL) foi adicionado pó de cobre (15,0 mg, 0,237 mmol) seguido por água (1,0 mL) e solução aq. a 1 M de sulfato de cobre (0,059 mL, 0,059 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 90 min, resfriada em temperatura ambiente e em seguida diluída com EtOAc. Depois da adição de NH4OH conc. (2,0 mL) seguido por água (2,0 mL), a mistura foi vigorosamente agitada durante 30 min e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 30 : 1) para proporcionar (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3-(1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-1H-1,2,3- triazol-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina (84,0 mg, 63 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,04-2,30 (7H, m), 2,49 (1H, br. s), 3,61 (2H, t, J = 11,6 Hz), 3,92 (1H, br. s), 4,18 (2H, t, J = 11,6 Hz), 4,73 (1H, br. s), 5,19 e 5,66 (1H, br. s + br. s), 5,88 e 6,31 (1H, br. s + br. s), 6,73-6,78 (1H, m), 6,91 (1H, br. s), 7,01-7,16 (1H, m), 7,52 (1H, s), 8,32 (1H, br. s), 8,47 (1H, s). MS: 452,2 [MH+]. Exemplo 49: Preparação do Composto Químico 37: (R)-2-(4-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H- 1,2,3-triazol-1 -il)-1 -(piperazin-1 -il)etan-1 -ona Etapa A: terc-butil 4-(2-bromoacetil)piperazina-1-carboxilato
[00303] A uma solução de terc-butil piperazina-1-carboxilato (2,00 g, 10,7 mmol) em 5 % em peso de aq NaHCO3 (36 mL) e DCM (36 mL) foi adicionado brometo de 2-bromoacetila (1,40 mL, 16,1 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C e em seguida em temperatura ambiente durante 2 horas. Depois da separação de fase, a camada orgânica foi lavada com água, HCl aq. a 2 N, água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O sólido residual foi puri-ficado por recristalização de EtOAc e hexanos para proporcionar terc- butil 4-(2-azidoacetil)piperazina-1-carboxilato (2,92 g, 89 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 3,42-3,44 (2H, m), 3,46-3,54 (4H, m), 3,58-3,60 (2H, m), 3,86 (2H, s). Etapa B: terc-butil 4-(2-azidoacetil)piperazina-1-carboxilato
[00304] Uma suspensão de terc-butil 4-(2-azidoacetil)piperazina-1- carboxilato (2,92 g, 9,51 mmol) e azida de sódio (1,54 g, 23,7 mmol) em CH3CN (47 mL) foi refluxada durante 1 hora e resfriada em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por recristalização de EtOAc e hexanos para proporcionar terc-butil 4-(2-azidoacetil)piperazina-1-carboxilato (2,28 g, 89 %) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 3,33-3,38 (2H, m), 3,42-3,50 (4H, m), 3,58-3,66 (2H, m), 3,95 (2H, s). Etapa C: terc-butil (R)-4-(2-(4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)acetil)piperazina-1- carboxilato
[00305] A uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- etinilpirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermediário 13, 100 mg, 0,308 mmol) e terc-butil 4-(2-azidoacetil)piperazina-1-carboxilato (91,0 mg, 0,339 mmol) em tBuOH (1,5 mL) foi adicionado pó de cobre (16,0 mg, 0,247 mmol) seguido por água (0,70 mL) e solução aq. a 1 M de sulfato de cobre (0,0620 mL, 0,0620 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 90 min, resfriada em temperatura ambiente e em seguida diluída com EtOAc. Depois da adição de NH4OH conc. (2,0 mL) seguido por água (2,0 mL), a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 30 min e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgâ-nicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 30 : 1) para proporcionar (R)-terc-butil 4-(2-(4-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)acetil)piperazina-1-carboxilato (108 mg, 59 %) como uma espuma amarela. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 2,00-2,25 (3H, m), 2,42-2,58 (1H, m), 3,34 (4H, br. s), 3,59 (2H, br. s), 3,65 (2H, br. s), 3,92 (1H, br. s), 5,20 e 5,52 (1H, br. s + br. s), 5,28-5,32 (2H, m), 5,85 e 6,27 (1H, br. s + br. s), 6,78 (1H, br. s), 6,90 (1H, br. s), 7,047,10 (1H, m), 7,63 (1H, s), 8,25 (1H, br. s), 8,47 (1H, s). Etapa D: (R)-2-(4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)-1-(piperazin-1-il)etan-1-ona
[00306] A uma solução de (R)-terc-butil 4-(2-(4-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)acetil)piperazina-1-carboxilato (108 mg, 0,182 mmol) em DCM (1,0 mL) foi adicionado TFA (0,500 mL, 6,49 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, lavado com NaHCO3 aq. saturado e salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 10 : 1 a 3 : 1 a 2 : 1) para proporcionar (R)-2-(4-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)-1-(piperazin-1- il)etanona (78,0 mg, 87 %) como um espuma amarela pálida. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,47 (9H, s), 2,00-2,25 (3H, m), 2,50 (1H, br. s), 2,85 (4H, br. s), 3,57 (2H, br. s), 3,64 (2H, br. s), 3,90 (1H, br. s), 5,26 e 5,52 (1H, br. s + br. s), 5,26-5,30 (2H, m), 5,85 e 6,26 (1H, br. s + br. s), 6,77 (1H, br. s), 6,88 (1H, br. s), 7,00-7,12 (1H, m), 7,62 (1H, s), 8,24 (1H, br. s), 8,46 (1H, s). MS: 494,2 [MH+]. Exemplo 50: Preparação do Composto Químico 38 Legenda da Figura: - r.t. = temperatura ambiente Composto Químico 38: (E)-N-etil-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilamida Etapa A:5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina- 3-carbaldeído
[00307] Uma mistura de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbaldeído (500 mg, 2,75 mmol), 3-fluoro-5-(pirrolidin-2-il)piridina (Intermediário 1, 490 mg, 2,95 mmol) e KF (800 mg, 13,8 mmol) em DMSO (9,2 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1) para proporcionar 5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (779 mg, 91 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,92-2,20 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,62-3,88 (1H, m), 3,98-4,15 (1H, m), 5,30-5,45 (1H, m), 6,22 (0,3H, m), 6,72 (0,7 H, d, J = 6,8 Hz), 7,607,75 (1H, m), 8,18-8,36 (1H, m), 8,38-8,56 (2H, m), 8,65 (0,3H, m), 8,80 (0,7 H, d, J = 6,0 Hz), 9,60 e 9,94 (1H, s+s). Etapa B: (E)-etil-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acrilato
[00308] A uma suspensão NaH (55 % em peso, 328 mg, 7,51 mmol) em THF seco (8,0 mL) foi adicionado uma solução de etil 2- (dietoxifosforil)acetato (841 mg, 3,75 mmol) em THF seco a 0 °C. A mistura foi agitada temperatura ambiente durante 30 min. Depois da adição de uma solução de 5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (0,779 g, 2,50 mmol) em THF seco, a mistura reacional foi agitada durante 5 horas em temperatura ambiente, extinguida com NH4Cl aq. saturado, e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar (E)-etil-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilato (511 mg, 54 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,20-1,32 (4H, m), 1,85-2,13 (3H, m), 3,60-3,90 (1H, m), 3,96-4,22 (3H, m), 5,28-5,42 (1H, m), 6,05-6,32 (1H, m), 6,54-6,70 (1H, m), 7,40-7,77 (2H, m), 8,09-8,12 (1H, m), 8,15-8,80 (3H, m). Etapa C: ácido (E)-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico
[00309] A uma solução de (E)-etil-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilato (511 mg, 1,340 mmol) em EtOH (5,0 mL) e água (1,7 mL) foi adicionado LiOH (96,0 mg, 4,02 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N até o pH 5~6 e em seguida extraído com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido (E)-3-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (373 mg, 79 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,92-2,13 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,60-3,92 (1H, m), 3,934,12 (1H, m), 5,28-5,42 (1H, m), 6,05-6,32 (1H, m), 6,54-6,70 (1H, m), 7,40-7,77 (2H, m), 8,09-8,29 (1H, m), 8,32-8,80 (3H, m), 11,73 (1H, br. s). Etapa D: (E)-N-etil-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acrilamida
[00310] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (50,0 mg, 0,142 mmol) em DMF (1,0 mL) foram adicionados etilamina (2,0 M em THF, 0,142 mL, 0,283 mmol), DIPEA (0,0740 mL, 0,425 mmol) e HATU (81,0 mg, 0,212 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)-N-etil-3-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilamida (48,0 mg, 89 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,10 (3H, t, J = 6,6 Hz), 1,92-2,20 (3H, m), 2,43-2,50 (1H, m), 3,10-3,30 (2H, m), 3,60-3,92 (1H, m), 4,00-4,15 (1H, m), 5,28-5,58 (1H, m), 6,05-6,42 (1H, m), 6,54-6,80 (1H, m), 7,18-8,10 (4H, m), 8,328,75 (3H, m). MS: 381,1 [MH+]. Exemplo 51: Preparação do Composto Químico 39: (E)-N- ciclopropil-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acrilamida
[00311] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (50,0 mg, 0,142 mmol) em DMF (1,0 mL) foram adicionados ciclopropanamina (0,0200 mL, 0,283 mmol), DIPEA (0,0740 mL, 0,425 mmol) e HATU (81,0 mg, 0,212 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)-N-ciclopropil-3-(5- (2-(5-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3- il)acrilamida (21,0 mg, 38 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO- d6, Varian, 400 MHz): δ 0,40-0,60 (2H, m), 0,61-0,75 (2H, m), 1,862,17 (3H, m), 2,43-2,50 (1H, m), 2,72-2,80 (1H, m), 3,60-3,92 (1H, m), 4,00-4,15 (1H, m), 5,25-5,52 (1H, m), 6,05-6,38 (1H, m), 6,54-6,70 (1H, m), 7,28-8,12 (4H, m), 8,32-8,75 (3H, m). MS: 393,1 [MH+]. Exemplo 52: Preparação do Composto Químico 40: (E)-3-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N,N- dimetilacril-amida
[00312] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(5-fluoropiridin-3- il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (50,0 mg, 0,142 mmol) em DMF (1,0 mL) foram adicionados cloridrato de dimetilamina (23,0 mg, 0,283 mmol), DIPEA (0,0740 mL, 0,425 mmol) e HATU (81,0 mg, 0,212 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)-3-(5-(2-(5- fluoropiridin-3-il)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N,N- dimetilacril-amida (39,0 mg, 72 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,86-2,10 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 2,80-3,00 (6H, m), 3,54-3,88 (1H, m), 3,92-4,15 (1H, m), 5,25-5,50 (1H, m), 6,05-6,12 (0,3H, m), 6,48-6,70 (0,7H, m), 6,73-7,70 (3H, m), 8,008,70 (4H, m). MS: 381,1 [MH+]. Exemplo 53: Preparação do Composto Químico 41 Legenda da Figura: - r.t. = temperatura ambiente Composto Químico 41: (E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N-etilacrilamida Etapa A: 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbaldeído
[00313] Uma mistura de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbaldeído (300 mg, 1,65 mmol), 2-(2,5-difluorofeil)pirrolidina (Intermediário 2, 324 mg, 1,77 mmol) e KF (480 mg, 8,26 mmol) em DMSO (5,5 mL) foi aquecida a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1) para proporcionar 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (540 mg, 100 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,90-2,28 (3H, m), 2,38-2,60 (1H, m), 3,60-4,18 (2H, m), 5,14-5,28 (0,6H, m), 5,545,72 (0,4H, m), 5,84-6,02 (0,6H, m), 6,35-6,46 (0,4H, m), 6,68-6,78 (1H, m), 6,82-7,20 (2H, m), 8,10-8,36 (2H, m), 9,77 e 10,11 (1H, s+s). Etapa B: (E)-etil-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acrilato
[00314] A uma suspensão NaH (55 % em peso, 349 mg, 8,00 mmol) em THF seco (8,9 mL) foi adicionado uma solução de etil 2- (dietoxifosforil)acetato (896 mg, 4,00 mmol) em THF seco a 0 °C. A mistura foi agitada temperatura ambiente durante 30 min. Depois da adição de uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (875 mg, 2,67 mmol) em THF seco, a mistura reacional foi agitada durante 5 horas e em seguida ex-tinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar (E)-etil-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilato (609 mg, 57 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,36 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,95-2,20 (3H, m), 2,45-2,60 (1H, m), 3,604,18 (2H, m), 4,20-4,43 (2H, m), 5,14-5,28 (0,6H, m), 5,54-5,70 (0,4H, m), 5,84-5,96 (0,4H, m), 6,25-6,46 (0,6H, m), 6,65-6,78 (2H, m), 6,827,00 (1H, m), 7,10-4,15 (1H, m), 7,50-7,85 (1H, m), 7,80-8,05 (1H, m), 8,12-8,35 (1H, m). Etapa C: ácido (E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acrílico
[00315] A uma solução de (E)-etil-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilato (345 mg, 0,866 mmol) em EtOH (3,3 mL) e água (1,1 mL) foi adicionado LiOH (62,0 mg, 2,60 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado por HCl aq. a 2 N até o pH 5~6. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (297 mg, 93 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,14 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,35-3,88 (1H, m), 3,98-4,18 (1H, m), 5,28-5,53 (1H, m), 6,00-3,20 (1H, m), 6,50-6,70 (1H, m), 6,907,00 (1H, m), 7,01-7,70 (3H, m), 8,05-8,20 (1H, m), 8,50-8,78 (1H, m), 11,95 (1H, s). Etapa D: (E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-N-etilacrilamida
[00316] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (75,0 mg, 0,203 mmol) em DCM (2,0 mL) foram adicionados 2 gotas de DMF seguido por cloreto de oxalila (0,0355 mL, 0,405 mmol). A mistura reaci- onal foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min e em seguida concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto de cloreto de acila correspondente. O composto de cloreto de acila cru residual foi dissolvido em DCM (2,0 mL), e em seguida cloridrato de etilamina (18,2 mg, 0,405 mmol) foi adicionado a isto. A mistura reaci- onal foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas e extinguida com HCl aq. a 1 N. A mistura foi lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 10 to EtOAc apenas) para proporcionar (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N-etilacrilamida (13,0 mg, 16 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,15-1,32 (6H, m), 1,98-2,32 (3H, m), 2,42-2,60 (1H, m), 3,38-3,50 (2H, m), 3,61-4,05 (2H, m), 5,38-5,50 (1H, m), 6,23-6,60 (1H, m), 6,70-6,78 (1H, m), 6,86-7,13 (2H, m), 7,80-9,00 (1H, m), 8,10-8,36 (1H, m). MS: 398,1 [MH+]. Exemplo 54: Preparação do Composto Químico 42: (E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)-pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N- isopropilacrilamida
[00317] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (55,0 mg, 0,149 mmol) em DMF (1,5 mL) foram adicionados HATU (73,4 mg, 0,193 mmol), DIPEA (78,0 μL, 0,446 mmol) e isopropilamina (9,66 mg, 0,163 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 10 a EtOAc apenas) para proporcionar (E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)- pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N-isopropilacrilamida (30,0 mg, 49 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,13-1,32 (6H, m), 2,00-2,29 (3H, m), 2,42-2,60 (1H, m), 3,604,00 (2H, m), 4,20-4,30 (1H, m), 5,25-5,38 (1H, m), 5,62-5,95 (1H, m), 6,20-6,60 (2H, m), 6,70-6,77 (1H, m), 6,82-6,98 (1H, m), 7,00-7,10 (1H, m), 7,45-7,55 (1H, m), 7,82-7,99 (1H, m), 8,10-8,40 (1H, m). MS: 412,1 [MH+]. Exemplo 55: Preparação do Composto Químico 43: (E)-N- ciclopropil-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acrilamida
[00318] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (50,0 mg, 0,135 mmol) em DMF (1,4 mL) foram adicionados HATU (66,7 mg, 0,176 mmol), DIPEA (70,7 μl, 0,405 mmol) e ciclopropilamina (10,5 μl, 0,149 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 10 : 1 a EtOAc apenas) para proporcionar (E)-N-ciclopropil-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilamida (30,0 mg, 54 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 0,50-0,65 (2H, m), 0,78-0,92 (2H, m), 1,92-2,30 (4H, m), 2,392,59 (1H, m), 2,82-2,85 (1H, m), 3,58-3,80 (1H, m), 3,86-4,12 (1H, m), 5,50-5,70 (2H, m), 6,23-6,48 (1H, m), 6,69-6,78 (1H, m), 6,82-7,08 (2H, m), 7,45-7,62 (1H, m), 7,82-8,00 (1H, m), 8,12-8,40 (1H, m). MS: 410,1 [MH+]. Exemplo 56: Preparação do Composto Químico 44: (E)-N-terc- butil-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo-[1,5- a]pirimidin-3-il)acrilamida
[00319] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (50,0 mg, 0,135 mmol) em DMF (0,90 mL) foram adicionados terc-butilamina (20,0 mg, 0,270 mmol), DIPEA (0,0710 mL, 0,405 mmol) e HATU (77,0 mg, 0,203 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)-N-terc-butil-3-(5- (2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo-[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilamida (38,0 mg, 66 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,31 (9H, s), 1,80-2,10 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,583,90 (1H, m), 3,95-4,12 (1H, m), 5,25-5,40 (0,4H, m), 5,50-5,62 (0,6H, m), 5,97-6,10 (0,4H, m), 6,30-6,54 (0,6H, m), 6,52-6,68 (1H, m), 6,707,00 (1H, m), 7,01-7,52 (4H, m), 7,95-8,10 (1H, m), 8,43-8,72 (1H, m). MS: 426,2 [MH+]. Exemplo 57: Preparação do Composto Químico 45: (E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N,N- dimetilacrilamida
[00320] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (55,0 mg, 0,149 mmol) em DMF (1,5 mL) foram adicionados HATU (73,4 mg, 0,193 mmol), DIPEA (78,0 μl, 0,446 mmol) e cloridrato de dimetil amina (7,36 mg, 0,163 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 10 a EtOAc apenas) para proporcionar (E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-N,N-dimetilacrilamida (38,0 mg, 64 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,98-2,15 (3H, m), 2,35-2,60 (1H, m), 2,82-3,30 (6H, m), 3,50-3,78 (1H, m), 3,80-4,15 (2H, m), 5,64-6,01 (1H, m), 6,18-6,44 (1H, m), 6,60-6,78 (1H, m), 6,83-7,13 (2H, m), 7,55-7,86 (1H, m), 7,90-8,05 (1H, m), 8,10-8,43 (1H, m). MS: 398,1 [MH+]. Exemplo 58: Preparação do Composto Químico 46: (E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N-(2- metoxietil)-acrilamida
[00321] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (60,0 mg, 0,162 mmol) em DMF (1,1 mL) foram adicionados 2-metoxietanamina (37,0 mg, 0,486 mmol), DIPEA (0,0850 mL, 0,486 mmol) e HATU (185 mg, 0,486 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas e diluída com água. Depois de ser agitada durante um adicional de 30 min, um sólido precipitado branco foi coletado por filtração e secado sob vácuo para proporcionar (E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-N-(2-metoxietil)-acrilamida (43,4 mg, 63 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,10 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,20-3,30 (3H, m), 3,33-3,45 (2H, m), 3,46-3,88 (2H, m), 3,90-4,15 (1H, m), 5,20-5,60 (1H, m), 5,88-6,38 (1H, m), 6,40-6,80 (1H, m), 6,81-7,55 (4H, m), 7,90-8,15 (2H, m), 8,40-8,80 (1H, m). * Um próton de NH não foi observado. MS: 428,2 [MH+]. Exemplo 59: Preparação do Composto Químico 47: (E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(3- hidroxiazetidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
[00322] A uma solução de ácido (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (50,0 mg, 0,135 mmol) em DMF (0,90 mL) foram adicionados cloridrato de azeti- din-3-ol (44,0 mg, 0,405 mmol), DIPEA (0,141 mL, 0,810 mmol) e HATU (0,103 g, 0,270 mmol) em temperatura ambiente. A mistura rea- cional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi pu-rificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(3- hidroxiazetidin-1-il)prop-2-en-1-ona (21,0 mg, 36 %) como um sólido branco. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,86-2,10 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,56-3,90 (2H, m), 3,92-4,19 (3H, m), 4,20-4,58 (2H, m), 5,30-5,40 (0,4H, m), 5,50-5,62 (0,6H, m), 5,74 (1H, d, J = 5,6 Hz), 5,97-6,10 (0,4H, m), 6,28-6,40 (0,6H, m), 6,52-7,70 (2H, m), 7,05-7,52 (3H, m), 8,09-8,20 (1H, m), 8,50-8,78 (1H, m). MS: 426,2 [MH+]. Exemplo 60: Preparação do Composto Químico 48 Legenda da Figura: - r.t. = temperatura ambiente Composto Químico 48: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N-(2-hidroxietil)-acrilamida Etapa A: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carbaldeído
[00323] Uma mistura de 5-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina-3- carbaldeído (Intermediário 10, 4,70 g, 25,9 mmol), (R)-2-(2,5- difluorofenil)pirrolidina (Intermediário 5, 5,07 g, 27,7 mmol) e KF (7,52 g, 129 mmol) em DMSO (86 mL) foi agitada a 180 °C durante 2 horas. Depois de ser resfriada em temperatura ambiente, a mistura reacional foi diluída com água. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH = 20 : 1) para proporcionar (R)-5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (8,50 g, 100 %) como um óleo amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,90-2,28 (3H, m), 2,38-2,60 (1H, m), 3,60-4,18 (2H, m), 5,14-5,28 (0,6H, m), 5,54-5,72 (0,4H, m), 5,84-6,02 (0,6H, m), 6,35-6,46 (0,4H, m), 6,68-6,78 (1H, m), 6,82-7,20 (2H, m), 8,10-8,36 (2H, m), 9,77 e 10,11 (1H, s+s). Etapa B: (R,E)-etil-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acrilato
[00324] A uma suspensão NaH (55 % em peso, 3,30 g, 76 mmol) em THF seco (80 mL) foi adicionado uma solução de etil 2- (dietoxifosforil)acetato (8,47 g, 37,8 mmol) em THF seco a 0 °C . A mis-tura foi agitada temperatura ambiente durante 1 hora. Depois da adi- ção de uma solução de (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbaldeído (8,27 g, 25,2 mmol) em THF seco (40 mL), a mistura reacional foi agitada durante 5 horas em tem-peratura ambiente e em seguida extinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc, lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1) para proporcionar (R,E)-etil-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilato (6,00 g, 60 %) como um sólido avermelhado. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,36 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,95-2,20 (3H, m), 2,45-2,60 (1H, m), 3,60-4,18 (2H, m), 4,20-4,43 (2H, m), 5,14-5,28 (0,6H, m), 5,54-5,70 (0,4H, m), 5,84-5,96 (0,4H, m), 6,25-6,46 (0,6H, m), 6,65-6,78 (2H, m), 6,82-7,00 (1H, m), 7,10-4,15 (1H, m), 7,50-7,85 (1H, m), 7,80-8,05 (1H, m), 8,12-8,35 (1H, m). Etapa C: ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico
[00325] A uma solução de (R,E)-etil-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrilato (6,00 g, 15,1 mmol) em EtOH (56 mL) e água (19 mL) foi adicionado hidrato de hidróxido de lítio (1,90 g, 45,2 mmol) em temperatura ambiente. A mis-tura reacional foi aquecida a 90 °C durante 5 horas e resfriada em temperatura ambiente. Depois da evaporação de EtOH, o resíduo foi acidificado com HCl aq. a 2 N e diluído com EtOAc. Um sólido precipi-tado amarelo foi coletado por filtração e lavado com EtOAc, secado sob vácuo para proporcionar ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (5,58 g, >99 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,80-2,14 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,35-3,88 (1H, m), 3,98-4,18 (1H, m), 5,28-5,53 (1H, m), 6,00-6,20 (1H, m), 6,50-6,70 (1H, m), 6,90-7,00 (1H, m), 7,01-7,70 (3H, m), 8,05-8,20 (1H, m), 8,50-8,78 (1H, m), 11,95 (1H, s). MS: 371,03 [MH+]. Etapa D: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-N-(2-hidroxietil)-acrilamida
[00326] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (400 mg, 1,080 mmol) em DMF (2,1 mL) foram adicionados HATU (616 mg, 1,62 mmol) e DIPEA (0,472 mL, 2,70 mmol) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Depois da adição de 2-aminoetanol (66,0 mg, 1,08 mmol) em temperatura ambiente, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi diluída com DCM, lavada com água duas vezes e NaOH aq. a 1 N, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (R,E)-3-(5- (2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-N-(2- hidroxietil)-acrilamida (279 mg, 62 %) como um sólido amarelo. 1H- RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,82-2,12 (3H, m), 2,40-2,50 (1H, m), 3,20-3,30 (3H, m), 3,33-3,52 (2H, m), 3,56-3,92 (2H, m), 3,954,15 (1H, m), 5,23-5,62 (1H, m), 5,92-6,43 (1H, m), 6,53-6,83 (1H, m), 6,90-7,55 (4H, m), 7,90-8,20 (1H, m), 8,50-8,80 (1H, m). MS: 414,1 [MH+]. Exemplo 61: Preparação do Composto Químico 49: (R,E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- morfolinoprop-2-en-1 -ona
[00327] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (3,00 g, 8,10 mmol) em DMF (16 mL) foram adicionados HATU (4,62 g, 12,1 mmol) e DIPEA (3,54 mL, 20,2 mmol) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 30 min em temperatura ambiente. Depois da adição de morfolina (1,05 mL, 12,1 mmol) em temperatura ambiente, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com EtOAc, lavado com água duas vezes, NaOH aq. a 1 N e salmoura sucessivamente, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para EtOAc:MeOH = 10 : 1) para proporcionar (R,E)-3- (5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- morfolinoprop-2-en-1-ona (2,13 g, 60 %) como um sólido cor-de-rosa. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,86-2,40 (5H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 3,40-3,70 (6H, m), 3,95-4,10 (1H, m), 5,24-5,40 (0,4H, m), 5,50-5,62 (0,6H, m), 5,95-6,18 (0,4H, m), 6,58-6,70 (0,6H, m), 6,716,85 (1H, m), 6,86-7,50 (5H, m), 8,05-8,30 (1H, m), 8,50-8,83 (1H, m). MS: 440,2 [MH+]. Exemplo 62: Preparação do Composto Químico 50: (R,E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- (piperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona Etapa A: (R,E)-terc-butil 4-(3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acriloil)-piperazina-1-carboxilato
[00328] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (400 mg, 1,08 mmol) em DMF (2,2 mL) foram adicionados HATU (616 mg, 1,62 mmol) e DIPEA (0,472 mL, 2,70 mmol) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Depois da adição de terc-butil piperazina-1-carboxilato (201 mg, 1,08 mmol) em temperatura ambiente, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, ao mesmo tempo que um sólido amarelo foi formado. A mistura foi diluída com DCM, lavada com água duas vezes e NaOH aq. a 1 N, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1 a DCM : EtOAc = 1 : 10) para proporcionar (R,E)-terc-butil 4-(3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acriloil)-piperazina-1-carboxilato (413 mg, 71 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,48 (9H, s), 1,95-2,09 (3H, m), 2,43-2,78 (1H, m), 3,20-4,00 (10H, m), 5,17 e 5,75 (1H, s+s), 5,85 e 6,34 (1H, s+s), 6,67 (1H, s), 6,91 (1H, s), 7,05 (1H, s), 7,32 (1H, s), 7,50-8,32 (3H, m). Etapa B: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1-(piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona
[00329] A uma solução de (R,E)-terc-butil 4-(3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acriloil)- piperazina-1-carboxilato (413 mg, 0,767 mmol) em DCM (3,8 mL) foi adicionado TFA (2,00 mL, 26,0 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, ba- sificado com NaHCO3 aq. saturado, lavado com salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 10 : 1 a 5 : 1) para proporcionar (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (220 mg, 65 %) como um sólido amarelo pálido. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,86-2,40 (3H, m), 2,38-2,50 (1H, m), 2,64-2,80 (3H, m), 3,40-3,82 (7H, m), 3,95-4,10 (1H, m), 5,24-5,40 (0,4H, m), 5,50-5,62 (0,6H, m), 5,95-6,18 (0,4H, m), 6,58-6,70 (0,6H, m), 6,71-6,85 (1H, m), 6,86-7,00 (1H, m), 7,05-7,50 (3H, m), 8,05-8,25 (1H, m), 8,46-8,80 (1H, m). MS: 439,2 [MH+]. Exemplo 63: Preparação do Composto Químico 51: (R,E)-4-(3-(5- (2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3- il)acriloil)piperazin-2-ona
[00330] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (50,0 mg, 0,162 mmol) em DMF (0,68 mL) foram adicionados HATU (62,0 mg, 0,162 mmol) e DIPEA (0,0570 mL, 0,324 mmol) em temperatura ambi-ente. A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Depois da adição de piperazina-2-ona (16,0 mg, 0,162 mmol) em tem-peratura ambiente, a mistura reacional foi agitada em temperatura am-biente durante a noite, ao mesmo tempo que um sólido amarelo foi formado. A mistura foi diluída com DCM, lavada com água duas vezes e NaOH aq. a 1 N, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1 a DCM : EtOAc = 1 : 10) para proporcionar (R,E)-4-(3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin- 3-il)acriloil)piperazin-2-ona(52,0 mg, 85 %) como um sólido amarelo. MS: 453,1 [MH+]. Exemplo 64: Preparação do Composto Químico 52: (E)-3-(5-((R)-2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(3-(2- hidroxipropan-2-il)piperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona Etapa A: ácido 1,4-bis(terc-butoxicarbonil)piperazina-2-carboxílico
[00331] A uma solução de ácido 1,4-bis(terc- butoxicarbonil)piperazina-2-carboxílico (5,00 g, 15,1 mmol) e Na2CO3 (5,79 g, 54,7 mmol) em água (49 mL) foi adicionado uma solução de (t- Boc)2O (7,20 mL, 31,0 mmol) em THF (31 mL) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reacional foi cuidadosamente acidificada com HCl aq. a 5 N até o pH = 1 e em seguida extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar ácido 1,4-bis(terc-butoxicarbonil)piperazina-2-carboxílico (5,00 g, 100 %) como um sólido branco, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,44 e 1,48 (18H, s e s), 2,83 (1H, br. s), 3,08-3,23 (2H, m), 3,84 (1H, dd, J = 17,2, 13,2 Hz), 4,01 (1H, br. s), 4,52-4,60 (1H, m), 4,75 (1H, s), 9,56 (1H, br. s). Etapa B: 1,4-di-terc-butil 2-metil piperazina-1,2,4-tricarboxilato Bocx.
[00332] A uma solução de ácido 1,4-bis(terc- butoxicarbonil)piperazina-2-carboxílico (4,88 g, 14,7 mmol) em DMF (49 mL) foi adicionado K2CO3 (2,65 g, 19,2 mmol), e a mistura resfriada a 0 °C. À mistura foi em seguida lentamente adicionado iodeto de metila (1,38 mL, 22,1 mmol). A reação agitada foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e extinguida com NH4Cl aquoso saturado (100 mL). A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 7 : 1 a 5 : 1 a 3 : 1) para proporcionar 1,4-di-terc- butil 2-metil piperazina-1,2,4-tricarboxilato (5,09 g, 100 %) como um óleo viscoso marrom pálido. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,44 (18H, s), 2,80 (1H, br. s), 3,12-3,24 (1H, m), 3,21 (1H, br. s), 3,74 (3H, s), 3,80-4,10 (2H, m), 4,48-4,73 (2H, m). Etapa C: di-terc-butil 2-(2-hidroxipropan-2-il)piperazina-1,4- dicarboxilato
[00333] A uma solução de 1,4-di-terc-butil 2-metil piperazina-1,2,4- tricarboxilato (5,09 g, 14,7 mmol) em THF seco (49 mL) foi adicionado brometo de metilmagnésio (3,0 M em THF e tol, 31,7 mL, 44,3 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas. Depois de extinguida com NH4Cl aq. saturado, a mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 5 : 1 a 3 : 1 a 2 : 1) para proporcionar di-terc-butil 2-(2-hidroxipropan-2- il)piperazina-1,4-dicarboxilato (2,47 g, 48 %) como um óleo viscoso incolor. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,21 (3H, s), 1,31 (3H, s), 1,46 (18H, s), 3,01-3,38 (4H, m), 3,79-4,21 (4H, m). Etapa D: 2-(piperazin-2-il)propan-2-ol 2HCl
[00334] A uma solução de di-terc-butil 2-(2-hidroxipropan-2- il)piperazina-1,4-dicarboxilato (2,47 g, 7,17 mmol) em MeOH (23 mL) foi adicionado HCl (solução a 4 M em dioxano, 8,96 mL, 35,9 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas, ao mesmo tempo que um sólido foi precipitado. Depois da concentração em vácuo, o sólido residual foi secado sob vácuo para proporcionar 2-(piperazin-2-il)propan-2-ol 2HCl (1,17 g, 75 %) como um sólido marrom pálido, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,19 (3H, s), 1,25 (3H, s), 2,97 (1H, t, J = 13,6 Hz), 3,20-3,34 (3H, m), 3,34-3,48 (2H, m), 3,53-3,56 (2H, m), 9,14 (1H, br. s), 9,60 (1H, br. s), 9,89 (2H, br. s). Etapa E: (E)-3-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1-(3-(2-hidroxipropan-2-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona
[00335] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (67,0 mg, 0,181 mmol) em DMF (1,2 mL) foram adicionados HATU (89,0 mg, 0,235 mmol) e DIPEA (0,142 mL, 0,814 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente e resfriada a 0 °C. Depois da adição de 2-(piperazin-2-il)propan-2-ol 2HCl (47,0 mg, 0,217 mmol) a 0 °C, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, lavado com água e salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)-3-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1-(3-(2-hidroxipropan-2-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (64,0 mg, 71 %) como um sólido amarelo pálido. MS: 468,1 [MH+] Exemplo 65: Preparação do Composto Químico 53: (R,E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(4- metilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
[00336] Uma mistura de (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (50,0 mg, 0,114 mmol) e formaldeído (solução aquosa 37 %, 0,011 mL, 0,148 mmol) em MeOH (1,1 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 10 min. Depois da adição de cianoboro-hidreto de sódio (10,7 mg, 0,171 mmol) em uma uma porção, a mistura reacional foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente e em seguida extinguida com NaOH aq. a 2 N (1,42 mL, 2,85 mmol). A mistura foi agitada durante 30 min em temperatura ambiente e extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromato- grafia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1-(4-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (44,0 mg, 85 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,65-1,85 (4H, m), 2,34 (3H, s), 2,40-2,52 (5H, m), 3,40-4,20 (6H, m), 5,20 (0,5H, s), 5,70-5,92 (1H, m), 6,38 (0,5H, s), 6,69 (1H, s), 6,827,16 (2H, m), 7,60-7,82 (1H, m), 7,95 (1H, s), 8,10-8,40 (1H, m). MS: 453,1 [MH+]. Exemplo 66: Preparação do Composto Químico 54: (R,E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(4- etilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
[00337] Uma mistura de (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (100 mg, 0,228 mmol) e acetaldeído (129 μL, 0,228 mmol) em MeOH (1,1 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 10 min. Depois da adição de triacetóxi-hidroborato de sódio (73,0 mg, 0,342 mmol) seguido por ácido acético (261 μL, 4,56 mmol), a mistura reacional foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente e em seguida extinguida com NaOH aq. a 2 N (1,42 mL, 2,85 mmol). A mistura foi agitada durante 30 min em temperatura ambiente e extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1 a 15 : 1) para proporcionar (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1-(4-etilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (69,5 mg, 63 %) como um sólido amarelo. . 1H-RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,03 (3H, t, J = 7,2 Hz), 1,83-2,00 (2H, m), 2,02-2,10 (1H, m), 2,302,48 (6H, m), 3,40-3,70 (4H, m). 4,03 (2H, q, J = 7,2 Hz), 5,35 e 5,59 (1H, s+s), 6,01 e 6,64 (1H, s+s), 6,76-6,79 (1H, m), 7,05-7,21 (1H, m), 7,23-7,48 (2H, m), 8,13-8,23 (1H, m), 8,54 e 8,74 (1H, s+s). MS : 467,1 [MH+]. Exemplo 67: Preparação do Composto Químico 55: (R,E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(4- isopropilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
[00338] Uma mistura de (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (50,0 mg, 0,114 mmol) e acetona (0,025 mL, 0,342 mmol) em MeOH (1,1 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 10 min. Depois da adição de cianoboro-hidreto de sódio (10,7 mg, 0,171 mmol) em uma porção, a mistura reacional foi agitada durante 30 horas e extinguida com NaOH aq. a 2 N (1,4 mL, 2,85 mmol). A mistura foi agitada durante 30 min em temperatura ambiente e extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (DCM:MeOH = 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1-(4-isopropilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (46,3 mg, 84 %) como um sólido amarelo. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,08 (6H, d, J = 6,8 Hz), 1,95-2,36 (4H, m), 2,40-2,50 (5H, m), 2,702,78 (1H, m), 3,40-4,20 (6H, m), 5,18 (0,5H, s), 5,65-5,92 (1H, m), 6,34 (0,5H, s), 6,69 (1H, s), 6,82-7,20 (2H, m), 7,60-7,82 (1H, m), 7,95 (1H, s), 8,10-8,40 (1H, m). MS: 481,1 [MH+]. Exemplo 68: Preparação do Composto Químico 56: (R,E)-1-(1,4- diazepan-1 -il)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1 -il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)prop-2-en-1-ona Etapa A: terc-butil 1,4-diazepano-1-carboxilato
[00339] A uma solução de 1,4-diazepano (1,00 g, 9,98 mmol) em DCM (22 mL) foi adicionado uma solução de (t-Boc)2O (1,08 g, 4,99 mmol) em DCM (11 mL) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em Et2O e extraído com solução de ácido cítrico aq. a 10 %. A camada aquosa foi basificada com K2CO3 sólido até o pH 11 e em seguida extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar terc-butil 1,4-diazepano-1- carboxilato (795 mg, 88 %) como um óleo amarelo, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H-RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,47(9H, s) 1,59 (1H, br. s), 1,74-1,80 (2H, m), 2,84-2,93 (4H, m), 3,39-3,51 (4H, m). Etapa B: (R,E)-terc-butil 4-(3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1- il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acriloil)-1,4-diazepano-1-carboxilato
[00340] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (100 mg, 0,270 mmol) em DMF (1,8 mL) foram adicionados HATU (154 mg, 0,405 mmol), DIPEA (118 μl, 0,675 mmol) e terc-butil 1,4-diazepano-1- carboxilato (65,0 mg, 0,324 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex: EtOAc = 1:4 a 1:5) para proporcionar (R,E)-terc-butil 4-(3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acriloil)-1,4- diazepano-1-carboxilato (137 mg, 92 %) como um sólido amarelo. 1H- RMN (DMSO-d6, Varian, 400 MHz): δ 1,12-1,43 (9H, m), 1,55-1,80 (2H, m), 1,81-2,00 (3H, m), 2,32-2,50 (1H, m), 2,19-3,30 (3H, m), 3,383,88 (7H, m), 4,00-4,10 (1H, m), 5,32 e 5,95 (1H, s+s), 6,11 e 3,64 (1H, s+s), 6,67 (1H, s), 6,91 (1H, s), 7,05 (1H, s), 7,32 (1H, s), 7,50-8,32 (3H, m). Etapa C: (R,E)-1-(1,4-diazepan-1-il)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin- 1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)prop-2-en-1-ona
[00341] A uma solução de (R,E)-terc-butil 4-(3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acriloil)-1,4- diazepano-1-carboxilato (137 mg, 0,283 mmol) em DCM (2,5 mL) foi adicionado TFA (382 μl g, 4,96 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em água, neutralizado com NaHCO3 aq. saturado e lavado com EtOAc. A camada aquosa separada foi extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas (apenas DCM) foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar (R,E)-1-(1,4-diazepan-1-il)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)prop-2-en-1-ona (48,1 mg, 42 %) como um sólido amarelo pálido. MS: 453,1 [MH+]. Exemplo 69: Preparação do Composto Químico 57: (R,E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(4- hidroxipiperidin-1 -il)prop-2-en-1 –ona
[00342] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (100 mg, 0,270 mmol) em DMF (1,35 mL) foram adicionados HATU (0,133 g, 0,351 mmol) e DIPEA (0,118 mL, 0,675 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente e resfriada a 0 °C. Depois da adição de piperidin-4-ol (0,0330 g, 0,324 mmol) em temperatura ambiente, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, lavado com água e NaHCO3 aq. saturado, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH 20 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(4- hidroxipiperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (120 mg, 98 %) como uma espuma amarela. MS: 454,1 [MH+] Exemplo 70: Preparação do Composto Químico 58: (R,E)-3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(4- hidróxi-4-metilpiperidin-1-il)prop-2-en-1-ona Etapa A: terc-butil 4-hidróxi-4-metilpiperidina-1-carboxilato
[00343] A uma solução de terc-butil 4-oxopiperidina-1-carboxilato (1,00 g, 5,02 mmol) em THF seco (25 mL) foi adicionado cloreto de metilmagnésio (2,17 mL, 6,52 mmol) a -78 °C. A mistura reacional foi lentamente aquecida a 0 °C com agitação durante 2 horas e extinguida com NH4Cl aq. saturado. A mistura foi extraída com EtOAc duas vezes, e a camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar terc-butil 4- hidróxi-4-metilpiperidina-1-carboxilato (1,08 g, >99 %) como um óleo incolor, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. 1H- RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 1,27 (3H, s), 1,46 (9H, s), 1,50-1,58 (4H, m), 3,20-3,27 (2H, m), 3,64-3,76 (2H, m). Etapa B: 4-metilpiperidin-4-ol
[00344] A uma solução de terc-butil 4-hidróxi-4-metilpiperidina-1- carboxilato (1,08 g, 5,02 mmol) em DCM foi adicionado TFA (1,93 mL, 25,1 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas. Depois de basificada com NaHCO3 aq. saturado, a camada aquosa separada foi concentrada em vácuo (O composto foi dissolvido em camada aquosa). O resíduo foi diluído com MeOH e em seguida filtrado através de uma almofada de SiO2 ao mesmo tempo que lavando com MeOH. O filtrado foi concentrado em vácuo para proporcionar 4-metilpiperidin-4-ol (235 mg, 40 %) como um óleo viscoso, que foi usado para a próxima reação sem outra purificação. Etapa C: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)-1-(4-hidróxi-4-metilpiperidin-1-il)prop-2-en-1-ona
[00345] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (100 mg, 0,270 mmol) em DMF (1,35 mL) foram adicionados HATU (133 mg, 0,351 mmol) e DIPEA (0,165 mL, 0,945 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente e resfriada a 0 °C. Depois da adição de 4-metilpiperidin-4-ol cru (0,155 g, 1,35 mmol) em temperatura ambiente, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi diluído com DCM, lavado com água e NaHCO3 aq. saturado, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc apenas para DCM:MeOH 20 : 1) para proporcionar (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-(4-hidróxi-4- metilpiperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (126 mg, 100 %) como um espuma amarela pálida. MS: 468,1 [MH+]. Exemplo 71: Preparação do Composto Químico 59: (E)-3-(5-((R)-2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-((R)- 3-hidroxipirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
[00346] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (70,0 mg, 0,189 mmol) em DMF (1,5 mL) foram adicionados HATU (108 mg, 0,284 mmol), DIPEA (99,0 μl, 0,567 mmol) e (R)-pirrolidin-3-ol (49,0 mg, 0,567 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 30 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)- 3-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- ((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (15,0 mg, 18 %) como um sólido amarelo. MS: 440,2 [MH+]. Exemplo 72: Preparação do Composto Químico 60: (E)-3-(5-((R)-2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1-((S)- 3-hidroxipirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
[00347] A uma solução de ácido (R,E)-3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)acrílico (70,0 mg, 0,189 mmol) em DMF (1,5 mL) foram adicionados HATU (108 mg, 0,284 mmol), DIPEA (99,0 μl, 0,567 mmol) e (S)-pirrolidin-3-ol (49,0 mg, 0,567 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com EtOAc. A mistura foi lavada com NH4Cl aq. saturado e salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (EtOAc:MeOH = 30 : 1 a 10 : 1) para proporcionar (E)- 3-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- ((S)-3-hidroxipirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (15,0 mg, 18 %) como um sólido amarelo. MS: 440,2 [MH+]. Exemplo 73: Preparação do Composto Químico 61: 3-(5-(2-(2,5- difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- morfolinoprop-2-in-1 -ona
[00348] Uma solução de 5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)-3- iodopirazolo[1,5-a]pirimidina (456 mg, 1,070 mmol), 1-morfolinoprop-2- in-1-ona (223 mg, 1,60 mmol) e PdCl2(PPh3)2 (75,0 mg, 0,107 mmol) e iodeto de cobre(I) (20,0 mg, 0,107 mmol) em TEA (5,0 mL) e THF (5,0 mL) foi agitada a 70 °C durante 12 horas. Depois da concentração em vácuo, o resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em SiO2 (Hex : EtOAc = 1 : 1 a EtOAc apenas) para proporcionar 3-(5-(2- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- morfolinoprop-2-in-1-ona (45,7 mg, 9,7 %) como um sólido laranja. 1H- RMN (CDCl3, Varian, 400 MHz): δ 2,05-2,20 (3H, m), 2,24-2,60 (1H, m), 3,58-4,20 (10H, m), 5,18 e 5,73 (1H, s+s), 5,88 e 6,36 (1H, s+s), 6,69 (1H, br. s), 6,94 (1H, br. s), 7,13 (1H, br. s), 7,44-7,77 (1H, m), 8,15-8,50 (1H, m). MS: 438,3 [MH+].
Exemplo 74: ENSAIO DE CINASE TRK A, B & C
[00349] O kit de ensaio ADP-Glo foi adquirido de Promega. poly (Glu, Tyr), Sulfato de magnésio, Albumina de soro bovino (BSA) e di- metilsulfóxido (DMSO) foram adquiridos de Sigma-Aldrich. Tampão de Tris-HCl foi adquirido de BD Gentest. O kit HTRF KinEASE-TK foi ad-quirido de cisbio. A cinase TRK A, B & C foi adquirida de Carna biosci-ence.
[00350] O ensaio de cinase foi realizado para os Compostos Químicos 1-61 usando dois métodos usando kit de ensaio ADP-Glo lumines- cente (Promega) e kit de ensaio HTRF KinEASE-TK (cisbio). O kit de ensaio ADP-Glo luminescente (Promega) mede ADP formado de uma reação de cinase. ADP convertido em ATP, que é em seguida convertido em luz por Ultra-Glo luciferase. O kit de ensaio HTRF KinEASE-TK (cisbio) mede as actividades de tirosina cinase usando um substrato e um sistema de detecção universal.
Kit de ensaio ADP-Glo (promega)
[00351] O ensaio de proteína cinase foi realizado pelos Compostos Químicos 1-61 usando um substrato e um sistema de detecção universal ADP convertido em ATP, cujas concentrações em ich. cl são 0,4 ng/ul de TrKA, 0,5 ng/ul de TrKB e 3 ng/ul de TrKC, respectivamente), 5 μL de 1 ug/ul de solução de matéria-prima de poli(glu, Tyr), 5 μL de compostos ou tampão de ensaio, 5 μL de ATP (125 μM de solução de matéria-prima).
[00352] O ensaio foi iniciado por incubação da mistura reacional em uma placa de 96 cavidades a 30°C durante 1 hr. Depois da incubação, o ensaio foi terminado pela adição de placa 25 a 30°C durante 1 hr. vertida em ATP, cujas concentrações em ich. cl são 0,4 ng/ul de TrKA, 0,5 ng/ul. Em seguida 50 e incuKinase Detection Reagent foram adicionados, e a placa de 96 cavidades foi agitada e em seguida incubada durante 30 min adicionais em temperatura ambiente. A placa de reação de 96 cavidades foi em seguida lida em uma leitora de placa Ens- pire. Os valores de IC50 foram derivados através de um ajustamento de curva usando SigmaPlot.
Kit de ensaio HTRF KinEASE-TK (cisbio)
[00353] O ensaio HTRF KinEASE-TK foi realizado para os Compostos Químicos 1-61 em microplaca de baixo volume de 384 cavidades (Greiner). O formato de ensaio HTRF KinEASE-TK envolve as duas etapas. A primeira etapa é etapa de reação de cinase. Esta etapa de reação de cinase foi realizada em RT (temperatura ambiente) em volume final de 10ul de acordo com a seguinte receita de reação de ensaio: 10ul de mistura de cinase (Kinase (2ul) + ATP (2ul) + Substrato (2 ul) + Composto (4 ul)). As concentrações de cinase finais foram 0,3 ng/ul de TRKA, 0,1 ng/ul de TRKB, 0,03 ng/ul de TRKC, respectivamente. As concentrações de cinase finais foram 14,7 uM (TRKA), 4,77 uM (TRKB), 25,6 uM (TRKC) respectivamente. A concentração final de substrato de TK foi 0,3 ng/ul. As misturas expostas ao composto de concentração de Dose Dose response (DRC) de 0 a 100 nM durante 40 min. Durante a etapa de reação de cinase, a reação de cinase foi iniciada pela adição de ATP. Cinase fosforila o substrato.
[00354] A segunda é a etapa de detecção. 10 ul de reagentes de detecção (5 ul de Sa-XL 665 em EDTA + 5 ul de Anticorpo-Eu de TK em EDTA) foram adicionados à mistura de cinase. Esta etapa foi realizada em temperatura ambiente durante 1hr. O reagente de detecção detecta o substrato fosforilado.
[00355] Finalmente a placa de reação de 384 cavidades foi em seguida lida em maquina FlexStation 3. A fluorescência foi medida a 620 nm (Criptate) e 665 nm (XL665). Uma relação é calculada (655/620) x104 para cada cavidade. O valor de IC50 foi derivado através de um ajustamento de curva usando GrafPad Prism. A Tabela 1 abaixo inclui os resultados dos ensaios.
Exemplo 74: Ensaios de proliferação celular
[00356] Doxorubicina foi adquirida de Sigma Aldrich (D1515). Todos os compostos foram diluídos em DMSO (Sigma Aldrich, D2650). O re- agente de viabilidade celular AlamarBlue® foi adquirido de Thermo Scientific (88952). O ensaio de proliferação CellTiter 96® AQueous One Solution Cell foi adquirido de Promega. As células KM12-luc foram obtidas de JCRB (National Institute of Healt Sciences, Tokio, Japan). Els foram mantidas em meio de DMEM (GIB-11965-118) suplementado com 10 % de soro bovino fetal (Gibco, 16000-044) e Solução de Aminoácidos não Essenciais de MEM (Thermo Scientific, 11140050). As células TF-1 foram obtidas de ATCC. Elas foram mantidas em meio de RPMI (GIB-A10491) suplementado com 10 % de soro bovino fetal (Gibco, 16000-044), GM-CSF (Thermo Scientific, 11140-050) e β- NGF (R&D systems). Tripsina/EDTA foi adquirido de Gibco (GIB- 25300-054, 0,05 %). Placas de 96 cavidades foram adquiridas de Corning Inc.
Ensaio de Proliferação Celular
[00357] O ensaio de proliferação foi realizado para os Compostos Químicos 1-61s em meios suplementados com 10 % de FBS, usando AlamarBlue® reagente de viabilidade celular ou kit de ensaio de proli-feração CellTiter 96® AQueous One Solution Cell. As células foram cultivadas em incubadora a 37 °C umidificada com 5 % de CO2. Para avaliar a atividade de antiproliferação de compostos, as células TF-1 foram ajustadas para meios livres de GM-CSF (RPMI, 10 % de FBS, e 1 % de penicilina-estreptomicina) durante 16 hr e foram semeadas em placas de 96 cavidades a 30.000 células/cavidade com meio (RPMI, 10 % de FBS, 1 % de penicilina-estreptomicina e 10 ng/ml de β-NGF humano). KM12-luc foram semeadas a 10.000 células por cavidade em placas de 96 cavidades. Depois da incubação durante a noite, diluições seriais de compostos foram adicionadas a cavidades triplicadas, e as células foram expostas durante 72 horas. A concentração final de DMSO foi ajustada a 0,5 % em meios. A quantificação do crescimento celular foi avaliada usando dois tipos de reagente. 20 ul de reagente AlamarBlue® em uma quantidade igual a 10 % do volume de cultura foram adicionados a cada cavidade e foram incubados em incubadora a 37°C unidificada com 5 % de CO2 durante 2 hr. De outra forma, 20 ul de reagente CellTiter 96® foram adicionados a cada cavidade e foram incubados nas mesmas condições como previamente descrito. Os dados foram plotados, e os valores de GI50 foram calculados usando o software GrafPad. A Tabela 1 abaixo inclui os resulta- dos dos ensaios. TABELA 1

Claims (18)

1. Composto de Fórmula I ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que apresenta a: em que: R1 é um anel de heteroarila ou de arila de 6 membros opci-onalmente substituído com um ou mais grupos substituintes indepen-dentemente selecionados a partir do grupo consistindo em halogênio, hidroxila, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, C1-C4 alcóxi linear, e C1-C4 alcóxi ramificado; R2 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear e C1-C4 alquila linear ramificada; X é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH2-, - CH2CH2-, -CH2O- e -CH(Z)-, em que Z é halogênio; e Q é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH=CR3C(O)NR4R5, -C_ CC(O)NR4R5, e ; em que R3 é hidrogênio ou halogênio, em que - NR4 R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros ou não forma uma estrutura de anel, o anel heterocíclico sendo anel de heteroarila ou de heterocicloalquila, em que quando -NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros, o anel heterocíclico de 4-7 membros inclui um hete- roátomo secundário opcional além do nitrogênio de -NR4R5 e é opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em C1-C6 alquila linear, C1-C6 alquila ramificada, hidroxila, ácido carboxílico de C1-C4 alquila linear, e ácido carboxílico de C2-C4 alquila ramificada, em que quando -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo con-sistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila, C1-C6 alquila ramificada opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila, e C1-C6 cicloalquila opcionalmente substituída com pelo menos um flúor ou pelo menos uma hidroxila, em que Y1, Y2, Y3, e Y4 são cada qual independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em -CH, N, O, S, -CR6, e -NR6, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, anel de arila de 5-6 membros, anel de heteroarila de 5-6 membros, anel de heterocicloalquila de 3-7 membros, anel de cicloalquila de 3-7 membros, -NHCO-(anel de arila, sendo que arila se refere a um radical de hidrocarboneto opcionalmente substituído aromático de seis a vinte átomos de carbono no anel, incluindo anéis de arila fundidos e não fundidos), e -CH2CO-(anel heterocí- clico de C3-C6 membros), ou R1 é um anel de fenila substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo con-sistindo em flúor, metóxi e etóxi; R2 é H; X é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH2-, -CH2CH2-, -CH2O- e -CH(Z)-, em que Z é halogênio; e Q é selecionado a partir do grupo consistindo em - CH=CR3C(O)NR4R5, -C-CC(O)NR4R5, e ; em que R3 é H, em que -NR4 R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros ou não forma uma estrutura de anel, o anel heterocíclico sendo anel de heteroarila ou de heterocicloalquila, em que quando -NR4R5 forma um anel hetero- cíclico de 4-7 membros, o anel heterocíclico de 4-7 membros inclui um heteroátomo secundário opcional além do nitrogênio de -NR4R5 e é opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em C1-C6 alquila linear, C1-C6 alquila ramificada, hidroxila, ácido carboxílico de C1-C4 alquila linear, e ácido carboxílico de C2-C4 alquila ramificada, em que quando -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, metila, etila, iso-propila, ciclopropila, t-butila, metoxietila e hidroxietila, em que Y1, Y2, Y3, e Y4 são cada qual independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em -CH, N, O, S, -CR6, e -NR6, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, anel de arila de 5-6 membros, anel de heteroarila de 5-6 membros, anel de heteroci- cloalquila de 3-7 membros, anel de cicloalquila de 3-7 membros, - NHCO-(anel de arila, sendo que arila se refere a um radical de hidro- carboneto opcionalmente substituído aromático de seis a vinte átomos de carbono no anel, incluindo anéis de arila fundidos e não fundidos), e -CH2CO-(anel heterocíclico de C3-C6 membros), ou R1 é um anel de piridina substituído com pelo menos um se-lecionado a partir do grupo consistindo em flúor e metóxi; R2 é H; X é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH2-, -CH2CH2-, -CH2O- e -CH(Z)-, em que Z é halogênio; e Q é selecionado a partir do grupo consistindo em -CH=CR3C(O)NR4R5, -C CC(O)NR4R5, e ; em que R3 é H, em que -NR4 R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros ou não forma uma estrutura de anel, o anel heterocíclico sendo anel de heteroarila ou de heterocicloalquila, em que quando -NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros, o anel heterocíclico de 47 membros inclui um heteroátomo secundário opcional além do nitrogênio de -NR4R5 e é opcionalmente substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em C1-C6 alquila linear, C1-C6 alquila ramificada, hidroxi- la, ácido carboxílico de C1-C4 alquila linear, e ácido carboxílico de C2C4 alquila ramificada, em que quando -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, metila, etila, iso-propila, ciclopropila, t-butila, metoxietila e hidroxietila, em que Y1, Y2, Y3, e Y4 são cada qual independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em - CH, N, O, S, -CR6, e -NR6, em que R6 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C4 alquila linear, C1-C4 alquila ramificada, anel de arila de 5-6 membros, anel de heteroarila de 5-6 membros, anel de heterocicloalquila de 3-7 membros, anel de cicloalquila de 3-7 membros, -NHCO-(anel de arila, sendo que arila se refere a um radical de hidrocarboneto opcionalmente substituído aromático de seis a vinte átomos de carbono no anel, incluindo anéis de arila fundidos e não fundidos), e -CH2CO-(anel heterocíclico de C3-C6 membros), ou o referido composto de Fórmula I é o Composto Químico 51: (R,E)-4-(3-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il)acriloil)piperazin-2-ona ou o Composto Químico 52: (E)- 3-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-1- (3-(2-hidroxipropan-2-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é um anel de fenila substituído com um ou mais grupos substituintes independentemente selecionados a partir do grupo consistindo em flúor, metóxi e etóxi, em que R2 e R3 são H, em que R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, metila, etila, iso- propila, ciclopropila, t-butila, metoxietila e hidroxietila.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é um anel de piridina substituído com pelo menos um selecionado a partir do grupo consistindo em flúor e metóxi, em que R2 e R3 são H, em que R5 é selecionado a partir do grupo con- sistindo em H, metila, etila, iso-propila, ciclopropila, t-butila, metoxietila e hidroxietila.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que quando -NR4R5 não forma uma estrutura de anel, R4 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, C1-C6 alquila linear e C1-C6 alquila ramificada, e R5 é selecionado a partir do grupo consistindo em C1-C6 fluoroalquila linear, C1-C6 fluoroalquila ramificada, C1-C6 difluoroalquila linear, C1-C6 difluoroalquila ramificada, C1-C6 trifluoroalquila linear, C1-C6 trifluoroalquila ramificada, C1C6 hiroxilalquila linear, C1-C6 hiroxilalquila ramificada, C2-C6 difluoro- alquila linear, e C2-C6 difluoroalquila ramificada.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que -NR4R5 formando um anel heterocílico de 4-7 membros é um anel de heterocicloalquila de 4-7 membros.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que quando -NR4R5 forma um anel heterocíclico de 4-7 membros, o heteroátomo secundário no anel heterocíclico de 4-7 membros é selecionado a partir do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio e enxofre.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é um composto de Fórmula II:
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é um composto de Fórmula III:
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é um composto de Fórmula IV:
10. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que o composto de Fórmula I é selecionado a partir do grupo consistindo em Compostos Químicos 1-10:
11. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é selecionado a partir do grupo consistindo em Compostos Químicos 11-20:
12. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é selecionado a partir do grupo consistindo em Compostos Químicos 21-30:
13. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é selecionado a partir do grupo consistindo em Compostos Químicos 31-40:
14. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que o composto de Fórmula I é selecionado a partir do grupo consistindo em Compostos Químicos 41-50:
15. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é selecionado a partir do grupo consistindo em Compostos Químicos 51-61:
16. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o sal é selecionado a partir do grupo consistindo em acetato, benzoato, besilato, bitartarato, brometo, carbonato, cloreto, edetato, edisilato, estolato, fumarato, gluceptato, gliconato, bromi- drato, cloridrato, iodeto, lactato, lactobionato, malato, maleato, mande- lato, mesilato, brometo de metila, sulfato de metila, mucato, napsilato, nitrato, oxalato, pamoato, fosfato, difosfato, salicilato, dissalicilato, es- tearato, succinato, sulfato, tartarato, tosilato, trietiodeto, trifluoroacetato e valerato.
17. Composto de Fórmula I ou um sal do mesmo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para uso no tra-tamento ou na profilaxia de uma doença mediada por TRK em um in-divíduo, sendo selecionada a partir do grupo consistindo em carcinoma de tireoide papilar, câncer pancreático, câncer de pulmão, câncer de cólon, carcinoma de mama, neuroblastoma, dor, caquexia, dermatite e asma.
18. Composto de Fórmula I ou um sal do mesmo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para uso na inibição de uma enzima de TRK em um indivíduo.
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