BG98426A

BG98426A - Пептиди с органо-защитна активност,метод за тяхното получаване и приложението им за лечение

Info

Publication number: BG98426A
Application number: BG98426A
Authority: BG
Inventors: Predrag Sikiric; Marijan Petek; Sven Seiwerth; Zeljko Grabarevic; Ivo Rotkvic; Marko Duvnjak; Branko Turkovic; Stjepan Mise; Ernest Suchanek; Boris Mildner; Ivan Udovicic
Original assignee: Boris Mildner; Predrag Sikiric; Ivan Udovicic; Marijan Petek; Sven Seiwerth; Zeljko Grabarevic; Ivo Rotkvic; Marko Duvnjak; Branko Turkovic; Stjepan Mise; Ernest Suchanek
Priority date: 1992-05-30
Filing date: 1994-01-28
Publication date: 1995-02-28
Also published as: EP0601154A1; RU2111214C1; SK278507B6; NO310027B1; ATE152734T1; HUT66309A; DE69312232D1; HU224073B1; BG61477B1; GR3024379T3; FI940375A; JPH06509588A; WO1993024521A1; PL302304A1; SK9694A3; DE69219590D1; CZ20594A3; DE69312232T2; PL176208B1; NO940299L

Abstract

1. Нов клас биологично високоактивни пептиди, характеризиращи се с това, че обхващат от 8 до 15 аминокиселинни остатъка и са представени с обща формулаХаа Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa1 5 10 15в която Хаа означава неутрални алифатични аминокиселинни остатъци като Ala, в Ala, Leu, Ile, Gly, Val, Nle, NVa; Yaa е основен аминокиселинен остатък като Lys, Arg, Orn, His;Zaa - кисел аминокиселинен остатък като Glu, Asp, Aad или Арм, като поне един от остатъците Хаа или Laa може да бъде пропуснат.

Description

Изобретението се атваея де дени дентмде е висока биологична втню 09 типа на известни ппиродаи съедененяя HPC_t де е по-къси амино киселинни последевателдести.

W

НИВО НА изовта aw

В Ж> 432 400 ,както и в публикацията не ?, St £<tiC %р. cfc п. GaSiwodbroi.» 1.1S-26 _t 1991 е описан биологично активен протеин,изолиран от дера и животни и озтчен дето BBS f Mr Mhriiw^ Сомрдеде1 4 Този протеин а е високо молекулно тегло от около 40 000 £ 5 000 Жлтона, вее адотичде определена структураЛова съоденоиио притежава мдего широк спектър на биологична акпвж? като * задат® против язяи.хвпатт, антивирусна мирт.аитидарметокднв^об^ тижшгшжтедаа актив но<».антималигнена st други. 1Ъ би могло ж са използва за лечеше на цитираните заболявания,на забелязания и тр^швкя на нервната система .нарушения е дапяминоргична етиология,® хирур гията, стоматологията, при лечение на стерилност и във ветеринар нита мададана. Чо този яирож спектър на биологична активност чело ок е оледатвие от неопределена струитурж или дори от не· достатъчната чистота или хомогенност на изолираното съолкмииио Ж.

Открити са синтетични пептнли само с 8 по 15 амино шоелинии остатъка във верига с молекулно тегло ’W $00 и 1600 it»* мтА.—м шмх*ям1киь scimixi С&омйк ямьтмпеФСФМк мь<мммйа*ъ*шъльам *ia ммжешвФМЬшА ^м»...... /влтоив* които имвт оио/ххи^на аитивност не ирв родното Сяоюляпг* нае ΒΡΟ,ηο е повишена сележт»ноет.’Гт нови пептмда са получени по много по-иионошчен начин и ©а по-малко обект на въздействието на странични реакции, поради това па съдържат »* мат «мно киселинни остатъка от W.

жшш «А * ги *4 <

В съответствие е един аспект от настоящето изобретение, са осигуреш клас от синтетични пептиж, които проявяват ввненалвашо висока биологична активност, и шж защитаЖ.^Ч1Щиважжч1®ЯЯМ®Ж жЖЯЯвчВижЯ ч1ж0ж»1ж ж^ ^жж '••'.ЯЖ ЧИ»*ж Л ЛЯw Чж ж» jB 499 Ж^Чж «ж .W 'V4ir · 94рВ/г* * чнь ^10* **ЯЬ Л^ЛЛ * *МММ* Лк вЖЖЖШЖЛкШМ ЛЛ’вКЛЛЛА^МЛЛЛЛЛ ^ж

ТЯ ВЯ ТЯЯЯ©а*^,фИ ВСЯТИЯ СЛучвЖ ЧР9ЯЯ9 сЗЮТОТ1Я1!т C^OJBnWfMK © добре определена структура притояовет огромно ярмиететво в сравнение с частично определеното високо молекулно съединение ВРС.което може да бъда получено cans посредством много слот

-—“·-—*--ж *- lja. Лжжжь 1 *. Мшава a. II- — ·- - -*- *— in 1— -—— --—- — процедура от съмнителни природни източници.

1Ь-сп®1Д«ално,и5юбрете1ше«> е» отнася де нов швв бйожгидии ш»ж активни деттда»вклтв®де от 8 де 15 ашде wee· явш остатъка,яоито еа представени от следващата основна струи

номерата дед вдежж адеде киселинен остр.тзд.отяесен към позицията ва остатъка в паптидната верига I

Хм Wfe IW 1W Хм Ум Pro Ма М, 7м Ц_л Хм Хм Хм ?

10 15 въдете един или повече амино киселинни остатъка еа sawsre». Звиоиижв Хаа ,Уаа и -баа ,които мотат да бад» използвани еа покадени на следващата Таблица I,

Таблица X

Оммнмшде Д» **жжмв*^м им ^wlWTWH *4»lwiHrl»Twt

Хм	®·H8t ЖВ?^МКВЯ®1 Ma, ©Ala, Jew, Xie, &ίγ, Vai_t M,
Ум	основна ашно киселина I %^.Arj, Огя_ф »n
Zm	видела амино киеелиде С1и, ^Ар, Аде, Apt

tmAVlMMhfrttlAiMAlMMHhJk. МИ^ЬвММ··* Мк* ЖМ Φ·ι— tf-й—ι—· ж (В гфЗДЦдочИТвгМТО IwBfHjp Сда яжжто СЛдедМ ·

1« &1в η» Pro ciy ly.Pro Al. Мр Asp Α-ίβ Cly У

ΙΟ 10 15

В съответствие е .друг aemw m явстояшете яюбретж·, осигурени са анажжшж пвптида в &шяв яш дарбодси тершяира* яа fopa ар С-края,притежаваш описаната по-горе структура формуж в гьдее гюне едан вж мА-швго 7 «мине «исежини осшш са пропуснати в обжстта 1*15 и йон© еукл ее вслушана ®«но кисажиш остатъка могат ж бъдат аашствяк еъобгвзяо описаната схема яа заместване в 1®бжца 1.

Цредпоштаните пощади са ивкто следва * s~: j*. п.. 4

S 9

Pro Pro Pro ion fys Pro Ай ASp δ 9 съответствие с друго изпълнение,пептидате притежаващи структурната формула както е описана по-горе, където поне едни амино киселинен остатък може да бъде пропуснат и поне едаи от оставалите амино киселинна остатъци може да е заместен както а означено на Таблица X, са трансформират» в сркличт» чрез образувана на нова връзка СО-НН между първия и последюш амино киселинен остатък в молекулата. Цзлучените пептида еа както следа t

Φμ.,Μμ.Μμ,^

Хей θίκ Pro Pro Хей fys Pro Afa Αίρ α{® Хеж б{у V®£

S 10 13

Заявителите саустановили, че когато се използват пептидите,описани по-го ре, те проявяват екологична активност, която < е еднаква или по-висока от тави на изходните ВГС протеини.

Проведени еа фармакологични изследвания на описаните пептида по общоизвестните ин витро и ин виво метода,като са установеж следните фармакологични свойства *

1. Стомашна язва,индуцирана от прицудателен стрес

Ί. ⁸ 4, 6 и 2 се прилагат в дава 10или

i.o. 1 час преда пропедурята на уврежПлъхове от породата Айбино Вистар /мъжки / /180-200 г / се обездаижват лежащи по гръб ва 48 часа на стайна температура. Незабавно след това се убиват и уврежданията се измерват. Пептида те S ¹⁰ данв.

Името Ϊ.J.»така и 1.р. приложенията, дари » такива ниски дови като 10 пв^/ж^ с^& силно протективни.

2. Пистеаминен модел на язва

Женски плъхове от породата Лй(Й!но Вистар /180-200 о / се третират с разтворен във вода /дестилирана / цистеаминов хидрохлорид в доза 400 mj/я^ L^.,S'.c. 24 часа по-късно се прилагат пептида в доза 1,0 100 чена е силна зависеща от дозата защита.Овцата активност е уста· • · « невена и за ί.ρ. и за интрагастралният път на приложение.

3.- Редуцирани с терпентин бутални едеми /едам на бузата Рсвотни I Миия плъхове от порода Вистар /180-240 г/ ,Ц •10 във всяка група. Терентинът се прилага интрацускулно 0,02 м/ на плъх. контрола > 0,9^ солен разтвор интрамускулно /0,02 м/ н^ ♦ 9 * * w все®? плъх, 2 χ /, Одедеде със де.ЗЬЗФ 2,4 ое пдедегде в

J » . , жде 10 мо и 10 де/де , 1.р. и !<©♦, 1 we преде терпентина, ^гшже адаш се дедервет 24 чаеа слея ияяупидедето ии.йе♦ тисянееде аш· > Т@стуввне по Vrfvnw. Яделелдедето тшкм еа вйктевш в дож 10 мо/де.

4. Хирурпш t ефект при тм ивдидеде

Ндеж пльаде перо* Аябиде ' 10 де вее®? едедерюдеде, « 20ОЖ) е телесно темю / е® дедадет де ewwe нзвмшт» Ддедеветае де^ни раяи се постоят в отдел» «детде. %я деш етеряа с.дестеаил не велде дедетно ее преде О-еентидетро·· сриадене и дедеде де дерва и дедередео. дедедесимо от дел атрв де, се преде сруде е дедедеиа 1,5 еи. ляната pewa ежя това ее дехвада е да* дерурдечесде ияидеа,а деудеде се оставя необработена. йдеорадетдеде слвд дерадедент мдао деете дени ни* традермалде ое прилага делтиi oo.U,Ho 4 ,девтдеден във Щде· одегдеде гадедер,» деви 1,0 но и 1,0 де/ де тедесде топло или * саш ^деодедеден деатдер дете дечтдеде.

Оредее де оздравителен ®|е«т се дебдажша и де деате рани · дет таде,в деято се дедедедеде шдеуртееде тждееде, таиа и другата, беи дерурдемде демееа.Слоя дет деи третираните групи дедаомт де-шл» «йиг брой деадедеде едетде и ядештех* де де—дебне шзвиват дедеделидеде Шйж отделдето теде г йон* трохата,

5. Вдедейстдее върху едедернштлни иадеретия

За иуждете на аледердеадеа св одедедеде »тжде бели в»· деве,дероде Шетар / ^ · 10 , 200 · 250 грош деде тегде Λ Оод леде етерна шюетавде деделдеде иудеде ее обдеде с пжадтад

- 8 • » · каутер в продължение на 5 секунда. Паптидът ео.^о.Ио* 4 се използва в доза 10 мо/ко телесно тегло, l.p. 1 час преда предизвиканото нараняване. Контрола t 5,0 мл/яо телесно тегло физиологичен разтвор ,1.р. Приложената процедура предизвиква обик новено подпухване на муцуната, което винаги е фатално за контролите /но не иа лекуваните с пептида животни I/ в рамките иа девет дан след нараняването.В противоположност на контролите, е се наблюдават само леки посттравмвтичии подавания на муцуната. Впоследствие нормалната назална респирация е само леко увредена и оздравяването е непрекъснато.

6. Въздействие за заздравяване на счупвания

Мъжки бели плъхове,порода Цетар /270*300 о телесно тег/ ло се подлагат на мадаално счупване на лявата тиб^я в средната част на костта под «торна анестезия.Ке се използва обездвижване и животните се оставят да се движат свобода» в клетките.Цветните се убиват на 5-тия,8-ми,12-ти и 30-ти ден след индуцирането нараняване.

Пептид ео.ЗоДЦ 4 се дава в доза 10,0 мо/го живо тегло, 1.р.,едан час преда нараняването и впоследствие веднъж дневно /последната апликация е 24 часа преда умъртвяването/. Контролните групи получават успоредно еднакъв обем физиологичен разтвор / 0,9^, 5,0 м1/яо живо тегло »1.р./. Значително повишен оздравителен ефект се наблюдава у всички третирани животни при всеки от изследваните интервали.Забележителен е факта,че всички третирани животни показват постоянен по-нисък локален посттравматичен к$кхх хематом в сравнение е контролните животни и we възстановяват своите нарушени функции твърде скоро.

• 9 *

7. ^ишрусна активнос»

Ангивируснйта активност се изследва върху новородени ш®· ин,линия ВАЖ - С,н® възраст дадасет » четири часа ет дата пож

АРВО » вирусите I 7 · . I , :

.. 1,2,3,4 ₉ , * . Са > _tBep ^; А,

ЗСМ / 7 и На ре тип J , се прилагат вм вид вв вирусна суспензия в разреждане 1O*^S/O,O2 на шшва 7 кажто е общоприето и се инжектират t.c. или р.е.

Нара- .. А 7, С оглед даференцирвж m зирулентноеда,.падате се довездвт да стойности,че да е възможно сренияиането им по стнояоние на Ijqq в 0,02 и 1.с. 7 иж р.о. ,Нвра А 7 инокулум при разреждане 10^.,¾ тези надам стявв възможно да ее сравнява хода на различдате давени инфекцда,без .да ее взима ч предвид възможното ино нулиране е paojanw данвеятредм вирус.

• *

Пептида eo.la.Ho 4 мо7м1 в 0,9* разтвер и се пдалвга caw едиодатие «* » ·* · в доза 2,0 ме7ио живо тегло, 1,с. или!р. t а/ 2 часа преда вирусната аплиившя 7 »2- /. в/ едновременно е инфекцията 7 о 7.

• · а ^нтрола > свдаят обш фишодагичен разтвор 1.с. ида 1.р Резултатите са обобщени в Таблшда И t числата в таблицата обозначават дайте» жжто веичии инфеи тирани с вирус навади в третирате е пеят иж Физиологичен разтвор rrsyiat се дадаадвт на. инфожвинмв·

ТРЕТИРАНЕ

Вирусни физиологичен разтвор инфекции 0* • · · ί » · η

I.p, 1,с, 1.р, l.c.

синтетичен фрагмент

-2^ 0*

1., ρ, * ,с. 1 .ρ. ¹ ,с.

TBE	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Bhania	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Dengue 1	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Dengue 2	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Dengue’ 3	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Dengue 4	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Sinbis	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
WestNile	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Calovo	a	5	5	5	5	n.d. n.d.	15	15
Hepatitis	A⁺	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
LCM		5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
Herpes typel	5	5	5	5	n.d. n.d.	20	20
None
(Healthy)	n	.d.	n.d.	n.d.	n.d.	n.d. n.d.	n.d.	n.d.

™ ι ι IWIII »·ιιι·.ιιι . I I in ι··ι····η···ι—, .1.”· '»' . I . ^¹.¹ ·2·υ·4.Ι? ¹ I . I LIJIU¹ WB1W • I _ - , _t .

π,ο, - не определени,.- животните са .наблюдавани по продължение на 40 дни след вирусната апликация, Щ са сабелязани мъртви.

а - 4SP - вируси + - перорална вирусна апликация χ * жптте са третирам даа часа пре.ли вирусната агглидаиям / *3 ft / иж едаовремнно c въвеждането »т вируса /о/.

Ο ... ^физиологичен разтвор р -.0,001 I 3 миеш за всяка груяа

8. йтидепресшреща активност

За установяване на антидепресирадата активност ее ивволзва теста еа принудатежз плуване по %Рьо1Ф et al,»%i% £2*379-391 ,1978 .

За дози експеримент ее използват мшш плъхове ат парада Шетер /130*340 о телесно тегло/, ^сяедвадает пептид eo.^oi. W 4 < ί ΐ:

ее дам първият дан след предаестовета готовност и гтошят да»* < · * · ежи час преда експеримента/ l.p.I* *·-·- » ^отрежа група t ί.Μ»οлогичен метеор . 1.р.

♦ потните се наблюдават· пет »^нути .Bpewro че датюдаишост се издарва / Т|/.

в контролите група е одало 150 сек. , а г третираната с пептид група е само 50-70 сок. ’Еози ефеит име голяла продал* :жтолтюст > след 16 дни все оде се наблюдава.

Лази на които се отговаря I 10 да да 10 по/ио / пълен е^ию рт/во* ефект© ода ее наблюдава да/ да 1 ефекта е » яете»* в© не

9, ^еат да дадал m болестта » Цзрденсон

Sa иаеледаде да добре познато «дш да ^рдетдежта • * · 4 · 4Mf болест,са използдаде / Hmmla ' . or, аЪ.ЯигдееоЪ Ъх1еоЕ, _________{_} » & _t95-100 , 1990 / t poaopema адш и модел.

ГШЯ -Хановер дадел / % ЖР медал / иж шиий от дата пола / за редердедешя модел Л « « а/ МИТ е® прижде в доза от мо/яо телесно тегло ,1.р.

веднъж деевно да шест последедетелии дай, и сдал това да след» « вагдете дедерк да. в по-виеода даде от ^г0 да/да телесно mi, чин» >Ьедедважят пептмд , 00.43¼ 4 ее пдедага в дева 1,5 да и 15»0 де/де »Л. , 1,р, ♦ 15 шш преда всяко въвеждане де а

пш 15 дан. елод всяко въвеждане ж ИГО, в/ Реаердеда ее прилага в жде 5 мо/де телесно тегло, Ер. Тоегувадеде пойгид се пдедега в леда W да иде 10 де/де телесно тегло, Ер. 15 данути преде редердеде иж 04 ласа елод реяерпановото въвеждане в еждата даде.

Ионтроде * еднакъв обем ^жолотен деятдер ,5 af/да те· лесно тегло , Ер,

След повторното третиран® е ядадагде ее дебдедена забождаме ^Ш^цщИрвИВ КЖ Жж1^1О1НВ!ЕЖ№ПГОррктждН0СтЧ?® < ВМгШИИЯЖЯТВ® Ж ^|^МИя&|Ж

В ЮТ моделът повторното третиране е tow иептид одера развитието на кателепсият® а дедежва адедедеже и тредаре.

Третирането след 15 шн категорично предетвраад». дедададаи

развитие де шталедеж и забележи w намалява аденедеята и тредара.Отдадено дееоде с.’<рт»ст /5П* / ее забелязва след caw едео ашдераде де »де е лед девтордете му въвеждане салда н® мадам.

'w.· *W.

• 13 *

10. ΕφβΚΤ HB IHHIWIJWBTO' иъвеждене при хеде рентген WK

Във веипки едедеришнти са използвани възрастни шяж бож 1Ж»вв /150*1Ш о/.

Ефекта при дедедегичен wk ® изследвам в дае серии «ден рименти» ® / ^BBOTfWT® се обезирдеямт / !w wen S ми , ” «ии за ©станалото / де тижата седрг.Отвтдеедшш* обем кр» пмжмикм· по фаталният изход се оненям чрез претмтипвне на wmthhto е пептад 60.¾.¹¾ U / 10,0 де иж 10 де/де тедесде тетде ,1.р./ или физдедепишн разтвор. Значително ш-високи загуби » кръв » сравнеше е контролния обем крч», се отпит® в групата,третирана е по-висока лоза. от пептиде.

в/ Дивното »жтне се понижава «раз деитрожраде отстраняване на кръвен обш,елад мето ее поддържа ма 30·35 w Ко стълб за пернел от 5 Wffi.

' * . . 4»»

След том, се прилага 1,р, пепто ^0.¾.¾ И / 10,0 мо иж 10,0 де/де телесно тегде / иж физиологичен mотвор /дете

- * дентшла, 3,0 м!/де телесно тегж /,В пдетидевест м дентролито, у третираните животни се ®Оют значително детдемне на стойностите и® крьтдато нададеш и задържането w м» е.ян© яде, както и пълно отсъствие на смърт»»,

Шр|да това, счита се че изследеаште пептида.в случая . де.Ж. 1¾ 4 , са висоде ефективни при подобряване на поежлстви* «та от загуби на кръв,

- 14 ·

11. В^яние върху летална редашшя

За ©кспешмента са използваш шт ^ададар , 1WI ,на възраст 5-6 свдаида^ от дата пола /18 - 22 о телесно тегло F ♦

Прилага се синтетичен паптид ео.^оЛЬ И в даа 20 да/да

- ’ * живо тег», Ι.ρ. 1 час преда или след облънданеЛнтродаите ж· вот» получават едаовреданне едааиви обеда физиологичен дазтвор 0,9* 1,р. / 5,0 «1'Лю Л Обишюва» злраж зизотда, дада» в обичайни условили® подлагани и® въз.пеаетже на дадаретпа ида облъчвана, служат като здрава контрол®.

Облъчван® * Титрон 90 / Co 60, 2200 Cl /. Неанестезире.ни «вот» в клетки, тю 15 в група , се подлагат не. облгтда иа цялото тя» със супроотадаи дож от 9 Су в радашжонда област от 20 х 20 ом , на разстояние 30 см.

·* Облъчването се провежда двукратно да ден за 30 дни.

Ддачда контролни давотни ударат в радаите на 7 - 12 яни ^{7 11}100/12 ^Л

Ва са наблюдавани смъртни случаи при здравите -необлчдаяи юнтроли.

В съответствие с данните от дантро».та.,не са наблюдават различия в групите, третирани е пептид 1 we след облъча®»®®. Здачителма степен н® одаляваяе.обачо се наблюдава яогме съеданен *

даете се придава 1 час вреда р®даа.дата.%ж да се уетадаж да 70^ повишение в 1 в сравнеше.© юнтролата.

12. Влоние върху иидапдан® далфоришия ’· **

Възрастни женски швда Хановер , XWX /_ДВу юеечда / , които да са Жли оплождани преда дап,в тегло 25 о ,е® използват във всички едавададаадж,йдадате шяж във фазата w еструв ее • 15 W-'

кръстосват със зрели здрави шшии от мъкни пол цяла нощ. % двадесетият ден от бременността шините ое умъртвяват.

·

Прилага се витамин А в доза 18700 П/да телесно тегло , 1.

*»-· , м» , на десетия ден от бременността /0,05 м1/но телесно тегло Л Йдаонремехзд с това се дава пептид βο.Χο,ϊ^ο М в дава 10 мо или 10 по/ю телесно тегло, Ър.

4·— в 1

Тигрова I фивиояотимен разтвор 5,0 И/но телесно тегло,1.р Чивотните, нетротираш е витамин А, получили по същото време 1,р, физиологичен разтвор или пептнд 4 в cwra дава служат като здрава контрола.

Нв са установени малНрмации у зитевите / с физиологичен разтвор/ или у трет ира wo е пептид групи.

Резултатите са сумирани на Твблигт ШДе показват изненадващо значително, зависеща от дозата защитно възпействие върцу изследваните животни посредством пантите « слещу ия.пупиреяи»о от ниташн А шлформвдаи ,

ТАБВДА Ш

Наиросиопево изследване

Третиране	Общ	б£«й фетуси	_НЯ
			фетуси
nftwwiBtsi vmtfrab 1Я0гЯмг^Жг<йиС· Ж ВИ*		ее □о	0
/<изиол. р-р /
Жташн А		54
%ташн А ♦		36	13
попид 4 -10 »/	*___ по

Шташн А +

- 16 13.. θοτρβ тсашвег

Остра токсичност за ештипгш пептиж се определя еърку женени шапки ! е тегло с»Л0 о Л армират е· групи от оо 6 «

^м№мам^Х.яакИ>4йЬ>' и*.** «»*. жашм м r»t, t** Ш¹ г~ ι»ΐιΐι ичг· <—tMTiii * mabbmMla мм

ЖИжЮ>НК 0® Β©βΙ® 0ж©о®рИ^в^;1НЧЯ и пОнтрояв ·

». · ·**. -W* Лл*.

Пептиди eo.lo.llo t 2.3,4 и 6 ое птилагет в деви 8. 25 ' — · « и 50 моЛц телесно тегло . 1Л. %1гро.жите групи се третират о ««-^, ... .V-- , физиологичен дазтзор Л>,9^ , 5,0 м1/ю телесно тегло Л Гноени» то се изследват за проявя на токсичност през следваото 15 дан, % ое наблюдават сигнали ж отравяне иж ошрт при прилаганите дози. Наблюдава се интересен феношен не повишен мотиаитот *

и жзненост в продължение на 2 часа след пжжгежто на даптида.

Следайш гезултятите от тези изслежоиия.пептидатв проявяват активност в смтл.че и предпазват оргенит-ш от стрес и м<Ьлтю1ШЯ,н»й-о<Ш я® ттшяйщвя· Фуншдада н» тори о-тяни* зш·

Тяхното приложение следва да е cw ефективно аа предотвра* МА4МЛ'*МКСЛ* '*4ЙЬ ΙΜ* М МШН.«'Mt* JK*L *.M*.* -<tt& **^*MMh*k Mh**flk ^ШНЙк

Ж®1МКИ® Я жв^ИнНИж MB ЖфЮЯИЮ*ЯЖ рв1й1«ЗйР*1И W®СХ?ЖЯПжЖИ® Ж W8 жения но човека и швотжто.Ш^жииалж.теж cw динения бит могли да бъдат използваш за лечеше на I • стрес.индугжрмди неразположения и звболяжния • ттроинтестиналми язви е разлмпна етиология • възпаления и едаш е дазличен произход

- травми, изгаряния.фрактури гш костите и епда в хирургията.

• вирусни инфекции • яоюво

- болестта на Дзркинсон • за защита от радаадат • за задига от мвлфордаадв

Най*о<П®» описаните пептиди шгат cw ж бъдат използвани ®- Ам шлщ м*^имн МММ «Пъ*Ь «м^аь .м^м. ·, *^ммь.,мм1М*ШМ «Мк·* * .ама -— мм мм^дк^й м«*^.„Ммм>^· мм. ^^мкй^ш шрои ирм* фармацевтични състави © нетоксични Фврмашвпндаи — — ****** ** ******·*.***** ММ ·Μ№(«ΜΚ. ММ* Шк* **·**** *МИВ а »-< И* j* rni'Mli *μ..ιι·μι>» ДКмьЗ®****** *«*В·

НОСИТвЛИ ИЛИ ВвХИКулумИ К8ТО ПЪЛИИПг*Ж,Н®ТОИВИЧЖ буфер» *ШК физиологичен разтвор. Такива фармеповтични състави w»t да бвдвт използвани неделно или в систеде и могат да бъдат в каква· то и ва е подходяща форма като течна, ЯЙЙ, полутвърда., индап· щк»т«14вхлами»ло<тош,иапогя1 и .ДР· подобни.

Тези пептида следа да бздат въвеждани в дож от IfT⁵ до 10’² мо/но телесно тегло, когато се прилагат със система. ^>га· то ое птмжгет локално, те следа да еа в по-високи ионпентрепж, като 0,1 $ де 0,5$.

на съединенията при перорално въвеждане /имтрогвстдално Л Описаните туй пептиди могат па бъдат еиятеждож е пастта на поетапна кондензация на защитени амино десежни в домогенни ♦- ,· течни системи иж за пре дпочнт®де,използвейж твъгио ^азов метод, За получаваш на шкжчии пептиди ,дестично дедагтеин жнеярни пептида © желан® льляина ее полудадет гада е алкил ©етерни гру· па при С~края , дойте се превпъда в ажд,с тюеледащо удаодане и резрудаване на защитеноетта. Обратно,частично защитен жнеарен пептид със евободаи крайни групи може да бъде ^уливидан посрал* ством дафенилфосфоридазид в шюпо разреден разтвор,

ЙЬобретежето· ще бъде описано посредством оледавдате иримерни изпълнения, които обаче не ограничават неговия обхват.

ПНМР l_r

Синтезата на пептида ее провежда sawmalw със 100 да Boo-Valt каучук за получаван» иа С-крей» тарбопси пежд» ·** «·*» m верига / ВШ закупена от Appt, ВШ'У<т»м ,яажетяанв 0,58 мда/о е ажно - адая · 4 * /оженим**/ - Фенилопетно «веело * производно на ажопожтарова» Вое амино жселини / %» · терц.

* Зудашжрбеикл · / ее кондензират ода® свод дрп* върху полимерен носител е помофа на ,хдаз©яропилка|м5одаю*д / <№0 / дат© кондензационен реагент. На вееш етап Вое групата ее отстранява а е 50^ ражидар на трифлуорооцотш киселина / ТГА / » жхдарочетая. Ашшгрупата след това ее депретажзира е даизопреттлждамкн.

Конверсията във всеки етап следа да е по-висока от 99 Л* Ада- но е ,новдензацията ее повтаря. Ода ц пъжвта синтеза, се провежда разграждане е помощта иа прокедура / ? дася при 0*>С / В качеството не поглъдащ иарбожвите йони агент· се използва, анизол. ВГ се изпарва. в поток от азот. Суровият пептид ее получава чрез оттам· на даденият остатък в сух етер.

Слод това суровият пептид се пречиства чрез оОратно фазова BPIC е подацте на колона 5 х 150 пи запълнена със сижка ж вол ВР - 18 , преженена елуация е разтворима система · 0,1 # ТГА във вода /ажмвтрш, Откриване I ултравиолетова абоорйда при 225 а,

Синтезата на пептида със ео. -¼. W I 4 co илюстрира е *пя» 1 .

- 19 Пептиден синтез е помощта да Г мое метедеиа

За синтеза ое използват стандарт» Г мее застани амин» киселини / Г дес * 9* (Н^Р®де>«»илож31*дарбо«л·· Л Втреничде-вер?шгите фуниш са защитени като 0- тото. бчтидеде естери / А р,Арм,С^г» Ада / и като- произвол-^ »» Це / ₅ Л Първата ашшо щсежж / е сяътшма w* пождарна с?ела в да· чествате й да носител *ВЯА / ВИЛ · бензхиприда»т!де о^?ат / е помощта на демаепроделдарбодаидед в дачеетдате н» йуш«! агент. На всеки етап Д»е протеятивната група се отстранява е пиверидан.Пераде това втората и т.н. еледдащи едеде киселини се въведе по сиде начин де завършване да синтезата.Цдеепмдето се остаствява е помопуз да саес от ТГА/ТШ_ЧЛ Днидел · 2 I 17 I 5? / обем/обем /.

йад това пептвда се пречиства е помощта не HFU датоде» л описан в %имер 1«

Ойнтедата на пептида съе 00.¾ W · 2 е илюстрирана на Цгура 2.

ПШМЕР 3.

даптиден синте» е помощта за аедерагина методика

Всички ат» киселини,които са използггяв,сп нашите» при твивт. -ами® Фунмчи посредством 1о /- «, а ^{d J L}V π ⁰¹ &

дедетил * 3,5 - дагйетодембеншденсидарбанил - /. ^граничните функции се задатени чрез Z група / · бензилзксикарбонил S / де .

за жзип и 0 - | · % група / | - бутилестер / дева и гдатамидева киселина.

* 20 -»

Повърхност Мервфиелд / кръстосаш свърши хдердатидаран полистиренов гея / е тпвцитя ее М ее използва за свързване на първата *вн«но дасежна тередетвом иеймт цезиева сол. След кондензация с жши»хедаи«8.рбодеишд /ДОС/ Ш протективната група се отстранява да вееш етап е 5 $ TFA в дезшзрдаши ,гюс лепвано от промивате е 10$ триетиладан в дахлормвтшьСяед депротош^жрвне,сле.даадата стът® да лупжшнв се ме,дайре посредством съшият *«етод, 'Гени етапи да кмпжрвте се повтарят де подадаване да нреЖшта амино дасежтеа /пептядаа тсдедевателтт,

Ширая иажвдв пептида ее разцепва /отделя/ от делидаршш носител е помодеа да смес НВр / ТГА /ададел. След иедарядаяв на летливата част,тоду де дедазджят пептяд се пдаттипитирв със сух етер и се изсушава, Сдед то» суровият даптил се прелиства *· по НРДО метода, жито е описан© в Пример 1, йнтезата на пептида със t 6 е илттрирано иа ^irypa 2,

ПРИМЕР 4.

Синтез да дадаопептид

е предварително получен е помшдаа на метода,описан в примери 1 ида 2*

0,0005 молврен разтвор от този даптид в дашшлформмгд ее циклизирв след добавяне да дфда^есфоридазвд и триетидашт ври 2(ЯС за 12 часа.

След това ежете. ее хмцроттра е хидаген / натежете въглероден катализатор при 25°С м 8 чеса.

Шзтеоритежт внимателно се итеярява и суровии* продуит *

се пречиства е шниощте· нв HPIC метода, сямеаи в Прижр 1. ^оопептидът, който им»$е^« Ж. 10 е с Ну ^1и iW ^рго с(у Αιη Чро ifa ASp

8 10 и се получава като 10 &<н добив.

ПИШЕР g_t

Синтез на линеарни и шкло пептида с помощта да t)i^ методата

Содата метода» е tick задатда груян се идаолзте за получаване на линеарни и циядачни паитида. Стредачните фунади са задавени от 7 група /лизин / и е 0-беияиж ©етерни груж · - ®4 - 7 г^минт и а_{0Пв1ЛПга0М} !.

Пзлимерен носител е НУС^АМ сдала / задавена торта, иа 01РВШ , Хайдалбе^Гертшя / » която е 4 -бр>да вретенил * » „иь __ an MM-*wa№ ._.. ап«а*· «шшк-лмпа··* 4мг VMMk ·Νΐ «πιаамг>1та> е· д Ьа юШ-итцА-миЛ- 4мьшм1ь*^«1Мммнвяь **в * влвшл * ймид^мвтйл * июлисздир®я е *мрввта аяжи® жввжгкв / ^октешми / е свързана върху полимерен носитея посредством неговата цевиева сол.

След това W? групата се отстранява с темадте «е трифлуореоретнр кисежна / Я0 / в днхлородаган и амиие трупа, даиро· тонизирана с даизопропмдатилаши.

В слепвалият етап ^oU-глицин се присъединява жъм ваят· нов остатък в полимерната матрица е πο’/ощта на диидепропилшрдедетогд / Д1РС / в присъствието на 1 · хидаясибензотриазол.

Тези етапи ое повтарят до пълното девървдене «а пептидаата ветите.Синтезираният пептид в дегжтеиа фопв сжп това внимателно се отделя от ЙУШР носителя с тетракие - /трифеиижфосфиде / -паладий / 0 / разтворен в безводен тетдеждаНМ»» в ир отсъствие на кислород.^ дечестдето на адето се използва морфолик тато акцептор на за злилови групи, йлимерният носител се филтшрв и промива е тетрзждрофр· ран.Сдед то де разтвор® не нептида се филтрира пред къса делона на силина гел де отстраняване де паладаевмп детелидетор.

Рауата.дейто съдерде частдеде дещитеният пептид Дд, . ое изсушава след изпаряването на разтворителя под дентум*

Частично протеятиреиият пептид 4а се разтваря в ттжфлуороетанол и се хилроденира в присъствие де палажй върху въглерод /10$/ с новороден дез при Ί0®0. Кптажгеторът се Филтрува и разтворителят се изпарява под деяуум.Слгдев||ят остатък след това се пречиства с помоля на MPIC »<е?оде денто е описано се получава . · в &wep 1. След прочиствано иж пепжде със$ ,^.Η© 4 ,%о

лукта се идатифшяра дето идентичен със· съеденениото,получено в Пример 1,

Лиьха

Частично ждатеният продунт /пептид 4а / ее разтвори в диможлфор^жд /дюоорметаи / 1*1 / де получаване на 0,001 модерен разтвор· За цнклидерано се добавят ДШ* и И®4? и ее оста вят на 2СРС да 10 часа. След това разтвора се тошшнтрира до шжък обем, разрежда се е 2,2,2 - трифлуороетанол и се пречиства чрез прекарване през кожна запълнена със Сефадм» ® -20. щм.съеджда частично защитеният цикличен пептид 9я се сШг* рш и хидаге?0*рет о паждеум въряу въглероден 7 10^ / пателизатор да ЗСРС чрез продухване с по пороя и интензивно развдедена за осе- ?ш,

След това катализатора ое отстранява чрез 'Тилтригене и разтвора се изсушава чрез изпардене на дантвочителя под вада* ум.Оурошят пептиц депълнител^с ее пречисти» чрез НРЮ с подайта на описаните штоде от Пример 1. ^лупаният чист нихличен пептид се иддатифмдерв като пептид със ΙβΙ. П© t 9 .

Синтезата върху ЯУШ?АК^ дежмернн носител с помощта на !>©U детожде и деклизиранет© ее идастшдет с $нуде 4 я R, Всичад синтезирани пептиде се проверяват да тяхната чистота чрея НИС метода е помощта на колона със оилиде гел ИР-19 / оитадецил - еиденидеран / , елуишн със смае от разтворители, светожде ее от вода /ацетодетрил/трифдуороорвтде киселина. в обичайно съотношение. Във неячди случаи чистотата е по-шсоиа от 95*,

Паптижте еа одера ^ерозирани ’w ами?® жеожден аналиа стейюстите са в рампите на w · 10* теоретично 7 , да секвенционен анализ .молекулно тегло, огг-ежлдаде чрез да сода -РЯВ ©пежрофотометрия .ултравиолетов и инфрачервен еюдеф 7 ЗЬрури б и 7 7,

Доделдето са описани сяда действителните същински варианти на изобротедеето в специфичните им детайли, би бил© очевидно ва специалиста в областта,че датт де ое проведат ^к<тюго други слегдифичш дарианти де изобретението и ?л®го изменения могат да бъдат шшравени» всички в луде де изобретението и в обхвата де приложените патентни претенции.

Claims

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ

1. %8 клас биологично високо вдигни пептиде,хврактетжжт»п|и се с това,че обхвагдет от В до 15 анияо киселинни остатъка и вот са приставени с обде формуде I

Хаа tea TW Pro Pro &>а ^а® EW Asp 7аа Ua ^а Хаа Хва

15 10 15 където *

Хаа означава неутрални ажфатични амино кисежнни естети като А^вА(а , 1еи , l{e , &{у , V₈{ ,н{« _t Ш®

Уаа означава основен амино киселинен остатък ват© fys ,

Огп , Нй ,

7®а означава кисел ачиде киселинен остатък като &ίη , AJp _tАао[ иж Apt ₉ където дена едем от остатъците Xsa иж 2аа моме де бъде ппопуе нат.
2. Пептад съгласно претенция 1 , където молекулата е пиклизирана посредством ашдаа връзка мекду първият и последен адено киселинен остатък.
3· Пептвд (яс£е^. W* 1¾ > 1 е фор^лв I

1<Ж С& Pte Pre 3e Gly Ι?ς Pte Ata λ2ρ At. Sir V.<

15 10 15

- 25 *
7. Пзптид със Ho s 5 от Формулата «

Cly С1и Pro Pro Pro Cly fy Pro Al® A p Ata Ciy 1^ У at
9. Двптид със £®^»XcLHo I 9 от формулата I

Хей cfa Pro Pro Pro Хей Xy^ Pro A{® ASp A(® Хш c/y W <25 1013
10. Пептид със2е^. Jd. Но * 10 от формулата ^; с{у с!и Bro Pro б(у Ар^ IVo А{а А^р

2 5 9
12. Терапевтичен състав съдържащ едно или повече от съедаданията съгласно коя и да е от претенции от 1 до 11 в примес е »

фармацевтично подходящ твърд или течен вехидулум.
13. Положение на новите пептиди съгласно претенции от 1 до 11 за лекуване на индицирани от стрес заболявания или неразположения, въздадения, е леш, травми, обгаряния,вирусни инфекции.забелязания на имунната система, нарушения на централната нервна система,гестроинтестинални язви с различна етиология, фрактури на костите,шок и общо хирурпптно,церебрални нарушения и депресии, болест на Ц&риинеон, за предпазване от редакционни увреждания и ммфоржщш.индуцирани с хтжчни агенти и най-общо като предпазващи тялото съединения.